CN103131693A - 一种血液中稀有细胞的分离方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种血液中稀有细胞的分离方法，翻转微芯片使微芯片处于不同的三个状态，第一个状态：PBS缓冲液将微芯片内的空气排出；第二个状态：让血液样本流经微芯片，进行检测，微流体通道位于磁铁的下方，此时利用磁铁和微磁场对稀有细胞的磁力和稀有细胞重力的方向相反的原理将稀有细胞从血液样本中分离出来；第三个状态：将微芯片处于垂直状态，提高稀有细胞和血红细胞的分离效率。在检测结束后，微芯片处于垂直状态，便于将附有肿瘤细胞的载玻片从微芯片中取出，进行后续分析。三个状态完成了对稀有细胞的分离。

Description

一种血液中稀有细胞的分离方法
技术领域
 本发明涉及一种血液检测方法，尤其是涉及一种血液中稀有细胞的分离方法。
背景技术
血液稀有细胞分离仪是检测与重大疾病相关的血液中稀有细胞的下一代诊断工具，稀有细胞包括流通在血液样本中的循环肿瘤细胞（CTC）、恶性干细胞和病变的具有特定蛋白质标记的细胞等等。相关的研究证实，病人的血液样本中出现的循环肿瘤细胞数量与病人早期诊断和存活率具有很强的相关性。因此，对病人的血液样本的稀有细胞检测和分析是提高肿瘤疾病早期发现率和个性化治疗的关键。
同为本申请人申请的申请日为2012年10月15日，专利号为201210389753.7的中国发明专利申请文件公开了“一种血液中稀有细胞的分离仪”，其结构如下： 包括存储器和泵、微芯片，微芯片包括具有凹槽的薄片和载玻片，薄片设置在载玻片上形成一个微流体通道；该微流体通道连接在该存储器与该泵之间，允许该血液样本从存储器流到泵；
多个磁铁位于该载玻片底部，沿着载玻片的长度形成梯度的磁场分布，载玻片用来采集微芯片捕获的稀有细胞。还包括用于旋转该微流体通道的方向的旋转手臂。在旋转手臂的驱动下，该微流体通道在垂直位置、水平位置和对称翻转位置进行交替，能使细胞分离更有效。该专利文件并未详细披露微芯片的具体转动方式以及所带来的特有效果。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种分离效果更好的血液中稀有细胞的分离方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：1）准备两个存储器、一个抽吸泵、一个注射泵和一个微芯片，微芯片包括具有凹槽的薄片和载玻片，薄片上设置有进液口和出液口，薄片设置在载玻片上形成一个微流体通道；磁铁位于该载玻片底部，并沿着载玻片的长度形成梯度的磁场分布，载玻片用来采集微芯片捕获的稀有细胞；
2）先将第一存储器通过第一连接管与微芯片的进液口连通，抽吸泵通过第二连接管与微芯片的出液口连通；注射泵与第一存储器连接；
利用注射泵向第一存储器注入PBS缓冲液，设定微芯片的转动中心，该转动中心位于第一连接管上，该转动中心靠近微芯片，以便于尽量缩短所需的第一连接管长度，转动微芯片使微芯片与水平面成20-40度角，磁铁位于载玻片的上方，微芯片的出液口低于微芯片的进液口，利用抽吸泵将第一存储器内的PBS缓冲液抽吸到微芯片内，将微芯片内的空气排出；此方法可以将微流体通道内的空气排干净，避免空气对血液样本的干扰而影响后续分离过程。
3）将存放血液的第二存储器替换掉第一存储器，转动微芯片使微芯片成水平状态，微芯片的进液口或出液口朝下，然后第二存储器做晃动动作，防止血液沉淀，利用注射泵将第二存储器内的血液注射入微芯片中，然后微芯片静止1-5个小时，血液在抽吸泵的作用下缓慢经过微芯片内的微流体通道，载玻片采集微芯片捕获的稀有细胞；
4）当微芯片内的血液稀少时，用注射泵向第二存储器内注入少量PBS缓冲液，第二存储器做晃动动作，防止PBS缓冲液沉淀，开启抽吸泵，第二存储器内的PBS缓冲液流入微芯片中，此过程对微芯片作清洗，重复清洗2-4次；将载玻片上的其他血液分子从载玻片上清除出去，方便后续的分析工作。
5）转动微芯片使微芯片处于垂直状态，微芯片的进液口高于出液口，便于血红细胞在重力作用下流出微芯片，提高稀有细胞分离效率；在检测结束后，微芯片处于垂直状态，便于将附有肿瘤细胞的载玻片从微芯片中取出，进行后续分析。
与现有技术相比，本发明的优点是翻转微芯片使微芯片处于不同的三个状态，第一个状态：PBS缓冲液将微芯片内的空气排出，避免空气对血液样本的干扰而影响后续分离过程。第二个状态：让血液样本流经微芯片，微流体通道位于磁铁的下方，此时利用磁铁对稀有细胞的磁力和稀有细胞重力的方向相反的原理将稀有细胞从血液样本中分离出来，第三个状态：将微芯片处于垂直状态，便于血红细胞在重力作用下流出微芯片，更有利于用户对载玻片的取拿，三个状态完成了对稀有细胞的分离。
附图说明
图1为本发明的第一状态示意图；
图2为本发明的第二状态示意图；
图3为本发明的第三状态示意图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
一种血液中稀有细胞的分离方法，具体步骤如下：
   1）准备两个存储器、一个抽吸泵1、一个注射泵和一个微芯片2，微芯片2包括具有凹槽的薄片和载玻片，薄片上设置有进液口21和出液口22，薄片设置在载玻片上形成一个微流体通道；磁铁位于该载玻片底部，并沿着载玻片的长度形成梯度的磁场分布，载玻片用来采集微芯片捕获的稀有细胞；
2）先将第一存储器通过第一连接管4与微芯片2的进液口21连通，抽吸泵1通过第二连接管6与微芯片的出液口22连通；注射泵与第一存储器连接；
利用注射泵向第一存储器注入PBS缓冲液，设定微芯片的转动中心5，该转动中心5位于第一连接管4上，该转动中心5靠近微芯片，转动微芯片使微芯片2与水平面成20-40度角，磁铁位于载玻片的上方，微芯片2的出液口22低于微芯片2的进液口21，利用抽吸泵1将第一存储器内的PBS缓冲液抽吸到微芯片2内，将微芯片2内的空气排出；
3）将存放血液的第二存储器3替换掉第一存储器，利用注射泵向第二存储器3内注入待检测的血液，转动微芯片2使微芯片2成水平状态，微芯片2的进液口21或出液口22朝下，然后第二存储器3做晃动动作，防止血液沉淀，在第二存储器3停止晃动后，利用注射泵将第二存储器3内的血液注射入微芯片2中，然后微芯片2静止1-5个小时，血液在抽吸泵1的作用下缓慢经过微芯片2内的微流体通道，载玻片采集微芯片捕获的稀有细胞；
4）当微芯片2内的血液稀少时，用注射泵向第二存储器3内注入少量PBS缓冲液，第二存储器3做晃动动作，防止PBS缓冲液沉淀，开启抽吸泵1，第二存储器3内的PBS缓冲液流入微芯片2中，此过程对微芯片2作清洗，重复清洗2-4次；
5）转动微芯片2使微芯片2处于垂直状态，微芯片2的出液口或进液口朝向一侧，微芯片的进液口21高于出液口22，便于血红细胞在重力作用下流出微芯片，提高稀有细胞分离效率。检测结束后，微芯片处于垂直状态，便于将附有肿瘤细胞的载玻片从微芯片2中取出，进行后续分析。

Claims (1)

1.一种血液中稀有细胞的分离方法，其特征在于具体步骤如下：
   1）准备两个存储器、一个抽吸泵、一个注射泵和一个微芯片，微芯片包括具有凹槽的薄片和载玻片，薄片上设置有进液口和出液口，薄片设置在载玻片上形成一个微流体通道；磁铁位于该载玻片底部，并沿着载玻片的长度形成梯度的磁场分布，载玻片用来采集微芯片捕获的稀有细胞；
2）先将第一存储器通过第一连接管与微芯片的进液口连通，抽吸泵通过第二连接管与微芯片的出液口连通；注射泵与第一存储器连接；
利用注射泵向第一存储器注入PBS缓冲液，设定微芯片的转动中心，该转动中心位于第一连接管上，该转动中心靠近微芯片，转动微芯片使微芯片与水平面成20-40度角，磁铁位于载玻片的上方，微芯片的出液口低于微芯片的进液口，利用抽吸泵将第一存储器内的PBS缓冲液抽吸到微芯片内，将微芯片内的空气排出；
3）将存放血液的第二存储器替换掉第一存储器，转动微芯片使微芯片成水平状态，微芯片的进液口或出液口朝下，然后第二存储器做晃动动作，防止血液沉淀，利用注射泵将第二存储器内的血液注射入微芯片中，然后微芯片静止1-5个小时，血液在抽吸泵的作用下缓慢经过微芯片内的微流体通道，载玻片采集微芯片捕获的稀有细胞；
4）当微芯片内的血液稀少时，用注射泵向第二存储器内注入少量PBS缓冲液，第二存储器做晃动动作，防止PBS缓冲液沉淀，开启抽吸泵，第二存储器内的PBS缓冲液流入微芯片中，此过程对微芯片作清洗，重复清洗2-4次；
5）转动微芯片使微芯片处于垂直状态，微芯片的进液口高于出液口，便于血红细胞在重力作用下流出微芯片；在检测结束后，将附有肿瘤细胞的载玻片从微芯片中取出，进行后续分析。
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