CN102911201A - 一种制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品的工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品的工艺,步骤如下:(1)取干南极磷虾,加入正己烷,搅拌提取3次,合并提取液,旋转蒸发,得虾油;(2)向虾油中加入丙酮,搅拌提取6次,合并滤液,旋转蒸发,得含磷脂的油状样品液;(3)制备层析柱;(4)取步骤(2)所得含磷脂的油状样品液1.5~3ml,缓缓加入到层析柱内,用氯仿-甲醇洗脱液洗脱,收集洗脱液;(5)将收集的各份洗脱液浓缩,薄层层析定性鉴定各份洗脱液组分,将具单一磷脂酰胆碱组分的浓缩液合并,蒸发除去溶剂,即得磷脂酰胆碱标准品,经高压液相分析检测,PC纯度≥98%。本发明制备了南极磷虾磷脂酰胆碱标准品,为未来南极磷虾深加工产品的检测做出了贡献。
Description
技术领域
本发明涉及一种制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品的工艺。
背景技术
南极磷虾(Euphausia superba)又名大磷虾或南极大磷虾,是一种生活在南冰洋的南极洲水域的磷虾。南极磷虾资源丰富,据估计最高有数亿吨之巨可捕量,是世界现有渔业产量的1倍以上,具有巨大的开发和利用潜力。世界主要渔业国家为日本和波兰。产品在日本主要用作为料理,而世界上其他地方则作为动物饲料及鱼饵。在世界海洋渔业资源普遍衰退的背景下,南极磷虾资源日益受到世界各国关注。
据报道,南极磷虾中含有丰富的磷脂成分,磷脂中富含被称为“抗脂肪肝因子”的磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,缩写PC,又称卵磷脂),其对脂肪肝、脂肪代谢障碍、动脉硬化症、皮肤病以脑血管、心血管等微血管疾病有效;还能防止高血压、治疗皮肤干癣。磷脂酰胆碱可直接作为注射剂使用,更是脂肪输液的乳化剂。磷脂酰胆碱也可用来作为脂质体,如一些毒性较强的药物如抗癌药物顺铂的包被载体,能使抗癌药物顺利通过以磷脂作为构成成份的细胞膜。我国治疗肝病的珍贵药物“肝得健”即是以磷脂酰胆碱为主要成分。此外,磷脂酰胆碱在高级涂料,高级化妆品、农药、杀虫剂、纺织品、石油制品(如橡胶)、电子工业等方面也具有不同的优良用途。
我国南极磷虾现已进入探捕阶段,约1~2年后开始大量捕捞,届时面临的主要问题是南极磷虾的深加工利用。国外对南极磷虾的加工主要是制备南极磷虾虾油,其中磷脂含量约占40%,磷脂酰胆碱是虾油磷脂的主要成分,虾油有可能成为最佳的磷脂酰胆碱加工的原料,生产南极磷虾虾油,生产南极磷虾磷脂酰胆碱,均需要定性定量检测PC的含量。检测过程中需要南极磷虾PC的标准品标定。制备南极磷虾PC标准品是未来南极磷虾深加工产品检测的关键。PC标准品本身也是一种产品。
发明内容
针对上述现有技术,本发明提供了一种制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品的工艺。
本发明是通过以下技术方案实现的:
一种制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品的工艺,步骤如下:
(1)取干南极磷虾(含水量为8%~10%)100g,加入500~600ml的正己烷,20~35℃下搅拌提取3次,每次提取1h,每提取一次,过滤将干南极磷虾滤出;合并提取液(约1350~1700ml),在30~45℃,-0.07~-0.09Mpa下旋转蒸发,得虾油(约4.5~5.5g);
(2)向步骤(1)所得的虾油中加入5~7倍(指质量体积倍数,即1g物料加入5~7ml液体,下同)的丙酮,20~35℃下搅拌提取6次,每次提取0.5h,提取液过滤,每提取一次,过滤得滤液和滤渣;合并6次的滤液(约135~210ml),在30~40℃,-0.07~-0.09Mpa下旋转蒸发,得含磷脂的油状样品液;
(3)层析柱的制备:称取65~75g硅胶,110~120℃下活化6~10h;向硅胶中加入3倍氯仿(质量体积倍数),搅拌成浆状;采用湿法装柱法将硅胶装入到3×30cm2层析柱中,静置,使硅胶充分沉降至体积稳定不变;
(4)取步骤(2)所得含磷脂的油状样品液1.5~3ml,缓缓加入到层析柱内,用氯仿:甲醇=1:1~2(体积比)洗脱液洗脱,流速为2~3ml/min,按每份100~300ml收集洗脱液;
(5)将收集的各份洗脱液浓缩,薄层层析定性鉴定各份洗脱液组分,将具单一磷脂酰胆碱组分的浓缩液合并,蒸发除去溶剂,得磷脂酰胆碱标准品(约8~12mg),经HPLC检测,磷脂酰胆碱的纯度≥98%。
所述南极磷虾磷脂酰胆碱(PC)的薄层层析定性检测方法为:
薄层层析使用GF254硅胶薄层板,展开剂为氯仿:甲醇:水:乙胺=14:6:0.6:5(V:V:V:V),展距为6cm,取各洗脱液的浓缩液点样,展毕后晾干,放入溴百里酚蓝染液缸中染色12秒;取出后晾干,将干燥后的薄层板放在薄层扫描仪上观察:PC的Rf值为0.37。
所述南极磷虾磷脂酰胆碱(PC)的HPLC定量检测方法为:
采用美国(waters)HPLC仪,2489紫外光检测器,Sepax HP-silica(4.6×250mm 5um)色谱柱,以甲醇作流动相,流速1ml/min,柱温35℃,检测波长206nm,进样量10ul,PC出峰时间为6~7分钟,检测纯度98%~98.9%。
本发明首先用正己烷从干的南极磷虾中提取出虾油,经丙酮提取除杂质,采用硅胶柱层析分离纯化南极磷虾PC标准品,经高压液相分析检测,PC纯度≥98%。
本发明制备了南极磷虾磷脂酰胆碱标准品,为未来南极磷虾深加工产品的检测做出了贡献。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品
步骤为:
(1)干南极磷虾100g,加入正己烷600ml,20℃下搅拌提取3次,每次1h,每提取一次,过滤将干南极磷虾滤出;合并三次的提取液(1700ml),在30℃,-0.08Mpa下旋转蒸发除去正己烷,得虾油5.5g。
(2)向上述制备的虾油中加入丙酮30ml,25℃下搅拌提取6次,每次提取0.5h,每提取一次,过滤得滤液和滤渣;合并6次的滤液(180ml),滤液在30℃,-0.08Mpa下旋转蒸发除去丙酮,得含磷脂的油状样品液4ml。
(3)称取硅胶(200~300目)65g,110℃活化6h,向硅胶中加入195ml氯仿搅拌成浆状,采用湿法装柱法将硅胶装入到层析柱(3×30cm2)中,静置,使硅胶充分沉降至硅胶体积稳定不变。
(4)取步骤(2)制备的样品液1.5ml,缓缓加入层析柱内,用氯仿:甲醇=1:1(体积比)洗脱液洗脱,流速为2.5ml/min,按每份100ml收集洗脱液,浓缩。薄层层析定性鉴定洗脱液组分,将具有单一PC组分的浓缩液合并,蒸发除去溶剂,得PC标准品8mg,经HPLC检测,PC纯度为98%。
南极磷虾磷脂酰胆碱(PC)的薄层层析定性检测方法为:
薄层层析使用GF254硅胶薄层板,展开剂为氯仿:甲醇:水:乙胺=14:6:0.6:5(V:V:V:V),展距为6cm,取各洗脱液的浓缩液点样,展毕后晾干,放入溴百里酚蓝染液缸中染色12秒;取出后晾干,将干燥后的薄层板放在薄层扫描仪上观察:PC的Rf值为0.37。
南极磷虾磷脂酰胆碱(PC)的HPLC定量检测方法为:
采用美国(waters)HPLC仪。,2489紫外光检测器,Sepax HP-silica(4.6×250mm 5um)色谱柱,以甲醇作流动相,流速1ml/min,柱温35℃,检测波长206nm,进样量10ul,PC出峰时间为6~7分钟,检测纯度98%~98.9%。
实施例2制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品
步骤为:
(1)干南极磷虾100g,加入正己烷500ml,25℃下搅拌提取3次,每次1h,每提取一次,过滤将干南极磷虾滤出;合并三次的提取液(1350ml),在45℃,-0.07Mpa下旋转蒸发除去正己烷,得虾油4.5g。
(2)向制备的虾油中加入丙酮22.5ml,20℃下搅拌提取6次,每次提取0.5h,每提取一次,过滤得滤液和滤渣;合并6次的滤液(135ml),滤液在40℃,-0.07Mpa下旋转蒸发除去丙酮,得含磷脂的油状样品液4ml。
(3)称取硅胶(200~300目)68g,115℃活化8h,向硅胶中加入204ml氯仿搅拌成浆状,采用湿法装柱法将硅胶装入到层析柱(3×30cm2)中,静置,使硅胶充分沉降至硅胶体积稳定不变。
(4)取步骤(2)制备的样品液2ml,缓缓加入层析柱内,用氯仿:甲醇=1:1.5洗脱液洗脱,流速为2ml/min,按每份300ml收集洗脱液,浓缩,薄层层析定性鉴定洗脱液组分。将具有单一PC组分的浓缩液合并,蒸发除去溶剂,得PC标准品10mg,经HPLC检测,PC纯度为98.5%。
实施例3制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品
步骤为:
(1)干南极磷虾100g,加入正己烷550ml,35℃下搅拌提取3次,每次1h,每提取一次,过滤将干南极磷虾滤出;合并三次的提取液(1500ml),在35℃,-0.09Mpa下旋转蒸发除去正己烷,得虾油5g。
(2)向制备的虾油中加入丙酮35ml,35℃下搅拌提取6次,每次提取0.5h,每提取一次,过滤将干南极磷虾滤出;合并三次的提取液(210ml),滤液在40℃,-0.09Mpa下旋转蒸发除去丙酮,得含磷脂的油状样品液4ml。
(3)称取硅胶(200~300目)75g,120℃活化10h,向硅胶中加入225ml氯仿搅拌成浆状,采用湿法装柱法将硅胶装入到层析柱(3×30cm2)中,静置,使硅胶充分沉淀至体积稳定不变。
(4)取步骤(2)制备的样品液3ml,缓缓加入层析柱内,用氯仿:甲醇=1:2洗脱液洗脱。流速为3ml/min每份200ml,收集洗脱液,浓缩,薄层层析定性鉴定洗脱液组分。将具有单一PC组分的浓缩液合并,蒸发除去溶剂,得PC标准品12mg。经HPLC检测,PC纯度为98.9%。
Claims (2)
1.一种制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品的工艺,其特征在于:步骤如下:
(1)取干南极磷虾100g,加入500~600ml的正己烷,20~35℃下搅拌提取3次,每次提取1h,每提取一次,过滤将干南极磷虾滤出;合并提取液,在30~45℃,-0.07~-0.09Mpa下旋转蒸发,得虾油;
(2)向步骤(1)所得的虾油中加入5~7倍的丙酮,20~35℃下搅拌提取6次,每次提取0.5h,提取液过滤,每提取一次,过滤得滤液和滤渣;合并6次的滤液,在30~40℃,-0.07~-0.09Mpa下旋转蒸发,得含磷脂的油状样品液;
(3)层析柱的制备:称取65~75g硅胶,110~120℃下活化6~10h;向硅胶中加入3倍氯仿,搅拌成浆状;采用湿法装柱法将硅胶装入到3×30cm2层析柱中,静置,使硅胶充分沉降至体积稳定不变;
(4)取步骤(2)所得含磷脂的油状样品液1.5~3ml,缓缓加入到层析柱内,用氯仿:甲醇=1:1~2洗脱液洗脱,流速为2~3ml/min,按每份100~300ml收集洗脱液;
(5)将收集的各份洗脱液浓缩,薄层层析定性鉴定各份洗脱液组分,将具单一磷脂酰胆碱组分的浓缩液合并,蒸发除去溶剂,即得磷脂酰胆碱标准品。
2.根据权利要求1所述的一种制备南极磷虾磷脂酰胆碱标准品的工艺,其特征在于:所述硅胶为200~300目的硅胶。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106153763A (zh) * | 2016-06-17 | 2016-11-23 | 浙江工商大学 | 刀额新对虾中磷脂的亲水色谱‑串联质谱检测方法 |
CN108864179A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-11-23 | 大连工业大学 | 一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法 |
CN109096327A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-12-28 | 大连工业大学 | 一种高纯度蛋黄磷脂酰乙醇胺的制备方法 |
CN114965829A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-08-30 | 浙江工商大学 | 富集epa/dha型磷脂酰胆碱的柱层析法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101792461A (zh) * | 2010-02-04 | 2010-08-04 | 南京工业大学 | 一种注射用大豆卵磷脂的制备工艺 |
CN102041166A (zh) * | 2011-01-20 | 2011-05-04 | 山东师范大学 | 从南极磷虾中提取高磷脂含量的虾油的方法 |
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101792461A (zh) * | 2010-02-04 | 2010-08-04 | 南京工业大学 | 一种注射用大豆卵磷脂的制备工艺 |
CN102041166A (zh) * | 2011-01-20 | 2011-05-04 | 山东师范大学 | 从南极磷虾中提取高磷脂含量的虾油的方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
宋华等: "柱层析法分离大豆磷脂", 《中国油脂》 * |
张潇予: "南极磷虾磷脂酰胆碱的提纯", 《山东师范大学硕士学位论文》 * |
张维农等: "柱色谱法制备高纯大豆卵磷脂和脑磷脂研究", 《中国油脂》 * |
李卫等: "柱层析法分离卵磷脂和脑磷脂", 《湖北工学院学报》 * |
韩雪等: "柱层析法分离纯化大豆磷脂酰胆碱", 《食品研究与开发》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106153763A (zh) * | 2016-06-17 | 2016-11-23 | 浙江工商大学 | 刀额新对虾中磷脂的亲水色谱‑串联质谱检测方法 |
CN106153763B (zh) * | 2016-06-17 | 2018-12-14 | 浙江工商大学 | 刀额新对虾中磷脂的亲水色谱-串联质谱检测方法 |
CN108864179A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-11-23 | 大连工业大学 | 一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法 |
CN109096327A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-12-28 | 大连工业大学 | 一种高纯度蛋黄磷脂酰乙醇胺的制备方法 |
CN114965829A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-08-30 | 浙江工商大学 | 富集epa/dha型磷脂酰胆碱的柱层析法 |
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