CN102994426B - 一株地衣芽孢杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一株地衣芽孢杆菌，为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis ）HB1，其保藏编号为CCTCC NO:M 2012480。本发明筛选的地衣芽孢杆菌用来制备菌粉；制备的菌粉作为饲料添加剂的，按质量百分比为0.01%~0.5%的比例添加至畜禽饲料中。本发明筛选的地衣芽孢杆菌的菌粉与饲料混合后饲喂养殖动物，有效改善了其日增重、料肉比、免疫方面等生产性能，因此，可将其作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中，利于增加经济效益，有着广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属微生物筛选应用技术领域，具体涉及一株地衣芽孢杆菌及其应用。
背景技术
在畜禽业上，抗生素除了被用来防止和治疗病菌感染，也长期被用于促进动物生长，从而提高畜禽产品产量。抗生素的使用带来了巨大的经济效益，但同时也出现了许多弊端；例如使耐药性病原菌增加，以及畜禽产品药残超标等问题。随着社会对食品安全的重视，人们对抗生素饲料添加剂带来的负面效应意识也在不断提高。为了应对这些问题，采用益生菌微生态制剂的生物促生长、调免疫措施成为当前畜禽养殖热点而受到重视。益生菌制剂可通过补充、调整或维持动物肠道内的微生态平衡，达到防治疾病、促进健康或提高生产性能的目的；而且益生菌制剂无毒副作用、无耐药性、无残留，因此，益生菌微生态制剂深获养殖业的青睐。这也使筛选出性能优良的新型益生菌成为研究热点。
发明内容
本发明的目的是提供一株地衣芽孢杆菌及其在畜禽养殖中的应用。所述的地衣芽孢杆菌分离自21日龄健康肉鸡的小肠中。将本发明的地衣芽孢杆菌发酵制备成菌粉，作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中，能显著提高养殖动物的生产性能。
本发明一方面提供了一株地衣芽孢杆菌，该菌株命名为地衣芽孢杆菌HB1（Bacillus licheniformis HB1），已于2012年11月26日保藏于“中国典型培养物保藏中心”，其保藏编号为CCTCC NO:M 2012480。
本发明筛选的地衣芽孢杆菌用来制备菌粉；制备过程为：将地衣芽孢杆菌HB1活化、扩大培养，经35~37℃液态发酵，5000~8000rpm离心收集菌泥，加入轻质碳酸钙载体，烘干制成菌量为200~1000亿/g的菌粉。
上述的菌粉作为饲料添加剂的应用，是按质量百分比为0.01%~0.5%的比例添加至畜禽饲料中。
本发明筛选的地衣芽孢杆菌的菌粉与饲料混合后饲喂养殖动物，有效改善了其日增重、料肉比、免疫方面等生产性能，因此，可将其作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中，利于增加经济效益，有着广阔的应用前景。
具体实施方式
实施例1 地衣芽孢杆菌HB1的分离、纯化
1、分离及纯化：
1）取21日龄的健康肉鸡，宰杀后，迅速取出小肠段，剪碎成1cm长的小段，置于加玻璃珠的无菌水中，震荡混匀15min，并用80℃水浴处理杀死非芽孢形态的菌体；
2）将处理液以10倍梯度稀释，取合适梯度的稀释液涂布于营养琼脂平板上，37℃过夜培养；
3）挑起菌落大、生长快的菌株，进一步划线纯化。
2、菌株的属种鉴定：
将分离到的1株芽孢杆菌，命名为HB1，进行生化鉴定。该菌株经革兰氏染色呈阳性，杆状，芽孢为椭圆状，位于中部或偏端；生理生化特征：V-P试验（+），淀粉水解（+），酪素水解（+），明胶水解（+），硝酸盐还原（+），吲哚试验（-），生长温度范围15~55℃，pH范围5~9，高于7%NaCl不生长。生化鉴定结果显示，该芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）；同时采用PCR扩增该菌16S rRNA序列，比对分析与NCBI数据库中地衣芽孢杆菌同源性达99%，将该菌HB1鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis），与生理生化结果一致。
将该地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）HB1于2012年11月26日送交“中国典型培养物保藏中心”保藏，保藏编号为：CCTCC NO:M 2012480。
实施例2 地衣芽孢杆菌HB1菌粉的制备
1、种子液制备：挑取地衣芽孢杆菌HB1单菌落，接种于50mL营养肉汤培养基中，pH为7.0±0.5，37℃，200rpm振荡培养24h，即为种子液；
2、发酵培养：以5%的接种量接种至新的营养肉汤中，37℃，200rpm振荡培养，芽孢形成达90%时，结束培养；
3、收集菌体：以5000rpm，10min条件，去除发酵上清液，收集菌泥备用；
4、烘干：将轻质碳酸钙与菌泥搅拌混匀，在干燥箱中50℃烘干，即得地衣芽孢杆菌HB1菌粉。
实施例3 地衣芽孢杆菌HB1对肉鸡生长性能影响
采购1日龄罗氏308白羽肉公鸡，分为对照组和实验组，每个处理组16个重复，每个重复8羽鸡，生产试验期为35天，其中对照组为饲喂普通商品日粮，实验组为饲喂添加0.01%地衣芽孢杆菌HB1菌粉的普通商品日粮，测量试验过程中日增重、日采食量、料肉比、成活率、育肥指数变化情况，实验结果如表1所示：
表1 地衣芽孢杆菌HB1对肉鸡生产性能的影响
由表1的肉鸡饲喂试验结果可知，全期来看，实验组肉鸡日增重比对照组提高了3.24%，料肉比在对照组基础上降低0.02，与对照差异显著（P＜0.05）。测试指标中，实验组日增重、日采食量、料肉比、成活率、育肥指数方面均优于对照组。
上述结果表明，饲料中添加本发明的地衣芽孢杆菌HB1，能显著改善肉鸡的生产性能，不仅降低了肉鸡的生产成本，还提高了肉鸡的生产效率，增加了饲养者的经济效益。
实施例4 地衣芽孢杆菌HB1对肉鸡免疫水平及其免疫器官的影响
将实施例3中的罗氏308白羽肉公鸡饲喂至35日龄时，进行以下操作：1）实验组和对照组分别随机取12只鸡采血，分离血清，检测血清球蛋白（IGg）含量及新城疫（ND）抗体水平；2）实验组和对照组分别随机取12只鸡宰杀，取完整的胸腺、法氏囊、脾脏，称重，计算免疫器官指数；然后取免疫器官病料，10%***固定，石蜡切片，HE染色，镜检观察各免疫器官的发育状况，实验结果如表2所示。
表2 地衣芽孢杆菌HB1对肉鸡免疫水平及其免疫器官的影响
由表2可以看出，实验组测得IGg含量是对照组的2.26倍，在提高血液中IGg含量方面明显高于对照组（P<0.01），具有显著性优势。
镜下观察免疫器官发育状况的结果显示，实验组明显优于对照组。其中实验组的胸腺镜下指数是对照组的1.62倍，法氏囊镜下指数是对照组的1.42倍。
上述结果表明，在饲料中添加本发明的地衣芽孢杆菌HB1，能显著促进肉鸡免疫器官组织结构的发育，提高肉鸡的免疫能力。
实施例5 地衣芽孢杆菌HB1对肉鸡肠道发育的影响
将实施例3的罗氏308白羽肉公鸡饲喂至35日龄时，实验组和对照组分别随机取5只鸡的十二指肠、空肠、回肠，10%***固定，石蜡切片，十二指肠、空肠、回肠取特定部位病料，每段肠分别取5个连续切片，HE染色，镜检观察各段肠管发育及健康状况，测量、记录每个切片上的所有绒毛和隐窝长度，实验结果如表3所示：
表3 肉鸡肠道发育情况统计结果
由表3实验结果可知，实验组的十二指肠绒毛长度明显高于对照组。实验组的各段肠管隐窝变短，上皮细胞成活率上升等方面具有明显的优势。
从绒毛长度与隐窝长度比值结果，可以看出，实验组十二指肠的绒毛长度与隐窝长度比值明显高于对照组，差异性显著（P<0.05）；空肠的绒毛长度与隐窝长度比值中，实验组高于对照组（P>0.05）；回肠的绒毛长度与隐窝长度比值中，实验组明显高于对照组，差异性显著（P<0.05）。
综合分析，实验组的绒毛长度与隐窝长度比值具有优势。而对照组的绒毛长度与隐窝长度比值很低。
上述结果表明，在饲料中添加本发明的地衣芽孢杆菌HB1，能显著促进肉鸡的肠道发育，与实施例3肉鸡生产性能指标相符。
Claims (6)
1.一株地衣芽孢杆菌，为地衣芽孢杆菌HB1（Bacillus licheniformis HB1），其保藏编号为CCTCC NO:M2012480。
2.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌在制备益生菌制剂中的应用。
3.一种菌粉，所述的菌粉是用权利要求1所述的地衣芽孢杆菌制备的。
4.权利要求3所述的菌粉的制备方法，其步骤如下：将权利要求1所述的地衣芽孢杆菌HB1菌株活化、扩大培养，经35～37℃液态发酵，5000～8000rpm离心收集菌泥，加入轻质碳酸钙载体，烘干制成菌量为200～1000亿/g的菌粉。
5.权利要求3所述的菌粉作为饲料添加剂的应用。
6.如权利要求5所述的应用，是将菌粉按质量百分比为0.01%～0.5%的比例添加至畜禽饲料中。
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