CN103108651A

CN103108651A - Cyp3a药物代谢的抑制

Info

Publication number: CN103108651A
Application number: CN2011800463012A
Authority: CN
Inventors: A.霍萨尔; S.古普塔; N.基什纳尼; C.卡塞拉; E.奥马拉
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 2010-07-30
Filing date: 2011-07-25
Publication date: 2013-05-15
Also published as: JP2013535469A; CA2805760A1; US20140162942A1; AU2011283008A1; WO2012015712A1; EP2598159A4; EP2598159A1

Abstract

本发明提供了使用波普瑞韦作为CYP3A4/5抑制剂来改善被细胞色素P4503A4/5(CYP3A4/5)酶代谢的治疗性化合物的药代动力学的方法、药物组合物、药物和药物试剂盒。

Description

CYP3A药物代谢的抑制

技术领域

本申请一般地涉及通过抑制细胞色素P450 3A (CYP3A)酶的化合物的共同施用来改善由CYP3A酶代谢的药物的药代动力学。

背景技术

由CYP3A酶亚家族的CYP3A4和CYP3A5成员实现的氧化代谢在大量药物的消除中起主要作用，并且难以维持被这些酶快速代谢的药物的治疗上有效的血浆水平。并且，对于有些药物而言，CYP3A介导的代谢的代谢副产物是高毒性的，且可以产生严重的副作用。

在人类中，CYP3A4通常是成年人肝脏和肠中的最丰富的CYP3A亚型，但是多晶型地表达的CYP3A5可能占表达CYP3A5的个体中的总肝脏CYP3A的超过50%。参见，例如，Granfors, M. T. 等人, Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology 98:79-85 (2006); von Richter, O., 等人, Clin. Pharmacol. Therap. 75:172-183 (2004)；和Lin, Y.S. 等人, Mol. Pharmacol. 62:162-172 (2002)。但是，由于目前不存在已知对CYP3A5特异性的底物，临床药物代谢研究通常使用已知被3A4和3A5两种亚型代谢的化合物（诸如咪达***）作为CYP3A4底物，并将结果报告为归因于CYP3A4/5代谢。

一种改善被CYP3A4/5快速代谢的药物的药代动力学的方案是，共同施用CYP3A4/5的抑制剂。例如，利托那韦（其最初被开发用作HIV蛋白酶抑制剂）也是一种有效的不可逆的CYP3A4/5抑制剂，且现在几乎唯一地用于被CYP3A4/5代谢的其它更有效的HIV蛋白酶抑制剂的药学增强（pharmacoenhancement）(“强化”)。还已经提出将利托那韦用于强化用于其它疾病的药物，即，实现所述药物的更大的生物利用度和/或增加的且持续的血浆浓度，所述其它疾病包括慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染。参见，例如，US 6037157、US 6703403、US 2007/0287664、WO 2007103934和WO2009/038663。但是，利托那韦也是代谢其它药物的CYP酶的有效抑制剂，所述CYP酶例如CYP2D6(就右美沙芬-O-脱甲基酶而言，IC₅₀ = 2.5µM)和CYP2C9/10 (就甲苯磺丁脲甲基羟化酶而言，IC₅₀ = 8.0µM) (Kumar, G.N., 等人, J. Pharmacol. Exp. Ther. 277:423-431 (1996))，这会增加不希望的药物-药物相互作用的风险。因而，需要鉴别可用于改善被CYP3A4/3A5代谢的药物的药代动力学的其它更特异性的CYP3A4/3A5抑制剂。

发明内容

现已令人惊讶地发现，波普瑞韦(boceprevir，BOC)（HCV NS3丝氨酸蛋白酶的一种缓慢结合的、可逆的α-酮酰胺(α-ketomide)抑制剂）也是细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)的一种强可逆抑制剂。

因此，在一个实施方案中，本发明提供了一种用于改善被CYP3A4/3A5代谢的治疗性化合物(在下文中进一步描述)的药代动力学的方法。所述方法包括：给需要使用治疗性化合物治疗的人共同施用所述治疗性化合物和波普瑞韦或波普瑞韦相关的化合物(在下文中进一步描述)。在有些实施方案中，所述方法另外包括：在共同施用以后的一个或多个时间点处测量至少一个药代动力学参数，并将测量的参数与所述药代动力学参数的靶范围进行对比。在其它实施方案中，所述方法另外包括：如果测量的值没有落入靶范围内，则调节与所述治疗性化合物共同施用的波普瑞韦相关的化合物的剂量。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种包含波普瑞韦相关的化合物的药物组合物，其用于上述方法和本文所述的它的不同实施方案中的任一个中。

本发明也提供了波普瑞韦相关的化合物(在下文中进一步描述)用于制备药物的用途，所述药物用于改善被细胞色素P450 3A4/3A5(CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物(在下文中进一步描述)的药代动力学，其中所述药物包含当与所述治疗性化合物共同施用时有效地改善所述治疗性化合物的药代动力学的量的波普瑞韦相关的化合物。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种含有被细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物(在下文中进一步描述)的用于治疗疾病的药物组合物，所述组合物包含治疗有效量的治疗性化合物和有效地改善所述化合物的药代动力学的量的波普瑞韦或波普瑞韦相关的化合物(在下文中进一步描述)。

本发明也提供了药物试剂盒，其包含至少一个剂量单位的含有被细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物(在下文中进一步描述)的第一药物组合物和至少一个剂量单位的含有波普瑞韦相关的化合物(在下文中进一步描述)的第二药物组合物，其中所述剂量单位一起被包装在容器中。

在本发明的所有上述实施方案中，被CYP3A4/3A5代谢的治疗性化合物优选地是抗病毒剂，更优选地是抑制HIV或HCV的复制的化合物。

附图说明

图1A-1C解释了波普瑞韦(BOC)对CYP3A4/5(睾酮6β-羟基化)的抑制的[IC50]的确定。

图2A-2C解释了波普瑞韦(BOC)对CYP3A4/5(睾酮6β-羟基化)的抑制的NAPDH-依赖性。在有(A和B)或没有(C)NADPH预温育下进行实验。

图3A-3C解释了波普瑞韦(BOC)对CYP3A4/5(咪达***1´羟基化)的抑制的[IC50] 的确定。

图4A-4C解释了波普瑞韦(BOC)对CYP3A4/5(咪达***1´-羟基化)的抑制的[Ki]的确定。

图5A-5C解释了波普瑞韦(BOC)对CYP3A4/5(咪达***1´-羟基化)的抑制的NAPDH-依赖性。在有(A和B)或没有(C)NADPH预温育下进行实验。

具体实施方式

I. 定义。

为了可以更容易地理解本发明，在下面明确地定义了某些技术和科学术语。除非在本文件别处明确定义，在本文中使用的所有其它技术和科学术语具有当用于本文使用的类似上下文中时本发明所属领域的普通技术人员将会通常理解的含义。

在本文（包括所附权利要求书）中使用的单数形式的词语诸如“一个”、“一种”和“所述”包括它们的对应的复数指示物，除非上下文另外清楚地指明。

“波普瑞韦相关的化合物”是指，处于所有它的分离形式和纯化形式的式1a的化合物(波普瑞韦)及其前药。因而，术语波普瑞韦相关的化合物包括式1a的化合物的任意互变异构体或立体异构体(例如，式1b和式1c的非对映异构体)、前述任一种的酯和任意药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。

式1a

式1b

式1c。

式1a的化合物的化学名称是(1R,2S,5S)-N-[(2Ξ)-4-氨基-1-环丁基-3,4-二氧代丁-2-基)]-3-{(2S)-2-[(叔丁基氨甲酰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基}-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酰胺。

式1b的化合物的化学名称是(1R,2S,5S)-N-[(1S)-3-氨基-1-(环丁基甲基)-2,3-二氧代丙基]-3-[(2S)-2-[[[(1,1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基]-3,3-二甲基-1-氧代丁基]-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酰胺。如在WO2005/015579中所述，式1b的化合物表现出比式1c的化合物明显更高的体外HCV NS3丝氨酸蛋白酶抑制活性。

“共施用”或“共同施用”是指，提供至少2种试剂，使得它们二者以有效量存在于体内(例如，在分开的组合物中同时或不同时施用治疗性化合物和波普瑞韦相关的化合物，或者可替换地，可以在单一组合物中共配制并施用它们)。“有效量”是治疗性化合物足以产生有益效果的量，所述有益效果例如减少感染、疾病或障碍的一种或多种征状；就波普瑞韦相关的化合物而言，有效量是足以改善如下文中进一步定义的治疗性化合物的药代动力学的量。

“组合物”意图包括：包含指定量的指定成分的产品，以及从指定量的指定成分的组合直接地或间接地产生的任意产品。

在本说明书和权利要求书中通篇使用的“基本上由……组成（Consists essentially of）”和变体（诸如“consist essentially of”或“consisting essentially of”）指示，包括任意列举的要素或要素的组，且任选地包括具有与列举的要素类似或不同的性质的其它要素，所述其它要素不会实质上改变指定的剂量方案、方法或组合物的基础的或新颖的性质。

“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”是指，需要或可能受益于任一种要求保护的组合物和方法的任意受试者，特别是哺乳动物受试者。在优选的实施方案中，个体是人。在更优选的实施方案中，个体是成年人，即，年龄至少18岁。

“IFN-α治疗原初的（IFN-α treatment naïve）”是指，要根据本文所述的任意实施方案治疗或试验的个体或患者以前不曾用任何IFN-α治疗过。

“药学上可接受的”表示，当施用给人时，“公认为安全的”(GRAS)的分子实体和组合物，例如，其是生理学上可耐受的，且通常不会产生变应性的或类似的不良反应，诸如胃不适等。在另一个实施方案中，该术语表示这样的分子实体和组合物：其被联邦或州政府的管理机构批准，或在美国药典中列出，或在用于动物、更特别是人类的另一种一般公认的药典中列出。

“药物组合物”是指，包含一种或多种活性成分以及任选的含惰性成分的载体的产品，以及任何两种或多种成分通过合并、络合或积聚而直接或间接得到的任何产品，或从一种或多种成分的解离而直接或间接得到的任何产品，或从一种或多种成分的其它类型的反应或相互作用而直接或间接得到的任何产品。一般而言，通过将活性成分（诸活性成分）均匀地且紧密地与液状载体或细分的固体载体或二者结合，制备药物组合物，然后如果必要的话，将产物成型成所需的制剂。在药物组合物中，每种活性成分的量以当用于本文所述的任一种方法中时足以产生期望的效果的量存在。

术语“药物组合物”还意图包括，包含超过一种(例如，两种)药学活性剂以及任意药学上无活性的赋形剂的散装组合物（bulk composition）和单个剂量单位，所述药学活性剂例如波普瑞韦相关的化合物和被CYP3A4/5代谢的治疗性化合物。所述散装组合物和每个单个剂量单位可以含有固定量的前述的“超过一种药学活性剂”。所述散装组合物是尚未形成单个剂量单位的物质。一种示例性的剂量单位是口服剂量单位诸如片剂、丸剂等。类似地，本文所述的通过施用本发明的药物组合物来治疗患者的方法还意图包括前述的散装组合物和单个剂量单位的施用。

“前药”是指，在体内被转化而产生所需化合物(例如，波普瑞韦或目标治疗性化合物)的化合物(例如，药物前体)。所述转化可以通过不同的机理(例如，通过代谢过程或化学过程)发生，例如，通过在血液中的水解。T. Higuchi和W. Stella, “Pro-drugs as Novel Delivery Systems,” A.C.S. Symposium Series第14卷和Bioreversible Carriers in Drug Design, Edward B. Roche编, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987提供了前药的用途的讨论。

例如，如果化合物含有羧酸官能团，则前药可以包含通过用例如下述基团替代酸基的氢原子而形成的酯：(C₁–C₈)烷基、(C₂-C₁₂)烷酰基氧基甲基、具有4-9个碳原子的1-(烷酰基氧基)乙基、具有5-10个碳原子的1-甲基-1-(烷酰基氧基)-乙基、具有3-6个碳原子的烷氧基羰基氧基甲基、具有4-7个碳原子的1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有5-8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有3-9个碳原子的N-(烷氧基羰基)氨基甲基、具有4-10个碳原子的1-(N-(烷氧基羰基)氨基)乙基、3-酞基、4-巴豆酰内酯基（4-crotonolactonyl）、γ-丁内酯-4-基、二-N,N-(C₁-C₂)烷基氨基(C₂-C₃)烷基(诸如β-二甲基氨基乙基)、氨甲酰基-(C₁-C₂)烷基、N,N-二(C₁-C₂)烷基氨甲酰基-(C1-C2)烷基和哌啶子基-（piperidino-）、吡咯烷子基-（pyrrolidino-）或吗啉代(C₂-C₃)烷基等。

类似地，如果化合物含有醇官能团，则可以通过用例如下述基团替代醇基的氢原子而形成前药：(C₁-C₆)烷酰基氧基甲基、1-((C₁-C₆)烷酰基氧基)乙基、1-甲基-1-((C₁-C₆)烷酰基氧基)乙基、(C₁-C₆)烷氧基羰基氧基甲基、N-(C₁-C₆)烷氧基羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C₁-C₆)烷酰基、α-氨基(C₁-C₄)烷基（alkanyl）、芳基酰基和α-氨酰基或α-氨酰基-α-氨酰基，其中每个α-氨酰基独立地选自天然存在的L-氨基酸、P(O)(OH)₂、-P(O)(O(C₁-C₆)烷基)₂或糖基(除去半缩醛形式的碳水化合物的羟基而形成的基团)等。

如果化合物包含胺官能团，则可以通过用例如下述基团替代胺基的氢原子而形成前药：R-羰基、RO-羰基、NRR’-羰基，其中R和R’各自独立地是(C₁-C₁₀)烷基、(C₃-C₇)环烷基、苄基，或者R-羰基是天然的α-氨酰基或天然的α-氨酰基、—C(OH)C(O)OY¹（其中Y¹是H、(C₁-C₆)烷基或苄基）、—C(OY²)Y³（其中Y²是(C₁-C₄)烷基，且Y³是(C₁-C₆)烷基、羧基(C₁-C₆)烷基、氨基(C₁-C₄)烷基或单-N-(C₁-C₆)烷基氨基烷基或二-N,N-(C₁-C₆)烷基氨基烷基）、—C(Y⁴)Y⁵（其中Y⁴是H或甲基，且Y⁵是单-N-(C₁-C₆)烷基氨基吗啉代或二-N,N-(C₁-C₆)烷基氨基吗啉代、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基等）。

“盐（诸盐）”表示，与无机酸和/或有机酸形成的酸性盐，以及与无机碱和/或有机碱形成的碱性盐，和可以形成的任意两性离子(“内盐”)。药学上可接受的(即，无毒的、生理上可接受的)盐是优选的，尽管其它盐也是有用的。可以例如如下形成在本发明中使用的波普瑞韦相关的化合物或治疗性化合物的盐：使所述化合物与一定量（诸如相当的量）的酸或碱在介质中反应（诸如在盐在其中沉淀出的介质中反应，或者在水性介质中反应，随后进行低压冻干）。

示例性的酸加成盐包括：乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐（toluenesulfonates，也称为tosylates）等。另外，例如下述参考文献讨论了通常认为适合用于从碱性药物化合物形成药学上有用的盐的酸：P. Stahl等人 , Camille G. (编) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge等人 ,Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217；Anderson等人 ,The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York；以及The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. 在它们的网站上)。这些公开内容通过对它们的引用并入本文。

示例性的碱性盐包括：铵盐、碱金属盐（诸如钠盐、锂盐和钾盐）、碱土金属盐（诸如钙盐和镁盐）、与有机碱(例如，有机胺，诸如二环己胺、叔丁基胺)形成的盐、和与氨基酸（诸如精氨酸、赖氨酸）形成的盐等。碱性的含氮基团可以用诸如下述试剂季铵化：低级烷基卤化物(例如甲基、乙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二丁酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基和硬脂酰基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基溴和苯乙基溴)等。

所有这样的酸盐和碱盐意图是在本发明范围内的药学上可接受的盐，并且就本发明的目的而言认为所有酸盐和碱盐与对应的化合物的游离形式等效。

“溶剂化物”是指，在本发明的组合物和方法中使用的化合物(即，波普瑞韦相关的化合物或治疗性化合物)与一种或多种溶剂分子的物理结合。该物理结合包括不同程度的离子键合和共价键合，包括氢键合。在某些情况下，溶剂化物将能够分离，例如，当一个或多个溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。“溶剂化物”包括溶液相和可分离的溶剂化物。合适的溶剂化物的非限制性实例包括：乙醇化物、甲醇化物等。“水合物”是一种溶剂化物，其中溶剂分子是H₂O。溶剂化物的制备是普遍已知的。因而，例如，M. Caira等人 ,J. Pharmaceutical Sci., 93(3), 601-611 (2004) 描述了抗真菌的氟康唑的溶剂化物在乙酸乙酯中的制备以及从水中制备。E. C. van Tonder等人 ,AAPS PharmSciTech., 5(1), article 12 (2004)；和A. L. Bingham等人 ,Chem. Commun., 603-604 (2001)描述了溶剂化物、半溶剂化物、水合物等的类似制备。一种典型的非限制性的方法包括：将本发明的化合物溶解在所需量的高于环境温度的期望的溶剂(有机溶剂或水或它们的混合物)中，并以足以形成晶体的速率冷却所述溶液，然后通过标准方法分离出所述晶体。分析技术（例如，例如红外光谱法）表明溶剂(或水)在作为溶剂化物(或水合物)的晶体中的存在。

在治疗慢性HCV感染的背景下，“病毒应答”是指，在抗病毒疗法开始以后，血清HCV RNA的水平的降低。

慢性HCV感染的现行治疗方案包括干扰素α，且通常与利巴韦林的每日剂量结合施用。在本领域中通常将包括干扰素α和利巴韦林的联合治疗称作间接抗病毒联合治疗，并且临床医师通常通过确定一种或多种下述病毒应答表型来评价这种疗法的有效性：快速的病毒应答(RVR)、早期的病毒应答(EVR)、治疗结束应答(ETR)、持续病毒应答(SVR)、缓慢应答、零应答(null response)、无应答(NR)和复发。

在间接的抗病毒联合治疗（例如，包括聚乙二醇干扰素-α和利巴韦林）的背景下，“快速的病毒应答”或“RVR”是指在4周治疗结束时不可检测的血清HCV RNA。

“早期的病毒应答”或“EVR”是指，在12周抗病毒治疗结束时，血清HCV RNA减小≥2 log，“完全的EVR”是指，在12周抗病毒治疗结束时不可检测的血清HCV RNA。

“治疗结束应答”或“ETR”是指，在抗病毒治疗结束时，优选地在本文所述的任意治疗方案结束时，或在管理机构批准的处方信息中所推荐的任意治疗方案结束时，不可检测的血清HCV RNA。ETR时间点的非限制性实例是12、16、24、36和48周。

“持续病毒应答”或“SVR”是指，在抗病毒治疗结束时，和在抗病毒治疗结束以后最多24周时，不可检测的血清HCV RNA。在有些实施方案中，在抗病毒治疗结束以后12周时，测量SVR。Dr. Steven L. Flamm在Journal of the American Medical Association, 第289卷, 第18期, 第2413-2417页(2003)中也描述了SVR。

在聚乙二醇干扰素α/利巴韦林联合治疗的背景下，“缓慢应答”是指，在12周抗病毒治疗结束时，血清HCV RNA减少≥2 log，但是仍然可检测出，以及在24周抗病毒治疗结束时不可检测的血清HCV RNA。

“零应答”分别是指，在4周抗病毒治疗结束时，血清HCV RNA减少< 1 log，和/或在12周抗病毒治疗结束时，血清HCV RNA减少< 2 log。

“无应答”或“NR”是指，在最小12周抗病毒治疗过程中，存在可检测的HCV RNA。如果在4周抗病毒治疗结束时和在12周抗病毒治疗结束时血清HCV RNA是可检测的，通常指示无应答表型。

“复发”是指，在治疗结束应答(ETR)以后的任意时间，包括但不限于在ETR以后12周或24周，存在可检测的HCV RNA。

“持续病毒应答”或“SVR”是指，在使用一种或多种抗病毒剂的治疗（包括、但不限于使用直接起作用的抗病毒剂以及聚乙二醇化干扰素α和利巴韦林的联合治疗）结束以后24周时，不存在可检测的HCV RNA。Steven L. Flamm博士在Journal of the American Medical Association, 第289卷, 第18期, 第2413-2417页中详细描述了SVR。优选地使用具有29国际单位/mL (IU/ mL)的检测下限的定量RT-PCR测定，确定不存在可检测的HCV RNA。

“治疗”是指，将治疗剂或治疗性化合物（诸如含有本文所述的任一种被CYP3A4/5代谢的治疗性化合物的组合物）从内部或从外部施用给需要所述治疗性化合物的个体。需要所述化合物的个体包括：已经被诊断为具有对所述化合物的治疗敏感的病症或障碍或处于发展所述病症或障碍的风险中的个体，以及当使用第一种治疗性化合物进行治疗时具有一种或多种不良作用（其易于用第二种治疗性化合物减轻）或处于发展所述不良作用的风险中的个体。通常，以治疗有效量施用治疗性化合物，所述治疗有效量是指有效地产生一种或多种有益结果的量。特定化合物的治疗有效量可以随下述因素变化：诸如疾病状态、要治疗的患者的年龄和体重、患者对治疗性化合物的敏感性（例如，做出应答的能力）。通过医师或其它熟练的健康护理供应者常用的任意临床测量法，可以评估是否已经实现有益结果或临床结果，以评估被靶向的疾病、症状或不良作用的存在、严重性或进展状态。通常，治疗有效量的化合物会导致有关的临床测量结果（诸临床测量结果）相对于基线状态或相对于如果不治疗时的预期状态改善了至少5%、通常至少10%、更常见地至少20%、最常见地至少30%、优选至少40%、更优选至少50%、最优选至少60%、理想地至少70%、更理想地至少80%和最理想地至少90%。尽管本发明的一个实施方案(例如，治疗方法或制品)可能不会在每位患者中实现希望的临床益处或结果，它应当会在统计上显著的数目的患者中实现，这通过本领域已知的任意统计检验来测定，诸如Student氏t-检验、chi²-检验、根据Mann和Whitney的U-检验、Kruskal-Wallis检验(H-检验)、Jonckheere-Terpstra-检验和Wilcoxon-检验。

II. 用于改善被CYP3A4/5代谢的化合物的药代动力学的方法、组合物、药物和试剂盒。

本发明涉及通过与波普瑞韦相关的化合物共同施用来改善被CYP3A4/5代谢的治疗性化合物(如下面进一步所述)的药代动力学(如下面进一步所述)。就其效力由于CYP3A4/5的快速代谢而降低的那些药物而言，通过本发明的组合物和方法实现的改善的药代动力学会提供增强的治疗效果。就通过CYP3A4/5代谢而转化成有毒代谢物（诸有毒代谢物）的药物而言，所述改善的药代动力学会降低这样的代谢物的形成速率和/或水平。因为众多不同治疗药物类别中的如此多的药物被CYP3A4/5代谢，本文所述的本发明的各个实施方案可用于治疗多种疾病和病症，包括、例如，不同生物体(诸如HIV、HCV、细菌、真菌和其它寄生物)的感染，心血管疾病和病症(诸如高HDL胆固醇、心律失常)、中枢神经***病症(诸如抑郁症、精神病和慢性疼痛)、癌症和妇女健康问题(诸如生育控制和绝经)。

本文使用的术语“改善药代动力学”是指，与在没有波普瑞韦相关的化合物的情况下施用相同剂量方案的治疗性化合物时的参数值相比，在共同施用有效量的波普瑞韦相关的化合物以后，治疗性化合物的至少一种药代动力学参数的改善。改善的药代动力学(pK)参数的非限制性实例是：增加的半衰期(t_1/2)、增加的最大浓度(Cmax)、增加的平均滞留时间(MRT)、增加的剂量之间的AUC、降低的清除率(CL)和降低的全血、血浆或血清中的潜在有毒代谢物的水平。在哺乳动物中，通常如下确定这些参数：使用常规分析技术，测量在多个全血、血浆或血清样品中的治疗性化合物或它的有毒代谢物（如果适用的话）的浓度，所述样品在一段时间内采集。尽管血液可能不是化合物的治疗活性的最佳部位，就给定剂量的治疗性化合物而言，在特定时间点在治疗活性部位处的浓度通常与血液中的浓度成比例。通过本发明实现的改善的药代动力学通常导致：与在没有波普瑞韦相关的化合物的情况下施用的治疗性化合物的血浆水平相比，升高在给定的时间点时的治疗性化合物的血浆水平，或将治疗上有效的化合物的血浆水平维持更长的时间段。

本文所述的本发明的各个实施方案可以用于改善被CYP3A4/CYP3A5代谢的任意治疗性化合物的一种或多种药代动力学参数。使用本领域已知的体外或体内方法，可以评价化合物是否被CYP3A4/5代谢。体外方法通常采用反应表型（Reaction Phenotyping），其包括使用cDNA-表达的P450酶、CYP-选择性的抑制剂的筛选(例如，就CYP3A4/5而言，用酮康唑抑制)和使用得自至少10个单独供体的微粒体的关联研究。体内方法通常使用模型CYP3A4/5抑制剂（诸如酮康唑或咪达***）进行药物相互作用研究。

已知多种治疗性化合物被CYP3A4/5代谢，且包括在下述药物类别中的化合物：丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂；HCV-IRES抑制剂；人免疫缺陷病毒(HIV)蛋白酶抑制剂；HIV整合酶抑制剂；HIV CCR5抑制剂；免疫调节剂；抗组胺药；HMG CoA还原酶抑制剂；通道阻滞剂；抗生素；类固醇；抗癌剂和抗精神病药。在本发明的不同实施方案中有用的治疗性化合物的非限制性列表如下面的表A和表B1-B5所示。

表A.被CYP3A4/5代谢的抗病毒治疗性化合物

表 A. ( 续 )

也预见到，通过本发明的组合物和方法可以改善其pK性质的治疗性化合物包括在表A和B中的化合物的所有分离形式和纯化形式(例如，互变异构体和立体异构体)和前药，包括这样的化合物中的任一种的任何药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。

要通过本文所述的任一种方法治疗的患者是需要治疗性化合物的治疗的人受试者。在有些实施方案中，所述个体已经被诊断为具有对所述治疗性化合物的治疗敏感的疾病或表现出所述疾病的症状。在其它实施方案中，要使用的治疗性化合物已经被批准用于治疗所述个体已经被诊断出的适应症。在其它实施方案中，要使用的治疗性化合物未被批准用于治疗诊断出的疾病或表现出的症状（诸症状），但是处方医师认为所述治疗性化合物可以有助于治疗所述个体。

在有些实施方案中，所述治疗性化合物是抗病毒化合物，且优选地是在表A中提及的任意化合物。在其它实施方案中，所述患者被HCV感染，且被CYP3A4/5代谢的治疗性化合物是直接起作用的抗病毒(DAA)化合物，诸如蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV NS3解螺旋酶抑制剂、HCV NS5A抑制剂、HCV IRES抑制剂、NS4B抑制剂、HCV进入抑制剂或HCV病毒粒子产生抑制剂。在其它优选的实施方案中，所述患者被HIV感染，且所述治疗性化合物是HIV蛋白酶抑制剂、NNRTI、CCR5抑制剂或HIV整合酶抑制剂。在有些实施方案中，所述治疗性化合物不是HIV和/或HCV抑制性的化合物。

在有些实施方案中，要治疗的患者被慢性HCV感染，且所述治疗性化合物是被CYP3A4/5代谢的DAA，但是具有选自下述的条件：所述抗病毒化合物不是HCV蛋白酶抑制剂；所述抗病毒化合物不是HCV蛋白酶抑制剂；所述抗病毒化合物不是HCV聚合酶抑制剂；所述抗病毒化合物不是HCV NS3解螺旋酶抑制剂；所述抗病毒化合物不是HCV进入抑制剂；所述抗病毒化合物不是NS4B抑制剂，所述抗病毒化合物不是HCV进入抑制剂；和所述抗病毒化合物不是HCV病毒粒子产生抑制剂。

在其它实施方案中，要治疗的患者被HIV感染，并且所述治疗性化合物是被CYP3A4/5代谢的抗逆转录病毒(ARV)化合物，但是具有选自下述的条件：所述ARV化合物不是HIV蛋白酶抑制剂；所述ARV化合物不是NNRTI；所述ARV抗病毒化合物不是CCR5抑制剂；和所述ARV抗病毒化合物不是HIV整合酶抑制剂。

在本发明范围内，当化合物的Ki (通过直接抑制或预温育测得)大于约1微摩尔(µM)时，则认为治疗性化合物不是提及的HCV或HIV靶标的抑制剂。

在有些优选的实施方案中，要治疗的患者被HIV和HCV共感染，并且所述波普瑞韦相关的化合物与至少2种治疗性化合物联合使用，所述治疗性化合物之一是用于治疗HIV感染的ARV，且另一种是用于治疗HCV感染的DAA，并且其中之一或二者被CYP3A4/5代谢。可以用一种或多种其它治疗剂治疗所述被共感染的患者，所述其它治疗剂具有针对HIV和HCV之一或二者的活性，并且其是或不是CYP3A4/5底物。

通过与pK-增强有效量的波普瑞韦相关的化合物一起共同施用对于待治疗的疾病或病症而言治疗有效量的治疗性化合物，实施本发明的方法。波普瑞韦相关的化合物的pK-增强有效量是，有效地改善目标治疗性化合物的一种或多种药代动力学参数的量。优选地，波普瑞韦的有效量是这样的量：该量已经被证实足以在2个或更多个受试者的试验组中使治疗性化合物的期望pK参数（诸参数）改善至少50%、100%、150%、200%、250%、300%、350%、400%、450%、500%或更大的平均值，或在50%至500%之间的任何百分比。优选地，受试者的试验组具有至少10、15、20、25或30个个体，且更优选地，每个受试者具有要用所述治疗性化合物治疗的疾病或病症。

就任一种目标治疗性化合物而言，可以在细胞培养测定中或在有关的动物模型（诸如猴）中初步估测波普瑞韦相关的化合物的有效量。所述动物模型也可以用于设计波普瑞韦相关的化合物和治疗性化合物各自的给药方案，以用于在人类中进一步评价。

在本文所述的不同实施方案中使用的波普瑞韦相关的化合物和治疗性化合物的剂量通常取决于年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药间隔、给药途径、***速率、药物组合和治疗的疾病的状况。通常，下述剂量水平的波普瑞韦相关的化合物可用于抑制治疗性化合物的CYP3A4/5代谢：约10微克(mcg)/天至约5000毫克(mg)/天，优选约25 mg/天至约2400 mg/天，或约25 mg/天至约1000 mg/天。

在有些实施方案中，用于改善治疗性化合物的药代动力学的波普瑞韦相关的化合物的量是亚治疗量（subtherapeutic）（例如，在低于常规地用于治疗性地治疗患者中的慢性HCV感染的波普瑞韦的量的剂量），但是仍然足够高以实现共同施用的治疗性化合物的期望的药代动力学改善水平。如果与HCV抗病毒方案一起施用波普瑞韦相关的化合物作为CYP 3A4/5抑制剂，在所述方案中的所有其它HCV抗病毒剂应当如下施用：向所述方案中的每种试剂的暴露被认为是治疗性的。亚治疗剂量的波普瑞韦相关的化合物对于未被HCV感染或可能未被HCV感染的患者而言将是最适当的；因而，在施用潜在亚治疗剂量的波普瑞韦相关的化合物之前，将优选地对患者试验HCV感染。

在患者被HCV感染或被HIV和HCV共感染的其它实施方案中，每种治疗性化合物和波普瑞韦相关的化合物可以以对HCV治疗上有效的剂量施用，例如，以实现任一种下述的病毒应答表型：快速的病毒应答(RVR)、早期的病毒应答(EVR)、治疗结束应答(ETR)、持续的病毒应答(SVR)。在这样的实施方案中，波普瑞韦相关的化合物起双重作用：抑制HCV复制和改善治疗性化合物的药代动力学。所述波普瑞韦相关的化合物优选地是式1a的化合物，且以下述剂量施用：200-1000毫克(mg)、每天3次(TID)，优选300-900 mg TID，更优选400-800 mg TID，和更优选500-700 mg TID。所述治疗性化合物可以是HCV蛋白酶抑制剂如波普瑞韦，但是优选地来自不同的HCV药物种类，诸如HCV聚合酶抑制剂、HCV整合酶抑制剂、HCV NS3解螺旋酶抑制剂；HCV进入抑制剂；HCV NS4B抑制剂和HCV病毒粒子产生抑制剂。本发明也预见到，可以将治疗有效量的波普瑞韦相关的化合物与2种或更多种被CYP3A4/5代谢的抗-HCV治疗性化合物共同施用，并改善后者的药代动力学。

在本文所述方法的有些实施方案中，在施用治疗性化合物之前施用波普瑞韦相关的化合物；例如，在初次施用治疗性化合物之前30分钟、1小时、2小时、4小时、8小时、12小时或24小时。一旦已经开始治疗，波普瑞韦相关的化合物可以以比治疗性化合物更低的频率施用，尽管技术人员将会认识到，在特定情形下可能需要不同的给药方案，例如，如果用可能诱导CYP3A4/5表达的另一种药物治疗患者。可替换地，波普瑞韦相关的化合物和治疗性化合物可以作为单一制剂施用，由此从所述制剂同时地或分别地释放2种化合物。

在本发明的方法的一些优选的实施方案中，在治疗性化合物与波普瑞韦相关的化合物一起共同施用以后的2个或更多个时间点，测量得自患者的血液、血浆和/或血清样品中的治疗性化合物水平，以评估是否实现期望的药代动力学改善。该评估优选地如下进行：将测得的治疗性化合物的量与药理学上推荐的治疗上有效的范围进行对比，或者与治疗性化合物的靶水平或范围进行对比。测量的次数和频率将随多种参数而变化，所述参数包括在没有波普瑞韦相关的化合物存在下在受试者中观察到的治疗性化合物的典型药代动力学分布。例如，可以在第一次给药以后每2、4、8、12或24小时、或者在第一次给药以后第2、3、4、5、6或7天、或者在第一次给药以后每l、2、3或4周，抽取血液样品用于药物水平测量。在有些实施方案中，第一次给药以后的初次测量是在基于治疗性化合物的正常“未强化”半衰期将预见到的治疗性化合物的稳态水平以后的时间点。也可以以类似的方式监测血液、血浆和/或血清中的波普瑞韦相关的化合物的水平。这种药物监测的结果可以用于调节波普瑞韦相关的化合物和治疗性化合物之一或二者的剂量或频率，以建立对于患者而言实现期望的药代动力学改善的最佳剂量方案。在有些实施方案中，在已经建立合适的剂量方案以后，医生可以以规律的间隔监测治疗性化合物的水平，以确保所述化合物保持在治疗范围内，或根据需要适应患者状况的变化(例如，增加或撤去一种或多种可能影响波普瑞韦相关的化合物或治疗性化合物的代谢的其它药物)。

本发明也提供了包含波普瑞韦相关的化合物的药物组合物，所述药物组合物用于本文所述的任一种治疗方法中。本发明的药物组合物包含有效地改善目标治疗性化合物的至少一种药代动力学参数的量的波普瑞韦相关的化合物。通常，将波普瑞韦相关的化合物配制为口服药物组合物，并每天1次至每天3次地施用给患者。可替换地，可以将波普瑞韦相关的化合物作为连续输注或作为缓释制剂，例如、但不限于透皮贴剂或离子电渗疗法贴剂、渗透装置或者缓释片剂或栓剂（其通常采用可膨大的或可侵蚀的聚合物组合物）来施用。这样的施用可以用作慢性或急性疗法。可以与载体材料相组合以产生单一剂型的波普瑞韦相关的化合物的量，将随治疗的宿主和具体给药模式而变化。典型的制剂将含有约5%至约95%的波普瑞韦相关的化合物(w/w)。在有些实施方案中，这样的制剂含有约20%至约80% 的波普瑞韦相关的化合物。本发明也预见到固定剂量组合，其中与治疗有效量的治疗性化合物一起共同配制pK-增强有效量的波普瑞韦相关的化合物。在这样的固定剂量组合物中，波普瑞韦相关的化合物和治疗性化合物都被视作活性成分。

根据本领域已知的用于生产药物组合物的任意方法，可以制备本发明的药物组合物，后者包含与或不与治疗性化合物一起配制的波普瑞韦相关的化合物且意在用于口服使用，并且这样的组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂，以提供药学上美观且适口的制剂。片剂可以含有与适用于生产片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂相混合的活性成分（诸活性成分）。这些赋形剂可以是例如惰性的稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如，玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或***胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以不包衣，或可以用已知技术包衣，以延迟在肠胃道内的崩解和吸收，从而在较长时间内提供持续的作用。

通过任选地与一种或多种辅助成分或佐剂一起压制或模塑，可以制备含有本发明组合物的片剂。通过在适当的机器中压制处于自由流动形式（例如粉末或颗粒）的活性成分（所述活性成分任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂相混合）可以制备压制的片剂。通过在适当的机器中模塑用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物，可以制备模塑片剂。每个片剂优选地含有约0.1 mg至约500 mg的每种活性成分，且每个扁囊剂或胶囊剂优选地含有约0.1 mg至约500 mg的每种活性成分。

用于口服使用的组合物也可以呈现为硬明胶胶囊剂，其中每种活性成分与惰性固体稀释剂（例如，碳酸钙、磷酸钙或白陶土）相混合，或呈现为软明胶胶囊剂，其中每种活性成分与水或油介质（例如花生油、液体石蜡或橄榄油）相混合。

其它药物组合物包括水性混悬液，其含有与适用于生产水性混悬液的赋形剂相混合的活性成分（诸活性成分）。此外，通过将活性成分（诸活性成分）混悬在植物油（例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油）中，或混悬在矿物油（例如液体石蜡）中，可以配制油性混悬液。油性混悬液也可以含有各种赋形剂。本发明的药物组合物也可以呈水包油乳剂形式，其也可以含赋形剂诸如甜味剂和调味剂。

所述药物组合物可以是无菌的可注射的水性或油性混悬液的形式，或者是用于临时配制这样的无菌的可注射的溶液或分散体的无菌粉剂的形式。在所有情况下，最终的可注射形式必须是无菌的，且必须可有效流动以易于注射。该药物组合物必须在制造和贮藏条件下是稳定的；因此，优选地应当保存以免于微生物（诸如细菌和真菌）的污染作用。

本发明的药物组合物可以是适用于局部使用的形式，例如气雾剂、乳膏剂、软膏剂、洗剂、扑粉等。此外，所述组合物可以是适合用于透皮装置中的形式。这些制剂可以通过常规加工方法来制备。作为一个实例，如下制备乳膏剂或软膏剂：将亲水材料和水与约5 wt%至约10 wt%的活性成分(诸活性成分)一起混合，以生成具有所需稠度的乳膏剂或软膏剂。

本发明的药物组合物也可以是适用于直肠给药的形式，其中载体是固体。优选的是，所述混合物形成单位剂量栓剂。合适的载体包括可可脂和本领域常用的其它材料。

本发明也提供了用于治疗疾病或病症的药物试剂盒，所述疾病或病症适合用被CYP3A4/5代谢的治疗性化合物治疗。本发明的试剂盒包含：至少一个剂量单位的包含治疗性化合物的第一药物组合物，和至少一个剂量单位的包含波普瑞韦相关的化合物的第二药物组合物。第一组合物和第二组合物的剂量单位一起包装在容器（诸如泡罩包）中。在有些实施方案中，所述试剂盒也包含关于施用试剂盒内的药物组合物来治疗具有疾病或病症的患者的说明书。所述说明书可以包括，例如，下述的一项或多项：治疗性化合物的一种或多种药代动力学参数（诸药代动力学参数）的靶值或范围，为实现靶值/范围所设计的剂量方案，和用于监测各个患者中的治疗性化合物的药物水平并用于根据需要调节剂量方案的方案。在其它实施方案中，所述试剂盒另外包含一种或多种可用于治疗疾病的其它药物组合物。在有些优选的实施方案中，所述试剂盒包含每种药物组合物的许多剂量单位，其足够选自下述的处方的治疗持续时间：1周、2周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月和6个月。

还应当明白，本发明的方法、化合物、组合物、药物和试剂盒可以用于联合治疗中，也就是说，所述化合物、组合物和药物可以与一种或多种其它需要的治疗剂或医学操作并行地、在其之前或在其之后施用。要在联合方案中采用的具体治疗组合(治疗剂或操作)将会考虑需要的治疗剂和/或操作与要实现的期望治疗效果之间的相容性。还应当明白，采用的疗法可以实现相同病症的预期效应(例如，本发明的化合物可以与用于治疗相同病症的另一种药剂并行地施用)，或者它们可以实现不同的效应(例如，任何不良作用的控制)。

例如，当要治疗的患者具有慢性HCV感染时，可以将本发明的组合物和药物添加到被管理机构批准用于慢性HCV适应症的联合治疗方案中，且特别优选的实施方案中，与在任一种下述产品的包装说明书中描述的慢性丙型肝炎的任何定量给药方案和联合治疗方案相组合：Roferon®-A (重组干扰素-α2A)、派罗欣®(聚乙二醇干扰素α-2a)、INTRON®A (重组干扰素α-2b)；佩乐能®(聚乙二醇干扰素α-2b)。

用于与本发明的不同实施方案一起治疗患者的特别优选的IFN-α组合物是被政府管理机构批准的干扰素α-2产品，包括下述的任一种：Roferon®-A (重组干扰素-α2A)及其聚乙二醇化形式，诸如派罗欣®(聚乙二醇干扰素α-2a)；INTRON®A (重组干扰素α-2b)及其聚乙二醇化形式，诸如佩乐能®(聚乙二醇干扰素α-2b)；干复津®(复合α干扰素，一种集成IFN-α)。预见到与本发明一起使用的其它干扰素包括：干扰素α和非-干扰素蛋白之间的融合体，诸如Albuferon®(albinterferon α-2b)；Locteron，即研究中的控释干扰素α制剂(Biolex/OctoPlus)；和Belerofon®，即天然α干扰素的单个氨基酸变体。任一种上述的IFN-α组合物也可以在不同的商标名下销售，诸如VIRAFERONPEG®聚乙二醇干扰素α-2b，它是与佩乐能®聚乙二醇干扰素α-2b相同的组合物。

慢性HCV感染的护理联合治疗方案的当前标准采用几个日剂量的利巴韦林（一种核苷类似物），以及每周1次施用的派罗欣®聚乙二醇干扰素α-2a或佩乐能®聚乙二醇干扰素-α2b。也预见到用于本发明中的是，被管理机构批准的任意聚乙二醇化干扰素α2a或聚乙二醇化干扰素α2b药物组合物，所述批准至少部分地基于对以前呈递给管理当局的临床前数据和/或临床数据的信任，以及对派罗欣®(聚乙二醇干扰素α-2a)和佩乐能®(聚乙二醇干扰素α-2b)的批准。这样的以后批准的产品可以被管理机构用不同的术语描述，诸如以前批准的产品的同一类、生物等效物、生物类似物或替代物，所述术语可以由管理机构明确地定义，或不明确地定义。

也预见到包括除了利巴韦林以外的核苷类似物的、基于IFN-α的联合方案与本发明的组合物、药物和试剂盒一起用于治疗慢性HCV感染。这样的核苷类似物的实例包括：利巴韦林衍生物诸如Valeant Pharmaceuticals International (Aliso Viejo, CA) 正在开发的他立韦林(也称作viramidine和ICN 3142)，和在美国专利号6,403,564和6,924,270中所述的化合物。

与本发明的方法、组合物、药物和试剂盒一起使用的基于干扰素α的联合方案也可以采用一种或多种其它的HCV抑制剂，所述HCV抑制剂靶向的HCV蛋白与被CYP3A4/5代谢的治疗性化合物的靶标相同或不同。这样的其它试剂包括：HCV蛋白酶抑制剂、NS3蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV NS5A抑制剂、IRES抑制剂、NS4B抑制剂、HCV解螺旋酶抑制剂、HCV进入抑制剂和HCV病毒粒子产生抑制剂。优选地，CYP3A4/5不在所述其它HCV抑制剂（诸其它HCV抑制剂）的代谢中起主要作用。

被HCV慢性感染的患者的肝脏有时会受到不可逆损伤，并且这样的患者经历肝移植和随后的免疫抑制剂治疗以防止抑制物的排斥。由于几种常用的免疫抑制剂会被CYP3A4/5代谢，本发明也预见到，在由于HCV感染而接受肝移植的患者的治疗中，波普瑞韦相关的化合物用于增强被CYP3A/4代谢的免疫抑制剂的药代动力学的用途。在这样的患者中，可以以有效地防止HCV感染在移植的肝脏中复发的剂量施用波普瑞韦相关的化合物。

在要治疗的患者被人免疫缺陷病毒(HIV)、特别是HIV-I或HIV-2感染的那些实施方案中，在本发明的药物组合物、药物和试剂盒中的治疗性化合物可以是在表A中列出的任一种HIV抑制剂，并且这样的组合物、药物和试剂盒可以用作联合治疗方案的一部分，所述联合治疗方案也采用一种或多种其它治疗剂，所述其它治疗剂针对的HIV靶标与被CYP3A4/5代谢的治疗性化合物的靶标相同或不同。这样的其它试剂包括：HIV进入抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、HIV逆转录酶抑制剂、HIV融合抑制剂和HIV整合酶抑制剂。优选地，CYP3A4/5不在所述其它HIV抑制剂（诸其它HCV抑制剂）的代谢中起主要作用。

本发明也预见到治疗被HIV感染的患者的伴随病症，诸如机会性感染和癌症。许多用于这样的伴随病症的药物会被CYP3A4/5代谢(参见，例如，表B1-B5)，因而通过与波普瑞韦相关的化合物共同施用可以改善它们的药代动力学。

III. 本发明的示例性的具体实施方案。

1. 一种用于改善被细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物的药代动力学的方法，所述方法包括：给需要用所述治疗性化合物治疗的人患者共同施用所述治疗性化合物和波普瑞韦相关的化合物。

2. 实施方案1的方法，所述方法另外包括：在所述共同施用步骤以后的2个或更多个时间点，测量所述治疗性化合物的至少一种药代动力学参数，并将测得的参数与所述参数的靶值进行对比。

3. 实施方案2的方法，其中所述靶值是所述治疗性化合物的治疗上有效的范围。

4. 实施方案2或3的方法，其中所述至少一种药代动力学参数选自：增加的半衰期(t_1/2)、增加的最大浓度(Cmax)、增加的平均滞留时间(MRT)、增加的剂量之间的AUC和降低的清除率(CL)。

5. 实施方案1-4中任一个的方法，其中所述治疗性化合物是在表A或表B1-B5中所列出的任一种化合物。

6. 实施方案1-5中任一个的方法，其中所述波普瑞韦相关的化合物是式1a或式1b的化合物。

7. 实施方案1-6中任一个的方法，其中所述患者具有慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染，所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物，且所述治疗性化合物是那拉匹韦、特拉匹韦或非利布韦。

8. 实施方案7的方法，其中所述波普瑞韦相关的化合物和所述治疗性化合物与间接抗病毒联合治疗方案一起共同施用。

9. 实施方案1-6中任一个的方法，其中所述患者具有慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染，所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物，且所述治疗性化合物是HCV聚合酶抑制剂、HCV NS4B抑制剂或HCV-IRES抑制剂。

10. 实施方案1-6中任一个的方法，其中所述患者被HIV感染，所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物，且所述治疗性化合物是阿拉韦罗、马拉韦罗或维立韦罗。

11. 实施方案1-6中任一个的方法，其中所述患者被HCV和HIV-1共感染，且所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物。

12. 实施方案1-6中任一个的方法，其中所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物，且所述治疗性化合物是在表B1-B5中所列出的任一种化合物。

13. 一种包含波普瑞韦相关的化合物的药物组合物，所述药物组合物用于改善被细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物的药代动力学的方法中，所述方法包括实施方案1-12中任一个的方法。

14. 实施方案13的药物组合物，其中所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物。

15. 波普瑞韦相关的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于改善被细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物的药代动力学，其中所述药物包含当与所述治疗性化合物共同施用时有效地改善所述治疗性化合物的药代动力学的量的波普瑞韦相关的化合物。

16. 实施方案15的用途，其中所述治疗性化合物是表A或表B1-B5中的任意化合物。

17. 实施方案16的用途，其中所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物，且所述治疗性化合物是那拉匹韦、特拉匹韦或非利布韦。

18. 实施方案16的用途，其中所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物，且所述治疗性化合物是阿拉韦罗、马拉韦罗或维立韦罗。

19. 一种用于采用被细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物治疗患者的药物组合物，所述组合物包含治疗有效量的治疗性化合物和当与所述治疗性化合物共同施用时有效地改善所述治疗性化合物的药代动力学的量的波普瑞韦相关的化合物。

20. 实施方案19的药物组合物，其中所述治疗性化合物是在表A或表B1-B5中所列出的任一种抗病毒化合物。

21. 实施方案19-20中任一项的药物组合物，其中所述波普瑞韦相关的化合物是式1a或式1b的化合物。

22. 实施方案19-21中任一项的药物组合物，其中所述患者具有慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染，所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物，且所述治疗性化合物是那拉匹韦、特拉匹韦或非利布韦。

23. 实施方案19-21中任一项的药物组合物，其中所述患者被HIV感染，所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物，且所述治疗性化合物是维立韦罗、马拉韦罗或阿拉韦罗。

24. 实施方案19-21中任一项的药物组合物，其中所述患者被HCV和HIV-1共感染，且所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物。

25. 一种用于采用被细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物治疗患者的药物试剂盒，所述试剂盒包含：含有治疗有效量的治疗性化合物的第一药物组合物和含有当与所述治疗性化合物共同施用时有效地改善所述治疗性化合物的药代动力学的量的波普瑞韦相关的化合物的第二药物组合物。

26. 实施方案25的药物试剂盒，所述药物试剂盒另外包含：关于施用第一药物组合物和第二药物组合物来治疗具有疾病或病症的患者的说明书，所述疾病或病症对采用所述治疗性化合物的治疗是敏感的。

27. 实施方案26的药物试剂盒，其中所述治疗性化合物是在表1、表B1、表B2、表B3、表B4或表B5中的任意化合物，且所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物。

28. 实施方案25-27中的任一个的药物试剂盒，其中所述治疗性化合物是在表1、表B1、表B2、表B3、表B4或表B5中的任意化合物，且所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物。

29. 实施方案25-28中的任一个的药物试剂盒，其中所述治疗性化合物选自：那拉匹韦、特拉匹韦、非利布韦、维立韦罗、马拉韦罗和阿拉韦罗。

30. 实施方案25-29中的任一个的药物试剂盒，其中所述第一药物组合物和第二药物组合物各自的至少一个剂量单位一起包装在泡罩包中。

实施例

提供下述实施例来更清楚地描述本发明，不应当解释为限制本发明的范围。

实施例1: 波普瑞韦作为人细胞色素P450酶的抑制剂的体外评价

1.1 介绍和目的。

设计本研究以评价波普瑞韦的抑制人肝微粒体中的主要CYP酶的能力，其目的是，确定波普瑞韦的抑制其它药物的代谢的潜力。通过测量人肝微粒体中的每种CYP酶在有或没有波普瑞韦存在下的活性，在体外确定波普瑞韦的抑制能力。这些体外实验被设计为测量波普瑞韦对每种检查的人CYP酶的直接抑制的抑制常数(IC₅₀值)，以及被设计为确定波普瑞韦是否是所述酶的时间依赖性的抑制剂。确定了CYP3A4/5的直接抑制的K_i值和抑制机制(通过咪达***1´-羟基化测量)。还进行了实验以确定观察到的时间依赖性的抑制的证据是否是NADPH依赖性的，以及是否对CYP3A4/5的稀释具有抗性。另外，检验了一个实验，以确定波普瑞韦的形成代谢物抑制复合物(MIC)的能力。

1.2 实验设计

1.2.1 波普瑞韦作为人CYP酶的直接的且时间依赖性的抑制剂的评价：[IC50]值的确定

评价了波普瑞韦的直接抑制下述人CYP酶的能力。还评价了波普瑞韦的以时间依赖性的方式抑制下述CYP酶的能力。

1.2.2 波普瑞韦作为人CYP酶的直接抑制剂的评价：[Ki]值的确定

通过确定K_i值和抑制机制，进一步评价了波普瑞韦的直接抑制人CYP3A4/5的能力(通过咪达***1´-羟基化测得)。

1.2.3 波普瑞韦作为人CYP酶的时间依赖性的抑制剂的评价：NADPH依赖性和稀释效应的确定

通过确定在30分钟预温育以后观察到的抑制增加是否需要NADPH和对稀释是否具有抗性，评价了波普瑞韦的以时间依赖性的方式抑制人CYP3A4/5的能力(通过睾酮6β-羟基化和咪达***1´-羟基化测得)。

1.2.4 波普瑞韦的形成代谢物抑制复合物的能力的评价

评价了波普瑞韦与人肝微粒体形成代谢物抑制复合物的能力，所述人肝微粒体得自具有高CYP3A4/5活性水平的个体。

1.3 材料和方法

1.3.1 材料

1.3.1.1 化学试剂

对乙酰氨基酚、3-氨基-1,2,4-***、乙酸铵、盐酸安非他酮、β-NADP、氯唑沙宗、香豆素、右美沙芬、双氯芬酸、二甲亚砜(DMSO)、呋拉茶碱、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、6-羟基氯唑沙宗、7-羟基香豆素(伞形酮)、4´-羟基双氯芬酸、6β-羟基睾酮、酮康唑、氯化镁、8-甲氧基补骨脂素、4-甲基吡唑、甲氧氯普胺、咪达***、α-萘黄酮、NADP、烟碱、奥芬那君、非那西丁、苯环利定、奎尼丁、蔗糖、磺胺苯吡唑、睾酮、噻氯匹定、Trizma®基质和醋竹桃霉素购自Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO)。磷酸氢二钾和磷酸二氢钾购自J.T. Baker, Inc. (Phillipsburg, NJ)。乙腈、甲醇、氢氧化钾和氢氧化钠购自Fisher Scientific (Pittsburgh, PA)。甲酸购自EM Science (Gibbstown, NJ)。EDTA购自Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, WI)。羟基安非他酮购自BD Gentest Corp. (Woburn, MA)。右啡烷和(±)-4´-羟基美芬妥英购自Ultrafine，即Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO)的一个部门。阿莫地喹和N-去甲基阿莫地喹购自LGC Promochem (Teddington, UK)。S-美芬妥英购自Toronto Research Chemicals Inc. (New York, On., 加拿大)。孟鲁司特购自Sequoia Research Products (Pangbourne,UK)。1´-羟基咪达***购自Cerilliant Corporation (Round Rock, TX)。在XENO TECH, LLC (Lenexa, KS)制备高纯度水和吉非贝齐葡萄糖醛酸苷。17β-N,N- 二乙基氨甲酰基-4-甲基-3-oto-4-氮杂-5α-雄烷-17α-甲酰胺(4-MA)是G.H. Rasmusson博士(Merck, Sharp & Dohme, Rahway, NJ)的慷慨赠品。替尼酸购自Cypex Ltd. (Dundee, 苏格兰)。使用的内部标准品是d4-对乙酰氨基酚、d5-N-去乙基阿莫地喹、d3-右啡烷、d6-羟基安非他酮、d2-6-羟基-氯唑沙宗、d5-7-羟基香豆素、d4-4´-羟基双氯芬酸、d3-4´-羟基-美芬妥英、d3-1´-羟基咪达***和d3-6β-羟基睾酮。由于该信息的专有性质，没有提供这些标准品的来源。

1.3.1.2 试验***：人肝微粒体

由Testing Facility (XenoTech, LLC, Lenexa, KS USA)制备和表征来自捐献的肝脏的人肝微粒。将一组16个混合性别的个体的人肝微粒体样品用于该研究。预先确定了用于选择标记物底物浓度和温育条件的动力学常数(K_m和V_max) (数据未显示)。另外，将得自所述组中的人个体之一的人肝微粒体(表达高水平的CYP3A4/5)用于评价波普瑞韦与CYP3A4/5形成代谢物抑制复合物。

1.3.1.3 试验物：波普瑞韦

制备波普瑞韦(10 mM的靶浓度)在甲醇中的储备溶液，并进行溶解度试验，以定性地评估波普瑞韦在试验***中的溶解度。以列出的终浓度，将最高的波普瑞韦储备溶液(10 mM在甲醇中)的等分试样(10 μL)加入含有高纯度水、磷酸钾缓冲液(50 mM)、MgCl₂ (3 mM)、EDTA (1 mM)和人肝微粒体(0.0125和0.1 mg/mL)的990- μL混合物(靶pH 7.4)中(总体积为1000 μL)。加入了波普瑞韦的试管与含有相同组分、但是不含波普瑞韦的对照试管的定性视觉对比，指示波普瑞韦可溶于试验***中。在进行实验的当天，新鲜地制备储备溶液(用于IC₅₀确定的10 mM波普瑞韦)以及向工作溶液(0.01-3.0 mM范围的波普瑞韦)的稀释液。对于K_i确定，储备溶液的浓度是10 mM，工作溶液的范围是0.25 mM至6 mM。在进行K_i确定实验的当天，新鲜地制备这些溶液。另外，将0.3 mM的储备液浓度用于NADPH依赖性/稀释效应以及MIC形成实验中。

1.3.2 波普瑞韦作为人CYP酶的抑制剂的评价

1.3.2.1 一般温育条件

在下述参考文献中，描述了许多下述温育条件的基础：Madan, 等人, 2002,⁽¹⁾ Huang, 2004,⁽³⁾Ogilvie, 等人, 2006,⁽⁶⁾ Pearce, 等人, 1996,⁽⁷⁾ Tucker, 等人, 2001,⁽⁴⁾以及Walsky和Obach, 2004.⁽⁵⁾。一般而言，在大约37℃在400- μL温育混合物(靶pH 7.4) 中进行温育，所述温育混合物含有：高纯度水、磷酸钾缓冲液(50 mM)、MgCl₂ (3 mM)、EDTA (1 mM)、NADPH产生***[总是下述物质的混合物：NADP (1 mM)、葡萄糖-6-磷酸(5 mM)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(1单位/mL)]和指定终浓度的标记物底物。将合并的人肝微粒体(得自16个个体)用作酶的来源(第1.3.1.2部分)。其它温育条件如表1所示。标记物底物的浓度是基于预先确定的K_m和V_max数据(数据未显示)。

由于波普瑞韦可能结合微粒体蛋白或脂质的可能性，进行了设计这些实验的尝试，使得在尽可能多的情况下，就用人肝微粒体进行的测定而言，微粒体蛋白、温育时间和磷酸盐缓冲液浓度分别是0.1 mg/mL、5分钟和50 mM (表1)。对于香豆素6-羟基化和咪达***1´-羟基化测定而言，存在例外，其中使用稍微不同的蛋白浓度(表1)，以允许在初始速率条件下测量反应速率；也就是说，产物形成随着蛋白浓度和温育时间的增加而增加，使得标记物底物的代谢百分比不会超过20%。由于标记物底物的浓度并非必须精确地等于K_m，在适当时将标记物底物浓度向上或向下舍入，以简化实验设计(数据未显示)。例如，将非那西丁O-脱乙基化活性的K_m确定为63 μM，将其向下调整至60 μM。因而，非那西丁的最终温育浓度是60 μM (表1)。

1.3.2.2 波普瑞韦作为人CYP酶的直接的且时间依赖性的抑制剂的评价：[IC50]值的确定

在表1中指出的浓度下，使用一组16个个体的人肝微粒体样品，研究了波普瑞韦的抑制在第1.2.1部分中列出的CYP酶的能力。将波普瑞韦的储备溶液和/或工作溶液的等分试样手工地加入含有在第1.3.2.1部分中所述的组分的缓冲液混合物中。大量制备温育混合物，以避免对直接抽吸非常小体积(即，1 μL或更小)的需求。不含有波普瑞韦的温育物(0 μM) 含有用于溶解波普瑞韦的媒介物(即，1%甲醇)。

Tecan液体处理***进行除了离心以外的所有剩余温育步骤。然后将缓冲液混合物的等分试样一式两份地自动地加入96-孔平板中的适当的位置。在开始反应之前，将底物工作溶液的等分试样加入96-孔平板，以得到表1所示的终浓度。通过加入NADPH产生***的等分试样，开始反应。通过加入适当的内部标准品(表5)和停止试剂乙腈，反应在大约5分钟时自动地终止。通过离心(在10℃在920g离心10分钟)，除去沉淀的蛋白。通过加入经认证的代谢物标准品，类似地制备标准品和质量控制样品。

为了检查它的作为时间依赖性的抑制剂起作用的能力，将波普瑞韦(在与用于评价直接抑制的浓度相同的浓度)一式两份地与人肝微粒体和NADPH产生***一起在37±1℃预温育大约30分钟。该预温育允许产生可抑制人CYP酶的中间体。通过加入NADPH产生***的等分试样，开始预温育。在预温育时段以后，自动地加入标记物底物(在大约等于它的K_m的浓度)，并继续温育5分钟，以测量残余的标记物CYP活性。通过加入适当的内部标准品(表5)和停止试剂乙腈，反应在大约5分钟时自动地终止。通过离心(在10℃在920g离心10分钟)，除去沉淀的蛋白。将不含有波普瑞韦的温育物(0 μM)和含有波普瑞韦但是未预温育的温育物用作阴性对照。

1.3.2.3 波普瑞韦作为人CYP酶的直接抑制剂的评价：[Ki]值的确定

在表2中指出的浓度下，使用一组16个个体的人肝微粒体样品，研究了波普瑞韦的直接抑制在第1.2.2部分中列出的CYP酶的能力。将波普瑞韦的储备溶液和/或工作溶液的等分试样手工地加入含有在第1.3.2.1部分中所述的组分的缓冲液混合物中。大量制备温育混合物，以避免对直接抽吸非常小体积(即，1 μL或更小)的需求。不含有波普瑞韦的温育物(0 μM)含有用于溶解波普瑞韦的媒介物(即，1%甲醇)。

Tecan液体处理***进行除了离心以外的所有剩余温育步骤。然后将缓冲液混合物的等分试样一式两份地自动地加入96-孔平板中的适当的位置。在开始反应之前，将底物工作溶液(在5种不同的浓度)的等分试样加入96-孔平板，以得到表2所示的终浓度。通过加入NADPH产生***的等分试样，开始反应，并一式两份地进行。通过加入适当的内部标准品(表5)和停止试剂乙腈，反应在大约5分钟时自动地终止。通过离心(在10℃在920g离心10分钟)，除去沉淀的蛋白。通过加入经认证的代谢物标准品，类似地制备标准品和质量控制样品。

1.3.2.4 波普瑞韦作为人CYP酶的时间依赖性的抑制剂的评价：NADPH依赖性和稀释效应的确定

设计实验以进一步研究在与人肝微粒体一起预温育波普瑞韦30分钟以后，在第1.2.3部分中列出的CYP酶的抑制的增加。包括样品以证实CYP3A4/5的抑制的增加（通过睾酮6β-羟基化和咪达***1´-羟基化测量）是否需要NADPH。首先，在有和没有NADPH产生***存在下，没有稀释步骤，将在表3中列出的浓度的一式两份的波普瑞韦样品与合并的人肝微粒体（0.05 mg/mL(就咪达***而言)和0.1 mg/mL(就睾酮而言)）一起预温育0、15和30分钟。然后加入底物（在大约等于K_m的浓度），并将温育进行指定的温育时间（5分钟）。这模仿最初的IC₅₀实验，其中在与人肝微粒体一起预温育波普瑞韦30分钟以后观察到抑制的增加。然后，在有NADPH产生***存在下，将一式两份的波普瑞韦样品（0和3 μM）与人肝微粒体（1.25 mg/mL(就咪达***而言)和2.5 mg/mL(就睾酮而言)，这是典型温育浓度的大约25倍）一起预温育0、15和30分钟。然后将样品稀释25倍，再与标记物底物（其浓度大约等于2 K_m（就睾酮6β-羟基化而言）和10 K_m（就咪达***1´-羟基化而言））一起温育。然后继续温育(在波普瑞韦和微粒体蛋白的预温育浓度的1/25) 5分钟(以允许形成标记物底物的任何代谢物)，并通过加入适当的内部标准品(表5)和停止试剂乙腈来终止。确定残余CYP3A4/5活性。

1.3.2.5 波普瑞韦作为人CYP3A4/5的代谢依赖性的抑制剂的评价：代谢物抑制复合物(MIC)形成的研究

在确定波普瑞韦灭活CYP3A4/5的机理的尝试中，进行实验以确定波普瑞韦是否与细胞色素P450形成通过分光光度计法可检测的代谢物抑制复合物(即，在大约452 nm处的峰)。

在该实验(总结在表4中)中，将含有高CYP3A4/5活性水平的单个人肝微粒体样品(最终蛋白浓度为1 mg/mL，1.7 nmol P450/mg蛋白)加入样品和参照比色皿内的由磷酸钾(50 mM)和MgCl₂ (3 mM)组成的缓冲液混合物中，终体积为980 μL。在Varian Cary 100 BIO UV/Vis双束分光光度计上记录380-520 nm的基线扫描。然后将波普瑞韦加入样品比色皿内的10 μL甲醇中，最终温育浓度为3 μM。将对应体积的用于溶解波普瑞韦的溶剂(10 μL甲醇)加入参照物中。通过向2个比色皿中加入10 μLβ-NADPH达到1 mL的终体积，开始反应。在加入β-NADPH以后，每分钟进行连续扫描，持续15分钟。在大约37℃进行所有扫描。

使用终浓度为25 μM的醋竹桃霉素作为阳性对照，使用相同的操作，但是参照比色皿接收10- μL乙腈等分试样。

1.3.3 [IC50]确定、[Ki]确定和NADPH依赖性和稀释效应实验的分析方法

使用经过验证的HPLC/MS/MS方法，进行所有分析；用于分析每种代谢物的操作遵循可适用的LC/MS/MS分析方法标准操作规程（SOP），且总结在表5中。MS设备是带有Shimadzu HPLC泵和自动采样器***的ABI Sciex (Applied Biosystems, Foster City, CA) API 3000或API 2000仪器。除了氯唑沙宗6-羟基化IC₅₀、咪达***1´-羟基化K_i以及咪达***1´-羟基化的NADPH-依赖性和稀释效应测定以外，在所有情况下，使用的HPLC柱是Waters Atlantis (5- μM粒度, 50 mm x 2.0 mm; Milford, MA)，其前面具有Phenomenex Luna C-8保护柱(4.0 mm x 2.0 mm) (Phenomenex, Torrance, CA)，在环境温度。就氯唑沙宗6-羟基化IC₅₀、咪达***1´-羟基化K_i以及咪达***1´-羟基化的NADPH-依赖性和稀释效应测定而言，使用的HPLC柱是Phenomenex Develosil RP-Aqueous (5- μm粒度, 50 mm x 2.0 mm)，其前面具有Phenomenex Luna C-8保护柱(4.0 mm x 2.0 mm) (Phenomenex, Torrance, CA)，在环境温度。通过加权(1/x)线性最小二乘法回归的向后计算(back calculation)，定量代谢物。回归拟合是基于从校准标准样品计算出的分析物/内部标准品峰面积比，所述校准标准样品从经认证的代谢物标准品制备。用Applied Biosystems/MDS Biosystems (Foster City, CA) Analyst^TM数据***1.4版，对峰面积积分。

1.3.4 统计检验和数据处理

使用用于计算机程序Microsoft Excel, (Office 2000第9.0版; Microsoft Inc., Redmond, WA)的经过验证的定制插件(customized add-in)(DI IC₅₀ LCMS Template 2.0.3版)，处理IC₅₀数据。当在IC₅₀确定实验中观察到CYP酶活性的抑制时，处理所述数据，以用于通过采用XLfit (3.0版, IDBS, Limited, Surrey, UK)的非线性回归确定IC₅₀值，并显示在适当的图上。XLfit是一个Excel插件，它是经过验证的DI IC₅₀ LCMS Template 2.0.3版的组件。该软件利用Levenberg-Marquardt算法来执行数据与下述4-参数S形对数的(sigmoidal-logistic)IC₅₀方程式的非线性回归拟合：

将背景设定为0且范围设定至100(或其它适当的值)（作为使用的对照值的百分比）。已经验证过该软件的计算IC₅₀值的能力（仅当它位于研究的抑制剂的浓度范围内时）。因此，当IC₅₀值落在研究的浓度范围以外时，将IC₅₀值报告为大于评价的波普瑞韦的最高浓度(100 μM)。从该研究得到的数据由计算机产生，并适当地舍入以包含在本文中，因此，报道的值用于计算后续参数的用途，在某些情况下会产生相对于在表中列出的那些的微小变异。

就K_i值的确定而言，用Windows (Microsoft, Inc., Redmond, WA)下的电子数据表计算机程序Microsoft Excel 9.0版处理数据。使用用于计算机程序Microsoft Excel (Office 2000 9.0版; Microsoft Inc., Redmond, WA)中的定制插件(DI K_i LCMS Template, 2.0.0版)，处理通过HPLC/MS/MS获得的数据。就所有测定而言，通过用GraFit (4.0版Erithacus Software Limited, 英国伦敦)进行的非线性回归分析，将整个数据集(即，在所有波普瑞韦浓度、在所有标记物底物浓度的反应速率)拟合至竞争性的、非竞争性的、无竞争性的和混合的(竞争性的-非竞争性的)抑制(数据未显示)的米氏方程式中。拟合至竞争性的、非竞争性的、无竞争性的和混合的抑制的每个方程式的优度，由较低的卡方值减少来指示，后者会提供选择抑制类型的初步基础。然后将数据绘制为Eadie-Hofstee图。应当指出，有时，非线性回归线似乎与在Eadie-Hofstee图上绘制的数据点没有关联，并且可能必须对Eadie-Hofstee图进行目检以证实抑制的性质(数据未显示)。已经验证了GraFit软件的计算K_i值的能力（仅当它们位于研究的抑制剂的试验浓度范围内时）。所述数据由计算机产生，并适当地舍入以包含在报告中，因此，报道的值用于计算后续参数的用途，在某些情况下会产生相对于在表中列出的那些的微小变异。

使用用于计算机程序Microsoft Excel (Office 2000第9.0版, Microsoft Inc., Redmond, WA)中的定制插件，处理得自测定（进行所述测定以进一步表征与人肝微粒体一起预温育波普瑞韦以后的抑制的增加）的数据，以确定反应速率和对照值的百分比。然后使用Microsoft Excel (Office 2000第9.0版; Microsoft Inc., Redmond, WA)，将这些数据显示在条形图上。

使用Microsoft Excel (Office 2000第9.0版或更新版; Microsoft Inc., Redmond, WA)，处理通过UV/Vis分光光度计从代谢物抑制复合物形成测定获得的数据。然后将所述数据输入并绘图(用于Windows的Delta Graph Pro 4.0版; SPSS Inc., Chicago, IL)。

1.3.5 其它对照

1.3.5.1 与温育时间和蛋白浓度的线性

对于每个IC₅₀、K_i和NADPH依赖性/稀释效应实验，在正常蛋白浓度的大约一半和2倍，进行温育，并保持正常温育时段的大约一半和2倍，以确定代谢物形成是否与蛋白浓度和温育时间直接成比例。这些对照的标记物底物的浓度大约等于K_m。在所有情况下，代谢物形成与蛋白浓度和温育时间直接成比例(数据未显示)。

1.3.5.2 [IC50]和[Ki]确定的阳性对照(在适用时)

对于下述直接抑制测定，在有标记物底物(大约等于K_m)和列出浓度的下述抑制剂存在下，在正常的温育时间和微粒体蛋白浓度进行其它温育。

在所有情况下，阳性对照抑制酶活性(数据未显示)。

对于下述时间依赖性的测定，使用正常的预温育时间和微粒体蛋白浓度，进行其它0-分钟和30-分钟预温育(在有下述抑制剂存在下)。如在第1.3.2.2部分中所述，继续温育。

在所有情况下，阳性对照以代谢依赖性的方式抑制酶活性(数据未显示)。

1.3.5.3 时间依赖性的抑制实验的阳性对照(NADPH-依赖性和稀释效应的确定)

使用含有醋竹桃霉素的其它温育物作为CYP3A4/5的阳性对照抑制剂(数据未显示)。对于这些预温育，在有和没有NADPH产生***存在下，将一式两份的醋竹桃霉素样品(25 μM(就睾酮6β-羟基化而言)，7.5 μM(就咪达***1´-羟基化而言))预温育0和30分钟(有和没有稀释步骤，如在第1.3.2.3部分中所述)。然后加入标记物底物(就睾酮β-羟基化而言在大约2 K_m，就咪达***1´-羟基化而言在大约10 K_m)，并继续温育5分钟，以允许形成标记物底物的代谢物。然后确定残余CYP3A4/5活性。

1.3.5.4 MIC阳性对照

对于MIC形成实验，在有溶解于乙腈中的醋竹桃霉素(25 μM)存在下，进行扫描。

1.4 结果和讨论

1.4.1 波普瑞韦作为人CYP酶的直接的且时间依赖性的抑制剂的评价

1.4.1.1 [IC50]值的确定

在检查的实验条件下，波普瑞韦造成CYP3A4/5的直接抑制(通过咪达***1´-羟基化测量)，具有11 μM的IC₅₀值。也存在波普瑞韦直接抑制CYP1A2、CYP2A6、CYP2C8、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4/5的证据(通过睾酮6β-羟基化测量)，因为在最高达100 μM的波普瑞韦浓度，观察到22%、20%、25%、25%、45%和41%的抑制；但是，这些酶的IC₅₀值被报告为大于100 μM。此外，波普瑞韦几乎没有造成或没有造成CYP2B6、CYP2C9或CYP2E1的直接抑制，并且针对这些酶确定的IC₅₀值被报告为大于研究的最高波普瑞韦浓度(>100 μM) (表6)。

在检查的实验条件下，波普瑞韦没有造成CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6或CYP2E1的可辨别的时间依赖性的抑制，因为在预温育以后没有观察到抑制的显著增加；但是，在检查的实验条件下，波普瑞韦造成CYP3A4/5的时间依赖性的抑制(使用睾酮和咪达***二者作为标记物底物)，因为在与人肝微粒体一起预温育波普瑞韦30分钟以后观察到抑制的增加(表6、图1和3)。

应当指出，在第1.3.2部分(波普瑞韦作为人CYP酶的抑制剂的评价)中描述的实验包括：在有NADPH产生***存在下，但是在没有标记物底物存在下，预温育人肝微粒体。在某些情况下，当进行这样的温育时，不论波普瑞韦是否存在，都观察到试验的酶的活性的一些丧失(数据未显示)。该酶活性丧失归因于CYP酶的灭活(例如，被活性氧簇灭活, Zanger, 等人(2004).⁽⁸⁾。

1.4.1.2 [Ki]值的确定

在检查的实验条件下，K_i确定指示，波普瑞韦是CYP3A4/5的竞争性抑制剂(通过咪达***1´-羟基化测量)，具有7.7 μM的K_i值(表6、图4)。

1.4.1.3 波普瑞韦的NADPH依赖性和稀释效应的确定

CYP3A4/5的时间依赖性的抑制(通过睾酮6β-羟基化和咪达***1´-羟基化测量)的进一步评价指示，抑制的增加确实需要NADPH；但是，似乎不具有对稀释的抗性(表6、图2和5)。

1.4.1.4 代谢物抑制复合物(MIC)形成的研究

波普瑞韦似乎不会与含有高CYP3A4/5水平的人肝微粒体样品形成通过光谱法可见的MIC (数据未显示)。

1.5 结论

波普瑞韦几乎没有造成或没有造成CYP2B6、CYP2C9或CYP2E1的直接抑制，且针对这些酶确定的IC₅₀值被报告为大于研究的最高波普瑞韦浓度(>100 μM)。

● 波普瑞韦造成CYP3A4/5的直接抑制(通过咪达***1´-羟基化测量)，具有11 μM的IC₅₀值。存在波普瑞韦直接抑制CYP1A2、CYP2A6、CYP2C8、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4/5 (通过睾酮6β-羟基化测量)的证据，因为在最高达100 μM的BOC浓度观察到22%、20%、25%、25%、45%和41%的抑制，并且这些酶的IC₅₀值被报告为大于100 μM。

● 发现波普瑞韦是CYP3A4/5的竞争性抑制剂(通过咪达***1´-羟基化测量)，具有7.7 μM的K_i值。

● CYP3A4/5的时间依赖性的抑制(通过睾酮6β-羟基化和咪达***1´-羟基化测量) 指示，抑制的增加确实需要NADPH；但是，似乎不具有对稀释的抗性。

● 波普瑞韦似乎不会与含有高CYP3A4/5水平的人肝微粒体样品形成通过光谱法可见的MIC。

1.6 文献参考

1. Madan A, Usuki E, Burton LA, Ogilvie BW, Parkinson A, (2002). In vitro approaches for studying the inhibition of drug-metabolizing enzymes and identifying the drug-metabolizing enzymes responsible for the metabolism of drugs. In Rodrigues AD, Drug-Drug Interactions, Marcel Dekker, Inc., 2002, 217-294.

2. Bjornsson TD, Callaghan JT, Einolf HJ, Fischer V, Gan L, Grimm S, 等人. (2003). The conduct of in vitro and in vivo drug-drug interaction studies: A Pharmaceutical Research and Manufacturers of America (PhRMA) perspective. Drug Metab Dispos 31:815-832.

3. Huang S, (2004). Preliminary Concept Paper-Drug interaction studies-study design, data analysis, and implications for dosing and labeling, 第34页, Office of Clinical Pharmacology and Biopharmaceutics, Center for Drug Evaluation and Research, United States Food and Drug Administration.

4. Tucker GT, Houston JB, Huang SM, (2001). Optimizing drug development: strategies to assess drug metabolism/transporter interaction potential-toward a consensus. Pharm Res 18:1071-1080.

5. Walsky RL, Obach RS, (2004). Validated assays for human cytochrome P450 activities. Drug Metab Dispos 32:647-660.

6. Ogilvie BW, Zhang D, Li W, Rodrigues AD, Gipson AE, Holsapple J, 等人. (2006). Glucuronidation converts gemfibrozil to a potent, metabolism-dependent inhibitor of CYP2C8: Implications for drug-drug interactions. Drug Metab Dispos 34(1):191-197.

7. Pearce RE, McIntyre CJ, Madan A, Sanzgiri U, Draper AJ, Bullock PL, 等人. (1996). Effects of freezing, thawing and storing human liver microsomes on cytochrome P450 activity. Arch Biochem Biophys 331:145-69.

8. Zanger RC, Davydov DR, Verma S. Mechanisms that regulate production of reactive oxygen species by cytochrome P450. Toxicol Appl Pharmacol. 2004; 199(3):316-331。

实施例2：波普瑞韦(BOC)作为人细胞色素P450酶的抑制剂的临床评价

进行了一项临床研究，以确定波普瑞韦对咪达***(MDZ)的药代动力学(PK)特性的影响，从而通过监测波普瑞韦对MDZ（一种敏感的CYP3A4/5底物）的代谢的影响来评估波普瑞韦在体内抑制CYP3A4/5的能力。

2.1一般方法学

根据优良临床试验规范，在处于单中心的健康的成年受试者(7位男性和5位女性受试者)中进行该研究。本研究使用固定顺序设计(单独的波普瑞韦和随后的MDZ + 波普瑞韦)。当单独施用MDZ时，确定MDZ和它的代谢物(1-羟基咪达***[1-OH-MDZ))的PK特性，并与共同施用波普瑞韦以后的PK特性以及施用波普瑞韦后的7天清除期之后的PK特性进行对比。

2.2试验产物、剂量、给药模式

施用800 mg(作为4 x 200 mg胶囊剂)波普瑞韦(BOC)。施用4 mg (作为单次剂量的口服溶液)MDZ。

2.3施用的治疗

•第1天：4 mg MDZ(口服溶液，单次剂量)

•第1-5天：800 mg波普瑞韦(4 x 200 mg胶囊剂)，每天3次

•第6天：4 mg MDZ (口服溶液，单次剂量)和800 mg波普瑞韦(4 x 200 mg胶囊剂)，每天3次

•第8天和第13天：4 mg MDZ (口服溶液，单次剂量)

收集用于PK分析的血液样品：

•对于MDZ和1-OH-MDZ：第-1、6、8和13天：给药前(0小时)和在给药后0.5、1、2、3、4、8、12和24小时。

•对于波普瑞韦：在第4天和第5天和第6天给药前(0小时)：给药前(0小时)和在给药后0.5、1、2、3、4、6和8小时。在施用下一剂量的波普瑞韦之前，收集8小时样品。

2.4结果和讨论

该临床pK研究的结果显示在下面的表7和8中。

与单独的MDZ (第-1天)相比，在共同施用MDZ和波普瑞韦(第6天)以后，平均MDZ Cmax和AUC(0-24小时)值明显更高；MDZ Cmax的几何均数比的点估计是277%，AUC(0-24小时)的几何均数比的点估计是530%。MDZ的血浆浓度在不迟于第8天(最后一次波普瑞韦给药后48小时)恢复至基线值。

在共同施用MDZ和波普瑞韦以后，平均1-OH-MDZ Cmax和AUC(0-24小时)值下降，并在不迟于第13天完全恢复至基线值。与单独的MDZ (第-1天)相比，在共同施用MDZ和波普瑞韦(第6天)以后，1-OH MDZ Cmax和AUC(0-24小时)的几何均数比的点估计分别是29%和56%。

2.5结论

MDZ和波普瑞韦的共同施用导致MDZ暴露的3-5倍的增加。波普瑞韦是CYP3A4/5的强时间依赖性的、可逆的抑制剂。因而，存在利用波普瑞韦来强化或增强作为CYP3A4/5底物的其它药物的药代动力学暴露的潜力。

Claims

1.一种用于改善被细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物的药代动力学的方法，所述方法包括：给需要用所述治疗性化合物治疗的人患者共同施用所述治疗性化合物和波普瑞韦相关的化合物。

2.根据权利要求1所述的方法，所述方法另外包括：在所述共同施用步骤以后的2个或更多个时间点，测量所述治疗性化合物的至少一种药代动力学参数，并将测得的参数与所述参数的靶值进行对比。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述治疗性化合物是在表A、表B1、表B2、表B3、表B4或表B5中所列出的任一种化合物。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述波普瑞韦相关的化合物是式1a或式1b的化合物

Figure 2011800463012100001DEST_PATH_IMAGE001

式1a

式1b。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述患者具有慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染，所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物，且所述治疗性化合物是那拉匹韦、特拉匹韦或非利布韦。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述患者被HIV感染，所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物，且所述治疗性化合物是阿拉韦罗、马拉韦罗或维立韦罗。

7.一种包含波普瑞韦相关的化合物的药物组合物，所述药物组合物用于改善被细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物的药代动力学的方法中，所述方法包括：给需要用所述治疗性化合物治疗的人患者共同施用所述治疗性化合物和波普瑞韦相关的化合物。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物。

9.一种用于采用被细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物治疗患者的药物组合物，所述组合物包含治疗有效量的治疗性化合物和当与所述治疗性化合物共同施用时有效地改善所述治疗性化合物的药代动力学的量的波普瑞韦相关的化合物。

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述治疗性化合物是在表A、表B1、表B2、表B3、表B4或表B5中所列出的任一种抗病毒化合物。

11.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物。

12.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述患者具有慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染，所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物，且所述治疗性化合物是那拉匹韦、特拉匹韦或非利布韦。

13.一种用于采用被细胞色素P450 3A4/3A5 (CYP3A4/3A5)代谢的治疗性化合物治疗患者的药物试剂盒，所述试剂盒包含：含有治疗有效量的治疗性化合物的第一药物组合物和含有当与所述治疗性化合物共同施用时有效地改善所述治疗性化合物的药代动力学的量的波普瑞韦相关的化合物的第二药物组合物。

14.根据权利要求13所述的药物试剂盒，所述药物试剂盒另外包含：关于施用第一药物组合物和第二药物组合物来治疗具有疾病或病症的患者的说明书，所述疾病或病症对采用所述治疗性化合物的治疗是敏感的。

15.根据权利要求14所述的药物试剂盒，其中所述治疗性化合物选自：那拉匹韦、特拉匹韦、非利布韦、维立韦罗、马拉韦罗和阿拉韦罗，且所述波普瑞韦相关的化合物是式1a的化合物。