CN103183586B - 一种从羊踯躅提取物中制备闹羊花素vi的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从羊踯躅提取物中制备闹羊花素VI的方法，包括步骤：（1）羊踯躅的提取；（2）硅胶色谱纯化；（3）反相色谱纯化。本发明是一种制备闹羊花素VI的简化工艺，能极大地提高闹羊花素VI的得率，可用于闹羊花素VI的工业制备。

Description

一种从羊踯躅提取物中制备闹羊花素VI的方法
技术领域
本发明涉及一种闹羊花素VI的制备方法，特别是涉及一种从羊踯躅提取物中分离制备闹羊花素VI的方法。
背景技术
羊踯躅RhododendronmolleG..Don为杜鹃花科植物，分布于我国长江流域至南部各地，生长于山坡、灌丛或草丛中，具有祛风、止咳、散瘀和止痛等功效，用于风寒湿痹，跌打损伤，痔漏，癣疮。
闹羊花素VI是存在于羊踯躅中的一类化合物，其中二萜类化合物是羊踯躅中主要的成分，文献报道此类二萜类化合物有很好的杀虫作用（中国农业科学,1982,(2):55-62）。目前，未见到闹羊花素VI的制备工艺的相关报道，因此，闹羊花素VI分离手段的不足是限制其医药用途的一个主要原因。闹羊花素VI结构式如下。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种从羊踯躅提取物中分离制备闹羊花素VI的方法，以解决现有技术中制备手段繁琐，产率极低的技术问题。
为解决上述技术问题，本发明从羊踯躅提取物中分离制备闹羊花素VI的方法，包括步骤：
（1）羊踯躅的提取
将羊踯躅粉碎成粗粉，分别以6-10倍体积，体积比为0%-95%的乙醇-水提取回流2-3次，每次1-2小时，减压回收溶剂得浸膏A。
（2）硅胶色谱纯化步骤
将步骤（1）所得浸膏A用100-200目柱层析硅胶柱色谱分离，并以体积比为10:1~1:1的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液作TLC检识，合并含有闹羊花素VI的流份，减压回收溶剂，得浸膏B。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿-甲醇5:1~3:1梯度洗脱，收集洗脱液，并作TLC检识，合并含有闹羊花素VI的流份，回收溶剂，即得浸膏C。
（3）反相C18色谱纯化步骤
将步骤（2）所得的浸膏C用反相硅胶柱色谱分离，分别以体积比为20%、30%、40%的甲醇-水溶液洗脱，每个部分洗脱6-10BV，洗脱液作TLC检识，合并含有闹羊花素VI的流份，减压回收溶剂，即得纯化的闹羊花素VI。
采用本发明的方法依次经（1）羊踯躅提取（2）硅胶色谱纯化（3）反相色谱纯化，能极大地提高得率，因此，该方法是一种制备闹羊花素VI的简化工艺，可用于闹羊花素VI的工业制备。
附图说明
图1是闹羊花素VI的1H-NMR图。
图2是闹羊花素VI的13C-NMR图。
图3是闹羊花素VI的DEPT图。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。
实施例1闹羊花素VI的制备
羊踯躅药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，以10、10、6倍的纯水提取回流3次，每次2小时，合并提取液，减压回收得浸膏A为45g。
将浸膏A用100-200目柱层析硅胶柱色谱分离（硅胶为100-200目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为1:30，硅胶柱规格Φ100*1000mm），并以体积比为10:1~1:1的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板（GF254）点样，以体积比为7:3:0.5的氯仿-甲醇-水溶液展开后用体积比为10%的硫酸-乙醇溶液显色，减压回收含有闹羊花素VI的部分，得浸膏B约3g。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离（浸膏样品与硅胶重量比为1:100，硅胶柱规格Φ60*600mm），并以氯仿-甲醇5:1~3:1梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液薄层硅胶板（GF254）点样，以体积比为7:3:0.5的氯仿-甲醇-水溶液展开后用体积比为10%的硫酸-乙醇溶液显色，减压回收含有闹羊花素VI的部分，得浸膏C约1.2g。将浸膏C用反相C18硅胶柱色谱分离（浸膏样品与C18硅胶重量比为1:50，硅胶柱规格Φ60*600mm），以体积比为20%、30%、40%的甲醇-水溶液洗脱，每个部分洗脱10BV，洗脱液作TLC检识，合并含有闹羊花素VI的流份，减压回收溶剂，即得纯化的闹羊花素VI0.25g。
最终所得闹羊花素VI经常规公知的NMR方法鉴定【Phytochemistry,2004,67(11):1903-1906】，并经ELSD检测【Kromasil-C18柱(4.6mm*250mm)，雾化温度为40℃，蒸发温度为60℃，流动相为体积比30:70的水-甲醇溶液，流速1.5mL·min-1，进样量10μl，柱温25℃】含量在98%以上，其得率为0.025%。
实施例2闹羊花素VI的制备
羊踯躅药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，以8、8、6倍的体积比为70%的乙醇-水溶液提取回流3次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收得浸膏A为55g。
将浸膏A用100-200目柱层析硅胶柱色谱分离（硅胶为100-200目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为1:40，硅胶柱规格Φ100*1000mm），并以体积比为10:1~1:1的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板（GF254）点样，以体积比为7:3:0.5的氯仿-甲醇-水溶液展开后用体积比为10%的硫酸-乙醇溶液显色，减压回收含有闹羊花素VI的部分，得浸膏B约5.2g。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离（浸膏样品与硅胶重量比为1:100，硅胶柱规格Φ60*600mm），并以氯仿-甲醇5:1~3:1梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液薄层硅胶板（GF254）点样，以体积比为7:3:0.5的氯仿-甲醇-水溶液展开后用体积比为10%的硫酸-乙醇溶液显色，减压回收含有闹羊花素VI的部分，得浸膏C约1.5g。将浸膏C用反相C18硅胶柱色谱分离（浸膏样品与C18硅胶重量比为1:50，硅胶柱规格Φ60*600mm），以体积比为20%、30%、40%的甲醇-水溶液洗脱，每个部分洗脱8BV，洗脱液作TLC检识，合并含有闹羊花素VI的流份，减压回收溶剂，即得纯化的闹羊花素VI0.43g。
最终所得闹羊花素VI经常规公知的NMR方法鉴定【Phytochemistry,2004,67(11):1903-1906】，并经ELSD检测【Kromasil-C18柱(4.6mm*250mm)，雾化温度为40℃，蒸发温度为60℃，流动相为体积比30:70的水-甲醇溶液，流速1.5mL·min-1，进样量10μl，柱温25℃】含量在98%以上，其得率为0.043%。
实施例3闹羊花素VI的制备
羊踯躅药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉，以8、8倍的浓度比为95%提取回流2次，每次1小时，合并提取液，减压回收得浸膏A为58g。
将浸膏A用100-200目柱层析硅胶柱色谱分离（硅胶为100-200目柱层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为1:50，硅胶柱规格Φ100*1000mm），并以体积比为10:1~1:1的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板（GF254）点样，以体积比为7:3:0.5的氯仿-甲醇-水溶液展开后用体积比为10%的硫酸-乙醇溶液显色，减压回收含有闹羊花素VI的部分，得浸膏B约6.1g。将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离（浸膏样品与硅胶重量比为1:100，硅胶柱规格Φ60*600mm），并以氯仿-甲醇5:1~3:1梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液薄层硅胶板（GF254）点样，以体积比为7:3:0.5的氯仿-甲醇-水溶液展开后用体积比为10%的硫酸-乙醇溶液显色，减压回收含有闹羊花素VI的部分，得浸膏C约1.6g。将浸膏C用反相C18硅胶柱色谱分离（浸膏样品与C18硅胶重量比为1:50，硅胶柱规格Φ60*600mm），以体积比为20%、30%、40%的甲醇-水溶液洗脱，每个部分洗脱6BV，洗脱液作TLC检识，合并含有闹羊花素VI的流份，减压回收溶剂，即得纯化的闹羊花素VI0.43g。
最终所得闹羊花素VI经常规公知的NMR方法鉴定【Phytochemistry,2004,67(11):1903-1906】，并经ELSD检测【Kromasil-C18柱(4.6mm*250mm)，雾化温度为40℃，蒸发温度为60℃，流动相为体积比30:70的水-甲醇溶液，流速1.5mL·min-1，进样量10μl，柱温25℃】含量在98%以上，其得率为0.043%。
以上实验结果表明，本方法用于制备闹羊花素VI，工艺简单，得率在万分之二以上，因此，本发明可用于闹羊花素VI的工业制备。

Claims (4)

1.从羊踯躅提取物中制备闹羊花素VI的方法，其特征在于：包括步骤：
①羊踯躅的提取：将羊踯躅粉碎成粗粉，分别以6-10倍体积，体积比为0％-95％的乙醇-水提取回流2-3次，每次1-2小时，减压回收溶剂得浸膏A；
②硅胶色谱纯化步骤：将步骤①所得浸膏A用100-200目柱层析硅胶柱色谱分离，并以体积比为10:1～1:1的氯仿-甲醇溶液进行洗脱，将洗脱液作TLC检识，合并含有闹羊花素VI的流份，减压回收溶剂，得浸膏B，将浸膏B再用薄层层析硅胶柱色谱分离，并以氯仿-甲醇5:1～3:1梯度洗脱，收集洗脱液，并作TLC检识，合并含有闹羊花素VI的流份，回收溶剂，即得浸膏C；
③反相C18色谱纯化步骤：将步骤②所得的浸膏C用反相硅胶柱色谱分离，分别以体积比为20％、30％、40％的甲醇-水溶液洗脱，每个部分洗脱6-10BV，洗脱液作TLC检识，合并含有闹羊花素VI的流份，减压回收溶剂，即得纯化的闹羊花素VI。
2.如权利要求1所述的从羊踯躅提取物中制备闹羊花素VI的方法，其特征在于：所述步骤①中，羊踯躅以6-10倍的体积浓度为70％的乙醇溶液提取回流2-3次，每次1-2小时。
3.如权利要求1所述的从羊踯躅提取物中制备闹羊花素VI的方法，其特征在于：所述硅胶色谱纯化步骤中，硅胶为100-200目柱层析硅胶或薄层层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为1:30～1:100。
4.如权利要求1所述的从羊踯躅提取物中制备闹羊花素VI的方法，其特征在于：所述反相色谱纯化步骤中，浸膏样品与C18反相硅胶重量比为1:30～1:50。
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