CN102920996A

CN102920996A - 受损伤口愈合的药物组合物

Info

Publication number: CN102920996A
Application number: CN2012104108213A
Authority: CN
Inventors: 布拉德福德·J·杜夫特
Original assignee: CoDa Therapeutics Inc
Current assignee: CoDa Therapeutics Inc
Priority date: 2007-12-11
Filing date: 2008-12-11
Publication date: 2013-02-13
Also published as: CN101970663A; AU2015200904A1; JP2014144976A; ZA201004998B; WO2009075882A9; CA2709153A1; US20100279921A1; AU2008335718A1; WO2009075882A3; EP2245158A2; WO2009075882A2; JP2016135799A; JP2011506447A

Abstract

本发明提供了受损伤口愈合的药物组合物。所述组合物包括联合和使用第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，其中所述治疗应用包括用于促进和/或改善伤口和伤口愈合和/或组织修复。

Description

受损伤口愈合的药物组合物

本申请是申请日为2008年12月11日，申请号为200880126536.0，发明名称为“受损伤口愈合的组合物和治疗”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及间隙连接并涉及伤口和伤口愈合，尤其是涉及急性创伤和并不以预期的速率愈合的伤口，如延迟愈合伤口、不完全愈合伤口、慢性伤口、以及裂开性伤口。

背景技术

以下包括可以有利于理解本发明的信息。这不是承认，这里提供的任何信息是现有技术，或与目前描述或要求保护的发明有关，或明确地或暗示性地提及的任何出版物或文件是现有技术。

在人类和其它哺乳动物中，伤口损伤会触发有机物（组织化）的复杂级联的细胞和生化事件，其在大多数情况下将导致愈合的伤口。理想愈合的伤口是这样的伤口，其在细胞、组织、器官和生物体水平上恢复正常解剖结构、功能、以及外观。伤口愈合，不管是通过创伤、微生物或异物所引发，经由包括多个重叠阶段的复杂过程进行，其包括发炎、上皮形成、血管生成以及基质沉积。通常，这些过程导致成熟伤口和一定程度的瘢痕形成。虽然发炎和修复通常沿规定的过程发生，但过程的敏感性取决于各种伤口愈合分子的平衡，包括例如，调节细胞因子和生长因子的网络。

间隙连接是细胞膜结构，该结构可以促进直接的细胞间通信。间隙连接通道由两个连接子(半通道)形成，每个连接子由六个连接蛋白亚单位构成。每个六聚连接子对接（停靠，dock）于在反相膜中的连接子以形成单间隙连接。间隙连接通道被报道存在于整个身体中。组织如角膜上皮，例如，具有六至八个细胞层，还使用基底层中的连接蛋白43和从基底至中翼细胞层的连接蛋白26在不同层中表达不同的间隙连接通道。通常，连接蛋白是一种蛋白质家族，通常按照它们的分子量加以命名或基于***发育分为α、β、以及γ亚类。已鉴定了至少20种人和19种鼠同种型。据报道，不同的组织和细胞类型具有连接蛋白表达的特征模式并且已表明在损伤或移植以后组织会改变连接蛋白表达模式(Qui,C.et al.,(2003)Current Biology,13:1967-1703;Brander et al.,(2004),J.InvestDermatol.122:1310-20)。

据报道，异常连接蛋白功能可能与某些疾病状态(例如，心脏病)有关(A.C.de Carvalho,et al.,J Cardiovasc Electrophysiol 1994,5686)。在某些连接蛋白中，通过添加外源性药剂可以诱导周转和运输性能的改变，其中外源性药剂可能影响间隙连接细胞间通讯的水平(Darrow,B.J.,et al.(1995).Circ Res 76:381;Lin R,et al.(2001)JCell Biol 154(4):815)。已提出反义技术用于调节与病毒、真菌以及代谢性疾病有关的基因的表达。参见，例如，美国专利第5,166,195号(HIV的寡核苷酸抑制剂（oligonucleotide inhibitors of HIV）)和美国专利第5,004,810号(寡聚体，用于杂交至单纯疱疹病毒Vmw65mRNA和抑制复制)。还参见授予Becker和Green的美国专利第7,098,190号(“Formulations comprising antisense nucleotides toconnexins”)。还已报道了间隙连接和半通道的肽抑制剂。参见例如Berthoud,V.M.et al.,Am J.Physiol.Lung Cell Mol.Physiol.279:L619-L622(2000);Evans,W.H.and Boitano,S.Biochem.Soc.Trans.29:606-612，以及De Vriese A.S.,et al.Kidney Int.61:177-185(2001)。还参见Becker和Green PCT/US06/04131(“Anti-connexincompounds and uses thereof”)。

尽管在理解成为伤口愈合过程基础的原理方面有进展，但是在用于伤口护理的合适的治疗选项方面仍然存在显著的未满足的需要，其中所述伤口护理包括并不以预期的速率愈合的伤口，如延迟愈合伤口、不完全愈合伤口、以及慢性伤口。本文描述并要求保护这样的治疗性组合物和治疗。

发明内容

本文描述和要求保护的发明具有许多特征和实施方式，其包括但不限于在本发明内容中陈述或描述或提及的那些特征和实施方式。它并不旨在包括一切并且本文描述和要求保护的发明并不限于或受限于在本发明内容中确定的特点或实施方式，其仅用于说明而不是限制的目的。

本发明通常涉及一种或多种抗连接蛋白多核苷酸(例如，连接蛋白抑制剂如α-l连接蛋白寡聚脱氧核苷酸)连同一种或多种抗连接蛋白肽、拟肽（肽模拟物，peptidomimetics）(例如，α-l抗连接蛋白肽或拟肽)间隙连接闭合化合物（封闭化合物，closing compounds）、半通道闭合化合物、以及连接蛋白羧基末端多肽在用于治疗伤口，包括急性、延迟愈合以及慢性伤口中的应用。

本文披露和要求保护的本发明的组合物和方法，该组合物和方法采用第一抗连接蛋白剂连同第二抗连接蛋白剂。第一抗连接蛋白剂可以选自由抗连接蛋白寡核苷酸、抗连接蛋白肽、抗连接蛋白拟肽、间隙连接闭合化合物、半通道闭合化合物、连接蛋白羧基末端多肽以及其它间隙连接调节剂（可用于伤口愈合）组成的组。第二抗连接蛋白剂选自经改变的上述组，其减去第一抗连接蛋白剂从其选择的抗连接蛋白剂的亚类。

本发明包括药物组合物，该组合物包括以有效的促进受治疗者体内愈合或组织修复的量的药用抗连接蛋白多核苷酸和药用抗连接蛋白肽或拟肽，用于伤口愈合。它还包括药物组合物，该组合物包括第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，其中第一抗连接蛋白剂选自由抗连接蛋白寡核苷酸、抗连接蛋白肽、抗连接蛋白拟肽、间隙连接闭合化合物、半通道闭合化合物、以及连接蛋白羧基末端多肽（可用于伤口愈合）组成的组，并且第二抗连接蛋白剂选自如改变的上述组，其减去第一抗连接蛋白剂从其选择的抗连接蛋白剂的亚类。这样的配方包括，例如，局部递送剂型和配方。这样的递送剂型和配方包括如本文披露的那些用于治疗受治疗者的递送剂型和配方。优选的抗连接蛋白多核苷酸是抗连接蛋白43寡核苷酸(ODN)。优选的肽或拟肽是抗连接蛋白43肽或拟肽，例如，抗连接蛋白43半通道封闭肽或抗连接蛋白43半通道封闭拟肽。优选的间隙连接闭合化合物和半通道闭合化合物是连接蛋白43间隙连接闭合化合物和连接蛋白43半通道闭合化合物。优选的连接蛋白羧基末端多肽是连接蛋白43羧基末端多肽。用本发明的一种或多种药物组合物，例如，抗连接蛋白ODN和连接蛋白半通道封闭剂，例如，肽或拟肽，或第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂来治疗受治疗者（例如伤口）可以包括它们的同时、分开、依次或持续给予。

本发明包括药物组合物，该组合物包括(a)抗连接蛋白肽或拟肽和(b)连接蛋白的mRNA的反义多核苷酸。最优选地，这种连接蛋白是连接蛋白43。本发明还包括药物组合物，该组合物包括(a)和/或(b)以及可用于伤口愈合的间隙连接闭合化合物、半通道闭合化合物、以及连接蛋白羧基末端多肽中的一种或多种。最优选地，在可用于伤口愈合的间隙连接闭合化合物和半通道闭合化合物的情况下，间隙连接或半通道是连接蛋白43间隙连接或连接蛋白43半通道。最优选地，在可用于伤口愈合的连接蛋白羧基末端多肽的情况下，连接蛋白是连接蛋白43。

还提供了联合制剂形式的药物组合物，例如，作为两种或更多种抗连接蛋白剂的混合物，例如一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。

术语“联合制剂（组合制剂）”包括在以下意义上的“试剂盒套件（试剂盒部分，试剂盒部件，成套试剂盒，多个部分的试剂盒，kitof parts）”：如上述所定义的联合伙伴可以单独给予剂量或通过使用具有不同量的联合伙伴(a)和(b)的不同固定组合来给予剂量，即同时、单独或顺序地，而不管是药剂剂型或敷料/基质形式或两者。于是可以，例如，同时或按时间先后顺序交错地给予试剂盒套件（试剂盒部分，parts of the kit），即对于试剂盒套件的任何部分是在不同时间点并具有相同或不同的时间间隔。

在一种实施方式中，给予联合制剂，其中将两种或更多种单独的组合物给予受治疗者，其中第一组合物包括治疗有效量的抗连接蛋白43多核苷酸，并且第二组合物包括治疗有效量的抗连接蛋白43肽或拟肽。在另一种实施方式中，给予第三组合物，该组合物包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸、肽、或拟肽。第三组合物还可以包括一种或多种可用于伤口愈合的间隙连接闭合化合物、半通道闭合化合物、或连接蛋白羧基末端多肽。

提供了药物组合物，用于联合、同时、分开、依次或持续给予。在一种实施方式中，在与一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的同时或约同时给予包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的组合物。在一种实施方式中，在一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的至少约三十分钟内给予包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的组合物。在一种实施方式中，在一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的至少约1小时内给予包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的组合物。在一种实施方式中，在一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的至少约12小时内给予包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的组合物。在一种实施方式中，在一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的至少约24小时内给予包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的组合物。在另一种实施方式中，在彼此约1小时内、在彼此约1天内、或在彼此约1周内，给予抗连接蛋白多核苷酸和抗连接蛋白肽或拟肽。其它实施方式包括给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽、以及可用于伤口愈合的一种或多种间隙连接闭合化合物、可用于伤口愈合的一种或多种半通道闭合化合物、和/或一种或多种可用于伤口愈合的连接蛋白羧基末端多肽。

在一个方面，本发明包括药物组合物，该组合物包括局部递送剂型和配方，其包括药用载体和治疗有效量的如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，可用于伤口愈合的抗连接蛋白多核苷酸和可用于伤口愈合的一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。抗连接蛋白多核苷酸的实例包括抗连接蛋白寡聚脱氧核苷酸(“ODN”)，其包括反义(包括修饰和未修饰的主链反义)RNAi、以及siRNA。合适的抗连接蛋白肽包括结合肽。合适的抗连接蛋白剂包括例如，针对连接蛋白43、26、37、30、以及31.1和32的反义ODN、肽和拟肽。在某些实施方式中，合适的组合物包括联用的多种抗连接蛋白剂，其包括例如，连接蛋白43、26、30、以及31.1。优选的抗连接蛋白剂（包括抗连接蛋白寡核苷酸以及抗连接蛋白肽和拟肽）是针对连接蛋白43。

通过使用同时、分开、或依次给予的两种或更多种抗连接蛋白剂，本发明可用来增加伤口愈合的速率、程度和/或质量。在一种优选的实施方式中，组合使用如本文中所描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，在促进伤口愈合方面具有加性、协同或超加性效应。在一种优选的实施方式中，作为上述组合使用的结果，给予联合制剂将具有更少的给予时间点和/或给予之间增加的时间间隔。在另一种优选的实施方式中，组合使用如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，便于降低给予频率。在另一种优选的实施方式中，与单独给予药剂时可以有效的一种或多种剂量相比，组合使用如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽便于使用降低剂量的上述药剂。

在另一个方面，本发明包括用于将治疗有效量的如本文中描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽给予具有伤口的受治疗者的方法，所述第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂被配制成延迟释放制剂、缓释制剂、延长释放制剂、控释制剂、和/或重复作用制剂，所述伤口包括全部或部分特征在于延迟或不完全愈合伤口的伤口。

在一些其它方面，本发明还涉及使用这样的组合物来治疗受治疗者的方法，所述受治疗者患有或有危险患有与伤口有关的各种疾病、障碍、以及病症，其中所述伤口包括急性伤口、以及并不以预期的速率愈合的伤口（包括延迟愈合和慢性伤口）。

在又一个方面，本发明包括用于治疗受治疗者的方法，所述受治疗者患有或怀疑患有或倾向于患有、或有危险患有全部或部分特征在于需要修复的伤口或组织的任何疾病、障碍和/或病症。这样的组合物包括，例如，局部递送剂型和配方。

在另一个方面，本发明提供了治疗方法，该方法包括给予受治疗者用于治疗伤口的本发明的药物组合物，其中伤口包括例如，急性伤口、以及并不以预期的速率愈合的伤口，其包括延迟愈合和慢性伤口。

在另一个方面，本发明提供了一种治疗方法，该方法包括给予需要其的受治疗者一种组合物，该组合物包括治疗有效量的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，其中所述第一药剂是抗连接蛋白多核苷酸剂，而所述第二药剂是抗连接蛋白肽或拟肽。

在又一个方面，本发明提供了一种治疗方法，该方法包括给予需要其的受治疗者第一组合物和第二组合物，所述第一组合物包括治疗有效量的抗连接蛋白43多核苷酸，而所述第二组合物包括治疗有效量的抗连接蛋白43肽或拟肽。在一种实施方式中，首先给予第一组合物。在另一种实施方式中，首先给予第二组合物。在另外的实施方式中，该方法进一步包括给予第三组合物，其中第三伤口愈合组合物包括抗连接蛋白多核苷酸、肽或拟肽。在一种实施方式中，首先给予第三组合物。

在一个方面，本发明提供了一种用于治疗急性创伤的方法，该方法包括给予需要其的受治疗者治疗有效量的药物组合物，该组合物包括如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。在一种实施方式中，所述方法包括给予两种药物组合物，第一组合物包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸，而第二药物组合物包括一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。在一种实施方式中，首先给予第一组合物。在另一种实施方式中，首先给予第二组合物。在另外的实施方式中，该方法进一步包括给予第三组合物，其中第三伤口愈合组合物包括抗连接蛋白多核苷酸、肽或拟肽。在一种实施方式中，首先给予第三组合物。在一种实施方式中，首先给予第三组合物。在一种实施方式中，局部给予药物组合物。

在一个方面，本发明提供了一种用于治疗慢性伤口、或延迟或缓慢愈合伤口的方法，该方法包括给予需要其的受治疗者治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包括如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。在一种实施方式中，所述方法包括给予两种药物组合物，第一组合物包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸，而第二药物组合物包括一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。在某些实施方式中，慢性伤口是糖尿病性溃疡、糖尿病足溃疡、静脉性溃疡（静脉曲张性溃疡）、静脉淤滞性溃疡（静脉停滞性溃疡）、压迫性溃疡、褥疮性溃疡、血管炎性溃疡（脉管炎性溃疡）、动脉性溃疡、感染性溃疡、烧伤性溃疡、创伤引起的溃疡、或与坏疽性脓皮病有关的溃疡形成。在一种实施方式中，受治疗者是糖尿病患者。在一种实施方式中，受治疗者患有心血管疾病或病症。在一种实施方式中，慢性伤口是一种持续性上皮缺损。在一种实施方式中，首先给予第一组合物。在另一种实施方式中，首先给予第二组合物。在另外的实施方式中，该方法进一步包括给予第三组合物，其中第三伤口愈合组合物包括抗连接蛋白剂，例如，抗连接蛋白多核苷酸、肽或拟肽。在一种实施方式中，本发明的方法可以用来治疗持续性上皮缺损。本发明的组合物的应用可以改善上皮和基底膜复合体的愈合。在一种实施方式中，首先给予第三组合物。在一种实施方式中，首先给予第三组合物。在一种实施方式中，局部给予药物组合物。

在另外的方面，本发明提供了一种用于在需要其的受治疗者中减少瘢痕形成的方法，该方法包括给予所述受治疗者治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包括如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。在一种实施方式中，所述方法包括给予两种药物组合物，第一组合物包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸，而第二药物组合物包括一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。在一种实施方式中，首先给予第一组合物。在另一种实施方式中，首先给予第二组合物。在另外的实施方式中，该方法进一步包括给予第三组合物，其中第三伤口愈合组合物包括抗连接蛋白剂，例如，抗连接蛋白多核苷酸、肽或拟肽。在一种实施方式中，首先给予第三组合物。在一种实施方式中，局部给予药物组合物。

优选的方法包括依次或同时给予如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，其每一种或两种以小于当单独给予药剂时（即当它们未联合给予时，物理上或在伤口治疗的过程中）所用的量或剂量提供。所给予的药剂的上述较少量通常是当单独给予时药剂的量的约二十分之一至约十分之一，并且可以是当单独给予时的量的约八分之一、约六分之一、约五分之一、约四分之一、约三分之一、以及约一半。

在另外的方面，本发明包括透皮贴剂、敷料、垫子、包裹材料、基质以及绷带，其能够附着于或以其它方式与受治疗者的皮肤联系在一起，所述制品能够将如本文描述的治疗有效量的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽递送至受治疗者。

在另一个方面，本发明包括一种包含容器的制品（article ofmanufacture），其中容器包含如本文描述的治疗有效量的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种药用抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种药用抗连接蛋白肽或拟肽，以及使用说明，包括用于治疗受治疗者。

本发明包括一种包含包装材料的制品，其中包装材料包含一种或多种剂型，该剂型包含如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，其中包装材料具有标记，该标记表明，该剂型可以用于患有或怀疑患有或倾向于患有本文描述或提及的任何疾病、障碍和/或病症，包括全部或部分特征在于急性、受损、延迟或慢性伤口愈合的疾病、障碍和/或病症的受治疗者。这样的剂型包括，例如，局部递送剂型和配方。

本发明包括一种配方，该配方包括可有效地促进受治疗者体内愈合或组织修复的量如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。本发明包括一种配方，该配方包括可有效地促进受治疗者体内伤口愈合的量的如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。这样的配方包括，例如，局部递送剂型和配方。优选的配方包括，例如，本发明的药物组合物，该药物组合物被配制成泡沫、喷雾剂或凝胶。在一种实施方式中，凝胶是基于聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物的凝胶或基于羧甲基纤维素的凝胶。在一种优选的实施方式中，凝胶是pluronic（一种聚丙二醇和环氧丙烷的加聚物）凝胶。

优选的配方包括如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，其每一种或两种以小于当药剂单独给予时（即当它们未联合给予时，物理上或在伤口治疗的过程中）所用的量或剂量提供。联合给予或提供的药剂的上述较少量通常是当单独给予时的量的约二十分之一至约十分之一，并且可以是当单独给予时的量的约八分之一、约六分之一、约五分之一、约四分之一、约三分之一、以及约一半。

本发明包括治疗有效量的组合物用于制备药物的方法，其中组合物包括如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。这样的药物包括，例如，局部递送剂型和配方。这样的药物包括如本文披露的用于治疗受治疗者的那些药物。这样的药物优选包括如本文描述的减少量的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，如本文指出的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。

本发明包括制备用于治疗伤口的药物的方法，该方法包括集合（聚集，bring together）一定量的如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，包括，例如，第一组合物和第二组合物，其中所述第一组合物包括有效量的抗连接蛋白多核苷酸，而所述第二组合物包括有效量的抗连接蛋白肽或拟肽。制备药物的其它实施方式包括第一和第二组合物，该组合物包括抗连接蛋白多核苷酸、抗连接蛋白肽或拟肽、可用于伤口愈合的间隙连接闭合化合物、可用于伤口愈合的半通道闭合化合物、和/或可用于伤口愈合的连接蛋白羧基末端多肽。

本发明包括如本文描述的治疗有效量的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽用于制备剂型的方法。这样的剂型包括，例如，局部递送剂型和配方。这样的剂型包括如本文披露的用于治疗受治疗者的那些剂型。这样的剂型优选包括减少量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽（如本文指出的），或减少量的可用于伤口愈合的间隙连接闭合化合物、可用于伤口愈合的半通道闭合化合物、和/或可用于伤口愈合的连接蛋白羧基末端多肽。

在另一个方面，本发明提供了如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，抗连接蛋白多核苷酸(例如，抗α-1ODN)和抗连接蛋白肽或拟肽在制备用于在需要其的患者中促进伤口愈合的药物产品中的应用。

在某些其它方面，本发明提供了：(i)包括抗连接蛋白剂和使用说明以及另一种抗连接蛋白剂，用于促进(例如，减少愈合时间、更好的伤口结果)伤口愈合的包装；(ii)包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和使用说明并连同一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，用于促进伤口愈合的包装；以及(iii)包括用于促进慢性伤口的伤口愈合的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽、以及使用说明的包装。

在一种实施方式中，提供了本发明的药物产品并连同伤口敷料或伤口愈合促进基质。适宜地，提供了伤口敷料或基质，其包括固体基质与如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂的形式，例如，分散在固体基质上或固体基质中的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。

可以以相同组合物或通过单独的组合物来给予如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，本发明的抗连接蛋白多肽、肽以及拟肽。优选地，如上所指出的，以减少的量给予上述药剂。

可以同时、依次或分开地将抗连接蛋白剂给予患者。如果分开地给予，则优选地，依次给予如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，抗连接蛋白多核苷酸和抗连接蛋白肽或拟肽。优选地，在彼此至少约半小时内依次给予药剂。还可以在彼此约1小时内、在彼此约1天至约1周内、或以其它方式认为适当的时间内给予药剂。优选地，首先给予抗连接蛋白剂。优选地，在给予抗连接蛋白多核苷酸（其阻断或减少连接蛋白表达或半通道或间隙连接的形成，例如，通过连接蛋白表达的向下调节）以前，给予如本文描述的第一抗连接蛋白剂和第二抗连接蛋白剂，例如，抗连接蛋白肽或抗连接蛋白拟肽，例如，抗连接蛋白剂，其可以阻断或减少半通道开放。优选地，抗连接蛋白剂是抗连接蛋白43药剂。

以下提供了本发明的这些和其它方面，其并不限于或受限于在该发明内容中的信息。

具体实施方式

定义

如在本文中所使用的，“障碍”是将受益于一种药剂的任何障碍、疾病、或病症，其中所述药剂促进伤口愈合和/或减少肿胀、发炎、和/或瘢痕形成。例如，包括由手术或创伤引起的伤口，以及伤口相关异常，神经病性、缺血性、微血管病变，骨区（尾骨(骶骨的)、髋关节(转节的)、臀(坐骨的)、或足跟）上的压力，再灌注损伤，以及瓣膜反流病因和病症。

如在本文中所使用的，“受治疗者”是指任何哺乳动物，包括人类、家畜和农场动物、以及动物园里的动物、运动动物、或宠物，如狗、马、猫、羊、猪、牛等。本文中优选的哺乳动物是人，包括成年人、儿童、以及老年人。优选的运动动物是马和狗。优选的宠物是狗和猫。

如在本文中所使用的，“预防”是指全部或部分地预防、或改善或控制。

如在本文中所使用的，关于本发明的化合物或组合物的“治疗有效量”是指足以诱导期望的生物、药物、或治疗结果的量。所述结果可以是疾病或障碍或病症的体征、症状、或起因的缓和，或生物***的任何其它期望的改变。在本发明中，所述结果将涉及全部或部分地促进和/或改善伤口愈合，包括伤口愈合和伤口闭合的速率。其它益处包括肿胀、发炎和/或瘢痕形成的全部或部分地减少。

如在本文中所使用的，术语“正治疗”和“治疗”是指治疗性治疗和预防或预防性措施。

如在本文中所使用的，“抗连接蛋白剂”是影响或调节连接蛋白、连接蛋白半通道(连接子)、或间隙连接的活性、表达或形成的化合物。抗连接蛋白剂包括但不限于反义化合物(例如，反义多核苷酸)、RNAi和siRNA化合物、抗体及其结合片断、以及肽和多肽，其包括“拟肽”和肽类似物。除了抗连接蛋白多核苷酸和抗连接蛋白肽或拟肽之外，其它抗连接蛋白剂包括可用于伤口愈合的间隙连接闭合化合物(例如，连接蛋白磷酸化化合物)、可用于伤口愈合的半通道闭合化合物(例如，连接蛋白磷酸化化合物)、以及可用于伤口愈合的连接蛋白羧基末端多肽。优选的抗连接蛋白剂是抗连接蛋白43剂、抗连接蛋白43间隙连接剂、以及抗连接蛋白43半通道剂。本文进一步详细地讨论了示例性的抗连接蛋白剂。

如在本文中所使用的，“同时”用来指同时给予本发明的一种或多种药剂，而术语“联合（组合）”用来指它们不是同时或以物理组合给予，而是在一定时间范围内“依次”给予，使得它们均可用于治疗作用。因此，“依次”给予可以允许在一种药剂以后的数分钟(例如，1、2、3、4、5、10、15、20、25、30)或数小时、数天、数周或数月内给予另一种药剂，只要一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽均同时以有效量存在。成分的一次给予或多次给予之间的时间延迟将随着成分的确切性质、它们之间的相互作用、以及它们各自的半寿期而变化。

术语“拟肽”和“模拟物”包括天然存在的和合成的化合物，这些化合物可以具有与它们模拟的蛋白区基本上相同的结构和功能特性。在连接蛋白的情况下，这些化合物可以模拟，例如，相反连接蛋白的细胞外环，其涉及连接子-连接子对接（停靠）和细胞间通道形成、和/或半通道连接蛋白的细胞外环。

如在本文中所使用的，术语“肽类似物”是指这样的化合物，其性能类似于模板肽的性能并且可以是非肽药物。包括基于肽的化合物的“拟肽”(还称作肽模拟物)还包括上述基于非肽的化合物如肽类似物。结构上类似于治疗上有用的肽的拟肽可以用来产生相当或增强的治疗或预防效果。通常，拟肽是范例多肽(即，具有生物或药理功能或活性的多肽)的结构或功能模拟物(例如，相同或类似)，但还可以具有可选地被选自由例如-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH=CH-(顺式和反式)、-COCH2-、-CH(OH)CH2-、以及-CH2SO-组成的组中的键取代的一个或多个肽键。模拟物可以完全由天然氨基酸、合成化合物、氨基酸的非天然类似物构成，或是部分天然肽氨基酸和氨基酸的部分非天然类似物的嵌合分子。模拟物还可以包括任何量的天然氨基酸保守替代，只要这样的替代同样并不显著改变模拟物活性。在连接蛋白的情况下，这些模拟物可以模拟，例如，相反连接蛋白的细胞外环，其涉及连接子-连接子对接（停靠）和细胞间通道形成。例如，模拟物组合物可以用作间隙连接调节剂，如果它能够向下调节连接子的生物作用或活性，如，例如，预防连接子的对接（停靠）以形成间隙连接介导的细胞间通信，或预防连接子的开放以将细胞质暴露于细胞外环境。拟肽包括本文描述的那些拟肽、以及如本领域可以已知的那些拟肽，不管是现在已知或以后开发的。

通常，如在本文中以其不同形式所使用的，术语连接蛋白活性的“调节剂”和“调节”是指全部或部分地抑制连接蛋白或连接蛋白半通道或连接蛋白间隙连接的作用或活性并且可以起抗连接蛋白剂，包括作为间隙连接调节剂的作用。

如在本文中所使用的，术语“蛋白质”是指经由肽键连接的两种或更多种单独氨基酸(不论是否是天然存在的)的任何聚合物，如当结合于一个氨基酸(或氨基酸残基)的α-碳的羧酸基团的羧基碳原子变成共价结合于与相邻氨基酸的α-碳结合的氨基基团的氨基氮原子时所发生的。这些肽键、以及构成它们的原子(即，α-碳原子、羧基碳原子(以及它们的取代基氧原子)、以及氨基氮原子(和它们的取代基氢原子))形成蛋白质的“多肽主链”。此外，如在本文中所使用的，术语“蛋白质”理解成包括术语“多肽”和“肽”(在本文中其有时可以交替使用)。类似地，在本文中，除非另有说明，否则蛋白质片段、类似物、衍生物、以及变体可以称作“蛋白质”，并且将被视为“蛋白质”。术语蛋白质的“片断”是指包括少于蛋白质的所有氨基酸残基的多肽。蛋白质的“结构域”也是片断，并且包括经常需要以赋予活性或功能的蛋白质的氨基酸残基。

术语“伤口敷料”是指用于局部施加至伤口的敷料并且排除适合于全身给药的组合物。例如，可以将一种或多种抗连接蛋白剂（包括间隙连接调节剂）分散在伤口接触材料的固体片中或之上，如编织或非编织纺织材料，或可以分散在泡沫如聚氨酯泡沫的层中，或分散在水凝胶如聚氨酯水凝胶、聚丙烯酸水凝胶、明胶、羧甲基纤维素、果胶、藻酸盐、和/或透明质酸水凝胶中，例如分散在凝胶或软膏中。在某些实施方式中，将一种或多种抗连接蛋白剂（包括间隙连接调节剂）分散在生物可降解片材中或之上，其中上述片材提供活性组分持续释放到伤口中，例如冻干胶原、冻干胶原/藻酸盐混合物(可从来自Johnson & Johnson Medical Limited的注册商标FIBRACOL获得)或冻干胶原/氧化再生纤维素(可从来自Johnson &Johnson Medical Limited的注册商标PROMOGRAN获得)的片材。

如在本文中所使用的，“基质”包括例如，基质如胶原，非细胞基质，交联生物支架分子，基于组织的基质(包括基于猪的伤口愈合基质)，培养的表皮自体移植物，培养的表皮同种异体移植物，组织工程皮肤，接种有自体成纤维细胞和角质细胞的胶原和糖胺聚糖真皮基质，Alloderm(具有完整基底膜复合体的非活体同种异体非细胞真皮基质)，活性皮肤等价物(例如，Dermagraft(生长在可降解支架上的活性同种异体真皮成纤维细胞))，TransCyte(由同种异体人真皮成纤维细胞产生的细胞外基质)，Apligraf(活性同种异体双层构建物，其包含角质细胞、成纤维细胞以及牛I型胶原)，以及OrCel(接种在牛胶原的双层基质的相反侧中的同种异体成纤维细胞和角质细胞)，动物来源的敷料(例如，Oasis的猪小肠粘膜下层非细胞胶原基质；以及E-Z Derm的非细胞异种胶原基质)，基于组织的生物工程结构框架，生物工程生物假体，以及其它植入或施加的结构如例如，可用于促进伤口愈合的适合于细胞浸润和增殖的血管移植物。另外适宜的生物基质材料可以包括化学修饰的胶原组织以减少抗原性和免疫原性。其它适宜的实例包括用于伤口敷料的胶原片，无抗原或抗原减少的非细胞基质(Wilson et al.,Trans Am Soc ArtifIntern 1990;36:340-343)或其它生物基质，其已被设计成减少对异种移植物材料的抗原反应。可用于促进伤口愈合的其它基质可以包括例如，经处理的牛心包蛋白，其包括不溶性胶原和弹性蛋白(Courtman et al.,J Biomed Mater Res 1994;28:655-666)以及其它非细胞组织，其可以用来为宿主细胞迁移提供天然微环境以加速组织再生(Malone et al.,J Vasc Surg 1984;1:181-91)。在某些实施方式中，基质材料可以补充有一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，用于这样的药剂的位点特异性释放。

如在本文中所使用的，“伤口促进基质”包括例如，合成或天然存在的基质如胶原，非细胞基质，交联生物支架分子，基于组织的生物工程结构框架，生物工程生物假体，以及其它植入结构如例如，可用于促进伤口愈合的适合于细胞浸润和增殖的血管移植物。另外适宜的生物基质材料可以包括化学修饰的胶原组织以减少抗原性和免疫原性。其它适宜的实例包括用于伤口敷料的胶原片，无抗原或抗原减少的非细胞基质(Wilson G J et al.(1990)Trans Am SocArtif Intern 36:340-343)，或其它生物基质，其已被设计成减少对异种移植物材料的抗原反应。可用于促进伤口愈合的其它基质可以包括例如，经处理的牛心包蛋白，其包括不溶性胶原和弹性蛋白(Courtman DW et al.(1994)J Biomed Mater Res 28:655-666)，以及其它非细胞组织，其可以用来为宿主细胞迁移提供天然微环境以加速组织再生(Malone J M et al.(1984)J Vasc Surg 1:181-91)。本发明预期包括一种或多种抗连接蛋白剂的合成或天然基质。

伤口和伤口分类

如在本文中所使用的，术语“伤口”包括对任何组织的损伤，包括，例如，急性、延迟或难以愈合的伤口，以及慢性伤口。伤口的实例可以包括开放性伤口和闭合性伤口。伤口包括，例如，烧伤、切口、切除、撕裂、擦伤、在贯通伤口上的穿剌、手术伤口、挫伤、血肿、挤压伤以及溃疡。还包括并不以预期的速率愈合的伤口。术语“伤口”还可以包括例如，以不同方式引发的对皮肤和皮下组织的损伤(例如，来自长期卧床休息的褥疮以及由创伤诱导的伤口)并具有不同特点。伤口可以分为4个等级之一，其取决于伤口深度：i)I级：限于上皮的伤口；ii)II级：延伸到真皮中的伤口；iii)III级：延伸到皮下组织中的伤口；以及iv)IV级(或全层伤口)：骨被暴露的伤口(例如，骨压点如更大的转子或骶骨)。

术语“Ⅱ度创面（部分厚度伤口，部分皮质受损伤口，partialthickness wound）”是指包括I-III级的伤口；Ⅱ度创面的实例包括褥疮、静脉淤滞性溃疡、以及糖尿病性溃疡。本发明预期治疗并不以预期的速率愈合的类型的所有伤口，包括延迟愈合伤口、不完全愈合伤口、以及慢性伤口。

“并不以预期的速率愈合的伤口”是指对任何组织的损伤，其并不在预期或通常的时间范围内愈合，包括延迟或难以愈合的伤口(包括延迟或不完全愈合伤口)、以及慢性伤口。并不以预期的速率愈合的伤口的实例包括溃疡如糖尿病性溃疡、糖尿病足溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、静脉淤滞性溃疡、烧伤性溃疡、感染性溃疡、创伤引起的溃疡、压迫性溃疡、褥疮性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、以及混合性溃疡。其它并不以预期的速率愈合的伤口包括裂开性伤口。

如在本文中所使用的，延迟或难以愈合的伤口可以包括，例如，至少部分具有以下特征的伤口：1)延长的发炎期，2.)缓慢形成细胞外基质，和/或3)降低速率的上皮形成或闭合。

术语“慢性伤口”是指未愈合的伤口。例如，在3个月内未愈合的伤口被认为是慢性的。慢性伤口包括，例如，压迫性溃疡、褥疮性溃疡、糖尿病性溃疡（包括糖尿病足和腿溃疡）、缓慢或非愈合的静脉性溃疡、静脉淤滞性溃疡、动脉性溃疡、血管炎性溃疡、烧伤性溃疡、创伤引起的溃疡、感染性溃疡、混合性溃疡、以及坏疽性脓皮病。慢性伤口可以是动脉性溃疡，该动脉性溃疡包括由完全或部分动脉阻塞引起的溃疡。慢性伤口可以是静脉性或静脉淤滞性溃疡，其包括由静脉瓣功能不良和相关的血管疾病引起的溃疡。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于压迫性溃疡的一个或多个以下AHCPR期：1期、2期、3期、和/或4期。

如在本文中所使用的，慢性伤口还可以包括，例如，这样的伤口，其至少部分地具有以下特征：1)伤口发炎的慢性自我持续状态，2)不足和有缺陷的伤口细胞外基质，3)不良反应的(衰老的)伤口细胞(包括成纤维细胞)，4)有限的细胞外基质产生，和/或5)部分由于缺乏必要的细胞外基质安排和缺乏用于迁移的脚手架而导致上皮再形成衰退。慢性伤口的特征还可以在于：1)长期发炎和蛋白水解活性，其导致溃疡性病变，该溃疡性病变包括例如，糖尿病性溃疡、压迫性溃疡(褥疮性溃疡)、静脉性溃疡、以及动脉性溃疡，2)在受影响的区域中基质的逐步沉积，3)更长的修复时间，4)更小的伤口收缩，5)更慢的上皮再形成，以及6)增加的肉芽组织厚度。

示例性慢性伤口可以包括“压迫性溃疡”。典型的压迫性溃疡可以包括基于AHCPR(Agency for Health Care Policy and Research,U.S.Department of Health and Human Services)指南的伤口分类的所有4个期，包括例如，1期。I期压迫性溃疡是可观察到的完整皮肤的压力相关改变，与身体上的相邻或相反区域相比，其标志可以包括以下一种或多种的变化：皮肤温度(温暖或凉爽)、组织一致性(结实或松软潮湿感)和/或感觉(疼痛、搔痒)。在轻色素沉着皮肤中，溃疡表现为限定区域的持续发红，而在较深的肤色中，溃疡可以呈现持续的红色、蓝色、或紫色色调。1期溃疡形成可以包括完整皮肤的非发白红斑（nonblanchable erythema）和皮肤溃疡的预示性病变。在具有较深的肤色的个体中，皮肤变色、温暖、水肿、硬化、或硬度也可以是1期溃疡的标志。2期：2期溃疡形成的表征可以在于部分皮肤层丧失，其涉及表皮、真皮、或两者。该溃疡是表面的并且临床上呈现为磨损、水疱、或较浅的腔洞。3期：3期溃疡形成的表征可以在于全层皮肤损失，该全层皮肤损失涉及皮下组织的损伤或坏死，其可以向下延伸到但不通过下面的筋膜。该溃疡临床上呈现为较深的腔洞并伴有或未伴有邻近组织的破坏。4期：4期溃疡形成的表征可以在于全层皮肤损失并伴有广泛的破坏、组织坏死、或对肌肉、骨、或支持结构(例如，腱、关节囊)的损伤。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于压迫性溃疡的以下AHCPR期中的一个或多个：1期、2期、3期、和/或4期。

示例性的慢性伤口可以包括“褥疮性溃疡”。示例性的褥疮性溃疡可以起因于对骨性***的长期的和未被释放的压力，其导致局部缺血。该伤口倾向于发生在相对于卸载重量不能重新定位自己的患者，如瘫痪、无意识、或严重虚弱的人。如由美国健康与人类服务部（Department of Health and Human Services）所定义的，主要预防措施包括高危患者的鉴定；经常评估；以及预防措施如有计划的重新定位、适当的减压寝具、防潮、以及适当的营养状况。治疗选项可以包括例如，减压、手术和酶清创术、湿润伤口护理、以及细菌负荷的控制。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于褥疮性溃疡或溃疡形成，其由对骨性***的长期的、未被释放的压力产生，而这导致局部缺血。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于褥疮性溃疡或溃疡形成，其由对骨性***的长期的、未被释放的压力产生，而这导致局部缺血。

示例性的慢性伤口可以包括“动脉性溃疡”。慢性动脉性溃疡通常理解成这样的溃疡形成，其伴随动脉硬化性和高血压性心血管病。它们是疼痛的、边界清晰的，并且经常在外侧下肢和足趾上发现。动脉性溃疡可以包括那些特征在于完全或部分动脉阻塞的溃疡，该动脉阻塞可以导致组织坏死和/或溃疡形成。动脉性溃疡的体征可以包括，例如，四肢无脉；痛苦的溃疡；小穿刺性溃疡，其通常是边界清楚的；凉爽或寒冷的皮肤；延迟的毛细管返回时间(简单地说，推动足趾的末端并释放，正常颜色应在约3秒或更短时间内返回足趾)；萎缩性外观皮肤(例如，有光泽、薄、干燥)；以及指和足发的损失。

示例性的慢性伤口可以包括“静脉性溃疡”。示例性的静脉性溃疡可以包括最常见类型的影响下肢的溃疡并且可以通过静脉瓣的功能不良来表征。正常静脉具有防止血液回流的瓣膜。当这些瓣膜变得无能时，静脉血的回流会引起静脉充血。来自红细胞的血红蛋白会逃逸并渗漏到血管外空间中，从而引起通常观察到的褐色变色。已表明，围绕静脉性溃疡的皮肤的经皮氧分压会降低，这提示存在阻碍该区域的正常血管分布的力。***引流和流量在这些溃疡中也发挥作用。静脉性溃疡可以出现在内踝附近并且通常与水肿和硬结下肢一起发生；它可以是肤浅的、不太疼痛并且可以存在有来自受影响部位的渗出性排出。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于起因于完全或部分动脉阻塞的动脉性溃疡或溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“静脉淤滞性溃疡”。瘀积性溃疡是与静脉功能不全有关的病变并且更通常存在于内踝上，通常伴随压凹性水肿、静脉曲张、斑点状色素沉着、红斑、以及不可触知的瘀点和紫癜。郁积性皮炎和溃疡通常是搔痒的而不是疼痛的。示例性的静脉淤滞性溃疡可以表征为下肢的慢性被动性静脉充血，其导致局部缺氧。这些伤口发病的一种可能的机制包括阻碍氧穿过粗血管周纤维蛋白套囊扩散到组织中。另一种机制是渗入血管周组织的大分子捕获对维持皮肤完整性所需要的生长因子。另外，由于静脉充血，较大白细胞的流动会放慢，从而阻塞毛细血管，变得激活，并且损害血管内皮，进而有溃疡形成的倾向。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于静脉性溃疡或溃疡形成，其是起因于静脉瓣的功能不良和相关的血管疾病。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于静脉淤滞性溃疡或溃疡形成，其是起因于下肢的慢性被动性静脉充血和/或形成的局部缺氧。

示例性的慢性伤口可以包括“糖尿病性溃疡”。糖尿病患者倾向于溃疡形成（包括足部溃疡），其是起因于神经和血管并发症。周围神经病可以引起脚和/或腿改变的或完全丧失的感觉。患有沉重期神经病的糖尿病患者会失去敏锐-迟钝辨别的所有能力。在患有神经病的患者中，对足的任何切口或创伤可以完全未注意到达数天或数周。并非不常见的是，当事实上溃疡已存在相当一段时间时，使患有神经病的患者注意到溃疡“刚刚出现”。对于神经病患者，已表明，严格的葡萄糖控制可以放慢该疾病的进展。作为降低的感觉的结果，还可以发生沙尔科足畸形。在他们的足部具有“正常”感觉的人能够自动感到何时太大压力正施加于足部区域上。一旦确定，我们的身体本能地移动位置以缓解这种应力。患有沉重期神经病的患者会失去这种感到持续的压力损伤的能力，结果，可以发生组织局部缺血和坏死，其导致例如，足底溃疡。另外，在足骨中的微小骨折，如果被忽视和未治疗，则可以导致外貌损伤、慢性肿胀以及另外的骨性***。微血管病是糖尿病患者的显著并发症之一，其也可以导致溃疡形成。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于糖尿病足溃疡和/或溃疡形成，其是起因于糖尿病的神经和血管并发症。

示例性的慢性伤口可以包括“创伤性溃疡”。由于对身体的创伤性损伤可以形成示例性的创伤性溃疡。这些损伤包括，例如，对动脉、静脉或淋巴***的损害；对骨骼的骨结构的改变；组织层的损失：表皮、真皮、皮下软组织、肌肉或骨；对身体部位或器官的损害以及身体部位或器官的损失。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于与对身体的外伤有关的溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“烧伤性溃疡”，包括例如，由于烧伤而发生的溃疡形成，其中烧伤包括I度烧伤(即，皮肤的表面的红色区域)；Ⅱ度烧伤(起泡受伤部位，在已除去水疱液以后，其可以自发愈合)；Ⅲ度烧伤(烧伤，穿过整个皮肤并且通常需要外科手术干预，以用于伤口愈合)；烫伤(可以起因于滚烫的热水、油脂或散热器用液)；热灼伤(可以起因于火焰，通常为深度烧伤)；化学烧伤(可以起因于酸和碱，通常为深度烧伤)；电烧伤(房子周围的低电压或工作中的高电压)；***焰烧伤(通常为表面损伤)；以及接触烧伤(通常为深度烧伤并且起因于***尾管、热熨斗以及火炉)。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于与对身体的烧伤有关的溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“血管炎性溃疡（脉管炎性溃疡）”。血管炎性溃疡还发生在下肢上并且是疼痛的、边界清晰的病变，其可以具有伴随的可触知的紫癜和出血性大疱。胶原病、败血症、以及各种血液学病症(例如，血小板减少、异常蛋白血)可以是这种严重的急性病症的起因。

示例性的慢性伤口可以包括坏疽性脓皮病。坏疽性脓皮病表现为小腿的单个或多个、非常敏感的溃疡。深红色至紫色破坏边界围绕化脓性中心缺陷。活检通常不能揭示血管炎。在一半患者中，它伴随全身性疾病如溃疡性结肠炎、局限性回肠炎、或白血病。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于与坏疽性脓皮病有关的溃疡。

示例性的慢性伤口可以包括眼溃疡，该眼溃疡包括角膜溃疡或顽固性（慢性）溃疡。还包括持续性上皮缺损。这些眼溃疡可以发生在人类中并且也发生在运动动物(如马)和宠物(包括狗)中。

示例性的慢性伤口可以包括感染性溃疡。感染性溃疡在直接接种各种生物体后发生并且可以伴随显著的局限性腺病。实例有分枝杆菌感染、炭疽病、白喉症、芽生菌病、孢子丝菌病、土拉菌病、以及猫抓热。初期梅毒的生殖器溃疡通常是非敏感的并具有干净、坚实的基质。软下疳和***的那些溃疡倾向于为粗糙的、暗淡的、以及更加无节制的病变。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于与感染有关的溃疡形成。

如在本文中所使用的，术语“裂开性伤口”是指这样的伤口，通常为已破裂或裂开的手术伤口。在某些实施方式中，提供了一种治疗并不以预期的速率愈合的伤口的方法，其中伤口的特征在于裂开。

除先前提供的定义之外，术语“伤口”还可以包括例如，以不同方式引发的对皮肤和皮下组织的损伤(例如，来自长期卧床休息的褥疮和由创伤引起的伤口)并具有不同特点。

抗连接蛋白剂

本文描述的本发明的抗连接蛋白剂能够调节或影响分子转运到细胞中和之外(例如，阻断或抑制或向下调节)。因此，本文描述的某些抗连接蛋白剂可以调节细胞通讯(例如，细胞与细胞)。某些抗连接蛋白剂是间隙连接调节剂。某些抗连接蛋白剂可以调节或影响分子在细胞质与周质间隙或细胞外间隙之间的传递。这样的抗连接蛋白剂通常靶向连接蛋白和/或连接蛋白半通道(连接子)。半通道和所得的间隙连接（其包括连接蛋白）独立参与小分子在细胞质与细胞外间隙或组织之间的释放或交换（在开放半通道的情况下）、以及小分子在邻近细胞的细胞质之间的释放或交换（在开放间隙连接的情况下）。因此，本文提供的抗连接蛋白剂可以直接或间接减少细胞之间的偶联和通讯或减少或阻断细胞和细胞外间隙或组织之间的通讯(或分子的传递)，以及分子从细胞进入细胞外间隙或组织(或从细胞外间隙或组织进入细胞)或邻近细胞之间的转运调节在本发明的抗连接蛋白剂和实施方式的范围内。优选地，连接蛋白是连接蛋白43。

能够诱导分子通过间隙连接或连接蛋白半通道的通道(例如转运)的期望的抑制的任何抗连接蛋白剂可以用于本发明的实施方式中。在特定实施方式中还提供了任何抗连接蛋白剂，其调节分子通过间隙连接或连接蛋白半通道的通道(例如，那些调节、阻断或减弱分子从细胞的细胞质进入细胞外间隙或邻近细胞质的通道的抗连接蛋白剂)。在有或没有间隙连接解偶联(阻断分子通过间隙连接的转运)的情况下，这样的抗连接蛋白剂可以调节分子通过间隙连接或连接蛋白半通道的通道。这样的化合物包括，例如，蛋白质和多肽、多核苷酸、以及其它有机化合物，并且它们可以，例如阻断间隙连接或半通道的全部或部分功能或表达，或向下调节连接蛋白的全部或部分生产。某些间隙连接抑制剂列在Evans,W.H.and Boitano,S.Biochem.Soc.Trans.29:606-612(2001)中。其它化合物包括连接蛋白磷酸化化合物，这些化合物可以使全部或部分间隙连接和/或半通道、以及连接蛋白羧基末端多肽闭合。优选地，连接蛋白是连接蛋白43。

某些抗连接蛋白剂提供了连接蛋白表达的向下调节(例如，通过mRNA转录或翻译的向下调节)或以其它方式减小或抑制连接蛋白、连接蛋白半通道或间隙连接的活性。在向下调节的情况下，这将具有以下效应：在连接蛋白表达被向下调节的部位，减少通过间隙连接的直接细胞间通信，或通过半通道使细胞质暴露于细胞外间隙。抗连接蛋白43剂是优选的。

抗连接蛋白剂的实例包括这样的药剂，其减小或抑制连接蛋白mRNA和/或蛋白质的表达或功能，或其减小连接蛋白、连接蛋白半通道或间隙连接的活性、表达或形成。抗连接蛋白剂包括抗连接蛋白多核苷酸，如反义多核苷酸和其它多核苷酸(如具有siRNA或核酶功能的多核苷酸)，以及抗体及其结合片断，以及肽和多肽，包括调节半通道或间隙连接活性或功能的拟肽和肽类似物。抗连接蛋白43剂是优选的。

抗连接蛋白多核苷酸

抗连接蛋白多核苷酸包括连接蛋白反义多核苷酸以及具有使它们能够向下调节连接蛋白表达的功能的多核苷酸。其它合适的抗连接蛋白多核苷酸包括RNAi多核苷酸和siRNA多核苷酸。抗连接蛋白43多核苷酸是优选的。

反义多核苷酸和其它抗连接蛋白多核苷酸如RNAi、siRNA、和核酶多核苷酸以及具有修饰和混合主链的多核苷酸的合成对于本领域技术人员来说是已知的。参见例如Stein C.A.and Krieg A.M.(eds),Applied Antisense Oligonucleotide Technology,1998(Wiley-Liss)。合成抗体和结合片段以及肽和多肽（包括拟肽和肽类似物）的方法对于本领域技术人员来说是已知的。参见例如LihuYang et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1;95(18):10836-10841(Sept1 1998);Harlow and Lane(1988)“Antibodies:A Laboratory Manuel”Cold Spring Harbor Publications,New York;Harlow and Lane(1999)“Using Antibodies”A Laboratory Manuel,Cold Spring HarborPublications,New York。

根据一个方面，连接蛋白表达的向下调节通常可以基于使用反义多核苷酸(如DNA或RNA多核苷酸)的反义方法，并且更具体地基于使用反义寡聚脱氧核苷酸(ODN)。这些多核苷酸(例如，ODN)靶向待向下调节的连接蛋白。通常，多核苷酸是单链的，但也可以是双链的。

反义多核苷酸可以抑制连接蛋白的转录和/或翻译。优选地，多核苷酸是来自连接蛋白基因或mRNA的转录和/或翻译的特异性抑制剂，并且不抑制来自其它基因或mRNA的转录和/或翻译。产物可以结合于连接蛋白基因或mRNA：(i)5’至编码序列，和/或(ii)至编码序列，和/或(iii)3’至编码序列。

反义多核苷酸通常反义于连接蛋白mRNA，优选连接蛋白43mRNA。这样的多核苷酸能够杂交于连接蛋白mRNA并因此通过干扰连接蛋白mRNA代谢的一个或多个方面可以抑制连接蛋白的表达，包括转录、mRNA加工、mRNA转运（来自细胞核）、翻译或mRNA降解。反义多核苷酸通常杂交于连接蛋白mRNA以形成双链体，该双链体可以引起mRNA的翻译和/或去稳定作用的直接抑制。这样的双链体可以易于受到核酸酶的降解。

反义多核苷酸可以杂交于所有或部分连接蛋白mRNA。通常，反义多核苷酸杂交于连接蛋白mRNA的核糖体结合区或编码区。多核苷酸可以互补于所有连接蛋白mRNA或连接蛋白mRNA的区。例如，多核苷酸可以是所有或部分连接蛋白mRNA的确切补体。然而，并不需要绝对互补性并且具有足够互补性以形成在生理条件下具有高于约20°C、30°C或40°C的解链温度的双链体的多核苷酸特别适用于本发明。

因此，多核苷酸通常是互补于mRNA的序列的同源物。多核苷酸可以是这样的多核苷酸，其在中等至高严格性的条件下，如在约50°C至约60°C下的0.03M氯化钠和0.03M柠檬酸钠，杂交于连接蛋白mRNA。

对于某些方面，合适的多核苷酸的长度通常为约6至40个核苷酸。优选地，多核苷酸的长度可以为约12至约35个核苷酸，或可替换地长度为约12至约20个核苷酸，或更优选地长度为约18至约32个核苷酸。根据一个可替换的方面，多核苷酸的长度可以是至少约40，例如至少约60或至少约80个核苷酸，并且高达约100、约200、约300、约400、约500、约1000、约2000或约3000或更多个核苷酸。

由多核苷酸靶向的所述连接蛋白将取决于待实施向下调节的部位。就连接蛋白亚单位组成而言，这反映了整个身体中在不同部位的间隙连接的非均匀组成。该连接蛋白是这样的连接蛋白，其在一个方面自然发生在人或动物中或自然发生在其中连接蛋白表达或活性将被降低的组织中。连接蛋白基因(包括编码序列)通常与本文提及的一种或多种特异性连接蛋白的编码序列具有同源性，如与表8所示的连接蛋白43编码序列的同源性。连接蛋白通常是α或β连接蛋白。优选地，连接蛋白是α连接蛋白并且在待治疗的组织中表达。

然而，就在组织中的分布而言，一些连接蛋白比其它连接蛋白是更加普遍存在的。最广泛之一是连接蛋白43。靶向连接蛋白43的多核苷酸特别适用于本发明。在其它方面，靶向其它连接蛋白。

抗连接蛋白多核苷酸包括连接蛋白反义多核苷酸以及具有使它们能够向下调节连接蛋白表达的功能的多核苷酸。其它合适的抗连接蛋白多核苷酸包括RNAi多核苷酸和SiRNA多核苷酸。

在一个优选的方面，使反义多核苷酸仅靶向一种连接蛋白的mRNA。最优选地，这种连接蛋白是连接蛋白43。在另一个方面，连接蛋白是连接蛋白26、30、31.1、32、36、37、40、或45。在其它方面，连接蛋白是连接蛋白30.3、31、40.1、或46.6。

还预期，联合使用靶向不同的连接蛋白的多核苷酸(例如，可以靶向1、2、3、4种或更多种不同的连接蛋白)。例如，可以联合使用这样的多核苷酸，其靶向连接蛋白43、以及连接蛋白家族的一种或多种其它成员(如连接蛋白26、30、30.3、31.1、32、36、37、40、40.1、45、以及46.6)。

可替换地，反义多核苷酸可以是组合物的一部分，该组合物可以包括多核苷酸以及多于一种的连接蛋白。优选地，其上定向有多核苷酸的连接蛋白之一是连接蛋白43。其上定向有寡聚脱氧核苷酸的其它连接蛋白可以包括，例如，连接蛋白26、30、30.3、31.1、32、36、37、40、40.1、45、以及46.6。定向于各种连接蛋白的合适的示例性多核苷酸(以及ODN)列在表1中。

单独的反义多核苷酸对于特定连接蛋白可以是特异性的，或可以靶向1、2、3或更多种不同的连接蛋白。特异性多核苷酸将通常靶向连接蛋白基因或mRNA中的序列，其在连接蛋白之间不是保守的，而非特异性多核苷酸将靶向各种连接蛋白的保守序列。

用于本发明的多核苷酸可以适宜为未修饰的磷酸二酯寡聚体。这样的寡聚脱氧核苷酸的长度可以变化。已发现30聚体多核苷酸是特别适宜的。

本发明的许多方面是参照寡聚脱氧核苷酸进行描述的。然而，应当理解，其它合适的多核苷酸(如RNA多核苷酸)可以用于这些方面中。

反义多核苷酸可以被化学修饰。这可以增强它们对核酸酶的抗性并且可以增强它们进入细胞的能力。例如，可以使用硫代硫酸寡核苷酸。其它脱氧核苷酸类似物包括甲基膦酸酯、氨基磷酸酯、二硫代磷酸酯、N3’P5’-氨基磷酸酯和寡核糖核苷酸硫代磷酸酯以及它们的2’-O-烷基类似物和2’-O-甲基核糖核苷酸甲基膦酸酯。可替换地，可以使用混合主链寡核苷酸(“MBO”)。MBO包含硫代磷酸酯寡聚脱氧核苷酸的链段和适当放置的修饰寡脱氧核苷酸或寡核糖核苷酸的链段。MBO具有硫代磷酸酯键的链段和其它修饰寡核苷酸的其它链段，如甲基膦酸酯，其是非离子的、并且非常耐核酸酶或2’-O-烷基寡核糖核苷酸。制备修饰主链和混合主链寡核苷酸的方法在本领域中是已知的。

在本发明中所使用的反义多核苷酸的精确序列将取决于靶连接蛋白。在一种实施方式中，合适的连接蛋白反义多核苷酸可以包括多核苷酸如寡聚脱氧核苷酸，其选自列在表1中的以下序列：

表1

用于制备本文描述的合并多核苷酸组合物的合适的多核苷酸包括例如，针对连接蛋白Cx43的多核苷酸以及用于如在以上表1中所描述的连接蛋白26、30、31.1、32以及37的多核苷酸。

虽然在本发明中所使用的反义多核苷酸的精确序列将取决于靶连接蛋白，但对于连接蛋白43，已发现，具有以下序列的反义多核苷酸是特别适宜的：GTA ATT GCG GCA AGA AGA ATT GTTTCT GTC(SEQ.ID.NO:1)；GTA ATT GCG GCA GGA GGA ATTGTT TCT GTC(SEQ.ID.NO:2)；以及GGC AAG AGA CAC CAAAGA CAC TAC CAG CAT(SEQ.ID.NO:3)。

例如，用于连接蛋白26、31.1以及32的合适的反义多核苷酸具有以下序列：5’TCC TGA GCA ATA CCT AAC GAA CAA ATA(连接蛋白26)(SEQ.ID.NO:4)；5’CGT CCG AGC CCA GAA AGA TGAGGT C(连接蛋白31.1)(SEQ.ID.NO:9)；以及5’TTT CTT TTC TATGTG CTG TTG GTG A(连接蛋白32)(SEQ.ID.NO:12)。

根据本发明的方法有用的其它连接蛋白反义多核苷酸序列包括：

5’CAT CTC CTT GGT GCT CAA CC 3’(连接蛋白37)(SEQ.ID.NO:5)；

5’CTG AAG TCG ACT TGG CTT GG 3’(连接蛋白37)(SEQ.ID.NO:6)；

5’CTC AGA TAG TGG CCA GAA TGC 3’(连接蛋白30)(SEQ.ID.NO:7)；

5’TTG TCC AGG TGA CTC CAA GG 3’(连接蛋白30)(SEQ.ID.NO:8)；

5’AGA GGC GCA CGT GAG ACA C 3’(连接蛋白31.1)(SEQ.ID.NO:10)；以及

5’TGA AGA CAA TGA AGA TGT T 3’(连接蛋白31.1)(SEQ.ID.NO:11)。

可以通过任何方便和常规的方式根据它们的核苷酸序列来选择定向于连接蛋白的包括ODN的多核苷酸。例如，可以使用计算机程序MacVector和OligoTech(来自Oligos等，Eugene,Oregon,USA)。在选择以后，可以利用DNA合成仪来合成ODN。

多核苷酸同源物

本文讨论了同源性和同源物(例如，多核苷酸可以是连接蛋白mRNA中序列的补体的同源物)。这样的多核苷酸通常与相关序列具有至少约70%同源性、优选至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约97%或至少约99%的同源性，例如在至少约15、至少约20、至少约40、至少约100更多连续核苷酸(同源序列的)的区上。

可以基于本领域中的任何方法来计算同源性。例如UWGCG软件包提供了BESTFIT程序，该程序可以用来计算同源性(例如基于它的默认设置加以使用)(Devereux et al(1984)Nucleic AcidsResearch 12,p387-395)。PILEUP和BLAST算法可以用来计算同源性或将序列排成直线(通常基于它们的默认设置)，例如如在AltschulS.F.(1993)J Mol Evol 36:290-300;Altschul,S,F et al(1990)J MolBiol 215:403-10中所描述的。

通过National Center for Biotechnology Information(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)可以公开获得用于进行BLAST分析的软件。这种算法涉及首先通过识别在查询序列中长度W的短字来识别高得分序列对(HSP)，当对比在数据库序列中的相同长度的字时，上述短字匹配或满足一定的正估值阈值得分T。T被称作邻近字得分阈值(Altschul等人，上文)。这些初始邻近字命中作为种子，用于引发搜索以发现包含它们的HSP。沿着每个序列在两个方向扩展字命中，远到可以增加累计序列对比得分。当累计序列对比得分从其最大达到值下降量X时，当累积得分变成零或以下时，这是由于一个或多个负得分残基序列对比的累积，或达到任一序列的末端时，停止在每个方向的字命中的扩展。

BLAST算法参数W、T以及X确定了序列对比的敏感性和速度。BLAST程序使用字长(W)、BLOSUM62得分矩阵(参见Henikoffand Henikoff(1992)Proc.Natl.Acad Sci.USA 89:10915-10919)、序列对比(B)为50、期望值(E)为10、M=5、N=4、以及两条链的比较作为默认值。

BLAST算法对两个序列之间的相似性进行统计分析；参见例如，Karlin and Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5787。由BLAST算法提供的相似性的一种度量是最小总和概率(P(N))，其提供两个核苷酸或氨基酸序列之间的匹配将偶然发生的概率的指示。例如，如果在比较第一序列与第二序列时的最小总和概率小于约1、优选小于约0.1、更优选小于约0.01、以及最优选小于约0.001，则一序列被认为类似于另一序列。

同源序列通常不同于相关序列至少约(或不大于约)2、5、10、15、20个更多突变(其可以是替代、缺失或***)。可以穿过与计算同源性有关的上述任何区来测量这些突变。

同源序列通常以显著高于背景的水平来选择性地杂交于原始序列。通常利用中等至高严格性的条件(例如在约50°C至约60°C下的0.03M氯化钠和0.03M柠檬酸钠)来实现选择性杂交。然而，可以在本领域已知的任何适宜条件下来进行这样的杂交(参见Sambrook et al.(1989),Molecular Cloning:A Laboratory Manual)。例如，如果需要高严格性，则适宜的条件包括在60°C下的0.2xSSC。如果需要更低的严格性，则适宜的条件包括在60°C下的2xSSC。

肽和多肽抗连接蛋白剂

包括肽、拟肽、抗体、抗体片段等的结合蛋白也是间隙连接和半通道的合适调节剂。

结合蛋白包括，例如，单克隆抗体，多克隆抗体，抗体片段(包括，例如，Fab、F(ab’)₂以及Fv片断；单链抗体；单链Fv；以及单链结合分子如那些分子，其包括，例如，结合域，铰链，CH2和CH3域，重组抗体以及抗体片段，其能够结合抗原决定簇(即，分子的通常称作表位的部分)，其中使抗原决定簇接触特定抗体或其它结合分子。这些结合蛋白（包括抗体、抗体片段等）可以是嵌合的或人源化的或以其它方式变得在它们将给予的受治疗者中较少免疫原性的，并且可以加以合成、重组生产、或用表达文库生产。设想本领域已知的或以后发现的任何结合分子，如本文提及的和/或本领域中更详细描述的那些结合分子。例如，结合蛋白不仅包括抗体等，而且还包括配体、受体、拟肽、或其它结合片段或分子(例如，通过噬菌体展示产生的)，其结合于靶(例如连接蛋白、半通道、或相关分子)。

结合分子将通常具有期望的特异性，包括但不限于结合特异性，以及期望的亲和力。亲和力例如可以是大于或等于约10⁴ M^-1、大于或等于约10⁶ M^-1、大于或等于约10⁷ M^-1、大于或等于约10⁸ M^-1的K_a。甚至大于约10⁸ M^-1的亲和力也是适宜的，如等于或大于约10⁹ M^-1、约10¹⁰M^-1、约10¹¹ M^-1、以及约10¹² M^-1的亲和力。利用常规技术，可以容易确定根据本发明的结合蛋白的亲和力，例如由Scatchard et al.,1949Ann.N.Y.Acad.Sci.51:660描述的那些常规技术。

通过利用获自水疗法图表的数据，已提出，连接蛋白包含四个跨膜-跨越区和两个短细胞外环。连接蛋白的第一和第二胞外区的定位的进一步的特征在于所报道的抗肽抗体的生产，其中抗肽抗体用于相应表位在***间隙连接上的免疫定位。Goodenough D.A.J CellBiol 107:1817-1824(1988);Meyer R.A.,J Cell Biol 119:179-189(1992)。

由两个相邻细胞贡献的半通道的胞外域彼此“对接（停靠）”以形成完整的间隙连接通道。干扰这些胞外域的相互作用的试剂可以削弱细胞间通讯。已报道了间隙连接和半通道的肽抑制剂。参见例如Berthoud,V.M.et al.,Am J.Physiol.Lung Cell Mol.Physiol.279:L619-L622(2000);Evans,W.H.and Boitano,S.Biochem.Soc.Trans.29:606-612；以及De Vriese A.S.,et al.Kidney Int.61:177-185(2001)。对应于连接蛋白的细胞外环内的序列的短肽声称可以抑制细胞间通讯。Boitano S.and Evans W.Am J Physiol Lung Cell MolPhysiol 279:L623-L630(2000)。还报道了，肽用作由在成对爪蟾***中表达的连接蛋白(Cx)32产生的细胞间通道形成的抑制剂。Dahl G，et al.,Biophys J 67:1816-1822(1994)。Berthoud,V.M.和Seul,K.H.总结了这些结果中的一些。Am J.,Physiol.Lung Cell Mol.Physiol.279:L619–L622(2000)。

抗连接蛋白剂包括肽，所述肽包括对应于连接蛋白(例如，连接蛋白45、43、26、30、31.1、以及37)的跨膜区(例如，第一至第四)的氨基酸序列。抗连接蛋白剂可以包括这样的肽，该肽包括对应于连接蛋白45的部分跨膜区的氨基酸序列。抗连接蛋白剂包括具有包括SEQ.ID.NO:13的约5至20个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽、具有包括SEQ.ID.NO:13的约8至15个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽、或具有包括SEQ.ID.NO:13的约11至13个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽。其它实施方式涉及抗连接蛋白剂，其是具有这样的氨基酸序列的肽，该氨基酸序列包括SEQ.ID.NO:13的至少约5、至少约6、至少约7、至少约8、至少约9、至少约10、至少约11、至少约12、至少约13、至少约14、至少约15、至少约20、至少约25、或至少约30个邻接氨基酸。在本文提供的某些抗连接蛋白剂中，对应于在SEQ ID NO:13的位置46-75和199-228的氨基酸的连接蛋白45的胞外域可以用来开发特定的肽序列。本文描述的某些肽具有对应于在SEQ.ID.NO:13的位置46-75和199-228的区的氨基酸序列。肽不需要具有相同于SEQ.ID.NO:13的那些部分的氨基酸序列，并且可以进行保守氨基酸变化使得肽保留结合活性或功能活性。可替换地，肽可以靶向连接蛋白而不是胞外域的区(例如，并不对应于位置46-75和199-228的部分SEQ.ID.NO:13)。

此外，合适的抗连接蛋白剂包括这样的肽，该肽包括对应于连接蛋白43的部分跨膜区的氨基酸序列。抗连接蛋白剂包括具有包括SEQ.ID.NO:14的约5至20个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽、具有包括SEQ.ID.NO:14的约8至15个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽、具有包括SEQ.ID.NO:14的约11至13个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽。其它抗连接蛋白剂包括具有这样的氨基酸序列的肽，该氨基酸序列包括SEQ.ID.NO:14的至少约5、至少约6、至少约7、至少约8、至少约9、至少约10、至少约11、至少约12、至少约13、至少约14、至少约15、至少约20、至少约25、或至少约30个邻接氨基酸。其它抗连接蛋白剂包括对应于在SEQ.ID.NO:14的位置37-76和178-208处的氨基酸的连接蛋白43的胞外域。抗连接蛋白剂包括本文描述的肽，其具有对应于在SEQ.ID.NO:14的位置37-76和178-208处的区的氨基酸序列。这些肽不需要具有相同于SEQ.ID.NO:14的那些部分的氨基酸序列，并且可以进行保守氨基酸变化使得这些肽保留结合活性或功能活性。可替换地，肽可以靶向连接蛋白而不是胞外域的区(例如，并不对应于位置37-76和178-208的部分SEQ.ID.NO:14)。

连接蛋白45(SEQ ID NO.13)

Met Ser Trp Ser Phe Leu Thr Arg Leu Leu Glu Glu Ile His Asn His

1 5 10 15

Ser Thr Phe Val Gly Lys Ile Trp Leu Thr Val Leu Ile Val Phe Arg

20 25 30

Ile Val Leu Thr Ala Val Gly Gly Glu Ser Ile Tyr Tyr Asp Glu Gln

35 40 45

Ser Lys Phe Val Cys Asn Thr Glu Gln Pro Gly Cys Glu Asn Val Cys

50 55 60

Tyr Asp Ala Phe Ala Pro Leu Ser His Val Arg Phe Trp Val Phe Gln

65 70 75 80

Ile Ile Leu Val Ala Thr Pro Ser Val Met Tyr Leu Gly Tyr Ala Ile

85 90 95

His Lys Ile Ala Lys Met Glu His Gly Glu Ala Asp Lys Lys Ala Ala

100 105 110

Arg Ser Lys Pro Tyr Ala Met Arg Trp Lys Gln His Arg Ala Leu Glu

115 120 125

Glu Thr Glu Glu Asp Asn Glu Glu Asp Pro Met Met Tyr Pro Glu Met

130 135 140

Glu Leu Glu Ser Asp Lys Glu Asn Lys Glu Gln Ser Gln Pro Lys Pro

145 150 155 160

Lys His Asp Gly Arg Arg Arg Ile Arg Glu Asp Gly Leu Met Lys Ile

165 170 175

Tyr Val Leu Gln Leu Leu Ala Arg Thr Val Phe Glu Val Gly Phe Leu

180 185 190

Ile Gly Gln Tyr Phe Leu Tyr Gly Phe Gln Val His Pro Phe Tyr Val

195 200 205

Cys Ser Arg Leu Pro Cys Pro His Lys Ile Asp Cys Phe Ile Ser Arg

210 215 220

Pro Thr Glu Lys Thr Ile Phe Leu Leu Ile Met Tyr Gly Val Thr Gly

225 230 235 240

Leu Cys Leu Leu Leu Asn Ile Trp Glu Met Leu His Leu Gly Phe Gly

245 250 255

Thr Ile Arg Asp Ser Leu Asn Ser Lys Arg Arg Glu Leu Glu Asp Pro

260 265 270

Gly Ala Tyr Asn Tyr Pro Phe Thr Trp Asn Thr Pro Ser Ala Pro Pro

275 280 285

Gly Tyr Asn Ile Ala Val Lys Pro Asp Gln Ile Gln Tyr Thr Glu Leu

290 295 300

Ser Asn Ala Lys Ile Ala Tyr Lys Gln Asn Lys Ala Asn Thr Ala Gln

305 310 315 320

Glu Gln Gln Tyr Gly Ser His Glu Glu Asn Leu Pro Ala Asp Leu Glu

325 330 335

Ala Leu Gln Arg Glu Ile Arg Met Ala Gln Glu Arg Leu Asp Leu Ala

340 345 350

Val Gln Ala Tyr Ser His Gln Asn Asn Pro His Gly Pro Arg Glu Lys

355 360 365

Lys Ala Lys Val Gly Ser Lys Ala Gly Ser Asn Lys Ser Thr Ala Ser

370 375 380

Ser Lys Ser Gly Asp Gly Lys Asn Ser Val Trp Ile

385 390 395

连接蛋白43(SEQ ID NO.14)

Met Gly Asp Trp Ser Ala Leu Gly Lys Leu Leu Asp Lys Val Gln Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Thr Ala Gly Gly Lys Val Trp Leu Ser Val Leu Phe Ile Phe

20 25 30

Arg Ile Leu Leu Leu Gly Thr Ala Val Glu Ser Ala Trp Gly Asp Glu

35 40 45

Gln Ser Ala Phe Arg Cys Asn Thr Gln Gln Pro Gly Cys Glu Asn Val

50 55 60

Cys Tyr Asp Lys Ser Phe Pro Ile Ser His Val Arg Phe Trp Val Leu

65 70 75 80

Gln Ile Ile Phe Val Ser Val Pro Thr Leu Leu Tyr Leu Ala His Val

85 90 95

Phe Tyr Val Met Arg Lys Glu Glu Lys Leu Asn Lys Lys Glu Glu Glu

100 105 110

Leu Lys Val Ala Gln Thr Asp Gly Val Asn Val Asp Met His Leu Lys

115 120 125

Gln Ile Glu Ile Lys Lys Phe Lys Tyr Gly Ile Glu Glu His Gly Lys

130 135 140

Val Lys Met Arg Gly Gly Leu Leu Arg Thr Tyr Ile Ile Ser Ile Leu

145 150 155 160

Phe Lys Ser Ile Phe Glu Val Ala Phe Leu Leu Ile Gln Trp Tyr Ile

165 170 175

Tyr Gly Phe Ser Leu Ser Ala Val Tyr Thr Cys Lys Arg Asp Pro Cys

180 185 190

Pro His Gln Val Asp Cys Phe Leu Ser Arg Pro Thr Glu Lys Thr Ile

195 200 205

Phe Ile Ile Phe Met Leu Val Val Ser Leu Val Ser Leu Ala Leu Asn

210 215 220

Ile Ile Glu Leu Phe Tyr Val Phe Phe Lys Gly Val Lys Asp Arg Val

225 230 235 240

Lys Gly Lys Ser Asp Pro Tyr His Ala Thr Ser Gly Ala Leu Ser Pro

245 250 255

Ala Lys Asp Cys Gly Ser Gln Lys Tyr Ala Tyr Phe Asn Gly Cys Ser

260 265 270

Ser Pro Thr Ala Pro Leu Ser Pro Met Ser Pro Pro Gly Tyr Lys Leu

275 280 285

Val Thr Gly Asp Arg Asn Asn Ser Ser Cys Arg Asn Tyr Asn Lys Gln

290 295 300

Ala Ser Glu Gln Asn Trp Ala Asn Tyr Ser Ala Glu Gln Asn Arg Met

305 310 315 320

Gly Gln Ala Gly Ser Thr Ile Ser Asn Ser His Ala Gln Pro Phe Asp

325 330 335

Phe Pro Asp Asp Asn Gln Asn Ser Lys Lys Leu Ala Ala Gly His Glu

340 345 350

Leu Gln Pro Leu Ala Ile Val Asp Gln Arg Pro Ser Ser Arg Ala Ser

355 360 365

Ser Arg Ala Ser Ser Arg Pro Arg Pro Asp Asp Leu Glu Ile

370 375 380

抗连接蛋白肽可以包括对应于部分连接蛋白胞外域（具有保守氨基酸替代）的序列，使得肽是功能上活性的抗连接蛋白剂。示例性的保守氨基酸替代包括例如用另一种非极性氨基酸替代非极性氨基酸，用另一种芳族氨基酸替代芳族氨基酸，用另一种脂族氨基酸替代脂族氨基酸，用另一种极性氨基酸替代极性氨基酸，用另一种酸性氨基酸替代酸性氨基酸，用另一种碱性氨基酸替代碱性氨基酸，以及用另一种可电离氨基酸替代可电离氨基酸。

靶向连接蛋白43的示例性的肽列于以下表2中。M1、2、3以及4分别是指连接蛋白43的第一至第四跨膜区。E1和E2分别是指第一和第二细胞外环。

表2.细胞间通讯的肽类抑制剂(cx43)

表3提供了在抑制半通道或间隙连接功能中所使用的另外的示例性的连接蛋白肽。在其它实施方式中，对肽或它们的片断进行保守氨基酸变化。

表3.细胞间通讯的另外的肽类抑制剂(cx32、cx43)

表4提供了用于连接蛋白家族成员的细胞外环，其用来开发供使用的肽抑制剂（如本文描述的）。在某些非限制性实施方式中，列于表4中的肽以及它们的片断用作肽抑制剂。在其它非限制性实施方式中，该表4中的包含肽的约8至约15、或约11至约13个邻接氨基酸的肽是肽抑制剂。对肽或它们的片断可以进行保守氨基酸变化。

表4.用于各种连接蛋白家族成员的细胞外环

表5提供了用于连接蛋白家族成员的胞外域，其可以用来开发肽抗连接蛋白剂。列在表5中的肽以及它们的片断也可以用作肽抗连接蛋白剂。这样的肽可以包括该表5中肽序列的约8至约15、或约11至约13个邻接氨基酸。可以对肽或它们的片断进行保守氨基酸变化。

表5.胞外域

表6提供了参照连接蛋白40的细胞外环(E1和E2)示出的连接蛋白40的肽抑制剂。粗体氨基酸定向于连接蛋白40的跨膜区。

表6.Cx40肽抑制剂

表7提供了参照连接蛋白45的细胞外环(E1和E2)示出的连接蛋白45的肽抑制剂。粗体氨基酸定向于连接蛋白45的跨膜区。

表7.Cx45肽抑制剂

在某些实施方式中，优选的是，某些肽抑制剂可以阻断半通道而没有破坏现有的间隙连接。虽然不希望受限于任何特定理论或机制，但还是认为某些拟肽(例如，VCYDKSFPISHVR(SEQ.ID.NO:23)可以阻断半通道而没有引起间隙连接的解偶联(参见Leybeart et al.,Cell Commun.Adhes.10:251-257(2003))，或以较低剂量这样做。还可以使用肽SRPTEKTIFII(SEQ.ID.NO:19)，例如以阻断半通道而没有间隙连接的解偶联。肽SRGGEKNVFIV(SEQ.ID.NO:107)可以用作对照序列(DeVriese et al.,Kidney Internat.61:177-185(2002))。用于连接蛋白45的肽抑制剂的实例是YVCSRLPCHP(SEQ.ID.NO:108)、QVHPFYVCSRL(SEQ.ID.NO:109)、FEVGFLIGQYFLY (SEQ.ID.NO:110)、GQYFLYGFQVHP(SEQ.ID.NO:111)、GFQVHPFYVCSR(SEQ.ID.NO:112)、AVGGESIYYDEQ(SEQ.ID.NO.113)、YDEQSKFVCNTE(SEQ.ID.NO:114)、NTEQPGCENVCY (SEQ.ID.NO:115)、CYDAFAPLSHVR(SEQ.ID.NO:116)、FAPLSHVRFWVF(SEQ.ID.NO:117)和 LIGQY (SEQ.ID.NO:118)、QVHPF(SEQ.ID.NO:119)、 YVCSR (SEQ.ID.NO:120)、SRLPC(SEQ.ID.NO:121)、 LPCHP (SEQ.ID.NO:122)和GESIY(SEQ.ID.NO:123)、 YDEQSK (SEQ.ID.NO:124)、SKFVCN(SEQ.ID.NO:125)、 TEQPGCEN (SEQ.ID.NO:126)、VCYDAFAP(SEQ.ID.NO:127)、 LSHVRFWVFQ (SEQ.ID.NO:128)。这些肽的长度可以仅为3个氨基酸，包括SRL、PCH、LCP、CHP、IYY、SKF、QPC、VCY、APL、HVR，或更长，例如：LIQYFLYGFQVHPF(SEQ.ID.NO:129)、VHPFYCSRLPCHP (SEQ.ID.NO:130)、VGGESIYYDEQSKFVCNTEQPG (SEQ.ID.NO:131)、TEQPGCENVCYDAFAPLSHVRF (SEQ.ID.NO:132)、AFAPLSHVRFWVFQ(SEQ.ID.NO:133)。

表8

表8A

人连接蛋白43，来自GenBank登录号M65188(SEQ.ID.NO:134)

表8B

人连接蛋白43(SEQ.ID.NO:135)

间隙连接调节剂

本文描述的某些抗连接蛋白剂能够调节或影响分子转运到细胞中和之外(例如阻断或抑制)。因此，本文描述的某些间隙连接调节剂可以调节细胞通讯(例如细胞与细胞)。某些间隙连接调节剂可以调节或影响分子在细胞质和周质间隙或细胞外间隙之间的传递。这样的调节剂通常靶向半通道(还称作连接子)，该半通道可以独立参与小分子在细胞质和细胞外间隙或组织之间的交换。因此，本文提供的化合物可以直接或间接减少细胞之间(经由间隙连接)或细胞和细胞外间隙或组织之间(经由半通道)的偶联，并且将分子从细胞转运到细胞外间隙中的的调节是在本发明的某些化合物和实施方式的范围内。

能够诱导对分子通过间隙连接或半通道的通道(例如转运)的所期望的抑制的任何分子可以用于本发明的实施方式中。在特定实施方式中，还提供了这样的化合物，该化合物调节分子通过间隙连接或半通道的通道(例如，那些调节分子从细胞的细胞质进入细胞外间隙的通道的化合物)。在有或没有间隙连接解偶联的情况下，这样的化合物可以调节分子通过间隙连接或半通道的通道。这样的化合物包括，例如，结合蛋白、多肽、以及其它有机化合物，其可以，例如，全部或部分地阻断间隙连接或半通道的功能或活性。

如在本文中所使用的，“间隙连接调节剂”可以广泛地包括那些药剂或化合物，其可以全部或部分地防止、减少或调节半通道或间隙连接的活性、功能、或形成。在某些实施方式中，间隙连接调节剂可以全部或部分地防止或减少半通道或间隙连接的功能。在某些实施方式中，间隙连接调节剂诱导半通道或间隙连接的全部或部分闭合。在其它实施方式中，间隙连接调节剂可以全部或部分地阻断半通道或间隙连接。在某些实施方式中，间隙连接调节剂可以全部或部分地减少或防止半通道或间隙连接的开放。在某些实施方式中，通过间隙连接调节剂进行的间隙连接或半通道的所述阻断或闭合通过预防或减少小分子通过开发通道流入和流出细胞外间隙或周质间隙而可以减少或抑制细胞外半通道通讯。拟肽、以及间隙连接磷酸化化合物（其阻断半通道和/或间隙连接开放）目前是优选的。

在某些实施方式中，间隙连接调节剂可以防止、减少或改变半通道或间隙连接的活性或功能。如在本文中所使用的，间隙连接活性或功能的改变可以包括闭合间隙连接，闭合半通道、和/或分子或离子通过间隙连接和/或半通道的通道。

示例性的间隙连接调节剂可以包括但不限于多肽(例如，拟肽、抗体、它们的结合片段、以及合成构建物)、和其它间隙连接封闭剂、以及间隙连接蛋白磷酸化剂。在授予Jensen等人的美国专利第7,153,822号、美国专利第7,250,397号、以及各类专利公开中已报道了用于闭合间隙连接的示例性化合物(例如，磷酸化连接蛋白43酪氨酸残基)。在Green等人，WO2006134494中报道了示例性的肽和拟肽。还参见Gourdie等人，参见WO2006069181，以及Tudor等人，参见WO2003032964。

如在本文中所使用的，“间隙连接磷酸化剂”可以包括那些药剂或化合物，其能够诱导连接蛋白氨基酸残基的磷酸化以便诱导间隙连接或半通道闭合。磷酸化的间隙连接调节示例性部位包括在连接蛋白上的酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基中的一个或多个。在某些实施方式中，磷酸化的调节可以发生在一种或多种连接蛋白上的一个或多个残基上。示例性的间隙连接磷酸化剂在本领域中是众所周知的并且可以包括，例如，c-Src酪氨酸激酶或其它G蛋白偶联受体激动剂。参见Giepmans B(2001)J.Biol.Chem.,Vol.276,Issue 11,8544-8549。在一种实施方式中，对一种或多种这些残基的磷酸化的调节会影响半通道功能，尤其通过闭合半通道。在另一种实施方式中，对一种或多种这些残基的磷酸化的调节会影响间隙连接功能，尤其通过闭合间隙连接。靶向连接蛋白43间隙连接和半通道的闭合的间隙连接磷酸化剂是优选的。

包括结合蛋白(例如，抗体、抗体片段等)、肽、拟肽、以及拟肽的多肽化合物是间隙连接的合适的调节剂。

结合蛋白包括，例如，单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段(包括，例如，Fab、F(ab')2以及Fv片断)；单链抗体；单链Fv；以及单链结合分子如那些单链结合分子，其包括，例如，结合域、铰链、CH2以及CH3域、重组抗体以及抗体片段，其能够结合抗原决定簇(即，分子的一部分，通常称作表位)，使得该抗原决定簇接触特定抗体或其它结合分子。这些结合蛋白（包括抗体、抗体片段等）可以是嵌合的或人源化的或以其它方式变得在它们将给予的受治疗者中是较少免疫原性的，并且可以合成、重组生产、或用表达文库产生。设想本领域中已知的或以后发现的任何结合蛋白，如本文提及的和/或本领域中更详细地描述的那些结合蛋白。例如，结合蛋白不仅包括抗体等，而且还包括配体、受体、拟肽、或其它结合片段或分子(例如，通过噬菌体展示产生的)，其结合于靶(例如，连接蛋白、连接子、间隙连接、或相关分子)。

结合蛋白将通常具有期望的特异性，包括但不限于结合特异性、以及期望的亲和力。亲和力，例如，可以是大于或等于约104M-1、大于或等于约106M-1、大于或等于约107M-1、大于或等于约108M-1的Ka。甚至大于约108M-1的亲和力是合适的，如等于或大于约109M-1、约1010M-1、约1011M-1、以及约1012M-1的亲和力。利用常规技术，可以容易地确定根据本发明的结合蛋白的亲和力，例如由Scatchard et al.,(1949)Ann.N.Y.Acad.Sci.51:660描述的那些常规技术。

本发明包括使用肽(包括拟肽和拟肽类)来调节间隙连接和半通道。通过使用获自水疗法图表的数据，已提出，连接蛋白包含四个跨膜-跨越区以及两个短细胞外环。连接蛋白的第一和第二胞外区的定位的进一步的特征在于用于在***间隙连接上相应表位的免疫定位的抗肽抗体的所报道的生产。Goodenough D.A.(1988)J CellBiol 107:1817-1824;Meyer R.A.(1992)J Cell Biol 119:179-189。

可以体外合成肽或它们的变体，例如，通过固相肽合成方法或通过酶催化肽合成方法或借助于重组DNA技术。固相肽合成方法是一种已确立和广泛使用的方法，该方法描述在如以下参考文献中：Stewart et al.,(1969)Solid Phase Peptide Synthesis,W.H.FreemanCo.,San Francisco;Merrifield,(1963)J.Am.Chem.Soc.852149;Meienhofer in“Hormonal Proteins and Peptides,”ed.;C.H.Li,Vol.2(Academic Press,1973),pp.48-267；以及Bavaay and Merrifield,“ThePeptides,”eds.E.Gross and F.Meienhofer,Vol.2(Academic Press,1980)pp.3-285。可以通过以下方法来进一步纯化这些肽：在免疫亲和或离子交换柱上的分馏；乙醇沉淀法；反相HPLC；在硅胶或在阴离子交换树脂如DEAE上的层析；色谱聚焦；SDS-PAGE；硫酸铵沉淀；使用，例如，Sephadex G-75的凝胶过滤；配体亲和层析；或从非极性溶剂或非极性/极性溶剂混合物结晶或沉淀。通过结晶或沉淀进行的纯化是优选的。

由两个相邻细胞贡献的半通道的胞外域彼此“对接（停靠）”以形成完整的间隙连接通道。干扰这些胞外域的相互作用的试剂可以削弱细胞间通讯，或干扰对细胞外环境的半通道开放。

间隙连接调节剂包括这样的肽，该肽包括对应于连接蛋白(例如，连接蛋白45、43、26、30、31.1、以及37)的跨膜区(例如，第一至第四)的氨基酸序列。在本发明中，优选使用包括这样的肽的间隙连接调节剂，所述肽包括对应于连接蛋白43的部分跨膜区的氨基酸序列。

间隙连接调节剂可以包括这样的肽，该肽包括对应于连接蛋白45的部分跨膜区的氨基酸序列。间隙连接调节剂包括具有包含SEQ.ID.NO:13的约5至20个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽、具有包含SEQ.ID.NO:13的约8至15个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽、或具有包含SEQ.ID.NO:13的约11至13个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽。其它实施方式涉及这样的间隙连接调节化合物，该化合物是具有氨基酸序列的肽，其中氨基酸序列包括SEQ.ID.NO:13的至少约5、至少约6、至少约7、至少约8、至少约9、至少约10、至少约11、至少约12、至少约13、至少约14、至少约15、至少约20、至少约25、或至少约30个邻接氨基酸。在本文提供的某些间隙连接调节化合物中，对应于SEQ ID NO:13的位置46-75和199-228处的氨基酸的连接蛋白45的胞外域可以用来开发特定的肽序列。本文描述的某些肽具有对应于在SEQ.ID.NO:13的位置46-75和199-228处的区的氨基酸序列。这些肽并不需要具有相同于SEQ.ID.NO:13的那些部分的氨基酸序列，并且可以进行保守氨基酸变化，使得这些肽保留结合活性或功能活性。可替换地，该肽可以靶向连接蛋白而不是胞外域的区(例如，并不对应于位置46-75和199-228的部分SEQ.ID.NO:13)。

此外，合适的间隙连接调节剂可以包括这样的肽，该肽包括对应于连接蛋白43的部分跨膜区的氨基酸序列。间隙连接调节剂包括具有包括SEQ.ID.NO:14的约5至20个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽、具有包括SEQ.ID.NO:14的约8至15个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽、或具有包括SEQ.ID.NO:14的约11至13个邻接氨基酸的氨基酸序列的肽。其它间隙连接调节剂包括具有这样的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列包括SEQ.ID.NO:14的至少约5、至少约6、至少约7、至少约8、至少约9、至少约10、至少约11、至少约12、至少约13、至少约14、至少约15、至少约20、至少约25、或至少约30个邻接氨基酸。其它间隙连接调节剂包括对应于SEQ.ID.NO:14的位置37-76和178-208处的氨基酸的连接蛋白43的胞外域。间隙连接调节剂包括本文描述的肽，这些肽具有这样的氨基酸序列，该氨基酸序列对应于在SEQ.ID.NO:14的位置37-76和178-208处的区。这些肽不需要具有相同于SEQ.ID.NO:14的那些部分的氨基酸序列，并且可以进行保守氨基酸变化，使得这些肽保留结合活性或功能活性。可替换地，肽可以靶向连接蛋白而不是胞外域的区(例如，并不对应于位置37-76和178-208的部分SEQ.ID.NO:14)。

其它抗连接蛋白剂包括连接蛋白羧基末端多肽。参见Gourdie等人，WO2006/069181。

间隙连接调节剂–其它抗连接蛋白剂

间隙连接调节剂包括这样的药剂，其可以关闭或阻断间隙连接和/或半通道或以其它方式防止或减少细胞与细胞通讯（经由间隙连接）或防止或减少经由半通道与细胞外环境的细胞通讯。它们包括可以全部或部分地防止、减小或抑制半通道或间隙连接的活性、功能、或形成的药剂或化合物。

在某些实施方式中，间隙连接调节剂会诱导半通道或间隙连接的全部或部分闭合。在其它实施方式中，间隙连接调节剂会全部或部分地阻断半通道或间隙连接。在某些实施方式中，间隙连接调节剂会全部或部分地减少或防止半通道或间隙连接的开放。

在某些实施方式中，通过防止或减少小分子通过开放通道流向和流出细胞外间隙或周质间隙，间隙连接或半通道的所述阻断或闭合（通过间隙连接调节剂）可以减少或抑制细胞外半通道通讯。

在授予Jensen等人的美国专利第7,153,822号、美国专利第7,250,397号、以及各类专利公开中已报道了用于闭合半通道或间隙连接的间隙连接调节剂(例如，磷酸化连接蛋白43酪氨酸残基)。还参见Gourdie等人，参见WO2006069181，关于连接蛋白羧基末端多肽，据说其可以，例如，抑制ZO-1蛋白结合。Gourdie等人，WO2006069181描述了包含这样的肽的配方的应用。

如在本文中所使用的，“间隙连接磷酸化剂”可以包括那些药剂或化合物，其能够诱导连接蛋白氨基酸残基的磷酸化以便诱导间隙连接或半通道闭合。磷酸化的示例性部位包括在连接蛋白上的酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基中的一种或多种。在某些实施方式中，磷酸化的调节可以发生在一种或多种连接蛋白上的一种或多种残基上。示例性的间隙连接磷酸化剂在本领域中是众所周知的并且可以包括，例如，c-Src酪氨酸激酶或其它G蛋白偶联受体激动剂。参见Giepmans B,J.Biol.Chem.,Vol.276,Issue 11,8544-8549,March16,2001。在一种实施方式中，在一种或多种这些残基上的磷酸化的调节会影响半通道功能，尤其通过闭合半通道。在另一种实施方式中，在一种或多种这些残基上的磷酸化调节会影响间隙连接功能，尤其通过闭合间隙连接。靶向连接蛋白43间隙连接和半通道的闭合的间隙连接磷酸化剂是优选的。

在另一个方面，间隙连接调节剂可以包括，例如，脂族醇；辛醇；庚醇；***(例如，氟烷)、***、氟烷、丙泊酚以及硫喷妥（戊硫代巴比妥）；花生四烯酸乙醇胺；芳氨基苯甲酸酯(FFA：氟芬那酸和类似的衍生物，其是亲脂的)；甘珀酸；查耳酮；(2’,5’-二羟基查耳酮)；CHF(氯羟基呋喃酮)；CMCF(3-氯-4-(氯甲基)-5-羟基-2(5H)-呋喃酮)；***；多柔比星(以及其它蒽醌衍生物)；类花生酸血栓烷A(2)(TXA(2))模拟物；NO(一氧化氮)；脂肪酸(例如，花生四烯酸、油酸以及脂肪氧合酶代谢产物；芬那酸(氟芬那酸(FFA)、尼氟酸(NFA)以及甲氯芬那酸(MFA))；染料木黄酮；甘草次酸(GA)：18a-甘草次酸和8-β-甘草次酸、以及它们的衍生物；林旦；溶血磷脂酸；甲氟喹；甲萘醌；2-甲基-1,4-萘醌、维生素K(3)；萘酚平；冈田酸；油酰胺；油酸；PH调节剂，通过细胞内酸化；例如酸化剂；多不饱和脂肪酸；脂肪酸GJIC抑制剂(例如，油酸和花生四烯酸)；奎尼定；奎宁；所有反式视黄酸；以及他莫昔芬。

剂型和配方以及给药

可以同时、单独或顺序地并以任何次序给予治疗有效量的每种联合伙伴(例如，抗连接蛋白多核苷酸和抗连接蛋白肽或拟肽)。这些药剂可以分别地或作为固定组合来给予。当未作为固定组合给予时，优选的方法包括顺序给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，在物理上或在伤口治疗过程中，它们的每一种或两种以小于当单独给予药剂时（即，当它们未联合给予时）的量或剂量提供。所给予药剂的上述较少量通常为当单独给予药剂时的量的约二十分之一至约十分之一，并且可以是当单独给予时的量的约八分之一、约六分之一、约五分之一、约四分之一、约三分之一、以及约一半。优选地，在彼此至少约半小时内顺序地给予药剂。还可以在彼此约1小时、约1天至约1周、或其它认为适当的时间内给予药剂。优选地，在给予抗连接蛋白剂（其阻断或减少连接蛋白表达或半通道或间隙连接的形成，例如通过连接蛋白表达的向下调节）以前，给予抗连接蛋白肽或抗连接蛋白拟肽，例如，抗连接蛋白剂，其可以阻断或减少半通道开放。优选地，抗连接蛋白剂是抗连接蛋白43剂。

本发明的药剂可以给予需要治疗的受治疗者，如患有本文提及的任何疾病或病症的受治疗者。因此可以改善受治疗者的状态。因此，通过治疗，抗连接蛋白剂可以用于治疗受治疗者的身体。它们可以用于制备治疗本文提及的任何病症的药物。因此，根据本发明，提供了配方，借此可以以瞬时和部位特异性方式向下调节细胞间通信。

抗连接蛋白剂可以以基本上分离的形式存在。应当理解，产品可以与载体或稀释剂混合，该载体或稀释剂将不会干扰产品的预期目的，并且仍然被看作基本上分离的。本发明的产品还可以以基本上纯化的形式，在这种情况下，它将通常包括约80%、85%、或90%，例如至少约95%、至少约98%或至少约99%的多核苷酸(或其它抗连接蛋白剂)或制剂的干质量。

取决于预期的给药途径，本发明的医药产品、药物组合物、联合制剂以及药物可以，例如，采取以下形式：溶液、混悬剂、滴注剂、药膏、乳膏剂、凝胶剂、泡沫、软膏剂、乳剂、洗剂、涂剂、缓释剂型、或散剂，并且通常包含约0.l%-95%的活性组分，优选约0.2%-70%。其它合适的剂型包括基于pluronic凝胶的剂型、基于羧甲基纤维素(CMC)的剂型、以及基于羟丙基甲基纤维素(HPMC)的剂型。合适的剂型（包括pluronic凝胶）具有例如约10%至约15%，适宜地约12%的pluronic凝胶。其它有用的剂型包括缓慢或延迟释放制剂。

可以利用合适的胶凝剂，包括但不限于明胶、黄蓍胶、或纤维素衍生物来制备凝胶剂或胶冻剂，并且凝胶剂或胶冻剂可以包括甘油（作为保湿剂）、软化剂、以及防腐剂。软膏剂是半固体制剂，该半固体制剂由加入到脂肪基质、蜡基质、或合成基质中的活性组分构成。合适的乳膏剂的实例包括但不限于油包水乳剂和水包油乳剂。可以利用合适的乳化剂来配制油包水乳膏剂，其中乳化剂的性能类似但不限于脂肪醇如十六醇或十六醇十八醇混合物以及乳化蜡的性能。可以利用乳化剂如聚西托醇乳化蜡来配制水包油乳膏剂。合适的性能包括在广泛的pH值范围内改进乳状液的粘度以及物理和化学稳定性的能力。水溶性或水溶混性膏基（膏用底物）可以包含防腐剂体系并且还可以加以缓冲以维持可接受的生理pH。

可以配制泡沫制剂以利用惰性推进剂经由合适的涂药器从加压气雾罐进行递送。用于配制泡沫基质的合适的赋形剂包括但不限于丙二醇、乳化蜡、十六醇、以及硬脂酸甘油酯。潜在的防腐剂包括羟苯甲酯和羟苯丙酯。

优选地，本发明的药剂与药用载体或稀释剂组合以产生药物组合物。合适的载体和稀释剂包括等渗盐水溶液，例如磷酸缓冲盐溶液。合适的稀释剂和赋形剂还包括，例如，水、盐水、葡萄糖、甘油等、以及它们的组合。此外，如果需要的话，还可以存在一些物质如湿润剂或乳化剂、稳定剂或pH缓冲剂。

术语“药用载体”是指任何药物载体，该药物载体本身并不诱导对接受组合物的个体有害的抗体的生产，并且其可以给予而没有过分的毒性。合适的载体可以是较大的、缓慢代谢的大分子如蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、以及氨基酸共聚物。

还可以存在药用盐，例如，无机酸盐如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等；以及有机酸的盐如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐等。

合适的载体材料包括任何载体或（媒介物），其通常用作用于乳膏剂、洗剂、凝胶剂、乳剂、洗剂或涂剂（用于局部给药）的基质。实例包括乳化剂、惰性载体（包括烃基质）、乳化基质、非毒性溶剂或水溶性基质。特别合适的实例包括pluronics、HPMC、CMC以及其它基于纤维素的组分、羊毛脂、硬石蜡、液体石蜡、黄软石蜡或软性白石蜡、白蜂蜡、黄蜂蜡、十六醇十八醇混合物、十六醇、二甲基硅氧烷、乳化蜡、肉豆蔻酸异丙酯、微晶蜡、油醇以及硬脂醇。

优选地，药用载体或媒介物是凝胶，适宜地非离子型聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物凝胶，例如，Pluronic凝胶，优选PluronicF-127(BASF Corp.)。该凝胶是特别优选的，因为它在低温下是液体但在生理温度下会快速凝固，这可以将药剂的释放限制于施加部位或紧邻上述部位。

在本发明的剂型（配方）中还可以包括助剂如酪蛋白、明胶、白蛋白、胶剂、藻酸钠、羧甲基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素或聚乙烯醇。

其它合适的剂型（配方）包括基于pluronic凝胶的剂型、基于羧甲基纤维素(CMC)的剂型、以及基于羟丙基甲基纤维素(HPMC)的剂型。组合物可以被配制成用于递送的任何期望的形式，其包括局部、滴注、胃肠道外、肌内、皮下、或经皮给予。其它有用的剂型包括缓慢或延迟释放制剂。

在抗连接蛋白剂是核酸（如多核苷酸）的情况下，哺乳动物细胞对核酸的摄取可以通过多种已知的转染技术来增强，例如那些包括使用转染剂的技术。可以与某些抗连接蛋白剂（包括多核苷酸）一起来使用这样的技术。给予的剂型可以包含上述转染剂。这些药剂的实例包括阳离子剂(例如磷酸钙和DEAE-葡聚糖)和脂转染剂（lipofectants）(例如，lipofectam^TM和transfectam^TM)、以及表面活性剂。

在抗连接蛋白剂包括多核苷酸的情况下，方便地，剂型进一步包括表面活性剂以协助多核苷酸细胞渗透，或剂型可以包含任何合适的负荷剂（填充剂）。可以包括任何合适的非毒性表面活性剂，如DMSO。可替换地，可以包括经皮渗透剂如尿素。

对于给定受治疗者或病症的有效剂量可以通过例行试验或本领域中已知或以后开发的其它方法来确定。例如，为了配制一定范围的剂量值，可以使用细胞培养试验和动物研究。上述化合物的剂量优选在这样的剂量范围内，其对于至少50%的群体是治疗有效的，并且在该水平下呈现很少或不呈现毒性。

在本发明的方法和组合物中采用的每种抗连接蛋白剂的有效剂量可以随多个因素而变化，这些因素包括所采用的特定抗连接蛋白剂、合作伙伴、给药方式、给药频率、待治疗的病症、待治疗病症的严重性、给药途径、待治疗患者亚群体的需要或个别患者的需要，上述不同需要可以起因于年龄、性别、体重、有关的医疗条件（患者特有的）。

给予患者的抗连接蛋白剂的剂量将取决于各种因素如患者的年龄、体重和一般情况、待治疗的病症、以及要给予的特定抗连接蛋白剂。

抗连接蛋白剂的合适的治疗有效剂量可以是约0.001至约1mg/kg体重如约0.01至约0.4mg/kg体重。然而，合适的剂量可以是约0.001至约0.1mg/kg体重如约0.01至约0.050mg/kg体重。

约1至100、100-200、100或200-300、100或200或300-400、以及100或200或300或400-500微克的抗连接蛋白剂的治疗有效剂量是适当的。约1-1000微克的剂量也是适当的。还可以使用高达2毫克的剂量。当以敷料的形式提供抗连接蛋白剂时，可以适当地调节剂量，通常向上调节以维持期望的总给予剂量。

可替换地，在抗连接蛋白寡核苷酸或抗连接蛋白拟肽的情况下，在组合物中的每种间隙连接调节剂的剂量可以通过参照相对于将施加区域的大小、长度、深度、面积或体积的组合物的浓度来确定。例如，在某些局部施加中，可以基于药物组合物的质量(例如克)或浓度(例如，μg/ul)/施加区域的长度、深度、面积、或体积来计算药物组合物的剂量。有用的剂量范围为约1至约10微克/平方厘米伤口大小。某些剂量将是约1-2、约1-5、约2-4、约5-7、以及约8-10微克/平方厘米伤口大小。其它有用的剂量是大于约10微克/平方厘米伤口大小，其包括至少约15微克/平方厘米伤口大小、至少约20微克/平方厘米伤口大小、至少约25微克/平方厘米伤口大小、约30微克/平方厘米伤口大小、至少约35微克/平方厘米伤口大小、至少约40微克/平方厘米伤口大小、至少约50微克/平方厘米伤口大小、以及至少约100至至少约150微克/平方厘米伤口大小。其它剂量包括约150-200微克/平方厘米、约200-250微克/平方厘米、约250-300微克/平方厘米、约300-350微克/平方厘米、约350-400微克/平方厘米、以及约400-500微克/平方厘米。

在某些实施方式中，可以在治疗部位和/或邻近治疗部位，以约0.01微摩尔(μM)或0.05μM至约200μM、或高达300μM或高达1000μM或高达2000μM或高达3200μM或更大的最终浓度、以及在这些剂量数值内的任何剂量和剂量范围来施加抗连接蛋白剂组合物。优选地，以约0.05μM至约100μM的最终浓度来施加反义多核苷酸组合物，更优选地，以约1.0μM至约50μM的最终浓度来施加抗连接蛋白剂组合物，并且更优选地，以约5-10μM至约30-50μM的最终浓度来施加抗连接蛋白剂组合物。另外，以约8μM至约20μM的最终浓度来施加组合的抗连接蛋白剂组合物，并且可替换地，以约10μM至约20μM的最终浓度、或以约10至约15μM的最终浓度来施加抗连接蛋白剂组合物。在某些其它实施方式中，以约10μM的最终浓度来施加抗连接蛋白剂。在又一种实施方式中，以约1-15μM的最终浓度来施加抗连接蛋白剂组合物。在其它实施方式中，以约20μM、30μM、40μM、50μM、60μM、70μM、80μM、90μM、100μM、10-200μM、200-300μM、300-400μM、400-500μM、500-600μM、600-700μM、700-800μM、800-900μM、900-1000或1000-1500μM、或1500μM-2000μM或2000μM-3000μM或更大来施加抗连接蛋白剂。

抗连接蛋白剂的剂量包括，例如，约0.1-1、1-2、2-3、3-4、或4-5微克(μg)、约5至约10μg、约10至约15μg、约15至约20μg、约20至约30μg、约30至约40μg、约40至约50μg、约50至约75μg、约75至约100μg、约100μg至约250μg、以及250μg至约500μg。如上文所述，还提供了0.5至约1.0毫克或更大的剂量。剂量容积将取决于待治疗部位的大小，并且可以为，例如，约25-100μL至约100-200μL、约200-500μL至约500-1000μL。毫升剂量还适用于更大的治疗部位。

其它剂量水平在约1纳克(ng)/kg和约1mg/kg体重/天的本文描述的每种药剂之间。在某些实施方式中，每种受治疗者化合物的剂量将通常在约1ng至约1微克/kg体重、约1ng至约0.1微克/kg体重、约1ng至约10ng/kg体重、约10ng至约0.1微克/kg体重、约0.1微克至约1微克/kg体重、约20ng至约100ng/kg体重、约0.001mg至约0.01mg/kg体重、约0.01mg至约0.1mg/kg体重、或约0.1mg至约1mg/kg体重的范围内。在某些实施方式中，每种受治疗者化合物的剂量将通常在约0.001mg至约0.01mg/kg体重、约0.01mg至约0.1mg/kg体重、约0.1mg至约1mg/kg体重的范围内。如果使用多于一种的抗连接蛋白剂，则每种抗连接蛋白剂的剂量无需在与其它相同的范围内。例如，一种抗连接蛋白剂的剂量在约0.01mg至约10mg/kg体重之间，而另一种抗连接蛋白剂的剂量可以在约0.1mg至约1mg/kg体重之间。

本文提及的所有剂量和剂量范围适用于，例如，抗连接蛋白寡核苷酸。这些剂量范围还适用于，例如，抗连接蛋白肽、抗连接蛋白模拟肽以及抗连接蛋白拟肽。

方便地，以足够量给予抗连接蛋白剂，以在给予以后，向下调节连接蛋白的表达、或调节间隙连接形成或连接子开放至少约0.5至1小时、至少约1-2小时、至少约2-4小时、至少约4-6小时、至少约6-8小时、至少约8-10小时、至少约12小时、或至少约24小时。

在本发明的组合物和方法中，每种抗连接蛋白剂的剂量还可以通过参照相对于将施加区域的大小、长度、深度、面积或体积的组合物的浓度来确定。例如，在某些局部和其它用途中，例如，滴注法，可以基于药物组合物的质量(例如，微克)或浓度(例如，μg/μl)/施加区域的长度、深度、面积、或体积来计算药物组合物的剂量。

如本文所述，联合给予的抗连接蛋白多核苷酸、肽或拟肽的剂量，或连同任何一种或两种给予的其它抗连接蛋白剂的剂量，可以从当单独给予时的剂量向下调节。

多种药剂的结合使用可以减少任何个别药剂的需要剂量，这是因为不同药剂的效应的起始和持续时间可以是互补的。在一种优选的实施方式中，两种或更多种抗连接蛋白剂的结合使用具有加性、协同或超加性效应。

在某些情况下，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的组合、或连同任何一种或两种给予的其它抗连接蛋白剂具有加性效应。在其他情况下，上述组合可以具有大于加性效应的效应。这样的效应在本文中称作“超加性”效应，并且可以起因于协同或加强的相互作用。

术语“伤口愈合的超加性促进”是指通过给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的组合、或连同任何一种或两种给予的其它抗连接蛋白剂所产生的平均伤口愈合统计学上显著高于通过单独给予任何一种制剂所产生的伤口愈合的总和。不管是通过组合给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽、或连同任何一种或两种所给予的其它抗连接蛋白剂所产生的“统计学上显著高于”个别化合物的预期的加性值可以通过各种如本文描述的和/或本领域普通技术人员已知的统计方法来确定。术语“协同”是指一种类型的超加性抑制，其中抗连接蛋白多核苷酸和抗连接蛋白肽或拟肽、或连同任何一种或两种给予的其它抗连接蛋白剂，单独地具有促进伤口愈合的能力。术语“增强”是指一种类型的超加性效应，其中抗连接蛋白多核苷酸、抗连接蛋白肽或拟肽、或连同任何一种或两种给予的其它抗连接蛋白剂单独地具有促进伤口愈合的增加的能力。

通常，增强可以通过确定当与在它们的治疗组中通过单独治疗所产生的平均伤口愈合增加的总和比较时，在治疗组中联合治疗是否产生统计显著超加性的平均伤口愈合增加来评估。平均伤口愈合增加可以计算为对照组和治疗组平均伤口愈合之间的差异。伤口愈合的分数增加，“有偏差分数”(Fa)，可以通过用对照组平均伤口愈合除治疗组平均伤口愈合增加来计算。对统计显著增强的测试需要计算每个治疗组的Fa。联合治疗的预期加性Fa可以看作是来自接受组合物的任何要素的组的平均Fa的总和。双尾单样本T检验，例如，可以用来估计通过实验获得的结果如何可能是仅由于偶然，如由治疗值所度量的。小于0.05的Ap值被认为是统计显著的，即，不可能仅是由于偶然。因此，联合治疗组的Fa必须统计学上显著高于单要素治疗组的预期加性Fa，以认为联合导致增强的超加性效应。

是否协同效应来自联合治疗可以通过中间效应/联合指数等热辐射测量图方法来估计(Chou,T.,and Talalay,P.(1984)Ad.EnzymeReg.22:27-55)。在该方法中，基于一些参数，计算不同剂量-效应水平的联合指数(CI)值，其中上述参数来自单独的抗连接蛋白剂的中间效应图、单独可用于伤口愈合的一种或多种药剂、以及具有固定摩尔比率的两种的组合。CI值of & lt；1表示协同作用、CI-1表示加性效应、以及CP1表示拮抗效应。该分析可以利用计算机软件工具来进行，如CalcuSyn,Windows Software for Dose Effect Analysis(Biosoft(D,Cambridge UK)。

设想本领域已知或以后开发的任何方法用于分析联合疗法是否存在超加性效应，以筛选供联合之用的适宜的抗连接蛋白剂。

在另一种优选的实施方式中，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的结合使用会减少任何上述药剂的有效剂量（与当单独给予所述药剂时的有效剂量相比）。在某些实施方式中，当联合使用时药剂的有效剂量是当单独使用时药剂的剂量的约1/15至约1/2、约1/10至约1/3、约1/8至约1/6、约1/5、约1/4、约1/3或约1/2。

在另一种优选的实施方式中，与当单独给予所述药剂时的频率相比，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的结合使用、或连同任何一种或两种一起的其它抗连接蛋白剂，会减小给予所述药剂的频率。因此，与先前为达到期望的治疗目的所需要的剂量相比，这些组合允许使用每种药剂的更低和/或更小剂量。

可以以单次或分开施加的方式来给予剂量。可以一次给予剂量，或可以重复施加。通常，将每周重复施加直到促进伤口愈合，或在伤口愈合放慢或停止的情况下可以进行重复施加。可以相隔3-7天或更长时间施加剂量。在慢性伤口的情况下，可以进行重复施加，例如，每周、或每两周、或每月、或以其它频率，例如如果和当伤口愈合放慢或停止时。对于一些适应证，如某些眼部应用，可以采用更加频率的给药，直到每小时。

可以通过相同或不同途径来给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。可以在治疗过程中的不同时间分别地、或以分开或单个组合形式同时地给予本发明的各种药剂。

在本发明的一个方面，以一种组合物给予抗连接蛋白多核苷酸并以第二组合物给予抗连接蛋白肽或拟肽。在一种实施方式中，在包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的第二组合物以前给予包含一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的第一组合物。在一种实施方式中，在包含一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的第二组合物以后给予包含一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的第一组合物。在一种实施方式中，在包含一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的第二组合物以前和以后给予包含一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的第一组合物。在一种实施方式中，在包含一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的第一组合物以前和以后给予包含一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的第二组合物。在一种实施方式中，在与包含一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的第二组合物的大约同时给予包含一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽的第一组合物。

优选地，通过局部给予(外周或直接地给予部位)来递送一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽、或连同任何一种或两种一起给予的其它抗连接蛋白剂，其中局部给予包括但不限于利用载体(如敷料和其它基质)和药物剂型(如凝胶剂、合剂、混悬剂以及软膏剂)来局部给予。在一种实施方式中，载体包含生物相容膜或进入治疗部位的***物。在另一种实施方式中，载体包含敷料或基质。在本发明的一种实施方式中，载体组合物可以是缓释载体组合物，其中一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽、或将连同任何一种或两种一起给予的其它抗连接蛋白剂，被分散在缓释固体基质中如藻酸盐、胶原、或合成可生物吸收聚合物的基质。优选地，载体组合物是无菌的或低生物负荷。在一种实施方式中，可以使用包含两种或更多种抗连接蛋白剂的洗液。

包含一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽、或将连同任何一种或两种一起给予的其它抗连接蛋白剂的剂型经一段时间的递送，在一些情况下约1-2小时、约2-4小时、约4-6小时、约6-8、或约24小时或更长时间，对于更加严重的损伤或病症可以是特别有利的。在一些情况下，细胞损失可以充分扩展手术部分以外至周围细胞。这样的损失可以发生在最初手术的24小时内并且通过间隙连接细胞间通信、或半通道开放来介导。因此，抗连接蛋白剂的给予，例如，用于连接蛋白表达的向下调节、或连接子开放或活性的阻断或抑制，将调节细胞之间的通讯、或损失进入细胞外间隙（在连接子调节的情况下），以及使另外的细胞损失或损伤或损伤的后果最小化。

虽然递送期将取决于要诱导向下调节的部位和所期望的治疗效果，但提供了连续或缓释递送约0.5-1小时、约1-2小时、约2-4小时、约4-6小时、约6-8、或约24小时或更长时间。根据本发明，这是通过在剂型中、尤其是在用于连续或缓释给予的剂型中，包含一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽、或连同任何一种或两种的其它抗连接蛋白剂，以及药用载体或赋形剂来实现的。

如所提及的，本发明的一种或多种药剂可以例如在受伤以前、期间、紧接着受伤以后给予，或在约180、约120、约90、约60、或约30天内给予，但优选在约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、或约2天或更短时间内给予，并且最优选地例如在受伤以后的约24、约12、约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、约2小时内或在约60、约45、约30、约15、约10、约5、约4、约3、约2、约1分钟内给予。

本文描述的给予途径和剂量仅作为指导，因为熟练的医师将针对任何特定患者和病症确定给予的最佳途径和剂量。

治疗患有本文提及或描述的伤口和/或病症的受治疗者的任何方法可以采用本文描述的任何剂量、剂型、配方、和/或组合物的给予。

敷料和基质

在一个方面，以敷料或基质的形式提供了一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。在某些实施方式中，以液体、半固体或固体组合物的形式提供了本发明的一种或多种药剂，用于直接施加，或将组合物施加于固体接触层的表面、或加入固体接触层如药用纱布或基质。可以例如以液体或凝胶的形式提供敷料组合物。可以连同用于局部施加的常规药物赋形剂一起提供一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽。合适的载体包括：Pluronic凝胶，泊洛沙姆凝胶，包含纤维素衍生物的水凝胶，其中纤维素衍生物包括羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素以及它们的混合物；以及包含聚丙烯酸的水凝胶(卡波普)。合适的载体还包括用于局部药物制剂的乳膏/软膏，例如，基于聚西托醇乳化软膏的乳膏。上述载体可以包括藻酸盐(作为增稠剂或刺激物)，防腐剂如苯甲醇，控制pH值的缓冲剂如磷酸氢二钠/磷酸二氢钠，调节同渗浓度的药剂如氯化钠，以及稳定剂如EDTA。

除先前提及的生物基质以外，合适的敷料或基质还可以包括，例如，以下制剂并连同一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽(或将连同任何一种或两种一起给予的其它抗连接蛋白剂)：

1)吸收剂：合适的吸收剂可以包括，例如，吸收性敷料，其可以提供，例如，半附着质量或非附着层，并结合于纤维的高度吸收层，如例如，纤维素、棉花或人造丝。可替换地，吸收剂可以用作主要或辅助敷料。

2)藻酸盐：合适的藻酸盐包括，例如，敷料，该敷料是非编织、非粘附垫子和系带，其由天然多糖纤维或干凝胶（来自海藻）构成。合适的藻酸盐敷料可以，例如，在接触渗出物以后通过离子交换过程形成湿凝胶。在某些实施方式中，藻酸盐敷料被设计成软和适合的、容易填塞、盖住或施加于不规则形状区域上。在某些实施方式中，藻酸盐敷料可以连同第二敷料一起使用。

3)抗微生物敷料：在需要或期望的情况下，合适的抗微生物敷料可以包括，例如，可以促进生物活性剂递送的敷料，如，例如，银和聚六亚甲基双胍(PHMB)，以维持预防感染的效力。在某些实施方式中，合适的抗微生物敷料可以例如，作为海绵、浸渍编织纺布、薄膜敷料、吸收性产品、岛状敷料、尼龙织物、非粘附阻挡层、或上述材料的组合而获得。

4)生物及生物合成材料：合适的生物敷料或生物合成敷料可以包括，例如，凝胶、溶液或半透片，其来自天然来源，例如，猪或牛。在某些实施方式中，将凝胶或溶液施加于治疗部位并覆盖敷料，用于屏障保护。在另一种实施方式中，原位放置基于生物的(例如，猪肠粘膜或膀胱组织)或生物合成的片，其可以作为膜，并在单次施用以后保留在适当位置，或可以预先制备生物敷料或生物合成敷料以包括一种或多种、优选两种抗连接蛋白剂。

5)胶原：合适的胶原敷料可以包括，例如，凝胶，垫子，颗粒，糊剂，粉末，片或溶液，其来自例如，牛、猪或禽源或其它天然来源或供体。在某些实施方式中，胶原敷料可以与治疗部位渗出物相互作用以形成凝胶。在某些实施方式中，胶原敷料可以连同辅助敷料一起使用。

6)复合物：合适的复合敷料可以包括，例如，这样的敷料，其将物理上不同的成分结合成单一产品以提供多种功能，如，例如，细菌屏障、吸收和附着。在某些实施方式中，复合敷料由例如多层构成并且结合入半或非附着垫子。在某些实施方式中，复合敷料还可以包括例如，非编织织物带或透明薄膜的粘附边缘。在某些其它实施方式中，复合敷料可以作为例如，主要或辅助敷料，以及在另一种实施方式中，可以连同局部药物组合物一起使用敷料。

7)接触层：合适的接触层敷料可以包括，例如，薄的非粘附片，其被放置在一个区域上以防止组织例如直接接触施加于治疗部位的其它制剂或敷料。在某些实施方式中，接触层可以被展开以符合治疗部位的区域形状并且是多孔的以便于渗出物穿过，从而由覆盖的辅助敷料吸收。在又一种实施方式中，可以连同局部药物组合物一起使用接触层敷料。

8)弹性绷带：合适的弹性绷带可以包括，例如，伸展并符合身体轮廓的敷料。在某些实施方式中，织物成分可以包括例如，棉花、聚酯纤维、人造丝或尼龙。在某些其它实施方式中，弹性绷带可以例如，提供吸收剂作为第二层或敷料，以将覆盖物保持在适当位置、施加压力、或保护治疗部位。

9)泡沫：合适的泡沫敷料可以包括，例如，片和其它形状的泡沫聚合物溶液(包括聚氨酯)以及能够保持流体的较小的开发细胞。可以例如连同其它材料一起来浸渍或分层示例性的泡沫。在某些实施方式中，可以基于泡沫的厚度和组成来调节吸收能力。在某些其它实施方式中，与治疗部位接触的区域可以是非粘附的，以易于去除。在又一种实施方式中，可以连同粘附边缘和/或透明薄膜涂层（其可以用作抗感染屏障）一起使用泡沫。

10)纱布以及非编织敷料：合适的纱布敷料和编织敷料可以包括，例如，具有不同吸收度的干编织或非编织海绵和包裹材料。示例性的织物成分可以包括，例如，棉花、聚酯纤维或人造丝。在某些实施方式中，纱布和非编织敷料可以是无菌的或非无菌的（整批散装）并且具有或没有粘附边缘。示例性的纱布敷料和编织敷料可以用于清洁、填塞以及覆盖各种治疗部位。

11)亲水胶：合适的亲水胶敷料可以包括，例如，糯米纸，粉末或糊剂，其由明胶、果胶或羧甲基纤维素构成。在某些实施方式中，糯米纸是自粘的以及有或没有粘附边缘并且具有各种形状和大小。示例性的亲水胶可用于需要外形修复的区域上。在某些实施方式中，可以连同辅助敷料一起使用粉末和糊剂亲水胶。

12)水凝胶(无定形)：合适的无定形水凝胶敷料可以包括，例如，水、聚合物以及其它组分的没有形状的配方，其被设计成提供水分和维持湿性愈合环境和/或再水化治疗部位。在某些实施方式中，可以连同辅助敷料覆盖物一起使用水凝胶。

13)水凝胶：浸渍敷料：合适的浸渍水凝胶敷料可以包括，例如，用无定形水凝胶饱和的纱布和非编织海绵、绳子以及长条。无定形水凝胶可以包括例如，水、聚合物以及其它组分的没有形状的配方，其被设计成向干燥的治疗部位提供水分以及维持湿性愈合环境。

14)水凝胶片：合适的水凝胶片可以包括例如，交联亲水性聚合物的三维网络，其中聚合物不溶于水并通过溶胀与水溶液相互作用。示例性的水凝胶是高度适合的和可渗透的并且可以吸收不同量的引流物（取决于它们的组成）。在某些实施方式中，水凝胶相对于治疗部位是非粘附的，以易于去除。

15)浸渍敷料：合适的浸渍敷料可以包括，例如，用溶液、乳状液、油、凝胶或一些其它药物活性化合物或载体（包括例如，盐水、油、锌盐、凡士林、三溴酚铋和猩红以及本文描述的化合物）饱和的纱布和非编织海绵、绳子和长条。

16)有机硅凝胶片：合适的有机硅凝胶片敷料可以包括，例如，软覆盖物，该软覆盖物由交联聚合物构成，其中交联聚合物用网状物或织物增强或结合于网状物或织物。

17)溶液：合适的液体敷料可以包括，例如，多蛋白材料和其它要素（在细胞外基质中发现的）的混合物。在某些实施方式中，可以在清创术和清洁以后将示例性的溶液施加于治疗部位，然后用吸收性敷料或非粘附垫子覆盖。

18)透明薄膜：合适的透明薄膜敷料可以包括不同厚度的透明聚合物膜，该透明聚合物膜是借助于粘合剂涂布在一侧上。在某些实施方式中，透明薄膜对于液体、水以及细菌是不可渗透的，但对于水蒸汽和大气气体是可渗透的。在某些实施方式中，透明性便于治疗部位的可视化。

19)填料：合适的填料敷料可以包括，例如，珠、乳膏、泡沫、凝胶、软膏、垫子、糊剂、枕垫、粉末、丝状体或其它配方。在某些实施方式中，填料是非粘附的并且可以包括随时间释放的抗微生物剂。实施例的填料可以用来维持湿环境、管理渗出物、以及用于治疗例如，局部和全层伤口、感染伤口、引流伤口以及深部伤口（其需要填塞）。

结合伤口治疗

一般方面

本发明涉及药物组合物以及它们的应用方法，其中组合物包括治疗有效量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽、或连同一种或多种的抗连接蛋白多核苷酸和/或抗连接蛋白肽或拟肽一起的其它抗连接蛋白剂。该组合物可用于加强或促进伤口愈合，其中伤口包括急性伤口和并不以预期的速率愈合的伤口，如慢性伤口和对于常规伤口治疗或伤口愈合促进疗法来说可以是缓慢愈合或难治的其它伤口。

同样地，在其它组织损伤(尤其是伤口)的情况下，本发明的方法和组合物可有效促进伤口愈合过程、减小肿胀和发炎、以及将瘢痕形成降低至最小程度。这些配方在治疗伤口方面具有明显益处，不管是外部创伤(包括烧伤)、内部创伤、或外科手术、以及慢性伤口。

组合物

因此，在一个方面，本发明提供了用于治疗性治疗的组合物，该组合物包括：至少一种抗连接蛋白多核苷酸和至少一种抗连接蛋白肽或拟肽、或连同任何一种或两种或单独给予的其它抗连接蛋白剂。在一种优选的实施方式中，该组合物进一步包括药用载体或媒介物（赋形剂）。

在一种优选的形式中，组合物包含相对于仅一种连接蛋白的mRNA的一种或多种反义多核苷酸。在另一种优选的形式中，组合物包括一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽、或间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。最优选地，该连接蛋白是连接蛋白43。

在另一种优选的形式中，组合物包括抗连接蛋白肽或拟肽和反义多核苷酸（相对于连接蛋白的mRNA）。最优选地，该连接蛋白是连接蛋白43。

组合物可以包括多核苷酸或抗连接蛋白肽、或连同任何一种或两种一起的其它抗连接蛋白剂，其定向于多于一种的连接蛋白。优选地，其上定向了多核苷酸或抗连接蛋白肽或其它抗连接蛋白剂的连接蛋白之一是连接蛋白43。其上定向了多核苷酸或抗连接蛋白肽或其它抗连接蛋白剂的其它连接蛋白可以包括，例如，连接蛋白26、30、30.3、31.1、32、36、37、40、40.1、44.6、45以及46。定向于各种连接蛋白的合适的示例性多核苷酸(以及ODN)列在表1中。本文还提供了合适的抗连接蛋白肽。合适的间隙连接或半通道磷酸化剂和连接蛋白羧基末端多肽在本领域中是已知的。

试剂盒、药物以及制品

可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽和/或其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽，还可以用于制备药物。

在一个方面，本发明提供了一种试剂盒，该试剂盒包括所描述的一种或多种组合物或配方。例如，试剂盒可以包括这样的组合物，该组合物包括有效量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽和/或其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。

还提供了制品，该制品包括容器，该容器包含如本文描述的本发明的组合物或剂型，以及用于治疗受治疗者的使用说明。例如，在另一个方面，本发明包括这样的制品，该制品包括容器，该容器包含治疗有效量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽和/或其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽，以及使用说明，其包括应用于治疗受治疗者。

治疗

本发明的组合物和配方可以与用于促进伤口愈合的组合物结合或组合使用，并且还可以减少肿胀、发炎和/或疤痕形成。本发明的组合物和配方还可以与用于促进和/或改善急性或慢性伤口的愈合的组合物结合或组合使用。在一个方面，伤口起因于手术或创伤或基本伤病状态，例如，糖尿病、外周水肿、血管炎、或心血管疾病。

在一个方面，本发明涉及一种促进或改善受治疗者中伤口愈合的方法，包括给予治疗有效量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。在某些实施方式中，给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽，可有效减少发炎，促进细胞迁移以加速伤口闭合和愈合，和/或促进上皮生长和表面恢复。在某些实施方式中，给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽，可有效减少或预防瘢痕形成。

在一个方面，本发明涉及一种促进或改善受治疗者中伤口愈合的方法，该方法包括给予有效的调节上皮基底细胞***和生长的量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。在一种实施方式中，抗连接蛋白剂是可有效调节上皮基底细胞***和生长的连接蛋白反义多核苷酸。在一种实施方式中，连接蛋白反义多核苷酸是连接蛋白26反义多核苷酸、肽或拟肽、连接蛋白43反义多核苷酸、肽、或拟肽或它们的混合物。

在一个方面，本发明涉及一种促进或改善伤口愈合的方法，该方法包括给予有效的调节外层角蛋白分泌的量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。在一种实施方式中，抗连接蛋白剂是可有效调节外层角蛋白分泌的连接蛋白反义多核苷酸。在一种实施方式中，连接蛋白反义多核苷酸是连接蛋白43反义多核苷酸、肽或拟肽，31.1反义多核苷酸、肽或拟肽，或它们的混合物。

在又一个方面，本发明提供了一种在患有伤口例如手术伤口(如在，例如，整容以及其它手术中)的患者中减少瘢痕形成和/或改善瘢痕外观的方法，该方法包括给予所述伤口一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽，以在所述伤口的部位和紧邻所述伤口的部位向下调节一种或多种连接蛋白的表达。此外，伤口可以起因于创伤或手术，例如，其中在手术修复和/或其闭合以前立即将配方施加于伤口。如本文所述，在减少或改善瘢痕形成或外观的方法中，优选在给予适量的抗连接蛋白多核苷酸的同时、或以后或以前，给予抗连接蛋白肽或拟肽。

在一个方面，本发明涉及一种减少、预防或改善受治疗者中组织损伤的方法，该方法包括给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。

在另一个方面，本发明涉及一种减小肿胀和/或发炎作为治疗急性或慢性伤口和/或经受身体创伤的组织的一部分的方法，该方法包括向或最接近于所述伤口或组织给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。在一种实施方式中，伤口起因于对组织的物理创伤，其中上述组织包括神经组织如脑、脊髓或视神经，或皮肤或眼。

在一个方面，本发明涉及持续给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，持续给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。在一种实施方式中，至少给予抗连接蛋白剂至少约0.5小时、约1-24小时、至少约2小时、至少约3小时、至少约4小时、至少约5小时、至少约6小时、至少约7小时、至少约8小时、至少约9小时、至少约10小时、至少约11小时、至少约12小时或至少约24小时。在一种实施方式中，在一段持续时间内向下调节连接蛋白表达。在另一种实施方式中，在一段优选的时间内，全部或部分地阻断或关闭连接蛋白半通道。优选地，向下调节连接蛋白43表达并且全部或部分地阻断或抑制连接蛋白半通道开放一段持续时间。方便地，向下调节连接蛋白43表达或阻断或抑制半通道至少约1、2、4、6、8、10、12、或24小时。根据一种实施方式，伤口是慢性伤口。合适的受治疗者包括糖尿病患者。其它受治疗者包括，例如，患有外周水肿、血管炎、或心血管疾病的受治疗者。

在一个方面，本发明提供了一种治疗具有伤口的受治疗者的方法，该方法包括持续给予伤口有效量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。在另一个方面，本发明提供了一种促进或改善受治疗者中伤口愈合的方法，该方法包括持续给予伤口一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。在另一个方面，本发明提供了一种减少、预防或改善受治疗者中肿胀和/或发炎的方法，该方法包括持续给予伤口一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，持续给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。在另一个方面，本发明提供了一种减少、预防或改善受治疗者中瘢痕形成的方法，该方法包括持续给予伤口一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。

根据另一个方面，本发明提供了一种促进或改善具有伤口的受治疗者中伤口愈合的方法，该方法包括将有效的在伤口区域增加上皮再形成速率的量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽持续给予伤口区域。在一种实施方式中，该方法包括持续给予连接蛋白43反义多核苷酸、肽和/或拟肽和/或连接蛋白31.1反义多核苷酸、肽和/或拟肽。在一种实施方式中，以缓释剂型给予组合物或多种组合物。在另一种实施方式中，给予组合物或多种组合物一段持续时间。方便地，组合物可有效地降低连接蛋白43和/或31.1水平或活性(例如，半通道或间隙连接活性)至少约24小时。根据一种实施方式，伤口是慢性伤口。可加以治疗的受治疗者包括糖尿病患者。

在又一个方面，本发明提供了一种促进或改善具有伤口的受治疗者中伤口愈合的方法，该方法包括持续给予伤口区域有效量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽，以有效调节上皮基底细胞***和生长和/或有效调节外层角蛋白分泌。在一种实施方式中，组合物包括可有效调节上皮基底细胞***或生长的连接蛋白反义多核苷酸，优选连接蛋白26反义多核苷酸、肽和/或拟肽，连接蛋白43反义多核苷酸、肽和/或拟肽，或它们的混合物。在一种实施方式中，组合物包括可有效调节外层角质化的连接蛋白反义多核苷酸，优选地，连接蛋白31.1反义多核苷酸、肽和/或拟肽。在一种实施方式中，以缓释剂型给予组合物或多种组合物。在另一种实施方式中，给予组合物或多种组合物一段持续时间。方便地，组合物可有效降低连接蛋白43、26、和/或31.1水平至少约24小时。根据一种实施方式，伤口是慢性伤口。可加以治疗的受治疗者包括糖尿病患者。

在另一个方面，提供了用于治疗具有慢性伤口的受治疗者的方法。这样的方法包括连同另一种抗连接蛋白剂一起给予受治疗者能够抑制连接蛋白、或连接蛋白半通道的表达、形成、或活性的抗连接蛋白剂。

在一个方面，本发明涉及一种用于治疗或预防慢性伤口的方法，该方法包括连同另一种抗连接蛋白剂一起给予需要其的受治疗者的所述慢性伤口或伴随所述慢性伤口的组织有效量的抗连接蛋白剂。在另一种实施方式中，慢性伤口是慢性皮肤伤口并且将本发明的组合物给予所述受治疗者的皮肤或伴随皮肤的组织一段有效时间。适合于治疗的慢性皮肤伤口可以，例如，选自由压迫性溃疡、糖尿病性溃疡、静脉性溃疡、动脉性溃疡、血管炎性溃疡、和混合性溃疡、以及本文提及的其它溃疡组成的组。慢性伤口可以是动脉性溃疡，该动脉性溃疡包括起因于完全或部分动脉阻塞的溃疡形成。慢性伤口可以是静脉淤滞性溃疡，该静脉淤滞性溃疡包括起因于静脉瓣的功能不良和相关的血管疾病的溃疡形成。慢性伤口可以是创伤引起的溃疡。慢性伤口可以是持续性上皮缺损。

当未作为固定组合给予时，优选的方法包括顺序给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。优选地，在彼此至少约半小时内顺序地给予药剂。还可以在彼此约1小时内、在彼此约1天至约1周内、或在以其它方式认为适当的时间内，给予药剂。优选地，在给予抗连接蛋白剂（其阻断或减少连接蛋白表达或半通道或间隙连接的形成，例如，通过连接蛋白表达的向下调节）以前，给予抗连接蛋白肽或抗连接蛋白拟肽，例如，抗连接蛋白剂，其可以阻断或减少半通道开放。优选地，抗连接蛋白剂是抗连接蛋白43剂。

在用于治疗伤口（包括慢性伤口）的另一种实施方式中，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽中的任何一种或者两者，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽以小于当单独给予药剂时，即当它们在物理上或在伤口治疗过程中未联合给予时的量或剂量提供。上述给予药剂的较少量通常是当单独给予时药剂的量的约二十分之一至约十分之一，并且可以是当单独给予时的量的约八分之一、约六分之一、约五分之一、约四分之一、约三分之一、以及约一半。

在一种实施方式中，用于治疗或预防慢性伤口的方法包括持续给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽，或者可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸和/或一种或多种抗连接蛋白肽或拟肽其它抗连接蛋白剂，如间隙连接或半通道磷酸化剂或连接蛋白羧基末端多肽。在一种实施方式中，以缓释剂型给予组合物或多种组合物。在另一种实施方式中，给予组合物或多种组合物一段持续时间。方便地，组合物可有效降低连接蛋白43水平、或阻断或减少连接蛋白43半通道开放至少约1-2小时、约2-4小时、约4-6小时、约4-8小时、约12小时、约18小时、或约24小时。可加以治疗的受治疗者包括糖尿病患者，以及具有其它溃疡的患者，包括静脉性溃疡以及本文描述的和本领域已知的其它溃疡。

应当明了，以下实施例仅是说明性的而不是用来限制本发明的范围。

实施例

实施例1

在大鼠糖尿病模型中评估了顺序地给予用以下示例性序列：SRPTEKTIFII(SEQ.ID.NO:19)制备的抗连接蛋白43肽制剂、接着给予用以下示例性序列：GTA ATT GCG GCA GGA GGA ATT GTTTCT GTC(连接蛋白43)(SEQ.ID.NO:2)和GAC AGA AAC AAT TCCTCC TGC CGC ATT TAC(有义对照)(SEQ.ID.NO:7)制备的抗连接蛋白43多核苷酸制剂的方法在伤口愈合方面的效力。

通过单次腹膜内注射，在成年斯-道鼠(350-400g)中诱导糖尿病，其中单次腹膜内注射包含在柠檬酸盐缓冲液中的链脲佐菌素65mg/kg(Shotton HR,Clarke S,Lincoln J.(2003)。在供给不同器官的自主神经中治疗糖尿病性自主神经病的有效性不是相同的(Id.)。在供给不同器官的自主神经中治疗糖尿病性自主神经病的有效性不是相同的(Id.)。在供给不同器官的自主神经中治疗糖尿病性自主神经病的有效性不是相同的(Id.)(N=6个糖尿病患者、6个对照/时间点)。大多数糖尿病性伤口愈合研究是在糖尿病诱导两周以后进行并且相同时间点用于这种伤口愈合研究。然而，在第8周还检查了在糖尿病大鼠皮肤中的连接蛋白表达(N=6只糖尿病大鼠、6只对照大鼠/时间点)以证实在第2周检测的变化将保持相同。正常背部皮肤被切除，冰冻切片，免疫染色（针对连接蛋白），通过共聚焦显微技术加以成像以及量化染色，如在Saitongdee et al.(2000)Effects ofhibernation on expression of multiple gap junction connexins inhamster myocardium,Cardiovascular Res.47,108-115中所描述的。

用氟烷麻醉大鼠并剃刮它们的背部。制作两对5×5mm全层切除伤口。将在Pluronic F-127凝胶中的100-500微克的抗连接蛋白43肽SRPTEKTIFII(SEQ ID NO:19)施加于一个伤口并将对照(仅Pluronic F-127凝胶)施加于第二伤口。

将在Pluronic F-127凝胶中的10μM的连接蛋白43寡聚脱氧核苷酸GTA ATT GCG GCA GGA GGA ATT GTT TCT GTC(SEQ.ID.NO:2)施加于一个伤口并在1分钟、5分钟、10分钟、30分钟、1小时或6小时内将对照(有义)凝胶施加于另一伤口。

在受伤后的第1、2、5、10以及15天收获组织并切片在制剂中，用于连接蛋白免疫组织化学或H&E染色(Coutinho P，et al.(2003)Dynamic changes in connexin expression correlate with key events inthe wound healing process.Cell Biol.Int.27:525-541)。N=6只糖尿病大鼠、6只对照大鼠/时间点。

通过用明胶海绵的小拭子将萤光黄CH(Sigma)的4%溶液施加到新鲜的全层皮肤切口中来评估细胞间通讯。在除去凝胶泡沫和固定组织以前，使染料可以转移5分钟。使用进入受伤细胞但并不穿过间隙连接的10kD Kd FITC-葡聚糖作为对照。对组织进行冰冻切片，然后在Leica SP2UV(Leica,Milton Keynes,UK)上通过共聚焦显微技术加以成像。

利用共聚焦显微镜检查了转移的染料和连接蛋白免疫染色。预先设置最佳增益和偏离并在图像采集过程中保持恒定。获取一系列单光截面图像以产生来自切口的皮肤的剪辑。利用Image-J软件(NIH)分析了数字图像(8位)。为了评估染料转移，从切口边缘放置感兴趣的方框的1500×30像素区域在中真皮中并产生穿过方框的图像强度图。灰度强度下降低于50是作为萤光黄已转送的点。类似地，在表皮中，记录从切口至萤光黄信号下降低于50处的距离。分析了来自每只动物的最少三个图像。为了比较连接蛋白的水平，从每个伤口的不同切片获取真皮或表皮的6个单光截面图像。激光功率、针孔、增益/偏置以及物镜的所有参数对于对照和糖尿病组均保持恒定。量化连接蛋白表达，如在Saitongdee P，et al.(2000)，上文中所描述的。设定阈值以检测具有最小背景噪声的间隙连接噬斑，然后对于所有图像保持恒定。记录每个图像的连接蛋白噬斑的数目和大小并表示为每100μm表皮或10000μm²真皮。这种方式已证明比蛋白质印迹更精确，因为它产生在细胞水平上蛋白表达的信息。蛋白质印迹不能区别表皮和真皮细胞或检测邻近伤口边缘的影响。利用这种方式，在伤口边缘(WE)的区域中以及在离开500μm(AD)的区域中，在角质细胞中的连接蛋白水平，在受伤后的第1或第2天能够加以量化。在受伤后的第5天，还成像了新生表皮的前沿(LE)的另外区域。利用Leica DMLFS显微镜（带有DC300F数码相机）获得H&E染色的图像。在Qiu,C et al.(2003)Targetingconnexin43expression accelerates the rate of wound repair.Curr.Biol.13:1697-1703中详细描述了上皮再形成速率的测量结果。利用Wilcoxon配对符号秩检验（如在Statview 5.0.1中实施的）测试了治疗之间的所有数值差异的显着性。

在诱导糖尿病以后的第2周和第8周，测量和比较了在正常和STZ糖尿病大鼠皮肤中的相对连接蛋白43和26染色水平。进行作图以显示在表皮和真皮中的噬斑数目。在第8周获得在对照和糖尿病性皮肤中典型连接蛋白43和连接蛋白26免疫染色的图像(箭头标明表皮和真皮之间的边界；刻度尺25μm)。量化了间隙连接渗透的染料，萤光黄，在5分钟内在对照和糖尿病大鼠的表皮和真皮中转送的相对距离。

通常，在表皮的基底层中、以及在真皮成纤维细胞、毛囊、血管以及附器中会发现点状连接蛋白43免疫染色。然而，在糖尿病性皮肤中，就间隙连接噬斑的大小和数目而论，连接蛋白43染色在表皮中可以显著降低。在糖尿病性表皮中，连接蛋白26的染色在表皮上层中可以类似地降低。

为了评估在糖尿病性表皮和真皮中的细胞间通讯，检查了在5分钟内间隙连接渗透的染料萤光黄通过组织的转移程度。在人糖尿病性成纤维细胞中已报道了连接蛋白43的高表达和增加的通讯(Abdullah KM,et al.(1999)Cell-to-cell communication and expressionof gap junctional proteins in human diabetic and nondiabetic skinfibroblasts:effects of basic fibroblast growth factor,Endocrine10:35-41)；并且在肾***中已注意到不同连接蛋白对糖尿病的混合反应(Zhang J,Hill CE.(2005)Differential connexin expression inpreglomerular and postglomerular vasculature:accentuation duringdiabetes,Kidney Int.68:1171-1185)。

测量了在损伤以后在对照和糖尿病性表皮中上皮再形成的相对速率以及连接蛋白43和连接蛋白26水平的反应。通过在伤口边缘(WE)表皮以及邻近(AD)表皮（离开500μm）中在受伤后的第1和第2天计数噬斑来量化染色。在第5天，量化了在新生表皮的前沿(LE)的另外的区。

对在伤口愈合过程中的对照和糖尿病性皮肤的表皮伤口边缘的连接蛋白43和连接蛋白26染色(绿色)以及核染色(蓝色)进行测量并通过图像分析进行处理。

为了确定连接蛋白表达对损伤的动态响应，在受伤后的第1天和第2天，量化了在伤口边缘(WE)和在离开500μm(AD)的邻近区中角质细胞中的连接蛋白染色。在5天以后，对前沿(LE)角质细胞进行成像。

通过用连接蛋白43特异性反义凝胶（在损伤时施加于伤口）来防止增加，评估了在糖尿病性WE角质细胞中连接蛋白43的可能增加的影响。

在糖尿病患者中在表皮伤口边缘中连接蛋白43的异常上调的发现是重要的，并且有可能以不同的方式影响伤口闭合过程。已提出在再生表皮内通讯室的形成在伤口愈合中会发挥作用(Martin P(1997)Wound healing-aiming for perfect skin regeneration,Science276:75-81;Lampe PD,et al.(1998)Cellular interaction of integrinalpha3betal 1with laminin 5promotes gap junctional communication.J.Cell Biol.143:1735-1747;Hodgins M(2004)Connecting wounds withconnexins.J.Invest.Dermatol.122:commentary)。通过表达连接蛋白26和除去前沿细胞中的连接蛋白43，可以在正常条件下有效地产生区室化，因为这些连接蛋白彼此并不形成连接。因此，在糖尿病患者中伤口愈合的延迟可以反映连接蛋白43表达向下调节到上述区室化可以发生的点所需要的另外的时间。可替换地，已知连接蛋白43的C-链端与细胞骨架成分或与P120ctn/Rho GTPase相互作用，使得连接蛋白43的向下调节对于改变在伤口边缘角质细胞的能动性可能是必要的，使它们迁移并闭合伤口(Wei CJ,et al.(2004)Connexins and cell signaling in development and disease,Annu RevCell Dev Biol.20:811-838)。

实施例2

在对糖尿病雄性斯-道鼠体内顺序地给予用以下示例性序列：SRPTEKTIFII(SEQ.ID.NO:19)制备的抗连接蛋白43肽制剂、接着给予用以下示例性序列：GTA ATT GCG GCA GGA GGA ATT GTTTCT GTC(连接蛋白43)(SEQ.ID.NO:2)和GAC AGA AAC AAT TCCTCC TGC CGC ATT TAC(有义对照)(SEQ.ID.NO:7)制备的抗连接蛋白43多核苷酸制剂以后，研究了在糖尿病受治疗者中的伤口愈合效力。为了量化在糖尿病受治疗者中的伤口愈合，研究了伤口的拉伸强度，其中更高的拉伸强度反映了伤口愈合的改善。

糖尿病大鼠动物模型是已建立的模型***，用于研究不良愈合的与糖尿病相关的伤口(Davidson,Arch.Dermatol.Res.290:S1-S11)。因为糖尿病伴随有微血管病，所以这种动物模型还适用于研究在伤口愈合中的动脉确定的干扰。

为了诱导糖尿病，对体重250-300g的大鼠i.p.注射新鲜制备的链脲佐菌素(Sigma)的水溶液(50mg/kg体重)。在诱导以后的第7-9天，检查动物的血糖，其中高于200mg/dL的血糖水平值证实了糖尿病状态。随后用由2%O₂(2l/min)和1.25%异氟烷组成的混合物麻醉糖尿病大鼠和非糖尿病对照动物。对背部进行脱毛并在每只动物的背部标记2个部位，用于随后受伤。然后通过伤口部位制作长度为1cm的切口伤口，并用创伤夹闭合伤口。

将在Pluronic F-127凝胶中的100-500微克的抗连接蛋白43肽SRPTEKTIFII(SEQ ID.NO:19)施加于一个伤口，并将对照(仅Pluronic F-127凝胶)施加于第二伤口。此后，将在Pluronic F-127凝胶中的10μM的连接蛋白43寡聚脱氧核苷酸GTA ATT GCG GCAGGA GGA ATT GTT TCT GTC(SEQ.ID.NO:2)施加于一个伤口，并在1分钟、5分钟、10分钟、30分钟、1小时或6小时内将对照(有义)凝胶施加于另一伤口。

在10天以后进行伤***检，然后利用英斯特朗拉力计并按照制造商的说明确定伤口的拉伸强度，接着标准化至伤口的横截面积。

随后，根据经治疗伤口的拉伸强度的绝对值和仅接受对照制剂的相同动物的伤口的拉伸强度的绝对值来计算商(E/C值)。确定E/C值的平均值并确定相对于治疗在拉伸强度方面的变化。

实施例3

本文披露的方法和组合物用来治疗患有慢性伤口(例如，血管炎性溃疡)的人受治疗者。

患有糖尿病、或潜在外周血管或动脉疾病的人受治疗者首先呈现来自非闭合腿部伤口的并发症。用合适剂量或多个剂量的抗连接蛋白肽SRPTEKTIFII(SEQ ID NO:19)，例如，100-500微克来治疗伤口。随后在抗连接蛋白肽的1分钟、10分钟、30分钟、1小时、6小时、12小时、或24小时内用抗连接蛋白多核苷酸（SEQ ID NO:1）治疗伤口。给予在Pluronic凝胶中的SEQ ID NO:1的2mL的20μM制剂(例如，总剂量约200-400μg)，其是基于大约7cm×5cm(约35cm²)的伤口大小以及大约3-4mm的深度(给予的其它适当剂量可以容易地由熟练的医师根据伤口大小来确定)。

包扎伤口部位并覆盖7天。在第7天露出伤口并评估伤口愈合结果。

必要或需要时，重复上面概述的治疗(以适当的剂量)。在这种治疗以后，评估伤口和伤口外观。在第二周、第1个月、和/或第2个月，再次估计患者，并再次估计伤口(减小，如果有的话)。

实施例4

本文披露的方法和组合物用来治疗患有慢性静脉性下肢溃疡的人受治疗者。

按照溃疡大小以及最小和最大溃疡面积(例如，2cm²和50cm²)对人试验受试者进行分组。确定患者的休息踝肱多普勒动脉压指数作为基线(例如等于或大于0.80)。

所有患者接受加压包扎。通过描记法确定溃疡的面积，并在抗连接蛋白肽的1分钟、10分钟、30分钟、1小时、6小时、12小时、或24小时内顺序地给予在Pluronic凝胶制剂中的合适剂量的测试抗连接蛋白肽SRPTEKTIFII(SEQ ID NO:19)，例如，100-500微克，接着给予抗连接蛋白多核苷酸（SEQ ID NO:1）(同样在Pluronic凝胶中，其中总剂量为大约200-400μg)。

要求患者斜靠在检查床上，同时将测试制剂施加于伤口表面，并在进行加压包扎以前保持15分钟。

在第7天露出伤口并评估伤口愈合结果。利用生物测定，分析伤口液和血液样品的有关伤口愈合生物标志物。

重复上述治疗(以适当的剂量)。在这种治疗以后，评估伤口和伤口外观。每周或每两周、或鉴于愈合状态认为合适的时间，重复这种过程，直到伤口闭合。

实施例5

以下用来确定顺序给予示例性制剂在加快糖尿病性和其它慢性溃疡的愈合速率方面的治疗效力。

主要效力终点是在12-20周内患者达到充分伤口闭合的百分比。次要终点包括达到100%闭合的时间、达到80%闭合的时间、达到50%闭合的时间，以及在第3、5、10、15、以及20周伤口闭合的量，其是作为离基线伤口大小的百分比变化。卡-迈生存分析技术用来检查时间变数评估指标。

所有患者接受标准糖尿病性(或其它)溃疡护理的方案，该方案包括初步尖锐清创、伤口清洗、伤口敷料、以及伤口压力卸载。通过初步尖锐清创和伤口清洗来治疗溃疡。在抗连接蛋白肽的1分钟、10分钟、30分钟、1小时、6小时、12小时、或24小时内顺序地给予在Pluronic凝胶制剂中的100-500微克的抗连接蛋白肽SRPTEKTIFII(SEQ ID NO:19)，接着给予抗连接蛋白多核苷酸（SEQ ID NO:1）(同样在Pluronic凝胶中，其中总剂量为大约200-400μg)。用不粘绷带和压迫绷带包扎伤口。

每周两次估计伤口，长达12-20周或直到伤口闭合（以较早者为准）。如果患者发展了临床感染或如果伤口状况显著恶化，则从研究中除去上述患者。在每次伤口评估(每周两次)时，绘出伤口周边以确定伤口面积，并用数码相机对伤口拍照。在患者登记时，以及在第5、10、15、以及20周，进行血液化学和血液学测试。可以每5周进行放射线评估以研究对底层骨组成的影响。

实施例6

将抗连接蛋白剂方便地配制成适合于根据本发明的方法给予的形式。

合适的配方包括以下配制剂的混合物。个别的抗连接蛋白剂或多种制剂以及配制剂的量将取决于所期望的特定用途。

在PBS中的ASO
	聚季铵盐（polyquaternium）10
HEC/HPMC/CMC
	透明质酸钠
吐温20
	泊洛沙姆188
Pluronic 87 NF
	SLES
聚L-赖氨酸/聚乙烯亚胺
	苯扎氯铵
羟苯甲酯
	羟苯丙酯
丙二醇
	10mM磷酸盐缓冲剂

本文参考或提及的所有专利、出版物、科学文章、网站、以及其他文献和材料都表示本发明所属领域中技术人员的技术水平，因此每个这样的参考文献和材料以引用方式结合于本文，结合的程度如同其各自以全文方式引用或以全文方式列在本文中一样。申请人保留将任何和全部来自任何这样的专利、出版物、科学文献、网站、电子可得到的信息及其他参考材料或文献的材料和信息自然结合于本说明书中的权利。

本文描述的具体方法和组合物表示优选的实施方式并且是示例性的，并不旨在作为对本发明范围的限制。在考虑本说明书的基础上，本领域技术人员将会想到其他目的、方面、以及实施方式，并且它们都包括在如权利要求的范围所限定的本发明的精神内。对于本领域技术人员来说，显而易见的是，在不偏离本发明的范围和精神的情况下，可以对本文披露的发明进行各种替换和更改。本文说明性地描述的发明可以适当地在没有任何要素或多种要素、或限制或多种限制（其不是本文必要的专门批露的）的情况下加以实施。因此，例如，在本文的每种情况下，在本发明的实施方式或实施例中，术语“包括”、“基本上由……组成”和“由……组成”中的任何一个在本说明书中都可以由其他两个术语中的任一个代替。此外，术语“包含”、“包括”、“含有”等都可以广义地理解并且没有限制。本文说明性地描述的方法和过程可以适当地以不同的步骤顺序加以实施，并且它们不必限于在本文中或在权利要求中示出的步骤的顺序。此外，如在本文中和所附权利要求中所使用的，除非上下文另有明确指明，否则单数形式“一个”、“一种”以及“该”包括复数形式。在任何情况下，本专利不可以解释为限于本文具体披露的具体实施例或实施方式或方法。在任何情况下，本专利决不解释为受到任何审查员或任何其他官方或专利和商标局员工的陈述的限制，除非这样的陈述是明确的而且没有规定或保守表达地适用于申请人的答辩。

已采用的术语和表达被用作描述而不是限制的术语，而且这样的术语和表达的使用也不是倾向于排除任何呈现和描述的等同特征或其部分，但在本发明要求保护的范围内，各种修改都被认为是可能的。因此，可以理解，虽然本发明已经通过优选的实施方式和可选的特征明确地公开，但是本领域技术人员可以采用本文公开的构思的修改和变更，并且这样的修改和变更被认为在如由所附的权利要求所限定的本发明的范围内。

这里已经宽泛且一般地描述了本发明。每个更窄的种类和落入批露类的亚类都构成本发明的一部分。这包括本发明的附带条件或消极限制的一般描述，其从类属中去除了任何主题，而不论去除内容是否在本文中明确地列举出来。

其他的实施方式在所附的权利要求内。另外，在根据马库什类描述本发明的特征或方面的情况下，本领域的技术人员将认识到，本发明因此也能够根据任何马库什类的个别成员或亚组成员来加以描述。

Claims

1.一种包括试剂盒套件的联合制剂形式的药物组合物，具有不同量的(a)连接蛋白反义多核苷酸和(b)抗连接蛋白肽或拟肽。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述连接蛋白反义多核苷酸是连接蛋白43反义多核苷酸，包括选自SEQ.ID.NOS:1至12的序列。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述连接蛋白反义多核苷酸选自：

GTA ATT GCG GCA AGA AGA ATT GTT TCT GTC (SEQID NO:1)；GTAATT GCG GCA GGA GGAATT GTT TCT GTC(SEQ ID NO:2)；以及GGC AAG AGA CAC CAA AGA CACTAC CAG CAT(SEQ ID NO:3)。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述连接蛋白反义多核苷酸具有约15至约35个核苷酸并且充分互补于连接蛋白43mRNA，以形成在生理条件下具有高于20°C的熔点的双链体。

5.根据权利要求2所述的药物组合物，其中，连接蛋白43反义多核苷酸具有约15至约35个核苷酸并且与连接蛋白43mRNA的反义序列具有至少约70%同源性。

6.根据权利要求2所述的药物组合物，其中，连接蛋白43反义多核苷酸包括约0.1至约1000微克的所述连接蛋白43反义多核苷酸，并且抗连接蛋白肽或拟肽是抗连接蛋白43肽或抗连接蛋白43拟肽。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中，所述肽包括选自SEQ.ID.NOS:14至23的序列。

8.根据权利要求6所述的药物组合物，其中，抗连接蛋白43肽或抗连接蛋白43拟肽包括约0.01至约100毫克的所述抗连接蛋白43肽或抗连接蛋白43拟肽。

9.根据权利要求2所述的药物组合物，其中，所述连接蛋白反义多核苷酸是RNAi或siRNA多核苷酸。

10.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述连接蛋白反义多核苷酸和所述抗连接蛋白肽或拟肽被配制成用于局部给予。

11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中，所述连接蛋白反义多核苷酸和所述抗连接蛋白肽或拟肽被配制成凝胶。

12.根据权利要求11所述的药物组合物，其中，所述凝胶是基于聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物的凝胶或基于羧甲基纤维素的凝胶。

13.根据权利要求12所述的药物组合物，其中，所述凝胶是pluronic凝胶。