CN103262943B - 一种淡竹叶提取物及其应用 - Google Patents
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Abstract
一种淡竹叶提取物及其应用，该淡竹叶提取物由以下方法制成：取淡竹叶茎叶，粉碎，加入体积浓度为70%-85%的乙醇溶液，回流提取，过滤；滤液浓缩至含固量12wt%-16wt%，喷雾干燥，得淡竹叶醇溶性提取物；取滤渣，加蒸馏水，于70-90℃下浸泡提取3-4h，过滤或离心后，滤液或离心液浓缩至含固量12wt%-16wt%，喷雾干燥，得淡竹叶水溶性提取物；将所得淡竹叶醇溶性提取物和淡竹叶水溶性提取物以质量比1:1－3的比例混合配制，即成。本发明之淡竹叶提取物按照0.02-0.3wt%的质量比添加到动物配合饲料中使用。本发明之淡竹叶提取物，绿色环保，成本低，能提高动物抗病抗炎能力，改善动物健康状况。
Description
技术领域
本发明涉及一种淡竹叶提取物及其应用，尤其是涉及一种淡竹叶提取物及其在动物保健中的应用。
背景技术
近年来，动物疾病成为制约我国养殖业健康持续发展最主要的因素。疾病误诊、不合理用药和免疫失败等现象在猪场时有发生，致使某些动物疾病反复暴发和持续流行，给养殖户造成了巨大的经济损失。目前动物传染性疾病如猪蓝耳病、猪圆环病毒Ⅱ型感染、猪流感、猪瘟和猪大肠杆菌病等，引起动物生产性能下降、饲料转化率低、繁殖障碍甚至死亡等诸多问题，这直接影响到养殖场的经济效益。一直以来，在动物疾病的预防和治疗上，大量使用抗生素、激素导致病菌产生耐药性，动物免疫和抗病能力下降，是引发这一系列问题的根源。目前改变这种现状最直接的方法就是寻找能替代抗生素的高效、无毒副作用的动物药物和改善动物健康状况、提高机体免疫抗病能力的饲料添加剂。中草药具有天然、高效、无毒副作用的特点，是目前研发新型动物保健产品的热点之一。在传统中医药理论的指导下，利用中草药作为饲料添加剂，能够起到促进动物生长，增强体质，提高生产性能，抗应激和防治疾病等作用。目前，中草药类饲料添加剂产品大多为中药复方及其提取物复方，如CN95100946.X公开了一种用于防治禽畜疾病的中草药制剂，申请号为200610001312.X的中国专利申请公开了一种饲料添加剂及饲料,以及申请号为201110292217.0的中国专利申请公开了一种天然植物饲料添加剂及其制备方法等，这些产品普遍存在组成复杂，药效物质基础和作用机制不明确，没有具体的质量标准，存在产品质量难以控制的缺陷。
近年来，病毒性疾病在动物疾病中占主导地位并种类逐年增多，病毒性疾病具有病原变异快和缺乏特异性的治疗药物等特点，相对于细菌性传染病，其更难以诊断和防治。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种绿色环保，成本低，能提高动物抗病抗炎能力，改善动物健康状况的淡竹叶提取物及其应用。
本发明之淡竹叶提取物，由以下方法制成：取淡竹叶茎叶，粉碎，加入体积浓度为70%-85%的乙醇溶液，淡竹叶茎叶粉与乙醇溶液的质量体积比为1︰12-18g/mL，于80-90℃回流提取2-3次，每次2.5-3.5h，过滤，滤液和滤渣均保留待用；滤液浓缩回收乙醇至含固量为12wt%-16wt%的浓缩液，然后在160-180℃下喷雾干燥，得淡竹叶醇溶性提取物；取过滤后的滤渣，按照淡竹叶茎叶粉的质量与蒸馏水的体积比为1:10-15g/mL的比例添加蒸馏水，于70-90℃下浸泡提取3-4h，过滤或离心后，滤液或离心液浓缩至含固量12wt%-16wt%，然后在160-180℃下喷雾干燥，得淡竹叶水溶性提取物；将所得淡竹叶醇溶性提取物和淡竹叶水溶性提取物以质量比1:1－3的比例混合配制，即得。
研究表明，淡竹叶有效成份既有醇溶成分，又有水溶成分。本发明对淡竹叶有效成份的提取，分两次进行，先用醇溶液提取，获得淡竹叶醇溶性提取物；残渣用蒸馏水继续提取，获得淡竹叶水溶性提取物，使淡竹叶的各类有效成分提取完全，以充分利用和节约淡竹叶资源。
本发明之淡竹叶提取物，淡竹叶醇溶性提取物主要活性成分为黄酮类化合物，淡竹叶水溶性提取物主要活性成分为多糖类化合物，两者以质量比1:1－3的比例混合后，淡竹叶提取物中黄酮类化合物的含量达10－20wt%，多糖含量达20－30wt%。
本发明之淡竹叶提取物的应用，可按照0.02-0.3wt%（优选0.04-0.15wt%）的质量比添加到动物配合饲料中使用。
本发明之淡竹叶提取物，适用于各类畜禽类动物和水产动物的保健，包括猪、鸡、鸭、鱼和虾。
淡竹叶作为一味传统中药，具有清热解毒、利尿的功效,主产于我国浙江、安徽、湖南、四川等省，自然资源丰富。传统中医用药时，淡竹叶常作为清热解毒药使用，从现代医学的角度来说，清热解毒药的药理作用可概括为以下几个方面，一是抗病原微生物作用，二是抗细菌内毒素作用，三是抗炎作用，四是调节免疫的作用。
研究表明，淡竹叶清热解毒的物质基础主要包括黄酮类、有机酸和三萜类化合物，从淡竹叶中分离获得的黄酮类化合物包括木犀素、苜蓿素、牡荆苷等，同时利用高效液相色谱法检测到荭草苷、异荭草苷等黄酮类成分。药理研究表明，木犀草素、苜蓿素和荭草苷等均具有清除自由基、抗病毒和抗菌的药理活性。尤其是木犀草素对多种病毒具有抑制作用，如单纯疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、HIV-1 病毒、柯萨奇B3病毒以及猪传染性胃肠炎病毒等。淡竹叶黄酮类化合物的广谱抗病毒、抗菌作用将能一定程度上提高动物抵抗疾病能力。同时，淡竹叶中还含有大量的多糖类化合物，多糖是目前公认的免疫增强剂，将淡竹叶提取物应用于动物饲料添加剂，其调节免疫、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗菌等多项生物活性，有利于增强动物机体免疫力，提高动物防病抗病能力，改善动物的健康状况等。本发明单独以淡竹叶提取物作为动物饲料添加剂产品，产品构成简单，淡竹叶中有效成分得到提炼，产品质量易控制，对淡竹叶资源的开发和动物饲料添加剂的创新均具有重要意义。
本发明之淡竹叶提取物，具有清除自由基、广谱抗菌、抗病毒、抗炎以及改善动物健康状况的作用。将淡竹叶提取物作为饲料添加剂应用于动物喂养，能明显提高动物体内抗病毒功能性物质含量和抗氧化酶活性，提高免疫抗体水平；应用于繁殖动物喂养，能减少生产繁殖动物炎症的发生，提高繁殖动物的生产性能和哺乳性能。
本发明具有以下积极效果：一是，本发明采用分步提取的方法，将淡竹叶不同极性范围的有效成分充分提取出来，不但充分利用了淡竹叶资源，同时最大程度上保留了淡竹叶中的有效成份，获得的混合提取物能充分发挥淡竹叶的药理作用，生物活性显著；二是，本发明之淡竹叶提取物按照0.02-0.3wt%的质量比添加到动物配合饲料中使用，能有效增强动物免疫抗病能力、提高动物抗炎和抗氧化能力、改善繁殖动物生产性能和哺乳性能等；三是，将中药淡竹叶以提取物的形式添加到饲料中，混料方便，有效物质得到提炼，功效更显著，具有质量标准规范，产品质量稳定，更加符合新型饲料添加剂的标准；四是，淡竹叶提取物属于纯天然植物提取物，对动物无毒副作用，无耐药性，动物产品中无残留，可长期添加。
附图说明
图1为本发明实施例3淡竹叶提取物对动物免疫抗病能力的影响图；
图2为本发明实施例3淡竹叶提取物对动物体内抗氧化酶水平的影响图；
图3为本发明实施例3淡竹叶提取物对动物体内过氧化产物的影响图；
图4是本发明实施例4淡竹叶提取物对动物体内伪狂犬抗体滴度水平的影响图；
图5是本发明实施例4淡竹叶提取物对动物体内猪瘟抗体水平的影响图；
图6是本发明实施例5淡竹叶提取物对母猪生产产程的影响图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1
淡竹叶提取物制备实施例一
本实施例之淡竹叶提取物，由以下方法制成：
取淡竹叶茎叶100g，粉碎，加1500mL 体积浓度为80%的乙醇溶液，于提取罐中85℃回流提取两次，每次3h，过滤，滤液和滤渣均保留待用；滤液浓缩回收乙醇至含固量12wt%的浓缩液，然后在170℃下喷雾干燥，得淡竹叶醇溶性提取物；取过滤后的滤渣，继续添加1200mL的蒸馏水，90℃下浸泡提取4h，离心后，离心液浓缩至含固量12wt%，然后在170℃下喷雾干燥，得淡竹叶水溶性提取物；将所得淡竹叶醇溶性提取物和淡竹叶水溶性提取物以质量比为1:2的比例进行混合，即得。
本实施例所得淡竹叶提取物中黄酮含量为13wt%，多糖含量为25wt%。
实施例2
淡竹叶提取物制备实施例二
本实施例之淡竹叶提取物，由以下方法制成：
取淡竹叶茎叶100g，粉碎，加1600mL 体积浓度为85%的乙醇溶液，于提取罐中80℃回流提取两次，每次3h，过滤，滤液和滤渣均保留待用；滤液浓缩回收乙醇至含固量15wt%的浓缩液，然后在170℃下喷雾干燥，得淡竹叶醇溶性提取物；取过滤后的滤渣，继续添加1500mL的蒸馏水，于80℃下浸泡提取4h，离心后，离心液浓缩至含固量15wt%，然后在170℃下喷雾干燥，得淡竹叶水溶性提取物；将所得淡竹叶醇溶性提取物和淡竹叶水溶性提取物以质量比为1:1的比例进行混合，即得。
本实施例所得淡竹叶提取物中黄酮含量为17wt%，多糖含量为20wt%。
实施例3
淡竹叶提取物对动物机体抗病能力和抗氧化能力的影响
选取日龄相近、体重为30kg左右的杜长大三元杂交猪24头，随机分为2个处理组。对照组喂养基础日粮，试验组在基础日粮中添加400g/t的实施例1所得淡竹叶提取物。基础日粮参照NRC《猪营养需要量》（1998）配制30－60kg生长猪试验基础日粮。喂养50天后，每个处理组随机选取8头体重相近的试验猪前腔静脉取血10mL，对血清中的抗病毒功能性物质免疫球蛋白IgG和血清γ-干扰素（IFN-γ）以及血浆中抗氧化指标物质丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSP-Px）的含量进行测定。
血清经前处理后，用MINDRAY BS-200全自动生化分析仪及试剂盒（购自深圳迈瑞公司）测定血清免疫球蛋白IgG；用ELISA法测定血清γ-干扰素（IFN-γ）含量。所得结果如图1所示，试验组猪内源抗病毒物质IgG、γ-干扰素水平较对照组分别提高13.8%、16.1%。
血浆抗氧化指标超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）根据试剂盒的方法操作测定和计算（试剂盒购自南京建成生物工程研究所）。结果如图2、图3所示，与对照组相比，试验组中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性分别提高9.84%、7.60%，过氧化产物丙二醛含量降低6.67%。
结论：IgG是动物体内免疫***最关键的组成物质之一，具有抗病毒、抗外毒素、杀灭细菌、中和毒素等多种生物学活性。γ-干扰素具有广谱抗病毒作用，γ-干扰素在体内通过基因合成抗病毒蛋白（TIP），切断病毒m741 RNA与宿主细胞核糖体结合，阻断病毒繁殖，起到抗病毒作用。IgG和γ-干扰素升高表明淡竹叶提取物能提高猪的免疫功能，增强抗病能力。血清谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶是机体内主要的抗氧化生物活性酶，而丙二醛含量为衡量机体过氧化程度的主要指标，两种抗氧化酶活性提高同时丙二醛含量降低，表明淡竹叶提取物具有增强机体清除过氧化物自由基的能力。
实施例4
淡竹叶提取物对动物免疫抗病毒的调节作用
选择25日龄仔猪120头，注射伪狂犬疫苗，28日龄时转入保育舍，将试验仔猪平均分配为三组：试验Ⅰ组在保育料中添加实施例1淡竹叶提取物600g/t；试验Ⅱ组在保育料中添加淡竹叶提取物800g/t；对照组以正常保育料饲养。饲养18天后，分别测定对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组的伪狂犬抗体滴度，根据猪伪狂犬抗体检测试剂盒（胶体金法）的说明进行操作，检测结果如图4所示，相对于对照组，试验Ⅰ组和试验Ⅱ组伪狂犬抗体滴度分别提高8.94%、31.71%。
选择30日龄仔猪120头，将试验仔猪平均分配为三组，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组分别向饲料中添加淡竹叶提取物500g/t、1000g/t。仔猪60日龄时接种猪瘟疫苗， 81日龄检测猪瘟抗体水平，根据猪瘟单抗纯化抗原ELISA试剂盒（购自中国兽药监察所）的方法操作，检测结果如图5所示，仔猪抗体水平合格率分别提高18.75%、21.88%。
结论：淡竹叶提取物能有效提高动物体内的抗体水平，进一步说明了淡竹叶提取物具有提高动物防病抗病能力的作用。
实施例5
淡竹叶提取物对繁殖动物健康状况及生产性能的调节作用
母猪生殖过程中机械损伤、细菌感染等易引发炎症导致母猪子宫炎症，甚至发展到***炎。母猪子宫炎症将影响母猪生产后发情断奶间隔时间、发情率以及发情配种率，严重时甚至造成母猪被提前淘汰。母猪***炎症将引起母猪采食量低、***质量差、少乳甚至无乳，哺乳仔猪腹泻、消瘦、成活率低等现象。
试验以68头生产母猪及所产仔猪为试验对象，对淡竹叶提取物对母猪炎症防控及生产性能的影响进行研究。选择距离预产期25天的母猪33头作为试验组，35头母猪作为对照组，试验组母猪产前每t饲料添加实施例2淡竹叶提取物750g，产后每t饲料添加淡竹叶提取物500g，对照组母猪进行常规的药物保健，试验组和对照组其他条件一致。试验从产前25天开始，到母猪断奶7天后结束。
对试验期间母猪子宫炎、***炎发病情况及断奶发情情况进行统计，结果见表1。
由表1可知，与对照组相比，试验组子宫炎和***炎发生率降低，断奶发情间隔期缩短，断奶7天内发情率显著提高，表明淡竹叶提取物能改善母猪的发情，有效降低母猪生产过程中子宫炎症和***炎症的发病率。
对试验母猪的生产产程进行记录，产程的计算以母猪产下第一头仔猪开始到胎衣产出结束，结果如图6所示，母猪饲料添加淡竹叶提取物能使产程缩短40-50分钟。
淡竹叶提取物对母猪哺乳性能的影响如表2所示，与对照组相比，试验组仔猪成活率显著提高，称重日龄降低，而转出均重与对照组相当，表明淡竹叶提取物具有改善母猪哺乳性能的作用。
结论：由上述试验结果可知，淡竹叶提取物具有提高繁殖动物抗炎能力，改善繁殖动物健康状况，提高其生产性能和哺乳性能的作用。
Claims (3)
1. 一种淡竹叶提取物，其特征在于，由以下方法制成：取淡竹叶茎叶，粉碎，加入体积浓度为70%-85%的乙醇溶液，淡竹叶茎叶粉与乙醇溶液的质量体积比为1︰12-18g/mL，于80-90℃回流提取2-3次，每次2.5-3.5h，过滤，滤液和滤渣均保留待用；滤液浓缩回收乙醇至含固量为12wt%-16wt%的浓缩液，然后在160-180℃下喷雾干燥，得淡竹叶醇溶性提取物；取过滤后的滤渣，按照淡竹叶茎叶粉的质量与蒸馏水的体积比为1:10-15g/mL的比例添加蒸馏水，于70-90℃下浸泡提取3-4h，过滤或离心后，滤液或离心液浓缩至含固量12wt%-16wt%，然后在160-180℃下喷雾干燥，得淡竹叶水溶性提取物；将所得淡竹叶醇溶性提取物和淡竹叶水溶性提取物以质量比1:1－3的比例混合配制，即成。
2.一种如权利要求1所述淡竹叶提取物的应用，其特征在于，按照0.02-0.3wt%的质量比添加到动物配合饲料中使用。
3.根据权利要求2所述淡竹叶提取物的应用，其特征在于，所述淡竹叶提取物添加到动物配合饲料中的质量比为0.04-0.15wt%。
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