CN103159801B

CN103159801B - N-二茂铁基-n′-芳基脲化合物及其应用

Info

Publication number: CN103159801B
Application number: CN201110406354.2A
Authority: CN
Inventors: 杨诚; 周红刚; 孙涛; 刘伟; 尹春晓
Original assignee: Tian Yun Yun (tianjin) Technology Co Ltd
Current assignee: Tiancheng Nanyun Tianjin Technology Co ltd
Priority date: 2011-12-08
Filing date: 2011-12-08
Publication date: 2016-09-07
Anticipated expiration: 2031-12-08
Also published as: CN103159801A

Abstract

本发明涉及通式(I)的N‑二茂铁基‑N′‑芳基脲化合物，其中，R选自C₁‑C₄的烷基、卤素或硝基，且R处于‑NH的邻位、间位或对位。本发明还涉及以该化合物为活性成分的药物组合物，以及本发明化合物和药用组合物在制备治疗或预防艾滋病的药物中的应用。

Description

N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物及其应用

技术领域

本发明涉及一种N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物及其用途。

背景技术

最近几年，生物金属有机化学得到了快速的发展，已经将经典的金属有机化学与生物学，医学及分子生物技术联系起来。比如：顺铂已经被应用于临床治疗睾丸癌及卵巢癌等。二茂铁，最早被报道于1951年，是一个中性的，化学稳定及无毒的分子。二茂铁及其衍生物具有好的亲脂性及膜透过性、低毒性、氧化还原活性及大体积等，这些优点使二茂铁及其衍生物成为生物应用领域中非常受欢迎的分子。许多二茂铁衍生物表现出抗癌、杀菌、抗疟、抗HIV及DNA切割等活性。因此，开发新的二茂铁衍生物是非常有意义的。

最近，脲类衍生物作为各种酶抑制剂被报道，这其中包括HIV-1蛋白酶抑制剂、p38丝裂原活化蛋白(p38MAP)激酶抑制剂、酪氨酸激酶(PTK)抑制剂等。因此，开发新的作为酶抑制剂的脲类衍生物是非常有意义的。

文献(Fischer，E.O.；Zahn，U.；Baumgartner，F.Univ.Munich，Germany，Zeitschrift fuer Naturforschung(1959)，14B，133)报道了具有以下结构式的二茂铁基脲类衍生物

但未报道其活性。

目前未有文献报道其他N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物，也未有文献报道该类化合物的活性。

发明内容

本发明提供了一类新的N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物。本发明还提供了该类N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物在制备治疗或预防艾滋病的药物中的应用以及一种治疗和预防艾滋病的药物组合物。

本发明提供的N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物具有以下结构：

其中，R选自C₁-C₄的烷基、卤素或硝基，并且R处于-NH的邻位、间位或对位。

在上述N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物中，R优选甲基、氟、氯或溴。

在上述N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物中，R优选处于-NH的邻位和对位。

根据本发明的一个方面，上述N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物优选：

根据本发明的另一方面，上述N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物优选：

根据本发明的又一方面，上述N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物优选：

上文所述的烷基是指具有1～4个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-丁基、叔丁基等。优选甲基。

上文所述的卤素是指氟、氯、溴或碘原子。优选氯原子、溴原子，特别优选氟原子。

根据本发明的另一方面，提供了一种合成N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物的方法(图3)：

上述方法包括以下步骤：

a.在氮气保护下，将五氯化磷分批加入溶有二茂铁甲酸1的干燥甲苯溶液中。室温搅拌3小时，然后用氢氧化钠溶液洗两次，抽滤去除产生的絮状沉淀。再用水、饱和食盐水、水洗。有机相用无水硫酸钠干燥，旋干得到二茂铁甲酰氯2；

b.将叠氮化钠的水溶液滴加到溶有二茂铁甲酰氯2的丙酮中。室温搅拌1小时后，将反应液导入水中，抽滤，干燥得二茂铁酰基叠氮3；

c、将二茂铁酰基叠氮3与新蒸芳胺溶于干燥甲苯中，氮气保护下微回流1小时。停止反应，将反应液旋蒸浓缩。

e.粗产品通过硅胶柱层析分离，流动相为石油醚(60-90℃)∶乙酸乙酯∶丙酮(20∶1∶1)。浓缩后得产品4。

在上述方法中，所述芳胺选自2-甲基苯胺、4-甲基苯胺、2-氟苯胺、4-氟苯胺、2，4-二氟苯胺、2-氯苯胺、3-氯苯胺、4-氯苯胺、2-溴苯胺、4-溴苯胺、2-硝基苯胺、3-硝基苯胺或4-硝基苯胺。

本发明的化合物显示出抑制HIV-1蛋白酶的活性。

本发明的药物组合物含有治疗有效量的N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可接受的载体。

本发明的化合物和药物组合物可用于制备治疗艾滋病的药物。

上述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁和聚乙二醇等。另外还可以再组合物中加入其他辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。

本发明提供了一类新的N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物，该类化合物具有抑制HIV-1蛋白酶的活性。其中1-二茂铁基-3-对氯苯基脲和1-二茂铁基-3-间硝基苯基脲的HIV-1蛋白酶抑制活性IC₅₀值分别为55.72μM和42.59μM。

附图说明

图1示出根据实施例8的化合物的HIV-1蛋白酶抑制活性IC₅₀图。

图2示出根据实施例12的化合物的HIV-1蛋白酶抑制活性IC₅₀图。

图3示出合成N-二茂铁基-N′-芳基脲化合物的流程图。

具体实施方式

下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

在以下具体实施方式中，熔点由X-4数字式熔点仪测定，NMR数据由布鲁克Avance-400MHz核磁设备测定，红外由珀金埃尔默65型付立叶红外仪测得，质谱数据由布鲁克ESQUIRELCTM电喷雾离子阱质谱仪测定。元素分析数据由德国Elementar Vairo EL型元素分析仪测定。

实施例1：1-二茂铁基-3-邻甲苯基脲的制备

氮气保护下，在一个半小时内，将11mmol五氯化磷分批加入溶有10mmol二茂铁甲酸1的80ml干燥甲苯溶液中。继续室温搅拌3小时后，用2M氢氧化钠溶液50ml洗两次，抽滤去除产生的絮状沉淀。再用水(4×50ml)，饱和食盐水，水洗。有机相用无水硫酸钠干燥，旋蒸得到红油状二茂铁甲酰氯。将含20mmol叠氮化钠的水溶液滴加到溶有二茂铁甲酰氯的40ml丙酮中。室温搅拌1小时后，反应液导入300ml水中，抽滤，干燥得有机晶体状二茂铁酰基叠氮，收率：1.08g(42.5％)。将1mmol的二茂铁酰基叠氮与1mmol的邻甲苯胺溶于30ml干燥甲苯中，氮气保护下微回流一小时。停止反应，将反应液旋蒸浓缩。粗产品通过硅胶柱层析分离，流动相为石油醚(60-90℃)∶乙酸乙酯∶丙酮(20∶1∶1)。浓缩后产品为黄色粉末，产率为64％。

产物的表征数据如下：

m.p.173℃分解；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：8.15(s，1H，NH)；7.88(m，1H，PhH)；7.71(s，1H，NH)；7.13(m，2H，PhH)；6.94(t，J＝9.8Hz，1H，PhH)；4.51(s，2H，FcH)；4.14(d，J＝2.8Hz，5H，FcH)；3.96(s，2H，FcH)；2.23(s，3H，CH3)；

¹³C-NMR(100MHz，DMSO-d6，δin ppm)：17.7(CH3)，60.2(Fc)，63.4(Fc)，68.5(Fc)，96.7(Fc)，120.4(Ph)，122.1(Ph)，126.0(Ph)，126.9(Ph)，130.0(Ph)，137.7(Ph)，153.0(C＝O)；

元素分析计算值：C₁₈H₁₈FeN₂O：C，64.69；H，5.43；N，8.38.实测值：C，65.00；H，5.55；N，8.69；

MS(ESI)m/z：335.3(M+H⁺)。

实施例2：1-二茂铁基-3-对甲苯基脲的制备

合成步骤同上

产率69％，深红色粉末，m.p.158℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：8.32(s，1H，NH)；7.73(s，1H，NH)；7.31(d，J＝8.0Hz，2H，PhH)；7.06(d，J＝8.0Hz，2H，PhH)；4.50(s，2H，FcH)；4.10(s，5H，FcH)；3.95(s，2H，FcH)；2.24(s，3H，CH₃)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：20.2(CH₃)，60.4(Fc)，63.4(Fc)，68.6(Fc)，96.6(Fc)，118.0(Ph)，129.5(Ph)，137.2(Ph)，152.8(C＝O)；

元素分析计算值：C₁₈H₁₈FeN₂O：C，64.69；H，5.43；N，8.38.实测值：C，64.89；H，5.73；N，8.40；

MS(ESI)m/z：335.4(M+H⁺)。

实施例3：1-二茂铁基-3-邻氟苯基脲的制备

合成步骤同上

产率77％，橘红色粉末，m.p.190℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：8.34(s，1H，NH)；8.21(s，1H，NH)；8.17(t，J＝7.8Hz，1H，PhH)；7.21(m，1H，PhH)；7.11(t，J＝7.8Hz，1H，PhH)；6.98(m，1H，PhH)；4.50(s，2H，FcH)；4.15(s，5H，FcH)；3.98(s，2H，FcH)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：61.3(Fc)，64.2(Fc)，69.2(Fc)，96.6(Fc)，115.3(Ph)，120.6(Ph)，122.4(Ph)，124.9(Ph)，128.3(Ph)，151.4，152.9(Ph)，153.0(C＝O)；

元素分析计算值：C₁₇H₁₅FFeN₂O：C，60.38；H，4.47；N，8.28.实测值：C，60.79；H，4.71；N，8.11；

MS(ESI)m/z：338.9(M+H⁺)。

实施例4：1-二茂铁基-3-对氟苯基脲的制备

合成步骤同上

产率78％，黄色粉末，m.p.190℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：8.46(s，1H，NH)；7.77(s，1H，NH)；7.44(m，2H，PhH)；7.10(t，J＝8.8Hz，2H，PhH)；4.51(t，J＝2.0Hz，2H，FcH)；4.14(s，5H，FcH)；3.94(m，2H，FcH)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：60.3(Fc)，63.4(Fc)，68.5(Fc)，96.9(Fc)，115.1(Ph)，119.4(Ph)，136.2(Ph)，152.8(C＝O)，157.6，159.3(Ph)；

元素分析计算值：C₁₇H₁₅FFeN₂O：C，60.38；H，4.47；N，8.28.实测值：C，60.65；H，4.53；N，8.08；

MS(ESI)m/z：339.3(M+H+)。

实施例5：1-二茂铁基-3-(2，4-二氟苯基)脲的制备

合成步骤同上

产率82％，橘红色粉末，m.p.170℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：8.29(s，1H，NH)；8.15(s，1H，NH)；8.11(m，1H，PhH)；7.28(m，1H，PhH)；7.02(t，J＝8.0Hz，1H，PhH)；4.50(s，2H，FcH)；4.15(s，5H，FcH)；3.97(s，2H，FcH)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：61.3(Fc)，64.2(Fc)，70.4(Fc)，96.6(Fc)，104.1(Ph)，111.5(Ph)，121.8(Ph)，124.9(Ph)，151.0，153.3(Ph)，153.1(C＝O)，155.7，158.1(Ph)；

元素分析计算值：C₁₇H₁₄F₂FeN₂O：C，57.33；H，3.96；N，7.87.实测值：C，57.40；H，4.33；N，8.24；

MS(ESI)m/z：357.1(M+H⁺)。

实施例6：1-二茂铁基-3-邻氯苯基脲的制备

合成步骤同上

产率81％，黄色粉末，m.p.193℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：8.57(s，1H，NH)；8.20(d，J＝8.0Hz，1H，PhH)；8.10(s，1H，NH)；7.44(d，J＝8.0Hz，1H，PhH)；7.27(t，J＝8.0Hz，1H，PhH)；6.99(m，1H，PhH)；4.51(t，2H，J＝1.2Hz，FcH)；4.16(s，5H，FcH)；3.98(t，2H，J＝1.6Hz，FcH)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：60.7(Fc)，63.7(Fc)，68.6(Fc)，96.0(Fc)，120.7(Ph)，121.2(Ph)，122.7(Ph)，127.5(Ph)，129.0(Ph)，136.1(Ph)，152.4(C＝O)；

元素分析计算值：C₁₇H₁₅ClFeN₂O：C，57.58；H，4.26；N，7.90.实测值：C，57.80；H，4.62；N，7.49；

MS(ESI)m/z：355.1(M+H⁺)。

实施例7：1-二茂铁基-3-间氯苯基脲的制备

合成步骤同上

产率92％，黄色粉末，m.p.193℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：8.68(s，1H，NH)；7.91(s，1H，NH)；7.72(s，1H，PhH)；7.25(m，2H，PhH)；6.98(d，J＝8.8Hz，1H，PhH)；4.52(s，2H，FcH)；4.14(s，5H，FcH)；3.96(s，2H，FcH)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：60.7(Fc)，63.6(Fc)，68.7(Fc)，96.3(Fc)，116.3(Ph)，117.3(Ph)，121.1(Ph)，130.4(Ph)，133.3(Ph)，141.6(Ph)，152.6(C＝O)；

元素分析计算值：C₁₇H₁₅ClFeN₂O：C，57.58；H，4.26；N，7.90.实测值：C，58.01；H，4.12；N，7.58；

MS(ESI)m/z：355.3(M+H⁺)。

实施例8：1-二茂铁基-3-对氯苯基脲的制备

合成步骤同上

产率82％，黄色粉末，m.p.205℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：8.59(s，1H，NH)；7.84(s，1H，NH)；7.47(d，2H，J＝12.0Hz PhH)；7.30(d，J＝8.8Hz，2H，PhH)；4.50(s，2H，FcH)；4.13(s，5H，FcH)；3.95(s，2H，FcH)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：60.5(Fc)，63.5(Fc)，68.7(Fc)，96.4(Fc)，119.2(Ph)，124.8(Ph)，128.5(Ph)，139.2(Ph)，152.6(C＝O)；

元素分析计算值：C₁₇H₁₅ClFeN₂O：C，57.58；H，4.26；N，7.90.实测值：C，57.86；H，4.44；N，8.15；

MS(ESI)m/z：355.0(M+H⁺)。

实施例9：1-二茂铁基-3-邻溴苯基脲的制备

合成步骤同上

产率81％，黄色粉末，m.p.203℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：8.66(s，1H，NH)；8.12(d，J＝8.0Hz，1H，PhH)；8.10(s，1H，NH)；7.44(d，J＝8.0Hz，1H，PhH)；7.27(t，J＝8.0Hz，1H，PhH)；6.99(m，1H，PhH)；4.51(t，2H，J＝1.2Hz，FcH)；4.16(s，5H，FcH)；3.98(t，2H，J＝1.6Hz，FcH)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：60.7(Fc)，63.7(Fc)，68.8(Fc)，96.5(Fc)，112.2(Ph)，121.5(Ph)，123.5(Ph)，128.0(Ph)，132.3(Ph)，137.1(Ph)，152.3(C＝O)；

元素分析计算值：C₁₇H₁₅BrFeN₂O：C，51.17；H，3.79；N，7.02.实测值：C，51.46；H，4.08；N，7.44；

MS(ESI)m/z：399.1(M+H⁺)。

实施例10：1-二茂铁基-3-对溴苯基脲的制备

合成步骤同上

产率86％，黄色粉末，m.p.200℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：8.85(s，1H，NH)；8.59(s，1H，NH)；7.43(s，2H，PhH)；7.41(s，2H，PhH)；4.50(s，2H，FcH)；4.12(s，5H，FcH)；3.92(d，2H，J＝9.2Hz，FcH)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：60.6(Fc)，63.5(Fc)，68.6(Fc)，96.4(Fc)，113.1(Ph)，119.9(Ph)，131.4(Ph)，139.1(Ph)，152.4(C＝O)；

元素分析计算值：C₁₇H₁₅BrFeN₂O：C，51.17；H，3.79；N，7.02.实测值：C，51.21；H，3.66；N，7.39；

MS(ESI)m/z：399.1(M+H⁺)。

实施例11：1-二茂铁基-3-邻硝基苯基脲的制备

合成步骤同上

产率74％，橘黄色粉末，m.p.210℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：9.47(s，1H，NH)；9.08(s，1H，NH)；8.37(d，J＝8.4Hz，1H，PhH)；8.09(d，J＝8.4Hz，1H，PhH)；7.68(t，J＝8.3Hz，1H，PhH)；7.17(t，J＝7.2Hz，1H，PhH)；4.52(s，2H，FcH)；4.16(s，5H，FcH)；3.97(s，2H，FcH)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：60.8(Fc)，63.8(Fc)，68.7(Fc)，95.8(Fc)，121.7(Ph)，122.0(Ph)，125.3(Ph)，135.0(Ph)，135.3(Ph)，137.0(Ph)，152.0(C＝O)；

元素分析计算值：C₁₇H₁₅FeN₃O₃：C，51.91；H，4.14；N，11.51.实测值：C，52.03；H，4.51；N，11.90；

MS(ESI)m/z：366.2(M+H⁺)。

实施例12：1-二茂铁基-3-间硝基苯基脲的制备

合成步骤同上

产率73％，红色粉末，m.p.180℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：8.99(s，1H，NH)；8.56(s，1H，PhH)；8.01(s，1H，NH)；7.79(d，J＝8.0Hz，1H，PhH)；7.68(d，J＝8.0Hz，1H，PhH)；7.54(t，J＝8.0Hz，1H，PhH)；4.55(s，2H，FcH)；4.15(d，J＝6.4Hz，5H，FcH)；3.97(s，2H，FcH)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：60.7(Fc)，63.7(Fc)，68.6(Fc)，96.1(Fc)，111.7(Ph)，115.8(Ph)，123.9(Ph)，129.9(Ph)，141.1(Ph)，148.1(Ph)，152.5(C＝O)；

元素分析计算值：C₁₇H₁₅FeN₃O₃：C，51.91；H，4.14；N，11.51.实测值：C，52.33；H，4.04；N，11.89；

MS(ESI)m/z：366.1(M+H⁺)。

实施例13：1-二茂铁基-3-对硝基苯基脲的制备

合成步骤同上

产率81％，深红色粉末，m.p.199℃分解；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：9.21(s，1H，NH)；8.15(d，J＝14.8Hz，2H，PhH)；7.95(s，1H，NH)；7.66(d，J＝9.2Hz，2H，PhH)；4.55(t，J＝1.6Hz，2H，FcH)；4.14(s，5H，FcH)；3.98(t，J＝1.6Hz，2H，FcH)；

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，δin ppm)：60.7(Fc)，63.7(Fc)，68.6(Fc)，95.7(Fc)，117.1(Ph)，125.0(Ph)，140.6(Ph)，146.5(Ph)，152.0(C＝O)；

元素分析计算值：C₁₇H₁₅FeN₃O₃：C，51.91；H，4.14；N，11.51.实测值：C，52.23；H，4.08；N，11.98；

MS(ESI)m/z：366.1(M+H⁺)。

HIV-1蛋白酶抑制剂活性检测方法如下：

利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer，FRET)技术测定针对HIV-1蛋白酶的抑制剂的活性，根据HIV-1蛋白酶识别位点设计底物：MCA-gama-abu-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-Glu-Lys-Dnp，当抑制剂对HIV-1蛋白酶没有作用时，HIV-1蛋白酶可以切割底物，淬灭基团(Dnp)远离荧光基团(MCA)，荧光基团吸收320nm波长，激发出405nm的波长，通过检测器检测荧光强度，如果抑制剂对HIV-1蛋白酶有作用，淬灭基团不会被切去，荧光基团吸收320nm的波后一部分能量会转移给淬灭基团，405nm的激发波强度就会减弱，以此来检测抑制剂对HIV-1蛋白酶的抑制效果。根据待测化合物存在或不存在时的荧光强度变化，可以计算化合物对蛋白酶活性的抑制程度或剩余活性，从而完成对蛋白酶抑制剂的初步筛选。具体计算方法是，酶促反应中，根据反映过程产物的生成量(即荧光强度)与反应时间的曲线，曲线的斜率表示单位时间内产物生成量的变化，所以曲线上任何一点的斜率就是该相应时间的反应速率，在底物消耗小于10％(反应开始很短的时间内)范围内，曲线斜率为酶反应的初速率(V0)，有不同抑制剂存在时，酶的反应初速率(Vi)会有不同程度的下降，酶的剩余活性(Vi/V0)低于10％，为阳性结果。本实验利用荧光淬灭的方法来排除假阳性，反应体系加入蛋白酶和底物反应一段时间，荧光值达到最大值Qmax，加入抑制剂后检测荧光值Qave的变化，荧光淬灭率Qi((Qmax-Qave)/Qmax)高于20％为假阳性。利用该方法可以在短时间内完成对大量样品的筛选工作，我们已应用该模型筛选和研究抗HIV-1化合物并取得了一定的进展。该模型也可以用于已知有抗HIV-1活性的物质，以检验其作用位点是否是蛋白酶。表1示出实施例1～13中化合物的活性测定结果。其中剩余活性的测量浓度为1mM。

表1实施例1～13的化合物的活性测定结果

编号	结构	剩余活性	淬灭率
				1	对照	41.77％	6.68％
2	实施例1	23.62％	2.38％
				3	实施例2	27.36％	22.49％
4	实施例3	14.76％	1.42％
				5	实施例4	15.95％	1.49％
6	实施例5	22.04％	1.95％
				7	实施例6	30.85％	3.39％
8	实施例7	18.25％	6.13％
				9	实施例8	2.68％	2.29％
10	实施例9	29.63％	2.43％
				11	实施例10	18.02％	5.54％
12	实施例11	20.76％	40.82％
				13	实施例12	-0.74％	21.80％
14	实施例13	1.19％	59.21％

表1中列举的实施例1～实施例13中的化合物的抑制率可以通过(1-剩余活性)进行计算，可以看出上述化合物均对HIV-1蛋白酶有抑制活性，本发明选择剩余活性值小于10％，淬灭率小于或接近20％的实施例8和实施例12中的化合物为优选化合物进行IC₅₀值的测试。

IC₅₀值的测定方法如下：

测试优选的实施例8和实施例12中的化合物的IC₅₀值，具体方法为：

测试所用的淬灭荧光底物肽为MCA-gama-abu-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-Glu-Lys-Dnp，HIV-1蛋白酶与淬灭荧光底物肽混合保温会使底物肽中的Tyr-Pro键特异性的断裂，同时荧光强度与底物水解的程度存在一个时间依赖的线性增强关系。测量在96孔板上进行，利用微孔板荧光光度计进行检测(Thermo Scientific Fluoroskan AscentFL)，激发和发射波长分别为340nm和396nm。

将实施例8和实施例12中的化合物配制成高浓度溶液(一般为200μM)，然后进行1/2浓度梯度稀释成系列浓度溶液，一般测定12个浓度下活性，所有的负对照组在37℃下进行，保温溶液组成为HIV-1蛋白酶检测缓冲溶液(20mM醋酸钠，pH＝5.2，1M氯化钠，1mM二硫苏糖醇及1mM乙二胺四乙酸)、20μM底物肽和500nM HIV-1蛋白酶。所有的实验组在37℃下进行，含有20μM底物肽的蛋白酶检测缓冲溶液中，混入1μL化合物溶液(使用二甲基亚砜做溶剂)，最后再加入500nM HIV-1蛋白酶。整个混合物(100μl)在加入HIV-1蛋白酶之前，至少提前保温10分钟。一分钟后测试初始速率。初始速度V0可以近似为反应时间与荧光强度线性关系的斜率。每个被测试化合物的浓度都计算出Vi/V0，即HIV-1蛋白酶的剩余活性。当剩余活性低于10％，这个化合物是一个好的结果。IC₅₀值通过GraphPad Prism 5软件计算得到，即，利用软件GraphPad Prism 5软件分析作出剩余活性值与化合物浓度的对数值的曲线，计算出IC₅₀(半数抑制浓度)值。

利用该方法计算出实施例8中化合物的IC₅₀值为55.72μM(图1)，实施例12中化合物的IC₅₀值为42.59μM(图2)。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims

1.一种N-二茂铁基-N'-芳基脲化合物，其结构式如下：

其中，R选自C₁-C₄的烷基、卤素或硝基，并且R处于-NH-的邻位、间位或对位。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中R是甲基。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中R是氟、氯或溴。

4.根据权利要求1所述的化合物，其中R处于-NH-的邻位或对位。

5.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物是：

6.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物是：

7.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物是：

8.权利要求1至7中任一项所述的N-二茂铁基-N'-芳基脲化合物在制备治疗或预防艾滋病的药物中的应用。

9.权利要求1至7中任一项所述的N-二茂铁基-N'-芳基脲化合物在制备抑制HIV-1蛋白酶的药物中的应用。

10.一种药物组合物，其中所述药物组合物包括治疗有效量的权利要求1～7中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体。