CN103096737A - 减少血液乳酸盐浓度的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明针对的是减少锻炼、体育活动或运动表现中的血液乳酸盐浓度的方法。

Description

减少血液乳酸盐浓度的方法
相关申请数据
该申请要求对于2010年9月17日提交的美国临时专利申请号61/383,973以及于2011年6月17日提交的美国临时专利申请号61/498,007的优先权,其中每项申请都以其全文通过引用并入本文用于所有目的。
发明领域
本发明涉及通过降低血液乳酸盐浓度和/或增加乳酸盐阈值(即,参与高强度运动活动的个体中的最大乳酸盐稳定状态)而提高运动表现(athletic performance)的领域。本发明进一步涉及测定法的领域,具体而言涉及用于确定化合物减少高强度运动中血液乳酸盐浓度的能力的测定法领域。
发明背景
在锻炼中,收缩的骨骼肌中产生乳酸或乳酸盐。除非乳酸被细胞利用,否则其会从细胞中清除并以乳酸盐形式(因为氢离子从乳酸中解离)携带进入血液中。个体都有一个静息血液乳酸盐浓度。然而,肌细胞收缩越多,在肌细胞中产生的乳酸或乳酸盐就越多,而以乳酸盐和解离氢离子形式携带进入血液中的乳酸也越多。当乳酸产生速率超过乳酸盐清除或移除速率及氢离子缓冲能力时,血液乳酸盐浓度增加且血液pH降低。
对于某个个体,个体维持锻炼强度的能力降低时(如表现为疲劳)的血液乳酸盐浓度被称为乳酸盐阈值或最大乳酸盐稳定状态。个体的一般最大乳酸盐稳定状态为大约4mmol血液乳酸盐。能够在达到最大乳酸盐稳定状态前维持较高百分比的最大锻炼能力的个体常常为更好的耐力运动员。也就是,个体在达到最大乳酸盐稳定状态前维持较高百分比的最大锻炼能力的能力可用于预测耐力表现(enduranceperformance)。
用于增加个体的乳酸盐阈值或用于在最大乳酸盐稳定状态下提高个体的输出功(work output)的一般方法是进行运动训练。规律的运动训练增加线粒体的生物发生,使得肌肉中线粒体含量增加。不希望受到科学理论的约束,对于给定的锻练强度水平,较高的线粒体质量可导致乳酸产生速率较低、乳酸盐(通过氧化)清除速率增加或二者。因此,乳酸盐阈值得到有效增加或者锻炼中乳酸盐应答得到有效提高,也就是说,个体能够在超出其最大乳酸盐稳定状态之前,例如在达到4mmol的血液乳酸盐浓度之前,以更高的强度进行锻炼。
槲皮素是一种发现于一些水果和蔬菜中的黄酮素。对一种包括槲皮素、绿茶提取物、维生素C、维生素E、咖啡因、烟酸、牛磺酸、维生素B6、维生素B2、维生素B1和葡萄糖的混合物进行的研究称其在特定条件下提高了计时自行车赛的成绩。然而,研究者认识到成绩的提高不单单归因于槲皮素。见MacRae和Mefferd,InternationalJournal of Sport Nutrition and Exercise Metabolism,2006,16,405-419。有报道称槲皮素增加小鼠大脑和小鼠肌肉的线粒体生物发生以及小鼠的锻炼耐受。见Davis等人,Am.J.Physiol.Regul.Inter.Comp.Physiol.296:R1071-R1077(2009)。还有报道称槲皮素在特定个体中增加最大摄氧量及自行车成绩。见Davis等人,InternationalJournal of Sport Nutrition and Exercise Metabolism,2009,20,1013。槲皮素和DMSO对来自C2C12骨骼肌细胞的骨骼肌形成的效应已有报道。见Basic Appl Myol11(1):31-44(2001)。然而,这些研究中无一提出了通过对个体施用槲皮素降低血液乳酸盐的方法、通过减少血液乳酸盐浓度提高个体的肌细胞效能的方法、或者在个体中增加乳酸盐阈值或最大乳酸盐稳定状态以允许长时间高强度体育活动的方法。
因此本发明的一个目标是通过施用槲皮素减少个体的血液乳酸盐浓度。本发明一个进一步的目标是通过减少血液乳酸盐浓度而延长高强度体育活动。本发明的另一个进一步的目标是建立一项用于鉴定能够减少肌细胞中乳酸浓度的化合物的测定法。通过以下公开及示例实施方式的描述,本领域技术人员会清楚本发明或本发明特定实施方式的这些及其他目标、特征和优势。
发明概述
本发明的实施方式针对用于在减少锻炼中个体血液乳酸盐浓度的方法。根据本发明的该方面,在体育锻炼前根据具体方案对个体施用槲皮素。然后个体参加体育锻炼,并比个体不施用槲皮素进行体育锻炼产生的血液乳酸盐浓度有所减少。根据该实施方式的一个方面,通过在体育锻炼前根据具体方案对个体施用槲皮素,提供了提高锻练表现(exercise performance),即在4mmol血液乳酸盐浓度下输出功的能力增加的方法。进一步地,当个体参与锻炼时,在相同输出功时相比于未施用槲皮素的锻炼的血液乳酸盐浓度得到减少,于是这会在疲劳前得到更多的运动时间和输出功,这超过了无槲皮素施用的个体达到的情况。根据此方面,槲皮素的施用增加了个体的乳酸盐阈值或个体的最大乳酸盐稳定状态并提高了对锻炼的耐受,这一点可通过对一项具体体育活动疲劳前的时间增加或完成特定距离的时间加快或累积完成特定量工作的时间变短而测量。本公开另一方面针对训练,即体育锻炼中施用槲皮素。训练可在具体体育赛事如竞赛体育赛事之前。根据此方面,在体育训练中施用槲皮素导致相比于未施用槲皮素而进行所述锻炼的个体,个体达到的血液乳酸盐浓度有所减少。根据该实施方式的一个方面,通过在锻炼训练中根据具体方案对个体施用槲皮素提供了提高运动表现,即增加4mmol血液乳酸盐浓度下输出功能力的方法。进一步地,当个体参与锻炼时,血液乳酸盐浓度得到减少,这意味着服用槲皮素后可在最大乳酸盐稳定状态下达到更大的锻炼强度,因此使得个体能更快完成既定距离或减少累积特定工作量所需的时间。根据另一方面,当个体参与锻炼时,在相同输出功时相比于未施用槲皮素的锻炼,血液乳酸盐浓度得到减少,于是这会在疲劳前得到更多的锻炼时间和输出功,这超过了无槲皮素施用的个体达到的情况。根据此方面,槲皮素的施用增加了个体的乳酸盐阈值或最大乳酸盐稳定状态并提高了锻炼耐受,这一点可通过对一项具体体育活动疲劳前的时间增加或完成特定距离或累积完成特定量工作的时间降低而测量。
本发明的特定实施方式基于肌细胞培养测定法的用途,其鉴定能够降低如通过培养中电刺激引发的肌细胞收缩或个体在体育锻炼中肌细胞收缩在细胞内所生成的乳酸的化合物。根据本发明,如通过培养中的电刺激或个体的体育锻炼期间,参与重复收缩的肌细胞生成乳酸或乳酸盐。细胞内积累的乳酸或乳酸盐超过正常静息细胞可导致肌肉疲劳和/或降低的肌细胞效能。根据本发明的一个方面,在以减少细胞内乳酸或乳酸盐的量或浓度的方式施用槲皮素时,肌细胞具有增加的(即超过细胞天然能力的)收缩能力。
根据本发明的方面的施用槲皮素的方法在将槲皮素直接施用于肌细胞、包围肌细胞的基质或作为补充物、食物、饮食替代营养棒、糖果、零食或饮料产品施用于个体时,有效减少由于例如通过在培养中对肌细胞的电刺激或个体的体育锻炼产生的收缩导致的血液乳酸盐量或浓度。根据一个方面,槲皮素降低肌细胞或包围肌细胞的基质中的乳酸或乳酸盐浓度。根据另一方面,槲皮素降低血液乳酸盐的量或浓度。根据一个进一步的方面,槲皮素抑制或减少肌细胞中乳酸或乳酸盐的形成。根据一个甚至更进一步的方面,槲皮素抑制或减少乳酸盐在血液中的积累。
根据本发明的特定方面,提供了通过以降低培养中收缩期间细胞的血液乳酸盐量的方式或以降低锻炼中个体的血液乳酸盐量或浓度的方式施用槲皮素,减少肌肉疲劳和/或肌肉效能损失的方法。本发明的方法包括以在收缩细胞中降低乳酸的量或浓度的方式或在进行给定输出功的运动的个体中降低血液乳酸盐的量或浓度的方式施用槲皮素,而增加个体的血液乳酸盐阈值或最大乳酸盐稳定状态(这是通过增加个体在疲劳前的锻炼时间、减少完成既定距离所花费的时间或通过降低给定输出功的血液乳酸盐浓度而达到的)而升高个体对运动的耐受或升高进行高强度运动的能力。
降低肌细胞内的乳酸或乳酸盐或血液乳酸盐浓度增加了肌肉在疲劳和/或肌细胞衰竭(这阻止或减少了进一步的收缩)前连续收缩的能力。因此,特定方面针对的是通过对肌细胞施用槲皮素由此延长肌细胞相对于未施用槲皮素的对照肌细胞的收缩能力而增加肌细胞收缩的能力。本发明的方面包括通过在锻炼前施用槲皮素阻止、减少或延迟个体中与锻炼相关的肌肉疲劳的发生以及降低锻炼中的血液乳酸盐浓度。本发明的方面还包括在锻炼前施用槲皮素而减少肌肉疲劳而延长个体的锻炼时间或减少个体完成特定距离所需的时间量,以及降低锻炼中的血液乳酸盐浓度。本发明的进一步的方面包括通过在锻练前施用槲皮素而减少肌肉疲劳增强运动表现,以及降低锻炼中的血液乳酸盐浓度。
本发明的实施方式还针对的是肌细胞测定法以及使用肌细胞测定发确定化合物的阻止、减少、抑制或限制收缩造成的肌细胞内乳酸产生的方法。本发明的肌细胞测定法用于定量肌肉收缩过程中涉及的乳酸产生量。根据此方面,确定了静息的细胞培养物的基质中的乳酸盐浓度。通过以一定频率和脉冲时长进行一段时间的电刺激引起培养物中的其他肌细胞收缩。测量来自收缩细胞的培养基质中的乳酸盐浓度以确定相对于未刺激的或静息肌细胞,激活的肌细胞中乳酸产生的程度。还将肌细胞与候选化合物相接触,并通过相同时间、相同频率和脉冲时长的电刺激引起肌细胞收缩。根据一个实施方式,候选化合物为槲皮素。测量细胞培养基质中的乳酸盐浓度并将其与激活的(未加候选化合物孵育的)细胞和静息细胞中的乳酸盐浓度进行比较。如果受刺激的肌细胞接触候选化合物后乳酸盐浓度减少,则选择及/或鉴定此化合物为能够在例如个体中通过减少锻炼中血液乳酸盐浓度和/或增加个体对于给定输出功的血液乳酸盐阈值而减少肌肉疲劳和/或增强体育表现的化合物。
根据另一方面,通过以一定频率和脉冲时长的电刺激并进行一段时间直至衰竭点,即,直至肌细胞停止收缩,而引起培养物中的肌细胞收缩。然后测量培养基质中的乳酸盐浓度。还将肌细胞与候选化合物相接触,并通过相同脉冲时长和相同频率下的电刺激引起肌细胞收缩直至衰竭点,并测量乳酸盐浓度。在一个优选的实施方式中,候选化合物为槲皮素。将未加化合物孵育的激活细胞衰竭前的时间与收缩并加有候选化合物孵育的细胞衰竭前的时间进行比较。如果对于候选化合物衰竭前的时间增加,则选择及/或鉴定此候选化合物为能够在例如个体中通过减少锻炼中血液乳酸盐浓度和/或增加个体对于给定输出功的血液乳酸盐阈值而减少肌肉疲劳和/或增强体育表现的化合物。
在本发明的另一方面,将肌细胞与化合物接触并通过以一定脉冲频率和时长进行一段时间的电刺激引起其收缩。根据一个特定的实施方式,所述化合物为黄酮素如槲皮素、芸香苷、异槲皮素、异槲皮苷、山奈酚、杨梅酮或异鼠李素及其硫酸盐、葡萄糖苷酸或糖苷缀合形式。测量肌细胞培养基质中乳酸盐浓度。还将肌细胞与候选化合物相接触,并通过相同时间、相同脉冲频率和时长的电刺激引起肌细胞收缩。然后测量培养基质中乳酸盐浓度并与来自未加化合物孵育并受刺激收缩的细胞的乳酸盐浓度进行比较。将候选化合物减少乳酸盐浓度的能力评定为高于或低于其他候选化合物或对照化合物减少乳酸盐浓度的能力。以这种方式,化合物在例如个体中减少肌肉疲劳和/或增强体育表现的能力是通过减少锻炼中血液乳酸盐浓度和/或增加个体对于给定输出功的血液乳酸盐阈值而确定的。
在本发明一个进一步的方面中,通过电刺激引起培养物中的肌细胞收缩直至疲劳点并最终产生衰竭。对槲皮素测量衰竭前时间。还将肌细胞与其他候选化合物相接触。然后通过电刺激引起培养物中的肌细胞收缩直至疲劳点并最终产生衰竭。对候选化合物测量衰竭前时间,并将其与对槲皮素或其他候选化合物得到的衰竭前时间进行比较。如果对于候选化合物的衰竭前时间比比较化合物(槲皮素或其他候选化合物)的衰竭前时间长,则选择此候选化合物为能够在例如个体中通过减少锻炼中血液乳酸盐浓度和/或增加个体对于给定输出功的血液乳酸盐阈值而减少肌肉疲劳和/或增强体育表现的化合物。
附图简述
本发明的前述及其他特征和优势将从以下说明性实施方式的详述结合附随的图得到更全面的理解。应当认识的是,图中的结果和实施例仅为说明性的,根据本公开的益处,本领域普通技术人员能容易地认识到有其他的实施例和说明。
图1为曲线图,以血液乳酸盐浓度相对%VO2峰值作图,显示了受训练的自行车运动员的血液乳酸盐对锻炼量增加的应答。
图2为多种%VO2峰值的锻炼强度下,受训练的自行车运动员的血液乳酸盐对锻炼量增加的应答的柱状图,显示在施用槲皮素后峰值强度强度附近的血液乳酸盐有所下降。
图3为多种对肌细胞进行的多种电脉冲刺激实验的示意图,其中存在或不存在槲皮素,并且经过或不经过前期电脉冲刺激。
图4为C2C12细胞中乳酸盐浓度的图,其中在锻炼强度刺激(加电刺激的培养或不加电刺激培养)前后未施用槲皮素。
图5为平板A(引发后第5天,低刺激)和平板C(引发后第5天,低刺激w/Q)的乳酸盐浓度的图。
图6为平板B(引发后第5天,高刺激)和平板D(引发后第5天,高刺激w/Q)的乳酸盐浓度的图。
图7为平板E(未引发,第5天,高刺激w/Q)和平板F(未引发,第5天,高刺激)的乳酸盐浓度的图。
特定示例性实施方式的详述
本发明的实施方式基于此项发现:特定化合物降低锻炼中个体的血液乳酸盐浓度。血液乳酸盐浓度为与肌肉疲劳和肌肉衰竭相关的一个因素。根据本发明的方面,提供了方法以减少或降低收缩骨骼肌中的乳酸浓度。在一个实施方式中,将一种或多种化合物以阻止、抑制、降低和/或减少肌细胞中的乳酸盐浓度的方式施用于肌细胞。根据此种减少肌细胞中乳酸的方法,肌肉疲劳得到降低,运动表现有所增强。
本发明范围内的阻止、减少、抑制、限制和/或降低收缩肌细胞中乳酸浓度及/或阻止、减少、抑制、限制和/或降低锻炼个体中乳酸盐浓度的化合物包括黄酮素化合物,如槲皮素、芸香苷、异槲皮素、异槲皮苷、山奈酚、杨梅酮或异鼠李素及其硫酸盐、葡萄糖苷酸或糖苷缀合形式。这些化合物包括天然发生的化合物及其衍生物和修饰物以及合成化合物。合成化合物的特征在于与由天然制造相反,通常是由有机合成制造的任何化合物。
要理解的是本发明的实施方式包括施用一种或多种化合物或大量化合物,其减少锻炼个体中由收缩肌细胞产生的乳酸盐积累。进一步地,在液体饮料或食物产品中,以足以减少锻炼个体对于给定输出功的血液乳酸盐浓度的量包括一种或多种这样的化合物或大量的这些化合物,其中的施用、递送或摄取是根据本文描述的方法进行的。
根据本发明的方面,在锻炼计划(包括轻量锻炼计划、中度锻炼计划、大量锻炼计划)或竞赛性运动赛事前,将化合物如槲皮素对个体进行一段时间的施用。本发明范围内的时间段包括大约紧邻锻炼计划或竞赛运动赛事前、锻炼计划或竞赛运动赛事前大约5分钟-大约1小时、锻炼计划或竞赛运动赛事前大约1小时-大约5小时、锻炼计划或竞赛运动赛事前大约1天-大约5天、或者锻炼计划或竞赛运动赛事前大约1周-大约5周以及上述范围内的所有范围和值,可以重合或不重合。施用频率包括大约每30分钟、大约每小时、大约每2-3小时、大约每3-5小时、大约每12小时、大约每天、大约每3天、大约每周施用化合物,等等,并包括上述范围内的所有范围和值,可以重合或不重合。在具体锻炼计划、体育获得或运动赛事前以给定频率和化合物量,化合物施用的总时间包括一天或24小时、一周、两周、三周、四周、五周、六周、七周及更长,以及上文内的任何及全部范围和值,可以重合或不重合。本领域普通技术人员会根据本公开的益处理解到的是,施用于个体的量至少取决于化合物活性及其在具体个体中的生物利用率。本发明范围内的化合物的特定单一剂量施用量包括大约1毫克-大约10克、大约5毫克-大约5克、大约100毫克-大约3克、大约500毫克-大约2克及上述范围内的任何及所有范围和值,可以重合或不重合。本发明范围内的化合物特定日剂量施用量包括大约1毫克-大约10克、大约5毫克-大约5克、大约100毫克-大约3克、大约500毫克-大约2克及上述范围内的任何及所有范围和值,可以重合或不重合。在一个具体实施方式中,在所需的锻炼表现、体育活动或运动赛事前以1000克的日剂量施用槲皮素,大约施用25-大约35天。
进一步地,本发明范围内化合物的特定量包括大约1mg化合物每kg体重(1mg/kg)-大约100mg/kg、大约5mg/kg-大约50mg/kg、大约10mg/kg-大约25mg/kg、大约15mg/kg-大约20mg/kg以及上述范围内的任何及所有范围和值,可以重合或不重合。根据特定方面,这样的量是以大约5-大约30液体盎司、大约10-大约25液体盎司、大约15-大约20液体盎司的液体体积施用的,并包括上述范围的任何及所有范围和值,可以重合或不重合。要理解的是,施用频率可取决于具体化合物、所施用的化合物或多种化合物的量、施用模式、个体分解代谢所述化合物或多种化合物的能力,等等。进一步地,所施用的化合物或多种化合物的频率和量可通过肌细胞中乳酸或个体在肌肉收缩和/或运动中血液乳酸盐浓度的阻止、减少、抑制、限制和/或降低的所需量而确定。通常,更大量及更频繁的施用可更强烈地阻止、减少、抑制、限制和/或降低肌细胞中乳酸浓度或个体在肌肉收缩和/或运动中血液乳酸盐浓度。更进一步地,所施用的化合物或多种化合物的频率和量还以肌肉疲劳减少和/或肌肉效能增强的所需量和/或血液乳酸盐阈值和/或最大血液乳酸盐稳定状态的所需增加而确定。需要极大减少肌肉疲劳或提高肌肉效能的个体更倾向于施用更高频率和更高量的化合物或多种化合物。
根据本发明的方面,可通过个体摄取将化合物施用或递送至个体,如通过饮用液体如复水或运动饮料或增强水或搅合饮料,通过食用固体食物产品如食物棒,以及通过摄取可食用的薄膜条、丸、润喉糖、咀嚼片、软糖、凝胶、果冻、果子冻、膏,等等。要理解的是术语施用并不限于一个个体为另一个提供化合物。相反,术语施用包括个体例如通过引用包括一种或多种化合物的饮料为其自身提供化合物。
施用或递送的一个示例性途径包括将化合物混合或溶解或重悬于液体,如作为乳液而摄取。要理解的是,本发明的方面包括施用减少锻炼中血液乳酸盐浓度的一种或多种化合物或减少锻炼中血液乳酸盐浓度的大量化合物。本发明的实施方式还包括液体、饮品或饮料,其以在根据本文描述的方法施用、递送或摄取时足以减少锻炼中血液乳酸盐浓度的量包括一种或多种或大量化合物。本发明范围内的液体、饮品和/或饮料包括水溶液如运动饮料或水或增强水,其可进一步包括一种或多种饮料成分以制成饮料,包括碳酸或非碳酸饮料。例如,运动饮品、增强水或其他饮料中以足以减少肌肉收缩过程中如运动计划或竞赛性运动赛事或其他剧烈体育活动中肌细胞收缩产生的血液乳酸盐浓度的量单独地或与其他减少锻炼中血液乳酸盐浓度的化合物组合地包括化合物槲皮素,其中个体可以是训练有素的运动员或不是。在一个具体实施方式中,槲皮素存在于运动饮品或其他饮料中,并在所需的锻炼、体育活动或运动赛事前以合适的量进行每日摄取,持续合适的天数,以减少所需的锻炼、体育活动或运动赛事中的血液乳酸盐浓度并提高肌肉和/或锻炼和/或体育活动和/或运动的效能。
应当理解的是,根据本公开的液体、运动饮品、复水饮料、饮料或其他饮料产品(全部统称饮料或饮料产品)可能具有大量不同特定制剂或组成中的任何种类。根据本公开的饮料产品的制剂可根据如产品的预期市场区隔、其所需的营养特征、风味特性等等,在一定程度上变动。
以足以作为日剂量或作为日剂量的一部分的量包括一种或多种化合物如槲皮素的复水饮料可结合体育活动(如锻炼)使用,以补充活动中损失的液体及电解质,还可提供附加的能量。为此,复水饮料通常至少包含水、碳水化合物和电解质,具有的测量渗透压为250-350mOsm/kg。一般包括在这种饮料内的碳水化合物为高果玉米糖浆和蔗糖。其他的复水饮料包括碳水化合物混合物,其在溶液中经过一段时间只发生最小的水解,由此在存储中基本上维持初始测量的渗透压。其他的包含这些碳水化合物混合物的复水/运动饮料具有低的渗透压,在食用(consumption)后会由受试者迅速吸收。
根据一个方面,提供了碳水化合物混合物,其包含35%-45%重量的果糖及55%-65%重量的葡萄糖。所述碳水化合物混合物可包括碳水化合物的组合,如果糖、葡萄糖、蔗糖、白菌二糖、海藻糖、半乳糖、异麦芽糖、右旋糖、麦芽糖糊精、玉米糖浆固体和/或低聚葡萄糖及其组合。含有6%重量的碳水化合物混合物的水溶液具有的测量渗透压为230-300mOsm/kg。进一步地,所述6%碳水化合物溶液在储存长达六个月中,测量渗透压变化不超过5%。
在另一方面,提供了饮料组合物,其包含水和4%-10%重量的碳水化合物混合物,后者具有35%-45%重量的果糖及55%-65%重量的葡萄糖。所述饮料可为复水饮料,并进一步包括电解质、可食用酸类、维生素、功能成分、着色试剂、风味试剂及其组合。
在本文公开的碳水化合物混合物和饮料组合物的特定实施方式中,至少一些葡萄糖是由低聚葡萄糖提供的,后者具有含大约3-7的糖聚合度或多至6的糖聚合度的结构,而在其他实施方式中,该结构含有多至10的糖聚合度。在特定实施方式中,至少一些葡萄糖是由具有11或更大的糖聚合度的多糖提供的。在根据本公开的饮料组合物的特定示例性实施方式中,提供了复水饮料,其具有的测量渗透压在230mOsm/kg-260mOsm/kg的范围内。在本发明的特定实施方式中,碳水化合物混合物包括的低聚葡萄糖的结构具有初始的α-(1,4)葡萄糖-葡萄糖连接,随后变成交替的α-(1,3)葡萄糖-葡萄糖连接及α-(1,6)葡萄糖-葡萄糖连接。一种合适的低聚葡萄糖由Cargill,Incorporated,Wyzata,MN合成,名称为Glucohydrate。
渗透压定义为每千克溶剂中溶质的渗透压克分子数,其中每摩尔的离子电荷提供一个渗透压克分子。低聚葡萄糖比较小的碳水化合物如二糖或单糖具有更大的分子量。因此,包含特定重量百分比的低聚葡萄糖的第一种碳水化合物混合物的溶液比除了包含相同的特定重量百分比的二糖取代低聚葡萄糖外与第一种是一致的第二种碳水化合物溶液具有更低的渗透压。这一点的原因是第一种溶液中存在的碳水化合物的总摩尔数比第二种溶液中少。因此,包含蔗糖和高果玉米糖浆(HFCS)的复水饮料通常具有的初始测量渗透压为大约330mOsm/kg,含有大约4%重量-大约10%重量的碳水化合物混合物的水溶液具有的测量渗透压为大约230-300mOsm/kg。进一步地,在根据本公开的饮料组合物的特定示例性实施方式中,提供了复水饮料组合物,其具有的测量渗透压在230mOsm/kg-260mOsm/kg的范围内。
根据不同实施方式的饮料组合物可包含一种或多种碳水化合物来源。在特定实施方式中,碳水化合物可包括单糖、二糖和低聚葡萄糖来源,而在其他实施方式中,碳水化合物还包括多糖来源,如玉米糖浆固体。在特定实施方式中,提供了饮料组合物,其包含水及4%-10%重量的碳水化合物混合物,后者具有35%-45%重量的果糖和55%-65%重量的葡萄糖。所述葡萄糖中至少一些是由低聚葡萄糖提供的。所述饮料可为复水饮料,并进一步包括电解质、可食用酸类、着色试剂、风味试剂、维生素、功能成分及其组合。
本发明的特定实施方式有利地提供了组合物如复水饮料组合物,其中碳水化合物来源的水解得到最小化。因为碳水化合物的水解导致碳水化合物总摩尔数的增加,所以受到水解的组合物的渗透压会在一段时间后表现出测量渗透压的增加。相反,根据本发明的包含4%-10%重量的碳水化合物混合物的组合物的测量渗透压在多至六个月的储存后增加不超过5%。因此,根据本发明的实施方式通常提供了测量渗透压(例如,大约300mOsm/kg)低于细胞质的复水饮料,其立即和在制造后长达至少六个月由胃肠***快速吸收。
向具体饮料实施方式包括运动饮品或复水饮料的制剂中加入其他成分通常会是一种选择。通常可向任意这类配方中加入一种或多种甜味剂、调料、电解质、维生素、果汁或其他水果产品、调味剂、掩蔽剂等等、风味增强剂及/或碳酸剂,以改变味道、口感、营养特征,等等。通常,根据本公开的饮料通常至少包含水、一种或多种根据本发明的降低乳酸盐的化合物、甜味剂、酸化剂、着色剂和/或调料。应当理解,所述饮料成分包括天然和人工成分。适合于根据本公开的至少特定制剂的示例性调料包括水果调料、可乐调料、柑橘调料、香辛料及其他。可加入二氧化碳形式的碳酸化剂用于泡腾作用。如果需要可以加入防腐剂,这取决于其他成分、生产技术、所需的保质期,等等。可选地,可加入咖啡因。本文公开的饮料的特定示例性实施方式为可乐风味的碳酸饮料,特征为含有碳酸水、甜味剂、可乐果提取物和/或其他调料、焦糖着色剂、磷酸,可选地包含其他成分。本领域技术人员根据本公开的益处会认识到其他备选的适合成分。
本文公开的饮料产品包括饮料,即,即饮液体制剂、饮料浓缩物等等。如本文所使用的,术语“即饮”指的是可以立即摄取的饮料。也就是,即饮饮料在消费者摄取前不需要稀释或添加。饮料产品包括例如运动饮料、碳酸化及非碳酸化软饮品、可乐机饮料、冷冻即饮饮料、咖啡饮料、茶饮料、奶饮料、粉末软饮品,以及液体浓缩物、风味水、增强水、果汁及果汁风味饮品,以及运动饮品。饮料成分的基本形式包括一种或多种水、一种或多种降低乳酸盐的化合物、可食用酸类、风味剂、盐类、甜味剂、着色剂、防腐剂及其任意混合物。在提供了包装即饮饮料的实施方式中,饮料组合物可与液体如水进行预混合。在特定实施方式中,即饮饮料包含大约饮料总重量的80-99重量百分比(wt%)的液体。除非另有说明,所有重量百分比都是基于即饮饮料的总重量。在进一步的实施方式中,可将饮料组合物包装为可食的组合物或浓缩物,如干粉混合物(例如粉末)或液体浓缩物,用于后期用一种或多种液体再配制形成饮料。浓缩的组合物可结合有制备饮料组合物的说明书。在另一个实施方式中,可将饮料浓缩物包装成胶、胶囊或小片,其与液体一同食用。在以这些形式提供时,饮料组合物可包含说明书,以与等于大约所制备饮料组合物的大约80-99wt%的量的液体混合或一同消费。
术语“饮料浓缩物”、“抛式饮料糖浆(throw beverage syrup)”和“糖浆”在整个公开中交换使用。如本文使用的,“增甜糖浆”定义为具有甜味并包含至少一种或更多甜味剂的糖浆。预期中饮料浓缩物的至少特定示例性实施方式是以向初始体积的水加入另外的成分而制备的。可通过向浓缩物中加入更多体积的水将其稀释至一倍浓度由饮料浓缩物或糖浆形成一倍浓度饮料组合物(即具有即饮浓度的饮料组合物)。通常,例如通过将大约1份浓缩物与大约3-大约7份水组合而由浓缩物形成一倍浓度饮料。在特定示例性实施方式中,通过组合1份的浓缩物与5份的水而制备一倍浓度饮料。在特定示例性实施方式中,用于形成一倍浓度饮料的其他的水为碳酸水。在特定的其他实施方式中,直接制备一倍浓度饮料而无需形成浓缩物,也无需后续的稀释。
本文公开的饮料产品的天然实施方式在其不含有任何正常情况下不预期在食物中存在的人工或合成物质(包括任何着色添加剂,无论其来源)。因此,如本文所使用的,“天然的”饮料组合物根据下面准则来定义:存在于或源自自然的天然成分的原料。采用包括发酵和各种酶类的生物学合成,但不使用用到化学反应剂的合成。人工色素、防腐剂和风味剂不被认为是天然成分。成分通过特定的具体技术进行加工及纯化,至少包括:物理学加工、发酵和酶解。适当的加工和纯化技术至少包括:吸收、吸附、凝聚、离心、剁碎(chopping)、烹饪(烘焙、煎炸、煮沸、烘烤)、冷却、切割、层析、包被、结晶、消化、干燥(喷雾、冻干、真空)、蒸发、蒸馏、电泳、乳化、封装、提取、挤压、过滤、发酵、研磨、融合、浸渍、微生物方法(凝乳酶、各种酶类)、混合、削皮、渗滤、冷冻/冰冻、压榨、浸泡、洗涤、加热、混合、脱皮,浸透、冷藏/冷冻、压榨、浸泡、清洗、加热、混合、离子交换、冻干、渗透作用、沉淀、盐析、升华、超声处理、浓缩、絮凝、匀浆、重构、酶解(使用天然存在的酶)。加工助剂(目前定义为用作制备助剂以加强食物组分的外观或效用的物质,包括澄清剂、催化剂、絮凝剂、过滤助剂和结晶抑制剂等,见21CFR§170.3(o)(24))被认为是附带的添加物,如果适当地移除则可以使用。本文公开的饮料产品的基本上澄清的实施方式是基本澄清的,因为其基本上无混浊且基本上无色。
水是本文公开的饮料中的基本成分,通常是媒介物或主要的液体部分,其中提供了降低乳酸盐的化合物并溶解、乳化、悬浮或分散其余的成分。纯化的水可用在制备本文公开的饮料的特定实施方式中,并且可以使用标准饮料质量的水以不有害地影响饮料味道、气味或表观。在生产饮料时,水通常是澄清、无色、无有害矿物、无味、无臭、无有机物、低碱度,并且具有基于饮料生产时适用的工业和政府标准可接受的微生物质量。在特定的典型实施方式中,水以饮料重量的大约80%-大约99.9%的水平存在。在至少特定的实施方式中,在本文公开的饮料和浓缩物中使用的水是“处理的水”,其是指在任选地补充(例如钙)之前已经处理而减少水中的总溶解固体的水,如在美国专利号7,052,725中公开的。生产处理的水的方法是本领域技术人员已知的,并且包括去离子、蒸馏、过滤和反向渗透(“r-o”)等。术语“处理的水”、“纯化的水”、“去矿化的水”、“蒸馏的水”和“r-o水”在本文的讨论中通常是同义的,是指从其中基本上去除了所有矿物内容物的水,通常含有不高于大约500ppm的总溶解固体,例如250ppm的总溶解固体。
在一个实施方式中,所述饮料组合物包括电解质来源,以提供钠(Na)。钠可由钠化合物提供,如氯化钠、柠檬酸钠、碳酸钠、碳酸氢钠、乳酸钠、柠檬酸三钠、葡萄糖酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠、酸式焦磷酸四钠、酸式硫酸钠或其组合。在一个实施方式中,钠是由乳酸钠提供的,其占钠重的大约20.5%。在另一个实施方式中,钠是由氯化钠提供的,其占钠重的大约39.4%。在一个进一步的实施方式中,钠是由酸式硫酸钠提供的,其占钠重的大约19.2%。在另一个实施方式中,钠是由葡萄糖酸钠提供的,其占钠重的大约10.5%。
在选择的饮料实施方式中,钠的量为最终产品或其组合的重量的大约0.03%-大约0.06%。在选择的饮料实施方式中,钠的量为饮料的重量的大约0.03%-大约0.06%。其他的量也可使用,取决于应用情况及其他因素。在一个实施方式中,钠是由氯化钠和柠檬酸钠提供的。
饮料组合物含有或不含钠(Na)时都可包括其他类型的提供例如钾(K)、镁(Mg)、钙(Ca)和氯(Cl)离子的电解质来源。不同类型的电解质可由其化合物或其化合物的组合提供。
例如,用于提供钙的电解质来源包括醋酸钾、碳酸氢钾、溴化钾、氯化钾、柠檬酸钾、葡萄糖酸钾、磷酸钾如磷酸氢钾和磷酸氢二钾、磷酸钾、焦磷酸四钾、硫酸钾、醋酸钾、碳酸氢钾、溴化钾、柠檬酸三钾、醋酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙、果糖酸钙、磷酸氢钙、氯化镁、碳酸镁、硫酸镁或其组合。
在特定实施方式中,电解质混合物包括提供氯(Cl)的电解质来源。氯可由氯的化合物提供,如六水合氯化镁、氯化钾、氯化钠、无水氯化钙或其组合。在一个实施方式中,氯是由氯化钾提供的,其氯重占大约47.5%。在另一个实施方式中,氯是由氯化钠提供的,其氯重占大约60.6%。在一个进一步地实施方式中,氯是由氯化钙(无水)提供的,其氯重占大约63.9%。在选择的饮料实施方式中,氯的量为最终产品重量的大约0.03%-大约0.06%。
在特定实施方式中,电解质混合物包括提供钙(Ca)的电解质来源。钙可由钙化合物提供,如无水氯化钙、醋酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙、果糖酸钙、磷酸氢钙。在一个实施方式中,钙是由无水氯化钙提供的,其占钙重的大约36.1%。在选择的饮料实施方式中,钙的量为最终产品重量的大约0.01%-大约0.03%。
在含有或不含钠(Na)时,电解质混合物中还可包括提供例如镁(Mg)离子的其他类型的电解质来源。不同类型的电解质可由其化合物或其化合物的组合提供。例如,镁化合物可包括氯化镁、碳酸镁及硫酸镁,或其组合。
在运动饮料的一个实施方式中,钾离子是由磷酸二氢钾提供的。在这样的一个实施方式中,磷酸二氢钾包含饮料组合物重量的大约0.0435%。在另一个实施方式中,饮料含有的钾占重量的大约0.01%-大约0.04%、镁占重量的大约0.01%-大约0.02%、钙占重量的大约0.001%-大约0.003%、氯占重量的大约0.02%-大约0.03%。其他的量或组合也可使用。
在一个实施方式中,钾离子是由磷酸二氢钾或磷酸氢二钾提供的。在这样的一个实施方式中,磷酸二氢钾包含饮料组合物重量的大约0.0439%。在另一个实施方式中,饮料含有的钾占重量的大约0.01%-大约0.04%、镁占重量的大约0.01%-大约0.02%、钙占重量的大约0.001%-大约0.003%、氯占重量的大约0.02%-大约0.03%。其他的量或组合也可使用。要理解的是上文所列的电解质的任何组合以及本领域技术人员已知的电解质都在本发明的预期之内。
本文公开的饮料产品中使用的可食用酸可起数种功能中的一种或多种,包括例如为饮料的味道提供酸感、增强适口性、增加生津止渴的效应、修饰甜味并起温和防腐剂的作用。根据本公开的益处,合适的酸对本领域技术人员是已知且清楚的。适合用于本文公开的饮料产品的一些或全部实施方式中的示例性酸包括磷酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸、抗坏血酸、乳酸、甲酸、延胡索酸、葡萄糖酸、琥珀酸、马来酸、酸式硫酸钠、己二酸、肉桂酸、戊二酸,及其任意混合物。通常,所述酸为磷酸、柠檬酸、苹果酸或其组合如磷酸和柠檬酸。
酸可以例如溶液形式使用,使用量应足以提供饮料所需的pH。所选择的具体酸或多种酸和使用量部分地取决于饮料产品其他成分、所需保质期以及对饮料pH、可滴定酸度和味道的效应。通常,例如,酸化剂的一种或多种酸使用量总的说来是饮料重量的大约0.01%到大约1.0%,例如重量的大约0.01%-大约0.5%、重量的大约0.05%-大约0.5%、重量的大约0.05%-大约0.25%、重量的大约0.1%-大约0.25%,这取决于所使用的酸化剂、所需pH、使用的其他成分等等。本文公开的饮料的至少特定示例性实施方式的pH可为大约2.0-5.0、大约2.5-4.0、大约2.8-3.3或大约3.0-3.2范围内的值,如,为3.1。特定示例性实施方式中的酸增强了饮料的风味。太多酸会破坏饮料的风味并导致酸涩或其他后味,而太少的酸使饮料味道平淡。
根据本公开的益处,本领域技术人员会认识到当制备含有甜味剂如肽基人工甜味剂如阿司帕坦(Aspartame)的饮料产品时,所得的饮料组合物最好在低于特定pH值下维持以保留人工甜味剂的增甜效应。在补充钙的饮料的形成中,钙盐的存在增加了pH,这需要附加的酸既能帮助盐的溶剂又能维持人工甜味剂保持稳定所需的pH。饮料组合物中附加酸的存在增加了组合物的可滴定酸度,导致所产生的饮料有更酸或酸涩的味道。根据本发明的益处,本领域技术人员能够选择合适的酸或酸组合以及这些酸的量用于本文公开的饮料产品的任何具体实施方式的酸化剂组分。
甜味剂可用于本文公开的饮料产品中。适合用于饮料产品的多种示例性实施方式中的所述甜味剂包括天然和人工或合成甜味剂。合适的甜味剂及甜味剂组合根据所需的营养特性、饮料风味特征、口感和其他感官因素来选择。如在本文中使用的,“味道”是指甜味感受、甜味感受到时间效果(即开始和持续时间)、后味(例如苦味和金属味)、残留感受(余味)和触觉感受(例如质地和厚度)的组合。如在本文中使用的,“富含卡路里”的饮料剂型是被营养甜味剂完全增甜的。术语“营养甜味剂”通常是指在典型的使用量中提供显著的卡路里含量的甜味剂,例如大于大约5卡路里每份8盎司饮料。如在本文中使用的,“有效甜味剂”是指甜度是糖的至少2倍的甜味剂,即是说根据重量,甜味剂需要不大于糖的一半重量就能达到相等的甜度。例如,有效甜味剂需要少于糖的一半重量来达到使用糖增甜至10白利糖度的饮料中的相等甜度。有效甜味剂包括营养的(例如罗汉果果汁浓缩物)和非营养的甜味剂(例如通常的罗汉果粉末)。另外,有效甜味剂包括天然有效甜味剂和人工有效甜味剂。然而,对于本文公开的天然饮料产品只使用了天然有效甜味剂。
适合于至少特定示例性实施方式的甜味剂包括例如糖醇如山梨醇、甘露醇、木糖醇、乳糖醇、异麦芽糖醇和麦芽糖醇。其他甜味剂包括塔格糖,如D-塔格糖,以及塔格糖与糖醇赤藓糖醇的组合。
适合于本文公开的饮料的一些或全部实施方式的示例性天然营养甜味剂包括来自天然来源如苹果、菊苣、蜂蜜等的晶体或液体蔗糖、果糖、葡萄糖、右旋糖、麦芽糖、海藻糖、低聚果糖、果葡糖浆如高果玉米糖浆、转化糖等,及其任意混合物;适合于本文公开的饮料的一些或全部实施方式的示例性人工甜味剂包括糖精、甜蜜素、阿司帕坦、其他的二肽、乙酰舒泛钾,以及其他这类有效甜味剂,及其任意混合物。并且,在本文公开的饮料的至少特定示例性实施方式中,使用了一种或多种天然营养甜味剂、一种或多种人工甜味剂和/或一种或多种天然非营养有效甜味剂的组合以提供甜味以及所需的味道特性和营养特征的其他方面。还应当认识到,例如在本文公开的饮料的多种实施方式中,特定的这些甜味剂无论是附加的或相反,作为增味剂、掩蔽剂或诸如此类,在所讨论饮料中使用量低于它(或它们)的感受阈值。
用于本发明的饮料中的高效甜味剂包括一种或多种天然高效甜味剂如甜菊糖苷,如莱鲍迪苷如莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷B、莱鲍迪苷C、莱鲍迪苷D、莱鲍迪苷E、莱鲍迪苷F、杜克苷A、杜克苷B、甜茶苷、甜菊糖、甜菊苷、罗汉果皂苷IV、罗汉果皂苷V、罗汉果甜味剂、翅子罗汉果、莫纳汀(monatin)及其盐(莫纳汀SS、RR、RS、SR)、仙茅素、甘草酸及其盐类、索马甜(thaumatin)、莫内林(monellin)、马槟榔、甜味蛋白(brazzein)、hernandulcin、叶甘素、根皮酚苷、根皮苷、三叶苷、白云参苷、欧亚水龙骨甜素、多足蕨苷A、pterocaryoside A、pterocaryoside B、无患子倍半萜苷、糙苏苷I、periandrin I、相思子三萜苷A、青钱柳苷I及其组合。
适合用于本文公开的饮料的多种实施方式的甜味剂包括营养和非营养的、天然和人工的,或合成的甜味剂。适合用于至少特定的示例性实施方式的非营养人工甜味剂包括例如肽基甜味剂例如阿司帕坦、纽甜和阿力甜,以及非肽基甜味剂例如糖精钠、糖精钙、乙酰舒泛(包括但不限于乙酰舒泛钾)、甜蜜素(包括但不限于甜蜜素钠和/或甜蜜素钙)、新橙皮苷二氢查耳酮和三氯蔗糖。阿力甜对含焦糖饮料可能不那么可取,已知其中其会形成沉淀。适合至少特定示例性实施方式的其他非营养甜味剂包括例如甘草甜素、新橙皮苷二氢查耳酮、麦芽糖、乳糖、低聚果糖、罗汉果粉、甜菊糖苷,例如,莱鲍迪甙如莱鲍迪甙A、甜菊苷等、木糖、***糖、异麦芽糖、海藻糖和核糖,以及蛋白质甜味剂,例如莫纳汀、索马甜、莫内林、甜味蛋白、L-丙氨酸和甘氨酸相关化合物及其任意的混合物。根据本公开的益处,本领域技术人员能够选择合适的甜味剂或甜味剂组合用于本文公开的饮料组合物的具体实施方式。
所述甜味剂可包括单糖或二糖。金属阳离子污染形成的特定纯度是预期中的。具有甜味的肽也是许可的。最常采用的糖包括蔗糖、果糖、右旋糖、麦芽糖和乳糖以及转化糖。可以使用这些糖的混合物。如果需要更少或更多的甜味,可使用其他天然碳水化合物。还可使用其他类型的由碳、氢、氧构成的天然甜味剂如莱鲍迪甙A、甜菊苷、罗汉果、罗汉果苷V、莫纳汀。
营养甜味剂的非限制性实例包括来自天然来源如苹果、菊苣、龙舌兰、蜂蜜等的蔗糖、液体蔗糖、果糖、液体果糖、葡萄糖、液体葡萄糖、果葡糖浆如高果玉米糖浆、菊苣糖浆、龙舌兰糖浆、转化糖、中度转化糖、枫糖浆、蜂蜜、红糖蜜如蔗糖蜜、甜菜糖蜜、高粱糖浆及其任意混合物。
甜味剂在至少特定示例性实施方式中的存在量为饮料重量的大约0.1%-大约20%,如重量的大约6%-大约16%,这取决于饮料所需的甜味水平。为达到所需的饮料均匀度、质地和味道,在本文公开的天然饮料产品的特定示例性实施方式中可使用饮料工业中常用的标准液体糖。通常这些标准化甜味剂不含任何微量的非糖固体,后者可对饮料的风味、颜色或一致性有不利影响。
本文公开的饮料产品的特定示例性实施方式还可含有少量的碱性试剂以调整pH。这些试剂包括例如柠檬酸钾和柠檬酸钠。例如,可以(饮料重量)大约0.005wt.%-大约0.02wt.%的量使用碱性试剂氢氧化钾,对特定饮料通常为大约0.01%的量。所用的量自然会取决于碱性试剂的类型以及pH要调整的程度。
本文公开的饮料产品可选地含有风味剂组合物,例如天然、非天然及合成的果实风味剂、植物风味剂、其他风味剂及其混合物。如本文所使用的,术语“果实风味剂”通常指代来源于种子植物可食用生殖部分的风味剂。包括其中甜果肉与种子相关的植物,例如,香蕉、番茄、蔓越莓(cranberry)等,及有着小的肉质浆果的植物两种。本文还用到浆果这一术语,包括聚合果,即,非“真实的”浆果,而是一般被认为是这样的果实。术语“果实风味剂”中还包括人工制备的风味剂,刺激来自天然来源的果实风味剂。合适果实或浆果来源的实例包括全浆果或其部分、浆果果汁、浆果果汁浓缩物、浆果泥和其混合物、干浆果粉、干浆果果汁粉等等。
示例性果实风味剂包括柑桔风味剂,例如桔子、柠檬、橙子、柑子(tangerine)、柳丁(mandarin orange)、橘柑果(tangelo)、柚子和葡萄柚,及如苹果、葡萄、樱桃和菠萝风味剂等的风味剂,及其混合物。在特定的示例性实施方式中,饮料浓缩物和饮料包含果实风味剂组分,例如,果汁浓缩物或果汁。如本文所用的,术语“植物风味剂”指来自除了果实外的植物部分的风味剂。像这样,植物风味剂包括来自精油和坚果、树皮、树根和叶子提取物的风味剂。术语“植物风味剂”中还包括人工制备的风味剂,刺激来自天然来源的植物风味剂。这些风味剂的实例包括可乐风味剂、茶风味剂、咖啡风味剂等,及其混合物。风味剂组分进一步包括多种以上提到的风味剂的混合物。在饮料浓缩物和饮料的特定的示例性实施方式中,使用可乐风味剂组分或茶风味剂组分。用于赋予本发明的饮料以风味特性的风味剂组分具体的量取决于所选择的(多种)风味剂、所需香味印象及风味剂组分的形式。根据本公开的益处,本领域技术人员能够容易地确定任何(多种)具体风味剂组分的量以达到所需的香味印象。
适合用于本文公开的饮料产品的至少特定示例性实施方式的果汁包括例如,果实、蔬菜和浆果的果汁。果汁在本发明中可以为浓缩物、果泥、一倍浓度果汁(single-strength juice)的形式或其他合适形式。如本文所使用的,术语“果汁”包括一倍浓度果汁、浆果或蔬菜果汁,及其浓缩物、果泥、果乳及其他形式。可组合多种不同的水果、蔬菜和/或浆果果汁,可选地还加有其他风味剂,以生成具有所需风味的饮料。合适的果汁来源的实例包括梅、李、枣、醋栗、无花果、葡萄、葡萄干、蔓越莓、菠萝、桃、香蕉、苹果、梨、番石榴、杏、萨斯卡顿莓(saskatoon berry),蓝莓、plains berry,prairie berry,桑葚、接骨木果、巴巴多斯樱桃(阿西罗拉樱桃),野樱桃、枣、椰子、橄榄、覆盆子、草莓、越橘、罗干莓、醋栗、露莓、博伊森莓(boysenberry)、奇异果、樱桃、黑莓、榅桲、鼠李、西番莲果、黑刺李、欧洲山梨、鹅莓、石榴、柿子、芒果、大黄、木瓜、荔枝、柠檬、桔子、橙子、柑子、柳丁、橘柑果、柚子及葡萄柚等等。根据此公开的益处,用于至少特定的示例性实施方式的大量其他的及备选的果汁对于本领域技术人员是清楚的。在使用果汁的本发明的饮料中,果汁使用水平在例如至少饮料重量的大约0.2%。在特定的示例性实施方式中,果汁使用水平为饮料重量的大约0.2%到大约40%。通常,如果使用果汁,其用量是重量的大约1%到大约20%(如果以全部计算)。
这些特定果汁颜色较浅,可以包含在特定的示例性实施方式的剂型中以调整风味和/或增加饮料的果汁含量,而不加深饮料颜色。这些果汁的实例包括苹果、梨、菠萝、桃、柠檬、橙子、桔子、杏、葡萄果、柑子、大黄、黑醋栗、榅桲、西番莲果、木瓜、芒果、番石榴、荔枝、奇异果、柳丁、椰子和香蕉。如果需要可采用去味和脱色的果汁。
适合用于本文公开的饮料产品至少特定示例性实施方式的其他调料包括例如,香辛料,如番泻、丁香、肉桂、胡椒、姜、香草香辛料、小豆蔻、胡荽、根汁汽水(root beer)、黄樟、人参及其他。根据本公开的益处,大量用于至少特定示例性实施方式的另外的和备选的调料对本领域技术人员是清楚的。调料可以为提取物、油性脂、果汁浓缩物、装瓶基础粉(bottler's base)或其他本领域已知形式。在至少特定示例性实施方式中,这些调料或其他风味剂补充于果汁或果汁组合的风味。
所述一种或多种调料可以乳剂的形式使用。可通过将所述调料中的一些或全部,可选地再加上饮料的其他成分,以及乳化试剂混合在一起而制备调料乳剂。乳化试剂可在调料混合在一起时加入或随后加入。在特定示例性实施方式中,乳化试剂是水溶性的。示例性的合适的乳化试剂包括***树胶、改性淀粉、羧甲基纤维素、黄芪胶、盖提胶和其他合适的树胶。根据本公开的益处,其他的合适的乳化试剂对本领域技术人员是明显的。示例性实施方式中的乳化剂包含超过大约3%的调料和乳化剂的混合物。在特定示例性实施方式中,乳化剂为混合物的大约5%-大约30%。
在本文公开的饮料的特定示例性实施方式中可使用二氧化碳以提供泡腾作用。本领域已知的用于饮料碳酸化的任何技术和碳酸化设备都可采用。二氧化碳可增强饮料的味道和外观,并可通过抑制和破坏有害细菌而有助于保证饮料纯度。例如在特定实施方式中,饮料具有的CO2水平多至大约4.0体积的二氧化碳。典型的实施方式可具有例如大约0.5-5.0体积的二氧化碳。如本文及独立的权利要求所使用的,1体积二氧化碳被定义为由任何给定量的液体(如水)在60°F(16°C)及一个大气压下吸收的二氧化碳的量。气体体积占据的空间与溶解其的液体相同。二氧化碳含量可由本领域技术人员基于所需的泡腾水平及二氧化碳对饮料的味道或口感的影响而选择。碳酸化试剂可以为天然或合成的。
本文公开的饮料浓缩物和饮料可含有附加成分,通常包括饮料制剂中通常可见的成分。这些附加成分通常可加入例如稳定的饮料浓缩物。这些附加成分的实例包括但不限于焦糖和其他着色试剂或染料、消泡试剂、树胶、乳化剂、茶叶硬粒、絮状组分及矿物和非矿物的营养补充物。
本领域一般技术人员已知非矿物营养补充物成分的实例,其中包括,例如,维生素,包括维生素A、D、E(生育酚)、C(抗坏血酸)、B(硫胺)、B2(核黄素)、B6、B12和K、烟酸、叶酸、生物素及其组合。通常,可选的非矿物营养补充物通常以在制造实践中一般被接受的量存在。示例性的量在1%到大约100%RDV之间,其中建立了这种RDV。在特定的示例性实施方式中,(多种)非矿物营养补充成分以大约5%到大约20%RDV的量存在,其中建立了RDV。
防腐剂可用于本文公开的饮料的至少特定实施方式中,也就是,至少特定示例性实施方式含有可选的溶解防腐剂***。具有低于4的pH的溶液,尤其是低于3的溶液通常是“微生物稳定的(microstable)”,即,其耐受微生物的生长,因此适合在食用前进行较长期的储存而不需添加其他防腐剂。然而,如果需要,可使用附加的防腐剂***。如果使用了防腐剂***,可在生产中任何时间将其加入饮料产品,如,在一些情况下是在加入甜味剂之前。如本文所使用的,术语“防腐***”或“防腐剂”包括许可用于食品和饮料组合物的所有合适的防腐剂,包括但不限于已知化学防腐剂如苯甲酸盐如苯甲酸钠、钙、钾,山梨酸盐如山梨酸钠、钙和钾,柠檬酸盐如柠檬酸钠和柠檬酸钾,多磷酸盐如六偏磷酸钠(SHMP)及其混合物,以及抗氧化剂如抗坏血酸、EDTA、BHA、BHT、TBHQ、脱氢乙酸,二碳酸二甲酯、乙氧喹、对羟基苯甲酸庚酯,及其组合。防腐剂可以以不超过适用法律和法规下强制的最高水平的量使用。防腐剂的使用水平通常是根据计划的最终产品pH以及对具体饮料制剂中微生物腐败可能性的评估而调整的。所采用的最高水平一般为占饮料重量的大约0.05%。根据本公开的益处,本领域技术人员能够选择合适的防腐剂或防腐剂组合用于根据本公开的饮料。
根据本发明的方法,在减少收缩肌细胞中乳酸和/或减少锻炼个体中血液乳酸盐浓度的方法中递送本发明的化合物或多种化合物,如槲皮素至个体。当如本文公开的方法施用时,这些化合物可用于如下方法中,所述方法通过减少肌细胞收缩过程产生的血液乳酸盐浓度而延迟肌疲劳的发生,并由此提高运动表现。
本发明的实施方式还针对一种肌细胞培养测定法,其可用于鉴定减少锻炼中由骨骼肌细胞收缩产生的血液乳酸盐浓度的化合物,也可用于将本文描述的方法中要使用的化合物相对槲皮素的能力进行分类。根据本发明的这个方面,在静息状态下确定用于培养成熟肌小管(本文称为肌细胞)的基质中的乳酸盐浓度。对成熟肌小管进行电脉冲刺激(EPS)并使之立即重复性收缩。刺激肌细胞使之重复收缩一段时间,如90分钟。然后分析肌细胞的培养基质以确定乳酸盐浓度。根据另一方面,以合适浓度的化合物对肌小管进行一段合适时间的预处理,随后进行电脉冲刺激并接着对其分析以确定细胞培养基质中的乳酸盐浓度。将来自以所述化合物处理的肌细胞的乳酸盐浓度与来自未处理肌细胞的基质中的乳酸盐浓度进行比较。合适的时间段包括大约30分钟-120分钟、大约60分钟-100分钟之间,以及大约90分钟。合适的脉冲频率包括能重现锻炼中肌细胞的收缩情况的频率,以及适合在肌细胞中生成乳酸的其他脉冲频率。可使用的脉冲频率包括大约0.5Hz-大约4Hz、大约1Hz-大约3Hz之间的频率,以及这之间的任何范围或值,可以重合或不重合。可用的脉冲时长包括大约2ms-大约24ms、大约5ms-大约20ms、大约10ms-大约15ms之间的时长,以及这之间的任何范围或值,可以重合或不重合。合适的候选化合物的浓度范围为大约0.001mM-大约50mM、大约0.01mM-大约25mM、大约0.1mM-大约10mM、大约0.5mM-大约5mM、大约1mM,以及这之间的任何范围或值,可以重合或不重合。将减少肌细胞培养基质中乳酸盐浓度的化合物鉴定为适合减少锻炼中血液乳酸盐并进一步减少肌疲劳并提高运动表现的化合物。根据特定实施方式,槲皮素为示例性的化合物,其减少收缩肌细胞中乳酸浓度及/或减少锻炼中的乳酸盐浓度。根据特定实施方式,可用的化合物对给定的输出功或锻炼计划中血液乳酸盐浓度的减少为大约1%-大约30%、大约5%-大约25%、大约10%-大约20%,以及这之间的任何范围或值,可以重合或不重合。
提出以下实施例以代表本发明。不认为这些实施例会限制本发明的范围,而根据本公开、附图及附随的权利要求,其他等价的实施方式会更清楚。
实施例1
用于鉴定减少乳酸浓度的化合物的肌细胞测定法
小鼠C2C12成肌细胞购自美国典型培养物保藏中心(ATCC;Manassas,VA),并在含有10%胎牛血清(FBS)的高葡萄糖Dubecco'sModified Eagle培养基(DMEM)中生长至90%的融合度。来自所购批号的成肌细胞在T75培养瓶中生长并进行>5次的继代培养,随后铺板于包被胶原的六孔板进行实验。为诱导肌小管分化,将含FBS的基质替换为含有2%的马血清的基质或无血清基质,培养5-7天。培养肌细胞并在加有或不加抗生素的情况下于37°C、5%CO2的培养箱中维持肌小管。
使用C-Pace EP Cell Culture Stimulator(IonOptix;Milton,MA)对肌小管施加电脉冲。在0.5Hz的脉冲频率和24ms的脉冲时长下刺激细胞使之产生可见并重复的收缩,持续90分钟。在紧接着刺激前,移除日旧基质并替换为5ml新鲜的分化基质。
实施例2
用槲皮素进行肌细胞测定
对于孵育实验,用槲皮素和/或其他化合物对分化的肌小管进行预处理。在电脉冲刺激前大约18小时并在紧接着电脉冲刺激前,将含有2%马血清的DMEM或无血清基质替换为含有多种浓度的槲皮素或其他测试化合物的相同基质。用Lowry和Passonneau(A FlexibleSystem of Enzymatic Analysis,pages194-199,Academic Press,INC.1972,其全文通过引用并入本文)的改良方法对来自(加有及不加化合物孵育)静息和收缩的细胞的基质样品进行酶分析测试乳酸盐的情况。
实施例3
筛选减少乳酸浓度的候选化合物
对候选化合物就相对于加有槲皮素的细胞和/或相对于接触了一种或多种其他候选化合物的细胞,减少来自收缩细胞的基质中乳酸盐浓度的能力进行筛选。用候选化合物(优选地以水溶形式)对分化的肌小管进行预处理。在电脉冲刺激前大约18小时并在紧接着电脉冲刺激前,将含有2%马血清的DMEM或无血清基质替换为含有浓度为大约0.001mM-大约10mM的候选化合物的相同基质。
对分化肌小管进行电脉冲刺激以使细胞产生可见的重复收缩。使用了0.5Hz的脉冲频率和24ms的时长,持续90分钟。确定细胞培养基质中的乳酸盐浓度并与不含候选化合物的对照实验或与其中细胞经过化合物如槲皮素的预处理的实验进行比较。如果接触了候选化合物的肌细胞的细胞培养基质中乳酸盐浓度比未加化合物孵育的收缩细胞减少,则将该候选化合物鉴定为能够通过减少收缩肌细胞中乳酸浓度和/或锻炼个体的血液乳酸盐浓度而减少肌疲劳或提高肌肉表现的化合物。而且,通过比较来自测定中受到刺激并与候选化合物接触的细胞的细胞培养基质中乳酸盐浓度相对测定中受到刺激并接触槲皮素的细胞的乳酸盐浓度而确定候选化合物相对于槲皮素孵育的减少乳酸或乳酸盐的能力。
实施例4
使用槲皮素通过减少血液乳酸盐浓度增强肌肉效能
进行了两项测试以确定槲皮素是否降低血液乳酸盐或提高最大乳酸盐稳定状态:VO2峰值测试以及血液乳酸盐积累发生[OBLA]测定。这些测试是在维持20-25°C和35-40%的相对湿度的实验室中进行的,参与者在Velotron自行车训练机(Velotron Pro,RacerMate Inc,Seattle,WA)上进行锻炼,设备根据制造商的推荐进行校准。使用增量多阶骑车流程测定VO2峰值:在100W下的10min的热身后,参与者在150W下骑五分钟,然后每三分钟增加50W的功率输出直至达到250W,之后每分钟增加25W的功率输出,直到意志耗竭。用计算机分析收集的呼出气体计算耗氧量(VO2)和二氧化碳产生量(VCO2),并以MOXUS代谢表(AEI Technologies,Pittsburgh,PA)进行分析。测量VO2峰值间隔至少七天后第二次确定OBLA。参与者在55、60、65、70、75、80、85和90%的VO2峰值下锻炼3.5分钟的时间,在每个阶段的最后30秒收集3-mL的血液样品用于测量血液乳酸盐浓度,使用曲线拟合技术确定OBLA,并以VO2峰值的百分比表示。在补充槲皮素(1000mg/d,其包含在加有电解质及维生素C和B3的2%碳水化合物饮料中)前,以及补充后28天确定OBLA。
图1为血液乳酸盐浓度对比%VO2峰值(耗氧量)的图,显示了4mmol/L下的血液乳酸盐积累的发生(OBLA)。这些数据表明,相对于不施用槲皮素,在施用槲皮素时需要较高的功率输出以达到4mmol的血液乳酸盐浓度,由此增加了最大乳酸盐稳定状态下的工作负荷。血液乳酸盐水平及增加的锻炼强度之间的关系也在图1中阐明。正常情况下,锻炼时在多达大约60%的最大努力下,血液乳酸盐水平维持在基线附近,此后有初始的升高,接着在接近最大强度时有指数升高。对大多数耐力运动员,产生4mmol血液乳酸盐浓度(称为血液乳酸盐积累发生或OBLA)的锻炼强度是进行长时(如1小时)体育运动的最高可持续锻炼强度。因此,引发4mmol血液乳酸盐的耐力运动类型中的功率输出或跑步速度是运动表现的有效预测值。例如,引发4mmol血液乳酸盐的功率输出或跑步速度越高,则运动员在给定的产生大约4mmol血液乳酸盐应答的步速下完成赛程越快。图1中阐述了在槲皮素施用(1000mg/d)前及28天后对耐力自行车手进行的乳酸盐阈值测试的结果,所述结果重点在于补充槲皮素后,要引发4mmol血液乳酸盐的转动功率输出增加了6瓦特(W),从244增至250W,这是一项有利的提高。例如,如果自行车手能够在20km计时赛的过程中维持平均6W的增加,该车手完成路程能快大约30秒。
此外,图1显示了槲皮素施用将自行车手达到4mmol的血液乳酸盐浓度的%VO2峰值提高了大约3%。例如,图1中可见,在槲皮素施用后达到4mmol的血液乳酸盐浓度的%VO2峰值从大约71%增加至大约73%。对应地,槲皮素施用导致对应未施用槲皮素时4mmol的血液乳酸盐浓度的%VO2峰值的血液乳酸盐浓度下降。
图2为对应多种锻炼强度(表示为%VO2峰值)的增量运动的血液乳酸盐应答的图。如图2中可见,对于给定的%VO2峰值的血液乳酸盐浓度从槲皮素施用前到槲皮素施用有所减少,减少开始于70%的VO2峰值。在大约10-大约17%的范围内槲皮素施用减少了血液乳酸盐浓度。根据本发明的方面,施用槲皮素以对于给定%VO2峰值减少个体的血液乳酸盐浓度,所述VO2峰值的百分比为大约0.01%-大约30%、大约0.1%-大约25%、大约0.5%-大约20%、大约0.75%-大约10%、大约0.75%-大约5%、大约1%-大约5%、大约1.5%-大约5%、大约2%-大约5%、大约2.5%-大约5%、大约2.5%-大约25%、大约5.0%-大约20%、大约7.5%-大约20%、大约8.0%-大约20%、大约9.0%-大约20%、大约10.0%-大约20.0%、大约10.0%-大约19.0%、大约10.0%-大约18.0%、大约10.0%-大约17.0%,以及之间的任何值或范围,可以重合或不重合。
实施例5
基于细胞的测定研究
如实施例1和实施例2中的一般描述,研究了槲皮素对受到电脉冲刺激的肌细胞乳酸盐浓度的效应。根据该实施例,如图3中说明的,以40k的密度将C2C12细胞种植于六个6孔板中(A-F),在DMEM生长基质中培养48小时。每24小时更换基质。48小时后,生长基质替换为AIM5分化基质,也是每24小时更换。将槲皮素加入平板C和D,在分化的第3和第4天刺激前1小时更换基质。在分化的第3和第4天,用基质刺激(10V/2Hz/12ms)对平板A-D进行30分钟的刺激,以在运动赛事前刺激肌细胞的锻炼。在分化的第5天,更换基质并向平板C、D和E中加入槲皮素(5μl的33mM储备液加至3ml基质)。1-2小时后,从各个平板中收集1ml基质并储存于-80°C用于后期分析。在分化的第5天,用低强度刺激(10V/0.5hz/24ms)对平板A和C进行刺激。用低强度刺激(10V/4hz/2ms)对平板B、D、E和F进行刺激。从各个平板中收集1ml基质用于后期乳酸盐分析。对于平板E和F,在分化的第3和第4天未施用槲皮素,也未进行电脉冲刺激。在分化的第5天,用槲皮素处理平板E并使之经受电脉冲刺激,而平板F进行了电脉冲刺激但未施用槲皮素。
按如下方法使用Enzychrom L-乳酸盐试剂盒测量乳酸盐浓度。通过混合200μl的2.0mM标准品及800μl的Aim5Media产生1000μl的4.0mM L-乳酸盐预混物。按如下方法稀释标准品。将每种标准品取20μl转移至干净的96-孔板的孔中。
对每个反应孔,通过混合60μl Assay Buffer、1μl Enzyme A、1μl Enzyme B、10μl NAD和14μl MTT制备工作反应剂。对于无EnzymeA的样品对照,工作反应剂包括60μl Assay Buffer、1μl Enzyme B、10μl NAD和14μl MTT。将80μl的工作反应剂迅速加入每个孔。轻弹平板,进行简短并完全的混合。在时间为“0”时读出565nm处的光学密度(OD0),并在室温下孵育30分钟后读出OD20
图4为未施用槲皮素时在锻炼强度刺激(经过电刺激训练及不经电刺激训练)前后,C2C12细胞中乳酸盐浓度的图。如图4显示的,经过训练的细胞相比于未经训练的细胞在刺激前后具有较低的乳酸盐浓度。
图5为平板A(引发第5天,低刺激)和平板C(引发第5天,低刺激w/Q)的乳酸盐浓度的图。在分化的第3天和第4天对平板A和平板C二者进行30分钟中强度电刺激进行训练。在分化第3天和第4天对平板C进行刺激前加入槲皮素。在分化第5天,将槲皮素加入平板C。在刺激前测量平板A和平板C的乳酸盐浓度。然后对细胞进行60分钟的低强度电刺激,测量平板A和平板C的乳酸盐浓度。图5的结果显示了平板C中细胞(在第3、4及5天对其施用槲皮素)在刺激后其第5天的乳酸盐浓度比平板A中细胞(未施用槲皮素)更低。
图6为平板B(引发第5天,高刺激)和平板D(引发第5天,高刺激w/Q)的乳酸盐浓度的图。在分化的第3天和第4天对平板B和平板D二者进行30分钟中强度电刺激进行训练。在分化第3天和第4天对平板D进行刺激前加入槲皮素。在分化第5天,将槲皮素加入平板D。在刺激前测量平板B和平板D的乳酸盐浓度。然后对细胞进行60分钟的高强度电刺激,测量平板B和平板D的乳酸盐浓度。图6的结果显示了平板D中细胞(在第3、4及5天对其施用槲皮素)在刺激后其第5天的乳酸盐浓度比平板B中细胞(未施用槲皮素)更低。
图7为平板E(未引发,第5天,高刺激w/Q)和平板F(未引发,第5天,高刺激)的乳酸盐浓度的图。在分化的第3天和第4天,未对平板B或平板D进行训练,也未对其施用槲皮素。在分化第5天,将槲皮素加入平板E。在刺激前测量平板E和平板F的乳酸盐浓度。然后对细胞进行60分钟的高强度电刺激,测量平板E和平板F的乳酸盐浓度。图7的结果显示了平板E中细胞(施用了槲皮素)在刺激后其第5天的乳酸盐浓度比平板F中细胞(未施用槲皮素)更低。
应当理解,本发明描述的实施方式仅仅是本发明原则的一些应用的说明。本领域技术人员基于本文提供的教导内容可作出大量改动而不偏离本发明的真正精神和范围。用于所有目的,本申请中引用的所有参考文献、专利和发表的专利申请的内容都以其全文并入本文作为参考。
根据上文公开的益处及示例性实施方式的描述,本领域技术人员会清除的是,大量备选及不同的实施方式可符合本文公开的发明的一般原则。本领域技术人员会认识到所有这些多样的变动及备选的实施方式都在本发明的真正范围和精神之内。虽然在附图及前文描述中已经详细说明并描述了本发明,然而这些说明和描述应被视为示例性的,不是限制性的,应当理解,只有优选的实施方式得到显示并描述,而在发明精神之内的所有变化和变动都需要受到保护。附随的权利要求意欲涵盖所有这些变动和备选实施方式。要理解的是,单数不定冠词或定冠词(例如,“一”、“一个”、“这个”等等)在本公开及以下权利要求中的用途遵循专利中的传统意义,除非在具体例子中由上下文清楚该术语意指具体的一个且仅指一个,其意为“至少一个”。同样地,术语“包含”是开放的,不排除附加的项目、特征、组分等等。除非另有指出,本文认同的参考文献都明确地以其全文并入本文作为参考。

Claims (14)

1.减少锻炼中个体的血液乳酸盐浓度的方法,其包括,在锻炼前向个体施用一段时间的一种或多种黄酮素化合物;参与锻炼;并达到更低的血液乳酸盐浓度。
2.权利要求1的方法,其中所述一种或多种黄酮素化合物为槲皮素、芸香苷、异槲皮素、异槲皮苷、山奈酚、杨梅酮或异鼠李素及其硫酸盐、葡萄糖苷酸或糖苷缀合形式。
3.减少锻炼中个体的肌疲劳的方法,其包括,在锻炼前向个体施用一段时间的一种或多种黄酮素化合物;参与锻炼;并达到较低的血液乳酸盐浓度。
4.权利要求3的方法,其中所述一种或多种黄酮素化合物为槲皮素、芸香苷、异槲皮素、异槲皮苷、山奈酚、杨梅酮或异鼠李素及其硫酸盐、葡萄糖苷酸或糖苷缀合形式。
5.增加锻炼中个体的肌肉表现的方法,其包括,在锻炼前向个体施用一段时间的一种或多种黄酮素化合物;参与锻炼;并达到较低的血液乳酸盐浓度。
6.权利要求5的方法,其中所述一种或多种黄酮素化合物为槲皮素、芸香苷、异槲皮素、异槲皮苷、山奈酚、杨梅酮或异鼠李素及其硫酸盐、葡萄糖苷酸或糖苷缀合形式。
7.鉴定有效降低细胞培养基质中乳酸盐浓度的化合物的方法,其包括
对第一组肌细胞进行电脉冲刺激,
测量来自第一组肌细胞的基质中的乳酸盐浓度,
将第二组肌细胞与化合物接触,
对第二组肌细胞进行电脉冲刺激,
测量来自第二组肌细胞的基质中的乳酸盐浓度,
比较第一组肌细胞与第二组肌细胞中的乳酸盐浓度,以及
当来自第二组肌细胞的基质中乳酸盐浓度低于来自第一组肌细胞的乳酸盐浓度时,将所述化合物鉴定为有效降低乳酸盐浓度。
8.饮料,其包含以当根据一定方案在个体参与锻炼前施用于个体时有效减少锻炼中的乳酸的量的槲皮素、芸香苷、异槲皮素、异槲皮苷、山奈酚、杨梅酮或异鼠李素及其硫酸盐、葡萄糖苷酸或糖苷缀合形式中的一种或多种。
9.用于分析产生于肌细胞收缩的乳酸产生情况的试剂盒,其包含分化的肌小管,槲皮素、芸香苷、异槲皮素、异槲皮苷、山奈酚、杨梅酮或异鼠李素及其硫酸盐、葡萄糖苷酸或糖苷缀合形式中的一种或多种,以及一种或多种测试化合物。
10.增加锻炼中个体的功率输出的方法,其包括,在锻炼前向个体施用一段时间的一种或多种黄酮素化合物;参与锻炼;并增加能量输出以获得4mmol的血液乳酸盐浓度。
11.权利要求10的方法,其中所述一种或多种黄酮素化合物为槲皮素、芸香苷、异槲皮素、异槲皮苷、山奈酚、杨梅酮或异鼠李素或其硫酸盐、葡萄糖苷酸或糖苷缀合形式。
12.权利要求11的方法,其中施用槲皮素以对大约0.01%-大约30%之间的给定%VO2峰值降低个体中的血液乳酸盐浓度。
13.增加锻炼中个体的%VO2峰值的方法,其包括,在锻炼前向个体施用一段时间的一种或多种黄酮素化合物;参与锻炼;并增加%VO2峰值以达到4mmol的血液乳酸盐浓度。
14.权利要求13的方法,其中所述一种或多种黄酮素化合物为槲皮素、芸香苷、异槲皮素、异槲皮苷、山奈酚、杨梅酮或异鼠李素或其硫酸盐、葡萄糖苷酸或糖苷缀合形式。
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