CN103284951A

CN103284951A - 一种包载水溶性药物的光敏脂质体

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Publication number: CN103284951A
Application number: CN2013101521711A
Authority: CN
Inventors: 游剑; 张培尊; 胡富强; 杜永忠; 袁弘
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2013-04-27
Filing date: 2013-04-27
Publication date: 2013-09-11
Anticipated expiration: 2033-04-27
Also published as: CN103284951B

Abstract

本发明提供一种包载水溶性抗肿瘤药物的光敏脂质体，由热敏磷脂、胆固醇、长循环材料和中空金纳米粒组成，中空金纳米粒在波长700~900nm近红外光区有特征吸收峰，中空金纳米粒的粒径分布范围是20~100nm。本发明通过热敏脂质体包裹水溶性药物和中空金纳米粒，组合成全新的光敏脂质体。在外界近红外光照下，所包裹的中空金纳米粒产生光热治疗作用，同时，利用这种光热效应控制药物从光敏脂质体中快速且大量的定位释放，有效地损伤肿瘤部位的血管或杀伤肿瘤细胞，发挥化学治疗作用。本发明的载药脂质体实现了同步光热与药物分子的治疗作用，显著提高对疾病如肿瘤的治疗效果，具备了临床应用性和现实的治疗意义。

Description

一种包载水溶性药物的光敏脂质体

技术领域

本发明涉及一种新型的载水溶性药物的光敏脂质体给药***，涉及该光敏脂质体的制备方法以及其结合外界近红外光照，在抗肿瘤中的应用。

背景技术

自从Yatvin 1978年在Science上首次发表有关二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）脂质体的温度敏感作用和将其作为热敏靶向药物载体的可能性以来，热敏脂质体一直是脂质体靶向研究领域的一个热点，并且从一开始它就和肿瘤热疗结合起来。热敏脂质体通常以DPPC等相变温度（41℃）略高于正常温度的温敏材料所制备而成。在相变温度以上，脂质体磷脂双分子层由排列致密的胶晶态变为疏松混乱的液晶态，脂质体膜的通透性发生变化，从而可以使得包裹的药物释放出来。

目前热敏脂质体主要和肿瘤热疗结合，所包封药物一般为抗肿瘤药物。水溶性药物和磷脂膜的亲和力小，脂质体发生相变时能迅速释放，最适合于作为热敏脂质体的包封药物。利用脂质体这种达到液晶态相变温度时会大量释放其包封药物的特性，结合肿瘤局部加热则可大大提高递送到肿瘤的药量，减少全身副作用，提高局部治疗效果。虽然热敏脂质体适合在实体瘤部位定位释放且不需特殊设备，但其注射进入体内后易被网状内皮***（RES）摄取而快速清除。一般采用亲水性的PEG₂₀₀₀等镶嵌到热敏脂质体表面，减少RES的识别和摄取，延长体内的循环时间。

在抗肿瘤药物热敏脂质体研究中，现存的最大问题是如何提高其在肿瘤部位的药物浓度，降低抗肿瘤药物对内皮网状***及正常组织的毒性。实际应用中，载水溶性药物的热敏脂质体仅仅是依赖局部的高温，并不能使得被包裹药物快速且大量地释放出来。包裹的药物释放过于缓慢，直接导致了肿瘤局部的药物浓度过低。选择新的方式，可控地触发热敏脂质体迅速且大量地释放包裹的药物，提高药物在肿瘤部位的局部浓度，提高抗肿瘤效果，成为了该领域一个亟须解决的问题。

近年来，新型的无机金纳米材料由于其表面等离子共振（localized surface plasma resonance）而具有强的消光性能，产生光热效应，成为国内外研究热点之一。一些发展起来的金纳米结构如：金纳米粒子（gold nanoparticles），金纳米棒（gold nanorods），金纳米笼（gold nanocages），中空金纳米粒（hollow gold nanospheres）等已经应用于药物的传递和肿瘤治疗领域。上述金纳米材料能够将表面等离子共振吸收峰调至近红外（700～900 nm）区域，能高效地吸收近红外光并转化为热量，产生的高温可以抑制或者直接杀死肿瘤细胞，如Visaria et al.设计了以金纳米球（spherical gold nanostructures）为基础的热疗治疗策略，通过在肿瘤部位照射近红外光，金纳米球可以产生热量并导致了肿瘤部位的血管损伤。此外，上述光热材料由于具有无毒性，无免疫性，生物相容性，稳定性好，可被机体***的特征，广泛应用于药物传递领域。如Younan Xia et al.合成的中空金纳米笼，利用其内核中空的结构，可以高效地包裹抗肿瘤药物阿霉素并传递到肿瘤部位，在近红外光下，纳米笼的高热效应触发了包裹的阿霉素快速释放。可以从实现了热疗和化疗的协同治疗。

将热敏脂质体包裹具有近红外光热效应的无机金纳米材料后，在外界近红外光照下，无机金纳米材料可高效地将近红外的光能转换为热能，产生的热量能使热敏脂质体得脂质膜从胶晶态变为液晶态，从而可以改变脂质体膜的通透性。外界近红外光相当于光源，无机金纳米材料相当于位于热敏脂质体内产热源，因此，外界近红外光照的变化能够引起热敏脂质体膜的通透性的改变，导致被包裹药物的迅速释放。可见，包裹无机金纳米材料的热敏脂质体具有明显的近红外光敏特性，形成一种新型光敏脂质体。

发明内容

本发明的创新性在于将热敏脂质体与中空金纳米粒相结合，通过热敏脂质体包裹水溶性药物和中空金纳米粒，组合成全新的光敏脂质体。在外界近红外光照下，所包裹的中空金纳米粒产生光热治疗作用。同时，利用这种光热效应控制药物从光敏脂质体中快速且大量的释放出来，并发挥化学治疗作用。

本发明的第一个目的是提供一种载水溶性抗肿瘤药物的光敏脂质体的组成，该光敏脂质体由热敏磷脂、胆固醇、长循环材料和中空金纳米粒组成，中空金纳米粒在近红外光区（波长700~900 nm）有特征峰的吸收，最大的吸收峰范围为750~850 nm，优选790~810 nm；每100 mg的脂材，加入0.01~3×10¹³个中空金纳米粒，优选0.2~1.5×10¹³个中空金纳米粒；中空金纳米粒的粒径分布范围是20~100 nm，优选30~60 nm；中空金纳米粒可直接包裹于脂质体中；为了提高包封率，也可先对中空金纳米粒进行疏水性表面修饰，然后再包裹于脂质体中；修饰剂选用：3-巯基丙酸十二烷酯，3-巯基丙酸十三烷酯，3-巯基丙酸十八烷基酯（OMP）以及巯基化聚乙二醇磷脂（DSPE-PEG₁₀₀₀-SH，DSPE-PEG₂₀₀₀-SH，DSPE-PEG₃₄₀₀-SH，DSPE-PEG₅₀₀₀-SH，DSPE-PEG₁₀₀₀₀-SH）中的任意一种；中空金纳米粒和疏水性修饰剂的质量摩尔比为1:0.01~1:0.1 w/mol，优选1:0.02~1:0.05 w/mol；反应的环境温度在10 ~70 ℃进行，优选20~50 ℃。中空金纳米粒和修饰剂反应是在惰性气体保护下进行，惰性气体包括氮气、氖气、氩气、氪气和氙气中任意的一种；反应时间为2~48 h。

所述的光敏脂质体，在近红外光照下（波长700~900 nm），能产生光热效应，即吸收近红外光，产生热能，并控制1-7所述的光敏脂质体中药物的释放。

所述的光敏脂质体，在近红外光照下（波长700~900 nm），呈现光热治疗作用，同时呈现药物的化学治疗作用。

所述的光敏脂质体，所涉及的药物为阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、吡柔比星、氨甲喋呤、长春新碱、顺铂、卡铂和奥沙利铂等水易溶性抗肿瘤药物。

本发明的第二个目的是提供所述光敏脂质体的制备方法，通过以下步骤实现：

（1）中空金纳米粒和疏水性的修饰剂按照一定的质量摩尔比（w/mol）进行反应，得到疏水性修饰的中空金纳米粒。所采用的修饰剂包括3-巯基丙酸十二烷酯，3-巯基丙酸十三烷酯，3-巯基丙酸十八烷基酯（OMP）以及巯基化聚乙二醇磷脂（DSPE-PEG₁₀₀₀-SH，DSPE-PEG₂₀₀₀-SH，DSPE-PEG₃₄₀₀-SH，DSPE-PEG₅₀₀₀-SH，DSPE-PEG₁₀₀₀₀-SH）中的任意一种；反应的质量摩尔比为1:0.01~1:0.1 w/mol，优选1:0.02~1:0.05 w/mol；反应的环境温度在10 ~70 ℃进行，优选20~50 ℃；反应是在惰性气体保护下进行，惰性气体包括氮气、氖气、氩气、氪气和氙气中任意的一种；反应时间为2~48 小时；

（2）将热敏磷脂，胆固醇，长循环材料和中空金纳米粒或者疏水性修饰的中空金纳米粒溶解于有机溶剂当中，采用薄膜分散法进行制备，真空减压除去有机溶剂，形成薄膜；有机溶剂包括：三氯甲烷和二氯甲烷的一种或两种的混合溶剂；

（3）往薄膜中加入药物水溶液或者硫酸铵溶液，一定温度下水合一段时间，得到多层脂质体溶液。水合温度为60 ℃；水合时间为1~2小时；

（4）该脂质体溶液经过超声处理，过Sephadex G50柱纯化，得到载药脂质体，或者进一步与药物水溶液孵育，完成药物的装载，并过Sephadex G50柱纯化。

本发明的第三个目的是提供包裹中空金纳米粒的光敏脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用。所述药物是将中空金纳米粒和水溶性的抗肿瘤药物包裹于脂质体中，组合成具有光热效应的光敏脂质体。所涉及的水溶性的抗肿瘤药物为阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、吡柔比星、氨甲喋呤、长春新碱、顺铂、卡铂和奥沙利铂等水易溶性抗肿瘤药物。

本发明提供的包裹了中空金纳米粒的光敏脂质体，在抗肿瘤的治疗中，光敏脂质体靶向至肿瘤部位，肿瘤部位照射近红外光照，光敏脂质体的光热转换效应使得肿瘤局部区域温度升高，可以有效地损伤肿瘤部位的血管或杀伤肿瘤细胞，实现光热治疗作用；通过调节近红外光的照射参数（功率、持续照射时间、频率和模式等），可以控制光敏脂质体的热疗效果。

本发明提供的包裹了中空金纳米粒的光敏脂质体，在抗肿瘤的治疗中，光敏脂质体靶向至肿瘤部位，肿瘤部位照射近红外光照，产生热量使周围温度升高；升高的温度使得光敏脂质体由致密的胶晶态变为疏松的液晶态，膜通透性变大，使得包裹的药物释放出来。通过调节近红外光的照射参数（功率、持续照射时间、频率和模式等），可以控制光敏脂质体包裹的药物在体内的释放。

本发明创造性地将中空金纳米粒和水溶性的抗肿瘤药物包裹于热敏脂质体中，组合成具有光热效应的光敏脂质体。并且该脂质体的粒径< 200 nm，可静脉注射，结合外界的近红外光照，应用于抗肿瘤的领域。该发明制备的光敏脂质体具有如下优势：

（1）药物控制释放。结合近红外光照，可控且大量地释放包裹的水溶性药物，解决了传统热敏脂质体释放药物过于缓慢的问题。在抗肿瘤治疗中，应用该光敏脂质体，结合外界的近红外光照，可以有效地提高肿瘤部位的药物浓度。此外，近红外光具有较强的机体组织穿透性。因此，该发明具备了临床应用性和现实的治疗意义。

（2）产生同步光热与药物分子的治疗作用。光敏脂质体具备光热效应，可以有效地损伤实体瘤的血管，甚至直接杀灭肿瘤细胞，呈现有效的光热治疗作用效果。同时，光热效应触发了脂质体内药物分子的释放，发挥其化学治疗作用。两种治疗方式协同起效，显著提高对疾病如肿瘤的治疗效果。

（3）本发明的光敏脂质体，能够通过外界近红外光照可控地实现自身包裹药物定位释放，并产生同步的光热治疗与药物分子化学治疗作用，在疾病治疗，特别是肿瘤治疗领域中呈现巨大的优势，具有重要的发明价值。

本发明涉及的专业术语：

“OMP-HAuNS” 表示3-巯基丙酸十八烷基酯疏水性修饰的中空金纳米粒，二者通过巯-金共价键相结合。

中空金纳米粒可外购。实施例所用中空金纳米粒为本实验人员合成制备，所得中空金纳米粒在近红外光区（波长700~900 nm）有特征峰的吸收，最大的吸收峰范围为750~850 nm，其制备方法如下：在氩气的保护下，1ml（1mol/L）氯化钴溶液与4.5ml（1mol/L）的硼氢化钠分散在1000ml纯净水中，反应半小时，生成钴纳米粒，然后加入氯金酸溶液，并迅速混合，在氩气的保护下继续搅拌两个小时，然后除去氩气保护，继续搅拌，得中空金纳米粒。

“疏水剂-S-HAuNS”表示包括但不局限OMP的一类带有巯基的，可对中空金纳米粒起到疏水性修饰的试剂。

“DPPC”表示二棕榈酰磷脂酰胆碱。

“HSPC”表示氢化大豆卵磷脂。

“Cholesterol”表示胆固醇。

“PBS”表示磷酸盐缓冲液。

附图说明

图1为中空金纳米粒（HAuNS）的电镜图结果。

图2为中空金纳米粒(HAuNS)和疏水性修饰的中空金纳米粒(OMP-HAuNS)在近红外光区域的吸收光谱（最大吸收峰为800 nm）。

图3为包裹疏水性的中空金纳米粒的光敏脂质体的电镜图结果。

图4为光敏脂质体的差示扫描量热分析图。图中，横坐标“temperature”表示“温度”，纵坐标“heat flow”表示“热流”。

图5为光敏脂质体在近红外光照下，释放包裹药物的假想图。

图6为载药的热敏脂质体和光敏脂质体体外释放的实验结果。

图7为活体成像仪拍摄载药的光敏脂质体外释放结果。

图8为载药的光敏脂质体的细胞毒性实验结果。

图9为载药的热敏脂质体近红外光照前后，细胞摄取的实验结果。

图10为载药的光敏脂质体近红外光照前后，细胞摄取的实验结果。

图11为药效学实验结束后，处死裸鼠取出实体瘤的图片结果。

图12为对照组和实验组的实体瘤质量结果。

图13为对照组和实验组在荷BEL-7402肿瘤裸鼠上的抗肿瘤结果。

图14为载药光敏脂质体（近红外光照射）组的肿瘤组织（A）和疤痕组织（B）切片的H&E染色结果。

图15为空白光敏脂质体（近红外光照射）组的肿瘤组织（C）和疤痕组织（D）切片的H&E染色结果。

图16为生理盐水（近红外光照射）组的肿瘤组织（E）切片的H&E染色结果。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例作进一步的说明。

实施例1

光敏脂质体的组成：

盐酸阿霉素（DOX·HCI） 2.76mg

二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC） 31.64mg

氢化大豆卵磷脂（HSPC） 11.42mg

胆固醇（Cholesterol） 5.0mg

聚乙二醇磷脂（DSPE-PEG₂₀₀₀） 7.2mg

OMP修饰中空金纳米粒（OMP-HAuNS） 1.0mg(~2.5×10¹²个粒子)

处方量的DPPC、HSPC、Cholesterol、DSPE-PEG₂₀₀₀和OMP-HAuNS(HAuNS : OMP=1:0.0279 w/mol)，置于茄形瓶中，加入有机溶剂（氯仿：二氯甲烷=1:1 v/v）中溶解，45℃水浴中真空减压旋转蒸发过夜，瓶壁形成薄膜。向茄形瓶中加入pH=5.4的硫酸铵溶液，60℃水浴水合1h，薄膜脱落溶解并形成多层脂质体溶液。使用探头超声将上述溶液超声至所需粒径。将所得的脂质体溶液过Sephadex G50柱，用PBS （pH=7.4）洗脱，除去未包裹的OMP-HAuNS和脂质体外相的硫酸铵溶液。光敏脂质体中加入2 mg/mL的阿霉素溶液，使药脂质量比为1:20，50℃水浴中搅拌孵育30 min。再经过Sephadex G50柱，除去游离的盐酸阿霉素，最终收集为载阿霉素的光敏脂质体。

考察本发明制备的光敏脂质体在外界近红外光照条件下，抗恶性人源性肝癌肿瘤的效果。以实例1的载阿霉素的光敏脂质体为例，进行以下方面的考察：

1、中空金纳米粒（HAuNS）的表面形态和光学特征

采用透射电子显微镜（transmission electron microscope，TEM），对中空金纳米粒的表面形态进行观察，其透射电子显微镜观察结果见图1。表明合成的中空金纳米粒的均一性良好，并且粒径均小于50 nm。对中空金纳米粒(HAuNS)以及疏水性修饰的中空金纳米粒（OMP-HAuNS）进行紫外光谱扫描，其光谱扫描结果见图2。表明中空金纳米粒在近红外光区域有最大的吸收波长（~ 800 nm）；并且修饰剂对中空金纳米粒的光学特性没有影响。

2、光敏脂质体的理化性质表征

采用荧光分光光度法测定光敏脂质体的阿霉素的包封率，结果为90%以上。采用动态光散射法（dynamic light scattering，DLS）对其粒径和电位进行测定。结果见表1。从表中可以看到，光敏脂质体的粒径分布较均一。采用透射电子显微镜（transmission electron microscope，TEM），对光敏脂质体的表面形态进行观察。其透射电子显微镜观察结果见图3。结果显示光敏脂质体外观呈球形，并且包裹了中空金纳米粒，测定的结果和粒径电位测定仪的测定结果基本一致。对空白的光敏脂质体和载药的光敏脂质体分别进行差示扫描量热分析（differential scanning calorimetry，DSC），其分析结果见图4。表明本发明中光敏脂质体的制备方法可行且良好。

Figure 2013101521711100002DEST_PATH_IMAGE002

3、体外释放试验

在37℃的水浴恒温振荡仪，PBS（pH7.4）中进行体外释放。载药的光敏脂质体的体外释放机制假想图如图5所示。对照组的载药的热敏脂质体和光敏脂质体在系列时间点（0.5、1、2、4、6、8、12和24h）取样测定荧光强度（Ex/Em=505/565nm）。实验组1的载药热敏脂质体在2h和6h分别用红外激光照射（3w, 5min），相同时间点取样测定。实验组2的载药光敏脂质体在2h和6h分别用红外激光照射（3w, 5min），相同时间点取样测定。实验组3的载药光敏脂质体在2h和6h分别用红外激光照射（6w, 5min），相同时间点取样测定。公式计算：累计释放百分率= F_t-F_i/F_f-F_i×100%。结果见图6，表明本发明可以通过调节近红外激光的功率和照射时间，可控地促使光敏脂质体包载的阿霉素快速释放。

4、活体成像仪拍摄体外释放

制备含圆形凹槽的琼脂糖水凝胶（琼脂糖：水=1:100 w/v），载阿霉素的光敏脂质体标记近红外染料DiR。将300μL标记DiR的载药的热敏脂质体和光敏脂质体溶液分别加入到凹槽中，照射近红外激光（6w, 20 min），然后用活体成像仪分别拍摄阿霉素和脂质体的荧光。不照射近红外激光的标记DiR的载药脂质体用做对照组。结果见图7，表明载药的热敏脂质体结合近红外光照，并不能促使包裹的阿霉素释放；也表明载药的光敏脂质体结合近红外光照，能够显著地控制包裹阿霉素的释放。（红色荧光代表阿霉素，绿色荧光代表光敏脂质体。）

5、细胞毒性实验

将BEL-7402人源性肝癌细胞以10⁵个/mL, 200μL/孔的量嫁接在96孔板上。待24h细胞贴壁后，把空白的光敏脂质体和载药的光敏脂质体，按照载体的系列浓度（116ng/mL，580ng/mL,1.16μg/mL,5.8μg/mL,11.6μg/mL,58μg/mL,116g/mL,0.58mg/mL,1.16mg/mL）加入到肿瘤细胞中。每孔立即照射近红外激光（3w, 3min），然后孵育72h。再每孔加入20μL的MTT水溶液（5mg/mL），继续孵育4h后，弃去培养液，每孔加入100μL的DMSO，摇床上振荡20分钟后，酶标仪在570 nm处测定吸光值。载药的光敏脂质体非激光组用作对照组。游离的盐酸阿霉素组用作阳性对照。结果见图8，表明激光照射的空白光敏脂质体一定程度上抑制了肿瘤细胞的生长；激光照射的载药的光敏脂质体较之游离的阿霉素，显示了更为优良的抗肿瘤细胞的效果，呈现热疗和化疗双重功效。

6、细胞摄取实验（激光共聚焦）

将BEL-7402人源性肝癌细胞按5×10⁴个/孔接种于24孔板每孔的10mm²的玻片上。待24h贴壁后，每孔分别加入含药量20μg/mL的被DiD荧光标记的载药热敏脂质体和载药光敏脂质体。然后每孔照射近红外激光（3 w, 5 min），非激光孔用作对照。2h后吸掉孔内的培养基，用PBS洗涤每孔3次。每孔加入4%的多聚甲醛溶液固定细胞，20分钟后取出玻片进行封片，置于激光共聚焦显微镜下观察。结果见图9，表明照射红外光后，阿霉素并没有从热敏脂质体释放出来，并没有被摄取进入细胞核；结果见图10，表明阿霉素从光敏脂质体释放出来并且被摄取进入细胞核。（红色荧光代表阿霉素，绿色荧光代表光敏脂质体。）

7、药效实验

每只裸鼠左腋皮下接种5×10⁶个BEL-7402细胞，获得BEL-7402荷瘤裸鼠模型。当肿瘤的体积约为150mm³开始给药。随机分为生理盐水组+激光组，载药的光敏脂质体+激光组，载药的光敏脂质体组，空白的光敏脂质体+激光组。所有组别均在第1,3,5天给药或者注射生理盐水。激光组在第2,4,6天给予近红外激光照射（2w，3min/只鼠）。结果见图11~16，表明近红外光照射的载药光敏脂质体不仅抑制了肿瘤的生长，而且肿瘤慢慢消掉，显示了极为显著的抗肿瘤效果。

实施例2

光敏脂质体的组成：

盐酸阿霉素（DOX·HCI） 2.76mg

二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC） 31.64mg

氢化大豆卵磷脂（HSPC） 11.42mg

胆固醇（Cholesterol） 5.0mg

聚乙二醇磷脂（DSPE-PEG₂₀₀₀） 7.2mg

中空金纳米粒（HAuNS ） 1.0mg(~2.5×10¹²个粒子)

处方量的DPPC、HSPC、Cholesterol、DSPE-PEG₂₀₀₀和HAuNS，置于茄形瓶中，加入有机溶剂（氯仿：二氯甲烷=1:1 v/v）中溶解，45℃水浴中真空减压旋转蒸发过夜，瓶壁形成薄膜。向茄形瓶中加入pH=5.4的硫酸铵溶液，60℃水浴水合1h，薄膜脱落溶解并形成多层脂质体溶液。使用探头超声将上述溶液超声至所需粒径。将所得的脂质体溶液过Sephadex G50柱，用PBS （pH=7.4）洗脱，除去未包裹的HAuNS和脂质体外相的硫酸铵溶液。光敏脂质体中加入2 mg/mL的阿霉素溶液，使药脂质量比为1:20，50℃水浴中搅拌孵育30 min。再经过Sephadex G50柱，除去游离的盐酸阿霉素，最终收集为载阿霉素的光敏脂质体。

实施例3

光敏脂质体的组成：

盐酸阿霉素（DOX·HCI） 2.76mg

二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC） 31.64mg

氢化大豆卵磷脂（HSPC） 11.42mg

胆固醇（Cholesterol） 5.0mg

聚乙二醇磷脂（DSPE-PEG₂₀₀₀） 7.2mg

聚乙二醇磷脂修饰中空金纳米粒（DSPE-PEG₂₀₀₀- HAuNS）1.0mg(~2.5×10¹²个粒子)

处方量的DPPC、HSPC、Cholesterol、DSPE-PEG₂₀₀₀和DSPE-PEG₂₀₀₀-HAuNS (HAuNS : DSPE-PEG₂₀₀₀-SH=1:0.0279 w/mol)，置于茄形瓶中，加入有机溶剂（氯仿：二氯甲烷=1:1 v/v）中溶解，45℃水浴中真空减压旋转蒸发过夜，瓶壁形成薄膜。向茄形瓶中加入pH=5.4的硫酸铵溶液，60℃水浴水合1h，薄膜脱落溶解并形成多层脂质体溶液。使用探头超声将上述溶液超声至所需粒径。将所得的脂质体溶液过Sephadex G50柱，用PBS （pH=7.4）洗脱，除去未包裹的DSPE-PEG₂₀₀₀- HAuNS和脂质体外相的硫酸铵溶液。光敏脂质体中加入2 mg/mL的阿霉素溶液，使药脂质量比为1:20，50℃水浴中搅拌孵育30 min。再经过Sephadex G50柱，除去游离的盐酸阿霉素，最终收集为载阿霉素的光敏脂质体。

实施例4

光敏脂质体的组成：

柔红霉素（DNR·HCl ） 2.76mg

二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC） 31.64mg

氢化大豆卵磷脂（HSPC） 11.42mg

胆固醇（Cholesterol） 5.0mg

聚乙二醇磷脂（DSPE-PEG₂₀₀₀） 7.2mg

OMP修饰中空金纳米粒（OMP-HAuNS） 1.0mg(~2.5×10¹²个粒子)

处方量的DPPC、HSPC、Cholesterol、DSPE-PEG₂₀₀₀和OMP-HAuNS(HAuNS : OMP=1:0.0279 w/mol)，置于茄形瓶中，加入有机溶剂（氯仿：二氯甲烷=1:1 v/v）中溶解，45℃水浴中真空减压旋转蒸发过夜，瓶壁形成薄膜。向茄形瓶中加入pH=5.4的硫酸铵溶液，60℃水浴水合1h，薄膜脱落溶解并形成多层脂质体溶液。使用探头超声将上述溶液超声至所需粒径。将所得的脂质体溶液过Sephadex G50柱，用PBS （pH=7.4）洗脱，除去未包裹的OMP-HAuNS和脂质体外相的硫酸铵溶液。光敏脂质体中加入2 mg/mL的柔红霉素溶液，使药脂质量比为1:20，50℃水浴中搅拌孵育30 min。再经过Sephadex G50柱，除去游离的盐酸柔红霉素，最终收集为载柔红霉素的光敏脂质体。

实施例5

光敏脂质体的组成：

奥沙利铂（L-OHP） 2.76mg

二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC） 31.64mg

氢化大豆卵磷脂（HSPC） 11.42mg

胆固醇（Cholesterol） 5.0mg

聚乙二醇磷脂（DSPE-PEG₂₀₀₀） 7.2mg

OMP修饰中空金纳米粒（OMP-HAuNS） 1.0mg(~2.5×1012个粒子)

处方量的DPPC、HSPC、Cholesterol、DSPE-PEG₂₀₀₀和OMP-HAuNS(HAuNS : OMP=1:0.0279 w/mol)，置于茄形瓶中，加入有机溶剂（氯仿：二氯甲烷=1:1 v/v）中溶解，45℃水浴中真空减压旋转蒸发过夜，瓶壁形成薄膜。向茄形瓶中加入奥沙利铂水溶液，浓度为2 mg/mL，60℃水浴水合1h，薄膜脱落溶解并形成多层脂质体溶液。使用探头超声将上述溶液超声至所需粒径。将所得的脂质体溶液过Sephadex G50柱，用PBS （pH=7.4）洗脱，得载奥沙利铂的光敏脂质体。

实施例6

光敏脂质体的组成

长春新碱（VCR·H₂SO₄） 2.76mg

二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC） 31.64mg

氢化大豆卵磷脂（HSPC） 11.42mg

胆固醇（Cholesterol） 5.0mg

聚乙二醇磷脂（DSPE-PEG₂₀₀₀） 7.2mg

OMP修饰中空金纳米粒（OMP-HAuNS） 1.0mg(~2.5×10¹²个粒子)

处方量的DPPC、HSPC、Cholesterol、DSPE-PEG₂₀₀₀和DSPE-PEG₂₀₀₀-HAuNS (HAuNS : DSPE-PEG₂₀₀₀-SH=1:0.0279 w/mol)，置于茄形瓶中，加入有机溶剂（氯仿：二氯甲烷=1:1 v/v）中溶解，45℃水浴中真空减压旋转蒸发过夜，瓶壁形成薄膜。向茄形瓶中加入pH=5.4的硫酸铵溶液，60℃水浴水合1h，薄膜脱落溶解并形成多层脂质体溶液。使用探头超声将上述溶液超声至所需粒径。将所得的脂质体溶液过Sephadex G50柱，用PBS （pH=7.4）洗脱，除去未包裹的DSPE-PEG₂₀₀₀- HAuNS和脂质体外相的硫酸铵溶液。光敏脂质体中加入2 mg/mL的长春新碱溶液，使药脂质量比为1:20，50℃水浴中搅拌孵育30 min。再经过Sephadex G50柱，除去游离的硫酸长春新碱，最终收集为载长春新碱的光敏脂质体。

实施例7

光敏脂质体的组成：

表阿霉素（EPI·HCI） 2.76mg

二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC） 31.64mg

氢化大豆卵磷脂（HSPC） 11.42mg

胆固醇（Cholesterol） 5.0mg

聚乙二醇磷脂（DSPE-PEG₂₀₀₀） 7.2mg

OMP修饰中空金纳米粒（OMP-HAuNS） 1.0mg(~2.5×10¹²个粒子)

处方量的DPPC、HSPC、Cholesterol、DSPE-PEG₂₀₀₀和OMP-HAuNS(HAuNS : OMP=1:0.0279 w/mol)，置于茄形瓶中，加入有机溶剂（氯仿：二氯甲烷=1:1 v/v）中溶解，45℃水浴中真空减压旋转蒸发过夜，瓶壁形成薄膜。向茄形瓶中加入pH=5.4的硫酸铵溶液，60℃水浴水合1h，薄膜脱落溶解并形成多层脂质体溶液。使用探头超声将上述溶液超声至所需粒径。将所得的脂质体溶液过Sephadex G50柱，用PBS （pH=7.4）洗脱，除去未包裹的OMP-HAuNS和脂质体外相的硫酸铵溶液。光敏脂质体中加入2 mg/mL的表阿霉素溶液，使药脂质量比为1:20，50℃水浴中搅拌孵育30 min。再经过Sephadex G50柱，除去游离的盐酸表阿霉素，最终收集为载表阿霉素的光敏脂质体。

实施例8

光敏脂质体的组成：

顺铂（CDP） 2.76mg

二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC） 31.64mg

氢化大豆卵磷脂（HSPC） 11.42mg

胆固醇（Cholesterol） 5.0mg

聚乙二醇磷脂（DSPE-PEG₂₀₀₀） 7.2mg

OMP修饰中空金纳米粒（OMP-HAuNS） 1.0mg(~2.5×10¹²个粒子)

处方量的DPPC、HSPC、Cholesterol、DSPE-PEG₂₀₀₀和OMP-HAuNS(HAuNS : OMP=1:0.0279 w/mol)，置于茄形瓶中，加入有机溶剂（氯仿：二氯甲烷=1:1 v/v）中溶解，45℃水浴中真空减压旋转蒸发过夜，瓶壁形成薄膜。将顺铂溶于适量0.9％NaCI-5％甘露醇溶液中，浓度为2 mg/mL，向茄形瓶中加入顺铂溶液，60℃水浴水合1h，薄膜脱落溶解并形成多层脂质体溶液。使用探头超声将上述溶液超声至所需粒径。将所得的脂质体溶液过Sephadex G50柱，用PBS （pH=7.4）洗脱，得载顺铂的光敏脂质体。

Claims

1.一种包载水溶性抗肿瘤药物的光敏脂质体，其特征在于，由热敏磷脂、胆固醇、长循环材料和中空金纳米粒组成，中空金纳米粒在波长700-900 nm的近红外光区有特征峰的吸收，最大的吸收峰范围为750-850 nm，每100 mg的脂材，加入0.01-3×10¹³个中空金纳米粒，中空金纳米粒的粒径分布范围是20-100 nm，中空金纳米粒直接包裹于脂质体中，脂质体的粒径< 200 nm。

2.一种包载水溶性抗肿瘤药物的光敏脂质体，其特征在于，由热敏磷脂、胆固醇、长循环材料和疏水性修饰的中空金纳米粒组成，疏水性修饰的中空金纳米粒在波长700-900 nm的近红外光区有特征峰的吸收，最大的吸收峰范围为750-850 nm，每100 mg的脂材，加入0.01-3×10¹³个疏水性修饰的中空金纳米粒，疏水性修饰的中空金纳米粒的粒径分布范围是20-100 nm，疏水性修饰的中空金纳米粒直接包裹于脂质体中；疏水性修饰剂选用：3-巯基丙酸十二烷酯，3-巯基丙酸十三烷酯，3-巯基丙酸十八烷基酯以及巯基化聚乙二醇磷脂中的任意一种；脂质体的粒径< 200 nm。

3.根据权利要求2所述的一种包载水溶性抗肿瘤药物的光敏脂质体，其特征在于，巯基化聚乙二醇磷脂选用DSPE-PEG₁₀₀₀-SH，DSPE-PEG₂₀₀₀-SH，DSPE-PEG₃₄₀₀-SH，DSPE-PEG₅₀₀₀-SH或DSPE-PEG₁₀₀₀₀-SH。

4.根据权利要求1或2所述的一种包载水溶性抗肿瘤药物的光敏脂质体，其特征在于，最大的吸收峰范围选择790-810 nm，加入0.2-1.5×10¹³个中空金纳米粒，中空金纳米粒的粒径分布范围选择30-60 nm。

5.根据权利要求1所述的一种包载水溶性抗肿瘤药物的光敏脂质体制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：

（1）将热敏磷脂，胆固醇，长循环材料和中空金纳米粒溶解于有机溶剂当中，采用薄膜分散法进行制备，真空减压除去有机溶剂，形成薄膜，有机溶剂选用三氯甲烷和二氯甲烷的一种或两种的混合溶剂；

（2）往薄膜中加入药物水溶液或者硫酸铵溶液，60 ℃水合1-2小时，得到多层脂质体溶液；

（3）该脂质体溶液经过超声处理，过Sephadex G50柱纯化，得到载药光敏脂质体。

6.根据权利要求2所述的一种包载水溶性抗肿瘤药物的光敏脂质体制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：

（1）中空金纳米粒和疏水性的修饰剂按照质量摩尔比进行反应，得到疏水性修饰的中空金纳米粒，中空金纳米粒和疏水性的修饰剂反应的质量摩尔比为1:0.01-1:0.1 w/mol，反应的环境温度在10-70 ℃进行，反应是在惰性气体保护下进行，惰性气体选用氮气、氖气、氩气、氪气和氙气中任意的一种，反应时间为2-48 小时；

（2）将热敏磷脂，胆固醇，长循环材料和疏水性修饰的中空金纳米粒溶解于有机溶剂当中，采用薄膜分散法进行制备，真空减压除去有机溶剂，形成薄膜，有机溶剂选用三氯甲烷和二氯甲烷的一种或两种的混合溶剂；

（3）往薄膜中加入药物水溶液或者硫酸铵溶液，60 ℃水合1-2小时，得到多层脂质体溶液；

（4）该脂质体溶液经过超声处理，过Sephadex G50柱纯化，得到载药光敏脂质体。

7.根据权利要求1或2所述的一种包载水溶性抗肿瘤药物的光敏脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述药物是将中空金纳米粒或疏水性修饰的中空金纳米粒和水溶性的抗肿瘤药物包裹于脂质体中，组合成具有光热效应的光敏脂质体。

8.根据权利要求7所述的一种包载水溶性抗肿瘤药物的光敏脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的水溶性抗肿瘤药物为阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、吡柔比星、氨甲喋呤、长春新碱、顺铂、卡铂或奥沙利铂。