CN103269684A - 局部皮肤制剂 - Google Patents

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德克兰·达利
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Abstract

开发了含有从自体成纤维细胞培养物获得的条件培养基的自体局部制剂。不同于其它局部制剂，它是自体的，因为它仅仅来源于从将使用所述制剂的人获得的细胞。这避免了与来源于所述细胞的蛋白质的任何可能的反应。优选的制剂包括凝胶、乳膏、洗剂和软膏。可对个体局部施用通过培养自体皮肤成纤维细胞获得的条件培养基的局部制剂来预防和治疗斑痕形成、减少衰老体征以及改善皮肤品质。

Description

局部皮肤制剂
相关申请的交叉引用
本申请要求2010年8月27日提交的U.S.S.N.61/377,803和2010年12月9日提交的U.S.S.N.61/421,516的优先权。
发明领域
本发明涉及用于人受试者皮肤的修复、保养和/或长期加强的局部制剂。
发明背景
皮肤品质随年龄、损伤、日光曝晒和其它环境因素以及(有时)疾病或自身免疫病症而衰退。许多世纪以来，已经使用了各种各样的材料，从泥浆和草药混合物、动物脂肪到更近代的乳液、洗剂、乳膏、凝胶和生物制剂。这些材料中许多不含药物活性剂，而是依靠相对惰性的物质补水和润滑皮肤的特性。一般只有制剂在皮肤上才持续产生益处。
已经将许多药物活性剂与洗剂、凝胶、乳膏、溶液和喷雾剂混合用于局部涂覆。实例包括减轻炎症的可的松和抗组胺药、治疗感染的抗生素、抗真菌剂、止痒和抗干燥剂。一些包括治疗衰老色斑的漂白剂和去除毛发的化学品。这些制剂对特定的活性成分是非常专一的而对恢复皮肤品质或减轻衰老影响没有作用。
近年来开发了局部生物制剂。它们包括含有诸如细胞因子和生长因子、胶原和其它胞外基质材料及补水化合物(如多羟基酸)等药剂的制剂。大多数情况下效果局限于生物制剂的特定作用。
其它生物制剂含有诸如以下等活性成分的不确定的混合物：生长因子、胞外基质材料和细胞培养基中发现的其它活性剂，例如，如Mehta等在J Drugs Dermatol.2008,Sep;7(9):864-71中和Naughton等在2009年5月14日公布的美国专利申请20090123503中描述的那些。然而，许多这些制剂的问题是它们不是来自施用所述混合物的人并且可能引起对外源蛋白质的免疫反应，这可能抵消所述培养基被提议的有益作用。
因此，本发明的目的是提供通过培养自体皮肤成纤维细胞获得的条件培养基的局部制剂，用于对患者局部施用来预防和治疗斑痕形成、减少衰老体征以及改善皮肤品质。
发明概述
开发了含有从自体成纤维细胞的培养物获得的条件培养基的自体局部制剂。不同于其它局部制剂，它是自体的，因为它仅仅来源于从将使用所述制剂的人获得的细胞。这避免了与来源于所述细胞的蛋白质的任何可能的反应。优选的制剂包括凝胶、乳膏、洗剂和软膏。
可对个体局部施用通过培养自体皮肤成纤维细胞获得的条件培养基的局部制剂来预防和治疗斑痕形成、减少衰老体征以及改善皮肤品质。
或者，可以使用一般群体使用的类似制造过程量产所述产品的异源型式。在这种型式的产品中，经过筛选的供体将提供组织用于扩增成纤维细胞和建立主细胞库(MCB)。对MCB进行适当的测试之后，将从主库扩增的细胞用于建立工作细胞库(WCB)，又将其扩增来制造用于在异源局部产品的制剂中使用的条件培养基。制造方法与自体方法相似，具有相同的应用并且局部产品的所有最终制剂将在相同的浓度范围内。
附图描述
图1是用于培养自体成纤维细胞的标准化制造方法流程图。
发明详述
成纤维细胞是皮肤中的特化细胞，它产生胶原和其它胞外基质组分。它们是发育成***的细胞，并且因此在人组织的发育中发挥关键作用，包括合成有助于皮肤质地和基质纤维(包括胶原)分泌的胞外基质组分的能力。胶原是构成真皮的主要组分之一的天然存在的蛋白质；它作为提供结构和支撑的纤维的基质而存在。已经开发出了自体成纤维细胞产品。所述细胞治疗产品由使用标准组织培养程序由每个个体自己皮肤的活检组织生长出的自体成纤维细胞的悬浮液组成。将借助于酶消化从组织分离的成纤维细胞扩增到足以用于注射到患者的靶标治疗区域中的量。所述自体局部治疗产品由从扩增的成纤维细胞获得的与合适的赋形剂配制用于局部施用的条件培养基组成。
这种方法也可以用于建立进行扩增以便产生用于配制量产局部产品的条件培养基的异源细胞系。
I.制剂。
本文中使用以下定义：
ATM分析测试方法
AZFICEL-T用于自体培养的成纤维细胞的USAN命名
大批收获物在低温保藏培养基中配制之前的最终收获之后的材料
CGMP现行良好生产规范
CS细胞层叠
DMEM杜贝尔科改良的依格氏培养基(Dulbecco’s Modification ofEagle’s Medium)
DMSO二甲亚砜
药物产品-注射剂经过洗涤并且在DMEM中再配制、装瓶并且准备好运至临床地点的材料
药物物质-低温小瓶在低温保藏培养基中配制并且等分到低温小瓶中的材料
EDTA乙二胺四乙酸
ES胚胎***
FACS荧光激活细胞分选
FBS胎牛血清
GA庆大霉素和两性霉素B
IMDM伊斯科夫改良的杜贝尔科氏培养基(Iscove's ModifiedDulbecco's Medium)
IND在研新药应用
MCB主细胞库
PBS磷酸盐缓冲盐水
PCA个人细胞分析
QC品质控制
SCNT体细胞核转移
SEC尺寸排阻色谱法
USP美国药典
WCB工作细胞库
A.条件细胞培养基制剂
使用标准组织培养程序由每个个体自己皮肤的活检组织生长出来的自体成纤维细胞的悬浮液被用于制备用于在局部自体制剂中使用的条件培养基。皮肤组织(真皮层和表皮层)是从患者耳后区域活检获得的。
这种方法也可以用于建立进行扩增以产生用于配制量产局部产品的异源细胞系。建立用于所述异源方法的主细胞库(MCB)的起始材料和细胞扩增方法与自体方法相同。
成纤维细胞也可被用于产生待培养以产生用于供组织修复或再生使用的材料的其它细胞类型。通过体细胞核转移(SCNT)得到与患者在遗传上相同的胚胎干(ES)细胞有治愈或减轻许多退行性疾病症状的潜力，同时避免了有关宿主免疫***排斥的顾虑。Byrne等，Nature.2007Nov22;450(7169):497-502，使用改进的SCNT方法从成人皮肤成纤维细胞产生恒河猴胚囊，并且成功从这些胚胎分离了两个ES细胞系。DNA分析证实核DNA与供体体细胞相同并且线粒体DNA来源于***。两种细胞系在活体外和活体内均显示正常的ES细胞形态，表达关键干细胞标记物，在转录上类似于对照ES细胞并且分化成多种细胞类型。另参见Sparman等，Stem Cells.2009;27(6):1255-64。图2是来自Byrne2008Hum.Mol.Gen.17:R37-R41的示意图，其示出如何使用表观遗传重编程(epigenetic reprogramming)将来源于皮肤的成纤维细胞去分化成多能干细胞，多能干细胞随后可以分化成神经元、心肌细胞、β胰岛细胞和造血细胞。参见Hochedlinger等，Development.2009Feb;136(4):509-23和Kanawaty等，Bioessays.2009Feb;31(2):134-8。
成纤维细胞可以通过细胞融合(Cowan等，Science.2005Aug26;309(5739):1369-73)、直接重编程(Takahashi等，Cell.200730;131(5):861-72)和体细胞核转移(Byrne等，2007)去分化成多能细胞。Takahashi等证明从带有相同四种因子Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc的成人皮肤成纤维细胞产生iPS细胞。人iPS细胞与人胚胎干(ES)细胞有相似的形态、增殖、表面抗原、基因表达、多能细胞特异性基因的表观遗传状态和端粒酶活性。此外，这些细胞可以在活体外和畸胎瘤中分化成三个胚层的细胞类型。这些发现表明可以从成人成纤维细胞产生iPS细胞。
B.细胞的制备
自体制造：
自体成纤维细胞是通过酶消化接受者自己皮肤的活检组织随后使用标准细胞培养技术在培养中扩增获得的。皮肤组织(真皮层和表皮层)是从受试者耳后区域活检获得的。一般来说，起始材料由使用标准灭菌操作收集的三个3-mm穿刺皮肤活检组织构成。治疗医师收集活检组织并且放入含有无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)的小瓶中。将活检组织在2-8℃冷藏货箱中运回制造设施。
到达制造设施后，检查活检组织并且在验收后直接转移至制造区域。过程开始后，先洗涤活检组织，随后进行酶消化。洗涤之后，添加Liberase消化酶溶液而不切碎，并将活检组织在37.0±2℃下孵育一小时。活检组织消化时间是可能影响培养中的细胞活力和生长速率的关键工艺参数。Liberase是胶原酶/中性蛋白酶混合液，它是从LonzaWalkersville,Inc.(Walkersville,MD)配制和从Roche Diagnostics Corp.(Indianapolis,IN)未配制获得的。或者，可以使用其它市售的胶原酶，如Serva Collagenase NB6(Helidelburg，德国)。消化之后，添加起始生长培养基(IMDM，GA，10%胎牛血清(FBS))来中和所述酶，通过离心将细胞集结(pelleted)并且重悬于5.0mL起始生长培养基中。或者，不进行离心，只通过添加起始生长培养基使酶完全失活。添加起始生长培养基，随后将细胞悬浮液接种到T-175细胞培养瓶中以便起始细胞生长和扩增。可以使用T-75、T-150、T-185或T-225瓶代替T-75瓶。在37±2.0℃及5.0±1.0%CO2的条件下孵育细胞并且每三至五天补给新鲜完全生长培养基。过程中的全部补给均通过去除一半完全生长培养基并且用新鲜培养基替换相同体积来进行。或者，可以进行全部补给。在传代之前不应该将细胞保留在T-175瓶中30天以上。在整个过程中监测汇合以确保在培养物分离期间有合适的接种密度。
当在T-175瓶中的细胞汇合大于或等于40%时，将其用胰蛋白酶处理并且接种到T-500瓶中继续细胞扩增。或者，可以使用一个或两个T-300瓶、单层细胞层叠(1CS)、单层细胞工厂(Cell Factory)(1CF)或双层细胞层叠(2CS)代替T-500瓶。在每次传代时和在收获之前评价形态以监测整个过程中的培养物纯度。通过比较观察到的样本与用于细胞培养物形态检查的可视标准物来评价形态。当细胞在培养的单层中生长时显示典型的成纤维细胞形态。细胞可能显示带有纤细延伸的长形、梭形或纺锤形的外观或表现为可能具有细胞质前缘的较大、变平星形细胞。也可能观察到这些形态的混合。在汇合度较低的区域中的成纤维细胞可能具有相似的形状，但是随机取向。也评价细胞培养物中角质化细胞的存在。角质化细胞看起来是圆的和不规则形状的，并且在汇合度较高时，它们看起来组织成卵石形。在较低汇合度下，可观察到呈小群落的角质化细胞。在37±2.0℃及5.0±1.0%CO2的条件下孵育细胞并且在T-500瓶中每三至五天补给以及在十层细胞层叠(10CS)中每五至七天补给。在传代之前不应该将细胞保留在T-500瓶中10天以上。原料药物质安全性的QC放行测试包括无菌性和内毒素测试。当细胞汇合度≥95%时，将细胞传代至10CS培养容器、两个五层细胞层叠(5CS)或10层细胞工厂(10CF)。通过去除用过的培养基，洗涤细胞以及用胰蛋白酶-EDTA处理将瓶中的粘附细胞释放到溶液中进行传代。再添加完全生长培养基以中和胰蛋白酶并且将T-500瓶中的细胞吸取到含有新鲜完全生长培养基的2L瓶子中。将2L瓶子的内容物转移到10CS中并且跨越所有的层进行接种。随后在37±2.0℃及5.0±1.0%CO2的条件下孵育细胞并且每五至七天补给新鲜完全生长培养基。在传代之前不应该将细胞保留在10CS中20天以上。
初次收获：当10CS中的细胞汇合度是95%或以上时收获细胞。通过去除用过的培养基，洗涤细胞，用胰蛋白酶-EDTA处理以将粘附细胞释放到溶液中并且再添加完全生长培养基中和胰蛋白酶来进行收获。通过离心收集细胞，重悬并且进行过程中品质控制(QC)测试以测定总的活细胞计数和细胞活力。应该收集条件培养基的理想时刻就是这个时候，因为培养基的量显著更高并且存在更多细胞产生副产物。
如果在接收源于初次10CS收获的细胞计数之后还需要额外的细胞，就再传代成多个细胞层叠(至多四个10CS)(图1中的步骤5a)。为了再次传代，将来自初次收获的细胞加入含有新鲜完全生长培养基的2L培养基瓶子中。将重悬的细胞加入多个细胞层叠并且在37±2.0℃及5.0±1.0%CO2下孵育。如上所述补给和收获细胞层叠，不同的是细胞收获之前的细胞汇合度必须是80%或更高。收获程序与对于上面的初次收获的描述相同。收集来自细胞和用过的培养基的支原体样本，并且按照对于上文初次收获的描述检测细胞计数和活力。
用于在局部配方的制备中使用的条件培养基理想地是从初次收获或自上述成纤维细胞制造过程初次收获之后的额外传代步骤收集的。与过程(T-175和T-500瓶)中较早使用的瓶比较，汇合的10CS由最大的粘附细胞群体组成，并且具有最大的完全生长培养基体积。然而，可以在过程的任何阶段收集条件培养基，其中培养基在一段时期的孵育之后去除以在过程中的早期产生局部产品，或汇集以获得更高的产率。
在收获10CS(或其它选择的培养容器)时，从所述容器去除1.5L(或对于上游培养容器更少)条件培养基并且收集在适当的容器(如2L瓶子)中。通过超滤、脱水或冻干浓缩培养基。可以将浓缩的培养基与不同培养基收获点(例如T-500和10CS)组合，或可以分别处理个别培养基收获物。
异源制造：
为了产生异源成纤维细胞培养物，选择供体以提供起始组织。收集活检皮肤组织之前，为个体进行全身健康检查并且筛选血源性致病疾病，如HIV和乙型肝炎。一旦供体有资格参与，就可以收集活检样本并且按照上面对于自体方法的描述进行运输。
为了向较大的顾客群体提供条件培养基，首先建立MCB用于后续的细胞扩增和培养基收集。为了产生MCB，使用上述自体方法扩增从供体收集的活检组织。一旦完成收获，就可以进行一系列的安全性测试以确保细胞系的纯度，所述测试包括以下：
病毒筛选：测试一组病毒粒子。
无菌性：测试没有微生物。
支原体：特别测试没有分类为支原体物种的微生物，所述支原体物种被认为是细胞培养中的潜在污染物。
内毒素：测试引起致热(发烧)反应的蛋白质。
此外，进行效力测试以确定细胞的品质：
细胞计数：定量收获的群体中的细胞。
细胞活力：群体中的活细胞的百分比。
一致性：确定为成纤维细胞的细胞的百分比。
胶原含量：存在于细胞悬浮液中的胶原的量，指示有生物活性的细胞群体。
最终收获之后，按照上文对于自体方法的描述将细胞等分并且低温储存在液氮的蒸气相中。这些细胞代表MCB，并且在下游用于接种其它培养物用于条件培养基收集。维持多个供体细胞系可提供不间断的库存用于制造。
每个MCB小瓶均能够接种新的成纤维细胞次培养系以建立工作细胞库(WCB)。成纤维细胞将在常规的培养容器中传代以产生足够的细胞，从而充分接种大规模培养生物反应器。冷冻从培养物收获的小瓶并且放入低温储存以产生最终的WCB。
将来自WCB的冷冻细胞解冻并且使用常规的细胞培养扩增。将细胞传代直到产生足够接种生物反应器的细胞。生物反应器通常在生物技术工业中用于支持疫苗、抗体和小分子的生产。为了产生大量用于在局部产品制剂中使用的条件培养基，可以使用生物反应器来生产大规模的培养物以使收集的培养基的量达到最大。
生物反应器中的粘附性细胞培养是可以直接应用于本申请的现有技术。有多种各种尺寸的现成的单元可时刻监测诸如温度、CO2、pH和溶解氧等培养条件，以确保批次间的一致性。实例包括：
Figure BDA00003116679000101
系列(New Brunswick Scientific,Edison,NJ)
WAVETM生物反应器***(GE Healthcare,Piscataway,NJ)
生物反应器采用微载体充当粘附性细胞(如成纤维细胞)的生长表面。所述载体是能够支持细胞直接扩增到所述表面的2D或3D结构。大量的微载体为细胞提供在生物反应器内附着的大量生长表面积。可能的载体包括：
多元掺混物如
Figure BDA00003116679000102
(Cesco Bioengineering，由BellcoBiotechnology,Vineland,NJ经销)和
Figure BDA00003116679000103
(New BrunswickScientific,Edison,NJ)
明胶，如Cultispher-G(Percell Biolytica,Astrop,Sweden)
纤维素，如CytoporeTM(GE Healthcare,Piscataway,NJ)有涂层/无涂层聚苯乙烯，如2D MicroHexTM(Nunc,Weisbaden,Germany)、
Figure BDA00003116679000104
(GE Healthcare,Piscataway,NJ)或Hy-Q SphereTM(ThermoScientific Hyclone,Logan,UT)
一旦接种到含有微载体的生物反应器中，就在处理过程中用新鲜培养基补给培养物。在培养期间每隔几天就进行多次补给。无菌收集条件培养基，等分到适当的容器中并且冷冻用于后续处理。
或者，可以使用典型的培养容器如组织培养瓶(tissue flaks)和细胞层叠代替生物反应器来扩增WCB并且收集培养基用于在局部制剂中使用。
C.制剂
载剂可以是能够向组织递送来自细胞培养基的活性剂的任何凝胶、软膏、洗剂、乳液、乳膏、泡沫、摩丝、液体、喷雾剂、混悬液、分散体或气雾剂。如果活性剂不可溶于含水环境，则需要合适的乳化剂。可以添加渗透增强剂以使活性剂能够穿过角质层屏障。在一个实施方案中，载剂是凝胶，其无嗅无味并且可迅速溶解，如水醇凝胶(hydroalcoholic gel)。
1.赋形剂
本文中使用的“水溶性的”是指溶解度大于或等于5g/100ml水的物质。
本文中使用的“脂溶性的”是指在疏水性液体(如蓖麻油)中的溶解度大于或等于5g/100ml的物质。
本文中使用的“亲水性的”是指具有容易与水相互作用的强极性基团的物质。
“亲脂性的”是指对脂质有亲和力的化合物。
“两亲性的”是指兼备亲水性和亲脂性(疏水性)特性的分子。
本文中使用的“疏水性的”是指对水缺少亲和力；趋向于排斥并且不吸收水以及不溶于水或与水混合的物质。
“凝胶”是其中分散相与连续相组合产生半固体材料(如果冻)的胶体。
“油”是含有至少95%wt的亲脂性物质的组合物。亲脂性物质的实例包括但不限于天然存在的和合成的油、脂肪、脂肪酸、卵磷脂、甘油三酯和其组合。
“连续相”是指其中悬浮固体或分散另一种液体的液滴的液体，并且有时称为外相(external phase)。这也指其中分布固体或液体颗粒的胶体的液相。如果连续相是水(或另一种亲水性溶剂)，那么水溶性或亲水性药物将溶于连续相(而非被分散)。在多相制剂(例如，乳液)中，离散相(discreet phase)悬浮或分散在连续相中。用于局部施用的赋形剂可以包括抗微生物化合物(例如对羟基苯甲酸酯)、抗氧化剂(例如抗坏血酸基乙酸钠和α-生育酚)、稳定剂(例如山梨醇)和/或产生具有亲水相和疏水相两者的稳定乳液的乳化剂。
制剂中可以包括“稀释剂”以溶解、分散或以其它方式并入载剂。稀释剂的实例包括但不限于水、缓冲水溶液、有机亲水性稀释剂(如一价醇)和低分子量二醇和多元醇(例如丙二醇、聚丙二醇、甘油、丁二醇)。
根据制剂类型来选择适当的赋形剂。标准的赋形剂包括明胶、酪蛋白、卵磷脂、***胶、胆固醇、黄芪胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、十八十六醇、西土马哥(cetomacrogol)乳化蜡、失水山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚乙二醇、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶态二氧化硅、磷酸盐、十二烷基硫酸钠、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、非晶纤维素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、糖和淀粉。
乳液是一种液体以小液滴形式分布于整个第二种液体本体中的制剂。分散的液体是不连续相，而分散介质是连续相。当油是分散液体并且水溶液是连续相时，它称为水包油乳液，而当水或水溶液是分散相并且油或油性物质是连续相时，它称为油包水乳液。油相可以至少部分由推进剂(如HFA推进剂)组成。油相和水相中的任一者或两者均可以含有一种或多种表面活性剂、乳化剂、乳液稳定剂、缓冲剂和其它赋形剂。优选的赋形剂包括表面活性剂，特别是非离子表面活性剂；乳化剂，特别是乳化蜡；和液态非挥发性非水材料，特别是二醇，如丙二醇。油相可以含有其它药学上认可的油性赋形剂。例如，在油相中可以使用诸如羟基化蓖麻油或芝麻油等材料作为表面活性剂或乳化剂。
“润肤剂”是软化或润滑皮肤的外部涂覆药剂，并且通常是本领域已知的并且在诸如“Handbook of Pharmaceutical Excipients”，4th Ed.，Pharmaceutical Press，2003等目录中列出。它们包括但不限于杏仁油、蓖麻油、长角豆提取物、十八十六醇、鲸蜡醇、鲸蜡酯蜡、胆固醇、棉籽油、环甲硅油、乙二醇硬脂酸棕榈酸酯、甘油、单硬脂酸甘油酯、单油酸甘油酯、豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、羊毛脂、卵磷脂、轻质矿物油、中链甘油三酯、矿物油和羊毛脂醇、石蜡油、石蜡油和羊毛脂醇、大豆油、淀粉、硬脂醇、葵花油、木糖醇和其组合。在一个实施方案中，润肤剂是硬脂酸乙基己酯和棕榈酸乙基己酯。
“表面活性剂”是表面张力较低并且由此增加产品的乳化、起泡、分散、展布和润湿特性的表面活性物质。合适的非离子表面活性剂包括乳化蜡、单油酸甘油酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚山梨醇酯、失水山梨醇酯、苄醇、苯甲酸苄酯、环糊精、单硬脂酸甘油酯、泊洛沙姆、聚维酮和其组合。在一个实施方案中，非离子表面活性剂是硬脂醇。
“乳化剂”是促进一种液体在另一种液体中悬浮并且促进油和水的稳定混合物或乳液形成的表面活性物质。常见的乳化剂是：金属皂、某些动物油和植物油和各种极性化合物。合适的乳化剂包括***胶、阴离子乳化蜡、硬脂酸钙、卡波姆、十八十六醇、鲸蜡醇、胆固醇、二乙醇胺、乙二醇硬脂酸棕榈酸酯、单硬脂酸甘油酯、单油酸甘油酯、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、羊毛脂、含水羊毛脂醇、卵磷脂、中链甘油三酯、甲基纤维素、矿物油和羊毛脂醇、磷酸二氢钠、单乙醇胺、非离子乳化蜡、油酸、泊洛沙姆(poloxamer)、泊洛沙姆(poloxamers)、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、海藻酸丙二醇酯、自乳化单硬脂酸甘油酯、脱水柠檬酸钠、十二烷基硫酸钠、失水山梨醇酯、硬脂酸、葵花油、黄芪胶、三乙醇胺、黄原胶和其组合。在一个实施方案中，乳化剂是硬脂酸甘油酯。
“洗剂”是低粘度至中等粘度液体制剂。洗剂可以含有通过使用助悬剂和分散剂可溶于分散介质的细粉状物质。或者，洗剂可以具有与媒剂不互溶并且通常借助于乳化剂或其它合适的稳定剂分散的液体物质作为分散相。在一个实施方案中，洗剂是呈粘度在100和1000厘斯之间的乳液形式。洗剂的流动性允许在较广的表面积上快速和均匀地涂覆。一般希望洗剂在皮肤上干燥，从而在皮肤表面上留下其医学组分的薄涂层。
“乳膏”是“水包油”或“油包水”型粘性液体或半固体乳液。乳膏可以含有乳化剂和/或其它稳定剂。在一个实施方案中，制剂是呈粘度大于1000厘斯(一般在20,000-50,000厘斯范围内)的乳膏形式。乳膏时常比软膏优选，这是因为它们通常容易展布并且容易去除。
乳膏和洗剂之间的基本区别是粘度，这取决于各种油的量/使用和用于制备制剂的水的百分比。取决于在皮肤上的希望的作用，乳膏一般比洗剂更稠，可能具有各种用途并且往往使用更多样的油/脂。在一种乳膏制剂中，水基百分比是总量的约60-75%并且油基百分比是总量的约20-30%，其它百分比是乳化剂、防腐剂和添加剂，总共为100%。
“软膏”是含有软膏基质和任选一种或多种活性剂的半固体制剂。合适的软膏基质的实例包括烃基质(例如，石蜡油、白石蜡油、黄软膏和矿物油)；吸收基质(亲水性石蜡油、无水羊毛脂、羊毛脂和冷霜)；水可去除的基质(例如，亲水性软膏)和水溶性基质(例如，聚乙二醇软膏)。一般糊剂与软膏的区别在于其含有更大的固体百分比。糊剂一般比用相同组分制备的软膏吸收性更好并且较不油腻。
“凝胶”是在液体媒剂中含有小分子或大分子分散体的半固体***，所述液体媒剂在溶解或悬浮于液体媒剂中的增稠剂或聚合材料的作用下变成半固体。所述液体可以包括亲脂性组分、含水组分或两者。一些乳液可能是凝胶或另外包括凝胶组分。然而，一些凝胶不是乳液，因为它们不含不互溶组分的均匀掺混物。合适的胶凝剂包括但不限于改性纤维素，如羟丙基纤维素和羟乙基纤维素；卡波普均聚物和共聚物；和其组合。液体媒剂中的合适的溶剂包括但不限于二甘醇单***；烷二醇，如丙二醇；二甲基异山梨醇；醇，如异丙醇和乙醇。一般根据溶剂溶解药物的能力来选择溶剂。也可以并入其它改善制剂的皮肤感觉和/或润肤性的添加剂。这些添加剂的实例包括但不限于豆蔻酸异丙酯、乙酸乙酯、苯甲酸C12-C15烷基酯、矿物油、角鲨烷、环甲硅油、癸酸/辛酸甘油三酯和其组合。
泡沫由乳液与气态推进剂的组合组成。气态推进剂主要由氢氟烷(HFA)组成。合适的推进剂包括HFA，如1,1,1,2-四氟乙烷(HFA134a)和1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷(HFA227)，但是这些和其它目前已批准或可能被批准用于医药使用的HFA的混合物和混杂物是合适的。推进剂优选不是在喷雾期间可能产生易燃或***性蒸气的烃推进剂气体。此外，组合物优选不含在使用期间可能产生易燃或***性蒸气的挥发性醇。
缓冲剂用于控制组合物的pH。缓冲剂优选使组合物缓冲在约4的pH至约7.5的pH，更优选约4的pH至约7的pH，并且最优选约5的pH至约7的pH。在一个优选实施方案中，缓冲剂是三乙醇胺。
防腐剂可用于防止真菌和微生物的生长。合适的抗真菌剂和抗微生物剂包括但不限于苯甲酸、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、丙酸钠、苯扎氯铵、苄索氯铵、苄醇、西吡氯铵、氯丁醇、苯酚、苯乙醇和硫柳汞。
2.渗透增强剂
渗透增强剂经常用于促进药物穿过皮肤的透皮递送，具体来讲是穿过角质层。一些渗透增强剂引起皮肤刺激、皮肤毒性和皮肤过敏。然而，较常用的渗透增强剂包括尿素、(碳酰胺)、咪唑烷基脲、N,N-二乙基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷、1-十二烷基-氮杂环庚烷-2-酮、硫代乙醇酸钙、2-吡咯烷、N,N-二乙基-间甲苯酰胺、油酸和其酯衍生物如单油酸的甲酯、乙酯、丙酯、异丙酯、丁酯、乙烯酯和甘油酯、失水山梨醇酯如单月桂酸失水山梨醇酯和单油酸失水山梨醇酯、其它脂肪酸酯如月桂酸异丙酯、豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、己二酸二异丙酯、单月桂酸丙二醇酯、单油酸丙二醇酯和非离子清洁剂如
Figure BDA00003116679000164
(硬脂基聚(10氧乙烯醚)、
Figure BDA00003116679000162
(硬脂基聚(20)氧乙烯醚)、
Figure BDA00003116679000163
(油烯基聚(10)氧乙烯醚)和
Figure BDA00003116679000165
(硬脂基聚(21)氧乙烯醚)(ICIAmericas Inc.Corp.)。
3.制剂
一旦培养基被充分地浓缩，就将粉末或液体与选择的局部媒剂掺混。掺混可以人工或使用机械装置进行。配制之后，将产品装入适当的分配器并且运往终端使用者。最终容器的实例可以包括泵式瓶、压挤瓶、罐、管或小瓶。
取决于使用的浓缩方法，浓缩的材料可以是液体(小于100mL)或粉末形式。在进行测试时，冻干从成纤维细胞培养物的10CS收集的全部1.5L得到23-27g之间的粉末材料(N=3)。取决于预定的用途，向赋形剂中添加的条件培养基的浓度在1-95%的范围内，但是一般是1-5%。在这些浓度下，可以制备多个容器的局部产品，用于对单个患者持续供应，或者如果从异源条件培养基发酵则用于大量销售。
4.条件培养基表征
总胶原：
测试总胶原含量是可注射自体细胞治疗产品的发布标准的一部分，它指示成纤维细胞在培养中是有生物活性的。在历史上也测试条件培养基的胶原含量作为表征测试的一部分。测试是使用Sicrol测定试剂盒(Biocolor Life Science Assays，英国)进行的。所述试剂盒测量胶原I-V并且报告总胶原含量值。
表1提供来自直接从培养物取得的条件培养基的胶原含量结果(N=10，从四个独立的细胞培养物批次取得)。此外，表1中提供培养基收集时的传代数和细胞汇合度，指示在40-100%范围内的汇合度和不同细胞传代时在过程中的各种传代时存在胶原。
表1：条件培养基样本的胶原含量结果
样本 胶原含量(μg/mL) 细胞汇合度% 细胞培养物传代
批次1-样本1 439.34 100 P1
批次1-样本2 416.90 50 P2
批次2-样本1 349.36 50 P2
批次3-样本1 410.74 70 P1
批次3-样本2 467.72 100 P1
批次3-样本3 356.84 50 P2
批次4-样本1 367.74 40 P0
批次4-样本2 256.74 60 P1
批次4-样本3 352.44 100 P1
批次4-样本4 364.32 50 P2
氨基酸：
完全生长培养基的IMDM组分含有支持细胞扩增的氨基酸。使用尺寸排阻色谱法(SEC，N=6)测试在自体制造过程期间收集的条件培养基样本的氨基酸含量。表3提供选择的氨基酸的报告浓度范围。
表2：来自条件培养基样本的氨基酸含量范围
氨基酸 检测的范围(mg/L)
Asp 3-17
Glu 49-105
Ser 13-33
Asn 12-16
Gly 21-48
Gln 201-282
His 20-28
Thr 56-87
Arg 43-51
Ala 24-53
Pro 30-51
Tyr 41-62
Cys 19-24
Val 56-82
Met 17-25
Ile 60-85
Leu 64-93
Lys 70-102
Phe 39-60
II.施用和治疗的方法
可以使用所述制剂用于局部表面递送到任何位置，特别是皮肤由于衰老造成变薄、变色或起皱的区域。皮肤的衰老过程是由内因和外因造成的。促进内在或自然衰老的因素都是结构和功能性的。结构上，表皮变薄，角质化细胞粘附性变小并且真皮-表皮接合处变平。功能上，成纤维细胞的数量和生物合成能力降低，并且真皮变得萎缩并且相对无细胞和无血管。曝露于紫外光辐射是外在或光衰老的主要原因。外在的衰老特征是弹性消失、粗糙度和干燥度增加、无规律的色素沉积、深的皱纹、皮革样外表、起泡和创面愈合不良。可见的衰老外表(特别是面部皱纹和折痕)是患者设法减少的常见影响。治疗面部线条、皱纹和折痕的选择包括手术、神经毒素、填充剂、激光、非损伤性治疗、微晶磨削(microdermabrasion)和化学脱皮。这些治疗方法中有许多在衰老体征的治疗中有不同的安全性、功效和作用持续时间。本文中描述的制剂可以通过以下方式起作用：刺激真皮中的细胞生长和***，增加胞外基质组分(例如胶原)的产生和/或刺激现有胞外基质重构，这对于皮肤改善可能具有多重作用。

Claims (16)

1.一种局部制剂，其包含
用于局部涂覆的赋形剂，和
通过培养活检成纤维细胞获得的条件培养基，所述成纤维细胞是从预期接受者获得的自体成纤维细胞或所述成纤维细胞是从一个或多个在培养之前进行了疾病和和相容性筛选的个体获得的，其中将所述赋形剂与所述条件培养基或其中的材料掺混以形成所述制剂。
2.如权利要求1所述的制剂，其选自由凝胶、软膏、洗剂、乳液、乳膏、泡沫、摩丝、液体、喷雾剂、混悬液、分散体和气雾剂组成的组。
3.如权利要求1所述的制剂，其中所述成纤维细胞已经传代多次以产生所述条件培养基。
4.如权利要求3所述的制剂，其中所述成纤维细胞在达到40%汇合之后传代。
5.如权利要求1所述的制剂，其中所述自体成纤维细胞是从三个3-mm穿刺皮肤活检获得的。
6.如权利要求1所述的制剂，其中所述制剂含有从所述细胞生长至至少80%细胞汇合的1.5升条件细胞培养基获得的材料。
7.一种制备包含以下的自体局部制剂的方法
用于局部涂覆的赋形剂，和
通过培养活检成纤维细胞获得的条件培养基，所述成纤维细胞是从预期接受者获得的自体成纤维细胞或所述成纤维细胞是从一个或多个在培养之前进行了疾病和相容性筛选的个体获得的，
所述方法包括在细胞培养物中培养所述成纤维细胞，以及将所述条件培养基或其中的材料与所述赋形剂混合以制备用于局部涂覆的制剂。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述制剂选自由凝胶、软膏、洗剂、乳液、乳膏、泡沫、摩丝、液体、喷雾剂、混悬液、分散体和气雾剂组成的组。
9.如权利要求7所述的方法，其中所述成纤维细胞已经传代多次以产生所述条件培养基。
10.如权利要求7所述的方法，其中所述成纤维细胞在达到40%汇合之后传代。
11.如权利要求7所述的方法，其中所述自体成纤维细胞是从三个3-mm穿刺皮肤活检获得的。
12.如权利要求7所述的方法，其中所述制剂含有从其中所述细胞生长至至少80%细胞汇合的1.5升条件细胞培养基获得的材料。
13.如权利要求7所述的方法，其中所述条件细胞培养基被干燥以产生与所述赋形剂掺混的材料。
14.一种用于治疗皮肤的方法，其包括局部施用通过培养由权利要求1-6中任一项定义的皮肤成纤维细胞获得的条件培养基的制剂。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述制剂是以有效减少斑痕形成或衰老体征的量施用的。
16.如权利要求14所述的方法，其中所述制剂是以有效改善皮肤品质的量施用的。
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Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8728819B2 (en) 2006-08-29 2014-05-20 Fibrocell Technologies, Inc. Methods for culturing minimally-passaged fibroblasts and uses thereof
US8900181B2 (en) 2009-12-18 2014-12-02 Srgi Holdings, Llc Skin treatment and drug delivery device
US20160317170A1 (en) 2013-12-06 2016-11-03 Edward KNOWLTON Pixel array medical systems, devices and methods
US10736653B2 (en) 2013-12-06 2020-08-11 Srgi Holdings, Llc Pixel array medical systems, devices and methods
US11278309B2 (en) 2010-12-17 2022-03-22 Srgi Holdings, Llc Pixel array medical systems, devices and methods
US10702684B2 (en) 2010-12-17 2020-07-07 Srgi Holdings, Llc Systems, devices and methods for fractional resection, fractional skin grafting, fractional scar reduction and fractional tattoo removal
US10856900B2 (en) 2010-12-17 2020-12-08 Srgi Holdings, Llc Pixel array medical systems, devices and methods
US10368904B2 (en) 2013-12-06 2019-08-06 Srgi Holdings, Llc Pixel array medical systems, devices and methods
US11103275B2 (en) 2010-12-17 2021-08-31 Srgi Holdings, Llc Pixel array medical systems, devices and methods
US11000310B2 (en) 2010-12-17 2021-05-11 Srgi Holdings, Llc Pixel array medical systems, devices and methods
US10967162B2 (en) 2010-12-17 2021-04-06 Srgi Holdings, Llc Systems, devices and methods for fractional resection, fractional skin grafting, fractional scar reduction and fractional tattoo removal
EP2822659A2 (en) * 2012-03-07 2015-01-14 Fibrocell Technologies, Inc. Topical dermal formulations and methods of personalized treatment of skin
US11744856B1 (en) 2012-04-11 2023-09-05 Medicell Technologies, Llc Compositions and methods to improve skin quality and appearance, cure skin and tissue damage, and use in therapy
SG11201602636PA (en) 2013-10-02 2016-05-30 Srgi Holdings Llc Pixel array medical devices and methods
ES2827049T3 (es) 2013-10-02 2021-05-19 Srgi Holdings Llc Dispositivos médicos de conjunto de píxeles
US11229452B2 (en) 2013-12-06 2022-01-25 Srgi Holdings, Llc Pixel array medical systems, devices and methods
US11937846B2 (en) 2013-12-06 2024-03-26 Srgi Holdings Llc Pixel array medical systems, devices and methods
CA2936430C (en) 2014-02-14 2022-05-31 Mission Pharmacal Company Sprayable composition containing zinc oxide and a fluoro-olefin propellant
EP3105146B1 (en) * 2014-02-14 2019-10-16 Mission Pharmacal Company Spray delivery device
US11751903B2 (en) 2015-08-31 2023-09-12 Srgi Holdings, Llc Pixel array medical systems, devices and methods
US11490952B2 (en) 2015-08-31 2022-11-08 Srgi Holdings, Llc Pixel array medical devices and methods
WO2017100425A1 (en) * 2015-12-10 2017-06-15 Aesthetics Biomedical, Inc. Topical formulation for skin care
US11564706B2 (en) 2019-10-28 2023-01-31 Srgi Holdings, Llc Pixel array medical systems, devices and methods
US11345884B2 (en) * 2017-03-31 2022-05-31 Cellum Biomedical, Inc. Biocompatible conditioned cell medium compositions and uses thereof
WO2020086915A2 (en) 2017-05-03 2020-04-30 Srgi Holdings Llc Handed spiral slotted scalpet array
WO2018217479A2 (en) 2017-05-11 2018-11-29 Srgi Holdings, Llc Systems, devices and methods for fractional resection, fractional skin grafting, fractional scar reduction and fractional tattoo removal

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008027984A1 (en) * 2006-08-29 2008-03-06 Isolagen Technologies, Inc. Methods for culturing minimally-passaged fibroblasts and uses thereof
WO2009121761A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-08 Scarcell Therapeutics Method for the cosmetic treatment of skin ageing

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6372494B1 (en) 1999-05-14 2002-04-16 Advanced Tissue Sciences, Inc. Methods of making conditioned cell culture medium compositions
NZ530481A (en) * 2001-06-07 2007-11-30 Skinmedica Inc Compositions comprising cell culture medium conditioned by cells grown in three-dimensional culture
NZ536290A (en) * 2002-05-10 2006-07-28 Isolagen Technologies Inc Injecting a suspension of histologically compatible, autologous, passaged fibroblasts and muscle cells to treat urinary incontinence and vesicoureteral and oesophageal reflux
JP2004339107A (ja) * 2003-05-14 2004-12-02 Applied Cell Biotechnologies Inc 細胞外マトリックス濃縮液を利用した皮膚疾患治療剤及び皮膚疾患治療用被覆材。

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008027984A1 (en) * 2006-08-29 2008-03-06 Isolagen Technologies, Inc. Methods for culturing minimally-passaged fibroblasts and uses thereof
WO2009121761A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-08 Scarcell Therapeutics Method for the cosmetic treatment of skin ageing

Also Published As

Publication number Publication date
WO2012027742A2 (en) 2012-03-01
US20120219634A1 (en) 2012-08-30
AU2011293146A1 (en) 2013-04-11
EP2608768A2 (en) 2013-07-03
US20140099383A1 (en) 2014-04-10
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JP2013536252A (ja) 2013-09-19
CA2809371A1 (en) 2012-03-01
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