CN102905763B - 脂质、脂质组合物和使用它们的方法 - Google Patents

脂质、脂质组合物和使用它们的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102905763B
CN102905763B CN201080064582.XA CN201080064582A CN102905763B CN 102905763 B CN102905763 B CN 102905763B CN 201080064582 A CN201080064582 A CN 201080064582A CN 102905763 B CN102905763 B CN 102905763B
Authority
CN
China
Prior art keywords
lipid
compound
group
disease
alkyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201080064582.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN102905763A (zh
Inventor
J·巴里扎
K·鲍曼
A·吉尔
T·法扎尔
C·李
C·瓦热塞
L·韦斯特
J·赵
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novartis AG
Original Assignee
Novartis AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis AG filed Critical Novartis AG
Publication of CN102905763A publication Critical patent/CN102905763A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102905763B publication Critical patent/CN102905763B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J31/006—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J31/003

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Polyethers (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了用于将治疗有效量的生物活性剂递送至肝、肿瘤和/或其它细胞或组织的制剂和优化方案。还提供了式(I)的阳离子脂质化合物的组合物和用途。本发明还涉及式(XI)的隐形脂质的组合物和用途。

Description

脂质、脂质组合物和使用它们的方法
发明领域
本发明涉及阳离子脂质化合物、隐形(stealth)脂质化合物和包含所述化合物的组合物。本发明还涉及制备所述化合物和组合物的方法以及所述化合物和组合物的使用方法和用途，例如将生物活性剂递送至细胞和组织的方法和用途。本发明描述了用在将生物活性剂递送至特定细胞类型(包括尤其是肝和肿瘤)的脂质制剂中的阳离子脂质的优化的pKa范围以及用于优化所述制剂的方法。
发明背景
将生物活性剂(包括治疗相关化合物)递送至受治疗者常被化合物难以达到靶细胞或组织所阻碍。特别地，将许多生物活性剂输送入活细胞高度受限于细胞的复杂膜***。这些局限可导致需要使用比产生效果所需的浓度高得多的生物活性剂浓度，这增加了毒性作用和副作用的风险。该问题的一种解决方式是使用能选择性进入细胞的特异性载体分子。脂质载体、生物可降解聚合物和各种轭合物***可用于改善生物活性剂向细胞的递送。
特别难以递送至细胞的一类生物活性剂是生物治疗剂(包括核苷、核苷酸、多核苷酸、核酸及其衍生物)。一般而言，核酸在细胞或血浆中仅稳定有限的一段时间。RNA干扰、RNAi疗法、RNA药物、反义疗法和基因疗法等的开发已经增加了对将活性核酸药物引入细胞的有效方法的需求。由于这些原因，能稳定和递送基于核酸的药物进入细胞的组合物受到人们的特别关注。
用于改善外源性核酸向细胞内运输的最充分研究的方法涉及使用病毒载体或阳离子脂质。病毒载体可用于将基因有效地转入一些细胞类型，但它们一般不能用于将化学合成的分子引入细胞。
一种供替代选择的方法是使用掺入了阳离子脂质的递送组合物，所述的阳离子脂质在一个部分上与生物活性剂相互作用并且在另一个部分上与膜***相互作用(就综述而言，参见Felgner，1990，Advanced DrugDelivery Reviews，5，162-187和Felgner，1993，J.Liposome Res.，3，3-16)。据报道这类组合物含有脂质体。
自从Bangham(J.Mol.Biol.13，238-252)在1965年首次描述脂质体以来，人们一直持续关注并致力于开发用于递送生物活性剂的基于脂质的载体***。由Philip Felgner等人Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，84，7413-7417(1987)首次描述了通过使用带正电荷的脂质体将功能性核酸引入培养的细胞的方法。该方法随后被K.L.Brigham等人Am.J.Med.Sci.，298，278-281(1989)在体内证实。
脂质体是有吸引力的载体，因为它们防止生物分子降解，同时改善它们的细胞摄取。在各种类型的脂质体中，含有阳离子脂质的脂质体常用于递送聚阴离子(例如核酸)。可以使用单独的阳离子脂质(并任选包括其它脂质)和两亲化合物例如磷脂酰乙醇胺形成这类脂质体。在本领域中众所周知的是，脂质制剂组合物及其制备方法均影响得到的聚集物的结构和大小。
阳离子脂质用于生物活性剂的细胞递送的应用具有几个优点。使用阳离子脂质包囊阴离子化合物因静电作用而基本上是定量的。此外，认为阳离子脂质与带负电荷的细胞膜相互作用，从而引发细胞膜运输(Akhtar等人1992，Trends Cell Bio.，2，139；Xu等人1996，Biochemistry 35，5616)。
在Felgner关于通过使用带正电荷的脂质体将功能性核酸引入培养的细胞的早期工作之后，在专利申请EP 0 187 702中已经披露了基于通式I的阳离子脂质化合物。
这些阳离子脂质化合物一般由与含氮的“头部”基团(“head”group)连接的两个烷基或烯基链组成。还公开了R3、R4和R5中的两个或三个一起为奎宁环-1-基(quinuclidino)、哌啶子基、吡咯烷子基或吗啉代。
自从EP 0 187 702以来，不同的其它研究人员已经披露了阳离子脂质化合物。相关专利申请是描述合成的阳离子脂质和脂质体的WO00/030444。该申请公开了具有各种不同的头部基团的阳离子脂质化合物；一些实施例的特征在于一个以上的头部基团。在所公开的化合物中有式(II)的化合物。
WO 2005/121348公开了基于脂质的制剂。其中公开的核酸-脂质颗粒包含干扰RNA分子、带有约10-20个碳原子的烷基侧链的具有一个以上不饱和单一位置的阳离子脂质、非阳离子脂质和抑制颗粒聚集的轭合脂质例如聚乙二醇(PEG)-脂质轭合物或聚酰胺(ATTA)-轭合物。该专利申请中公开的具体阳离子脂质化合物包括DSDMA、DODMA、DLinDMA、DLenDMA。
Cullis和Bailey，Biochemistry 1994，33，12573-12580报道了包含氨基酸的脂质体，例如
另一个涉及新的阳离子脂质化合物的近期的公开文献是WO2008/137758，其描述了一系列氨基酸脂质化合物，据报道其可用于药物递送和诊断。
US 2006/0240554和相关申请US 2008/0020058和US 2009/0048197也涉及阳离子脂质。据报道这些脂质能将生物活性剂(包括小核酸分子例如短干扰核酸(siNA))递送至细胞和/或组织。
US2006/0240554、US2008/0020058和US2009/0048197描述了阳离子脂质CLinDMA与胆固醇和PEG-DAG组合用于将siRNA递送至细胞的用途。CLinDMA的结构如下所示；在该分子的“头部”上是-N(Me)2基团。ClinDMA在本文中也称作E0173。
WO2009/086558公开了下面的化合物：
该申请还公开了具有下面的通式的氨基脂质(其中R3和R4可以连接形成任选被取代的4-6个碳原子和1或2个选自氮和氧的杂原子的杂环)：
需要有利于生物活性剂向细胞的全身和局部递送的另外的阳离子脂质。也需要相对于本领域已知的那些阳离子脂质而言改善生物活性剂向细胞的全身和局部递送的阳离子脂质。还需要对于生物活性剂向特定器官和肿瘤(尤其是肝外的肿瘤)的改善的全身和局部递送而言具有优化的物理特征的脂质制剂。
发明概述
本发明提供了新的阳离子脂质和隐形脂质、含有它们的制剂和使用它们的方法。还提供了使用所述脂质递送治疗有效量的药物(包括尤其是RNAi构建体)、递送至需要其的受治疗者的制剂。提供了含有pKa在特定范围内的阳离子脂质的特定制剂，用于将治疗有效量的药物施用至受治疗者的肝和/或身体组织中的肿瘤。作为一般性原则(存在例外)，对于递送至肿瘤而言最有效的制剂(下文更详细地描述)含有pKa为约6.1或更低的阳离子脂质，但是特定范围包括约5.0-约6.7，尤其是包括约5.2-约6.3，或约5.4-约6.2。或约5.8-约6.1，这取决于肿瘤类型；而对于递送至肝而言最有效的制剂(下文更详细地描述)含有pKa为约6.1或更高的阳离子脂质，但是特定范围包括约5.1-约7.4，包括约5.3-约7.3，尤其是包括约5.9-约7.0，在一个实施方案中是约6.2-约6.8。
本领域技术人员可以通过调整制剂的其它方面进一步优化制剂，包括但不限于个别地选择例如针对所靶向的细胞或器官类型优化的阳离子脂质的pKa、所用的阳离子脂质、所用的隐形脂质、辅助脂质、所用的中性脂质，包括(无论中性脂质存在还是不存在)所选择的辅助脂质、任选的中性脂质、隐形脂质和阳离子脂质的比例、N/P比、颗粒大小、剂量方案、给予的剂量、配制方法等。
本发明提供了阳离子脂质(本文也称作“化合物”)和包含所述脂质的组合物。本发明还提供了制备所述化合物和组合物的方法以及所述化合物和组合物将生物活性剂(包括治疗剂)递送至细胞(包括体内递送)的方法和用途，和优化用于体内递送至特定细胞类型和组织的所述制剂的方法和用途。本发明还提供了隐形脂质。
在一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物：
或其药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
b不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
c不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L不存在或者是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明还提供了包含式(I)的化合物的药物组合物。这些组合物可以包含生物活性剂，任选地还可以包含与生物活性剂组合的其它脂质组分。
本发明还提供了包含式(XI)的化合物的药物组合物。这些组合物可以包含生物活性剂，任选地还可以包含与生物活性剂组合的其它脂质组分。
在一个实施方案中，本发明提供了式(XI)的化合物：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
Z是亲水性头部基团组分，其选自PEG和基于聚(唑啉)、聚(环氧乙烷)、聚(乙烯醇)、聚(甘油)、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚[N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺]和聚(氨基酸)的聚合物，其中所述聚合物可以是直链的或支链的，且其中所述聚合物可以任选被取代；
其中Z以n个亚单元聚合；
n是10-200个单元的Z的数均聚合度，其中针对不同的聚合物类型n被优化；
L1是任选被取代的C1-10亚烷基或C1-10亚杂烷基连接基团，包括0个、1个、2个或更多个醚(例如-O-)、酯(例如-C(O)O-)、琥珀酸酯(例如-O(O)C-CH2-CH2-C(O)O-))、氨基甲酸酯(例如-OC(O)-NR’-)、碳酸酯(例如-OC(O)O-)、酮(例如-C-C(O)-C-)；羰基(例如-C(O)-)；脲(例如-NRC(O)NR’-)、胺(例如-NR’-)、酰胺(例如-C(O)NR’-)、亚胺(例如-C(NR’)-)、硫醚(例如-S-)、黄原酸酯(xanthate)(例如-OC(S)S-)和磷酸二酯(例如-OP(O)2O-)；它们中的任意一个可以被0个、1个或更多个Z基团取代；
其中R’独立地选自-H、-NH-、-NH2、-O-、-S-、磷酸酯基(phosphate)或任选被取代的C1-10亚烷基；
X1和X2独立地选自：碳或选自-NH-、-O-、-S-或磷酸酯基的杂原子；
A1和A2独立地选自C6-30烷基、C6-30烯基和C6-30炔基，其中A1和A2可以相同或不同，
或者其中A1和A2与它们所连接的碳原子一起形成任选被取代的类固醇。
含有本发明的脂质的组合物可用于例如递送治疗化合物(例如一种或多种生物活性剂)以治疗障碍或疾病，尤其是包括那些对调节患者的基因表达或向靶细胞或组织施用治疗剂有响应的障碍或疾病。为此，本发明的化合物和组合物可用于治疗患者的疾病和病症。特别地，所述化合物可被用于脂质体和/或脂质纳米粒制剂组合物中以将生物活性剂递送至细胞或组织，所述生物活性剂包括例如抗体、低分子量组合物、蛋白质治疗剂和核酸组合物如针对RNAi的siRNA。
在本发明的方法中，使用所述的阳离子脂质将生物活性剂递送至细胞，在此过程中，它们可以通过上皮和内皮组织，例如皮肤、粘膜、血管组织、胃肠组织、血脑屏障组织、眼组织、肺组织、肝组织、心脏组织、肾组织、肿瘤组织等。所述化合物和组合物可用于局部和全身递送生物活性剂。
发明详述
迄今为止，RNAi领域的治疗潜能因将治疗有效量的RNAi组合物递送至大部分身体组织的问题而尚未被满足。当定向于眼、皮肤、肺和肝中的组织时，RNAi治疗剂具有一些有效性。仍然需要用于递送治疗有效量的RNAi以治疗所有其它身体组织以及癌症(包括转移癌)的组合物和方法。
本文所述的发现是在用于递送至肿瘤的制剂中的阳离子脂质的最佳pKa范围低于用于递送至肝的制剂中的阳离子脂质的范围。作为一般性原则(因为存在例外)，用于递送至肿瘤的具有最有效的脂质的制剂(下文更详细地描述)含有pKa为约5.0-约6.7(尤其是包括约5.8-约6.1)的阳离子脂质，这取决于肿瘤类型，而用于递送至肝的具有最有效的脂质的制剂(下文更详细地描述)含有pKa为约5.1-约7.4(尤其是包括约5.9-约7.0)的阳离子脂质。在一个实施方案中，在用于将生物活性剂递送至肿瘤或肿瘤细胞的制剂中pKa为约6.1或更低的阳离子脂质是最有效的；而在用于将生物活性剂递送至肝或肝细胞的制剂中pKa为约6.1或更高的阳离子脂质是最有效的。
本文提供了新的阳离子脂质、隐形脂质和含有它们的制剂；以及使用方法。描述了特定pKa范围的举例性的阳离子脂质，其中当体内施用于受治疗者时，含有这些阳离子脂质的制剂可以将治疗有效量的RNAi组合物递送至肿瘤。描述了用另外的pKa范围的阳离子脂质制备的其它制剂，其中当体内施用于受治疗者时，含有这些阳离子脂质的制剂可以将治疗有效量的RNAi组合物递送至肝。
本发明的阳离子脂质
在一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物：
或其药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
b不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
c不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L不存在或者是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；且
Y2是任选被取代的类固醇。
在式I的一个实施方案中，a是任选被取代的C1-2亚烷基。在式I的一个实施方案中，a是任选被取代的C1亚烷基。在式I的一个实施方案中，b是任选被取代的C0-2亚烷基。在式I的一个实施方案中，b是任选被取代的C1亚烷基。在式I的一个实施方案中，c不存在或者是任选被取代的C1亚烷基。在式I的一个实施方案中，a、b和c是未被取代的。在式I的一个实施方案中，c不存在。
在式I的一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基或C3-20-杂环炔基。在式I的一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基。在式I的一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C5-16基团。在式I的一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C5-12基团。
在式I的一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C5基团、C6基团或C7基团。在式I的一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C5基团或C6基团。
在式I的一个实施方案中，R1和R2与所连接的氮个原子一起选自H1至H52。
在式I的一个实施方案中，X1是O。在式I的一个实施方案中，X2是O。
在式I的一个实施方案中，L包含至少一个杂原子。在式I的一个实施方案中，L包含至少一个O原子。在式I的一个实施方案中，L包含至少两个杂原子。在式I的一个实施方案中，L包含至少两个O原子取代。在式I的一个实施方案中，Lc是任选被取代的C1-15亚烷基或C1-15亚杂烷基。在式I的一个实施方案中，Lc选自式Lc-i至Lc-xxxxiii中的任意一种或多种。
在式I的一个实施方案中，Lc是任选被取代的C1-15亚杂烷基。在式I的一个实施方案中，Lc是任选被取代的C1-11基团。在式I的一个实施方案中，Lc是任选被取代的C1-9基团。在式I的一个实施方案中，Lc是任选被取代的C3-8基团。在式I的一个实施方案中，Lc是任选被取代的C4-7基团。在式I的一个实施方案中，Lc是任选被取代的C5、C6或C7基团。
在式I的一个实施方案中，d是0；e是0，且f是1。
在式I的一个实施方案中，Y1是C12-28基团。在式I的一个实施方案中，Y1是C14-26基团。在式I的一个实施方案中，Y1是C16-24基团。在式I的一个实施方案中，Y1是C16-22基团。在式I的一个实施方案中，Y1具有至少一个烯基团。在式I的一个实施方案中，Y1具有1、2或3个烯基团。在式I的一个实施方案中，Y1在ω-3位上具有烯基团。在式I的一个实施方案中，Y1在ω-6位上具有烯基团。在式I的一个实施方案中，Y1在ω-9位上具有烯基团。
在式I的一个实施方案中，Y1具有至少一个顺式不饱和烯基团。在式I的一个实施方案中，Y1具有至少两个顺式不饱和烯基团。在式I的一个实施方案中，Y1具有至少三个顺式不饱和烯基团。在式I的一个实施方案中，Y1选自y1-i至y1-vii。
在式I的一个实施方案中，Y2通过任选被取代的类固醇上的氧原子与L连接。在式I的一个实施方案中，Y2通过类固醇环A的3-位上的氧原子与L连接。式I的一个实施方案中，Y2是固醇，其中类固醇环A的3-位上的羟基的氢原子被除去。在式I的一个实施方案中，所述的固醇是胆固醇。
本发明的第二个实施方案是式(II)的化合物：
或其药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
b不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
c不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；
条件是L包含一个或多个杂原子，且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明的第三个实施方案是式(III)的化合物：
或其药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明的第四个实施方案是式(IV)的化合物：
或其药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；
条件是L包含一个或多个杂原子，且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明的第五个实施方案是式(V)的化合物：
或其药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O；
X2是O；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L 是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；
条件是L包含一个或多个杂原子，且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明的第六个实施方案是式(VI)的化合物：
或其药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O；
X2是O；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L 是-Lc-，其中
Lc是任选被取代的C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明的第七个实施方案是式(VII)的化合物：
或其药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O；
X2是O；
Y1是任选被取代的C16-22烯基；
L 是-Lc-，其中
Lc是任选被取代的C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明的第八个实施方案是式(VIII)的化合物：
或其药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O；
X2是O；
Y1是任选被取代的C16-22烯基；
L是-Lc-，其中
Lc是任选被取代的C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；且
Y2是胆固醇，其通过类固醇环A的3-位上的羟基连接，所述羟基的氢原子不存在。
本发明的第九个实施方案是式(IX)的化合物：
或其药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L 是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；
条件是L包含一个或多个杂原子，且
Y2是任选被取代的类固醇；且
其中该化合物的pKa为约5.1-约7.4。
本发明的第十个实施方案是式(X)的化合物：
或其药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L 是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；
条件是L包含一个或多个杂原子，且
Y2是任选被取代的类固醇；且
其中该化合物的pKa为约5.0-约6.7。
隐形脂质
本发明包括含有与脂质部分相连接的亲水性头部基团的“隐形脂质”。隐形脂质的进一步的特征在下文提供。
在一个实施方案中，提供了式(XI)的隐形脂质组合物：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
Z是亲水性头部基团组分，其选自PEG和基于聚(唑啉)、聚(环氧乙烷)、聚(乙烯醇)、聚(甘油)、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚[N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺]和聚(氨基酸)的聚合物，其中所述聚合物可以是直链的或支链的，且其中所述聚合物可以任选被取代；
其中Z以n个亚单元聚合；
n是10-200个单元的Z的数均聚合度，其中针对不同的聚合物类型n被优化；
L1是任选被取代的C1-10亚烷基或C1-10亚杂烷基连接基团，包括0个、1个、2个或更多个醚(例如-O-)、酯(例如-C(O)O-)、琥珀酸酯(例如-O(O)C-CH2-CH2-C(O)O-))、氨基甲酸酯(例如-OC(O)-NR’-)、碳酸酯(例如-OC(O)O-)、酮(例如-C-C(O)-C-)、羰基(例如-C(O)-)、脲(例如-NRC(O)NR’-)、胺(例如-NR’-)、酰胺(例如-C(O)NR’-)、亚胺(例如-C(NR’)-)、硫醚(例如-S-)、黄原酸酯(例如-OC(S)S-)和磷酸二酯(例如-OP(O)2O-)；它们中的任意一个可以被0个、1个或更多个Z基团取代；
其中R’独立地选自-H、-NH-、-NH2、-O-、-S-、磷酸酯基或任选被取代的C1-10亚烷基；
X1和X2独立地选自：碳或选自-NH-、-O-、-S-或磷酸酯基的杂原子；
A1和A2独立地选自C6-30烷基、C6-30烯基和C6-30炔基，其中A1和A2可以相同或不同，
或者其中A1和A2与它们所连接的碳原子一起形成任选被取代的类固醇。
在一个实施方案中，本发明提供了式(XII)的隐形脂质
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中
PEG是聚(乙二醇)亚单元，其中PEG可以是直链的或支链的；
n是10-200个单元、优选约23个单元、约45个单元或约68个单元的PEG的数均聚合度；
L1是任选被取代的C1-10亚烷基或C1-10亚杂烷基连接基团，其含有1个、2个或更多个醚、酯、琥珀酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、酮、羰基、脲、胺、酰胺、亚胺、硫醚、黄原酸酯和磷酸二酯；它们中的任意一个可以被0个、1个或更多个PEG基团取代；
X1和X2独立地选自碳或氧；
A1和A2独立地选自C6-30烷基、C6-30烯基和C6-30炔基，其中A1和A2可以相同或不同，
或者其中A1和A2与它们所连接的碳原子一起形成任选被取代的类固醇。
当用例如式(I)的阳离子脂质配制时，式(XI)和(XII)的隐形脂质提供了与以前的可比较的隐形脂质相比具有增加的体内效力的脂质纳米粒。
因此，本发明提供了具有改善功效和毒性的潜能的隐形脂质。本文提供了含有这些隐形脂质的组合物和这些隐形脂质将生物活性剂递送至细胞的用途。
正如表8中所提供的，将使用相同方法配制的并且隐形脂质不同、其它组成相同的两种举例性的脂质纳米粒递送至肝。含有现有技术的隐形脂质S010并且递送对因子VII(“FVII”)具有特异性的siRNA构建体的脂质纳米粒当施用于肝时显示出72.2％的体内抑制，而相比之下含有隐形脂质S006的脂质纳米粒显示出83.8％的体内因子VII抑制。
在表9中提供的另一个实例中，针对体内递送至皮下肿瘤，比较了除PEG/隐形脂质外其它组成相同的6种脂质纳米粒的对Polo样激酶1(Polo-Like Kinase 1)(“PLK1”)具有特异性的siRNA的有效递送。含有现有技术的隐形脂质S011的脂质纳米粒在肿瘤组织中显示出46％的体内PLK1抑制，而含有隐形脂质S004、S007、S009、S008和S005的脂质纳米粒在肿瘤组织中分别显示出56％、65％、64％、60％和52％的体内PLK1抑制。
当用在用于递送生物活性剂(在该情况中是一种或多种siRNA)的制剂和治疗组合物中时，隐形脂质S001-S009和S012-S026各自以及因此作为一类显示出了改善的特征。
本发明提供了新的隐形脂质。在本发明的一个实施方案中，隐形脂质是S001。在一个实施方案中，隐形脂质是S002。在一个实施方案中，隐形脂质是S003。在一个实施方案中，隐形脂质是S004。在一个实施方案中，隐形脂质是S005。在一个实施方案中，隐形脂质是S006。在一个实施方案中，隐形脂质是S007。在一个实施方案中，隐形脂质是S008。在一个实施方案中，隐形脂质是S009。在一个实施方案中，隐形脂质是S012。在一个实施方案中，隐形脂质是S013。在一个实施方案中，隐形脂质是S014。在一个实施方案中，隐形脂质是S015。在一个实施方案中，隐形脂质是S016。在一个实施方案中，隐形脂质是S017。在一个实施方案中，隐形脂质是S018。在一个实施方案中，隐形脂质是S019。在一个实施方案中，隐形脂质是S020。在一个实施方案中，隐形脂质是S021。在一个实施方案中，隐形脂质是S022。在一个实施方案中，隐形脂质是S023。在一个实施方案中，隐形脂质是S024。在一个实施方案中，隐形脂质是S025。在一个实施方案中，隐形脂质是S026。
用于递送生物活性剂的制剂
一般而言，在现有技术中通过单独改变隐形脂质控制组织依赖性功效，而我们已经发现可通过改变阳离子脂质令人惊奇地控制针对特定组织的功效。如下文所讨论的那样，已经发现可通过仅改变制剂中包括的阳离子脂质来调整用于递送生物活性剂的脂质制剂以相对于另一种细胞类型或器官优先靶向于一种细胞类型或器官。例如，与含有pKa为约6.1或更低的阳离子脂质的制剂相比，pKa为约6.1或更高的阳离子脂质在靶向于肝的制剂中有效得多，pKa为约6.1或更低的阳离子脂质在体内靶向于肿瘤的制剂中相差无几地更为有效。作为一般性原则(存在例外)，用于递送至肿瘤的具有最有效的脂质的制剂(下文更详细地描述)含有pKa为约5.0-约6.7(尤其是包括约5.2-约6.3或约5.4-约6.2或约5.8-约6.1)的阳离子脂质，这取决于肿瘤类型；而用于递送至肝的具有最有效的脂质的制剂(下文更详细地描述)含有pKa为约5.1-约7.4(包括约5.3-约7.3，包括约5.9-约7.0，在一个实施方案中包括约6.2-约6.8)的阳离子脂质。
在一个实施方案中，通过将具有所需pKa范围的阳离子脂质、隐形脂质、辅助脂质、任选的基于烷基间苯二酚的脂质和任选的中性脂质合并入制剂中本领域技术人员可进行进一步的优化，所述制剂包括例如脂质体制剂、脂纳米粒(liponanoparticle)(LNP)制剂等，用于体内递送至特定细胞和组织。在一个实施方案中，通过调整这些不同类型脂质之间的脂质摩尔比得到进一步优化。在一个实施方案中，通过调整一种或多种如下方面得到进一步优化：所需的颗粒大小、N/P比、配制方法和/或给药方案(例如，所施用的剂量数-时间、以mg/kg计的实际剂量、剂量的定时、与其它治疗剂的组合等)。本领域技术人员已知的涉及以上列出的实施方案的各种优化技术均被视为本发明的组成部分。
在一个实施方案中，提供了本发明的阳离子脂质，其中用于递送治疗有效量的生物活性剂的制剂包含阳离子脂质、辅助脂质和隐形脂质各自的至少一种。在一个实施方案中，所述制剂还包含至少一种中性脂质。在一个实施方案中，制剂被优化以将生物活性剂递送至肿瘤。在一个实施方案中，制剂被优化以将生物活性剂递送至肝。在一个实施方案中，制剂被优化以递送特定类型的生物活性剂。举例性的生物活性剂类型包括但不限于例如抗体、胆固醇、激素、抗病毒药、肽、多肽、蛋白质、核蛋白、化疗剂、低分子量药物、维生素、辅因子、核苷、核苷衍生物、核苷酸、寡核苷酸、酶性核酸、反义核酸、三链结构寡核苷酸、2，5-A反义嵌合体、等位酶、适配体、核酶、诱饵RNA分子及其类似物和小核酸分子如短干扰核酸(siRNA)、短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微小-RNA(miRNA)和短发夹RNA(shRNA)。可以任选用一种或多种另外的化学和生物学物质优化所述生物活性剂，以增加它们的治疗价值，例如调节生物学性质例如稳定性、半衰期、效力和/或免疫原性的修饰。
对于将治疗剂递送至肿瘤而言，优选的制剂选自递送足量的生物活性剂以有效调节需要所述施用的受治疗者的治疗靶标的活性的那些。
在生物活性剂是RNAi构建体的情况下，RNAi、siRNA、siNA或shRNA的有效量是提供至少20％或更大、50％或更大、60％或更大、70％或更大、75％或更大、80％或更大、85％或更大、90％或更大、95％或更大或高达100％的靶细胞中表达的靶mRNA的敲除(KD)的量。一般而言，需要选择该治疗相关的KD范围，因为有效的治疗可根据所靶向的途径、细胞类型或组织和/或所治疗的疾病或障碍的不同而不同。
本文报道了其中R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成环状“头部基团”的上文所述类型的阳离子脂质是用在脂质制剂中的有效的阳离子脂质。此外，现还报道环状头部基团的存在出乎预料地改变脂质制剂的行为，特别地，它改变其它取代基的影响。
本发明的阳离子脂质化合物的头部基团(即R1-N-R2)含有叔胺基。该特征导致化合物的行为不同于例如它们具有例如季(阳离子)胺基的情况，因为氮的季胺化使原子具有固定的电荷，从而使其失去了pH响应性并且导致化合物的行为极为不同。
在一个具体的实例中，与仅头部基团不同的脂质E0173和E0172相比，本发明的化合物E0027和E0014中环状头部基团的存在改变了阳离子脂质整体上在制剂中作为有效递送剂发挥作用的能力。例如，如下文更详细描述的那样，含有具有-N(Me)2头部基团的特定阳离子脂质(E0173，CLinDMA)的制剂当用在递送对因子VII具有特异性的RNAi构建体的制剂中时显示出98.5％的体内因子VII抑制。当通过用L亚杂烷基取代基(下文用箭头标记)代替L亚烷基取代基对化合物进行修饰时，发现该化合物(E0172)的活性降低：发现体内因子VII抑制为40.8％。
相反，本发明的发明人已经发现，当存在环状头部基团时，将L亚烷基改变成L亚杂烷基取代基具有相反的效果：化合物的功效增加，例如：
因此，本发明的一个实施方案包括其中L包含一个或多个杂原子的那些化合物。本领域技术人员从CLinDMA的公开内容开始无法得到这类化合物，因为如上文所述，本领域技术人员从具有CLinDMA头部基团的化合物开始可以发现包含两个或更多个杂原子的L基团降低最终化合物的功效，因此无法得到包含这种基团的化合物。
不希望受到任何理论约束，一种可能性在于本发明的脂质制剂的功效与pKa相关。通过改变结构、例如改变L中杂原子的数量或改变头部基团的性质可调整阳离子脂质的pKa。
在一个实例中，就体内siRNA实验而言，例如在表8中，使用上面提到的制剂(含有阳离子脂质E0172、E0171、E0027和E0014)分别导致肝中98.5％、40.8％、30.3％和97.4％的因子-VII抑制，发现它们的pKa值分别为6.7、8.5、5.7和6.4。
就将活性剂递送至肝而言，针对本发明的一个实施方案，认为作为一般原则(存在例外)，用在这类制剂中的最有效的阳离子脂质具有约5.1-约7.4的pKa。在一个实施方案中，用于肝递送的本发明的制剂包含具有约5.3-约7.3的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，用于肝递送的本发明的制剂包含具有约5.9-约7.0的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，用在将生物活性剂递送至肝的制剂中的优选的脂质具有约6.2-约6.8的pKa范围。
本发明的一个令人惊奇的发现是肿瘤组织就功效而言具有不同的最佳pKa范围。因此，前一段落中的pKa范围适用于脂质旨在将生物活性剂递送至肝细胞的情况。
就将生物活性剂递送至肿瘤而言，认为作为一般原则(存在例外)，用在这类制剂中的本发明的最有效的阳离子脂质具有约5.0-约6.7的pKa，因此在一个实施方案中它们对于递送至肿瘤而言是优选的脂质。
在一个一般性的实施方案中，将生物活性剂递送至一种或多种肿瘤的本发明的制剂包含具有约5.0-约6.7的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，将生物活性剂递送至一种或多种肿瘤的本发明的制剂包含具有约5.2-约6.3的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，将生物活性剂递送至一种或多种肿瘤的本发明的制剂包含具有约5.4-约6.2的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，将生物活性剂递送至一种或多种肿瘤的本发明的制剂包含具有约5.8-约6.1的pKa的阳离子脂质。
在一个实施方案中，用在制剂中的阳离子脂质具有针对将生物活性剂递送至特定肿瘤或细胞类型而被优化的pKa。肿瘤类型可以是原发性肿瘤或者可以是转移的肿瘤。
在一个具体的实施方案中，为递送至Hep3B-样肿瘤优化的制剂包含具有约5.0-约6.7的pKa的阳离子脂质。在一个具体的实施方案中，为递送至Hep3B-样肿瘤优化的制剂包含具有约5.3-约6.3的pKa的阳离子脂质。在一个具体的实施方案中，为递送至Hep3B-样肿瘤优化的制剂包含具有约5.4-约5.9的pKa的阳离子脂质。在一个具体的实施方案中，为递送至Hep3B-样肿瘤优化的制剂包含具有约5.8-约5.9的pKa的阳离子脂质。
在一个具体的实施方案中，为递送至HepG2-样肿瘤优化的制剂包含具有约5.2-约6.2的pKa的阳离子脂质。在一个具体的实施方案中，为递送至Hep3B-样肿瘤优化的制剂包含具有约5.3-约6.2的pKa的阳离子脂质。在一个具体的实施方案中，为递送至Hep3B-样肿瘤优化的制剂包含具有约5.6-约6.1的pKa的阳离子脂质。在一个具体的实施方案中，为递送至HepG2-样肿瘤优化的制剂包含具有约6.1的pKa的阳离子脂质。
在一个具体的实施方案中，为递送至786-0-样肾肿瘤或它们的转移灶优化的制剂包含具有约6.1的pKa的阳离子脂质。
合理地推断其它组织、适应症、肿瘤类型或施用途径可具有优选的脂质pKa范围。就脂质体或LNP制剂而言，还合理地推断，不同的组织、适应症、肿瘤类型或施用途径可具有优选的阳离子脂质pKa范围、N/P比、颗粒大小、所用的阳离子脂质、所用的隐形脂质、所用的辅助脂质、任选使用选择的中性脂质、各脂质组分的相对摩尔比、配制方法、所递送的生物活性剂和剂量方案，包括所给予的剂量。对这些方面中的每一个方面独立地或以协调的方式进行优化如下文所述，并且认为这种优化的许多具体方面在本领域技术人员的能力之内，无需过度的实验。
本领域技术人员可通过调整制剂的其它方面优化制剂，包括但不限于个别地选择例如针对所靶向的细胞或器官类型优化的阳离子脂质的pKa；所用的阳离子脂质；所用的隐形脂质；所用的辅助脂质；无论中性脂质存在还是不存在；如果存在，选择所用的中性脂质；所选择的辅助脂质、任选的中性脂质、隐形脂质和阳离子脂质的摩尔比；N/P比；颗粒大小；剂量方案；给予的剂量；配制方法等。
式(I)-(X)的化合物的实施方案
a，b和c
在一个实施方案中，a是任选被取代的C1-2亚烷基。在一个实施方案中，a是任选被取代的C1亚烷基。
在一个实施方案中，b是任选被取代的C0-2亚烷基。在一个实施方案中，b是任选被取代的C1亚烷基。
在一个实施方案中，c不存在或者是任选被取代的C1亚烷基。在一个实施方案中，c不存在。
在一个实施方案中，a、b和c如果存在则是未被取代的。
阳离子脂质的头部基团
在一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基、C5-杂芳基或C6-杂芳基。在一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基或C3-20-杂环炔基。在一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基。
在一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的环状C5-16基团。在一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的环状C5-12基团。在一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的环状C5基团、环状C6基团或环状C7基团。在一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的环状C5基团或环状C6基团。
在本发明的一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成包含至少一个氧原子的环状基团。
在一个实施方案中，R1和R2与它们所连接的氮原子一起选自表1中所提供的头部基团H1至H52中的至少一个。
表1-称作H1至H52的基团
阳离子脂质的pKa
在一个实施方案中，优选具有在所需范围内的pKa范围的本文的阳离子脂质，尤其是包括对于递送生物活性剂的制剂而言的那些。
如上文所述以及如下文所示，当用在靶向于肝的制剂中时，具有约5.1-约7.4的pKa的阳离子脂质一般是有效的。在一个实施方案中，用于递送至肝的阳离子脂质的pKa为约5.1-约7.4。在一个实施方案中，用在特异性地靶向于肝的制剂中的阳离子脂质的pKa为约5.3-约7.3。因此，在一个实施方案中，用于递送至肝的阳离子脂质的pKa为约5.3-约7.3。在一个实施方案中，用于递送至肝的阳离子脂质的pKa为约5.9-约7.0。在一个实施方案中，用于递送至肝的阳离子脂质的pKa为约6.2-约6.8。
如上文所述以及如下文实验所示，当用在将生物活性剂递送至肿瘤的制剂中时，具有约5.0-约6.7的pKa的阳离子脂质是特别有效的。因此，在一个实施方案中，用于递送至肿瘤的阳离子脂质的pKa为约5.0-约6.7。在一个实施方案中，用于递送至肿瘤的阳离子脂质的pKa为约5.2-约6.3。在一个实施方案中，用于递送至肿瘤的阳离子脂质的pKa为约5.4-约6.2。在一个实施方案中，用于递送至肿瘤的阳离子脂质的pKa为约5.8-约6.1。在一个一般性的实施方案中，用于将生物活性剂递送至肿瘤或肿瘤细胞的阳离子脂质的pKa为约6.1或更低。
根据肿瘤类型可以进一步优化用在递送生物活性剂的制剂中的阳离子脂质的pKa。例如，如表9、10和11中所提供的，将对PLK1mRNA具有特异性的RNA构建体差别地递送至注入小鼠侧腹的Hep3B、HepG2和786-0肾肿瘤，其方式与LNP制剂中的阳离子脂质的pKa相关。经进一步分析，显而易见的是，用于体内Hep3B肿瘤中PLK1敲除的最佳pKa范围不同于HepG2和786-0肿瘤的最佳pKa范围，但是两种范围均落入上面的段落中列出的5.0-6.7的总范围，且一般而言，所有范围均包括具有低于递送至肝最佳的pKa的阳离子脂质。
因此，在一个实施方案中，为了将生物活性剂体内递送至Hep3B-样肿瘤，本发明的阳离子脂质具有约5.0-约6.7的pKa范围。在一个实施方案中，为递送至Hep3B-样肿瘤，阳离子脂质的pKa为约5.3-约6.3。在一个实施方案中，为递送至Hep3B-样肿瘤，阳离子脂质的pKa为约5.4-约5.9。在一个实施方案中，为递送至Hep3B-样肿瘤，阳离子脂质的pKa为约5.8-约5.9。
此外，在一个实施方案中，为将生物活性剂体内递送至HepG2-样肿瘤，本发明的阳离子脂质具有约5.2-约6.2的pKa范围。在一个实施方案中，为递送至HepG2-样肿瘤，阳离子脂质的pKa为约5.3-约6.2。在一个实施方案中，为递送至HepG2-样肿瘤，阳离子脂质的pKa为约5.6-约6.1。在一个实施方案中，为递送至HepG2-样肿瘤或递送至786-0肾肿瘤-样肿瘤，阳离子脂质的pKa为约6.1。
X1和X2
在一个实施方案中，X1是O。在另一个实施方案中，X2是O。在一个实施方案中，X1和X2均是O。
连接基团
在一个实施方案中，L包含至少一个杂原子。这意味着提供X2与Y2之间的直接连接的链具有至少一个杂原子。换言之，L上的取代基中的任意杂原子就该目的而言不计算在内。在一个实施方案中，L包含至少一个O原子。
在一个实施方案中，L包含至少两个杂原子。在一个实施方案中，L包含至少两个O原子。
在一个实施方案中，Lc是任选被取代的C1-15亚烷基或C1-15亚杂烷基。在一个实施方案中，Lc是任选被取代的C1-15亚烷基或C1-15亚杂烷基，d和e是零(0)。
在一个实施方案中，Lc选自式Lc-i至Lc-xxxxiii之一。在一个实施方案中，Lc选自式Lc-i至Lc-xxxxiii之一，d和e均是零(0)。
由于其中L包含至少一个杂原子的基团是优选的，所以Lc优选选自Lc-i、Lc-iv至Lc-vii以及Lc-ix至Lc-xxxxiii。
在一个实施方案中，Lc是任选被取代的C1-15亚杂烷基。
在一个实施方案中，Lc是任选被取代的C1-11基团。在一个实施方案中，Lc是任选被取代的C1-9基团。在一个实施方案中，Lc是任选被取代的C3-8基团。在一个实施方案中，其中Lc是任选被取代的C4-7基团。在一个实施方案中，Lc是任选被取代的C5、C6或C7基团。
在一个实施方案中，d是0；e是0，且f是1。在一个实施方案中，d是0；e是0，且f是1，Lc是在上面给出的链长范围内的亚杂烷基。
阳离子脂质的Y1
在一个实施方案中，Y1是C12-28基团。在一个实施方案中，Y1是任选被取代的C14-26基团。在一个实施方案中，Y1是任选被取代的C16-24基团。在一个实施方案中，Y1是任选被取代的C16-22基团。在一个实施方案中，任选被取代的Y1链长度为18、19、20或21个原子。
在上面给出的碳范围内，Y1优选是烯基或杂烯基。
在一个实施方案中，Y1具有至少一个烯基团。在一个实施方案中，Y1具有1、2或3个烯基团。
在一个实施方案中，Y1在ω-3位上具有烯基团。在另一个实施方案中，Y1在ω-6位上具有烯基团。在另一个实施方案中，Y1在ω-9位上具有烯基团。在一个实施方案中，Y1在ω-3、ω-6和ω-9位的两个或三个位置上具有烯基团。在一个实施方案中，Y1在ω-6和ω-9位上是不饱和的。在另一个实施方案中，Y1在ω-3、ω-6和ω-9位上是不饱和的。在一个实施方案中，Y1在ω-9位上是不饱和的。
在一个实施方案中，Y1具有至少一个顺式不饱和烯基团。在一个实施方案中，Y1具有至少两个顺式不饱和烯基团。在一个实施方案中，Y1具有至少三个顺式不饱和烯基团。所述的至少一个顺式不饱和烯基团可以在ω-3、ω-6和ω-9位中的一个、两个或三个位置上。在MacLachlan等人Journal of Controlled Release 107(2005)276-287中讨论了脂质链中的不饱和。
在一个实施方案中，Y1选自表2中所提供的y1-i至y1-vii。
表2.称作y1-i至y1-vii的Y1相关基团
Y2
在一个实施方案中，Y2通过任选被取代的类固醇上的氧原子与L连接。在一个实施方案中，Y2通过类固醇环A的3-位上的氧原子与L连接。在一个实施方案中，Y2是固醇，其中类固醇环A的3-位上的羟基的氢原子已经被除去(并且通过所述羟基的氧原子与L连接)。
在一个实施方案中，所述固醇选自：
annasterol；   燕麦甾醇；    β-谷甾醇；      菜子甾醇；
麦角骨化醇；   菜油甾醇；    chalinosterol；  chinasterol；
胆甾烷醇；     胆固醇；      粪甾醇；         环阿吞醇；
脱氢胆固醇；   链甾醇(desmosterol)；二氢麦角骨化醇；二氢胆固醇；
二氢麦角甾醇； 黑海甾醇；    表胆甾醇；       麦角甾醇；
岩藻甾醇；     六氢光甾醇；  hexaol；         羟基胆固醇；
羊毛甾醇；     光甾醇；      帕克醇(parkeol)；多孔甾醇；
海藻甾醇(saringosterol)；谷甾烷醇；谷甾醇；   豆甾烷醇；
豆甾醇；       weinbersterol；酵母甾醇；
固醇胆汁酸(例如胆酸；鹅胆酸；甘氨胆酸；牛磺胆酸；脱氧胆酸和石胆酸)；和/或其药学上相关的盐或其药学上可接受的衍生物。
在一个实施方案中，所述固醇是胆固醇。
用于递送生物活性剂的具体脂质
本发明的新的阳离子脂质和隐形脂质可用于递送治疗上可接受的物质，包括例如生物活性剂。本申请全文中描述了含有阳离子脂质、隐形脂质和其它类型的脂质的制剂。虽然认为本文所公开的脂质是新的且有用的，但就治疗应用而言某些特征相对于其它特征是优选的，如在下文提供的举例性的、非限制性的公开内容中所详细描述的那样。在一个实施方案中，脂质体、脂质纳米粒或其它这类脂质制剂还包含生物有效剂。在一个实施方案中，脂质体、脂质纳米粒或其它这类脂质制剂是空的。
在一个实施方案中，在药盒中提供用在制剂中的分开的脂质组分。在一个实施方案中，所述药盒包含用于生成脂质制剂的说明书。所述药盒可包含现成的(ready-made)制剂或者在施用前需要混合的分开的或部分的组分。药盒还可提供另外的成分，例如但不限于对照品、缓冲剂、容器和递送组分，或可以限于那些本发明的脂质和本文所述的组分。
在一个实施方案中，所述药盒至少包含脂质体或脂质体组分，包括但不限于阳离子脂质、隐形脂质、辅助脂质和/或任选的中性脂质中的一种或多种。在一个实施方案中，所述药盒还包含生物活性剂。在一个实施方案中，所述药盒还包含一种或多种对照脂质或对照活性剂、对照脂质体制剂、染色剂(stain)、缓冲剂、使用说明书等。在一种替代选择中，脂质体制剂是预混合的。药盒化学组分中的一种或多种可以以脱水形式或水化形式被提供。可以使用本领域已知的各种方法中的任意一种将本文所述的各种化合物和组合物脱水或冻干。
在本发明的一个方面，提供了下面举例给出的具体化合物中的任意一种或其药学上可接受的衍生物。
在一个实施方案中，化合物用于将生物活性剂递送至肝，且化合物选自E0024、E0014、E0052、E0118、E0175、E0177或E0083中的一种或多种。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肝的组合物包含选自E0024、E0014、E0052、E0118或E0083的化合物中的一种或多种。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肝的组合物包含化合物E0024。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肝的组合物包含化合物E0014。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肝的组合物包含化合物E0052。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肝的组合物包含化合物E0118。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肝的组合物包含化合物E0083。
在一个实施方案中，化合物用于将生物活性剂递送至肿瘤，且化合物选自E0011、E0008、E0025、E0026、E0076、E0077、E0085或E0088中的一种或多种。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肿瘤的组合物包含选自E0011、E0008、E0025、E0026、E0076、E0077、E0085或E0088的化合物中的一种或多种。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肿瘤的组合物包含化合物E0011。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肿瘤的组合物包含化合物E0008。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肿瘤的组合物包含化合物E0025。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肿瘤的组合物包含化合物E0026。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肿瘤的组合物包含化合物E0076。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肿瘤的组合物包含化合物E0077。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肿瘤的组合物包含化合物E0085。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肿瘤的组合物包含化合物E0088。
脂质体、脂质纳米粒和包含本文所述的脂质中的一种或多种的这类脂质制剂可用于将核酸组合物体外或体内递送至细胞或组织。治疗上相关的核酸组合物包括对一种或多种与疾病或障碍相关的基因具有特异性的RNAi活性剂，其中用RNAi活性剂靶向于细胞或组织中的内源性序列导致治疗或预防作用。
作为一般性的非限制性原则，递送生物活性剂(尤其是包括RNAi活性剂)的靶标抑制的治疗有效量导致至少70％的靶标抑制，其中靶标在肝中表达。在一个实施方案中，当在将RNAi递送至肝的制剂中提供时，本发明的阳离子脂质提供至少70％的靶标抑制。当配制用于肝时提供至少70％KD的阳离子脂质包括但不限于E0007、E0008、E0011、E0014、E0015、E0016、E0017、E0018、E0019、E0022、E0024、E0025、E0026、E0032、E0034、E0040、E0042、E0043、E0045、E0048、E0049、E0051、E0052、E0053、E0054、E0055和E0118。在一个实施方案中，当在将RNAi递送至肝的制剂中提供时，本发明的阳离子脂质提供至少80％的靶标抑制。当配制用于肝时提供至少80％KD的阳离子脂质包括但不限于E0008、E0011、E0014、E0016、E0017、E0018、E0019、E0022、E0024、E0025、E0026、E0032、E0034、E0040、E0042、E0043、E0045、E0048、E0052、E0053、E0054、E0055和E0118。在一个实施方案中，当在将RNAi递送至肝的制剂中提供时，本发明的阳离子脂质提供至少90％的靶标抑制。当配制用于肝时提供至少90％KD的阳离子脂质包括但不限于E0011、E0014、E0017、E0018、E0024、E0025、E0026、E0040、E0043、E0045、E0052、E0053、E0054、E0055和E0118。在一个实施方案中，当在将RNAi递送至肝的制剂中提供时，本发明的阳离子脂质提供至少95％的靶标抑制。当配制用于肝时提供至少95％KD的阳离子脂质包括但不限于E0014、E0017、E0018、E0024、E0026、E0040、E0043、E0052、E0054、E0055和E0118。在一个实施方案中，当在将RNAi递送至肝的制剂中提供时，本发明的阳离子脂质提供至少98％的靶标抑制。当配制用于肝时提供至少98％KD的阳离子脂质包括但不限于E0014、E0017、E0018、E0024、E0052、E0054和E0118。
作为一般性的非限制性原则，递送生物活性剂(尤其是包括RNAi活性剂)的靶标抑制的治疗有效量导致至少50％的靶标抑制，其中靶标是肿瘤。在一个实施方案中，当在用于将RNAi递送至肿瘤或肿瘤细胞的制剂中提供时，本发明的阳离子脂质提供至少50％的靶标抑制。当配制用于肿瘤或肿瘤细胞时提供至少50％KD的阳离子脂质包括但不限于E0008、E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077、E0085、E0088、E0095、E0104、E0178和E0179。在一个实施方案中，当在用于将RNAi递送至肿瘤或肿瘤细胞的制剂中提供时，本发明的阳离子脂质提供至少60％的靶标抑制。当配制用于肿瘤或肿瘤细胞时提供至少60％KD的阳离子脂质包括但不限于E0008、E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077、E0085和E0088。在一个实施方案中，当在用于将RNAi递送至肿瘤或肿瘤细胞的制剂中提供时，本发明的阳离子脂质提供至少70％的靶标抑制。当配制用于肿瘤或肿瘤细胞时提供至少70％KD的阳离子脂质包括但不限于E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077和E0088。在一个实施方案中，当在用于将RNAi递送至肿瘤或肿瘤细胞的制剂中提供时，本发明的阳离子脂质提供至少80％的靶标抑制。当配制用于肿瘤或肿瘤细胞时提供至少80％KD的阳离子脂质包括但不限于E0008、E0025和E0076。
在一个具体的实施方案中，递送生物活性剂(尤其是包括RNAi活性剂)的靶标抑制的治疗有效量导致至少30％的靶标抑制，其中靶标是HepG2-样肿瘤或786-0-样肿瘤。在一个具体的实施方案中，当在用于将RNAi递送至HepG2-样肿瘤或786-0-样肿瘤的制剂中提供时，本发明的阳离子脂质提供至少30％的靶标抑制，包括E0056、E0076、E0085、E0104、E0175、E0176和E0177。在一个具体的实施方案中，当在用于将RNAi递送至HepG2-样肿瘤或786-0-样肿瘤的制剂中提供时，本发明的阳离子脂质提供至少30％的靶标抑制，包括E0085、E0175和E0177。
用于递送至肝的具体阳离子脂质
在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0014。在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0017。在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0018。在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0024。在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0052。在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0054。在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0118。
在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肝的优选的制剂包含具有约5.1-约7.4的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肝的优选的制剂包含具有约5.3-约7.3的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肝的优选的制剂包含具有约5.9-约7.0的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肝的优选的制剂包含具有约6.2-约6.8的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肝的优选的制剂包含具有约6.1或更高的pKa的阳离子脂质。
用于递送至肿瘤的具体阳离子脂质
在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0008。在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0025。在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0076。在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0085。在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0175。在一个实施方案中，优选的阳离子脂质是E0177。
在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至体内肿瘤的优选的制剂包含具有约5.0-约6.7的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至体内肿瘤的优选的制剂包含具有约5.2-约6.3的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至体内肿瘤的优选的制剂包含具有约5.4-约6.2的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至体内肿瘤的优选的制剂包含具有约5.8-约6.1的pKa的阳离子脂质。在一个实施方案中，用于将生物活性剂递送至肿瘤或肿瘤细胞的优选的制剂包含具有约6.1或更低的pKa的阳离子脂质。
药物组合物和制剂
本发明提供了包含至少一种本发明的阳离子脂质化合物的药物组合物。本发明提供了包含至少一种本发明的隐形脂质化合物的药物组合物。在一个实施方案中，存在至少一种另外的脂质组分。所述组合物还可以含有生物活性剂，可以任选地含有与生物活性剂组合的一种或多种另外的脂质组分。在一个实施方案中，所述一种或多种组分、组合物和/或活性剂在药盒中被提供。在一个实施方案中，提供了包含与一种或多种生物活性剂组合的本发明的脂质的组合物，其是制剂的形式，用于例如将治疗有效量的一种或多种生物活性剂递送至细胞或组织。在一个实施方案中，所述的细胞或组织在需要治疗或预防的受治疗者体内。在一个实施方案中，所述的受治疗者是需要治疗有效量的生物活性剂的患者。本文所用的受治疗者包括人和非人动物。
所述的另外的脂质组分可以是选自阳离子脂质、(任选的)中性脂质、辅助脂质、隐形脂质和基于烷基间苯二酚的脂质中的一种或多种。在一个实施方案中，本发明提供了一种组合物，其包含：(a)阳离子脂质，例如本发明的式I至式X中任意一个的化合物和/或E0001至E0171和E0175-E0180；(b)任选的中性脂质，例如DSPC；(c)辅助脂质，例如含有胆固醇的辅助脂质；(d)隐形脂质，例如式XI或XII之一或者S001-S009和S012-S026中的任意一个或多个，或者1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(乙二醇)-2000](目录#880150P，来自Avanti PolarLipids)。在一个实施方案中，所述的脂质组分在脂质体制剂例如纳米粒等中。在一个实施方案中，所述的脂质体制剂还包含生物活性剂。在一个实施方案中，所述的脂质体制剂还包含治疗有效量的生物活性剂。
所述另外的脂质组分可以是例如选自已知的阳离子脂质的一种或多种，所述已知的阳离子脂质是：N，N-二油基-N，N-二甲基氯化铵(DODAC)、N，N-二硬脂酰-N，N-二甲基溴化铵(DDAB)、N-(1-(2，3-二油酰氧基)丙基)-N，N，N-三甲基氯化铵(DOTAP)、N-(1-(2，3-二油基氧基)丙基)-N，N，N-三甲基氯化铵(DOTMA)、N，N-二甲基-2，3-二油基氧基)丙胺(DODMA)、1，2-二油酰-3-二甲基铵-丙烷(DODAP)、1，2-二油酰基氨甲酰基-3-二甲基铵-丙烷(DOCDAP)、1，2-dilineoyl-3-二甲基铵-丙烷(DLINDAP)、二月桂基(C12:0)三甲基铵丙烷(DLTAP)、二油酰氧基-N-[2-精胺甲酰氨基)乙基}-N，N-二甲基-1-丙烷三氟乙酸铵(DOSPA)、双十八烷酰氨基甘氨酰精胺(DOGS)、DC-Chol、1，2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-二甲基-羟基乙基溴化铵(DMRIE)、3-二甲基氨基-2-(胆甾-5-烯-3-β-氧基丁烷-4-氧基)-1-(顺式，顺式-9，12-十八碳二烯氧基)丙烷(CLinDMA)、2-[5’-(胆甾-5-烯-3[β]-氧基)-3’-氧杂戊氧基)-3-二甲基-1-(顺式，顺式-9’，12’-十八碳二烯氧基)丙烷(CpLinDMA)和N，N-二甲基-3，4-二油酰基氧基苄胺(DMOBA)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、1，2-N，N’-二油基氨甲酰基-3-二甲基氨基丙烷(DOcarbDAP)。在一个实施方案中，所述另外的脂质组分是DOTAP或DLTAP。
在一个实施方案中，阳离子脂质选自式I的脂质。在一个实施方案中，阳离子脂质选自式II的脂质。在一个实施方案中，阳离子脂质选自式III的脂质。在一个实施方案中，阳离子脂质选自式IV的脂质。在一个实施方案中，阳离子脂质选自式V的脂质。在一个实施方案中，阳离子脂质选自式VI的脂质。在一个实施方案中，阳离子脂质选自式VII的脂质。在一个实施方案中，阳离子脂质选自式VIII的脂质。在一个实施方案中，阳离子脂质选自式IX的脂质。在一个实施方案中，阳离子脂质选自式X的脂质。在一个实施方案中，阳离子脂质选自E0001至E0171(E0001-E0171)和E0175至E0180(E0175-E0180)的列表。
另外的脂质组分可以是例如中性脂质。在一个实施方案中，所述的中性脂质可以是选自各种中性的不带电荷的或两性离子脂质中的一种或多种。用于本发明的中性磷脂类的实例包括：5-十七基苯-1，3-二酚(间苯二酚)、胆固醇半琥珀酸酯(CHEMS)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、磷酸胆碱(DOPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、磷脂酰胆碱(PLPC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、卵磷脂酰胆碱(EPC)、二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱(MPPC)、1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(PMPC)、1，2-二花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DBPC)、1-棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱(PSPC)、1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱(SPPC)、1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DAPC)、1，2-二二十碳烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DEPC)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、溶血磷脂酰胆碱、二亚油酰磷脂酰胆碱二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺(POPE)、溶血磷脂酰乙醇胺或其组合。在一个实施方案中，中性磷脂选自二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)和二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)。
另外的脂质组分可以是例如阴离子脂质，例如能产生稳定复合物的阴离子脂质。阴离子脂质的实例是磷脂酰甘油、心磷脂、二酰基磷脂酰丝氨酸、二酰基磷脂酸、N-十二烷酰磷脂酰乙醇胺、N-琥珀酰磷脂酰乙醇胺、N-戊二酰磷脂酰乙醇胺和赖氨酰磷脂酰甘油。
适合的中性和阴离子脂质还包括US 2009/0048197的段落[0119]中所述的那些。
在一个实施方案中，所施用的组合物中的脂质的总量为约5-约30mg脂质/mg生物活性剂(例如siRNA)，在另一个实施方案中，为约5-约25mg脂质/mg生物活性剂(例如siRNA)，在另一个实施方案中，为约7-约25mg脂质/mg生物活性剂(例如siRNA)，在一个实施方案中，为约7-约15mg脂质/mg生物活性剂(例如siRNA)。
将生物活性剂荷载入脂质组合物例如脂质体和脂纳米粒的各种方法是本领域可得到的，包括被动和主动荷载方法。这两类方法中的任何一种均考虑在本发明的范围内。所用的确切方法可以基于多种因素选择，所述因素包括但不限于例如所荷载的生物活性剂、荷载后所用的贮存方法、得到的颗粒的大小和所考虑的剂量方案。方法包括例如在形成或重构脂质体时机械混合药物和脂质、将所有组分溶于有机溶剂并将它们浓缩成干薄膜、形成pH或离子梯度以将活性剂吸入脂质体内部、创建跨膜电位以及离子导体介导的荷载。参见例如至少下文的实施例68、69和77、PCT公开No.WO 95/08986、美国专利No.5,837,282、美国专利No.5,837,282和美国专利No.7,811,602。
所施用的生物活性剂的剂量取决于许多因素，例如生物活性剂的本性和目标患者(例如动物的种属)。因此，可以调整生物活性剂的浓度，但是当将siRNA施用于动物时，典型的是每个剂量0.1mg/ml-10mg/ml浓度。
可以通过多种方法测定siRNA的总量。HPLC方法包括阴离子交换、反相(RP)或尺寸排阻(SEC)。还可以使用荧光法。在所有这些方法中，在测定总siRNA含量之前均必须将纳米粒裂解以从纳米粒中释放出siRNA。
在一个实施方案中，组合物包含阳离子脂质组分，其形成组合物中存在的总脂质的约10％-约80％、约20％-约70％或约30％-约60％。这些百分比是相对于最终脂质颗粒中的脂质组分的总摩尔数的摩尔百分比。
在一个实施方案中，组合物包含中性脂质组分，其形成组合物中存在的总脂质的约0％-约50％、约0％-约30％或约10％-约20％。在一个实施方案中，组合物的中性脂质组分是任选的。在一个实施方案中，组合物不具有中性脂质组分。这些百分比是相对于最终脂质颗粒中的脂质组分的总摩尔数的摩尔百分比。
在一个实施方案中，组合物包含辅助脂质组分，其形成组合物中存在的总脂质的约5％-约80％、约20％-约70％或约30％-约50％。这些百分比是相对于最终脂质颗粒中的脂质组分的总摩尔数的摩尔百分比。
在一个实施方案中，组合物包含隐形脂质组分，其形成组合物中存在的总脂质的约0％-约10％、约1％-约6％或约2％-约5％。这些百分比是相对于最终脂质颗粒中的脂质组分的总摩尔数的摩尔百分比。
在一个实施方案中，组合物包含形成制剂中存在的总脂质的约30-约60％的阳离子脂质组分、形成制剂中存在的总脂质的约0％-约30％的中性脂质、形成制剂中存在的总脂质的约18％-约46％的辅助脂质和形成制剂中存在的总脂质的约2％-约4％的隐形脂质。这些百分比是相对于最终脂质颗粒中的脂质组分的总摩尔数的摩尔百分比。
可以以许多方式中的任意一种施用本发明的脂质体组合物，所述方式包括胃肠外、静脉内、全身、局部、口服、肿瘤内、肌内、皮下、腹膜内、吸入或任意这类递送方法。在一个实施方案中，组合物被胃肠外施用，即，关节内、静脉内、腹膜内、皮下或肌内施用。在一个具体的实施方案中，脂质体组合物被通过静脉内输注施用或通过快速浓注(bolusinjection)腹膜内施用。
可以将本发明的脂质体组合物配制成适于递送至受治疗者的药物组合物。本发明的药物组合物常常还包含一种或多种缓冲剂(例如中性缓冲盐水或磷酸盐缓冲盐水)、碳水化合物(例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖、右旋糖或葡聚糖)、甘露醇、蛋白质、多肽或氨基酸例如甘氨酸、抗氧化剂、制菌剂、螯合剂例如EDTA或谷胱甘肽、佐剂(adjuvant)(例如氢氧化铝)、使制剂与接受者的血液相比等张、低张或弱高张的溶质、助悬剂、增稠剂和/或防腐剂。或者，可以将本发明的组合物配制成冻干物。
用于本发明的适合的制剂可以在例如Remington′sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Philadelphia，Pa.，17.sup.th Ed.(1985)中找到。静脉内组合物常常包含混悬在可接受的载体例如水性载体中的脂质体的溶液。
递送生物活性剂的方法和相关应用
本发明的阳离子脂质和隐形脂质可用于递送生物活性剂的制剂。含有本发明的新脂质的制剂可以是各种形式，包括但不限于形成递送剂的颗粒(包括微粒、纳米粒)和可用于将各种分子递送至细胞的转染剂。特定的制剂有效地将生物活性剂转染或递送至相关细胞和/或组织，例如细胞培养物、受治疗者或生物体中的相关细胞和/或组织，所述生物活性剂例如抗体(例如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、纳米抗体(nanobody)及其片段等)、胆固醇、激素、肽、蛋白质、化疗剂和其它类型的抗肿瘤剂、低分子量药物、维生素、辅因子、核苷、核苷酸、寡核苷酸、酶性核酸、反义核酸、三链结构寡核苷酸、反义DNA或RNA组合物、嵌合DNA:RNA组合物、等位酶、适配体、核酶、诱杀剂及其类似物、质粒和其它类型的表达载体，以及小核酸分子、RNAi活性剂、短干扰核酸(siNA)、短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微小-RNA(miRNA)和短发夹RNA(shRNA)分子。上面的生物活性剂列表仅是举例性的，不是限制性的。这类组合物可以被纯化或部分纯化，可以是天然存在的或合成的，可以被化学修饰。
这类包含生物活性剂的制剂是有用的，例如用于提供预防、抑制或治疗细胞、受治疗者或生物体的疾病、病症或性状的组合物。疾病、病症或性状包括但不限于增殖性疾病，包括癌症、炎性疾病、移植物和/或组织排斥、自身免疫性疾病或病症、与年龄相关的疾病、神经学疾病或神经变性疾病、呼吸***疾病、心血管疾病、眼疾病、代谢性疾病、皮肤病学疾病、听觉疾病、肝病、肾病或肾脏疾病等。
每个剂量所施用的活性剂的量是高于最小治疗剂量、但低于毒性剂量的量。每个剂量的实际量可以由临床医师根据许多因素确定，例如患者的医疗史、其它疗法的使用、所提供的生物活性剂和疾病的性质。在治疗过程中可以调整所施用的生物活性剂的量，这取决于患者对治疗的响应以及任何与治疗相关的副作用的存在或严重性。适当的管理部门批准的化合物的举例性的剂量和治疗是已知的并且是本领域技术人员可以得到的。参见例如Physician′s Desk Reference，第64版Physician′s Desk ReferenceInc.(2010)；Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack PublishingCompany，Philadelphia，Pa.(1985)和Remington The Science and Practiceof Pharmacy，第21版，Lippincott Williams & Williams Publishers(2005)。
在一个实施方案中，对需要其的患者施用单剂量的生物活性剂。在一个实施方案中，使用多个剂量，其中所述多个剂量可以并行(concurrently)、依次或交替施用。在一个实施方案中，多个剂量施用相同的制剂。在一个实施方案中，多个剂量的制剂是不同的。在各种实施方案中，可以每天1次或者连续1、2、3、4天或更多天施用剂量。在一个实施方案中，每周1次施用剂量。在一个实施方案中，每隔1周施用剂量。在一个实施方案中，患者接受至少两个疗程的治疗方案，且可能接受更多个疗程，这取决于患者对治疗的响应。在单一活性剂的方案中，治疗的总疗程由患者和临床医师基于所观察到的响应和毒性来决定。上面的给药方案是举例性的。其它给药方案也被考虑在本发明的范围内，且取决于所需要的治疗效果。
在一个实施方案中，本发明提供了将生物活性剂递送至细胞的方法，其包括给细胞施用组合物，所述组合物包含生物活性剂和本发明的化合物。
所述的细胞可以是体外的或体内的。
本发明提供了用于治疗的式(I)的化合物。本发明还提供了进一步被区分的式II-X亚组的式I化合物。式I-X的化合物在本文中被统称为阳离子脂质。
本发明还提供了用于治疗的式(XI)的化合物。本发明还提供了进一步区分的式XII亚组的式XI的化合物。式XI和XII的化合物在本文中被统称为隐形脂质。
本发明还提供了治疗疾病或病症的方法，其包括给患者施用治疗有效量的包含至少一种式(I)化合物的组合物以及与之组合的治疗所述疾病或病症的生物活性剂的步骤。本发明还提供了用于治疗疾病或病症的包含至少一种式(XI)的化合物的组合物。
本发明还提供了式(I)的化合物在制备用于治疗疾病或病症的药剂中的用途。在一个实施方案中，所述药剂包含治疗所述疾病或病症的生物活性剂。本发明还提供了治疗疾病或病症的生物活性剂在制备用于治疗所述疾病或病症的药剂中的用途，其中所述药剂还包含式(I)或式XI的化合物。
本发明还提供了治疗疾病或病症的方法，其包括给患者施用在含有至少一种本发明的组合物的制剂中的治疗有效量的生物活性剂的步骤。在一个实施方案中，所述疾病或病症是肝病、肿瘤或疾病。在一个实施方案中，所述疾病或病症能通过施用siRNA物质治疗。
本发明还提供了用于治疗患者的疾病或病症的本发明的组合物。在一个实施方案中，所述疾病或病症是肝病、肿瘤或由mRNA编码的蛋白质介导的疾病。
本发明还提供了包含式(I)和/或式XI的化合物的产品。在一个实施方案中，所述产品还包含生物活性剂，为组合制剂，用于在治疗中同时、分别或依次使用。
施用&制剂
一般介绍
就药物应用而言，可以将本发明的化合物和组合物作为药剂的至少一个部分通过肠内或胃肠外途径施用，包括静脉内、肌内、皮下、透皮、气道(气雾剂)、口服、鼻内、直肠、***、***、鼻咽、胃肠道或舌下施用。所述施用可以是全身性的或局部的。局部施用可以包括例如导管***、植入、渗透泵、直接注射、皮肤/透皮应用、放置支架、耳/眼滴剂或门静脉施用。应评价式(I)和/或式XI的化合物的生物药剂学性质，例如溶解度和溶液稳定性(跨越pH)、渗透性等，以便选择用于治疗所提出的适应症的最适合的剂型和施用途径。
本发明的化合物和组合物一般、但不必须以制剂的形式与一种或多种药学上可接受的赋形剂联合施用。术语“赋形剂”包括不是本发明的化合物、另外的脂质组分和生物活性剂的任意成分。赋形剂可以赋予制剂功能性(例如控制药物释放速率)和/或非功能性(例如加工助剂或稀释剂)特征。赋形剂的选择在很大程度上取决于例如具体的施用方式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响和剂型的性质等因素。
典型的药学上可接受的赋形剂包括：
●稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
●润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其镁或钙盐和/或聚乙二醇；
●粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；
●崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐、或泡腾混合物；和/或
●吸附剂、着色剂、矫味剂和/或甜味剂。
赋形剂可以是任选含有缓冲剂(例如PBS缓冲剂)和/或糖的水溶液载体。
药学上可接受的赋形剂的详细讨论可以在Gennaro，Remington：The Science and Practice of Pharmacy 2000，第20版(ISBN：0683306472)中得到。
口服施用
本发明的化合物和组合物可以口服施用。口服施用可包括吞咽，以便化合物进入胃肠道；和/或***、舌或舌下施用，通过这些方式化合物从口腔直接进入血流。
胃肠外施用
本发明的化合物和组合物可以胃肠外施用。本发明的化合物和组合物可以直接施用入血流、皮下组织、肌肉或内部器官。适合的施用方式包括皮下、动脉内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内、滑膜内和皮下。适合的施用装置包括针头(包括显微针)注射器、无针头注射器和输注技术。
胃肠外制剂典型地是水性或油性溶液。如果溶液是水性的，则赋形剂例如糖(包括但不限于葡萄糖、甘露醇、山梨醇等)、盐、碳水化合物和缓冲剂(优选至pH 3-9)，但对于一些应用，它们可能更适合于被配制成非水性的溶液或与合适的媒介物例如无菌无热原的水(WFI)联合使用的干燥形式。
胃肠外制剂可以包括衍生自可降解的聚合物例如聚酯(即聚乳酸、聚丙交酯、聚丙交酯-共-乙交酯、聚己内酯、聚羟基丁酸酯)、聚原酸酯和聚酐的植入剂。这些制剂可以通过手术切入皮下组织、肌肉组织或直接手术切入特定器官来施用。
使用本领域技术人员众所周知的标准制药技术可以容易地完成在无菌条件下的胃肠外制剂的制备，例如通过冻干制备。
可以通过使用适合的配制技术例如掺入共溶剂和/或溶解促进剂例如表面活性剂、胶束结构和环糊精来增加用于制备胃肠外溶液的化合物和组合物的溶解度。
吸入&鼻内施用
本发明的化合物和组合物可以鼻内施用或通过吸入施用，典型地以干粉形式(单独的，以混合物(例如与乳糖的干混合物)的形式，或以混合组分颗粒(例如与磷脂类例如磷脂酰胆碱混合)的形式从干粉吸入器中施用，以气雾剂喷雾剂的形式从加压容器、泵、喷雾器、雾化器(优选使用电流体动力学的雾化器来产生细雾)或喷洒器中施用，使用或不使用适合的抛射剂如1，1，1，2-四氟乙烷或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷，或以滴鼻剂的形式施用。就鼻内使用而言，粉末可以包含生物粘附剂，例如脱乙酰壳多糖或环糊精。
加压的容器、泵、喷雾器、雾化器或喷洒器含有本发明的化合物的溶液或混悬液，其包含例如乙醇、含水乙醇或适合的用于分散、溶解或延长释放本发明的化合物的供选物质、作为溶剂的抛射剂和任选的表面活性剂例如三油酸山梨坦、油酸或低聚乳酸。
在以干粉或混悬剂制剂应用之前，将化合物或组合物微粉化成适合于通过吸入递送的大小(典型地小于5微米)。这可以通过任意适合的粉碎方法来实现，例如螺旋气流粉碎(spiral jet milling)、流化床气流粉碎、形成纳米粒的超临界流体加工、高压匀化或喷雾干燥。
可以配制用于在吸入器或吹入器中使用的胶囊(例如由明胶或羟丙基甲基纤维素制成)、泡罩包装和药筒以含有本发明的化合物或组合物、适合的粉末基质例如乳糖或淀粉和性能调节物例如l-亮氨酸、甘露醇或硬脂酸镁的粉末混合物。乳糖可以是无水的或一水合物的形式，优选后者。其它适合的赋形剂包括右旋糖酐、葡萄糖、麦芽糖、山梨醇、木糖醇、果糖、蔗糖和海藻糖。
可以使用例如PGLA将用于吸入/鼻内施用的制剂配制成立即(immediate)释放和/或调节释放制剂。调节释放制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控制释放、靶向释放和程序释放。
透皮施用
用于透皮应用的适合的制剂包括治疗有效量的本发明的化合物或组合物以及载体。有利的载体包括帮助通过宿主皮肤的可吸入的药理学上可接受的溶剂。特征性地，透皮装置是绷带的形式，包括背衬层、任选具有载体的含有化合物的贮库、任选的历经延长的一段时间以控制的和预定的速度将化合物递送至宿主皮肤的控速屏障和将该装置固定至皮肤的部件。
本发明所靶向的细胞和器官
本发明的化合物、组合物、方法和用途可用于将生物活性剂递送至患者的下列部分中的一种或多种：
肝或肝的细胞(例如肝细胞)；
肾或肾的细胞；
肿瘤或肿瘤细胞；
CNS或CNS细胞(中枢神经***，例如脑和/或脊髓)；
PNS或PNS细胞(外周神经***)；
肺或肺的细胞；
血管***或血管细胞；
皮肤或皮肤的细胞(例如真皮细胞和/或毛囊细胞(follicular cell))；
眼或眼的细胞(例如黄斑、中央凹(fovea)、角膜、视网膜)；和
耳或耳的细胞(例如内耳、中耳和/或外耳的细胞)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的化合物、组合物、方法和用途是用于将生物活性剂递送至肝的细胞(例如肝细胞)。在本发明的一个实施方案中，本发明的化合物、组合物、方法和用途是用于将生物活性剂递送至肿瘤或肿瘤细胞(例如原发性肿瘤或转移癌细胞)。
为了将生物活性剂递送至肝或肝的细胞，在一个实施方案中，如本领域广泛已知的那样，使本发明的化合物或组合物与患者的肝或肝的细胞接触，例如通过胃肠外施用(例如静脉内、肌内、皮下施用)或局部施用(例如直接注射、门静脉注射、导管***、放置支架)来进行，以有利于递送。
为了将生物活性剂递送至肾或肾的细胞，在一个实施方案中，如本领域广泛已知的那样，使本发明的化合物或组合物与患者的肾或肾的细胞接触，例如通过胃肠外施用(例如静脉内、肌内、皮下施用)或局部施用(例如直接注射、导管***、放置支架)来进行，以有利于递送。
为了将生物活性剂递送至肿瘤或肿瘤细胞，在一个实施方案中，如本领域广泛已知的那样，使本发明的化合物或组合物与患者的肿瘤或肿瘤细胞接触，例如通过胃肠外施用(例如静脉内、肌内、皮下施用)或局部施用(例如直接注射、导管***、放置支架)来进行，以有利于递送。
为了将生物活性剂递送至CNS或CNS细胞(例如脑细胞和/或脊髓细胞)，在一个实施方案中，如本领域广泛已知的那样，使本发明的化合物或组合物与患者的CNS或CNS细胞(例如脑细胞和/或脊髓细胞)接触，例如通过胃肠外施用(例如静脉内、肌内、皮下施用)或局部施用(例如直接注射、导管***、放置支架、渗透崩施用(例如鞘内或心室)来进行，以有利于递送。
为了将生物活性剂递送至PNS或PNS细胞，在一个实施方案中，如本领域广泛已知的那样，使本发明的化合物或组合物与患者的PNS或PNS细胞接触，例如通过胃肠外施用(例如静脉内、肌内、皮下施用)或局部施用(例如直接注射)来进行，以有利于递送。
为了将生物活性剂递送至肺或肺的细胞，在一个实施方案中，如本领域广泛已知的那样，使本发明的化合物或组合物与患者的肺或肺的细胞接触，例如通过胃肠外施用(例如静脉内、肌内、皮下施用)或局部施用(例如直接肺部施用于肺组织和细胞)来进行，以有利于递送。
为了将生物活性剂递送至血管***或血管细胞，在一个实施方案中，如本领域广泛已知的那样，使本发明的化合物或组合物与患者的血管***或血管细胞接触，例如通过胃肠外施用(例如静脉内、肌内、皮下施用)或局部施用(例如钳夹术(claimping)、导管***、放置支架)来进行，以有利于递送。
为了将生物活性剂递送至皮肤或皮肤的细胞(例如真皮细胞和/或毛囊细胞)，在一个实施方案中，如本领域广泛已知的那样，使本发明的化合物或组合物与患者的皮肤或皮肤的细胞(例如真皮细胞和/或毛囊细胞)接触，例如通过胃肠外施用(例如静脉内、肌内、皮下施用)或局部施用(例如直接真皮施用、离子导入法)来进行，以有利于递送。
为了将生物活性剂递送至眼或眼的细胞(例如黄斑、中央凹、角膜、视网膜)，在一个实施方案中，如本领域广泛已知的那样，使本发明的化合物或组合物与患者的眼或眼的细胞(例如黄斑、中央凹、角膜、视网膜)接触，例如通过胃肠外施用(例如静脉内、肌内、皮下施用)或局部施用(例如直接注射、眼内注射、眼周注射、离子导入法、使用滴眼液、植入物)来进行，以有利于递送。
为了将生物活性剂递送至耳或耳的细胞(例如内耳、中耳和/或外耳的细胞)，在一个实施方案中，如本领域广泛已知的那样，使本发明的化合物或组合物与患者的耳或耳的细胞(例如内耳、中耳和/或外耳的细胞)接触，例如通过胃肠外施用(例如静脉内、肌内、皮下施用)或局部施用(例如直接注射)来进行，以有利于递送。
疾病或病症的治疗
可用本发明治疗的疾病或病症包括与调节患者的基因、基因表达、蛋白质、蛋白质活性、细胞途径等有关的那些。用本发明治疗的疾病或病症可以是选自以下的一种或多种：增殖性疾病(例如肿瘤)；炎性疾病；移植物和/或组织排斥(同种异体移植物排斥)；自身免疫性疾病；感染性疾病(infectious disease)；与年龄相关的疾病；神经学疾病或神经变性疾病(例如亨廷顿舞蹈病)；代谢性疾病；心血管疾病；呼吸***疾病；眼疾病；皮肤病学疾病；听觉疾病(例如听力损失、耳聋)；肝病(例如肝炎、HCV、HBV、糖尿病(diabetis)、肝硬化、肝细胞癌)；肾病/肾脏疾病(例如多囊肾病)。在一个具体的实施方案中，本发明治疗增殖性疾病，例如肿瘤或肿瘤细胞。在一个具体的实施方案中，本发明治疗肝病，例如肝炎、HCV、HBV、糖尿病、肝硬化和某些肝细胞癌。
本领域技术人员能选择与递送治疗有效量的活性剂的本发明的化合物组合的生物活性剂。如果该活性剂是RNAi治疗剂，则所需的治疗效果是调节所关注的疾病或病症中所牵涉的靶基因的表达。在一个实施方案中，基因表达减少并且因此相应的蛋白/RNA水平降低，这在一定程度上缓解了所述疾病或病症的症状。
功效
所述化合物、组合物、方法和用途可包括适合用于减轻或抑制或改善疾病或障碍的施用条件。在一个实施方案中，给需要其的患者施用治疗有效量的RNAi活性剂，其中与未治疗的患者相比，患者的靶基因表达水平降低。
在一个实施方案中，相对于未治疗的患者，所关注的疾病或病症中所牵涉的靶基因的表达减少约10％、更优选约20％、更优选约30％、更优选约40％、更优选约50％、更优选约60％、更优选约70％、更优选约80％、更优选约90％、更优选约95％、更优选约98％、最优选约100％。
定义
在本说明书的上下文中所用的冠词例如“一种”和“一个”是指一种/个或者一种/个以上(至少一种/个)该冠词的语法对象。
式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)、(X)、(XI)和(XII)的化合物及其衍生物
本文所用的术语“本发明的(脂质)化合物”、“式(I)的(脂质)化合物”、“(脂质)化合物”、“阳离子脂质”等(即，所有对本发明的阳离子脂质和/或“隐形脂质”的提及包括其药学上可接受的衍生物及其多晶型物、异构体和同位素标记的变体。此外，所述术语就阳离子脂质而言包括式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)和(X)的化合物；就隐形脂质而言包括式(XI)和(XII)；以及本文所公开的其实施方案。
药学上可接受的衍生物
术语“药学上可接受的衍生物”包括式(I)化合物的任意一种药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在一个实施方案中，药学上可接受的衍生物是式(I)化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
药学上可接受的盐
术语“药学上可接受的盐”包括由药学上可接受的无毒的酸或碱(包括无机的和有机的酸和碱)制备的盐。关于药学上可接受的盐的综述，参见Stahl和Wermuth，Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection and Use(Wiley-VCH，Weinheim，德国，2002)。
落剂合物水合物
本发明的化合物可以以未溶剂化的形式和溶剂化的形式存在。术语“溶剂合物”包括包含本发明的化合物和一个或多个药学上可接受的溶剂分子例如水或C1-6醇如乙醇的分子复合物。术语“水合物”意指其中溶剂是水的“溶剂合物”。
异构体形式
本发明的化合物可以以一种或多种几何异构体、旋光异构体、对映体、非对映体和互变异构体的形式存在，包括但不限于顺式-和反式-形式、E-和Z-形式、R-、S-和内消旋-形式、酮-和烯醇-形式。所有这类异构体形式均包括在本发明内。异构体形式可以是异构体纯的或富集的形式以及异构体的混合物(例如外消旋混合物或非对映体混合物)。
因此，本发明至少提供了，例如：
●式(I)化合物的立体异构体混合物；
●式(I)化合物的非对映体富集的或非对映体纯的异构体；或
●式(I)化合物的对映体富集的或对映体纯的异构体。
在适合的情况下，可以通过应用或调整已知的方法(例如色谱技术和重结晶技术)将异构体从它们的混合物中分离出来。在适合的情况下，可以通过应用或调整已知的方法(例如不对称合成)制备异构体。
同位素标记
本发明包括药学上可接受的同位素标记的式(I)化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子数、但原子质量或质量数不同于通常天然发现的原子质量或质量数的原子代替。
适合包含在本发明的化合物中的同位素的实例包括：氢的同位素，例如2H和3H；碳的同位素，例如11C、13C和14C；氯的同位素，例如36Cl；氟的同位素，例如18F；碘的同位素，例如123I和125I；氮的同位素，例如13N和15N；氧的同位素，例如15O、17O和18O；磷的同位素，例如32P；和硫的同位素，例如35S。某些同位素标记的式(I)化合物例如掺入了放射性同位素的那些可用在药物和/或底物组织分布研究中。由于它们易于掺入且检测方法容易，放射性同位素3H和14C特别是可用于该目的。
用正电子发射同位素例如11C、18F、15O和13N取代可用在正电子发射断层成像(PET)研究中。
一般可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本文所述的方法类似的方法使用适宜的同位素标记的试剂代替之前使用的未标记的试剂来制备同位素标记的式(I)化合物。
治疗定义
本文所用的“治疗”包括改善性、治愈性和预防性的治疗。本文所用的“患者”意指需要治疗的动物，优选哺乳动物，优选人。
“生物活性剂”优选是治疗化合物，即可用于治疗或预防疾病或病症的化合物。
生物活性剂包括但不限于例如抗体、胆固醇、激素、抗病毒药、肽、多肽、蛋白质、核蛋白、化疗剂、低分子量药物、维生素、辅因子、核苷、核苷衍生物、核苷酸、寡核苷酸、酶性核酸、反义核酸、三链结构寡核苷酸、2，5-A反义嵌合体、等位酶、适配体、核酶、诱饵RNA分子及其类似物和小核酸分子如RNA抑制剂(RNAi)，例如短干扰核酸(siNA)、短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微小-RNA(miRNA)和短发夹RNA(shRNA)。在一个实施方案中，生物活性剂优选是核苷或核苷衍生物，例如核酸、寡核苷酸、多核苷酸(例如siNA、miRNA、RNAi、反义、适配体、核酶、诱杀剂、核酶、2-5A、三链结构寡核苷酸)，优选siRNA、miRNA、siRNA抑制剂或miRNA抑制剂。
在一个实施方案中，生物活性剂是siNA(短干扰核酸)分子。在一个实施方案中，siNA是siDNA。在一个实施方案中，siNA是siRNA。在一个实施方案中，siNA是miRNA。
在一个实施方案中，生物活性剂是小核酸分子，在下文中为方便目的将其称为“siNA”分子，其减量调节靶基因的表达，例如其中靶基因包含靶标编码序列或其中靶基因包含靶基因表达中所涉及的靶标非编码序列或调节元件。
siNA可以是单链的、双链的或多链的。在一个实施方案中，它是双链的。
在一个实施方案中，siNA包含未修饰的核苷酸和/或非核苷酸。在一个实施方案中，siNA包含至少一个或一个以上修饰的核苷酸和/或非核苷酸。在一个实施方案中，修饰的核苷酸包含修饰的碱基部分。在一个实施方案中，修饰的核苷酸包含修饰的糖部分。在一个实施方案中，修饰的核苷酸包含修饰的骨架部分。在一个实施方案中，siNA包含修饰的碱基部分、修饰的糖部分和/或修饰的骨架部分中的一个或多个。
在一个实施方案中，siNA分子包含约15-约40(例如约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、23、33、34、35、36、37、38、39或40)个碱基对，在一个子实施方案中，约15-约30(例如约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30)个碱基对，在一个子实施方案中，约15-约28个碱基对，在一个子实施方案中，约17-约25个碱基对，在一个子实施方案中，约18-约23个碱基对，在另一个子实施方案中，约19-约22个碱基对。在一个实施方案中，siNA包含约17个碱基对。在一个实施方案中，siNA包含约18个碱基对。在一个实施方案中，siNA包含约19个碱基对。在一个实施方案中，siNA包含约20个碱基对。在一个实施方案中，siNA包含约21个碱基对。
在一个实施方案中，siNA分子的两条链的每条链独立地包含约15-约40(例如约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、23、33、34、35、36、37、38、39或40)个核苷酸，在一个子实施方案中，约15-约30(例如约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30)个核苷酸，在一个子实施方案中，约15-约28个核苷酸，在一个子实施方案中，约17-约25个核苷酸，在一个子实施方案中，约18-约23个核苷酸，在另一个下一级实施方案中，约19-约22个核苷酸。在一个实施方案中，每条链的长度为约17个核苷酸。在一个实施方案中，每条链的长度为约18个核苷酸。在一个实施方案中，每条链的长度为约19个核苷酸。在一个实施方案中，每条链的长度为约20个核苷酸。在一个实施方案中，每条链为约21个核苷酸。
在一个实施方案中，siNA分子通过RISC复合物、即RNA干扰(RNAi)指导靶标RNA的裂解。
在一个实施方案中，siNA分子包含第一链和第二链，siNA的第一链包含核苷酸序列，该核苷酸序列对通过RNA干扰指导靶标RNA裂解的该siNA分子的靶标RNA具有充分的互补性，所述siNA分子的第二链包含与第一链互补的核苷酸序列。
在一个实施方案中，短干扰核酸(siNA)分子是化学合成的双链分子。
在一个实施方案中，siNA抑制靶基因或靶基因家族的表达，其中所述基因或基因家族序列共享序列同源性。这类同源序列可以如本领域已知的那样例如使用序列比对来鉴定。这类siNA分子可以被设计为靶向于这类同源序列，例如使用完全互补的序列或通过掺入非规范碱基对，例如能提供另外的靶序列的错配和/或变偶碱基对。
在一个实施方案中，双链siNA分子不含有任何核糖核苷酸。在另一个实施方案中，双链siNA分子包含一个或多个核糖核苷酸。
在一个实施方案中，减量调节靶基因表达的siNA分子包含：反义区，其中该反应区包含与靶基因或其一部分的核苷酸序列互补的核苷酸序列；和有义区，其中该有义区包含与靶基因或其一部分的核苷酸序列基本上类似的核苷酸序列。在一个实施方案中，反义区和有义区独立地包含约15-约30(例如约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30)个核苷酸。在一个实施方案中，反义区包含与靶基因或其一部分编码的RNA的核苷酸序列互补的核苷酸序列，有义区包含与反义区互补的核苷酸序列。
在一个实施方案中，siNA分子包含一个钝端。在一个实施方案中，siNA分子包含两个钝端，即，无任何悬垂的未配对的核苷酸的对称末端。
在一个实施方案中，siNA分子的各片段的所有核苷酸与siNA分子的另一条链上的互补核苷酸是碱基配对的。
在一个实施方案中，siNA分子包含一种或多种下列特征：错配、凸起、环和变偶碱基对，它们各自可以调节介导RNA干扰的siNA分子的活性。
在一个实施方案中，有义区与反义区通过连接分子例如多核苷酸连接基团或非核苷酸连接基团连接。
在一个实施方案中，siNA分子具有一个或多个修饰的嘧啶和/或嘌呤核苷酸。在一个实施方案中，有义区中的嘧啶核苷酸是2’-O-甲基嘧啶核苷酸或2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸，有义区中存在的嘌呤核苷酸是2’-脱氧嘌呤核苷酸。在另一个实施方案中，有义区中的嘧啶核苷酸是2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸，有义区中存在的嘌呤核苷酸是2’-O-甲基嘌呤核苷酸。在另一个实施方案中，有义区中的嘧啶核苷酸是2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸，有义区中存在的嘌呤核苷酸是2’-脱氧嘌呤核苷酸。在一个实施方案中，反义区中的嘧啶核苷酸是2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸，反义区中存在的嘌呤核苷酸是2’-O-甲基或2’-脱氧嘌呤核苷酸。
在一个实施方案中，有义链具有非互补区。任选地，所述非互补区中存在的核苷酸全部是2’-脱氧核苷酸。
在一个实施方案中，包含有义区的多核苷酸在链的5’-端、3’-端或5’和3’端上具有端帽部分。在一个实施方案中，包含反应链的多核苷酸在链的5’-端、3’-端或5’和3’端上具有端帽部分。在一个实施方案中，所述端帽部分是反向的脱氧脱碱基部分或甘油基部分。端帽部分的其它实例在本领域中是已知的，例如WO 2005/021749和WO 2007/128477。
在一个实施方案中，siNA在多核苷酸骨架中具有亚磷酸酯、磷酸二酯、硫代磷酸酯和/或二硫代磷酸酯键。在一个实施方案中，siNA具有至少一个硫代磷酸酯键。在一个实施方案中，siNA具有至少一个二硫代磷酸酯键。
在一个实施方案中，在对核糖核酸酶进行的裂解敏感的siNA中的特定选择的位置、例如具有嘧啶核苷酸的位置存在核苷酸修饰。
在一个实施方案中，siNA分子的每条链的两个3’末端核苷酸各自是2’-脱氧-嘧啶核苷酸，例如2’-脱氧-胸苷。
所施用的本发明的化合物和生物活性剂(例如治疗化合物)的量应当是用于治疗疾病或病症的治疗有效量和用于预防疾病或病症的预防有效量。
术语“治疗有效量”是指治疗或改善所靶向的疾病或病症所需的本发明的化合物和生物活性剂(例如治疗化合物)的量。本文所用的术语“预防有效量”是指预防所靶向的疾病或病症所需的本发明的化合物和生物活性剂(例如治疗化合物)的量。确切剂量一般取决于施用时患者的状态。当确定剂量时可能需要考虑的因素包括患者的疾病状态的严重性、患者的一般健康状况、年龄、性别、饮食、时间、施用的频率和途径、生物活性剂(例如治疗化合物)的本性、反应敏感性和患者对治疗的耐受性或响应。精确的量可通过常规实验来确定，但可能最终依赖于临床医师的判断。一般而言，有效剂量为0.01mg/kg/天(药物质量/患者质量)-1000mg/kg/天，例如1mg/kg/天-100mg/kg/天。组合物可独自施用给患者，或者可以与其它活性剂、药物或激素组合施用。
在任意一种治疗方法或相关用途中，可以将本发明的化合物或组合物以疗程施用给患者，例如在不同的时间间隔施用，例如在疗程中每天施用1次，在疗程中每2天施用1次，在疗程中每3天施用1次，在疗程中每4天施用1次，在疗程中每5天施用1次，在疗程中每6天施用1次，在疗程中每周施用1次，在疗程中每隔一周施用1次，在疗程中每月施用1次等。在一个实施方案中，疗程是每1、2、3、4、5、6、7、8、9或10周施用1次。在一个实施方案中，疗程为约1周-约52周或更长(例如无限期)。在一个实施方案中，疗程为约1个月-约48个月或更长(例如无限期)。
在一个实施方案中，疗程包括起始疗程，例如每1、2、3、4、5、6、7、8、9或10周或更多周一次，具有固定的间期(例如1x、2x、3x、4x、5x、6x、7x、8x、9x、1ox或更长)，然后是维持疗程，例如每4、6、8、10、15、20、25、30、35、40周或更多周一次，具有另外的固定间期(例如1x、2x、3x、4x、5x、6x、7x、8x、9x、10x或更长)。
本文所用的“增殖性疾病”意指本领域已知的以失调的细胞生长或复制为特征的任何疾病、病症、性状、基因型或表型。在一个实施方案中，所述增殖性疾病是癌症。在一个实施方案中，所述增殖性疾病是肿瘤。在一个实施方案中，所述增殖性疾病包括但不限于例如液体肿瘤，例如白血病，如急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、多发性骨髓瘤和慢性淋巴细胞白血病；和实体瘤，例如与AIDS相关的癌症，如卡波西肉瘤；乳癌；骨癌；脑癌；头颈癌、非霍奇金淋巴瘤、腺瘤、鳞状细胞癌、喉癌、胆囊和胆管癌、视网膜癌、食道癌、胃肠癌、卵巢癌、子宫癌、甲状腺癌、睾丸癌、子宫内膜癌、黑素瘤、结直肠癌、肺癌、膀胱癌、***癌、肺癌(包括非小细胞肺癌)、胰腺癌、肉瘤、维尔姆斯瘤、***、头颈癌、皮肤癌、鼻咽癌、脂肉瘤、上皮癌、肾细胞癌、胆囊腺癌、子宫内膜肉瘤、多药耐药性癌症。在一个实施方案中，所述增殖性疾病包括与肿瘤血管生成相关的新生血管形成、黄斑变性(例如湿型/干型年龄相关性黄斑变性)、角膜新血管形成、糖尿病性视网膜病变、新生血管性青光眼、近视性变性(myopic degeneration)。在一个实施方案中，所述增殖性疾病包括再狭窄和多囊肾病。
本文所用的“炎性疾病”意指本领域已知的以炎性或变应性过程为特征的任何疾病、病症、性状、基因型或表型。炎性疾病包括但不限于例如炎症(例如急性和/或慢性炎症)、呼吸***疾病、动脉粥样硬化、银屑病、皮炎、再狭窄、哮喘、变应性鼻炎、特应性皮炎、败血症性休克、类风湿性关节炎、炎症性肠病、炎症性盆腔疾病(inflammatory pelvic disease)、疼痛、眼炎性疾病、乳糜泻、结核、矽肺和其它尘肺。
本文所用的“自身免疫性疾病”意指本领域已知的以自身免疫性为特征的任何疾病、病症、性状、基因型或表型。自身免疫性疾病包括但不限于例如多发性硬化、糖尿病、狼疮、硬皮病、纤维肌痛、移植排斥(例如预防同种异体移植物排斥)、恶性贫血、类风湿性关节炎、***性红斑狼疮、皮肌炎、重症肌无力、红斑狼疮、多发性硬化和格雷夫斯病。
“感染性疾病”意指与传染原例如病毒、细菌、真菌、朊病毒或寄生虫相关的任何疾病、障碍或病症。
“神经学疾病”意指影响中枢神经***或外周神经***的任何疾病、障碍或病症。神经学疾病包括但不限于外周神经***或中枢神经***的疾病或障碍，包括例如阿尔茨海默病、动脉瘤、脑损伤、腕管综合征、脑动脉瘤、慢性痛、克-雅病、癫痫、亨廷顿舞蹈病、脑膜炎、癫痫发作症(Seizure Disorder)和其它神经学疾病、障碍和综合征。
“呼吸***疾病”意指影响呼吸道的任何疾病或病症。呼吸***疾病包括但不限于例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、变应性鼻炎、窦炎、***反应、呼吸不畅(impeded respiration)、呼吸窘迫综合征、囊性纤维化、肺动脉高压或血管收缩和肺气肿。
“心血管疾病”意指影响心脏和血管***的疾病或病症。心血管疾病包括但不限于例如冠心病(CHD)、脑血管病(CVD)、主动脉瓣狭窄、外周血管病、心肌梗死(心脏病发作(heart attack))、心律失常和充血性心力衰竭。
本文所用的“眼疾病”意指眼和相关结构的任何疾病、病症、性状、基因型或表型。眼疾病包括但不限于例如囊样黄斑水肿、糖尿病性视网膜病变、格子状变性(lattice degeneration)、视网膜静脉阻塞、视网膜动脉阻塞、黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性例如湿型AMD或干型AMD)、弓形体病、色素性视网膜炎、结膜裂伤、角膜裂伤、青光眼等。
“代谢性疾病”意指影响代谢途径的任何疾病或病症。代谢性疾病能导致异常的代谢过程，其是由于遗传的酶异常导致的先天性的(先天的代谢错误)或者由于内分泌器官的疾病或代谢重要器官如肝的衰竭导致的获得性的。在一个实施方案中，代谢性疾病包括肥胖、胰岛素抗性和糖尿病(例如I型和/或II型糖尿病)。
“皮肤病学疾病”意指皮肤、真皮或其中的任意亚结构如毛发、毛囊等的任何疾病或病症。皮肤病学疾病、障碍、病症和性状可包括银屑病、异位性皮炎(ectopic dermatitis)、皮肤癌例如黑素瘤和基底细胞癌、掉发(hair loss)、毛发去除(hair removal)和色素沉着改变。
“听觉疾病”意指听觉***(包括耳，例如内耳、中耳、外耳、听神经及其中的任何亚结构)的任何疾病或病症。听觉疾病、障碍、病症和性状可包括听力损失、耳聋、耳鸣、眩晕、平衡和运动障碍。
在一个实施方案中，所述疾病或病症是肝病、肿瘤、FVII介导的疾病和/或PLK1介导的疾病。FVII介导的疾病包括血液凝固异常和肿瘤；因此这类疾病包括血栓形成(例如静脉血栓栓塞、肺栓塞和中风)。
生物化学术语和定义
术语“脂质”是指一组有机化合物，其包括但不限于脂肪酸的酯且特征在于不溶于水，但溶于许多有机溶剂。脂质可以分成至少三类(1)“单纯脂质”，包括脂肪和油以及蜡；(2)“复合脂质”，包括磷脂和糖脂；和(3)“衍生脂质”，例如类固醇。
本文所用的术语“阳离子脂质”意指具有阳离子电荷的任何亲脂性化合物，例如式(I)的化合物
其中的定义如本文其它部分所示。阳离子脂质的其它实例如上面的标题“组合物”项下所示。
辅助脂质
本文所用的术语“辅助脂质”意指在一定程度上促进转染(例如包括生物活性剂的纳米粒的转染)的脂质。辅助脂质促进转染的机制可包括例如促进颗粒稳定性和/或促进膜融合性。辅助脂质包括类固醇和烷基间苯二酚。辅助脂质的实例是胆固醇、5-十七基间苯二酚和胆固醇半琥珀酸酯。
隐形脂质
本文所用的术语“隐形脂质”意指增加纳米粒能在体内存在(例如在血液中)的时间长度的脂质。在一个实施方案中，隐形脂质包含可操作地与脂质部分连接的亲水性聚合物头部基团。在一个实施方案中，脂质体制剂中的隐形脂质遮蔽纳米粒表面，并且因此减少被血液蛋白质调理和被单核吞噬细胞***的巨噬细胞摄取。适合用于本发明的隐形脂质的结构包括但不限于例如式XI和式XII中所提供的化合物。其它被考虑的隐形脂质和有关这类脂质的生物化学的信息可以在Romberg等人PharmaceuticalResearch，Vol.25，No.1，2008，p.55-71和Hoekstra等人Biochimica etBiophysica Acta 1660(2004)41-52中找到。
在一个实施方案中，隐形脂质包含选自PEG(有时称为聚(环氧乙烷)和基于聚(唑啉)、聚(乙烯醇)、聚(甘油)、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚氨基酸和聚[N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺]的聚合物的基团。在一个实施方案中，辅助脂质能“脱落”，如Romberg等人所述。提供了本发明的具体的隐形脂质，例如式XI和式XII，其可以进一步由本领域技术人员进行取代。另外的适合的PEG脂质公开在例如WO 2006/007712中。
具体的适合的隐形脂质包括聚乙二醇-二酰基甘油或聚乙二醇-二酰基咪唑双酰胺(polyethyleneglycol-diacylglycamide)(PEG-DAG)轭合物，包括包含二烷基甘油或二烷基咪唑双酰胺基团的那些，所具有的烷基链长度独立地包含约C4-约C40饱和或不饱和的碳原子。二烷基甘油或二烷基咪唑双酰胺基团还可以包含一个或多个被取代的烷基。在本文所述的任意一个实施方案中，PEG轭合物可以选自PEG-二月桂基甘油、PEG-二肉豆蔻基甘油(目录#GM-020，来自NOF)、PEG-二棕榈酰甘油、PEG-二steryl甘油、PEG-二月桂基咪唑双酰胺、PEG-二肉豆蔻基咪唑双酰胺、PEG-二棕榈酰咪唑双酰胺和PEG-二steryl咪唑双酰胺、PEG-胆固醇(1-[8’-(胆甾-5-烯-3[β]-氧基)甲酰氨基-3’，6’-二氧杂辛烷基]氨甲酰基-[ω]-甲基-聚(乙二醇)、PEG-DMB(3，4-双十四烷氧基苄基-[ω]-甲基-聚(乙二醇)醚)、S001、S002，S003、S004、S005、S006、S007、S008、S009、S010、S011、S012、S013、S014、S015、S016、S017、S018、S019、S020、S021、S022、S023、S024、S025、S026、1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](目录#880150P，来自Avanti Polar Lipids)。S010和S011分别公开在WO 2009/086558中的标记IVa和IVc下面。
除非另有说明，否则本文所用的术语“PEG”意指任意的聚乙二醇或其它聚亚烷基醚聚合物。在一个实施方案中，PEG是任选被取代的直链或支链的乙二醇或环氧乙烷聚合物。在一个实施方案中，PEG是未被取代的。在一个实施方案中，PEG是被取代的，例如被一个或多个烷基、烷氧基、酰基或芳基取代。在一个实施方案中，该术语包括PEG共聚物，例如PEG-聚氨基甲酸酯或PEG-聚丙烯(参见例如J.Milton Harris，Poly(ethylene glycol)chemistry：biotechnical and biomedical applications(1992))；在另一个实施方案中，该术语不包括PEG共聚物。在一个实施方案中，PEG具有约130-约50,000的分子量，在一个子实施方案中，具有约150-约30,000的分子量，在一个子实施方案中，具有约150-约20,000的分子量，在一个子实施方案中，具有约150-约15,000的分子量，在一个子实施方案中，具有约150-约10,000的分子量，在一个子实施方案中，具有约150-约6000的分子量，在一个子实施方案中，具有约150-约5000的分子量，在一个子实施方案中，具有约150-约4000的分子量，在一个子实施方案中，具有约150-约3000的分子量，在一个子实施方案中，具有约300-约3000的分子量，在一个子实施方案中，具有约1000-约3000的分子量，在一个子实施方案中，具有约1500-约2500的分子量。
在某些实施方案中，PEG是“PEG-2K”，也称为“PEG 2000”，其具有约2000道尔顿的平均分子量。PEG-2K在本文中用下面的式(XIIa)表示，其中n是45，意思是数均聚合度包含约45个亚单元。然而，可以使用本领域已知的其它PEG实施方案，例如其中数均聚合度包含约23个亚单元(n＝23)和/或68个亚单元(n＝68)的那些。
RNA干扰和RNAi制剂的定义
“脂质纳米粒”意指包含多个(即多于一个)彼此通过分子间作用力物理结合的脂质分子的颗粒。脂质纳米粒可以是例如微球(包括单层和多层囊泡，例如脂质体)、乳剂中的分散相、胶束或混悬剂中的内相。
脂质纳米粒具有约1-约2,500nm、约1-约1,500nm、约1-约1,000nm的大小，在一个子实施方案中，具有约50-约600nm的大小，在一个子实施方案中，具有约50-约400nm的大小，在一个子实施方案中，具有约50-约250nm的大小，在一个子实施方案中，具有约50-约150nm的大小。除非另有说明，否则本文所提及的所有大小均是完全形成的纳米粒的平均大小(直径)，如通过用Malvern Zetasizer进行的动态光散射所测定的。用磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释纳米粒样品，以便计数率为约200-400kcts。将数据表示为强度测量值的加权平均值。
在一个实施方案中，生物活性剂与脂质纳米粒(例如囊泡)结合且因此优选被包囊的。
在一个实施方案中，脂质纳米粒包含生物活性剂、本发明的化合物、中性脂质、辅助脂质和隐形脂质。
在一个实施方案中，脂质体颗粒在血清中是稳定的。
本文所用的术语“短干扰核酸”(siNA)是指能通过以序列特异性方式介导RNA干扰(RNAi)或基因沉默来抑制或减量调节基因表达或病毒复制的任意核酸分子。它包括短干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)、短干扰寡核苷酸和化学修饰的短干扰核酸分子。siRNA负责RNA干扰-动物和植物中的序列特异性转录后基因沉默的过程。siRNA通过核糖核酸酶III裂解由与沉默的基因靶标同源的或对其具有特异性的较长的双链RNA(dsRNA)生成。
“RNA干扰”(RNAi)意指本领域广泛已知的抑制或减量调节细胞中的基因表达的生物过程，参见例如Zamore和Haley，2005，Science，309，1519-1524；Zamore等人2000，Cell，101，25-33；Elbashir等人2001，Nature，411，494-498；和Kreutzer等人PCT公开WO 00/44895；Fire，PCT公开WO 99/32619；Mello和Fire，PCT公开WO 01/29058等。
如本文所用的，RNAi等同于用于描述序列特异性RNA干扰的其它术语，例如转录后基因沉默、翻译抑制、转录抑制或外遗传(epigenetics)。例如，含有本发明的脂质的制剂可以与siNA分子联用，以便在转录后水平和/或转录前水平上以外遗传方式使基因沉默。在一个非限制性的实例中，siNA分子调节基因表达产生自siNA介导的经由RISC的RNA(编码或非编码RNA)裂解或者翻译抑制，如本领域已知的。在另一个实施方案中，siNA调节基因表达可产生自转录抑制，例如在Janowski等人2005，Nature Chemical Biology，1，216-222中报道的。
“RNAi抑制剂”意指能减量调节(例如减少或抑制)细胞或患者中RNA干扰功能或活性的任意分子。RNAi抑制剂能通过与RNAi途径的任意组分(包括蛋白质组分如RISC或核酸组分如miRNA或siRNA)相互作用或干扰其功能来减量调节、减少或抑制RNAi(例如RNAi介导的靶标多核苷酸裂解、翻译抑制或转录沉默)。RNAi抑制剂可以是siNA分子、反义分子、适配体或小分子，其与RISC、miRNA或siRNA或者细胞或患者中RNAi途径的任意其它组分相互作用或干扰其功能。通过抑制RNAi(例如RNAi介导的靶标多核苷酸裂解、翻译抑制或转录沉默)，RNAi抑制剂可用于调节(例如增量调节或减量调节)靶标基因的表达。在一个实施方案中，RNA抑制剂用于通过干扰(例如减少或防止)基因表达的内源性减量调节或抑制-翻译抑制、转录沉默或RISC介导的多核苷酸(例如mRNA)裂解来增量调节基因表达。因此，通过干扰内源性抑制、沉默或基因表达抑制的机制，本发明的RNAi抑制剂可用于增量调节基因表达，以治疗由功能损失导致的疾病或病症。在本文的各种实施方案中，术语“RNAi抑制剂”可以与术语“siNA”互换使用。
本文所用的术语“酶性核酸”是指在底物结合区与指定的基因靶标具有互补性并且还具有酶活性的核酸分子，所述的酶活性发挥特异性裂解靶标RNA、从而使靶标RNA分子失活的作用。互补区使酶性核酸分子与靶标RNA充分杂交并因此使得进行裂解。优选100％的互补性，但低至50-75％的互补性在本发明中也是可用的(参见例如Werner和Uhlenbeck，1995，Nucleic Acid Research，23，2092-2096；Hammann等人1999，Antisense and Nucleic Acid Drug Dev.，9，25-31)。核酸可以在碱基、糖和/或磷酸酯基团上被修饰。术语酶性核酸与诸如核酶、催化性RNA、酶性RNA、催化性DNA、适体酶(aptazyme)或适配体-结合核酶、可调节的核酶、催化性寡核苷酸、核糖核酸拟酶(nucleozyme)、脱氧核酶(DNAzyme)、RNA酶、内切核糖核酸酶、内切核酸酶、minizyme、leadzyme、oligozyme或DNA酶等短语可以互换使用。所有这些术语均描述具有酶活性的核酸分子。酶性核酸分子的关键特征是：它具有与靶标核酸区中的一个或多个互补的特异性底物结合位点，和它在底物结合位点内或周围具有核苷酸序列，其赋予该分子核酸裂解和/或连接活性(参见例如Cech等人，美国专利4,987,071；Cech等人，1988，260 JAMA 3030)。本发明的核酶和酶性核酸分子可以被化学修饰，例如如本领域中以及本文另外的部分中所述的那样被化学修饰。
本文所用的术语“反义核酸”是指通过RNA-RNA或RNA-DNA或RNA-PNA(蛋白质核酸；Egholm等人，1993Nature 365，566)相互作用结合靶标RNA并且改变靶标RNA的活性的非酶性核酸分子(就综述而言，参见Stein和Cheng，1993Science 261，1004和Woolf等人，美国专利5,849,902)。反义DNA可以化学合成或通过使用单链DNA表达载体或其等效物表达。本发明的反义分子可以被化学修饰，例如如本领域中所述的那样被化学修饰。
本文所用的术语“RNase H活化区”是指能结合靶标RNA以形成被细胞RNase H酶识别的非共价复合物的核酸分子区(一般长度大于或等于4-25个核苷酸，优选长度为5-11个核苷酸)(参见例如Arrow等人，美国专利5,849,902；Arrow等人，美国专利5,989,912)。RNase H酶与核酸分子-靶标RNA复合物结合并且裂解靶标RNA序列。
本文所用的术语“2-5A反义嵌合体”是指含有5’-磷酸化的’-5’-连接的腺苷酸残基的反义寡核苷酸。这些嵌合体以序列特异性方式与靶标RNA结合并活化细胞的2-5A-依赖性核糖核酸酶，后者进而裂解靶标RNA(Torrence等人，1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90，1300；Silverman等人，2000，Methods Enzymol.，313，522-533；Player和Torrence，1998，Pharmacol.Ther.，78，55-113)。2-5A反义嵌合体分子可以被化学修饰，例如如本领域中所述的那样被化学修饰。
本文所用的术语“三链结构寡核苷酸”是指能以序列特异性方式与双链DNA结合以形成三链螺旋结构的寡核苷酸。已经证实这类三链螺旋结构的形成抑制所靶向的基因的转录(Duval-Valentin等人，1992Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89，504；Fox，2000，Curr.Med.Chem.，7，17-37；Praseuth等人，2000，Biochim.Biophys.Acta，1489，181-206)。本发明的三链结构寡核苷酸分子可以被化学修饰，例如如本领域中所述的那样被化学修饰。
本文所用的术语“诱饵RNA”是指被涉及优先与预定的配体结合的RNA分子或适配体。这类结合会导致靶标分子的抑制或活化。诱饵RNA或适配体可与天然存在的结合靶标竞争结合特异性配体。类似地，可以将诱饵RNA设计成与受体结合并阻断效应分子的结合，或者可将其设计成与所关注的受体结合并防止与该受体的相互作用。本发明的诱饵分子可以被化学修饰，例如如本领域中所述的那样被化学修饰。
本文所用的术语“单链DNA”(ssDNA)是指包含线性单链的天然存在的或合成的脱氧核糖核酸分子，例如ssDNA可以是有义或反义基因序列或EST(被表达的序列标签)。
本文所用的术语“等位酶”是指变构酶性核酸分子，包括例如美国专利No.5,834,186、5,741,679、5,589,332、5,871,914和PCT公开No.WO00/24931、WO 00/26226、WO 98/27104和WO 99/29842。
本文所用的“适配体”意指特异性结合靶标分子的多核苷酸组合物，其中所述多核苷酸具有与细胞中的靶标分子正常识别的序列不同的序列。或者，适配体可以是与靶标分子结合的核酸分子，其中所述靶标分子不天然与核酸结合。所述靶标分子可以是所关注的任意分子。本发明的适配体分子可以被化学修饰，例如如本领域中所述的那样被化学修饰。
“调节”意指基因的表达或者编码一种或多种蛋白质或蛋白质亚单位的RNA分子或等效RNA分子的水平或者一种或多种蛋白质或蛋白质亚单位的活性被增量调节或减量调节或不存在，以至于该表达、水平或活性大于或小于不使用调节剂所观察到的那些。例如，在一个实施方案中，术语“调节”意指“抑制”。在一个实施方案中，在本发明的术语范围内，调节途径表示增量调节或减量调节治疗上有意义的组分和/或生物途径的终点，所述生物途径含有例如蛋白质、酶或被靶标mRNA靶向或编码的物质或者受例如蛋白质、酶或被靶标mRNA靶向或编码的物质调节。
“抑制”、“减量调节”或“减少”意指基因的表达或者编码一种或多种蛋白质或蛋白质亚单位的RNA分子或等效RNA分子的水平或者一种或多种蛋白质或蛋白质亚单位的活性被降低至低于天然环境中(例如在不存在核酸分子(例如siNA)的情况下)所观察到的那些。在一个实施方案中，使用siNA分子的抑制、减量调节或减少低于在存在无活性的或减弱的分子的情况下所观察到的水平。在一个实施方案中，使用siNA分子的抑制、减量调节或减少低于在存在例如具有零乱序列或具有错配的siNA分子的情况下所观察到的水平。在一个实施方案中，使用核酸分子的抑制、减量调节或基因表达减少在存在核酸分子的情况下比其不存在的情况下更大。在一个实施方案中，基因表达的抑制、减量调节或减少与转录后沉默如RNAi介导的靶标核酸分子(例如RNA)的裂解或翻译的抑制相关。在一个实施方案中，基因表达的抑制、减量调节或减少与转录前沉默相关。
“增量调节”或“促进”意指基因的表达或者编码一种或多种蛋白质或蛋白质亚单位的RNA分子或等效RNA分子的水平或者一种或多种蛋白质或蛋白质亚单位的活性被增加至高于天然环境中(例如在不存在核酸分子(例如siNA)的情况下)所观察到的那些。在一个实施方案中，使用siNA分子的基因表达的增量调节或促进高于在存在无活性的或减弱的分子的情况下所观察到的水平。在一个实施方案中，使用siNA分子的基因表达的增量调节或促进高于在存在例如具有零乱序列或具有错配的siNA分子的情况下所观察到的水平。在一个实施方案中，使用核酸分子的基因表达的增量调节或促进在存在核酸分子的情况下比其不存在的情况下更大。在一个实施方案中，基因表达的增量调节或促进与RNA介导的基因沉默的抑制例如RNAi介导的的编码或非编码RNA靶标的裂解或沉默相关，所述的编码或非编码RNA靶标减量调节、抑制所关注的被增量调节的基因的表达或使其沉默。
“基因”或“靶标基因”意指编码RNA的核酸，例如核酸序列，包括但不限于编码多肽的结构基因。基因或靶标基因还可编码功能性RNA(FRNA)或非编码RNA(ncRNA)，例如小的时序RNA(stRNA)、微小RNA(miRNA)、小核RNA(snRNA)、短干扰RNA(siRNA)、小核仁RNA(snRNA)、核糖体RNA(rRNA)、转移RNA(tRNA)及其前体RNA。对于调节功能性或调节细胞过程中所涉及的FRNA或ncRNA活性中的siNA介导的RNA干扰，所述非编码RNA可以用作靶标核酸分子。因此siNA分子可调节导致疾病的异常型FRNA或ncRNA活性。
本文所用的“靶标”意指由靶标基因编码的任意的靶标蛋白、肽或多肽。术语“靶标”还指编码(例如由靶标RNA编码)具有靶标活性的任意靶标蛋白、肽或多肽的核酸序列。术语“靶标”还包括其它靶标编码序列，例如其它靶标同工型、突变靶标基因、靶标基因的剪接变体和靶基因的多态性。“靶标核酸”意指其表达或活性被调节的任意的核酸序列。靶标核酸可以是DNA或RNA。
“非规范碱基对”意指任意的非沃森-克里克碱基对，例如错配和/或变偶碱基。
“有义区”意指具有与siNA分子的反义区的互补性的siNA分子的核苷酸序列。此外，siNA分子的有义区可包含具有与靶标核酸序列的同源性的核酸序列。在一个实施方案中，siNA分子的有义区被称为有义链或过客链。
“反义区”意指具有与靶标核酸序列的互补性的siNA分子的核苷酸序列。此外，siNA分子的反义区可任选包含具有与siNA分子的有义区的互补性的核酸序列。在一个实施方案中，siNA分子的反义区被称为反义链或指导链。
“靶标核酸”或“靶标多核苷酸”意指其表达或活性被调节的任意的核酸序列。靶标核酸可以是DNA或RNA。在一个实施方案中，本发明的靶标核酸是靶标RNA。在一个实施方案中，本发明的靶标核酸是靶标DNA。
“互补性”意指核酸可以与另一个核酸序列通过传统沃森-克里克或其它非传统类型例如Hoogsteen碱基配对形成氢键。在一个实施方案中，本发明的双链核酸例如siNA分子(其中每条链是15-40个核苷酸长度)在双链核酸分子的两条链之间包含约10％-约100％(例如约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或100％)的互补性。互补性百分比表示可通过形成氢键列(例如沃森-克里克碱基配对)与第二个核酸序列配对的核酸分子中的连续残基的百分比。
化学术语和定义
为了解释本说明书的目的，应用下列定义，在适宜时，以单数形式使用的术语也包括复数，反之亦然。
卤素
本文所用的术语“卤素”或“卤代”是指氟、氯、溴和碘。术语“卤素”(或“卤代”)包括氟、氯、溴和碘。
本文所用的术语“卤代烷基”是指被一个或多个本文所定义的卤代基团取代的本文所定义的烷基。卤代烷基可以是单卤代烷基、二卤代烷基或多卤代烷基，包括全卤代烷基。单卤代烷基可以在烷基内具有一个碘、溴、氯或氟。二卤代烷基和多卤代烷基可以在烷基内具有两个或更多个相同的卤原子或不同卤代基团的组合。典型地，多卤代烷基含有至多12个或10个或8个或6个或4个或3个或2个卤代基团。卤代烷基的非限制性实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全卤代烷基是指全部氢原子均被卤素原子替换的烷基。
烷基、亚烷基、烯基、炔基、环烷基等
本文所用的术语“烷基”、“亚烷基”、“烯基”和“炔基”是指直链和支链的无环形式。其环状类似物被称为环烷基、环烯基等。
术语“烷基”包括一价的直链或支链的饱和的无环烃基。本文所用的术语“烷基”是指具有至多50个碳原子的完全饱和的支链或非支链的烃基。除非另有说明，否则烷基是指具有1-50个碳原子、1-40个碳原子、1-30个碳原子、1-20个碳原子、1-16个碳原子、1-16个碳原子、1-10个碳原子、1-7个碳原子或1-4个碳原子的烃基。烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正-丙基、异-丙基、正-丁基、仲-丁基、异-丁基、叔-丁基、正-戊基、异戊基、新戊基、正-己基、3-甲基己基、2，2-二甲基戊基、2，3-二甲基戊基、正-庚基、正-辛基、正-壬基、正-癸基等。在一个实施方案中，烷基是C1-10烷基，在另一个实施方案中，是C1-6烷基，在另一个实施方案中，是C1-4烷基，例如甲基、乙基、正-丙基、异-丙基或叔丁基。
术语“环烷基”包括一价的饱和的环状烃基。在一个实施方案中，环烷基是C3-10环烷基、在另一个实施方案中，是C3-6环烷基，例如环戊基和环己基。
术语“烷氧基”意指烷基-O-，其中烷基如上文所定义。烷氧基的代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、环丙基氧基-、环己基氧基-等。典型地，烷氧基具有约1-7个、更优选约1-4个碳。
术语“烯基”包括具有至少一个碳-碳双键的一价的直链或支链的不饱和的无环烃基，并且在一个实施方案中，无碳-碳三键。本文所用的术语“亚烷基”是指上文所定义的具有1-50个碳原子的二价烷基。除非另有说明，否则它包含1-50个碳原子，亚烷基是指具有1-50个碳原子、1-40个碳原子、1-30个碳原子、1-20个碳原子、1-16个碳原子、1-10个碳原子、1-7个碳原子或1-4个碳原子的基团。亚烷基的代表性实例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚正丙基、亚异丙基、亚正丁基、亚仲丁基、亚异丁基、亚叔丁基、亚正戊基、亚异戊基、亚新戊基、亚正己基、3-甲基亚己基、2，2-二甲基亚戊基、2，3-二甲基亚戊基、亚正庚基、亚正辛基、亚正壬基、亚正癸基等。在一个实施方案中，烯基是C2-10烯基，在另一个实施方案中，是C2-6烯基，在另一个实施方案中，是C2-4烯基。
术语“环烯基”包括具有至少一个碳-碳双键的一价的部分不饱和的环状烃基。在一个实施方案中，环烯基是C3-10环烯基，在另一个实施方案中，是C5-10环烯基，例如环己烯基。
术语“炔基”包括具有至少一个碳-碳三键的一价的直链或支链的不饱和的无环烃基，并且在一个实施方案中，无碳-碳双键。在一个实施方案中，炔基是C2-10炔基，在另一个实施方案中，是C2-6炔基，在另一个实施方案中，是C2-4炔基。
术语“环炔基”包括具有至少一个碳-碳三键的一价的部分不饱和的环状烃基。在一个实施方案中，环炔基是C6-10环烯基，在另一个实施方案中，是C8-10环炔基。
术语“亚烷基”包括二价的直链或支链的饱和的无环烃基。在一个实施方案中，亚烷基是C1-10亚烷基，在另一个实施方案中，是C1-6亚烷基，在另一个实施方案中，是C1-4亚烷基，例如亚甲基、亚乙基、亚正丙基、亚异丙基或亚叔丁基。
术语“亚烯基”包括具有至少一个碳-碳双键的二价的直链或支链的不饱和的无环烃基，并且在一个实施方案中，无碳-碳三键。在一个实施方案中，亚烯基是C2-10亚烯基，在另一个实施方案中，是C2-6亚烯基，在另一个实施方案中，是C2-4亚烯基。
术语“亚炔基”包括具有至少一个碳-碳三键的二价的直链或支链的不饱和的无环烃基。在一个实施方案中，亚炔基是C2-10亚炔基，在另一个实施方案中，是C2-6亚炔基，在另一个实施方案中，是C2-4亚炔基。
杂烷基等
本文所用的术语“杂原子”是指氮(N)、氧(O)、磷(P)或硫(S)原子，特别是氮或氧。
术语“杂烷基”包括其中至多6个碳原子、在一个实施方案中至多5个碳原子、在另一个实施方案中至多4个碳原子、在另一个实施方案中至多3个碳原子、在另一个实施方案中至多2个碳原子、在另一个实施方案中1个碳原子各自独立地被O、S(O)q、N、P(O)r或Si(且优选O、S(O)q或N)代替的烷基，条件是保留至少一个烷基碳原子。杂烷基可以是C-连接的或杂-连接的，即它可以通过碳原子或通过O、S(O)q、N、P(O)r或Si与分子的其余部分连接。注意S(O)q和P(O)r如下文所定义。
术语“杂环烷基”包括其中至多6个碳原子、在一个实施方案中至多5个碳原子、在另一个实施方案中至多4个碳原子、在另一个实施方案中至多3个碳原子、在另一个实施方案中至多2个碳原子、在另一个实施方案中1个碳原子各自独立地被O、S(O)q或N代替的环烷基，条件是保留至少一个环烷基碳原子。杂环烷基的实例包括环氧乙烷基、硫杂环丙烷基(thiaranyl)、氮丙啶基、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷基(thiatanyl)、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、1，4-二烷基、1，4-氧杂硫杂环己烷基(1，4-oxathianyl)、吗啉基、1，4-二噻烷基、哌嗪基、1，4-氮杂硫杂环己烷基(1，4-azathianyl)、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氮杂环庚烷基、1，4-二氧杂环庚烷基、1，4-氧杂硫杂环庚烷基、1，4-氧杂氮杂环庚烷基、1，4-二硫杂环庚烷基、1，4-硫杂氮杂环庚烷基和1，4-二氮杂环庚烷基。杂环烷基可以是C-连接的或杂-连接的，即它可以通过碳原子或通过氮原子与分子的其余部分连接。
术语“杂烯基”包括其中至多3个碳原子、在一个实施方案中至多2个碳原子、在另一个实施方案中1个碳原子各自独立地被O、S(O)q或N代替的烯基，条件是保留至少一个烯基碳-碳双键。杂烯基可以是C-连接的或杂-连接的，即它可以通过碳原子或通过O、S(O)q或N与分子的其余部分连接。
术语“杂环烯基”包括其中至多3个碳原子、在一个实施方案中至多2个碳原子、在另一个实施方案中1个碳原子各自独立地被O、S(O)q或N代替的环烯基，条件是保留至少一个环烯基碳-碳双键。杂环烯基的实例包括3，4-二氢-2H-吡喃基、5-6-二氢-2H-吡喃基、2H-吡喃基、1，2，3，4-四氢吡啶基和1，2，5，6-四氢吡啶基。杂环烯基可以是C-连接的或杂-连接的，即它可以通过碳原子或通过氮原子与分子的其余部分连接。在一个实施方案中，本发明的杂环烯基包括C3-C10环烯基。在一个实施方案中，本发明的杂环烯基包括C5-C10环烯基。
术语“杂炔基”包括其中至多3个碳原子、在一个实施方案中至多2个碳原子、在另一个实施方案中1个碳原子各自独立地被O、S(O)q或N代替的炔基，条件是保留至少一个炔基碳-碳三键。杂炔基可以是C-连接的或杂-连接的，即它可以通过碳原子或通过O、S(O)q或N与分子的其余部分连接。
术语“杂环炔基”包括其中至多3个碳原子、在一个实施方案中至多2个碳原子、在另一个实施方案中1个碳原子各自独立地被O、S(O)q或N代替的环炔基，条件是保留至少一个环炔基碳-碳三键。杂环烯基可以是C-连接的或杂-连接的，即它可以通过碳原子或通过氮原子与分子的其余部分连接。杂环炔基的实例包括氮杂环辛-4-炔。在一个实施方案中，本发明包括C3-C10杂环炔基。在一个实施方案中，本发明包括C5-C10杂环炔基。
术语“亚杂烷基”包括其中至多3个碳原子、在一个实施方案中至多2个碳原子、在另一个实施方案中1个碳原子各自独立地被O、S(O)q或N代替的亚烷基，条件是保留至少一个亚烷基碳-碳键。
术语“亚杂烯基”包括其中至多3个碳原子、在一个实施方案中至多2个碳原子、在另一个实施方案中1个碳原子各自独立地被O、S(O)q或N代替的亚烯基，条件是保留至少一个亚烯基碳-碳双键。
术语“亚杂炔基”包括其中至多3个碳原子、在一个实施方案中至多2个碳原子、在另一个实施方案中1个碳原子各自独立地被O、S(O)q或N代替的亚炔基，条件是保留至少一个亚炔基碳-碳三键。
芳基
术语“芳基”包括一价的芳族的环状烃基，例如苯基或萘基(例如1-萘基或2-萘基)。一般而言，芳基可以是单环的或多环稠合的环芳族基团。优选的芳基是C6-C14芳基。本文所用的术语“芳基”是指在环部分具有6-20个碳原子的芳族烃基。典型地，芳基是具有6-20个碳原子的单环、二环或三环的芳基，包括与一个或多个非芳族烃环稠合的一个或多个芳族环。非限制性的实例包括苯基、萘基或四氢萘基。
芳基的另一些实例是醋蒽烯、苊、醋菲烯(acephenanthrylene)、蒽、薁、蔻、荧蒽、芴、不对称-引达省(as-indacene)、对称-引达省(s-indacene)、茚、萘、卵苯、苝、萉(phenalene)、菲、苉、七曜烯(pleiadene)、芘、皮蒽和玉红省的一价衍生物。
术语“芳基烷基”意指被芳基例取代的烷基，例如苄基。
术语“亚芳基”包括二价的芳族的环状烃基，例如亚苯基。一般而言，亚芳基可以是单环的或多环稠合的环芳族基团。优选的亚芳基是C6-C14亚芳基。亚芳基的另一些实例是醋蒽烯、苊、醋菲烯、蒽、薁、蔻、荧蒽、芴、不对称-引达省、对称-引达省、茚、萘、卵苯、苝、萉、菲、苉、七曜烯、芘、皮蒽和玉红省的二价衍生物。
杂芳基
术语“杂芳基”包括一价的杂芳族环状烃基，其还含有一个或多个独立地选自O、S、N和NRN的杂原子，其中RN如下文所定义(并且在一个实施方案中，是H或烷基(例如C1-6烷基))。本文所用的术语“杂芳基”是指5-14元的单环-或二环-或三环-芳族环系，具有1-8个选自N、O或S的杂原子。典型地，杂芳基是5-10元环系(例如5-7元单环或8-10元二环)或5-7元环系。典型的杂芳基包括2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、2-或3-吡咯基、2-，4-或5-咪唑基、3-，4-，或5-吡唑基、2-，4-或5-噻唑基、3-，4-或5-异噻唑基、2-，4-或5-唑基、3-，4-或5-异唑基、3-或5-1，2，4-***基、4-或5-1，2，3-***基、四唑基、2-，3-或4-吡啶基、3-或4-哒嗪基、3-，4-或5-吡嗪基、2-吡嗪基和2-，4-或5-嘧啶基。
术语“杂芳基”还指其中杂芳族环与一个或多个芳基、脂环族基团或杂环基环稠合的基团，其中连接基或连接点在杂芳族环上。非限制性的实例包括本文提供的那些头部基团，例如H15和H29。
一般而言，杂芳基可以是单环或多环(例如二环)稠合的环杂芳族基团。在一个实施方案中，杂芳基含有5-13个环成员(例如5-10个成员)和1、2、3或4个独立地选自O、S、N和NRN的环杂原子。在一个实施方案中，杂芳基可以是5、6、9或10元的，例如5-元单环的、6-元单环的、9-元稠合二环的或10-元稠合二环的。
单环杂芳族基团包括包含5-6个环成员和1、2、3或4选自O、S、N或NRN的杂原子的杂芳族基团。
在一个实施方案中，5-元单环杂芳基含有1个为-NRN-基团、-O-原子或-S-原子的环成员，并且任选地含有为＝N-原子的1-3个环成员(例如1或2个环成员)(5个环成员中的其余环成员是碳原子)。
5-元单环杂芳基的实例是吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、异唑基、唑基、异噻唑基、噻唑基、1，2，3-***基、1，2，4-***基、1，2，3-二唑基、1，2，4-二唑基、1，2，5-二唑基、1，3，4-二唑基、1，3，4-噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，2，4-三嗪基、1，2，3-三嗪基和四唑基。
6-元单环杂芳基的实例是吡啶基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基。
在一个实施方案中，6-元单环杂芳基含有1或2个为＝N-原子的环成员(6个环成员中的其余环成员是碳原子)。
二环杂芳族基团包括含有9-13个环成员和1、2、3、4个或更多个选自O、S、N或NRN的杂原子的稠合杂芳族基团。
在一个实施方案中，9-元二环杂芳基含有1个为-NRN-基团、-O-原子或-S-原子的环成员，并且任选地含有1-3个(例如1个或2个)为＝N-原子的环成员(9个环成员中的其余环成员是碳原子)。
9-元稠合二环杂芳基的实例是苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并***基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基、吡咯并[3，2-c]吡啶基、吡咯并[3，2-b]吡啶基、咪唑并[4，5-b]吡啶基、咪唑并[4，5-c]吡啶基、吡唑并[4，3-d]吡啶基、吡唑并[4，3-c]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、异吲哚基、吲唑基、嘌呤基、二氢吲哚基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[1，5-a]吡啶基、吡唑并[1，2-a]吡啶基、吡咯并[1，2-b]哒嗪基和咪唑并[1，2-c]嘧啶基。
术语“杂芳基烷基”意指被杂芳基取代的烷基。
术语“亚杂芳基”包括另外含有一个或多个独立地选自O、S、N和NRN的杂原子的二价的杂芳族环状烃基，其中RN如下文所定义(并且在一个实施方案中，是H或烷基(例如C1-6烷基))。一般而言，亚杂芳基可以是单环或多环(例如二环)稠合杂芳族基团。在一个实施方案中，亚杂芳基含有5-13个环成员(优选5-10个成员)和1、2、3或4个独立地选自O、S、N和NRN的环杂原子。在一个实施方案中，亚杂芳基可以是5、6、9或10元的，例如5-元单环的、6-元单环的、9-元稠合二环的或10-元稠合二环的。术语“亚杂芳基”包括上文所述的杂芳基中每一个的二价衍生物。
术语“芳基”、“芳族”、“杂芳基”和“杂芳族”还包括部分被还原的基团。因此，例如，“杂芳基”包括其中环之一已经被还原成饱和环的稠合基团(例如1，2，3，4-四氢-1，8-萘啶-2-基)。
一般介绍
除非另有明确说明，否则在本文作为一个原子团提及基团组合的情况下，例如芳基烷基，最后提及的基团含有该原子团通过其与分子的其余部分连接的原子。
如果提及烷基或其它基团的碳原子被O、S(O)q、N或P(O)r代替，则用于表示：
被代替(其中E不能是H)；
-CH＝被-N＝或-P(O)r＝代替；
≡C-H被≡N或≡P(O)r代替；或
-CH2-被-O-、-S(O)q-、-NRN-或-P(O)rRN-代替，其中RN是H或是任选被取代的C1-6烷基、C1-6杂烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、C2-6烯基、C2-6杂烯基、C3-6环烯基、C3-6杂环烯基、苯基或含有5或6个环成员的杂芳基。RN优选是H、C1-6烷基或C3-6环烷基。
q独立地是0、1或2。在一个实施方案中，q是0。
r独立地是0或1。在一个实施方案中，r是0。
如果提及碳原子被Si代替，则用于表示碳原子被替换为硅原子，但是其余的键保持相同。因此，例如，-CH2-被-SiH2-代替；-CH＝被-SiH＝代替；≡C-H被≡Si-H代替。
作为澄清，与上面提及的含杂原子的基团(例如杂烷基等)相关，在给出了碳原子数的情况下，例如C3-6杂烷基，其用于指其中3-6个链碳原子中一个或多个被O、S(O)q或N代替的C3-6烷基。因此，C3-6杂烷基例如含有小于3-6个链碳原子。作为另一个实例，尽管其含有5个碳原子，但是吡啶基被分类为C6杂芳基。
如果提及下面提供的具体的官能团或化学原子团，意指的化学实体如下：
醚(例如-O-)；酯(例如-C(O)O-)；琥珀酸酯(例如-O(O)C-CH2-CH2-C(O)O-))；氨基甲酸酯(例如-OC(O)-NR’-)；碳酸酯(例如-OC(O)O-)；酮(例如-C-C(O)-C-)；羰基(例如-C(O)-)；脲(例如-NRC(O)NR’-)；胺(例如-NR’-)；酰胺(例如-C(O)NR’-)；亚胺(例如-C(NR’)-)；硫醚(例如-S-)；黄原酸酯(例如-OC(S)S-)；磷酸二酯(例如-OP(O)2O-)；其中R’可以独立地选自H、-NH-、-O-、-S-、磷酸酯基或任选被取代的C1-10亚烷基。
pKa
除非另有明确说明，否则本文所提及的所有pKa均是在标准温度和压力下在水中测定的。此外，除非另有说明，否则所有对pKa的提及均是对使用下列技术测定的pKa的提及。
2mM的脂质在乙醇中的溶液是通过将脂质称重、然后溶于乙醇中来制备的。0.3mM的荧光探针TNS在乙醇∶甲醇9∶1中的溶液是通过首先制备3mM的TNS在甲醇中的溶液、然后用乙醇稀释至0.3mM来制备的。
分别制备含有浓度为20mM、25mM、20mM和150mM的磷酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠和氯化钠的缓冲水溶液。将缓冲液分成8份，用12N HCl或6N NaOH将pH调至4.44-4.52、5.27、6.15-6.21、6.57、7.10-7.20、7.72-7.80、8.27-8.33和10.47-11.12。将400uL 2mM的脂质溶液与800uL 0.3mM的TNS溶液混合。
使用Tecan Genesis RSP150高通量液体处理器和Gemini软件，将7.5uL探针/脂质混合物加入到在1mL 96孔板(模式NUNC 260252，Nalgae Nunc International)中的242.5uL缓冲液中。对所有8份缓冲液均这么做。
在1mL 96孔板中混合后，将100uL各探针/脂质/缓冲液混合物转入250uL黑色的具有透明底的96孔板(模式COSTAR 3904，Corning)。
使用软件SoftMax pro 5.2和下列参数在SpectraMax M5分光光度计上进行荧光测定：
读取模式：    荧光，顶部读取
波长：        激发322nm，发射431nm，在420nm自动截断
灵敏度：      读数6，PMT：自动
自动混合：    之前：关
自动校准：    开
测定板类型：  96孔标准clrbtm
读取孔：      读取整个板
沉降时间：    关
柱波长优先：  柱优先
短柱速度：    正常
自动读取：    关
在测量后，从各探针/脂质/缓冲液混合物中扣除96孔板上空孔的背景荧光值。然后将荧光强度值对最低pH下的值标准化。然后用MirosoftExcel软件绘制标准化的荧光强度-pH图。用平滑线连接8个点。
找到线上标准化的荧光强度等于0.5的点。找到与等于0.5的标准化的荧光强度对应的pH，将其视为脂质的pKa。
使用该方法测定的pKa精确至约0.2pKa单位。
不存在的基团
当在式(I)中基团a、b或c“不存在”时，意指存在单键，即基团a、b或c的两侧的两基团彼此直接键合。
取代
除非另有说明，否则本文所用的术语“任选被取代的”当用于芳基、杂芳基、环烷基或杂环基中任意一个时是指未被取代的或被一个或多个、典型地被1、2、3、4或5个合适的非氢取代基取代的这类基团，所述非氢取代基各自独立地选自：
(a)烷基；
(b)羟基(或被保护的羟基)；
(c)卤素；
(d)氧代，即＝O，或烷基亚氨基，即＝N-烷基；
(e)氨基、烷基氨基或二烷基氨基；
(f)烷氧基；
(g)环烷基；
(h)羧基；
(i)杂环氧基，其中杂环氧基表示通过氧桥键合的杂环基；
(j)烷基-O-C(O)-；
(k)巯基；
(l)硝基；
(m)氰基
(n)氨磺酰基或磺酰氨基；
(o)芳基；
(p)烷基-C(O)-O-；
(q)芳基-C(O)-O-；
(r)芳基-S-；
(s)芳基氧基；
(t)烷基-S-；
(u)甲酰基，即HC(O)-；
(v)氨甲酰基；
(w)芳基-烷基-；和
(x)被烷基、环烷基、烷氧基、羟基、氨基、烷基-C(O)-NH-、烷基氨基、二烷基氨基或卤素取代的芳基。
除非另有说明，否则本文所用的“任选被取代的”当用于烷基或含有烷基的基团中的任意一个时是指未被取代的或被一个或多个、典型地被1、2或3个合适的非氢取代基取代的这类基团，所述非氢取代基各自独立地选自：卤素、羟基(或被保护的羟基)或烷氧基。
本发明的化合物的基团(例如烷基、环烷基、烷氧基、烯基、环烯基、炔基、亚烷基、亚烯基、杂烷基、杂环烷基、杂烯基、杂环烯基、杂炔基、亚杂烷基、亚杂烯基、芳基、芳基烷基、芳基杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基或杂芳基杂烷基等)可以是被取代的或未被取代的，在一个实施方案中，是未被取代的。典型地，取代包括理论上用一个取代基代替一个氢原子，或者在被＝O取代的情况中代替两个氢原子。
在被取代的情况下，一般在每个基团上存在1-5个取代基，在一个实施方案中，存在1-3个取代基，在一个实施方案中，存在1或2个取代基，在一个实施方案中，存在1个取代基。一个实施方案包括在同一原子上存在一个以上取代基，例如缩醛基团。
在一个实施方案中，取代基独立地是Sub1或Sub2(在一个实施方案中，是Sub2)，其中：
Sub1独立地是卤素、三卤代甲基、三卤代乙基、-NO2、-CN、-N+(Rs)2O-、-CO2H、-CO2Rs、-SO3H、-SORs、-SO2Rs、-SO3Rs、-OC(＝O)ORs、-C(＝O)H、-C(＝O)Rs、-OC(＝O)Rs、＝O、-NRs 2、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NRs 2、-N(Rs)C(＝O)ORs、-N(Rs)C(＝O)NRs 2、-OC(＝O)NRs 2、-N(Rs)C(＝O)Rs、-C(＝S)NRs 2、-NRsC(＝S)Rs、-SO2NRs 2、-NRsSO2Rs、-N(Rs)C(＝S)NRs 2、-N(Rs)SO2NRs 2、-Rs或-ZsRs，其中：
Zs独立地是O、S或NRs；
Rs独立地是H或C1-6烷基、C1-6杂烷基、-(Alka)f-C3-6环烷基、-(Alka)f-C3-6杂环烷基、C2-6烯基、C2-6杂烯基、-(Alka)f-C3-6环烯基、-(Alka)f-C3-6杂环烯基、C2-6炔基、C2-6杂炔基、-(Alka)f-C6-14芳基、-(Alka)f-C6-14芳基或-(Alka)f-杂芳基(其中杂芳基含有5-13个环成员)，其中
f是0或1；
Alka是C1-6亚烷基或C1-6亚杂烷基；且
Rs自身是任选被1-3个取代基Sub2取代的(在一个实施方案中，是未被取代的)；
Sub2独立地是卤素、三卤代甲基、三卤代乙基、-NO2、-CN、-N+(C1-6烷基)2O-、-CO2H、-CO2C1-6烷基、-SO3H、-SOC1-6烷基、-SO2C1-6烷基、-SO3C1-6烷基、-OC(＝O)OC1-6烷基、-C(＝O)H、-C(＝O)C1-6烷基、-OC(＝O)C1-6烷基、＝O、-N(C1-6烷基)2、-C(＝O)NH2、-C(＝O)N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)C(＝O)O(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)C(＝O)N(C1-6烷基)2、-OC(＝O)N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)C(＝O)C1-6烷基、-C(＝S)N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)C(＝S)C1-6烷基、-SO2N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)SO2C1-6烷基、-N(C1-6烷基)C(＝S)N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)SO2N(C1-6烷基)2、-C1-6烷基、-C1-6杂烷基、-C3-6环烷基、-C3-6杂环烷基、-C2-6烯基、-C2-6杂烯基、-C3-6环烯基、-C3-6杂环烯基、-C2-6炔基、-C2-6杂炔基、-C6-14芳基、-C5-13杂芳基、-Zt-C1-6烷基、-Zt-C3-6环烷基、-Zt-C2-6烯基、-Zt-C3-6环烯基或-Zt-C2-6炔基；且
Zt独立地是O、S、NH或N(C1-6烷基)。
当Sub1中的Rs可以任选被1-3个取代基Sub2取代时，Sub2是未被取代的。然而，在一个实施方案中，Rs是未被取代的。
在一个实施方案中，Rs是H或任选被1-3个取代基Sub2取代的C1-6烷基。
在一个实施方案中，Sub2独立地是卤素、三卤代甲基、三卤代乙基、-NO2、-CN、-N+(C1-6烷基)2O-、-CO2H、-SO3H、-SOC1-6烷基、-SO2C1-6烷基、-C(＝O)H、-C(＝O)C1-6烷基、＝O、-N(C1-6烷基)2、-C(＝O)NH2、-C1-6烷基、-C3-6环烷基、-C3-6杂环烷基、-Zt-C1-6烷基或-Zt-C3-6环烷基。
在一个实施方案中，如果被取代的基团是无环基团(例如烷基、杂烷基、烯基等)，则Sub1不是-Rs，Sub2不是-C1-6烷基、-C1-6杂烷基、-C2-6烯基、-C2-6杂烯基、-C2-6炔基或-C2-6杂炔基。
如果不是Sub2的基团具有至少2个可被取代的位置，该基团可以被亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚杂烯基或亚杂炔基链(在一个实施方案中，含有1-6个原子，在一个实施方案中，含有3-6个原子，在一个实施方案中，含有3或4个原子)的两端取代，从而形成环状基团。该链任选被1-3个取代基Sub2取代。在一个实施方案中，该链是未被取代的。因此，术语任选被取代的“环烷基”、“环烯基”、“环炔基”、“杂环烷基”、“杂环烯基”、“杂环炔基”、“芳基”和“杂芳基”包括稠合的基团。例如，“任选被取代的环烷基”包括其中2个环烷基环稠合的基团，“任选被取代的杂芳基”包括其中杂环烷基环与芳族环稠合的基团(例如5，6，7，8-四氢-1，8-萘啶-2-基)。
如果不是Sub2的基团具有可被取代两次的原子，则该原子可以被亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚杂烯基或亚杂炔基链(在一个实施方案中，含有2-8个原子，在一个实施方案中，含有3-6个原子，在一个实施方案中，含有4或5个原子)的两端取代，从而形成环状基团。该链任选被1-3个取代基Sub2取代。在一个实施方案中，该链是未被取代的。因此，术语任选被取代的“环烷基”、“环烯基”、“环炔基”、“杂环烷基”、“杂环烯基”、“杂环炔基”、“芳基”和“杂芳基”包括螺环基团。
作为澄清，当基团具有杂原子时，取代基可以与杂原子键合。因此，例如，“任选被取代的杂烷基”包括-CH2-N(Sub1)-CH2-、-CH(Sub1)-NH-CH2-和-CH(Sub1)-N(Sub1)-CH2-等。
修饰术语
当名称列表的前面具有修饰语时，用于表示该修饰语应被理解为适用于列表中各项中的每一项。例如，短语“任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基”意指该列表中的四项(即C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基和C6-20-杂芳基)可以任选被取代。
当基团用第一个修饰语进行特征记述并且且随后同一基团又用后继的修饰语进行特征记述时，意指该基团同时用两个修饰语进行特征记述。例如，如果基团被描述为“C3-20-杂环炔基”(第一个修饰语)，并且随后同一基团被描述为“C5-16”(后继的修饰语)基团，则含义是C5-16杂环炔基。
类固醇
本文所用的术语“类固醇”是指包含下列结构(该结构在本文中被称为“类固醇骨架”)的任意基团。
纯粹为了举例说明目的，类固醇骨架在上面已经被画为完全饱和的。然而，术语类固醇也覆盖在类固醇骨架中存在不饱和度的情况。例如，术语类固醇覆盖包含完全不饱和(mancude)的基本骨架15H-环戊二烯并[a]菲的基团：
术语类固醇也覆盖包含部分不饱和的类固醇骨架的基团。
术语类固醇还覆盖类固醇骨架的“断裂”衍生物，即其中已经实现了开环的基团；分别涉及环缩小和扩环的类固醇骨架的“降”和“高”衍生物(参见Systemic Nomenclature of Organic Chemistry，D.Hellwinkel编辑，Springer出版，2001，ISBN：3-540-41138-0，有关“断裂”在203页，有关“降”和“高”在204页)。然而，在一个实施方案中，这类“断裂”衍生物不包括在术语“类固醇”中。在另一个实施方案中，这类“降”衍生物不包括在术语“类固醇”中。在另一个实施方案中，这类“高”衍生物不包括在术语“类固醇”中。因此，在一个实施方案中，这类断裂、降和高衍生物不包括在术语“类固醇”中。
术语类固醇还覆盖其中结构标记的类固醇骨架中的一个或多个碳原子被杂原子代替的情况。在一个这类实施方案中至多6个碳原子、在一个实施方案中至多5个碳原子、在另一个实施方案中至多4个碳原子、在另一个实施方案中至多3个碳原子、在另一个实施方案中至多2个碳原子、在另一个实施方案中1个碳原子各自独立地被O、S(O)q、N、P(O)r或Si(且优选O、S(O)q或N)代替。然而，在一个实施方案中，术语“类固醇”包括其中“类固醇基本骨架”不含有杂原子的那些。
类固醇环系按照下面所示的规定编号。
术语类固醇包括固醇、类固醇激素、胆汁酸和胆汁酸的盐。固醇是在A环的3-位上带有羟基的任意类固醇。
不饱和
根据标准应用，ω-3位是指从链的(甲基)末端起第三个键；ω-6位是指从链的(甲基)末端起第六个键，ω-9位是指从链的(甲基)末端起第九个键。
PDI
首字母缩写词PDI表示多分散性指数。除非另有说明，否则本文所提及的所有PDI均是完全形成的纳米粒的PDI，如通过使用MalvernZetasizer进行的动态光散射所测定的。用磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释纳米粒样品，以便计数率为约200-400kcts。
通用定义
术语“包含”涵盖“包括”以及“由...组成”，例如“包含”X的组合物可以仅由X组成或者可包括一些另外的成分，例如X+Y。
措词“基本上”不排除“完全地”，例如“基本上不含”Y的组合物可以完全不含Y。在必要的情况下，措词“基本上”可以从本发明的定义中省略。
与数值x相关的术语“约”意指例如x±10％。在一个实施方案中，与所公开的所有数值相关，术语“约”不存在。
为了避免疑虑，在化合物、组合物、方法或用途的语境中所明确公开的任何特征在此也隐含地公开在化合物、组合物、方法和用途的语境中。例如，如果本文明确公开了本发明的化合物具有特征“A”，则本文隐含地公开了涉及具有特征“A”的本发明的化合物的本发明的治疗方法。
此外，本文描述了本发明的不同实施方案。应当清楚的是，在各实施方案中给出的特征可以与其它给出的特征组合，从而得到另外的实施方案。
本发明的阳离子脂质的化学合成
途径A给出了可用于合成本发明的化合物的通用方法。途径CDT举例说明了如何制备胆固醇二甘醇甲苯磺酸酯试剂。
环氧化物(实施例1)
将亚油醇(linoleyl alcohol)(48.7g，183mmol)加入到圆底烧瓶中，溶于THF(400mL)。使用冰浴冷却得到的溶液，加入氢化钠(13.16g，329mmol)。将得到的浆液于室温搅拌1h。一次性加入表溴醇，使反应于室温持续进行。搅拌4h后，加入另外的氢化钠(13.16g，329mmol)。于室温再搅拌1h后，加入另外一个等分试样的表溴醇(32.5g，238mmol)。然后将反应加热至50℃过夜。然后将反应冷却至室温，用水淬灭。加入EtOAc，收集得到的有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发除去挥发性物质，通过使用EtOAc/庚烷的硅胶色谱法纯化得到的残余物，得到所需的环氧化物。
胆固醇甲苯磺酸酯(实施例2)
将胆固醇(50g，129mmol)溶于DCM(55mL)和吡啶(150mL)。将得到的溶液冷却至0℃，一次性加入固体形式的甲苯磺酰氯。将反应缓慢温至室温过夜。将反应通过旋转蒸发浓缩，加入MeOH(500mL)，产生白色固体。持续搅拌30min，通过过滤收集沉淀物，用MeOH洗涤，真空干燥，得到所需的甲苯磺酸酯。
胆固醇二甘醇(实施例3)
将胆固醇甲苯磺酸酯(73g，128mmol)溶于1，4-二烷(750mL)。加入二甘醇(294mL，3077mmol)，将反应加热至温和回流过夜。将得到的溶液冷却至室温，通过旋转蒸发浓缩。将得到的凝胶状物用DCM吸收，与水一起搅拌。收集得到的有机层，用DCM将水层萃取1次。合并有机层，用硫酸钠干燥，通过旋转蒸发浓缩。使用EtOAc/庚烷在硅胶上纯化粗产物，得到所需的胆固醇二甘醇。
胆固醇二甘醇甲苯磺酸酯(实施例4)
将胆固醇二甘醇(51.5g，103mmol)在DCM(160mL)和吡啶(60mL)中搅拌。加入甲苯磺酸酐(38.7g，119mmol)，将得到的溶液于室温搅拌过夜。将反应通过旋转蒸发浓缩，使用EtOAc/庚烷在硅胶上纯化所得的残余物，得到所需的产物。
3-哌啶基-1，2-丙二醇1-亚油基醚(实施例5)
将来自实施例1的环氧化物(1.0g，3.1mmol)溶于EtOH(17mL)。
加入哌啶(0.45mL，4.65mmol)，将混合物在微波反应器中加热至140℃达5min。冷却至室温后，通过旋转蒸发浓缩该混合物，使用MeOH/DCM在硅胶上纯化，得到所需的氨基醇。
最终化合物1(实施例6)
将来自实施例5的氨基醇(0.447mg，1.09mmol)在甲苯(15mL)中搅拌，一次性加入NaH(0.102g，4.24mmol)。将得到的混合物于室温搅拌30min，一次性加入来自实施例4的甲苯磺酸酯。将反应加热至回流过夜。冷却至室温(“rt”)后，通过添加饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应。将得到的混合物搅拌5min，然后通过旋转蒸发浓缩。使用MeOH/DCM在硅胶上直接纯化得到的残余物，得到粗产物，将其使用EtOAc/庚烷在硅胶上再纯化，得到所需的化合物。
下列化合物(其结构如下文所示)能通过途径A方法制备。
E0011；    E0002；    E0003；    E0013；    E0015；
E0006；    E0008；    E0001；    E0022；    E0026；
E0030；    E0037；    E0038；    E0039；    E0042；
E0050；    E0055；    E0061      E0062；    E0063；
E0064；    E0065；    E0066；    E0068；    E0069；
E0070；    E0071；    E0072；    E0073；    E0074；
E0075；    E0076；    E0077；    E0078；    E0079；
E0080；    E0081；    E0082；    E0083；    E0084；
E0085；    E0086；    E0087；    E0088；    E0089；
E0090；    E0091；    E0092；    E0093；    E0094；
E0095；    E0096；    E0107；    E0109；    E0023；
E0024；    E0025；    E0031；    E0033；    E0034；
E0043；    E0046；    E0059；    E0067；    E0014；
E0119；    E0016；    E0004；    E0005；    E0017；
E0018；    E0019；    E0120；    E0007；    E0020；
E0010；    E0021；    E0027；    E0028；    E0029；
E0032；    E0035；    E0009；    E0040；    E0041；
E0044；    E0048；    E0049；    E0052；    E0053；
E0057；    E0119；    E0120；    E0121；    E0124；
E0126；    E0127；    E0147；    E0149；    E0158；
E0051：    E0067：    E0112；    E0113；    E0114；
E0118；    E0159；    E0170；和  E0171.
途径B也表示可以用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例7
将胆固醇(3.33g，8.62mmol)、二甘醇酸酐(1g，8.62mmol)、DMAP(0.263g，2.154mmol)、CH2Cl2(35ml)和搅拌子加入圆底烧瓶中。将反应于室温搅拌3天。
浓缩反应混合物，在IntelliFlash 280(AnaLogix)上通过闪式色谱法纯化残余物，使用SF40-80G柱：0-2CV，100％CH2Cl2；2-10CV，100∶0CH2Cl2∶(MeOH 10％AcOH)-90∶10CH2Cl2∶(MeOH 10％AcOH)的线性梯度；10-25CV，90∶10CH2Cl2∶(MeOH 10％AcOH)-85∶15CH2Cl2∶(MeOH 10％AcOH)的线性梯度。将产物与胆固醇共同洗脱。合并含有产物的级分，真空浓缩，得到白色浆液，然后用庚烷洗脱(胆固醇可溶于庚烷)，在冰浴中冷却。滤出白色固体，用庚烷洗涤，置于真空下，得到1.50g(35％)纯产物。
实施例8
将来自实施例5的氨基醇(105.3mg，0.258mmol)、DMAP(22mg，0.180mmol)和来自实施例7的羧酸(135.6mg，0.270mmol)称重入小瓶。加入二氯甲烷(2.5mL)，然后加入EDC.HCl(67.1mg，0.350mmol)。将反应混合物于室温搅拌过夜。
在IntelliFlash 280(AnaLogix)上通过闪式色谱法纯化粗品反应混合物，使用SF15-24G柱：0-3CV，100％CH2Cl2；3-25CV，100∶0CH2Cl2∶MeOH-95∶5CH2Cl2∶MeOH的线性梯度。产物仍然不纯。将残余物再次在IntelliFlash 280(AnaLogix)上通过闪式色谱法纯化，使用SF15-24G柱，0-3CV，100％庚烷；3-30CV，100∶0庚烷∶乙酸乙酯-65∶35庚烷∶乙酸乙酯的线性梯度。用TLC鉴定含有产物的级分，将其合并，真空浓缩，得到38mg(13％)纯产物，为澄清液体。
下列化合物(其结构如下文所示)能通过途径B方法制备：E0036和E0047。
途径C也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例9
将2-(2-氯乙氧基乙醇)(5.01g，40.2mmol)称重入圆底烧瓶，溶于DMF(100ml)。搅拌该溶液，加入NaN3(2.89g，44.5mmol)，使温度增至80℃。溶液变混浊。将反应搅拌过夜。
第二天早晨，从加热中取出反应，用300mL水稀释。用乙酸乙酯洗涤该溶液，以萃取产物(4×100mL)。用硫酸钠干燥有机相，浓缩，得到液体。根据1H NMR，该液体含有44％重量的DMF。将产物-5.19g(98％)-不经进一步纯化即用于下一步。
实施例10
将来自实施例9的叠氮基醇(5.25g，22.42mmol)和吡啶(3mL，37.1mmol)在圆底烧瓶中溶于CH2Cl2(45ml)，在冰浴中搅拌。一旦冷却，一次性加入甲苯磺酰氯(4.70g，24.66mmol)。将反应贮存在冰箱中过夜。
第二天，将反应用CH2Cl2(50mL)稀释，用1M HCl(2×40mL)萃取，以除去吡啶。用盐水(40mL)将有机相洗涤1次，浓缩。在IntelliFlash280(AnaLogix)上通过闪式色谱法纯化残余物，使用SF40-115G柱：0-20CV，100∶0庚烷∶乙酸乙酯-50∶50庚烷∶乙酸乙酯线性梯度。用TLC鉴定含有产物的级分，合并，真空浓缩，得到产物，估计纯度90％：0.61g(10％)。
实施例11
如实施例6中所述进行，但使用来自实施例5的氨基醇和来自实施例10的甲苯磺酸酯。
实施例12
在小瓶中将来自实施例11的烷基叠氮化物(334mg，0.641mmol)溶于THF(4mL)和水(0.400mL)。向该溶液中加入三甲膦在THF中的溶液(2.5mL，2.500mmol三甲膦)，将反应搅拌过夜。第二天早晨TLC显示反应完全。蒸发溶剂，将残余物溶于10mL MeOH。将溶液荷载至用MeOH预平衡的SCX(10g)柱上，用50mL MeOH洗涤，然后用4×10mL 7M NH3的MeOH溶液洗脱。产物在第二、第三和第四个级分中洗脱；合并这些级分，浓缩。TLC(和嗅觉)显示仍然存在三甲膦，因此将残余物用50mLEtOAc吸收，用3×15mL水洗涤，所述水用NaHCO3使得略呈碱性。用Na2SO4干燥有机相，浓缩，得到无色液体：232mg(73％)。
实施例13
在圆底烧瓶中将来自实施例12的胺(232mg，0.469mmol)溶于CH2Cl2(5mL)。向该溶液中加入胆固醇氯甲酸酯(316mg，0.703mmol)和DMAP(86mg，0.703mmol)。将该溶液于室温搅拌过夜。
在IntelliFlash 280(AnaLogix)上通过闪式色谱法直接纯化粗品反应混合物，使用SF15-24G柱：0-5CV，100％CH2Cl2；5-15CV，100∶0CH2Cl2∶MeOH-95∶5CH2Cl2∶MeOH的线性梯度；15-30，95∶5CH2Cl2∶MeOH。通过TLC鉴定含有产物的级分，将其合并，浓缩，得到浅黄色油状物：339mg(80％)。
下列化合物(其结构如下文所示)能通过途径C方法制备：
E0054；    E0097；    E0099；    E0103；    E0148；
E0169；    E0175；和  E0176。
途径D也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例14
向0℃的二甘醇乙烯基醚(3.96g，30mmol)在CH2Cl2中的溶液中加入吡啶(4.85mL)，然后加入甲苯磺酰氯(6.86g，36mmol)。于0℃10min后，将反应温至室温，搅拌过夜。
将反应在NaHCO3饱和水溶液与乙酸乙酯之间萃取。合并有机萃取物，干燥并浓缩。通过闪式色谱法纯化产物，用30％乙酸乙酯/70％庚烷洗脱：5.45g(63％)。
实施例15
向室温的来自实施例14的乙烯基醚(1.0g，3.49mmol)在CH2Cl2中的溶液中加入胆固醇(0.675g，1.746mmol)，然后加入PPTS(0.878g，3.49mmol)。将反应于室温搅拌5小时。根据TLC，产物非常接近胆固醇地被洗脱，且是轻微UV-活性的。将反应在NaHCO3饱和水溶液与乙酸乙酯之间萃取。合并有机萃取物，干燥并浓缩。通过使用30％乙酸乙酯/70％庚烷的闪式色谱法纯化粗品残余物：700mg(60％)。
实施例16
如实施例6所述进行，但使用来自实施例5的氨基醇和来自实施例15的甲苯磺酸酯。
下列化合物(其结构如下文所示)能通过途径D方法制备：E0058。
途径E也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例17
如实施例6所述进行，但使用来自实施例5的氨基醇和来自实施例14的甲苯磺酸酯。
实施例18
于室温将1N HCl水溶液(0.38mL，0.38mmol)滴加到来自实施例17的乙烯基醚(100mg，0.19mmol)在4mL 1∶1乙醇/THF中的溶液中。1h后，将反应在NaHCO3饱和水溶液与乙酸乙酯之间萃取。合并有机萃取物，干燥并浓缩，得到油状物，将其不经进一步纯化即用于下一步：85mg(90％)。
实施例19
如实施例8所述进行，但使用来自实施例18的氨基醇和胆固醇半琥珀酸酯作为羧酸。
下列化合物(其结构如下文所示)能通过途径E方法制备：
E0060；    E0104；    E0129；    E0130；    E0143；    E0150；
E0151；    E0152；    E0161；    E0162；    E0163；    E0164；
E0165；    E0177；    E0178；和  E0179。
途径F也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例20
向室温的来自实施例18的氨基醇(600mg，1.21mmol)在甲苯(12mL)中的溶液中加入60％NaH(97mg，2.42mmol)(反应变成黄色)。10min后，加入胆固醇氯甲酸酯(815mg，1.815mmol)。然后将反应加热至80℃(反应变成橙色)，搅拌过夜。
冷却反应混合物，在盐水与乙酸乙酯之间萃取。合并有机萃取物，用Na2SO4干燥，浓缩。得到油状物。通过使用5％MeOH/95％CH2Cl2的闪式色谱法纯化粗品油状物：720mg(66％)。
下列化合物(其结构如下文所示)能通过途径F方法制备。
E0056；    E0122；    E0123；    E0138；和E0139。
途径G也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例21
将来自实施例5的氨基醇(12.4mmol)在THF(10mL)中的溶液和DIAD(3mL)在THF(10mL)中的溶液同时加入到PPh3(2.5g)和苯邻二甲酰亚胺(2.5g)在THF(50mL)中的溶液中。将得到的混合物于室温搅拌过夜。将反应浓缩至干，直接用于下一步。
实施例22
将来自实施例21的物质在乙醇(25mL)中搅拌，加入甲胺的THF溶液。将反应于室温搅拌16h，然后浓缩至干。用硅胶色谱法纯化粗品物质。
实施例23
将来自实施例22的胺(0.22mmol)在DMF(5mL)中与胆固醇半琥珀酸酯(0.25mmol)、HATU(0.26mmol)一起搅拌。加入N-甲基吗啉(0.55mmol)，将反应于室温搅拌过夜。将得到的溶液真空浓缩，用EtOAc稀释。将得到的有机层用水、然后用盐水洗涤，浓缩，得到黄色液体。将得到的残余物用中性氧化铝纯化，得到浅黄色液体。
下列化合物能通过途径G方法制备：
E0098；    E0100；    E0101；    E0105；    E0106；和E0108。
途径H也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例24
向来自实施例22的胺(3.55mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入DIEA(5.7mmol)和胆固醇氯甲酸酯(6.0mmol)。将得到的反应于室温搅拌过夜。将反应用EtOAc(50mL)稀释，用水、然后用盐水洗涤。浓缩得到的有机层，得到残余物，通过硅胶色谱法纯化，得到浅黄色液体。
E0102能用途径H方法制备。
途径I也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例25
向来自实施例22的胺(0.33mmol)在DCM(25mL)中的溶液中加入BOC甘氨酸(0.36mmol)、HATU(0.36mmol)和DIEA(0.66mmol)。将得到的混合物于室温搅拌过夜。用饱和NH4Cl水溶液洗涤得到的反应混合物，用硫酸钠干燥，浓缩，得到粗品固体，将其不经进一步纯化即使用。
实施例26
将来自前一步骤的物质在DCM(15mL)中搅拌，加入TFA(5mL)。将得到的溶液于室温搅拌过夜。将得到的混合物浓缩至干，加入1.5NHCl(20mL)。用EtOAc洗涤该溶液，然后用固体NaHCO3降至pH＞7。将得到的混合物用DCM萃取，用硫酸钠干燥得到的有机层，浓缩，得到粗品固体，将其不经进一步纯化即使用。
实施例27
将来自前一步骤的物质在DCM(20mL)中搅拌，加入DIEA(0.53mmol)。向该溶液中加入胆固醇氯甲酸酯(0.53mmol)，将反应于室温搅拌过夜。然后将反应用EtOAc(50mL)稀释，用1.5N HCl、10％NaHCO3水溶液和盐水洗涤得到的溶液。用硫酸钠干燥得到的有机层，浓缩，得到固体。
E0110和E0111能使用途径I方法制备。
实施例28-32也代表了可用于合成本发明的化合物的途径。
实施例28
将使用途径A方法制备的BOC保护的阳离子脂质(150mg)与三乙基硅烷(0.5mL)一起搅拌，一次性加入TFA(10mL)。2h后，将反应浓缩至干。将得到的残余物在硅胶上纯化(使用0-15％MeOH在DCM中的溶液)，浓缩，得到玻璃状的油状物。
E0012能使用该方法制备。
实施例29
将使用途径A方法制备的TBDMS保护的阳离子脂质(135mg，0.138mmol)在THF(2mL)中搅拌，加入TBAF溶液(0.28mL，1.0M的THF溶液，0.28mmol)。将反应于室温搅拌过夜。将反应在硅胶上直接纯化(使用0-20％MeOH在DCM中的溶液)，得到澄清的油状物。
E0045能使用该方法制备。
实施例30-31也代表可用于合成本发明的化合物的途径。
实施例30
历经15min向搅拌着的低聚甲醛(536mg)在TMSCl(9.4mL)中的混悬液中滴加亚油醇(5.0g)。一旦反应变澄清，将其减压浓缩，立即用于下一步。
实施例31
向搅拌着的缩水甘油(1.5mL)在THF(50mL)中的溶液中加入来实施例30的化合物(5.8g)、DIEA(9.5mL)、碘化四丁基铵(6.8g)。将反应于室温搅拌5h。通过过滤取出固体，用***洗涤。收集滤液，用水和盐水洗涤。用硫酸钠干燥得到的有机层，减压浓缩，得到粗品油状物。通过已经用含3％三乙胺的流动相预处理的硅胶色谱法纯化粗品物质。使用EtOAc在庚烷中的溶液洗脱该物质，得到1.65g纯产物，为澄清液体。
用于制备E0115、E0116、E0117和E0160的原料能使用来自实施例30和本实施例31的步骤制备。
实施例32
将乙二醇(0.30g)在THF(20mL)中搅拌，加入60重量％氢化钠(0.19g)。将得到的混合物搅拌20min。加入甲磺酸亚油醇酯(1.64g)，将反应加热至50℃达2h，然后加热至回流过夜。将反应冷却至室温，再搅拌24h。向反应中加入饱和氯化铵水溶液，用DCM萃取得到的混合物。将得到的有机层用硫酸钠干燥，浓缩，得到粗品油状物。使用EtOAc在庚烷中的溶液在硅胶上纯化粗品物质，得到640mg所需的产物。
实施例30-32的方法可用于合成在亚油基链与分子的核心之间具有间隔基的脂质(例如E0055)。
途径J也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例33
向胆固醇(10g，26mmol)和硼烷-THF(5滴)在DCM(30mL)中的溶液中加入重氮基乙酸乙酯(3.5mL，52mmol)。搅拌5min后，浓缩该反应混合物，通过使用己烷/EtOAc的硅胶色谱法纯化，得到9g所需的产物。
实施例34
向来自实施例33的化合物(9g，19mmol)在EtOH(110mL)中的溶液中加入NaOH(3g，76mmol)。将得到的混合物加热至70℃达3h。将反应冷却至室温，浓缩。将残余物用水吸收，用2N HCl酸化，用DCM(2×)萃取。合并得到的有机层，浓缩，得到8g所需的产物。
实施例35
将EDC(1.8g，9.8mmol)和DMAP(80mg，0.66mmol)加入来自实施例34的化合物(2.2g，4.9mmol)在DCM(5mL)中的溶液中。将反应搅拌10min，然后加入醇(1.5g)，将反应于室温搅拌过夜。用DCM稀释反应，用水洗涤。浓缩得到的有机层，得到残余物，使用氯仿/MeOH在硅胶上纯化，得到所需的产物，为油状物。
下列化合物能通过途径J方法制备：
E0125；    E0128；    E0131；    E0140；和E0144。
途径K也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例36
向N-Boc-β丙氨酸(1.25g，6.61mmol)在DCM(6mL)中的溶液中加入EDC(2.5g，13mmol)、HOBt(0.3g，2mmol)和TEA(2mL，13mmol)。将得到的混合物搅拌30分钟。加入氨基醇(2g)在DCM(4mL)中的溶液，将反应搅拌10h。用DCM稀释反应，用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。用硫酸钠干燥得到的有机层，浓缩，得到油状物，将其使用MeOH/DCM在硅胶上纯化。浓缩产物，得到2.65g油状物。
实施例37
将来自实施例36的化合物(2.6g)在DCM(10mL)中搅拌，加入TFA(10mL)。3h后，将反应浓缩至干，直接用于下一步。
实施例38
向来自实施例37的化合物(2g)在DCM(20mL)中的溶液中加入DIEA(2.7mL，15.7mmol)和DMAP(80mg，0.6mmol)，然后加入胆固醇氯甲酸酯(2.1g，4.7mmol)。将反应于室温搅拌3h。用DCM稀释反应，用水洗涤。浓缩得到的有机层，使用MeOH/氯仿在硅胶上纯化，得到2.1g所需的产物。
下列化合物能通过途径K方法制备：
E0133；    E0134；    E0135；    E0136；    E0137；    E0141；
E0132；    E0142；    E0145；    E0166；和  E0168。
途径L也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例39
向醇(2.5g，5.8mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入对-硝基氯甲酸酯和TEA。将反应于室温搅拌过夜。用DCM稀释反应，用水洗涤。用硫酸钠干燥得到的有机层，浓缩，得到油状物，使用EtOAc/己烷在硅胶上纯化，得到所需的产物。
实施例40
将醇(1.3g，2.9mmol)在MePh(10mL)中搅拌。加入NaH(0.46g，11.4mmol)，将反应于室温搅拌30min。加入来自实施例39的化合物(1.7g，1.2mmol)，将反应于室温搅拌16h。用冰浴冷却反应，用水淬灭。用EtOAc萃取得到的混合物。合并有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，得到粗品油状物。使用EtOAc/己烷在硅胶上纯化，得到1g所需的产物。
E0146能使用途径L技术制备。
实施例41、42和43
实施例41、42和43被储备并且特异地保留作为空白。
途径X也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例44
于室温向2-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)乙醇(800mg，5.47mmol)、三乙胺(0.915mL，6.57mmol)和N，N-二甲基氨基吡啶(134mg，1.10mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中加入甲苯磺酰氯(1.10g，5.75mmol)。将反应于室温搅拌3h。用饱和NaHCO3水溶液稀释反应，用乙酸乙酯萃取。干燥有机相，浓缩，通过使用乙酸乙酯/庚烷梯度的硅胶闪式色谱法纯化粗产物：1.24g，75％。
实施例45
将来自实施例44的甲苯磺酸酯(1.03g，3.43mmol)和吗啉(2.97mL，34.3mmol)在烧瓶中合并。密封烧瓶，于60℃加热过夜。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用饱和NaHCO3水溶液洗涤。干燥有机相，浓缩，通过使用二氯甲烷/甲醇梯度的硅胶闪式色谱法纯化粗产物：670mg，91％。
实施例46
于0℃将来自实施例45的胺(530mg，2.46mmol)溶于二烷(15mL)。向冷却的溶液中加入浓HCl(水溶液，7.39mmol)。将反应于室温搅拌过夜。加入过量的固体K2CO3以中和酸。通过过滤取出固体，用丙酮洗涤。浓缩滤液，通过使用二氯甲烷/甲醇梯度的硅胶闪式色谱法纯化粗产物：320mg，74％。
实施例47
将来自实施例46中前一步的二醇(320mg，1.8mmol)在DCM(12mL)中与咪唑(249mg，3.65mmol)一起搅拌。向该溶液中加入TBDPSCl(0.475mL)，1.8mmol)。将得到的混合物于室温搅拌过夜。用DCM稀释反应，用饱和碳酸氢钠洗涤。用硫酸钠干燥得到的有机层，浓缩，得到油状物，使用DCM/MeOH在硅胶上纯化，得到650mg所需的产物。
实施例48
向在甲苯(15mL)中的来自前一步骤的物质(640mg，1.5mmol)中加入氢化钠(124mg，60重量％在油中，3.1mmol)。20min后，加入胆固醇试剂(1.17g，1.86mmol)，将反应加热至回流过夜。冷却至室温后，用盐水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取。干燥得到的有机层，浓缩，使用EtOAc/庚烷在硅胶上纯化，得到560mg所需的产物。
实施例49
向在THF(6mL)中的来自前一步骤的物质(660mg，0.76mmol)中加入1M TBAF的THF溶液(1.5mL0，1.5mmol)。将反应于室温搅拌2h，然后用EtOAc稀释。用盐水稀释得到的有机层，干燥，浓缩，得到粗产物，将其使用MeOH/DCM在硅胶上纯化。
实施例50
于室温将来自实施例49的氨基醇(280mg，0.443mmol)溶于甲苯(4mL)，然后加入60％NaH(44mg，1.1mmol)。20分钟后，加入甲苯磺酸油酯(按照与实施例10中所述的方法类似的方法由油醇制备)(187mg，0.443mmol)。将反应回流3h。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。干燥有机相，浓缩，通过使用乙酸乙酯/庚烷梯度的硅胶闪式色谱法纯化粗产物：183mg，47％。
E0180能通过途径X方法制备。
途径Y也表示可用于合成本发明的化合物的通用方法。
实施例51
向胆固醇(700mg，1.8mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入碳酸钾(750g，5.4mmol)和DMAP(22mg，0.18mmol)，滴加溴乙酰溴(0.19mL，2.2mmol)。在冰浴中搅拌90min后，过滤反应，浓缩，使用DCM/庚烷在硅胶上纯化，得到850mg所需的产物。
实施例52
向氨基醇(1.08g，2.37mmol)在MePh(20mL)中的溶液中加入NaH(190mg，60重量％在油中，4.74mmol)。将该混合物在回流下加热10min，然后加入溴乙酰基胆固醇(1.20g，2.37mmol)。将反应在回流下搅拌2h，冷却至室温。向反应中加入水和EtOAc和盐水。收集得到的有机层，干燥，浓缩，得到粗品物质，用1％乙酸的DCM溶液将柱平衡后，将其使用EtOAc/庚烷在硅胶上纯化。纯化后，合并含有产物的级分，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后浓缩，得到700mg所需的产物。
E0167能使用途径Y方法制备。
实施例53
隐形脂质结构和合成
隐形脂质S001至S026的结构提供在表3中。下面的实施例54-67举例说明了隐形脂质的合成。
表3-隐形脂质结构
实施例54：S001
将胆固醇半琥珀酸酯(608mg，1.25mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(240mg，1.25mmol，EDC.HCl)溶于无水二氯甲烷(4mL)，然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(305mg，2.50mmol)和聚(乙二醇)甲基醚(500mg，0.250mmol，Mn～2,000g/mol，Sigma-Aldrich)。于室温搅拌该反应混合物。72h后，将全部反应混合物荷载至10g Bond Elut SCX柱(来自Varian；用50∶50二氯甲烷∶甲醇预平衡)上，用50∶50二氯甲烷∶甲醇洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩。通过使用二氯甲烷/甲醇梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩，得到白色固体：304mg，48.6％。
在四氢呋喃中的尺寸排阻色谱法显示窄单峰。在1H NMR谱中观察到的峰和积分值与预期的产物一致。
实施例55：S002
步骤1
将β-丙氨酸盐酸盐(1.00g，7.16mmol)、胆固醇氯甲酸酯(3.06g，6.81mmol)和三乙胺(2.0ml，14mmol)溶于无水氯仿(25ml)。将该溶液于室温搅拌过夜。第二天早晨，蒸发溶剂，将残余物溶于乙酸乙酯(100mL)，用1M HCl、盐水洗涤，用Na2SO4干燥。浓缩产物，得到白色固体，不经进一步纯化即用于下一步：3.31g，90.0％。
步骤2
将来自前一步骤的产物(甲酯)(298mg，0.578mmol)溶于四氢呋喃(2mL)，加入1M NaOH(2.0mL，2.0mmol)，得到双相溶液。于室温搅拌该溶液，形成乳剂。2h后，用10mL水稀释反应混合物，用1M HCl酸化。将产物萃取入乙酸乙酯(100mL)。用盐水洗涤有机相，用Na2SO4干燥，浓缩，得到白色固体。1H NMR显示存在少量甲酯起始材料(～5mol％)，但认为纯度足够不经进一步纯化用于下一步：252mg，83.0％。
步骤3
将N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(96mg，0.50mmol)、来自前一步骤的产物(羧酸)(252mg，0.477mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(122mg，1.00mmol)和聚(乙二醇)甲基醚(200mg，0.100mmol，Mn～2,000g/mol，Sigma-Aldrich)溶于无水二氯甲烷(5.0mL)，于室温搅拌。24h后，将反应混合物荷载至10g Bond Elut SCX柱(来自Varian；用50∶50二氯甲烷∶甲醇预平衡)上，用50∶50二氯甲烷∶甲醇洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，将其合并，浓缩。通过使用二氯甲烷/甲醇梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩，得到白色固体：151mg，60.3％。
在四氢呋喃中的尺寸排阻色谱法显示窄单峰。在1H NMR谱中观察到的峰和积分值与预期的产物一致。
实施例56：S003
将PEG-NH2(500mg，0.250mmol，Mn～2000g/mol，“SunbrightMEPA-20H”，NOF Corp.)、胆固醇氯甲酸酯(449mg，1.00mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(122mg，1.00mmol)和N，N-二异丙基乙胺(148mg，1.15mmol)溶于5mL 1∶1甲苯∶二氯甲烷，于室温搅拌。72h后，加入N，N-二甲基乙二胺(0.2mL)，以淬灭过量的胆固醇氯甲酸酯。搅拌30min后，将反应混合物荷载至10g Bond Elut SCX柱(来自Varian；用50∶50二氯甲烷∶甲醇预平衡)上，用50∶50二氯甲烷∶甲醇洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩。通过使用二氯甲烷/甲醇梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩，得到白色固体：376mg，57.8％。
在四氢呋喃中的尺寸排阻色谱法显示窄单峰。在1H NMR谱中观察到的峰和积分值与预期的产物一致。
实施例57：S004
步骤1
向热枪-干燥的圆底烧瓶中并且在氮气下加入十八醛(octadecylaldehyde)(500mg，1.86mmol)和四氢呋喃(10mL)。通过注射器加入0.5M十八基氯化镁的四氢呋喃溶液(7.5mL，3.8mmol)，将反应温至40℃。在添加完成后，将反应搅拌1h。使反应脱离加热，用1mL乙酸淬灭。达到室温后，用二氯甲烷稀释该溶液，用水、0.1M NaOH、1M HCl和盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机相，过滤。将粗品物质用热庚烷结晶两次，得到产物，为白色粉末：195mg，20.0％。
步骤2
于40℃将来自前一步骤的产物(醇)(194mg，0.371mmol)溶于二氯甲烷(4ml)，然后加入吡啶(100μl，1.24mmol)和氯甲酸4-硝基苯酯(93mg，0.46mmol)。将反应于40℃搅拌过夜，然后冷却至室温。通过使用庚烷/二氯甲烷梯度的硅胶闪式色谱法纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩，得到白色固体：219mg，86.0％。
步骤3
于室温将来自前一步骤的产物(碳酸4-硝基苯酯)溶于甲苯(5ml)。加入PEG-NH2(800mg，0.400mmol，Mn～2000g/mol，“SunbrightMEPA-20H”，NOF Corp.)、N，N-二甲基氨基吡啶(50mg，0.409mmol)和N，N-二异丙基乙胺(200μl，1.145mmol)。于室温搅拌该溶液。72h后，将反应荷载至10g Bond Elut SCX柱(来自Varian；用50∶50二氯甲烷∶甲醇预平衡)上，用50∶50二氯甲烷∶甲醇洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩。通过使用二氯甲烷/甲醇梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩。为了除去4-硝基苯酚杂质，将产物溶于二氯甲烷(10mL)，加入来自Silicycle(2.0g，目录号R52030B)的Si-胺清除树脂。将溶液于室温搅拌1h，过滤以除去树脂，浓缩，得到浅黄色固体：806mg，97.0％。
在N，N-二甲基甲酰胺中的尺寸排阻色谱法显示窄单峰。在1HNMR谱中观察到的峰和积分值与预期的产物一致。
实施例58：S005
步骤1
在圆底烧瓶中，在温和加热下将三十五烷-18-酮(750mg，1.48mmol)溶于四氢呋喃(40mL)。将含酮的溶液冷却至室温，滴加4M氢化铝锂的***溶液(0.74mL，2.96mmol)。将反应于室温搅拌30min。加入固体硫酸钠十水合物，将浆液搅拌20min以淬灭过量的氢化铝锂。过滤出固体，用庚烷稀释滤液，用1M HCl洗涤。用硫酸钠干燥有机相，浓缩，得到白色固体。粗产物的纯度足以不经进一步纯化用于下一步：650mg，86.0％。
步骤2
向室温的来自前一步骤的产物(醇)(200mg，0.393mmol)和吡啶(78mg，0.98mmol)(194mg，0.371mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入氯甲酸4-硝基苯酯(99mg，0.49mmol)。将反应混合物于35℃加热4h。然后用庚烷稀释反应混合物，用1M HCl、然后用饱和碳酸氢钠萃取。用硫酸钠干燥有机相，浓缩，通过使用庚烷∶乙酸乙酯梯度的硅胶闪式色谱法纯化。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩，得到白色固体：200mg，76％。
步骤3
将来自前一步骤的产物(碳酸4-硝基苯酯)(260mg，0.386mmol)溶于甲苯(4mL)，然后加入PEG2k(620mg，0.310mmol，Mn～2000g/mol，“Sunbright MEPA-20H”，NOF Corp.)、N，N-二甲基氨基吡啶(40mg，0.33mmol)和N，N-二异丙基乙胺(200μl，1.15mmol)。将该溶液于室温搅拌过夜。将反应混合物荷载至10g Bond Elut SCX柱(来自Varian；用50∶50二氯甲烷∶甲醇预平衡)上，用50∶50二氯甲烷∶甲醇洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩。通过使用二氯甲烷/甲醇梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩。为了除去4-硝基苯酚杂质，将粗产物溶于1∶1二氯甲烷∶甲醇，通过10g BondElut NH2柱(来自Varian；用50∶50二氯甲烷∶甲醇预平衡)洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩，得到浅黄色固体：631mg，78.0％。
在N，N-二甲基甲酰胺中的尺寸排阻色谱法显示窄单峰。在1HNMR谱中观察到的峰和积分值与预期的产物一致。
实施例59：S007
步骤1
向圆底烧瓶中加入金属镁(0.201g，8.27mmol)和催化量的碘，然后加入四氢呋喃(30mL)和1-溴十四烷(2.17g，7.82mmol)。将混合物回流2h，然后冷却至室温。加入十八醛(0.600g，2.24mmol)在四氢呋喃(5mL)中的溶液，将反应混合物于室温搅拌30min。用乙酸乙酯稀释反应，用1M HCl洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩。通过使用庚烷/乙酸乙酯梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩：310mg，29.7％。
步骤2
将来自前一步骤的产物(醇)(310mg，0.664mmol)溶于二氯甲烷(15mL)。然后加入吡啶(0.134mL，1.66mmol)，然后加入氯甲酸4-硝基苯酯(167mg，0.830mmol)。将反应于室温搅拌过夜。用乙酸乙酯稀释反应，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩。通过使用庚烷/乙酸乙酯梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩：315mg，75.0％。
步骤3
于室温向来自前一步骤的产物(碳酸4-硝基苯酯)(315mg，0.498mmol)在甲苯(10mL)中的溶液中加入N，N-二甲基氨基吡啶(48.7mg，0.399mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.174ml，0.997mmol)，然后加入PEG-NH2(798mg，0.399mmol，Mn～2000g/mol，“Sunbright MEPA-20H”，NOFCorp.)。将黄色溶液于室温搅拌过夜。将反应混合物荷载至10g Bond ElutSCX柱(来自Varian；用50∶50二氯甲烷∶甲醇预平衡)上，用50∶50二氯甲烷∶甲醇洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩。通过使用二氯甲烷/甲醇梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩：540mg，54.3％。
在1H NMR谱中观察到的峰和积分值与预期的产物一致。
实施例60：S008
步骤1
向在氮气下的干燥的圆底烧瓶中加入1-碘十六烷(0.705g，2.00mmol)和***(15mL)。将溶液冷却至-78℃(溶液变成白色浆液)，滴加1.7M正丁基锂的庚烷溶液(2.59mL，4.40mmol)。搅拌20min后，将反应混合物温至室温，再搅拌2h。向反应混合物中滴加十八醛(0.268g，1.00mmol)在***(3mL)中的溶液(放热)。用冰冷的1M HCl淬灭反应，用二氯甲烷萃取，用硫酸钠干燥，浓缩。通过使用二氯甲烷/甲醇梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩：150mg，30.3％。
步骤2
将来自前一步骤的产物(醇)(200mg，0.404mmol)溶于二氯甲烷(6mL)。然后加入吡啶(0.082mL，1.01mmol)，然后加入氯甲酸4-硝基苯酯(102mg，0.505mmol)。将反应于室温搅拌过夜。将反应用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩。通过使用庚烷/乙酸乙酯梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩：220mg，82.0％。
步骤3
于室温向来自前一步骤的产物(碳酸4-硝基苯酯)(230mg，0.348mmol)在甲苯(6mL)中的溶液中加入N，N-二甲基氨基吡啶(42.6mg，0.348mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.152ml，0.871mmol)，然后加入PEG-NH2(697mg，0.348mmol，Mn～2000g/mol，“Sunbright MEPA-20H”，NOFCorp.)。将黄色溶液于室温搅拌过夜。将反应混合物荷载至10g Bond ElutSCX柱(来自Varian；用50∶50二氯甲烷∶甲醇预平衡)上，用50∶50二氯甲烷∶甲醇洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩。通过使用二氯甲烷/甲醇梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩：600mg，68.3％。
在1H NMR谱中观察到的峰和积分值与预期的产物一致。
可以按照与针对S008所述的方法类似的方式制备S009。
实施例61：S010和S011
S010和S011可以分别例如如PCT公开WO2009086558中所提供的化合物IVa和IVc那样制备。这些化合物可以如WO2009086558的实施例19中所提供的那样合成。
实施例62：S012
可以按照与对S001所述的方法类似的方式使用PEG-NH2(“Sunbright MEPA-20H”，NOF Corp.)代替聚(乙二醇)甲基醚制备S012。
实施例63：S006和S013至S024
可以按照与对S004所述的方法类似的方式制备S006、S013、S014、S015、S016、S017、S018、S019、S020、S021、S022、S023和S024。
实施例64：S025
步骤1
将本文所述的化合物S004的合成中步骤2的产物(碳酸4-硝基苯酯)(285mg，0.414mmol)混悬于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)，然后加入D-谷氨酸二甲酯(145mg，0.828mmol)、N，N-二异丙基乙胺(0.145ml，0.828mmol)和N，N-二甲基氨基吡啶(101mg，0.828mmol)。将该溶液于60℃加热过夜。将反应混合物荷载至10g Bond Elut SCX柱(来自Varian；用50∶50二氯甲烷∶甲醇预平衡)上，用50∶50二氯甲烷∶甲醇洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩。通过使用乙酸乙酯/庚烷梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩，得到白色固体：131mg，44％。
步骤2
将来自前一步骤的产物(二-甲酯)(0.160g，0.221mmol)溶于四氢呋喃(5mL)，加入LiOH(52.9mg，2.21mmol)在水(5mL)中的溶液。将反应于室温搅拌72h。用氯仿稀释该溶液，用1N HCl(水溶液)、然后用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机相，过滤。浓缩滤液，得到白色固体：130mg，85％。
步骤3
于室温将来自前一步骤的产物(二-酸)(130mg，0.187mmol)混悬于二氯甲烷(9mL)和庚烷(1.5mL)中。向该混悬液中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(107mg，0.560mmol)，然后加入羟基苯并***(86mg，0.56mmol)。30min后，加入PEG-NH2(411mg，0.411mmol，Mn～1000g/mol、“mPEG-Amine，1k”、Creative PEGWorks)和N，N-二异丙基乙胺(65μL，0.374mmol)。将反应于室温搅拌过夜。将反应混合物荷载至10g Bond Elut SC柱(来自Varian；用50∶50二氯甲烷∶甲醇预平衡)上，用50∶50二氯甲烷∶甲醇洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩。通过使用二氯甲烷/甲醇梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩，得到白色固体：376mg，57.8％。
实施例65：S026
步骤1
将本文所述的化合物S004的合成中步骤1的产物(醇)(200mg，0.382mmol)、琥珀酸酐(38mg，0.38mmol)和N，N-二甲基氨基吡啶(12mg，0.096mmol)称重入烧瓶，混悬于氯仿(3.5mL)中。将反应混合物于70℃搅拌过夜。将反应混合物荷载至10g Bond Elut SCX柱(来自Varian；用二氯甲烷预平衡)上，用二氯甲烷洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩。通过使用乙酸乙酯/庚烷梯度的硅胶闪式色谱法进一步纯化粗产物。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩，得到白色固体：134mg，56％。
步骤2
将来自前一步骤的产物步骤(羧酸)(75mg，0.12mmol)、N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(35mg，0.18mmol)和羟基苯并***(28mg，0.18mmol)溶于无水氯仿(1mL)，于室温搅拌0.5h。然后加入PEG-NH2(265mg，0.132mmol，Mn～2000g/mol，“SunbrightMEPA-20H”，NOF Corp.)和N，N-二异丙基乙胺(32μL，0.18mmol)，将该溶液于室温搅拌过夜。将反应混合物荷载至2g Bond Elut SCX柱(来自Varian；用50∶50二氯甲烷∶甲醇预平衡)上，用二氯甲烷洗脱。通过TLC鉴定含有产物的级分，合并，浓缩，得到白色固体：240mg，76％。
这些隐形脂质的表征数据如下表4和5中所示。
表4-隐形脂质S001至S026的1H NMR
表5-隐形脂质S001至S026的另外的表征
实施例66
结果的总结表
所合成的化合物在下面的表中给出。为了避免疑惑，一些取代基被以重叠的方式画出，但是化合物的真实结构是完全清楚的。例如，标记
不表示化学上不可能的3-元含氢环，而是表示如下情况：
表6提供了本发明的阳离子脂质的结构。
表6-阳离子脂质的表征和结构
对于除E0180以外的上述化合物，Y2是通过类固醇环A的3-位上的氧原子与L连接的胆固醇(所述羟基上的氢原子不存在)；X1和X2是O；a＝亚甲基；b＝亚甲基，c不存在；而对于E0180，a＝亚乙基。
除下面的表征数据外，对所有脂质均记录了1H NMR以评估纯度和在合成中可能出现的任意烯烃异构化。具体地，将通常在0.68ppm或接近于0.68ppm的胆固醇衍生的单峰的积分与在5.2-5.5ppm范围内的烯烃衍生的信号相比。将所需的顺式、非轭合的烯烃和胆固醇烯属氢的烯烃信号与对应于异构化产物的高于5.5ppm的任意新信号相比。如通过比较1H NMR中的积分信号所确定的，在所有情况中，异构化程度均小于10％。
实施例67
下面提供了各种脂质的NMR表征。
E0008
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.25-5.48(m，5H)，3.69-3.86(m，2H)，3.55-3.69(m，7H)，3.34-3.55(m，4H)，3.07-3.25(m，1H)，2.70-3.01(m，4H)，2.30-2.53(m，3H)，2.15-2.30(m，1H)，1.78-2.14(m，11H)，1.42-1.66(m，12H)，0.97-1.42(m，34H)，0.81-0.97(m，16H)，0.68(s，3H)ppm.
E0006
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.25-5.47(m，5H)，3.56-3.85(m，11H)，3.48-3.56(m，1H)，3.36-3.48(m，3H)，3.11-3.27(m，1H)，2.66-2.83(m，4H)，2.41-2.49(m，2H)，2.30-2.41(m，1H)，2.15-2.28(m，1H)，1.72-2.12(m，11H)，0.96-1.70(m，60H)，0.68(s，3H)ppm.
13C NMR(400MHz，CDCl3)δ140.9，130.2，130.1，128.0，127.9，121.6，79.5，72.0，71.7，71.6，70.9，69.4，67.3，60.2，60.1，59.7，56.8，56.1，50.2，42.3，39.8，39.5，39.0，37.2，36.8，36.2，35.8，31.9，31.9，31.5，29.7，29.5，29.5，29.3，29.3，29.0，28.3，28.2，28.0，27.2，27.2，26.2，25.6，24.3，23.8，22.8，22.7，22.6，22.6，21.0，19.4，18.7，14.1，11.8ppm.
E0003
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.22-5.46(m，7H)，3.66-3.93(m，5H)，3.54-3.66(m，6H)，3.35-3.54(m，4H)，3.07-3.23(m，1H)，2.73-2.89(m，4H)，2.39-2.73(m，4H)，2.28-2.39(m，1H)，2.28-2.39(m，1H)，1.70-2.12(m，10H)，1.20-1.65(m，24H)，0.94-1.19(m，13H)，0.77-0.94(m，14H)，0.66(s，3H)ppm.
13C NMR(400MHz，CDCl3)δ140.9，130.4，130.0，128.3，128.1，127.8，127.6，121.6，79.5，71.6，70.8，70.7，69.2，67.3，60.1，56.7，56.1，54.2，50.1，42.3，39.7，39.5，39.0，37.2，36.8，36.2，35.8，31.9，31.8，31.5，29.5，29.4，29.3，28.3，28.2，28.0，27.2，27.2，25.8，25.6，24.3，23.8，22.8，22.6，22.5，21.0，19.4，18.7，14.1，11.8ppm.
E0002
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.26-5.44(m，5H)，3.68-3.84(m，3H)，5.54-3.68(m，7H)，3.32-3.54(m，6H)，3.09-3.24(m，1H)，2.68-2.80(m，2H)，2.27-2.58(m，3H)，2.12-2.27(m，1H)，1.69-2.12(m，9H)，1.41-1.69(m，20H)，1.19-1.40(m，20H)，0.95-1.19(m，11H)，0.78-0.95(m，12H)，0.66(s，3H)ppm.
E0001
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.10-7.24(m，3H)，6.96-7.10(m，1H)，5.21-5.48(m，5H)，3.73-3.90(m，3H)，3.37-3.72(m，11H)，3.10-3.25(m，1H)，2.72-2.86(m，2H)，2.28-2.42(m，1H)，2.14-2.28(m，1H)，1.92-2.14(m，6H)，1.78-1.92(m，4H)，1.22-1.78(m，34H)，0.95-1.22(m，13H)，0.84-0.95(m，13H)，0.68(s，3H)ppm.
E0004
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.24-5.44(m，5H)，3.66-3.83(m，2H)，3.54-3.65(m，7H)，3.34-3.51(m，4H)，3.11-3.23(m，1H)，2.94-3.10(m，2H)，2.56-2.87(m，6.5H)，2.41-2.50(d，J＝5.02Hz，2H)，2.29-2.40(m，2.5H)，1.96-2.26(m，8H)，1.62-1.96(m，8H)，1.62-1.96(m，11H)，1.40-1.61(m，11H)，1.22-1.40(m，20H)，0.81-1.21(m，26H)，0.66(s，3H)ppm.
13C NMR CDCl3，400MHz)δ142.5，140.9，139.7，130.1，130.1，128.7，127.9，127.9，125.8，121.5，79.4，77.2，71.8，71.6，70.8，70.8，69.3，67.3，63.1，59.3，56.7，56.1，53.6，53.3，50.1，49.9，42.2，39.7，39.4，39.0，37.2，36.8，36.1，35.7，31.9，31.8，31.5，29.6，29.5，29.4，29.3，29.3，28.3，28.2，27.9，27.2，27.1，27.0，26.9，26.1，25.6，24.8，24.2，23.8，22.8，22.5，21.3，21.0，19.3，18.6，14.0，11.8ppm.
E0005
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.28-5.44，(m，3H)，3.69-3.82(m，2H)，3.57-3.67(m，7H)，3.48-3.64(m，1H)，3.39-3.48(m，3H)，3.33(s，3H)，3.12-3.24(m，2H)，2.70-2.86(m，4H)，2.42-2.47(d，J＝6.02Hz，2H)，2.33-2.42(m，3H)，1.97-2.10(m，5H)，1.76-1.97(m，7H)，1.42-1.64(m，12H)，1.23-1.42(m，20H)，0.97-1.23(m，12H)，0.81-0.97(m，13H)，0.68(s，3H)ppm.
13C NMR(400MHz，CDCl3)δ140.9，130.2，130.1，127.9，127.9，121.5，79.5，77.5，72.5，72.1，70.9，v70.8，69.3，67.3，63.1，59.3，56.7，56.1，55.5，52.0，51.7，50.1，42.3，39.8，39.5，39.0，37.2，36.8，36.2，35.8，31.9，31.9，31.5，31.0，29.7，29.5，29.5，29.3，29.3，28.3，28.2，28.0，27.2，27.2，26.1，25.6，24.3，23.8，22.8，22.6，21.0，19.4，18.7，14.1，11.8ppm.
E0007
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.26-5.44(m，5H)，3.84-3.94(t，J＝5.56Hz，4H)，3.68-3.87(m，2H)，3.56-3.67(m，7H)，3.47-3.54(m，1H)，3.38-3.47(m，3H)，3.11-3.23).2.73-2.82(t，J＝6.44Hz，2H)，2.42-2.57(m，5H)，，2.32-2.41(m，1H)，2.11-2.27(m，2H)，1.97-2.10(m，6H)，1.76-1.96(m，7H)，1.66-1.75(m，2H)，1.41-1.62(m，9H)，1.22-1.41(m，20H)，0.81-1.22(m，25H)，0.67(s，3H)ppm.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ141.0，130.1，130.1，127.9，127.9，121.5，96.2，79.5，77.6，72.2，71.6，70.9，70.8，69.4，67.3，63.1，59.3，59.1，56.8，56.1，50.5，50.2，42.3，39.8，39.5，39.1，37.2，36.8，36.2，35.7，32.8，31.9，31.9，31.5，29.7，29.5，29.4，29.3，29.3，28.3，28.2，28.0，27.2，27.2，26.1，25.6，25.6，24.3，23.8，22.8，22.5，21.0，19.3，18.7，14.0，11.8ppm.
E0009
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.27-5.44(m，5H)，4.07-4.22(m，2H)，3.67-3.83(m，2H)，3.55-3.67(m，6H)，3.37-3.52(m，4H)，3.12-3.25(m，1H)，2.81-2.90(m，1H)，2.73-2.81(t，J＝6.53Hz，2H)，2.42-2.64(m，3H)，2.15-2.41(m，4H)，1.76-2.11(m，11H)，1.64-1.72(m，4H)，1.42-1.63(m，12H)，1.21-1.41(m，22H)，0.81-1.22(m，26H)，0.68(s，3H)ppm.
13 C NMR(400MHz，CDCl3)δ140.9，130.2，130.1，127.9，127.9，121.5，79.5，77.2，72.7，72.0，71.6，71.5，70.8，69.4，67.3，61.9，59.5，56.7，56.5，56.1，50.1，49.3，49.3，42.3，39.7，39.5，39.0，37.2，36.8，36.2，35.8，31.9，31.9，31.5，29.7，29.5，29.5，29.3，29.3，28.4，28.3，28.2，28.0，27.4，27.4，27.2，27.2，26.5，26.1，25.6，24.3，23.8，22.8，22.6，22.6，21.0，19.4，18.7，14.1，11.8ppm.
E0170
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.26-5.45(m，5H)，3.68-3.82(m，2H)，3.56-3.68(m，7H)，3.38-3.53m，4H)，3.11-3.24(m，1H)，2.73-2.82(t，J＝6.53Hz，2H)，2.56-2.69(m，4H)，2.50-2.56(m，2H)，2.32-2.41(m，1H)，2.09-2.27(m，2H)，1.77-2.09(m，13H)，1.42-1.63(m，9H)，1.21-1.42(m，20H)，0.83-1.21(m，25H)，0.68(s，3H)ppm.
13C NMR(400MHz，CDCl3)δ140.9，130.2，130.1，128.0，127.9，124.4，122.0，121.5，119.6，79.5，77.6，77.2，71.8，71.6，70.9，70.8，69.4，67.3，58.7，56.7，56.1，50.7，50.1，42.3，39.7，39.5，39.0，37.2，36.8，36.1，35.8，34.0，31.9，31.8，31.5，29.6，29.5，29.4，29.3，28.3，28.2，28.0，27.2，27.2，26.1，25.6，24.3，23.8，22.8，22.6，21.0，19.3，18.7，14.1，11.8ppm.
E0171
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.27-5.46(m，5H)，3.58-3.82(m，9H)，3.38-3.54(m，4H)，3.13-3.26(m，1H)，2.74-2.82(m，2H)，2.31-2.50(m，6H)，2.16-2.2(m，1H)，1.70-2.10(m，12H)，1.24-1.65(m，33H)，0.97-1.23(m，13H)，0.82-0.97(m，19H)，0.68(s，3H)ppm.
13 C NMR(400MHz，CDCl3)δ141.0，130.2，130.1，127.9，127.9，121.5，79.5，77.2，73.2，72.5，72.3，71.6，70.9，70.8，69.3，67.3，66.0，61.9，60.9，60.2，56.7，56.1，50.7，50.1，42.3，39.8，39.5，39.0，38.7，37.2，36.8，36.2，35.8，31.9，31.9，31.5，29.7，29.5，29.5，29.3，29.3，28.3，28.2，28.0，27.2，27.2，26.1，25.6，24.3，23.8，22.8，22.6，21.0，19.4，18.7，14.1，11.8ppm.
E0010
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.26-5.45(m，5H)，3.53-3.84(m，9H)，3.37-3.53(m，4H)，3.13-3.24(m，1H)，2.91-3.00(m，1H)，2.74-2.86(m，2H)，2.28-2.43(m，2H)，2.10-2.28(m，2H)，1.42-2.10(m，32H)，0.82-1.41(m，50H)，0.68(s，3H)ppm.
13C NMR(400MHz，CDCl3)δ141.0，130.2，130.1，127.9，127.9，121.5，79.5，77.2，71.9，71.6，70.9，70.8，69.1，67.3，66.7，56.8，56.1，55.5，54.6，54.0，50.1，42.3，42.1，42.0，39.8，39.5，39.0，37.2，36.8，36.2，35.8，33.2，32.6，31.9，31.9，31.5，30.7，29.7，29.5，29.5，29.3，29.3，28.3，28.2，28.0，27.2，27.2，26.2，26.1，25.8，25.6，24.3，23.8，22.8，22.6，21.0，19.4，18.7，14.1，11.8ppm.
下面的表7中给出了化合物的另外的表征数据。
表7-阳离子脂质表征数据
a E0050是非对映体混合物，它的两个非对映体组分在二氧化硅上具有不同的Rf值。
在给出标示的情况下，所用的方法如下：
＊1-Zorbax 300SB C3150×4.6，1mL/min，水：MeCN w/0.1％TFA，40-100％，历经15min，100％5min，ELSD检测。
＊2-Zorbax RX-SIL 250×4.6，0.7mL/min，己烷：EtOH 4∶6，ELSD检测。
＊3-Zorbax NH2250×4.6，1mL/min，己烷：IPA，30-60％，历经10min，60％5min，ELSD检测器。
＊4-Xbridge C8，150×4.6mm，1mL/min，水：MeCN w/0.1％TFA，30-100％，历经15min，100％5min，ELSD检测。
＊5-Zorbax Eclipse XDB-C18250×4.6，1mL/min，水：MeCN w/0.1％TFA，50％5min，然后50-100％，历经5min，然后保持在100％12min，ELSD检测器。
＊6-Zorbax Eclipse XDB-C18250×4.6，1mL/min，水：MeOH w/0.1％TFA，50％5min，然后50-100％，历经5min，然后保持在100％5min，ELSD检测器。
＊7-Zorbax Eclipse XDB-C18250×4.6，1mL/min，水：MeOH w/0.1％TFA，50-70％，历经2min，70-100％，历经3min，然后保持在100％5min，ELSD检测器。
＊8-Acquity BEH Shield RP 1850×2.1，0.5mL/min，65℃，水：IPAw/0.0125％TFA，30-50％，历经1.5min，50-75％，历经10.5min，75-90％，历经0.6min，然后保持在90％0.4min，CAD检测器。
实施例68
组合物的制备
优选以脂质纳米粒的形式施用本发明的化合物。因此，优选本发明的组合物包含脂质纳米粒，其包含本发明的化合物，并任选包含一种或多种另外的脂质组分。
为了实现颗粒大小的减小和/或增加大小的均匀性，本领域技术人员可以使用下面给出的方法步骤，使用不同的组合进行实验。另外，本领域技术人员可以使用在脂质体制剂中所用的超声处理、过滤或其它改变大小的技术。
制备本发明的组合物的方法典型地包括：在第一个贮器中提供包含生物活性剂的水溶液，提供包含脂质的有机溶液的第二个贮器，然后将所述水溶液与所述有机脂质溶液混合。任选地，所述第一个贮器与第二个贮器是流体互联的。任选地，混合步骤后是温育步骤、过滤步骤和稀释和/或浓缩步骤。
在一个实施方案中，生物活性剂和/或脂质在适合的缓冲液中。在一个实施方案中，生物活性剂在水性缓冲液例如柠檬酸盐缓冲液中。在一个实施方案中，脂质在有机醇例如乙醇中。
在一个实施方案中，温育步骤包括：在约室温下和任选地在避光下使来自混合步骤的溶液在容器中静置约0-约100小时(优选约0-约24小时)。
在一个实施方案中，温育步骤之后是稀释步骤。稀释步骤可以包括：用水性缓冲液(例如柠檬酸盐缓冲液)例如使用泵送装置(例如蠕动泵)稀释。
在一个实施方案中，过滤步骤是超滤。在一个实施方案中，超滤包括：浓缩稀溶液，然后透析过滤，例如使用适合的泵送***(例如泵送装置，例如蠕动泵或其等效物)，联合使用适合的超滤膜(例如GE Hollow纤维筒或等效物)。
该方法应导致脂质纳米粒的形成。在一个实施方案中，脂质纳米粒包含生物活性剂。
在一个实施方案中，混合步骤提供澄清的单相。
在一个实施方案中，在混合步骤之后，除去有机溶剂，得到颗粒混悬液，其中生物活性剂被脂质包囊，例如包囊在脂质双层中。
有机溶剂的选择典型地包括考虑溶剂极性和在颗粒形成的后期阶段除去溶剂的容易度。
也用作增溶剂的有机溶剂优选是足以提供生物活性剂和脂质的澄清单相混合物的量。
有机溶剂可以选自氯仿、二氯甲烷、***、环己烷、环戊烷、苯、甲苯、甲醇和其它脂族醇(例如C1-C8)如乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、异丁醇、戊醇和己醇中的一种或多种(例如两种)。
混合步骤可以通过任意数量的方法、例如通过机械装置如涡旋混合器进行。
用于除去有机溶剂的方法典型地包括透析过滤或减压蒸发或用惰性气体流(例如氮气或氩气)吹过混合物。
在另一些实施方案中，该方法进一步包括添加可用于使用本发明的组合物实现细胞转化的非脂质聚阳离子。适合的非脂质聚阳离子的实例包括但不限于海美溴铵(以商品名POLYBRENE(R)销售，来自AldrichChemical Co.，Milwaukee，Wis.，USA)或其它海美铵(hexadimethrine)盐。另一些适合的聚阳离子包括例如聚-L-鸟氨酸、聚-L-精氨酸、聚-L-赖氨酸、聚-D-赖氨酸、聚烯丙胺和聚乙烯亚胺的盐。
在某些实施方案中，脂质纳米粒的形成可在适合的混合下以单相***(例如Bligh和Dyer单相或类似的水性溶剂和有机溶剂的混合物)或以两相***的形式进行。
可以形成单相或双相***形式的脂质纳米粒。在单相***中，阳离子脂质和生物活性剂各自溶于一定体积的单相混合物。合并两种溶液，得到单相混合物，其中复合物形成。在双相***中，阳离子脂质与生物活性剂(其存在于水相中)结合并且将其“拉”入有机相。
在一个实施方案中，通过一种方法制备脂质纳米粒，所述方法包括：(a)使生物活性剂与包含非阳离子脂质和洗涤剂的溶液解除，以形成化合物-脂质混合物；(b)使阳离子脂质与所述化合物-脂质混合物接触，以中和生物活性剂的部分负电荷并形成电荷被中和的生物活性剂和脂质的混合物；和(c)从所述的电荷被中和的混合物中除去洗涤剂。
在一组实施方案中，中性脂质和洗涤剂的溶液是水溶液。使生物活性剂与中性脂质和洗涤剂的溶液接触典型地通过将生物活性剂的第一溶液与脂质和洗涤剂的第二溶液混合在一起来进行。优选地，生物活性剂溶液也是洗涤剂溶液。用在本方法中的中性脂质的量典型地根据所用的阳离子脂质的量确定，且典型地为阳离子脂质的量的约0.2-5倍，优选为所用的阳离子脂质的量的约0.5-约2倍。
使由此形成的生物活性剂-脂质混合物与阳离子脂质接触，以中和与存在的所关注的分子(或其它聚阴离子材料)结合的部分负电荷。所用的阳离子脂质的量典型地是足以中和生物活性剂的至少50％负电荷的量。优选地负电荷至少70％被中和，更优选至少90％被中和。
用于除去洗涤剂的方法典型地包括透析。当存在有机溶剂时，所述除去典型地通过透析过滤或减压蒸发或通过用惰性气体流(例如氮气或氩气)吹过混合物来进行。
本文公开了用于制备本发明的组合物的装置。该装置典型地包括用于盛放包含生物活性剂的水溶液的第一个贮器和用于盛放有机脂质溶液的第二个贮器。该装置还典型地包括配置用于以基本上相等的流速将水溶液和有机脂质溶液泵入混合区或混合室的泵结构。在一个实施方案中，混合区或混合室包含T形连接器或其等效物，其使得水性流体流和有机流体流当输入T形连接器时合并，得到的合并的水溶液和有机溶液从T形连接器流出进入收集贮器或其等效物。
实施例69
制备组合物的实例方法
通过用碰撞喷射法将等体积的溶于醇的脂质与溶于柠檬酸盐缓冲液的siRNA混合形成脂质纳米粒(LNP)。该脂质溶液在醇中含有本发明的阳离子脂质化合物或对比脂质、辅助脂质(胆固醇)、任选的中性脂质(DSPC)和PEG(PEG)脂质，浓度为8-16mg/mL，目标是12mg/mL。在表8-11中报道了本发明的制剂中每种脂质组分的相对摩尔比。如果LNP制剂含有4种脂质组分，则摩尔比对应于它出现在表中首个四栏中的脂质类型，顺序是它们出现的顺序。如果LNP制剂含有3种脂质组分，则不存在中性脂质。
阳离子脂质的脂质比为20-70摩尔百分比，目标是40-60；辅助脂质的摩尔百分比为20-70，目标是30-50；中性脂质的摩尔百分比为0-30；PEG脂质的摩尔百分比为1-6，目标是2-5。siRNA溶液的浓度为在pH 4的柠檬酸钠∶氯化钠缓冲液中0.7-1.0mg/mL，目标是0.8-0.9mg/mL。通过用碰撞喷射方法经由ID为0.25-2.0mm的管道以10-120mL/min的总流速混合相等体积的脂质的乙醇溶液与溶于柠檬酸盐缓冲液的siRNA形成LNP。将混合的LNP溶液于室温保持0-48小时，然后进行稀释步骤。然后将溶液浓缩，用适合的缓冲液通过使用MW截止值为30-100KD的膜的超滤法进行透析。将终产物无菌过滤，于4℃贮存。
实施例70：在小鼠模型中的体内转染
从Charles River Labs接收雌性CD-1小鼠并且使其自由获取标准实验室食物和水。在给药时动物体重为约25克。将配制的siRNA作为单剂量以不同的剂量水平通过尾侧静脉静脉内施用，所述剂量基于(mgsiRNAs/kg)按照各动物的体重计算(10ml/kg注射体积)。
配制的siRNA由对靶mRNA序列具有特异性的双链siRNA序列制成且是含有阳离子脂质、隐形脂质和中性脂质的脂质核苷酸颗粒(LNP)的形式(在下面的实施例中提供的)。用于靶向于肝的siRNA构建体对因子VII具有特异性。用于靶向于肿瘤的siRNA构建体对PLK1-424具有特异性，其被Judge等人公开，参见J Clin Invest.2009年3月；119(3)：661-73；doi：10.1172/JCI37515)。
1.FVII siRNA双螺旋序列
5’UUu AAU UGA AAC cAA GAc Auu 3’(SEQ ID NO：1)
5’uGu cuu GGu uuc AAu uAA Auu 3’(SEQ ID NO：2)
2.PLK1-424siRNA双螺旋序列
5’UAU UUA AgG AGG GUG AuC Uuu 3’(SEQ ID NO：3)
5’AGA Uca cCC Ucc uuA AAU auu 3’(SEQ ID NO：4)
在这些序列中使用了下列缩写：
A＝腺苷
U＝尿苷
G＝鸟苷
C＝胞嘧啶
a＝2’-O-甲基-腺苷
u＝2’-O-甲基-尿苷
g＝2’-O-甲基-鸟苷
c＝2’-O-甲基-胞嘧啶
实施例71：团子VII活性测定
将配制的因子VII siRNA作为单剂量以不同的剂量水平通过尾侧静脉静脉内施用，所述剂量基于mg siRNAs/kg按照各动物的体重计算(10ml/kg注射体积)。在注射后约48h，通过CO2吸入、然后腔静脉放血将小鼠安乐死。用含有0.105M柠檬酸钠抗凝剂的试管采血用于血浆因子VII活性分析。在一些情况中，采集小片(～50mg)肝，在液氮中骤冷，以便接下来进行mRNA定量。
使用来自Hyphen Biomedical(目录号221304)的Biophen FVII试剂盒测定了采集自注射小鼠的血浆的因子VII活性。使用来自媒介物对照动物的合并的血浆等分试样制备测定标准曲线。稀释落入标准曲线的线性范围内的所有样品，报道相对因子VII活性。
在一些情况中，使用Qiagen’s RNeasy分离试剂盒(目录号74106)根据制造商的方案制备总肝RNA。通过定量PCR分析因子VII mRNA，将其对GAPDH标准化。施用Applied Biosystems因子VII基因表达测定Mm00487333_m1和小鼠GAPDH内源性对照目录号4352339进行mRNA检测。
FVII测定的结果如下面的表8中所示。
表8-因子VII测定-体内肝结果
1其中空白格显示无中性脂质存在
2其中AVANTI表示AVANTI 880150P
3其中GM-020表示GM-020NOF
4其中当它们以摩尔比出现时脂质类型的顺序对应于脂质在表的首个四栏中出现的顺序。如果仅以摩尔比列出了3种脂质，则中性脂质不存在。
实施例72：Hep3B肿瘤研究
通过将在100ul PBS中的7×106个细胞皮下注射入左侧腹在雌性裸鼠中建立Hep3B肿瘤。在肿瘤达到100mm3平均大小时接种后10-14天将小鼠随机分入治疗组。将siRNA配制的LNP制剂以不同的剂量水平通过尾侧静脉静脉内施用，所述剂量基于mg siRNAs/kg按照各动物的体重计算(10ml/kg注射体积)。在不同的时间点通过CO2吸入将小鼠安乐死，收获肿瘤用于mRNA定量。在LNP制剂中使用具有宽范围pKa(5.3-6.6)的脂质。使用数字测径器以2维(宽×长)方式测量肿瘤以评价肿瘤生长。使用方程[a×b×b/2]计算肿瘤体积，其中a等于最大直径，b等于最小直径。
实施例73：HepG2肝肿瘤研究
通过将在100ul PBS中的5×106个细胞皮下注射入左侧腹在雌性裸鼠中建立HepG2肿瘤。在肿瘤达到150mm3平均大小时接种后10-14天将小鼠随机分入治疗组。将siRNA配制的LNP制剂以3×3mg/kg的剂量水平通过尾侧静脉静脉内施用，所述剂量基于mg siRNAs/kg按照各动物的体重计算(10ml/kg注射体积)。在不同的时间点通过CO2吸入将小鼠安乐死，在最后一个剂量后24小时收获肿瘤用于mRNA定量。在LNP制剂中使用具有宽范围pKa(5.3-6.6)的脂质。使用数字测径器以2维(宽×长)方式测量肿瘤以评价肿瘤生长。使用方程[a×b×b/2]计算肿瘤体积，其中a等于最大直径，b等于最小直径。
实施例74：786-0肾肿瘤研究
通过皮下注射在200ul PBS中的10×106个细胞如前面所述建立786-0肿瘤。植入后4周，将具有200-250mm3肿瘤大小的小鼠随机分入治疗组。然后将siRNA配制的LNP制剂以5或10mg/kg剂量水平静脉内施用。单剂量后48小时，采集肿瘤用于mRNA定量。
实施例75：肿瘤组织中PLK-1和GAPDH mRNA KD的测量
用Qiagen匀化器在组织裂解缓冲液中匀化约30-50mg肿瘤组织，然后离心以澄清裂解物。使用RNeasy分离试剂盒(目录号74106)根据制造商的方案分离总RNA。通过定量PCR分析PLK-1mRNA并且对人GAPDH标准化。使用Applied Biosystems人PLK-1基因表达测定Hs00983229_m1和人GAPDH内源性对照目录号4326317E进行mRNA检测。
实施例72、73、74和75的肿瘤实验中的PLK1mRNA水平的敲除(“KD”)的结果在下面的表中给出，计算为抑制百分比(PLK1％抑制)。靶向于Hep3B肝肿瘤的结果报道在表9中。靶向于HepG2肝肿瘤的结果报道在表10中。靶向于786-0肾肿瘤的结果报道在表11中。所有表中的pKa是指阳离子脂质的pKa。如果给出多个剂量(例如3×5)，则第一个数字表示所给与的剂量数，第二个数字表示单位为mg siRNA(生物活性剂)/kg小鼠的每个剂量的量。一般而言，多个剂量以24小时的时间间隔施用，在最后一个剂量后24小时收获用于mRNA定量的组织。
表9-Hep3B肿瘤体内测定结果
1空白格表示中性脂质不存在
2其中当它们以摩尔比出现时脂质类型的顺序对应于脂质在表的首个四栏中出现的顺序。如果仅以摩尔比列出了3种脂质，则中性脂质不存在。
3其中“间苯二酚”代表5-十七基苯-1，3-二酚。
表10-HepG2肿瘤体内测定结果
1空白格表示中性脂质不存在
2其中当它们以摩尔比出现时脂质类型的顺序对应于脂质在表的首个四栏中出现的顺序。如果仅以摩尔比列出了3种脂质，则中性脂质不存在。
表11-786-0肾肿瘤测定结果
1空白格表示中性脂质不存在
2其中当它们以摩尔比出现时脂质类型的顺序对应于脂质在表的首个四栏中出现的顺序。如果仅以摩尔比列出了3种脂质，则中性脂质不存在。
在上述表中，N/P比等于以下：(最初配制的阳离子脂质的摩尔数)/(最初配制的siRNA的摩尔数＊阴离子电荷总数/siRNA)。
实施例76：脂质制剂的优化
使用阳离子脂质和隐形脂质(例如上面的表中所示的阳离子脂质和隐形脂质)进一步优化制剂被认为在本领域技术人员的知识范围内，无需过度实验即可进行。例如，可以针对至少一个参数对制剂进行优化，包括但不限于个别地选择例如针对所靶向的细胞或器官类型优化的阳离子脂质的pKa、所用的阳离子脂质、所用的隐形脂质、辅助脂质、所用的中性脂质，无论中性脂质存在还是不存在，所选择的辅助脂质、任选的中性脂质、隐形脂质和阳离子脂质的比例、N/P比、颗粒大小、剂量方案、给予的剂量、配制方法等。
在一个实施方案中，当选择更佳的中性脂质时，本领域技术人员更常选择DSPC，而非DOPC。在一些实施方案中，例如表9中的E0177和表10中的E0104，所有其它方面被认为等同，仅在这两种中性脂质的选择方面不同的组合物当使用DOPC时比使用DSPC时显示出更低的KD或者甚至零KD。在某些组合物中，完全不存在中性脂质(例如表9中E0085的至少一种制剂)与存在中性脂质的情况相比导致更高的PLK1抑制百分比，或者就E0011而言，其中逐步减少制剂中DSPC的量导致敲除百分比逐步增加。
单位为mg/kg的剂量和剂量方案(例如给予的剂量数和所述剂量的给予时间)也可以被优化。例如，在表9中所示的一个实施方案中，施用0.1mg/kg具有E0178的制剂导致零(0)％KD，但是施用1.0mg/kg提供了35％KD。如果受治疗者不耐受较大剂量，则可以将全部治疗方案作为历经数天提供的多个较小剂量施用，如表9中所示，其中在含有E0011和S004的制剂中递送1×10mg/kg siRNA和3×5mg/kg siRNA分别导致70％KD和67％KD。
实施例77：用于递送核酸复制子的脂质体
如下文所述以脂质体递送各种核酸复制子，其长度各自为约10,000个核苷酸。将核酸包囊在基本上用Jeffs等人(2005)PharmaceuticalResearch 22(3)：362-372和Maurer等人(2001)Biophysical Journal，80：2310-2326的方法制备的脂质体中。
参比脂质体由10％DSPC(两性离子，即中性脂质)、40％DlinDMA(阳离子脂质)、48％胆固醇(辅助脂质)和2％PEG-轭合的DMG(隐形脂质)制成。使用Heyes等人(2005)J Controlled Release 107：276-87的方法合成DlinDMA脂质(1，2-二亚油基氧基-N，N-二甲基-3-氨基丙烷)。DSPC(1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱)购自Genzyme。胆固醇获自Sigma-Aldrich。PEG-轭合的DMG(1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)，铵盐)、DOTAP(1，2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷，氯化物盐)和DC-chol(3β-[N-(N′，N′二甲基氨基乙烷)-氨甲酰基]胆固醇盐酸盐)可由Avanti Polar Lipids获得。
简言之，将脂质溶于乙醇(2ml)，将复制子溶于缓冲液(2ml，100mM柠檬酸钠，pH 6)，将它们与2ml缓冲液混合，然后平衡1小时。用6ml缓冲液稀释该混合物，然后过滤。得到的产品含有脂质体，其包囊效率～95％。
使用商购试剂盒测定被包囊的核酸的百分比和核酸浓度。用1XTE缓冲液(来自试剂盒)将脂质体稀释10x或100x，然后添加染料。分开地用含有0.5％Triton X的1X TE缓冲液将脂质体稀释10x或100x，然后添加染料(以破坏脂质体，由此测定总核酸)。此后，向每种溶液中加入等量的染料，然后在染料添加后将约180μL每种溶液一式两份地荷载入96孔培养板。用微量培养板读出器读取荧光(激发波长485nm，发射波长528nm)。
为了评价核酸的体内表达，在复制子中编码报道酶(SEAP；分泌的碱性磷酸酶)。使用化学发光碱性磷酸酯底物测定在1X Phospha-Light稀释缓冲液中系列稀释1∶4的表达水平。在第0天给8-10周龄的BALB/c小鼠(5只/组)肌内注射0.1μg或1μg核酸剂量，50μl/腿。另外，无脂质体的相同载体(在PBS中)也以1μg施用。
在1μg剂量下包囊使SEAP水平增加约1/2 log，在第6天，0.1μg包囊的剂量的表达与用1μg未包囊的剂量所观察到的水平相当。因此，相对于裸核酸对照，甚至在10x较低剂量下，当核酸被配制在脂质体中时，表达增加。
另外的SEAP实验显示清楚的体内剂量响应，其中在递送低至1ng核酸后即观察到表达。比较来自包囊的复制子和裸复制子的表达的实验显示0.01μg包囊的核酸与1μg裸核酸等效。在0.5μg剂量核酸下，包囊的材料可在第6天产生高12-倍的表达；在0.1μg剂量水平下，在第6天可产生高24-倍的表达。
作为使用参比脂质(DlinDMA)的替代选择，使用本发明的阳离子脂质。使用DlinDMA(参见上文)作为阳离子脂质形成参比脂质体。如下文所述和如表中所示用一系列不同的阳离子脂质代替DlinDMA。使用2％PEG2000-DMG以及(01)40％阳离子脂质、10％DSPC和48％胆固醇或(02)60％阳离子脂质和38％胆固醇形成两种不同类型的各自的脂质体。因此，(01)和(02)的比较显示了中性两性离子脂质的作用。
用上文所述的SEAP报道分子测试了这些脂质体。下面的表12显示了脂质体的大小(Z平均值和多分散性指数)、各脂质体中的核酸包囊％以及注射后第1天和第6天检测的SEAP活性。将SEAP活性是相对于由DlinDMA、胆固醇和PEG-DMG制成的“DlinDMA(02)”脂质体的。
表12.核酸复制子的脂质体递送
  E no.   Zav(pdl)   ％包囊  SEAP第1天   SEAP第6天
  DlinDMA(01)   154.6(0.131)   95.5  80.9   71.1
  DlinDMA(02)   162.0(0.134)   85.3  100   100
  对比(01)   133.9(0.185)   96.5  57   45.7
  对比(02)   134.6(0.082)   97.6  54.2   4.3
  E0014(01)   158.3(0.212)   62.0  65.7   44.9
  E0014(02)   164.2(0.145)   86  62.2   39.7
  E0024(01)   131.0(0.145)   74.0  91   154.8
  E0024(02)   134.6(0.117)   81.5  90.4   142.6
  E0026(01)   164.0(0.162)   76.0  76.9   329.8
  E0026(02)   177.8(0.117)   72.8  67.1   227.9
  E0084(01)   116.0(0.180)   79.8  25.5   12.4
  E0084(02)   136.3(0.164)   74.9  24.8   23.1
  E0065(01)   140.6(0.184)   77  26.5   163.3
  E0065(02)   138.6(0.122)   87  29.7   74.8
  E0078(01)   176.7(0.185)   50  76.5   187
  E0078(02)   199.5(0.191)   46.3  82.4   329.8
  E0069(01)   165.3(0.169)   72.2  65.1   453.9
  E0069(02)   179.5(0.157)   65   68.5   658.2
  E0108(01)   129.7(0.184)   78.4   113.4   47.8
  E0108(02)   147.6(0.131)   80.9   78.2   10.4
  E0115(01)   129.2(0.186)   71   113.6   242.2
  E0115(02)   139(0198)   75.2   71.8   187.2
  E0099(01)   135.7(0.161)   78.8   65   10
  E0099(02)   158.3(0.287)   69.4   78.8   8.2
本发明的另外的方面
本发明包括用于递送生物活性剂的包含至少一种阳离子脂质、至少一种辅助脂质和至少一种隐形脂质的组合物，其中所述生物活性剂递送至选自以下的组织或细胞：
(a)肝或肝细胞，其中组合物含有具有约6.2或更高的pKa的阳离子脂质；和(b)肿瘤或肿瘤细胞，其中组合物含有具有约6.2或更低的pKa的阳离子脂质。
本发明包括用于递送生物活性剂的包含至少一种阳离子脂质、至少一种辅助脂质和至少一种隐形脂质的组合物，其中所述生物活性剂递送至选自以下的组织或细胞：
(a)肝或肝细胞，其中组合物包含具有约5.1-约7.4的pKa的阳离子脂质；和(b)肿瘤或肿瘤细胞，其中组合物包含具有约5.0-约6.7的pKa的阳离子脂质。
本发明包括第[00706]或[00707]段的组合物，其中所述组合物还包含任选的中性脂质。
本发明包括第[00706]、[00707]或[00708]段中任一段的组合物，其中所述生物活性剂以有效治疗疾病或障碍的量存在。
本发明包括第[00709]段的组合物，其中所述生物活性剂递送至肝或肝细胞且阳离子脂质1具有至少约5.1-约7.4的pKa。
本发明包括第[00709]段的组合物，其中所述生物活性剂递送至肿瘤或肿瘤细胞且段落1的化合物具有约5.0-约6.7的pKa。
本发明包括第[00711]段的组合物，其中阳离子脂质具有约5.2-约6.3的pKa。
本发明包括第[00711]段的组合物，其中阳离子脂质具有约5.4-约6.2的pKa。
本发明包括第[00711]段的组合物，其中阳离子脂质具有约5.8-约6.1的pKa。
本发明包括第[00711]段-第[00714]段中任意一段或多段的组合物，其中通过选择隐形脂质、配制方法、N/P比、颗粒大小和阳离子脂质、任选的中性脂质、辅助脂质、隐形脂质和任选的基于烷基间苯二酚的脂质的摩尔比中的至少一种优化所述组合物。
本发明包括第[00709]段的组合物，其中所述生物活性剂递送至肝或肝细胞，所述组合物包含含有具有约5.1-约7.4的pKa的至少一种阳离子脂质的制剂。
本发明包括第[00716]段的组合物，其中阳离子脂质具有约5.3-约7.3的pKa。
本发明包括第[00716]段的组合物，其中阳离子脂质具有约5.9-约7.0的pKa。
本发明包括第[00716]段的组合物，其中阳离子脂质具有约6.2-约6.8的pKa。
本发明包括第[00716]段-第[00719]段中任意一段或多段的组合物，其中通过选择隐形脂质、配制方法、N/P比、颗粒大小和阳离子脂质、任选的中性脂质、辅助脂质、隐形脂质和任选的基于烷基间苯二酚的脂质的摩尔比中的至少一种优化所述组合物。
本发明包括第[00715]段的组合物，其中用于递送至Hep3B-样肿瘤的阳离子脂质的pKa为约5.4-约5.9。
本发明包括第[00715]段的组合物，其中用于递送至HepG2-样和786-0-样肿瘤的阳离子脂质的pKa为约约5.6-约6.1。
本发明包括治疗疾病或病症的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的第[00706]-[00722]段中任意一段的组合物的步骤。
本发明包括第[00723]段的方法，其中所述疾病或病症是肿瘤、肝病或对用RNAi构建体治疗有响应的疾病。
本发明包括第[00723]段的方法，其中所述疾病或病症是肿瘤且组合物中的阳离子脂质具有约5.0-约6.7的pKa。
本发明包括第[00723]段的方法，其中所述疾病或病症在肝中且组合物中的阳离子脂质具有约5.1-约7.4的pKa。
本发明包含式(I)的化合物：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
b不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
c不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L不存在或者是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明包括第[00727]段的化合物，其中a选自任选被取代的C1-2亚烷基和任选被取代的C1亚烷基。
本发明包括第[00727]或[00728]段的化合物，其中b选自任选被取代的C0-2亚烷基和任选被取代的C1亚烷基。
本发明包括第[00727]-[00729]段中任意一段的化合物，其中c不存在或者是任选被取代的C1亚烷基。
本发明包括第[00727]-[00730]段中任意一段的化合物，其中a、b和c是未被取代的。
本发明包括第[00727]-[00731]段中任意一段的化合物，其中R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基或C3-20-杂环炔基。
本发明包括第[00727]-[00732]段中任意一段的化合物，其中R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成选自环状的任选被取代的C5-16基团和环状的任选被取代的C5-12基团。
本发明包括第[00733]段的化合物，其中R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成环状的任选被取代的C5基团、C6基团或C7基团。
本发明包括第[00727]-[00734]段中任意一段的化合物，其中R1和R2与它们所连接的氮原子一起选自头部基团H1-H52中的至少一个。
本发明包括第[00727]-[00735]段中任意一段的化合物，其中X1是O。
本发明包括第[00727]-[00736]段中任意一段的化合物，其中X2是O。
本发明包括第[00727]-[00737]段中任意一段的化合物，其中L包含至少一个杂原子。
本发明包括第[00738]段的化合物，其中L包含至少一个O原子。
本发明包括第[00727]-[00739]段中任意一段的化合物，其中Lc选自式Lc-i-Lc-xxxxiii之一：
本发明包括第[00727]-[00740]中任意一段的化合物，其中d是0；e是0，且f是1。
本发明包括第[00727]-[00741]中任意一段的化合物，其中Y1是C12-28基团。
本发明包括第[00727]-[00742]段中任意一段的化合物，其中Y1具有至少一个烯基团。
本发明包括第[00743]段的化合物，其中Y1具有至少一个顺式不饱和烯基团。
本发明包括第[00727]-[00741]段中任意一段的化合物，其中Y1选自Y1-i-Y1-vii。
本发明包括第[00727]-[00745]段中任意一段的化合物，其中Y2通过任选被取代的类固醇上的氧原子与L连接。
本发明包括第[00746]段的化合物，其中Y2是固醇，其中类固醇环A的3-位上的羟基的氢原子已经被除去。
本发明包括第[00746]段的化合物，其中所述固醇选自：annasterol；燕麦甾醇；β-谷甾醇；菜子甾醇；麦角骨化醇；菜油甾醇；chalinosterol；chinasterol；胆甾烷醇；胆固醇；粪甾醇；环阿吞醇；脱氢胆固醇；链甾醇；二氢麦角骨化醇；二氢胆固醇；二氢麦角甾醇；黑海甾醇；表胆甾醇；麦角甾醇；岩藻甾醇；六氢光甾醇；hexaol；羟基胆固醇；羊毛甾醇；光甾醇；帕克醇；多孔甾醇；海藻甾醇；谷甾烷醇；谷甾醇；豆甾烷醇；豆甾醇；weinbersterol；酵母甾醇；固醇胆汁酸(包括选自胆酸；鹅胆酸；甘氨胆酸；牛磺胆酸；脱氧胆酸和石胆酸中的一个或多个)；和/或
其盐或药学上可接受的衍生物。
本发明包括第[00748]段的化合物，其中所述固醇是胆固醇。
本发明包括第[00727]段的化合物，包括式(II)：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
b不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
c不存在或者是任选被取代的C1-4亚烷基；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；
条件是L包含一个或多个杂原子，且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明包括第[00727]段的化合物，包括式(III)：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L 是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明包括第[00727]段的化合物，包括式(IV)：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L 是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；
条件是L包含一个或多个杂原子，和
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明包括第[00727]段的化合物，包括式(V)：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O；
X2是O；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L 是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；
条件是L包含一个或多个杂原子，且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明包括第[00727]段的化合物，包括式(VI)：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O；
X2是O；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L是-Lc-，其中
Lc是任选被取代的C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明包括第[00727]段的化合物，包括式(VII)：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O；
X2是O；
Y1是任选被取代的C16-22烯基；
L是-Lc-，其中
Lc是任选被取代的C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；且
Y2是任选被取代的类固醇。
本发明包括第[00727]段的化合物，包括式(VIII)：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O；
X2是O；
Y1是任选被取代的C16-22烯基；
L是-Lc-，其中
Lc是任选被取代的C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；且
Y2是通过胆固醇环A的3-位上的羟基连接的胆固醇，所述羟基的氢原子不存在。
本发明包括第[00727]段的化合物，包括式(IX)：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L 是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；
条件是L包含一个或多个杂原子，且
Y2是任选被取代的类固醇；且
其中化合物的pKa为约5.1-约7.4。
本发明包括第[00727]段的化合物，包括式(X)：
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中：
R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的C3-20-杂环烷基、C3-20-杂环烯基、C3-20-杂环炔基或C5-20-杂芳基；
a是亚甲基；
b是亚甲基；
c不存在；
X1是O或S；
X2是O或S；
Y1是任选被取代的C10-30烯基、C10-30炔基、C10-30杂烯基或C10-30杂炔基；
L是-(La)d-(Lb)e-(Lc)f-，其中
La是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
Lb是任选被取代的C6-14亚芳基或C5-13亚杂芳基；
Lc是任选被取代的C1-15亚烷基、C1-15亚烯基、C1-15亚炔基、C1-15亚杂烷基、C1-15亚杂烯基或C1-15亚杂炔基；
d是0或1；
e是0或1；且
f是0或1；
条件是L包含一个或多个杂原子，且
Y2是任选被取代的类固醇；且
其中化合物的pKa为约5.0-约6.7。
本发明包括第[00727]-[00758]段的式I-X中任意一个的化合物，其中所述化合物选自E0001-E0171和E0175-E0180中的任意一个或多个。
本发明包括式(XI)的隐形脂质
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中
Z是亲水性头部基团组分，其选自PEG和基于聚(唑啉)、聚(环氧乙烷)、聚(乙烯醇)、聚(甘油)、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚[N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺]和聚(氨基酸)的聚合物，其中所述聚合物可以是直链的或支链的，且其中所述聚合物可以任选被取代；
其中Z以n个亚单元聚合；
n是10-200个单元的Z的数均聚合度，其中针对不同的聚合物类型n被优化；
L1是任选被取代的C1-10亚烷基或C1-10亚杂烷基连接基团，包括0个、1个、2个或更多个醚(例如-O-)、酯(例如-C(O)O-)、琥珀酸酯(例如-O(O)C-CH2-CH2-C(O)O-))、氨基甲酸酯(例如-OC(O)-NR’-)、碳酸酯(例如-OC(O)O-)、酮(例如-C-C(O)-C-)；羰基(例如-C(O)-)；脲(例如-NRC(O)NR’-)、胺(例如-NR’-)、酰胺(例如-C(O)NR’-)、亚胺(例如-C(NR’)-)、硫醚(例如-S-)、黄原酸酯(例如-OC(S)S-)和磷酸二酯(例如-OP(O)2O-)；它们中的任意一个可以被0个、1个或更多个Z基团取代；
其中R’独立地选自-H、-NH-、-O-、-S-、磷酸酯基或任选被取代的C1-10亚烷基；
X1和X2独立地选自：碳或选自-NH-、-O-、-S-或磷酸酯基的杂原子；
A1和A2独立地选自C6-30烷基、C6-30烯基和C6-30炔基，其中A1和A2可以相同或不同，
或者其中A1和A2与它们所连接的碳原子一起形成任选被取代的类固醇。
本发明包括第[00760]段的隐形脂质，包括式(XII)
或其盐或药学上可接受的衍生物，
其中
PEG是聚(乙二醇)亚单元，其中PEG可以是直链的或支链的；
n是10-200个单元、优选约23个单元、约45个单元或约68个单元的PEG的数均聚合度；
L1是任选被取代的C1-10亚杂烷基连接基团，其含有1个、2个或更多个醚、酯、琥珀酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、酮、羰基、脲、胺、酰胺、亚胺、硫醚、黄原酸酯和磷酸二酯；它们中的任意一个可以被0个、1个或更多个PEG基团取代；
X1和X2独立地选自碳或氧；
A1和A2独立地选自C6-30烷基、C6-30烯基和C6-30炔基，其中A1和A2可以相同或不同，
或者其中A1和A2与它们所连接的碳原子一起形成任选被取代的类固醇。
本发明包括第[00760]和[00761]段中任意一段的化合物，其中所述化合物选自S001-S009和S012-S026中的任意一个或多个。
本发明包括第[00727]-[00759]段中任意一段的化合物，其中所述化合物的pKa为约5.1-约7.4，其用在将生物活性剂递送至肝或肝细胞的制剂中。
本发明包括第[00727]-[00759]段中任意一段的化合物，其中所述化合物的pKa为约6.2或更高，其用在将生物活性剂递送至肝或肝细胞的制剂中。
本发明包括第[00764]段的化合物，其中所述化合物的pKa为约5.9-约7.0，其用在将生物活性剂递送至肝或肝细胞的制剂中。
本发明包括第[00727]-[00759]段中任意一段的化合物，其中所述化合物的pKa为约5.0-约6.7，其用在将生物活性剂递送至肿瘤或肿瘤细胞的制剂中。
本发明包括第[00727]-[00759]段中任意一段的化合物，其中所述化合物的pKa为约5.4-约6.2，其用在将生物活性剂递送至肿瘤或肿瘤细胞的制剂中。
本发明包括第[00727]-[00759]中任意一段的化合物，其中所述化合物的pKa为约6.2或更低，其用在将生物活性剂递送至肿瘤或肿瘤细胞的制剂中。
本发明包括第[00727]-[00768]段中任意一段的化合物，其用在递送生物活性剂以进行治疗的制剂中。
本发明包括组合物，其包含一种或多种第[00727]-[00769]段中任意一段的化合物，用在递送生物活性剂以进行治疗的制剂中。
本发明包括第[00770]段的组合物，除了第[00727]-[00769]段中任意一段的化合物之外，其还包含至少一种另外的脂质组分。
本发明包括第[00706]-[00722]段和第[00771]段中任意一段的组合物，其包含含有一种或多种脂质组分的脂质制剂，其中所述脂质组分选自阳离子脂质、任选的中性脂质、辅助脂质、隐形脂质和任选的基于烷基间苯二酚的脂质中的一种或多种。
本发明包括第[00772]段的组合物，其中所述的隐形脂质选自式XI或式XII的隐形脂质。
本发明包括第[00772]段的组合物，其中针对至少一个参数对制剂进行优化，包括但不限于个别地选择针对所靶向的细胞或器官类型优化的阳离子脂质的pKa、所用的阳离子脂质、所用的隐形脂质、辅助脂质、所用的中性脂质，无论中性脂质存在还是不存在，所选择的辅助脂质、任选的中性脂质、隐形脂质和阳离子脂质的比例、N/P比、颗粒大小、剂量方案、给予的剂量、配制方法等。
本发明包括第[00706]-[00722]段和第[00770]-[00774]段中任意一段的组合物，其还包含生物活性剂。
本发明包括第[00775]段的组合物，其中所述生物活性剂选自抗体、胆固醇、激素、抗病毒药、肽、多肽、蛋白质、核蛋白、化疗剂、低分子量药物、维生素、辅因子、核苷、核苷衍生物、核苷酸、寡核苷酸、酶性核酸、反义核酸、三链结构寡核苷酸、2，5-A反义嵌合体、等位酶、适配体、诱饵RNA分子及其类似物和小核酸分子，如RNA干扰物(RNAi)、短干扰核酸(siNA)、短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微小-RNA(miRNA)和短发夹RNA(shRNA)。
本发明包括第[00776]段的组合物，其中所述的生物活性剂是核苷或核苷衍生物。
本发明包括第[00777]段的组合物，其中所述的生物活性剂选自RNAi、siNA、RNAi抑制剂、miRNA、siRNA和shRNA。
本发明包括第[00772]段的组合物，其中所述的阳离子脂质选自E0007、E0008、E0011、E0014、E0015、E0016、E0017、E0018、E0019、E0022、E0024、E0025、E0026、E0032、E0034、E0040、E0042、E0043、E0045、E0048、E0049、E0051、E0052、E0053、E0054、E0055和E0118的阳离子脂质中的一个或多个。
本发明包括第[00772]段的组合物，其中所述的阳离子脂质选自E0008、E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077、E0085、E0088、E0095、E0104、E0178和E0179的阳离子脂质。
本发明包括第[00772]段的组合物，所述组合物包含至少一种选自E0008、E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077、E0085、E0088、E0095、E0104、E0178和E0179的阳离子脂质。
本发明包括第[00772]段的组合物，所述组合物包含至少一种选自E0011、E0025、E0026、E0075、E0076、E0077和E0088的阳离子脂质。
本发明包括第[00772]段的组合物，其中所述的隐形脂质选自S001、S002、S003、S004、S005、S006、S007、S008、S009、S010、S011、S012、S013、S014、S015、S016、S017、S018、S019、S020、S021、S022、S023、S024、S025和S026的隐形脂质。
本发明包括上文的化合物、制剂和/或组合物中的任意一种或多种，其还包含药学上可接受的载体。
本发明包括药盒，其包含上文的化合物、制剂和组合物中的任意一种或多种以及使用说明书。
本发明包括治疗需要其的受治疗者的疾病或病症的方法，所述方法包括施用治疗有效量的在制剂中的生物活性剂的步骤，所述制剂包含第[00706]-[00722]段和第[00770]-[00783]段中任意一段的一种或多种组合物。
本发明包括将生物活性剂递送至细胞或组织的方法，所述方法包括给细胞或组织施用第[00706]-[00722]段和第[00770]-[00783]段中任意一段的组合物。
本发明包括第[00787]段的方法，其中所述疾病或病症是肿瘤、肝病或对使用RNAi构建体的治疗有响应的疾病。
本发明包括第[00787]段的方法，其中所述疾病或病症是肿瘤且组合物中的阳离子脂质具有约5.0-约6.7的pKa。
本发明包括第[00787]段的方法，其中所述疾病或病症是肿瘤且组合物中的阳离子脂质具有约6.2或更低的pKa。
本发明包括第[00787]段的方法，其中所述疾病或病症是肿瘤且组合物中的阳离子脂质具有约5.0-约6.7的pKa。
本发明包括第[00787]段的方法，其中所述疾病或病症在肝中且组合物中的阳离子脂质具有约5.1-约7.4的pKa。
本发明包括第[00786]-[00792]段的方法，其中所述的生物活性剂选自抗体、胆固醇、激素、抗病毒药、肽、多肽、蛋白质、核蛋白、化疗剂、低分子量药物、维生素、辅因子、核苷、核苷衍生物、核苷酸、寡核苷酸、酶性核酸、反义核酸、三链结构寡核苷酸、2，5-A反义嵌合体、等位酶、适配体、诱饵RNA分子及其类似物和小核酸分子，如RNA干扰物(RNAi)、短干扰核酸(siNA)、短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微小-RNA(miRNA)和短发夹RNA(shRNA-)。
本发明包括第[00793]段的方法，其中所述的生物活性剂是核苷或核苷衍生物。
本发明包括第[00794]段的方法，其中所述的生物活性剂选自RNAi、siNA、RNAi抑制剂、miRNA、siRNA和shRNA。
除非另有定义，否则本文所用的技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的专业人员通常所理解的含义相同的含义。
除非另有说明，否则应认定未具体详述的所有其它方法、步骤、技术和操作可以以本领域技术人员已知的方式进行以及已经以本领域技术人员已知的方式进行。参照例如标准手册和一般背景技术以及其中所引用的另外的参考文献。
本发明的权利要求是非限制性的，并且在下面提供。
尽管本文已经详细公开了具体的实施方案和权利要求，但是其作为实例仅用于举例说明目的，不旨在限制所附权利要求的范围或任何相应的未来申请的权利要求的主题的范围。特别地，本申请的发明人考虑，可以在不脱离权利要求所定义的本发明的精神和范围的情况下进行各种替代、改变和修饰。所关注的起始材料、生物材料或脂质体组装方法的选择被认为对于具有本文所述的实施方案知识的本领域技术人员而言是常规的。其它方面、优点和修饰被认为在下面的权利要求的范围内。稍后提交的相应申请中的权利要求范围的改写可能是由于不同国家的专利法的限制所致，不应解释为放弃权利要求的主题内容。
序列表格
 SEQID NO ：   序列(5′至3′)   类型
 1   UUu AAU UGA AAC cAA GAc Auu   人工的
 2   uGu cuu GGu uuc AAu uAA Auu   人工的
 3   UAU UUA AgG AGG GUG AuC Uuu   人工的
 4   AGA Uca cCC Ucc uuA AAU auu   人工的

Claims (6)

1.隐形脂质或其盐，其中所述隐形脂质选自：
2.隐形脂质或其盐，其中所述隐形脂质是
3.权利要求1至2中任意一项所述的隐形脂质或其盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗疾病或病症。
4.权利要求3的用途，其中所述的疾病或病症是癌症或肝病。
5.权利要求1至2中任意一项所述的隐形脂质或其盐与生物活性剂的组合在制备药物中的用途，所述药物用于治疗疾病或病症。
6.权利要求5的用途，其中所述的疾病或病症是肿瘤或肝病。
CN201080064582.XA 2009-12-23 2010-12-21 脂质、脂质组合物和使用它们的方法 Active CN102905763B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28478709P 2009-12-23 2009-12-23
US61/284,787 2009-12-23
PCT/EP2010/070412 WO2011076807A2 (en) 2009-12-23 2010-12-21 Lipids, lipid compositions, and methods of using them

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102905763A CN102905763A (zh) 2013-01-30
CN102905763B true CN102905763B (zh) 2015-06-17

Family

ID=43857652

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201080064582.XA Active CN102905763B (zh) 2009-12-23 2010-12-21 脂质、脂质组合物和使用它们的方法

Country Status (14)

Country Link
US (2) US20110200582A1 (zh)
EP (2) EP3721943A1 (zh)
JP (4) JP2013515693A (zh)
KR (1) KR101762466B1 (zh)
CN (1) CN102905763B (zh)
AR (1) AR079745A1 (zh)
AU (1) AU2010334911A1 (zh)
BR (1) BR112012015755B1 (zh)
CA (2) CA2785492C (zh)
EA (1) EA026374B1 (zh)
MX (1) MX348474B (zh)
SG (2) SG10201407996PA (zh)
TW (1) TWI549699B (zh)
WO (1) WO2011076807A2 (zh)

Families Citing this family (188)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK3338765T3 (en) 2009-12-01 2019-03-04 Translate Bio Inc STEROID DERIVATIVE FOR THE SUPPLY OF MRNA IN HUMANGENETIC DISEASES
US20110200582A1 (en) * 2009-12-23 2011-08-18 Novartis Ag Lipids, lipid compositions, and methods of using them
DK3243526T3 (da) 2010-07-06 2020-02-17 Glaxosmithkline Biologicals Sa Levering af rna til at udløse flere immunsignalveje
ES2649896T3 (es) 2010-07-06 2018-01-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Emulsiones catiónicas de aceite en agua
CN103153284B (zh) 2010-07-06 2015-11-25 诺华股份有限公司 含有其pKa值有利于RNA递送的脂质的脂质体
WO2012006369A2 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Novartis Ag Immunisation of large mammals with low doses of rna
RS63817B1 (sr) 2010-07-06 2023-01-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Čestice za isporuku slične virionu za molekule samoreplicirajuće rnk
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
BR112013004879A2 (pt) 2010-08-31 2018-04-24 Novartis Ag lipossomas pequenos para entrega de rna que codifica imunogénio
EP2611420B1 (en) 2010-08-31 2019-03-27 GlaxoSmithKline Biologicals SA Lipids suitable for liposomal delivery of protein-coding rna
HUE058667T2 (hu) 2010-08-31 2022-09-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Pegilált liposzómák immunogént kódoló RNS szállítására
EP2625189B1 (en) 2010-10-01 2018-06-27 ModernaTX, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2627351B1 (en) 2010-10-11 2018-12-26 GlaxoSmithKline Biologicals SA Antigen delivery platforms
JP2014511687A (ja) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 工学操作された核酸の送達および製剤
ME03491B (me) 2011-06-08 2020-01-20 Translate Bio Inc Kompozicije lipidnih nanočestica i postupci za isporuku irnk
EP2729168A2 (en) 2011-07-06 2014-05-14 Novartis AG Immunogenic compositions and uses thereof
WO2013006837A1 (en) * 2011-07-06 2013-01-10 Novartis Ag Cationic oil-in-water emulsions
CA2840913C (en) 2011-07-06 2020-01-21 Novartis Ag Oil-in-water emulsions that contain nucleic acids
EP4115875A1 (en) 2011-07-06 2023-01-11 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Liposomes having useful n:p ratio for delivery of rna molecules
US11896636B2 (en) 2011-07-06 2024-02-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic combination compositions and uses thereof
CN103974719A (zh) 2011-08-31 2014-08-06 诺华股份有限公司 用于递送免疫原编码rna的聚乙二醇化脂质体
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2013049328A1 (en) * 2011-09-27 2013-04-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Di-aliphatic substituted pegylated lipids
HUE057725T2 (hu) 2011-10-03 2022-06-28 Modernatx Inc Módosított nukleozidok, nukleotidok és nukleinsavak és ezek felhasználása
EP2583680A3 (en) 2011-10-21 2013-06-12 Abbvie Inc. Mono (PSI-7977) or combination treatment of DAAs for use in treating HCV
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
CH707029B1 (de) 2011-10-21 2015-03-13 Abbvie Inc Verfahren zur Behandlung von HCV, umfassend mindestens zwei direkt wirkende antivirale Wirkstoffe, Ribavirin, aber nicht Interferon.
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
HUE21212055T1 (hu) 2011-12-07 2022-11-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc Biológiailag lebontható lipidek hatóanyagok bejuttatására
HRP20220717T1 (hr) 2011-12-16 2022-07-22 Modernatx, Inc. Modificirani pripravci mrna
DK2830595T3 (da) * 2012-03-29 2019-12-02 Translate Bio Inc Ioniserbare kationiske lipider
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
CA2868391A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Stephane Bancel Polynucleotides comprising n1-methyl-pseudouridine and methods for preparing the same
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
AU2013243947A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
CN109481455A (zh) 2012-05-02 2019-03-19 箭头研究公司 治疗kras相关疾病的有机组合物
US9663784B2 (en) * 2012-05-26 2017-05-30 Bonac Corporation Single-stranded nucleic acid molecule for regulating expression of gene having delivering function
US20150267192A1 (en) 2012-06-08 2015-09-24 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Nuclease resistant polynucleotides and uses thereof
WO2014028429A2 (en) 2012-08-14 2014-02-20 Moderna Therapeutics, Inc. Enzymes and polymerases for the synthesis of rna
ES2921623T3 (es) 2012-11-26 2022-08-30 Modernatx Inc ARN modificado terminalmente
US20140200261A1 (en) 2013-01-17 2014-07-17 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
CN105247051A (zh) 2013-02-28 2016-01-13 箭头研究公司 治疗epas1相关疾病的有机组合物
EP3608308B1 (en) 2013-03-08 2021-07-21 Novartis AG Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
WO2014159813A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
EP2971010B1 (en) 2013-03-14 2020-06-10 ModernaTX, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
LT2968586T (lt) 2013-03-14 2018-11-26 Translate Bio, Inc. Cft mrnr kompozicijos bei su jomis susiję būdai ir panaudojimai
EA201591229A1 (ru) 2013-03-14 2016-01-29 Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. Способы очистки матричной рнк
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
KR101514320B1 (ko) * 2013-06-14 2015-04-22 재단법인 의약바이오컨버젼스연구단 신규한 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2015034925A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
WO2015034928A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
RS62641B1 (sr) 2013-09-16 2021-12-31 Glycomine Inc Farmaceutski preparat ugljenih hidrata za terapeutsku upotrebu
EP3052106A4 (en) 2013-09-30 2017-07-19 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
WO2015051366A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Novartis Ag Novel formats for organic compounds for use in rna interference
US10519446B2 (en) 2013-10-04 2019-12-31 Novartis Ag Organic compounds to treat hepatitis B virus
WO2015051135A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Novartis Ag Organic compositions to treat hepcidin-related diseases
EP3052464B1 (en) 2013-10-04 2020-04-15 Novartis AG 3'end caps for rna-interferring agents for use in rna interference
JP6506749B2 (ja) 2013-10-22 2019-04-24 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド フェニルケトン尿症のためのｍＲＮＡ療法
CN112618732A (zh) 2013-10-22 2021-04-09 夏尔人类遗传性治疗公司 用于递送信使rna的脂质制剂
ES2707966T3 (es) 2013-10-22 2019-04-08 Translate Bio Inc Terapia de ARNm para la deficiencia en síntesis de argininosuccinato
US10426737B2 (en) 2013-12-19 2019-10-01 Novartis Ag Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
EP3623361B1 (en) * 2013-12-19 2021-08-18 Novartis AG Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
JP2017500865A (ja) 2013-12-19 2017-01-12 ノバルティス アーゲー レプチンｍＲＮＡの組成物および製剤
WO2015099122A1 (ja) 2013-12-26 2015-07-02 学校法人東京医科大学 遺伝子発現制御のための人工ミミックｍｉＲＮＡおよびその用途
BR112016014986A2 (pt) 2013-12-27 2018-01-23 Bonac Corporation mirna tipo correspondência artificial, composição e método para suprimir expressão de um gene alvo, composição farmacêutica, método para tratar uma doença, e, ácido nucleico de fita única
EP3096741B1 (en) 2014-01-21 2020-09-02 Anjarium Biosciences AG Process for the production of hybridosomes
US10821175B2 (en) 2014-02-25 2020-11-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems
HRP20220070T1 (hr) 2014-04-23 2022-04-01 Modernatx, Inc. Cjepiva nukleinske kiseline
WO2015164773A1 (en) 2014-04-25 2015-10-29 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Methods for purification of messenger rna
EP2974739A1 (en) 2014-07-15 2016-01-20 Novartis AG RSVF trimerization domains
JP6557722B2 (ja) 2014-05-30 2019-08-07 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド 核酸の送達のための生分解性脂質
CN106795142B (zh) 2014-06-24 2022-11-04 川斯勒佰尔公司 用于递送核酸的立体化学富集组合物
PL3766916T3 (pl) 2014-06-25 2023-02-27 Acuitas Therapeutics Inc. Nowe lipidy i formulacje nanocząstek lipidowych do dostarczania kwasów nukleinowych
AU2015283954B2 (en) * 2014-07-02 2020-11-12 Translate Bio, Inc. Encapsulation of messenger RNA
EP3736334A1 (en) 2014-07-16 2020-11-11 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Rnai compositions to treat apoc3-related diseases
US20170204152A1 (en) 2014-07-16 2017-07-20 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
WO2016010840A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Novartis Ag Method of encapsulating a nucleic acid in a lipid nanoparticle host
US20170210788A1 (en) 2014-07-23 2017-07-27 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of intrabodies
US10125092B2 (en) 2014-09-05 2018-11-13 Novartis Ag Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
MX2017008587A (es) 2014-12-27 2017-10-20 Bonac Corp Mirna natural para controlar la expresion de gen y uso del mismo.
EP3061826A1 (en) 2015-02-27 2016-08-31 Novartis AG Flavivirus replicons
US11142769B2 (en) 2015-03-27 2021-10-12 Bonac Corporation Single-stranded nucleic acid molecule having delivery function and gene expression regulating ability
CN104922141B (zh) * 2015-05-28 2016-05-25 厦门成坤生物技术有限公司 一种用于治疗乙型病毒性肝炎的siRNA组合物
US9790490B2 (en) 2015-06-18 2017-10-17 The Broad Institute Inc. CRISPR enzymes and systems
IL283545B2 (en) 2015-06-29 2023-09-01 Acuitas Therapeutics Inc Lipids and nanoparticulate lipid formulations for delivery of nucleic acids
WO2017031232A1 (en) 2015-08-17 2017-02-23 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
ES2910425T3 (es) 2015-09-17 2022-05-12 Modernatx Inc Compuestos y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
EP3359670B2 (en) 2015-10-05 2024-02-14 ModernaTX, Inc. Methods for therapeutic administration of messenger ribonucleic acid drugs
JP2018532404A (ja) * 2015-10-14 2018-11-08 ライフ テクノロジーズ コーポレーション リボ核タンパク質トランスフェクション薬剤
HRP20230209T1 (hr) 2015-10-28 2023-04-14 Acuitas Therapeutics Inc. Novi lipidi i lipidne formulacije nanočestica za isporuku nukleinskih kiselina
SI3386484T1 (sl) 2015-12-10 2022-06-30 Modernatx, Inc. Sestave in metode za dovajanje terapevtskih sredstev
RS63051B1 (sr) 2015-12-22 2022-04-29 Modernatx Inc Jedinjenja i kompozicije za intracelularnu isporuku agenasa
SI3394093T1 (sl) 2015-12-23 2022-05-31 Modernatx, Inc. Metode uporabe liganda OX40, ki kodira polinukleotid
MX2018007987A (es) 2015-12-28 2019-01-10 Novartis Ag Composiciones y metodos para el tratamiento de hemoglobinopatias.
US20190241658A1 (en) 2016-01-10 2019-08-08 Modernatx, Inc. Therapeutic mRNAs encoding anti CTLA-4 antibodies
EP3402549A4 (en) 2016-01-11 2019-09-11 Verndari, Inc. MICRO-NEEDLE COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
EA201892448A1 (ru) 2016-04-28 2019-06-28 Эмори Юниверсити Алкинсодержащие нуклеотидные и нуклеозидные терапевтические композиции и связанные с ними способы применения
MA45290A (fr) * 2016-05-04 2019-03-13 Wave Life Sciences Ltd Procédés et compositions d'agents biologiquement actifs
KR20230074598A (ko) 2016-05-18 2023-05-30 모더나티엑스, 인크. 릴랙신을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드
EP3463445A1 (en) 2016-06-02 2019-04-10 GlaxoSmithKline Biologicals SA Zika viral antigen constructs
EP3493834A1 (en) 2016-08-07 2019-06-12 Novartis AG Mrna-mediated immunization methods
CN110114461A (zh) 2016-08-17 2019-08-09 博德研究所 新型crispr酶和***
CN110312799A (zh) 2016-08-17 2019-10-08 博德研究所 新型crispr酶和***
WO2018047148A1 (en) 2016-09-12 2018-03-15 Novartis Ag Compounds for the inhibition of mirna
WO2018060288A1 (en) 2016-09-29 2018-04-05 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Compositions and methods of treatment of persistent hpv infection
GB201616904D0 (en) 2016-10-05 2016-11-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccine
EP3939604A3 (en) 2016-10-21 2022-06-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Influenza hemagglutinin protein vaccines
US11583504B2 (en) 2016-11-08 2023-02-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
EP4043031A3 (en) 2016-11-17 2022-11-23 GlaxoSmithKline Biologicals SA Zika viral antigen constructs
TW201839136A (zh) 2017-02-06 2018-11-01 瑞士商諾華公司 治療血色素異常症之組合物及方法
US11253605B2 (en) 2017-02-27 2022-02-22 Translate Bio, Inc. Codon-optimized CFTR MRNA
AU2018234814B2 (en) 2017-03-15 2022-06-30 Modernatx, Inc. Crystal forms of amino lipids
WO2018170336A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
KR20190132405A (ko) 2017-03-15 2019-11-27 모더나티엑스, 인크. 치료제의 세포내 전달을 위한 화합물 및 조성물
CN116693411A (zh) 2017-04-28 2023-09-05 爱康泰生治疗公司 用于递送核酸的新型羰基脂质和脂质纳米颗粒制剂
US11173190B2 (en) 2017-05-16 2021-11-16 Translate Bio, Inc. Treatment of cystic fibrosis by delivery of codon-optimized mRNA encoding CFTR
EP3638215A4 (en) 2017-06-15 2021-03-24 Modernatx, Inc. RNA FORMULATIONS
CN111315362A (zh) 2017-06-15 2020-06-19 传染病研究所 纳米结构脂质载剂和稳定乳剂以及其用途
AU2018326799A1 (en) 2017-08-31 2020-02-27 Modernatx, Inc. Methods of making lipid nanoparticles
CA3073851A1 (en) * 2017-08-31 2019-03-07 Life Technologies Corporation Cationic lipid compositions for tissue-specific delivery
US10597657B2 (en) 2017-09-11 2020-03-24 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. RNAi agents and compositions for inhibiting expression of apolipoprotein C-III (APOC3)
WO2019060746A1 (en) 2017-09-21 2019-03-28 The Broad Institute, Inc. SYSTEMS, METHODS, AND COMPOSITIONS FOR THE TARGETED EDITING OF NUCLEIC ACIDS
EP3461497A1 (en) 2017-09-27 2019-04-03 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Viral antigens
JP7284179B2 (ja) 2017-09-29 2023-05-30 インテリア セラピューティクス，インコーポレーテッド 製剤
US11413243B2 (en) 2017-11-06 2022-08-16 Nitto Denko Corporation Fusogenic compounds for delivery of biologically active molecules
WO2019094702A1 (en) 2017-11-10 2019-05-16 Cocoon Biotech Inc. Ocular applications of silk-based products
US20210363260A1 (en) 2017-11-13 2021-11-25 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for treating cancer by targeting the clec2d-klrb1 pathway
CA3088546A1 (en) 2018-01-29 2019-08-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Stabilized rsv f proteins and uses thereof
AU2019318079A1 (en) 2018-08-07 2021-01-28 Massachusetts Institute Of Technology Novel Cas12b enzymes and systems
WO2020035609A2 (en) 2018-08-17 2020-02-20 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic compositions and uses thereof
WO2020041793A1 (en) 2018-08-24 2020-02-27 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger rna
CA3114032A1 (en) 2018-10-02 2020-04-09 Intellia Therapeutics, Inc. Ionizable amine lipids
KR20210108969A (ko) 2018-12-05 2021-09-03 인텔리아 테라퓨틱스, 인크. 변형된 아민 지질
AU2020205717A1 (en) 2019-01-11 2021-08-12 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for lipid nanoparticle delivery of active agents
US20220177863A1 (en) 2019-03-18 2022-06-09 The Broad Institute, Inc. Type vii crispr proteins and systems
BR112021021313A2 (pt) 2019-04-25 2022-01-18 Intellia Therapeutics Inc Lipídios de amina ionizáveis e nanopartículas de lipídio
CA3146900A1 (en) 2019-07-21 2021-01-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Therapeutic viral vaccine
CA3154618A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 Modernatx, Inc. Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
JP2022548320A (ja) 2019-09-23 2022-11-17 オメガ セラピューティクス， インコーポレイテッド アポリポタンパク質ｂ（ａｐｏｂ）遺伝子発現をモジュレートするための組成物および方法
AU2020352552A1 (en) 2019-09-23 2022-03-17 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating hepatocyte nuclear factor 4-alpha (HNF4α) gene expression
EP4077676A1 (en) 2019-12-18 2022-10-26 Novartis AG Compositions and methods for the treatment of hemoglobinopathies
US11576966B2 (en) 2020-02-04 2023-02-14 CureVac SE Coronavirus vaccine
AR121292A1 (es) 2020-02-14 2022-05-04 Merck Sharp & Dohme Vacuna contra hpv
EP4118207A1 (en) 2020-03-11 2023-01-18 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating forkhead box p3 (foxp3) gene expression
EP4135761A1 (en) 2020-04-16 2023-02-22 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Sars cov-2 spike protein construct
CN113683769B (zh) * 2020-05-19 2022-11-11 上海交通大学 一种细胞内吞释放响应的化合物及其应用
CN115885042A (zh) 2020-05-22 2023-03-31 波涛生命科学有限公司 双链寡核苷酸组合物及其相关方法
US20230234992A1 (en) 2020-06-05 2023-07-27 Glaxosmithkline Biologicals Sa Modified betacoronavirus spike proteins
EP4171629A1 (en) 2020-06-29 2023-05-03 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Adjuvants
US11976019B2 (en) 2020-07-16 2024-05-07 Acuitas Therapeutics, Inc. Cationic lipids for use in lipid nanoparticles
CA3173951A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Emily VOIGT Genetically-adjuvanted rna vaccines
WO2022051023A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Infectious Disease Research Institute Live-attenuated rna hybrid vaccine technology
CA3174411A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Ryan M. Kramer Co-lyophilized rna and nanostructured lipid carrier
KR20230164648A (ko) 2020-12-22 2023-12-04 큐어백 에스이 SARS-CoV-2 변이체에 대한 RNA 백신
EP4267593A2 (en) 2020-12-23 2023-11-01 GlaxoSmithKline Biologicals SA Self-amplifying messenger rna
EP4032546A1 (en) 2021-01-20 2022-07-27 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Therapeutic viral vaccine
TW202245835A (zh) 2021-02-04 2022-12-01 美商默沙東有限責任公司 用於肺炎球菌結合物疫苗之奈米乳化液佐劑組合物
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
EP4312999A1 (en) 2021-03-26 2024-02-07 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Immunogenic compositions
TW202309034A (zh) 2021-04-17 2023-03-01 美商英特利亞醫療公司 Dna依賴性蛋白質激酶抑制劑以及其組合物及用途
AU2022258732A1 (en) 2021-04-17 2023-11-30 Intellia Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
CR20230536A (es) 2021-04-17 2024-03-08 Intellia Therapeutics Inc Composiciones de nanopartículas lipídicas
EP4346894A1 (en) 2021-05-24 2024-04-10 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Adjuvants
WO2022259191A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Release assay for determining potency of self-amplifying rna drug product and methods for using
WO2022269518A2 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Novartis Ag Compositions and methods for the treatment of hemoglobinopathies
WO2023283359A2 (en) 2021-07-07 2023-01-12 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating secreted frizzled receptor protein 1 (sfrp1) gene expression
CN115703714A (zh) * 2021-08-13 2023-02-17 广州谷森制药有限公司 新型阳离子脂质化合物
WO2023020994A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novel methods
WO2023020993A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novel methods
WO2023020992A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novel methods
WO2023021421A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Low-dose lyophilized rna vaccines and methods for preparing and using the same
WO2023021427A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Freeze-drying of lipid nanoparticles (lnps) encapsulating rna and formulations thereof
CN118019547A (zh) 2021-08-19 2024-05-10 默沙东有限责任公司 热稳定脂质纳米粒子及其使用方法
CN115710193A (zh) * 2021-08-23 2023-02-24 广州谷森制药有限公司 新型阳离子脂质化合物
WO2023031855A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Glaxosmithkline Biologicals Sa Substitution of nucleotide bases in self-amplifying messenger ribonucleic acids
CN115745942A (zh) * 2021-09-03 2023-03-07 广州谷森制药有限公司 新型阳离子脂质化合物
WO2023161350A1 (en) 2022-02-24 2023-08-31 Io Biotech Aps Nucleotide delivery of cancer therapy
US11951177B2 (en) 2022-03-23 2024-04-09 Nanovation Therapeutics Inc. High sterol-containing lipid nanoparticles
CN114605791A (zh) * 2022-03-28 2022-06-10 济南际通智能制造有限公司 一种扎带及其制备方法
CN115626983A (zh) * 2022-04-27 2023-01-20 北京清科胜因生物科技有限公司 一种聚(2-噁唑啉)脂质及脂质纳米颗粒
WO2023228116A1 (en) 2022-05-24 2023-11-30 Access To Advanced Health Institute Intranasal administration of thermostable rna vaccines
CN114805460B (zh) * 2022-05-31 2023-10-24 温州大学 一种dna-胆固醇功能化树状分子杂化体及合成方法与应用
WO2023242817A2 (en) 2022-06-18 2023-12-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Recombinant rna molecules comprising untranslated regions or segments encoding spike protein from the omicron strain of severe acute respiratory coronavirus-2
WO2024052882A1 (en) 2022-09-09 2024-03-14 Access To Advanced Health Institute Immunogenic vaccine composition incorporating a saponin
WO2024064910A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 Chroma Medicine, Inc. Compositions and methods for epigenetic regulation of hbv gene expression
WO2024068545A1 (en) 2022-09-26 2024-04-04 Glaxosmithkline Biologicals Sa Influenza virus vaccines

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1968714A (zh) * 2004-05-05 2007-05-23 阿图根股份公司 脂质、脂质复合物及其应用

Family Cites Families (63)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5345374B2 (zh) * 1974-12-28 1978-12-06
US4166132A (en) 1977-08-18 1979-08-28 Pfizer Inc. Antiviral amine derivatives of glycerol and propanediols
US4173641A (en) * 1978-05-15 1979-11-06 Pfizer Inc. Di-O-n-alkyl glycerol derivatives as immune stimulants
JPH0662517B2 (ja) 1985-01-07 1994-08-17 シンテツクス（ユー・エス・エイ）インコーポレイテツド 置換アルキルートリ置換アンモニウム界面活性剤
EP0188311A3 (en) 1985-01-07 1988-07-20 Syntex (U.S.A.) Inc. Pharmaceutical formulation of nicardipine and 1,2-dioxy-omega-trialkylammonium compounds
CA1267087A (en) * 1985-02-14 1990-03-27 Nicolaas Visser Synthetic immunogen
US4987071A (en) 1986-12-03 1991-01-22 University Patents, Inc. RNA ribozyme polymerases, dephosphorylases, restriction endoribonucleases and methods
EP1195442A3 (en) * 1992-12-04 2002-07-31 Innovir Laboratories, Inc. Ribozyme amplified diagnostics
AU679525B2 (en) 1992-12-04 1997-07-03 Innovir Laboratories, Inc. Regulatable nucleic acid therapeutic and methods of use thereof
US5871914A (en) 1993-06-03 1999-02-16 Intelligene Ltd. Method for detecting a nucleic acid involving the production of a triggering RNA and transcription amplification
JPH09504517A (ja) 1993-09-27 1997-05-06 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション カンプトテシン処方物
US6166197A (en) * 1995-03-06 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds having pyrimidine nucleotide (S) with 2'and 5 substitutions
WO1997048712A1 (fr) 1996-06-17 1997-12-24 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Derives asialotrisaccharide moranoline et medicaments
US5849902A (en) 1996-09-26 1998-12-15 Oligos Etc. Inc. Three component chimeric antisense oligonucleotides
US5989912A (en) 1996-11-21 1999-11-23 Oligos Etc. Inc. Three component chimeric antisense oligonucleotides
US5837282A (en) 1996-10-30 1998-11-17 University Of British Columbia Ionophore-mediated liposome loading
AU724627B2 (en) 1996-12-19 2000-09-28 Yale University Bioreactive allosteric polynucleotides
JPH10251152A (ja) 1997-03-14 1998-09-22 Nippon Shinyaku Co Ltd 虚血再灌流障害治療剤
TW589189B (en) 1997-08-04 2004-06-01 Scras Kit containing at least one double-stranded RNA combined with at least one anti-viral agent for therapeutic use in the treatment of a viral disease, notably of viral hepatitis
EP1036169A1 (en) 1997-12-05 2000-09-20 Duke University Nucleic acid mediated rna tagging and rna revision
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
WO1999033791A1 (fr) 1997-12-26 1999-07-08 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Derives aliphatiques
GB9827152D0 (en) 1998-07-03 1999-02-03 Devgen Nv Characterisation of gene function using double stranded rna inhibition
IL126731A0 (en) 1998-10-23 1999-08-17 Intelligene Ltd A method of detection
WO2000026226A1 (en) 1998-11-03 2000-05-11 Yale University Multidomain polynucleotide molecular sensors
US6656498B1 (en) 1998-11-25 2003-12-02 Vanderbilt University Cationic liposomes for gene transfer
EP2314700A1 (en) 1999-01-28 2011-04-27 Medical College of Georgia Research Institute, Inc Composition and method for in vivo and in vitro attenuation of gene expression using double stranded RNA
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
JP2000281569A (ja) 1999-03-25 2000-10-10 Nippon Shinyaku Co Ltd 脊髄障害治療剤
AU1086501A (en) 1999-10-15 2001-04-30 Carnegie Institution Of Washington Rna interference pathway genes as tools for targeted genetic interference
GB9927444D0 (en) 1999-11-19 2000-01-19 Cancer Res Campaign Tech Inhibiting gene expression
CN1311189A (zh) * 2000-03-01 2001-09-05 沈阳药科大学 聚乙二醇单甲醚胆固醇琥珀酸酯衍生物的合成及其制剂
JP2002212477A (ja) * 2001-01-19 2002-07-31 Fuji Photo Film Co Ltd インクジェット用インク
US20080207542A1 (en) 2002-03-26 2008-08-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA inteference mediated inhibition of hepatitis C virus (HVC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20080214437A1 (en) * 2002-09-06 2008-09-04 Mohapatra Shyam S Methods and compositions for reducing activity of the atrial natriuretic peptide receptor and for treatment of diseases
MXPA06002216A (es) 2003-08-28 2006-04-27 Novartis Ag Interferencia de arn doble que tiene extremos romos y modificaciones 3'.
CN1882693B (zh) * 2003-09-15 2012-08-15 普洛体维生物治疗公司 聚乙二醇修饰的脂质化合物及其应用
US7811602B2 (en) 2004-05-17 2010-10-12 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Liposomal formulations comprising dihydrosphingomyelin and methods of use thereof
EP1766035B1 (en) 2004-06-07 2011-12-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid encapsulated interfering rna
US7807815B2 (en) * 2004-07-02 2010-10-05 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions comprising immunostimulatory siRNA molecules and DLinDMA or DLenDMA
WO2006007712A1 (en) 2004-07-19 2006-01-26 Protiva Biotherapeutics, Inc. Methods comprising polyethylene glycol-lipid conjugates for delivery of therapeutic agents
GB0418172D0 (en) 2004-08-13 2004-09-15 Ic Vec Ltd Vector
US7404969B2 (en) 2005-02-14 2008-07-29 Sirna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules
EP1922300A2 (en) * 2005-02-14 2008-05-21 Sirna Therapeutics Inc. Cationic lipids and formulated molecular compositions containing them
JP2009509566A (ja) * 2005-10-03 2009-03-12 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 低分子干渉核酸を用いた、ｒｎａ干渉によって媒介される、インフルエンザウイルス遺伝子発現の阻害
TW200800235A (en) 2005-10-18 2008-01-01 Otsuka Pharma Co Ltd Carrier composition for nucleic acid transport
JP2009520039A (ja) * 2005-12-19 2009-05-21 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）を用いた、ＲＮＡ干渉によって媒介される、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）遺伝子発現の阻害
GB0608838D0 (en) 2006-05-04 2006-06-14 Novartis Ag Organic compounds
CN102124107A (zh) * 2006-07-17 2011-07-13 瑟纳治疗公司 使用短干扰核酸(siNA)的RNA干扰介导的前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶Kexin9(PCSK9)基因表达的抑制
KR101129509B1 (ko) * 2006-10-03 2012-04-13 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 지질 함유 조성물
JP5347510B2 (ja) * 2007-02-05 2013-11-20 日本新薬株式会社 ポリエチレングリコール誘導体
WO2008103276A2 (en) * 2007-02-16 2008-08-28 Merck & Co., Inc. Compositions and methods for potentiated activity of biologicaly active molecules
CA2686735A1 (en) 2007-05-04 2008-11-13 Mdrna, Inc. Amino acid lipids and uses thereof
CN101903018B (zh) * 2007-10-17 2012-09-05 韩国科学技术院 用于递送核酸基因的ldl样阳离子纳米微粒、其制备方法以及使用其递送核酸基因的方法
CN101468203B (zh) * 2007-12-25 2012-06-27 沈阳药科大学 可断裂聚乙二醇脂质衍生物的制备方法以及应用
US9006191B2 (en) * 2007-12-27 2015-04-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Silencing of polo-like kinase expression using interfering RNA
US20110117125A1 (en) 2008-01-02 2011-05-19 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Compositions and methods for the delivery of nucleic acids
WO2009129387A2 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Abbott Laboratories Cationic lipids and uses thereof
WO2010009065A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Novartis Ag Amphipathic peptide compositions
JP5832898B2 (ja) 2008-11-10 2015-12-16 テクミラ ファーマシューティカルズ コーポレイションＴｅｋｍｉｒａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 治療薬を送達するための新規な脂質及び組成物
WO2010054384A1 (en) 2008-11-10 2010-05-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids and compositions for the delivery of therapeutics
EP3072881A1 (en) * 2009-08-20 2016-09-28 Sirna Therapeutics, Inc. Novel cationic lipids with various head groups for oligonucleotide delivery
US20110200582A1 (en) * 2009-12-23 2011-08-18 Novartis Ag Lipids, lipid compositions, and methods of using them

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1968714A (zh) * 2004-05-05 2007-05-23 阿图根股份公司 脂质、脂质复合物及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
JP2018016789A (ja) 2018-02-01
TWI549699B (zh) 2016-09-21
TW201132365A (en) 2011-10-01
BR112012015755A2 (pt) 2017-12-12
CA3009891C (en) 2020-09-15
US9301923B2 (en) 2016-04-05
SG10201407996PA (en) 2015-01-29
BR112012015755A8 (pt) 2018-04-10
CA2785492C (en) 2018-07-24
EP3721943A1 (en) 2020-10-14
CA2785492A1 (en) 2011-06-30
WO2011076807A3 (en) 2011-11-17
EP2516010A2 (en) 2012-10-31
JP2016041811A (ja) 2016-03-31
AU2010334911A1 (en) 2012-07-12
BR112012015755B1 (pt) 2021-06-22
US20140309277A1 (en) 2014-10-16
JP2013515693A (ja) 2013-05-09
AR079745A1 (es) 2012-02-15
JP6166321B2 (ja) 2017-07-19
MX348474B (es) 2017-06-14
MX2012007450A (es) 2012-07-17
JP6585659B2 (ja) 2019-10-02
US20110200582A1 (en) 2011-08-18
EA026374B1 (ru) 2017-04-28
WO2011076807A2 (en) 2011-06-30
KR20120101719A (ko) 2012-09-14
KR101762466B1 (ko) 2017-07-27
JP6940567B2 (ja) 2021-09-29
JP2020007562A (ja) 2020-01-16
EA201200939A1 (ru) 2013-02-28
SG181904A1 (en) 2012-07-30
CN102905763A (zh) 2013-01-30
CA3009891A1 (en) 2011-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102905763B (zh) 脂质、脂质组合物和使用它们的方法
JP7332478B2 (ja) 脂質ナノ粒子製剤
AU2010249881B2 (en) Compositions comprising cationic amphiphiles and colipids for delivering therapeutics molecules
JP2019508371A (ja) 薬剤の細胞内送達のための化合物および組成物
WO2010056403A1 (en) Branched cationic lipids for nucleic acids delivery system
WO2010057155A1 (en) Releasable cationic lipids for nucleic acids delivery systems
WO2010057160A9 (en) Releasable fusogenic lipids for nucleic acids delivery systems
JP6124078B2 (ja) 巨大環状脂肪族化合物及びその応用
US9820942B2 (en) Lipidosome preparation, preparation method and application thereof
AU2014259532B2 (en) Lipids, lipid compositions, and methods of using them
CN118105357A (zh) 一种鞘内递送制剂及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C53 Correction of patent for invention or patent application
CB02 Change of applicant information

Address after: Basel

Applicant after: Novartis Ag

Address before: Basel

Applicant before: Novartis AG

COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: NOVARTIS AG TO: NOVARTIS CO., LTD.

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant