CN103193894B - 忍冬藤多糖铬络合物的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及忍冬藤多糖铬络合物的制备方法及其应用，可有效解决忍冬藤多糖铬络合物的制备，及制备防治高血糖和糖尿病的药物问题，方法是，取忍冬藤药材粉末，加入蒸馏水，搅匀，水浴回流提取，滤液除去蛋白，得忍冬藤多糖溶液；将忍冬藤多糖溶液加热，再逐滴加入NaOH离子溶液至pH值为8-9，然后同时逐滴加入CrCl3离子溶液和NaOH离子溶液，至忍冬藤多糖溶液出现绿色絮状沉淀时，停止滴加，冷却至室温，离心除去沉淀，得忍冬藤多糖铬络合物溶液；然后装入透析袋进行透析，透析液加入乙醇，静置过夜，弃去上清液，沉淀物用乙醇、丙酮和***洗涤，得忍冬藤多糖铬络合物，本发明能有效降低高血糖或治疗糖尿病，也可作为食品添加剂或保健品使用。
Description
技术领域
本发明涉及医药，特别是一种忍冬藤多糖铬络合物的制备方法及其应用。
背景技术
三价铬离子无明显的细胞毒性，对血糖有重要的影响。以无机盐形式（三氯化铬）给药后，因三价铬离子较难进入细胞中，降糖效果并不明显，而以络合物的形式给药有利于铬离子的吸收。忍冬藤多糖铬络合物由忍冬藤多糖与三价铬络合而成，其具有一般纤维素所不具备的理化性质，忍冬藤多糖铬在给药后，通过胞饮进入细胞，三价铬离子从配合物中游离出来，与蛋白质、核酸以及各种低分子量配体结合，在糖代谢和脂肪代谢中起胰岛素增敏剂的作用，达到协助治疗高血糖及糖尿病的效果。
忍冬藤为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥茎枝。具有清热解毒，疏风通络的功效，用于温病发热，热毒血痢，痈肿疮疡，风湿热痹，关节红肿热痛。关于中药多糖铬络合物协助治疗糖尿病的研究已有所报道，但对忍冬藤多糖铬络合物治疗高血糖及糖尿病的报道却从未有研究公开报道。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之不足，本发明之目的就是提供一种忍冬藤多糖铬络合物的制备方法及其应用，可有效解决忍冬藤多糖铬络合物的制备，及制备防治高血糖和糖尿病的药物问题。
本发明解决的技术方案是，包括以下步骤：
（1）取忍冬藤药材粉末，按料液重量比1︰10—20的比例加入蒸馏水，搅匀；在100℃水浴回流提取3次，每次3—5h，过滤，合并滤液，用常规的Sevag法除去蛋白，得忍冬藤多糖溶液；
（2）将CrCl3加入水中，配制成浓度为2mol/L的CrCl3离子溶液；将NaOH加入水中，配制成浓度为2mol/L的NaOH离子溶液；
（3）将步骤（1）制备的忍冬藤多糖溶液水浴加热至70℃，再逐滴加入步骤（2）制备的NaOH离子溶液至pH值为8-9，然后同时逐滴加入步骤（2）制备的CrCl3离子溶液和NaOH离子溶液，保持pH值为8—10，至忍冬藤多糖溶液出现绿色絮状沉淀时，停止滴加NaOH离子溶液和CrCl3离子溶液，继续70℃水浴1h，得水浴后的忍冬藤多糖反应液，冷却至室温，离心除去沉淀，得忍冬藤多糖铬络合物溶液；
（4）将忍冬藤多糖铬络合物溶液装入透析袋进行透析，透析袋的截留分子量为8000—14000，透析液加入体积浓度为95%的乙醇至乙醇体积含量达到80%，静置10—15h过夜，弃去上清液，得沉淀物，沉淀物先用无水乙醇洗至上清液无色，再用丙酮和***各洗涤一次，得忍冬藤多糖铬络合物，有效用于制备防治高血糖和糖尿病的药物，实现忍冬藤多糖铬络合物在制备防治高血糖和糖尿病药物中的应用。
本发明的忍冬藤多糖铬络合物是利用中药材忍冬藤为原料提取忍冬藤多糖，在水溶液中络合反应快速获得该产物。该产物作为制备药物或食品添加剂用，能有效降低高血糖或治疗糖尿病，是一种预防和治疗高血糖或糖尿病的药物，也可作为食品添加剂或保健品使用，有广阔的实际应用价值。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
实施例1
本发明在具体实施中，是由以下步骤实现的：
（1）取忍冬藤药材粉末，按料液重量比1︰10—15的比例加入蒸馏水，搅匀；在100℃水浴回流提取3次，每次3—5h，过滤，合并滤液，用常规的Sevag法除去蛋白，得忍冬藤多糖溶液；
（2）将CrCl3加入水中，配制成浓度为2mol/L的CrCl3离子溶液；将NaOH加入水中，配制成浓度为2mol/L的NaOH离子溶液；
（3）将步骤（1）制备的忍冬藤多糖溶液水浴加热至70℃，再逐滴加入步骤（2）制备的NaOH离子溶液至pH值为8，然后同时逐滴加入步骤（2）制备的CrCl3离子溶液和NaOH离子溶液，保持pH值为8—9，至忍冬藤多糖溶液出现绿色絮状沉淀时，停止滴加NaOH离子溶液和CrCl3离子溶液，继续70℃水浴1h，得水浴后的忍冬藤多糖反应液，冷却至室温，离心除去沉淀，得忍冬藤多糖铬络合物溶液；
（4）将忍冬藤多糖铬络合物溶液装入透析袋进行透析，透析袋的截留分子量为8000—14000，透析液加入体积浓度为95%的乙醇至乙醇体积含量达到80%，静置10—15h过夜，弃去上清液，得沉淀物，沉淀物先用无水乙醇洗至上清液无色，再用丙酮和***各洗涤一次，得忍冬藤多糖铬络合物，有效用于制备防治高血糖和糖尿病的药物，实现忍冬藤多糖铬络合物在制备防治高血糖和糖尿病药物中的应用。
实施例2
本发明在具体实施中，可由以下步骤实现：
（1）取忍冬藤药材粉末，按料液重量比1︰16—20的比例加入蒸馏水，搅匀；在100℃水浴回流提取3次，每次3—5h，过滤，合并滤液，用常规的Sevag法除去蛋白，得忍冬藤多糖溶液；
（2）将CrCl3加入水中，配制成浓度为2mol/L的CrCl3离子溶液；将NaOH加入水中，配制成浓度为2mol/L的NaOH离子溶液；
（3）将步骤（1）制备的忍冬藤多糖溶液水浴加热至70℃，再逐滴加入步骤（2）制备的NaOH离子溶液至pH值为9，然后同时逐滴加入步骤（2）制备的CrCl3离子溶液和NaOH离子溶液，保持pH值为9.1—10，至忍冬藤多糖溶液出现绿色絮状沉淀时，停止滴加NaOH离子溶液和CrCl3离子溶液，继续70℃水浴1h，得水浴后的忍冬藤多糖反应液，冷却至室温，离心除去沉淀，得忍冬藤多糖铬络合物溶液；
（4）将忍冬藤多糖铬络合物溶液装入透析袋进行透析，透析袋的截留分子量为8000—14000，透析液加入体积浓度为95%的乙醇至乙醇体积含量达到80%，静置10—15h过夜，弃去上清液，得沉淀物，沉淀物先用无水乙醇洗至上清液无色，再用丙酮和***各洗涤一次，得忍冬藤多糖铬络合物，有效用于制备防治高血糖和糖尿病的药物，实现忍冬藤多糖铬络合物在制备防治高血糖和糖尿病药物中的应用。
实施例3
本发明在具体实施中，可由以下步骤实现：
（1）取忍冬藤药材粉末，按料液重量比1︰12的比例加入蒸馏水，搅匀；在100℃水浴回流提取3次，每次3—5h，过滤，合并滤液，用常规的Sevag法除去蛋白，得忍冬藤多糖溶液；
（2）将CrCl3加入水中，配制成浓度为2mol/L的CrCl3离子溶液；将NaOH加入水中，配制成浓度为2mol/L的NaOH离子溶液；
（3）将步骤（1）制备的忍冬藤多糖溶液水浴加热至70℃，再逐滴加入步骤（2）制备的NaOH离子溶液至pH值为8.5，然后同时逐滴加入步骤（2）制备的CrCl3离子溶液和NaOH离子溶液，保持pH值为8.5，至忍冬藤多糖溶液出现绿色絮状沉淀时，停止滴加NaOH离子溶液和CrCl3离子溶液，继续70℃水浴1h，得水浴后的忍冬藤多糖反应液，冷却至室温，离心除去沉淀，得忍冬藤多糖铬络合物溶液；
（4）将忍冬藤多糖铬络合物溶液装入透析袋进行透析，透析袋的截留分子量为8000—14000，透析液加入体积浓度为95%的乙醇至乙醇体积含量达到80%，静置10—15h过夜，弃去上清液，得沉淀物，沉淀物先用无水乙醇洗至上清液无色，再用丙酮和***各洗涤一次，得忍冬藤多糖铬络合物，有效用于制备防治高血糖和糖尿病的药物，实现忍冬藤多糖铬络合物在制备防治高血糖和糖尿病药物中的应用。
实施例4
本发明在具体实施中，可由以下步骤实现：
（1）取忍冬藤药材粉末，按料液重量比1︰18的比例加入蒸馏水，搅匀；在100℃水浴回流提取3次，每次3—5h，过滤，合并滤液，用常规的Sevag法除去蛋白，得忍冬藤多糖溶液；
（2）将CrCl3加入水中，配制成浓度为2mol/L的CrCl3离子溶液；将NaOH加入水中，配制成浓度为2mol/L的NaOH离子溶液；
（3）将步骤（1）制备的忍冬藤多糖溶液水浴加热至70℃，再逐滴加入步骤（2）制备的NaOH离子溶液至pH值为8.8，然后同时逐滴加入步骤（2）制备的CrCl3离子溶液和NaOH离子溶液，保持pH值为9.5，至忍冬藤多糖溶液出现绿色絮状沉淀时，停止滴加NaOH离子溶液和CrCl3离子溶液，继续70℃水浴1h，得水浴后的忍冬藤多糖反应液，冷却至室温，离心除去沉淀，得忍冬藤多糖铬络合物溶液；
（4）将忍冬藤多糖铬络合物溶液装入透析袋进行透析，透析袋的截留分子量为8000—14000，透析液加入体积浓度为95%的乙醇至乙醇体积含量达到80%，静置10—15h过夜，弃去上清液，得沉淀物，沉淀物先用无水乙醇洗至上清液无色，再用丙酮和***各洗涤一次，得忍冬藤多糖铬络合物，有效用于制备防治高血糖和糖尿病的药物，实现忍冬藤多糖铬络合物在制备防治高血糖和糖尿病药物中的应用。
本发明制备方法稳定可靠，并经多次（10次以上）实验得到了相同或相近的结果，所制备的忍冬藤多糖铬络合物经试验取得了突出的技术效果，有关实验资料如下：
Spf级小鼠制备高血糖模型前禁食24小时，自由饮水。将四氧嘧啶用生理盐水配成0.7%注射液，每只小鼠按50mg/kg体重尾静脉一次性注射。注射后第五天测空腹血糖，空腹血糖值大于l1.1mmol/L者纳入高血糖模型。
正常小鼠12只为空白对照组，每日灌服中剂量的生理盐水；正常小鼠12只为正常对照组，每日灌服中剂量的忍冬藤多糖铬络合物；高血糖模型小鼠96只按血糖高低随机分为8组，分别为高血糖模型对照组、药物对照组、忍冬藤多糖实验组(大、中、小三个剂量组)、忍冬藤多糖铬络合物实验组(大、中、小三个剂量组)。实验期间各组小鼠均给予块料喂养，忍冬藤多糖实验组(大、中、小三个剂量组)每日分别灌服忍冬藤多糖1200mg/kg、600mg/kg、300mg/kg；忍冬藤多糖铬络合物实验组每日分别灌服忍冬藤多糖及忍冬藤多糖铬络合物Cr3- 600mg/kg、400mg/kg、200mg/kg；药物对照组每日灌服美的康50mg/kg;高血糖模型对照组和正常对照组每日灌服相应体积的生理盐水；实验周期为3周。
忍冬藤多糖及其络合物对高血糖小鼠血糖的影响（x±s，n=12）
| 组别 | 动物只数 | 给药前血糖（mmol/L） | 给药后血糖（mmol/L） |
| 空白对照组 | 12 | 5.29±1.23 | 5.68±1.71 |
| 正常对照组 | 12 | 5.25±1.15 | 5.52±1.39 |
| 高血糖对照组 | 12 | 14.31±3.36 | 18.61±4.85** |
| 药物对照组 | 12 | 15.34±4.62 | 8.41±2.27* |
| 忍冬藤多糖 | |||
| 大剂量组 | 12 | 16.25±4.88 | 18.33±4.92** |
| 中剂量组 | 12 | 16.82±5.17 | 19.28±5.61** |
| 小剂量组 | 12 | 14.75±4.15 | 16.44±4.75** |
| 忍冬藤多糖铬络合物 | |||
| 大剂量组 | 12 | 17.20±5.61 | 7.94±1.78◇ |
| 中剂量组 | 12 | 15.75±4.68 | 7.39±2.83◇ |
| 小剂量组 | 12 | 16.22±5.37 | 8.75±2.66◇ |
** 与空白对照组相比P＜0.01； ◇与高血糖对照组相比P＜0.01。
结果表明，四氧嘧啶组动物血糖较空白组极显著升高（P＜0.01）；忍冬藤多糖组大、中、小剂量组血糖值均有所升高；忍冬藤多糖铬络合物组大、中、小剂量均对四氧嘧啶致高血糖小鼠的血糖值有显著的降低作用（P＜0.01），其作用和药物对照组没有明显的差异（P＞0.05）。本实验说明，本发明所制备的忍冬藤多糖铬络合物对正常小鼠血糖水平没有影响，可以有效的防治四氧嘧啶所致高血糖病症的发生，对预防和治疗高血糖病症有积极的作用。
本发明产品既可直接作为药物服用，也可加入食品，制成保健食品用，还可加入到添加剂中，再制备成防治高血糖和糖尿病的药物及食品中服用，用途广，服用安全，效果好，有实际的临床意义和应用价值。
Claims (6)
1.一种忍冬藤多糖铬络合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取忍冬藤药材粉末，按料液重量比1︰10—20的比例加入蒸馏水，搅匀；在100℃水浴回流提取3次，每次3—5h，过滤，合并滤液，用常规的Sevag法除去蛋白，得忍冬藤多糖溶液；
（2）将CrCl3加入水中，配制成浓度为2mol/L的CrCl3离子溶液；将NaOH加入水中，配制成浓度为2mol/L的NaOH离子溶液；
（3）将步骤（1）制备的忍冬藤多糖溶液水浴加热至70℃，再逐滴加入步骤（2）制备的NaOH离子溶液至pH值为8-9，然后同时逐滴加入步骤（2）制备的CrCl3离子溶液和NaOH离子溶液，保持pH值为8—10，至忍冬藤多糖溶液出现绿色絮状沉淀时，停止滴加NaOH离子溶液和CrCl3离子溶液，继续70℃水浴1h，得水浴后的忍冬藤多糖反应液，冷却至室温，离心除去沉淀，得忍冬藤多糖铬络合物溶液；
（4）将忍冬藤多糖铬络合物溶液装入透析袋进行透析，透析袋的截留分子量为8000—14000，透析液加入体积浓度为95%的乙醇至乙醇体积含量达到80%，静置10—15h过夜，弃去上清液，得沉淀物，沉淀物先用无水乙醇洗至上清液无色，再用丙酮和***各洗涤一次，得忍冬藤多糖铬络合物。
2.根据权利要求1所述的忍冬藤多糖铬络合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）忍冬藤药材粉末按料液重量比为1︰10-15或1︰16-20的比例加入蒸馏水。
3.根据权利要求2所述的忍冬藤多糖铬络合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）忍冬藤药材粉末按料液重量比为1︰12或1︰18的比例加入蒸馏水。
4.根据权利要求1所述的忍冬藤多糖铬络合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤（3）中逐滴加入步骤（2）制备的NaOH离子溶液至pH值为8、9、8.5或8.8；所述的同时逐滴加入步骤（2）制备的CrCl3离子溶液和NaOH离子溶液，保持pH值为8-9或9.1-10。
5.根据权利要求4所述的忍冬藤多糖铬络合物的制备方法，其特征在于，所述的同时逐滴加入步骤（2）制备的CrCl3离子溶液和NaOH离子溶液，保持pH值为8.5或9.5。
6.权利要求1或2-5任一项所述方法制备的忍冬藤多糖铬络合物在制备防治高血糖和糖尿病的药物中的应用。
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