CN102858342B

CN102858342B - 用于便秘的芳基乙烯基氮杂环烷烃化合物

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Publication number: CN102858342B
Application number: CN201180020078.4A
Authority: CN
Inventors: S·M·托勒; D·A·霍斯弗德; P·M·利皮埃罗; G·C·邓巴; W·S·考德威尔; P·哈梅丹尼; M·本彻利夫
Original assignee: Targacept Inc
Current assignee: Catalyst Biosciences Inc
Priority date: 2010-03-11
Filing date: 2011-03-04
Publication date: 2014-12-10
Anticipated expiration: 2031-03-04
Also published as: US20130237550A1; AR080387A1; AU2011224697A1; MX2012010491A; UY33266A; EP2544690A2; CA2792157A1; JP2013522201A; WO2011112428A2; TW201138778A; CN102858342A; WO2011112428A3; EP2544690A4

Abstract

本发明涉及通过施用5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐来治疗便秘和增加结肠能动性的方法。

Description

用于便秘的芳基乙烯基氮杂环烷烃化合物

技术领域

本发明涉及通过施用5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐来治疗便秘和增加结肠能动性（motility）的方法。

背景技术

便秘（constipation）也称作排便困难（costiveness）、大便困难和排粪运动异常，表示低频率的和/或难以通过的排便（bowelmovements）。便秘是排便疼痛的常见原因。严重的便秘包括顽固性便秘（不能通过大便或气体）和粪便嵌塞（肠梗阻）。便秘是常见的；在一般人群中，便秘的发生率为2-30%。

Rome III标准被广泛地用于诊断慢性便秘，且有助于将慢性功能性便秘病例与严重性更低的实例分开。并且，Bristol大便量表（BristolStool Scale）或Bristol大便图表（Bristol Stool Chart）是用于将人粪便形式分类为7类的医学辅助。有时称作“Meyers量表”，它在Bristol大学形成，并于1997年首次公开在Scandinavian Journal ofGastroenterology中。来自Bristol大便图表的1和2型指示便秘。参见：Lewis,S.,Heaton,K.(1997),Stool Form Scale as a Useful Guide toIntestinal Transit Time.Scand.J.Gastroenterol.32(9):920–4。

便秘的原因分成2类：排便梗阻和结肠缓慢运输（或低能动性）。约50%的在第三中心医院（tertiary referral hospital）评价便秘的患者具有排便梗阻。这类便秘具有机械性的和功能性的原因。结肠慢通过性便秘的原因包括：饮食、激素、药物副作用和重金属毒性。便秘的定义包括下述的：罕见的排便，通常每周3次或更少；排便困难，在超过25%的排便过程中使劲，或主观感觉硬粪；或不完全肠排空的感觉。

便秘的原因可以进一步分成先天性的、原发性的和继发性的。最常见的原因是原发性的，且不是危及生命的。原因包括：膳食纤维摄入不足、流体摄入不足、缺乏体育锻炼、药物副作用、甲状腺功能减退和结直肠癌造成的梗阻。原发性的或功能性的便秘被定义为：不是由于任何潜在原因（诸如药物副作用）或潜在医学病症，症状持续大于6个月。它与腹痛无关，因而将它与肠易激综合征区分开。它是便秘的最常见原因。便秘可以由低纤维饮食、低液体摄入或节食造成或加剧。许多药物以便秘作为副作用。一些实例包括：阿片样物质、利尿剂、抗抑郁药、抗组胺剂、镇痉剂、抗惊厥药和铝抗酸药。可能导致便秘的代谢和内分泌问题包括：高钙血症、甲状腺功能减退、糖尿病、囊性纤维化和乳糜泻。便秘也常见于具有肌营养不良症和营养不良性肌强直的个体中。最后，几篇报道注意到戒烟和便秘发作之间的关联。参见，例如，Lagrue等人,Stopping Smoking and Constipation,astranslated from the original French,Addiction,2003年11月,98(11):1563-7。

便秘具有许多结构的（机械的、形态学的、解剖学的）原因，包括：脊髓损害、帕金森病、结肠癌、***裂、直肠炎和骨盆底功能障碍。

便秘也具有功能的（神经学的）原因，包括：***痉挛、***下降综合征和赫希施普龙氏病。在婴儿中，赫希施普龙氏病是与便秘有关的最常见的医学障碍。***痉挛发生在少数具有慢性便秘或排便梗阻的人中。

慢性便秘在美国人群中的发生率是12%至20%。慢性便秘的一种定义是，每周排便3次或更少，在一年中持续3个月或更久。认为每年的有关医疗成本（基于估测的250万医师出诊和有限的治疗选择，它们主要限于非处方药品）超过70亿美元。

肠易激综合征（IBS）代表目前可得到的治疗选择未满足的医疗需求的治疗领域。过去的研究已经聚焦于靶向血清素和它在胃能动性和分泌物的调节中的作用。可利用的治疗选择的心血管方面的限制剂量的副作用已经减慢了进展。

IBS包含白天腹痛、胃气胀和不适以及改变的大便习惯，其特征在于显著的下述之一：便秘（IBS-C）；腹泻（IBS-D）；和二者交替（IBS-A或交替的IBS）。IBS在美国影响12%的成年人，且在女性中的发病率是男性的2倍。参见，Mertz,H.Irritable bowel syndrome.N.Engl.J.Med.349,2136-2146(2003)。当前的药物开发范例已经聚焦于改变结肠中的血清素的作用的药物。研究已经揭示，血清素（5-HT）涉入介导肠能动性、控制胃肠道中的肠分泌和调节肠的感觉。迄今为止，在该方案中的兴趣已经聚焦于5-HT₃和5-HT₄受体。不利的5-HT药理学问题（包括不利的心血管副作用）会减少对5-HT疗法的兴趣。

慢性特发性便秘（CIC）是对这样的个体给出的诊断：所述个体具有健康的肠，且遭受慢性便秘，但是其症状通过标准的治疗不能缓解。CIC与便秘突出的肠易激综合征（IBS-C）的差别在于，缺乏疼痛作为主要症状。

已经提议将多种位变异构烟碱（metanicotine）类似物用于治疗多种障碍，包括IBS。参见，例如，美国专利号7,098,331，和公开的PCTWO 2010/065443，它们的内容通过引用并入本文。这些化合物中的一些在给药后具有有害作用，例如，呕吐和恶心（作为在上胃肠道中的药物暴露的结果）。

有利的是，提供新疗法（特别是靶向烟碱受体的疗法）作为不同表现形式的便秘的5-HT方案的替代方案。本发明提供了这样的组合物和方法。

发明内容

本发明的一个方面包括，使用5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐的方法、用途和组合物。

本发明的一个方面包括，一种减轻便秘的方法，所述方法包括：施用(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。本发明的一个实施方案包括治疗便秘，其中便秘的根源（source）是：胃肠道，包括、但不限于肠易激综合征（包括IBS-A和IBS-C）、急性或慢性特发性便秘、结肠癌或无力性肠梗阻；内分泌学的，包括、但不限于妊娠或甲状腺功能减退；神经学的，包括、但不限于帕金森病、多发性硬化或抑郁；医源性的，包括、但不限于使用阿片剂、抗抑郁药、抗酸药或补铁剂的治疗；与进食障碍有关，诸如厌食或食欲亢进以及与应激、旅行和饮食变化有关的进食障碍；或与损伤有关，包括外科手术、脊髓损伤、自主功能障碍、截瘫、年老或长期患者护理。

本发明的另一个方面包括，一种治疗与胃肠道障碍有关的便秘的方法，所述方法包括：施用(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，所述胃肠道障碍是肠易激综合征、便秘突出的肠易激综合征、交替的肠易激综合征、慢性特发性便秘、急性便秘、药物诱发的便秘、结肠障碍、结肠癌或无力性肠梗阻。作为另一个实施方案，药物诱发的便秘优选地是：阿片样物质诱发的便秘、抗抑郁药诱发的便秘、抗酸药诱发的便秘或补铁剂诱发的便秘。

本发明的另一个方面包括，一种治疗由内分泌学根源引起的便秘的方法，所述方法包括：施用(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，所述内分泌学根源是妊娠或甲状腺功能减退。

本发明的另一个方面包括，一种治疗与神经学病症有关的便秘的方法，所述方法包括：施用(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，所述神经学病症是帕金森病、多发性硬化或抑郁。

本发明的另一个方面包括，一种治疗与进食障碍有关的便秘的方法，所述方法包括：施用(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个方面包括，一种治疗与外科手术、脊髓损伤、自主功能障碍、截瘫、年老或长期患者护理有关的便秘的方法，所述方法包括：施用(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。

作为本发明的另一个方面，使用本发明的方法、用途或组合物另外包括：施用一种或多种额外的治疗剂。

本发明的另一个方面包括，一种增加结肠能动性的方法，所述方法包括：施用(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个方面包括，一种使用(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐治疗有此需要的哺乳动物以减轻便秘的方法。这样的治疗包括人药用以及兽医学应用，包括、但不限于治疗兔、猫、狗、牛（cow）、马或其它动物。

本发明包括5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐的药用形式，包括肠溶形式（presentation）。本发明的一个方面包括，包含(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐的肠溶口服药用产品。在一个实施方案中，所述产品是片剂。在一个实施方案中，所述产品是胶囊剂或被包裹在环形体中的药芯。在一个实施方案中，所述产品包含在胃中基本上不可溶的肠溶包衣，所述肠溶包衣包裹含有活性成分的药芯。在一个实施方案中，所述产品含有所述(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐作为唯一活性成分。在一个实施方案中，所述产品包含：(a)药芯，其由(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐和一种或多种药用赋形剂组成-以单元或多颗粒形式；(b)任选的分离层；(c)肠溶层，其包含聚甲基丙烯酸酯和药学上可接受的赋形剂；和(d)任选的涂饰层（finishing layer）。在多颗粒形式的一个实施方案中，所述药芯包含惰性珠，(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐沉积在所述惰性珠上，作为包含所述一种或多种药用赋形剂的层。在一个实施方案中，所述产品含有约0.5-50毫克的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。

本发明的一个方面包括，一种口服药物剂型，其包含(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐，且被改造成延迟或抑制(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐在胃中的释放。在一个实施方案中，所述口服药物剂型是片剂、胶囊剂或被包裹在环形体中的药芯。在一个实施方案中，所述药物剂型是片剂。在一个实施方案中，所述药物剂型是胶囊剂。在一个实施方案中，所述药物剂型包括肠溶包衣。

本发明的一个方面包括，一种治疗肠易激综合征的方法，所述方法包括：施用(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐的肠溶包衣的药物剂型。在一个实施方案中，所述肠易激综合征是便秘突出的肠易激综合征。在一个实施方案中，所述(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐的药物剂型包含包囊化的多颗粒弹丸（pellet）。在一个实施方案中，所述施用是约0.5-50毫克的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，所述肠溶包衣包含聚甲基丙烯酸酯。在一个实施方案中，将所述(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐递送给下胃肠道。

本发明的一个方面包括，一种将(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐选择性地递送至下胃肠道的方法，所述方法包括：施用具有肠溶包衣的药物剂型。

在本文中更详细地描述了本发明的范围，且包括各方面和实施方案的所有组合。

附图说明

图1是在IBS-C受试者中观察到的SBM的条形图表示。该图的左部分表示每周的SBM的客观计数。该图的右部分表示在整个4周治疗期中化合物A与安慰剂相比的效力。

图2是几种治疗剂之间的SBM相对比较的条形图表示。将化合物A与现有的和提议的疗法（即替加色罗（以前在商标名称下销售，现在被撤回）、芦比前列酮（在商品名下销售）和利那洛肽（目前处于III期临床试验中））以及安慰剂（在每种情况下）进行对比。如图示的，在第4周时，化合物A在患有IBS-C的受试者中相对有利于SBM。

具体实施方式

本文提供了这样的制剂：所述制剂被工程设计成在小肠的中段至下段中开始药物释放，在给药后具有大于例如大约1小时、1.25小时、1.5小时、1.75小时或2小时的延迟释放时间。这样的药物制剂以特定方式生产，使得产品无变化地穿过患者的胃，并在它离开胃和进入小肠的中段和下段时溶解并释放出活性成分。这样的制剂可以是片剂或弹丸形式，其中活性成分是在片剂或弹丸的内部部分中，且被包裹在膜或外壳（即“肠溶包衣”）中，所述肠溶包衣在酸性环境（诸如胃）中是不溶性的，但是在接近中性的环境（诸如小肠）中是可溶性的。

本文使用的百分比、比率、比例等等所有表述都是按照重量单位，除非另有说明。肠溶产品的比例表述表示：在去除用于溶解或分散多种成分的水以后，处于干燥形式的产品。术语“糖”表示，除了还原糖以外的糖。还原糖是还原Fehling氏(或Benedict氏)或Tollens氏试剂的碳水化合物。所有单糖都是还原糖，除了蔗糖以外的大多数二糖也是还原糖。一种常见的粘合剂或填充剂是乳糖。该赋形剂特别适用于片剂，因为它可适当地压缩，它是稀释剂和粘合剂，且是廉价的。但是，它是还原糖，且它可以是在室温和在加速的稳定性条件(加热)下会与乳糖相互作用的活性成分。因此，在包含活性成分的制剂中避免乳糖和其它还原糖可能是重要的。如下面讨论的，蔗糖是一种具体的糖。

在一种具体的肠溶产品中，活性剂药芯被肠溶包衣包围，并形成弹丸。所述弹丸然后可以加载进明胶胶囊剂中。将在下面逐一讨论所述弹丸的各种组分和层，以及添加不同成分来构建弹丸的方法。

I.化合物

本文使用的术语“药学上可接受的”表示这样的本发明化合物的载体、稀释剂、赋形剂或盐形式：其与制剂的其它成分相容，且对药物组合物的受体无害。

本文使用的术语“药物组合物”表示，任选地与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂相混合的本发明化合物。药物组合物优选地表现出对环境条件的稳定性程度，从而使得它们适用于生产和商业化目的。

本文使用的术语“有效量”、“治疗量”或“有效剂量”表示这样的本发明化合物的量：其足以引起希望的药理学效果或治疗效果，从而导致障碍的有效预防或治疗。障碍的预防可以表现为：延迟或预防障碍的进展，以及与所述障碍有关的症状的发作。障碍的治疗可以表现为：症状的减少或消除，障碍进展的抑制或反转，以及对患者健康的任何其它促进。

有效剂量可以随下述因素而变化：诸如患者的状况、障碍的症状的严重性和药物组合物的施用方式。通常，如果要以有效剂量施用，需要以小于5mg/kg患者体重的量施用化合物。经常以小于约1mg/kg患者体重至小于约100μg/kg患者体重的量，偶尔以约10μg/kg至小于100μg/kg患者体重的量，施用所述化合物。前述有效剂量通常代表作为单次剂量施用的量，或作为在24小时时段内施用的1次或多次剂量。对于人患者，所述化合物的有效剂量可能需要以至少约1mg/24小时/患者、但是不超过约1000mg/24小时/患者、经常不超过约500mg/24小时/患者的量施用所述化合物。如下面将更详细地指出的，5mg(或<100μg/kg)的总剂量表现出效力。本发明的一种可能有效的剂量可能是在约10μg/kg至约100μg/kg之间。

本发明的化合物可以通过多种方法来制备，包括众所周知的标准合成方法。示例性的一般合成方法如下所述，然后在工作实施例中制备本发明的具体化合物。

在下述的所有实施例中，在必要的情况下，根据合成化学的一般原理，采用敏感基团或反应基团的保护基。根据标准的有机合成方法(T.W.Green和P.G.M.Wuts(1999)Protecting Groups in OrganicSynthesis,第3版，John Wiley & Sons)，操作保护基。使用本领域技术人员可容易地明白的方法，在化合物合成的方便阶段，去除这些基团。过程以及反应条件和它们的执行次序的选择，应当符合本发明化合物的制备。

本发明也提供了一种合成化合物的方法，所述化合物可用作制备本发明化合物的中间体，以及它们的制备方法。

根据下述的方法，使用可容易地得到的原料和试剂，可以制备所述化合物。在这些反应中，可以采用变体，所述变体本身是本领域普通技术人员已知的，但是没有更详细地提及。

除非另有说明，本文描绘的结构也意图包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在方面有所不同的化合物。例如，除了氢原子被氘或氚代替或者碳原子被¹³C-或¹⁴C-富集的碳代替以外，具有本发明结构的化合物都在本发明的范围内。

本发明的化合物可以以超过一种形式结晶，即称作多态现象的特征，这样的多晶型形式(“多晶型物”)是在本发明的范围内。多态现象通常可以作为对温度、压力或二者的变化的响应而发生。多态现象也可以源自结晶过程的变化。通过本领域已知的各种物理特征，诸如x-射线衍射图样、溶解度和熔点，可以区分多晶型物。

本文所述的某些化合物含有一个或多个手性中心，或以其它方式能够作为多种立体异构体存在。本发明的范围包括立体异构体的混合物以及纯化的对映异构体或对映异构地/非对映异构地富集的混合物。本发明的范围也包括本发明的通式所示的化合物的单独异构体及其任何全部地或部分地平衡的混合物。本发明还包括上式表示的化合物的单独异构体作为与其异构体的混合物，其中一个或多个手性中心被倒转。尽管可能描绘了仅一个离开原位的共振结构，但在本发明的范围内预见到所有这些形式。

当希望化合物为单一对映异构体时，这可以如下获得：通过立体特异性的合成，通过拆分终产物或任何方便的中间体，或通过本领域已知的手性色谱方法。通过本领域已知的任何合适的方法，可以实现终产物、中间体或原料的拆分。参见，例如，Stereochemistry of OrganicCompounds(Wiley-Interscience,1994)。

本发明包括本文所述化合物的盐或溶剂化物，包括它们的组合，诸如盐的溶剂化物。本发明的化合物可以以溶剂化形式（例如水合形式）以及未溶剂化形式存在，且本发明包括所有这样的形式。

通常，但并非绝对地，本发明的盐是药学上可接受的盐。在术语“药学上可接受的盐”内包括的盐表示，本发明的化合物的无毒盐。

合适的药学上可接受的盐的实例包括：无机酸加成盐，诸如氯化物、溴化物、硫酸盐、磷酸盐和硝酸盐；有机酸加成盐，诸如乙酸盐、半乳糖二酸盐（galactarate）、丙酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、乙醇酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和抗坏血酸盐；与酸性氨基酸形成的盐，诸如天冬氨酸盐和谷氨酸盐；碱金属盐，诸如钠盐和钾盐；碱土金属盐，诸如镁盐和钙盐；铵盐；有机碱的盐，诸如三甲胺盐、三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、二环己基胺盐和N，N′-二苄基乙二胺盐；和与碱性氨基酸形成的盐，诸如赖氨酸盐和精氨酸盐。在有些情况下，所述盐可以是水合物或乙醇溶剂化物。

II.一般合成方法

通过本领域技术人员会明白的多种合成策略，可以制备(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。在一个方面，使用钯催化的芳基卤化物与乙烯基吡咯烷化合物的偶联反应(参见，例如，美国专利号7,098,331和公开的PCT申请WO 10/065443)，可以得到(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。因而，在有乙酸钯(II)、三苯基膦和三乙胺存在下，使适当地N-保护的3-乙烯基吡咯烷与5-溴嘧啶反应，会产生N-保护的(E)-(2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶。随后去除保护基，生成(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。

吡咯烷氮的保护和去保护的方法，是合成化学领域的技术人员众所周知的，且可以参见文献，诸如T.W.Greene和P.G.M.Wuts的“Protective Groups in Organic Synthesis(第2版)”(Wiley-Interscience(1991))。通过众多方法，可以得到偶联反应必需的原料(杂芳基卤化物和3-乙烯基吡咯烷)。使用亚甲基三苯基膦，通过Wittig烯化作用，可以从对应的N-保护的3-甲酰基吡咯烷制备N-保护的3-乙烯基吡咯烷。醛向乙烯基的其它转化是本领域技术人员已知的。从对应的酯(例如，N-保护的烷基吡咯烷-3-甲酸酯)开始，可以如下在1个或2个步骤中制备3-甲酰基吡咯烷：用二异丁基氢化铝还原，或用氢化铝锂还原，随后通过用于将醇氧化成醛的多种方法中的任一种，进行氧化。在该顺序中，可能必须改变在氮上的保护基。通过偶氮甲碱环加成为对应的丙烯酸酯，又可以得到N-保护的烷基吡咯烷-3-甲酸酯。

或者，通过用甲氧基亚甲基三苯基膦处理N-保护的3-吡咯烷酮或本领域技术人员已知的其它类似的羰基同系化反应，可以形成N-保护的3-甲酰基吡咯烷。通过合适的氮保护剂和用于将醇转化成对应的酮的多种氧化剂中的任一种先后处理可商业得到的3-吡咯烷醇（pyrrolidinol），制备必需的N-保护的3-吡咯烷酮。

或者，可以从外消旋的或对映异构地富集的N-保护的3-吡咯烷醇，制备N-保护的3-乙烯基吡咯烷。实现该转化的一种方式是，将(3-吡咯烷醇的)羟基转化成对应的甲磺酸盐或甲苯磺酸盐，并用丙二酸盐离子置换所述甲磺酸盐（mesylate）或甲苯磺酸盐（tosylate）。随后的丙二酸盐水解(成为丙二酸)、脱羧和氢化铝锂还原，会提供外消旋的或对映异构地富集的(与原料的立体化学相对应)N-保护的3-(羟基乙基)吡咯烷。该物质然后可以转化成对应的N-保护的3-(卤代乙基)吡咯烷，后者可以脱氢卤化，得到N-保护的3-乙烯基吡咯烷(外消旋的或对映异构地富集的，与原料的立体化学相对应)。

III.治疗方法

本文所述的化合物可用于治疗这样的病症和障碍类型：已经提议将其它类型的烟碱化合物用作所述病症和障碍的治疗剂。参见，例如，Williams等人,DN&P 7(4):205-227(1994),Arneric等人,CNS DrugRev.1(1):1-26(1995),Arneric等人,Exp.Opin.Invest.Drugs5(1):79-100(1996),Bencherif等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.279:1413(1996),Lippiello等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.279:1422(1996),Damaj等人,Neuroscience(1997),Holladay等人,J.Med.Chem.40(28):4169-4194(1997),Bannon等人,Science 279:77-80(1998)，PCT WO94/08992，PCT WO 96/31475，以及Bencherif等人的美国专利号5,583,140，Dull等人的美国专利号5,597,919，和Smith等人的美国专利号5,604,231。

所述化合物还可以在控制上述类型的疾病和障碍中作为辅助疗法与现有的疗法联用。在这类情况中，优选地以对nAChR亚型的作用（诸如与肌肉和神经节相关的那些作用）最小的方式施用活性成分。这可以如下实现：通过靶向药物递送，和/或通过调整剂量使得在不满足出现显著副作用所需的阈值剂量的情况下获得所需作用。所述的药物组合物可以用于改善与那些病症、疾病和障碍相关的症状中的任一种。

已知神经***（主要通过迷走神经）通过抑制巨噬细胞肿瘤坏死因子(TNF)的释放来调节先天免疫应答的等级。这种生理学机制称作“胆碱能抗炎途径”(参见，例如，Tracey,“The InflammatoryReflex,”Nature 420:853-9(2002))。在多种疾病中，过度的炎症和肿瘤坏死因子合成会造成发病和甚至死亡。这些疾病包括、但不限于：内毒素血症、类风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病、哮喘、动脉粥样硬化、特发性肺纤维化和炎性肠病。

通过施用本文所述的化合物可以治疗或预防的炎性病症包括、但不限于：慢性和急性炎症、银屑病、内毒素血症、痛风、急性假痛风、急性痛风性关节炎、关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、同种异体移植物排斥、慢性移植排斥、哮喘、动脉粥样硬化、单核-吞噬细胞依赖性的肺损伤、特发性肺纤维化、特应性皮炎、慢性阻塞性肺疾病、成人呼吸窘迫综合征、镰形细胞病中的急性胸部综合征、炎性肠病、肠易激综合征、克罗恩氏病、溃疡、溃疡性结肠炎、急性胆管炎、口疮性口炎、恶病质、隐窝炎、肾小球肾炎、狼疮肾炎、血栓形成和移植物抗宿主反应。

本发明的一个方面包括，一种减轻便秘的方法。本发明的一个实施方案包括其中便秘的根源是：胃肠道，包括、但不限于肠易激综合征（包括IBS-A和IBS-C）、急性或慢性特发性便秘、结肠障碍（包括结肠癌）或无力性肠梗阻；内分泌学的，包括、但不限于妊娠或甲状腺功能减退；神经学的，包括、但不限于帕金森病、多发性硬化或抑郁；医源性的，包括、但不限于阿片剂、抗抑郁药、抗酸药或补铁剂；与进食障碍有关，诸如厌食或食欲亢进以及与应激、旅行和饮食变化有关的进食障碍；或与外科手术有关，诸如手术后问题、损伤（包括脊髓损伤）、自主功能障碍或截瘫或长期护理患者（包括肿瘤学、CNS、中风、截瘫和老年患者）。

本发明的另一个方面包括，一种治疗与胃肠道障碍有关的便秘的方法，所述方法包括：施用(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，所述胃肠道障碍是肠易激综合征、便秘突出的肠易激综合征、交替的肠易激综合征、慢性特发性便秘、急性便秘、药物诱发的便秘、结肠障碍、结肠癌或无力性肠梗阻。

化合物的合适剂量是这样的量：其有效地预防障碍的症状的发生或治疗患者患有的障碍的某些症状。“有效量”、“治疗量”或“有效剂量”是指这样的量：其足以引起希望的药理学效果或治疗效果，从而导致障碍的有效预防或治疗。因而，当治疗CNS障碍时，化合物的有效量是这样的量：其足以穿过受试者的血脑屏障，以结合该受试者脑内的相关受体部位，并活化相关的烟碱受体亚型(例如，提供神经递质分泌，从而导致障碍的有效预防或治疗)。障碍的预防表现为：延迟障碍的症状的发作。障碍的治疗表现为：与该障碍相关的症状减轻，或该障碍的症状的复发改善。

有效剂量可以随多种因素而变化，诸如患者的状况、障碍的症状的严重性和药物组合物的施用方式。就人类患者而言，典型化合物的有效剂量通常要求，以足以活化有关的受体从而影响神经递质(例如，多巴胺)释放的量施用该化合物，但该量应当不足以将对骨骼肌和神经节的作用诱发至任何明显的程度。化合物的有效剂量当然随患者而不同，但一般包括从发生CNS作用或其它所需治疗效果开始的量，但低于观察到肌肉作用时的量。

IV.药物组合物

尽管可能以整体活性化学物（bulk active chemical）的形式施用本发明化合物，但优选的是施用药物组合物或制剂形式的化合物。因而，本发明的一个方面包括药物组合物，所述药物组合物包含本发明化合物和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明的另一个方面提供了一种制备药物组合物的方法，所述方法包括：将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂一起混合。

施用本发明化合物的方式可以变化。优选地口服地施用本发明化合物。就口服给药而言，优选的药物组合物包括片剂、胶囊剂、囊片（caplet）、糖浆剂、溶液和悬浮液。本发明的药物组合物可以提供成改进的释放剂型，诸如限时（time-release）释放片剂和胶囊制剂。

药物组合物可以配制成单元剂量形式，或多个剂量或亚单元剂量。本文所述的药物组合物的施用可以是间歇性的，或者按递进的、连续的、恒定的或受控的速率。另外，施用药物组合物的天数和每天的次数可以变化。

所述药物组合物可以施用给需要缓解急性或慢性便秘的任意温血动物。例如，这种治疗的哺乳动物包括人类。但是，同样地，可以治疗哺乳动物，诸如小鼠、大鼠、猫、兔、狗、猪、牛、马或猴。关于本发明作为人用药物或兽用产品的用途，本发明可以用于减轻由多种潜在原因导致的便秘。

本发明化合物可以用于治疗多种障碍和病症，并因此可以与可用于治疗或预防那些障碍或病症的多种其它合适的治疗剂联合使用。因而，本发明的一个实施方案包括，与其它治疗化合物联合施用本发明化合物。

具体地，本发明化合物可以与已知以便秘作为主要副作用的某些其它治疗剂（包括阿片样物质、利尿剂、抗抑郁药、抗组胺剂、镇痉剂、抗惊厥药和铝抗酸药）联合使用。

同样地，本发明化合物可以与已知的或用于治疗IBS的某些其它治疗剂（包括、但不限于疼痛缓解剂、抗生素或促分泌剂）联合使用。在这点上，本发明会减轻障碍的便秘部分，并因而可以与用于缓解其它症状的其它试剂相组合。

作为其它实例，本发明化合物可以与下述物质联合使用：其它NNR配体（诸如伐尼克兰）、抗氧化剂（诸如自由基清除剂）、抗细菌剂（诸如青霉素抗生素）、抗病毒剂（诸如核苷类似物，如齐多夫定和阿昔洛韦）、抗凝血剂（诸如华法林）、抗炎剂（诸如NSAID）、解热剂、镇痛药、***（诸如用于外科手术中）、乙酰胆碱酯酶抑制剂（诸如多奈哌齐和加兰他敏）、抗精神病药（诸如氟哌啶醇、氯氮平、奥氮平和喹硫平）、免疫抑制剂（诸如环孢素和甲氨蝶呤）、神经保护剂、类固醇（诸如类固醇激素）、皮质类固醇（诸如***、强的松（predisone）和氢化可的松）、维生素、矿物质、营养制品、抗抑郁药（诸如丙米嗪、氟西汀、帕罗西汀、依他普仑、舍曲林、文拉法辛和度洛西汀）、抗焦虑药（诸如阿普***和丁螺环酮）、抗惊厥药（诸如苯妥英和加巴喷丁）、血管扩张剂（诸如哌唑嗪和西地那非）、情绪稳定剂（诸如丙戊酸盐和阿立哌唑）、抗癌药物（诸如抗增殖剂）、抗高血压剂（诸如阿替洛尔、可乐定、氨氯地平、维拉帕米和奥美沙坦）、泻药、大便软化剂、利尿剂（诸如呋塞米）、抗痉挛剂（诸如双环维林）、抗运动障碍药和抗溃疡药（诸如埃索美拉唑）。药学活性剂的这种组合可以一起或分开施用，且当分开施用时，施用可以同时地或顺序地以任意次序进行。为了实现希望的治疗效果，可以选择化合物或药剂的量以及相对给药时机。本发明的化合物与其它治疗剂的联合施用，可以是在下述组合物中伴随地联合施用：(1)包含两种化合物的单元药物组合物；或(2)分开的药物组合物，每种包括一种化合物。或者，所述组合可以以相继方式分开施用，其中首先施用一种治疗剂，然后施用另一种。这样的相继给药可以在时间上接近或在时间上远离。

本发明的另一个方面包括联合治疗，所述联合治疗包括：给受试者施用治疗或预防有效量的本发明化合物和一种或多种其它疗法，包括化学疗法、辐射疗法、基因疗法或免疫疗法。

本发明的肠溶制剂可以包括（单元的或多颗粒的）药芯和一种或多种包衣。所述一种或多种包衣可以是美容的或功能性的，包括、但不限于pH依赖性的和pH非依赖性的功能性。

A.药芯（core）

通常通过将含有活性成分的层应用在惰性药芯上来制备弹丸的特定多颗粒药芯。这样的惰性药芯常规地用于药物科学中，且可容易地得到。特定药芯是由淀粉和蔗糖制成，用于糖果业中以及药物生产中。但是，可以使用任意药学上可接受的赋形剂（包括、例如，微晶纤维素、植物胶、蜡类等等）的药芯。惰性药芯的主要特征是，对弹丸中的活性成分和其它赋形剂是惰性的，并且对最终摄入弹丸的受试者也是惰性的。

药芯的大小取决于要生产的弹丸的希望的大小。一般而言，弹丸可以小至0.1mm或大至4mm。特定药芯是约0.5至约3.0mm，以便提供直径大小范围为约1.0至约3.0mm的完成弹丸（finished pellet）。

药芯可以具有适当地窄的粒度分布，以便提高要添加的不同包衣的均匀度和终产物的同质性。例如，可以将药芯指定为具有下述粒度范围：诸如18-20美国网目、20-25美国网目、25-30美国网目或30-35美国网目，以得到不同绝对尺寸的可接受的尺寸分布。

要使用的药芯的量可以根据添加层的重量和厚度而变化。一般而言，药芯占产品的约10至约70%。更具体地，药芯的装载量占产品的约15至约45%。

当弹丸的生产从惰性药芯开始时，可以将活性成分包在药芯上，以产生通常占产品的约10至约25%的最终药物浓度。活性成分的量取决于药物的所需剂量和要施用的弹丸的量。活性成分的剂量是在约0.5-100mg、更具体地约1-10mg的范围内，且弹丸的常见量是方便地保留在明胶胶囊剂中的量。明胶胶囊剂的体积范围可以是，本发明的产品中的活性剂的约15%至约25%。

用活性成分包被药芯的方便方式是“粉末包被”方法，其中用粘性的液体或粘合剂润湿药芯，加入活性成分粉末，并将混合物干燥。这样的方法经常在工业药学实践中进行，且合适的装置是本领域已知的。

这样的装置可以用于本发明的方法的几个步骤中。该方法可以在与糖包衣方法所用的那些包衣锅（coating pan）类似的常规包衣锅中进行。该方法可以用于制备弹丸。

或者，本发明的产品可以在流化床装置(使用旋转处理器)中或在旋转板装置诸如Freund CF-Granulator(Vector Corporation,Marion,Iowa)中制备。所述旋转板装置通常由圆筒组成，所述圆筒的底部是可旋转的板。通过圆筒的静止壁和旋转底之间的团块（mass）摩擦，提供要包被的颗粒团块的运动。施加暖风来干燥所述团块，并可以将液体喷洒在所述团块上，相对于干燥速率达到平衡（如在流化床的情况下）。

在有些实施方案中，施加粉末包被。在这样的实施方案中，弹丸团块可以维持在粘性状态，并可以连续地或定期地加入要粘附在它们上面的粉末（在本发明情况下，活性成分），并粘附到粘性的弹丸上。当已经施加所有这样的活性剂时，可以停止喷洒，并在气流中干燥团块。可以适当地或方便地向活性成分中添加一些惰性粉末。

可以将额外固体加入含有活性成分的层中。根据需要，可以加入这些固体来促进包衣过程，以辅助流动、减少静电荷、辅助体积增加（bulk buildup）和形成光滑的表面。可以使用惰性物质诸如滑石、高岭土和二氧化钛、润滑剂诸如硬脂酸镁、精细粉碎的二氧化硅、交聚维酮和非还原糖例如蔗糖。这样的物质的量是在下述范围内：产品的约千分之几至产品的约20%。这样的固体通常具有细微的粒度（例如，小于50微米），以生成光滑的表面。

可以如下使活性成分粘附到药芯上：喷洒药用赋形剂（所述赋形剂在潮湿时是粘性的和粘附的），并干燥成坚硬的粘着膜。本领域技术人员知晓并常规地使用许多这样的物质，它们中的大多数是聚合物。具体的这种聚合物包括羟丙甲基纤维素、羟丙基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。其它这样的物质包括例如甲基纤维素、羧甲基纤维素、***胶和明胶。粘性赋形剂的量可以是在产品的约4%至约12%范围内，且主要取决于要粘附到药芯上的活性物质的量。

也可以如下将活性成分叠加在药芯上：喷洒浆料，所述浆料包含悬浮于溶液中的活性成分，所述溶液是将活性层的赋形剂溶解或悬浮在足够的水中，以使得所述浆料是可喷雾的。可以在适合研磨悬浮液的机器中碾磨这样的浆料，以便减小活性成分的粒度。以悬浮液形式研磨可以是合乎需要的，因为它会避免在研磨干粉药物时造成的粉尘产生和防范问题。应用该悬浮液的一种具体方法是，药用流化床包衣装置，诸如Wurster柱，其由具有透气底的垂直圆筒和在所述底上面附近处的向上喷洒的喷嘴或固定在产物团块上面的向下喷洒的喷嘴组成。给所述圆筒装载要包被的颗粒，穿过所述圆筒的底抽吸足够体积的空气，以悬浮颗粒团块，并将要涂布的液体喷洒在团块上。相对于喷洒速率平衡流态化空气的温度，以维持弹丸团块或片剂在希望的湿度和粘度水平，同时叠加包衣。

另一方面，所述药芯可以包含在其中掺入了活性成分的整体颗粒。这样的药芯可以通过在制药科学中广泛使用的造粒技术（具体地，用于制备压制的片剂的颗粒材料）来制备。可以如下制备药芯：将活性成分混合进药用赋形剂团块中，用水或溶剂润湿团块，干燥，并将团块破碎成确定大小的颗粒，所述颗粒是在上面关于惰性药芯所述的相同尺寸范围内。这可以通过挤压工艺和一步制粒法来实现。

还可以如下制备弹丸的药芯：将活性成分与常规药用成分一起混合，以得到希望的浓度，并通过常规操作使所述混合物形成希望大小的单元药芯，所述操作包括、但不限于R.E.Sparks等人、美国专利号5,019,302和5,100,592的方法，它们关于这样的方法的内容通过引用并入本文。

所述肠溶药用产品的具体的受保护的药芯包含下式(I)的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶(在本文中也称作化合物A)作为活性成分：

制备(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶的方法是本领域已知的，如在美国专利号7,098,331中所例证，其通过引用整体并入本文中。

本文也提供了含有所述活性成分的口服组合物诸如片剂或胶囊剂，其具有低赋形剂负荷，使得每天1次或2次给药是可能的，优选地在每次给药时施用1或2个这样的组合物。本文提供的肠溶产品可以使用活性成分的任意物理形式。

B.分离层

在含有活性成分的药芯和肠溶层之间的分离层不是必需的，但是是所述制剂的一个具体特征。如果需要的话，所述分离层的功能是，提供用于施加肠溶层的光滑基质，以延长弹丸对酸性条件的抗性，和/或通过抑制药物和肠溶层中的肠溶聚合物之间的任何相互作用来提高稳定性。

分离层的光滑功能是纯机械的，其目的是，提高肠溶层的覆盖度，并避免在其中的薄斑（由药芯上的凸起和不规则性造成）。因此，可以制备的药芯越光滑和越规则，在分离层中需要越少的材料，并且当活性成分具有非常细微的粒度且药芯被制得尽可能接近真实球形时，可以完全避免对分离层的光滑特征的需求。

当将药学上可接受的非还原糖加入分离层中时，可以显著地增加弹丸对酸性条件的抗性。因此，这样的糖可以被包含在施加于药芯上的分离层中，作为粉末化的混合物，或溶解为喷洒（sprayed-on）液体的一部分。含有糖的分离层可以减少达到给定水平的酸抗性所需的肠溶聚合物的量。更少肠溶聚合物的使用，可以减少材料成本和加工时间，并且也可以减少可用于与活性成分反应的聚合物的量。任何药芯/肠溶层相互作用的抑制是机械的。所述分离层在物理上保持药芯组分和肠溶层彼此直接接触。在某些情况下，所述分离层也可以充当溶解在产品水分中的药芯或肠溶层组分发生迁移的扩散屏障。所述分离层也可以用作光屏障，其中用诸如二氧化钛、氧化铁等试剂遮挡光。

一般而言，所述分离层可以包括粘着的或聚合的材料和构成填充剂的精细粉末化的固体赋形剂。当将糖用在分离层中时，它以水溶液的形式施用，并构成粘着材料的一部分或全部，所述粘着材料将分离层粘在一起。除了糖以外，或作为糖的替代，还可以在分离层中使用聚合材料。例如，诸如羟丙甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素等物质可以以小量使用，以增加分离层的粘附和粘合。

还可以在分离层中使用填充赋形剂，以增加该层的光滑性和固体性。诸如精细粉末化的滑石、二氧化硅等物质被普遍地接受为药用赋形剂，并可以在方便的情况下加入，以填充分离层并使分离层光滑。

一般而言，在分离层中的糖的量可以是在产物的约2%至约10%的范围内，当完全使用糖时，聚合的或其它粘性的材料的量可以是在约0.1至约5%的范围内。诸如滑石等填充剂的量可以是在约5至约15%的范围内，这基于终产物重量。

可以如下施加分离层：通过喷洒糖或聚合材料的水溶液，并如在活性层的制备中已经描述的那样，用填充剂撒粉。可以提高分离层的光滑性和同质性，但是，如果填充剂彻底地分散为在糖和/或聚合材料溶液中的悬浮液，使用上面关于制备含有活性层的药芯所述的装置，将所述悬浮液喷洒在药芯上，并干燥。

C.肠溶层

肠溶层包含肠溶聚合物，所述肠溶聚合物可以选择成与活性成分相容。所述聚合物可以在每单位重量内仅具有小量羧酸基团或具有聚合物的重复单元。

一般而言，可以如下控制活性药剂（无论亲水的、疏水的还是两亲的）的释放速率：通过调节包衣的厚度和/或组成，并任选地，通过调节聚合的和/或非聚合的赋形剂的类型和/或浓度。

药芯中的聚合物会抑制释放速率，因为聚氧化乙烯的分子量相对较高。使用相对高分子量的聚氧化乙烯的一个额外优点是，所述释放是pH非依赖性的，这不同于使用离子聚合物（诸如聚丙烯酸）的情况。此外，可以使用包含可以与这样的聚合物反应的官能团的活性药剂(即，其包括胺和/或羧酸基团)，且没有活性剂和聚合物之间的不良反应。

肠溶聚合物可以作为来自水性悬浮液、来自在水性或有机溶剂中的溶液的包衣或作为粉末来施用。本领域技术人员能够根据需要从已知的溶剂和/或方法中选择。

一种具体的肠溶聚合物是丙烯酸药物递送聚合物，诸如聚甲基丙烯酸酯，诸如在商标名称下销售的那些，包括粉末应用，诸如L100-55和L100。

根据Shin-Etsu Chemical Co.Ltd.所述的方法(Obara,等人,Poster PT6115,AAPS Annual Meeting,Seattle,Wash.,1996年10月27-31日)，也可以施加肠溶聚合物。在该方法中，当肠溶聚合物作为粉末施加时，所述肠溶聚合物以固态直接地加入片剂或弹丸中，同时将增塑剂喷洒在片剂或弹丸上。固体肠溶颗粒的堆积物然后通过固化变成膜。所述固化如下实现：用小量水喷洒包衣片剂或弹丸，然后加热所述片剂或弹丸短时间。采用与上面关于制备含有活性成分层的药芯所述的相同类型的装置，可以执行该肠溶包衣施加方法。

当肠溶聚合物作为水性悬浮液施加时，在得到均匀的粘着膜时经常产生问题。在可能产生该问题的情况下，可以使用细颗粒级别，或可以将聚合物颗粒磨碎成非常小的尺寸，然后施加。可能研磨干燥的聚合物，如在空气嵌塞碾磨机（air-impaction mill）中，或可能制备悬浮液并研磨浆料形式的聚合物。浆料研磨通常是优选的，具体地因为它也可以用于在同一步骤中研磨肠溶层的填充剂部分。在有些实施方案中，适当地减小肠溶聚合物的平均粒度至约1微米至约5微米的范围，特别是不大于3微米。

当肠溶聚合物以悬浮液的形式施加时，通常维持所述悬浮液均匀。这样的谨慎包括：维持所述悬浮液在轻轻搅拌的条件下，但是不剧烈搅拌以致于产生泡沫，并确保所述悬浮液不会静止在喷嘴体中，例如，或在过大的递送管道中的漩涡中。如果悬浮液变得太热，且在个别情况下临界温度可以低至30℃，处于悬浮液形式的聚合物经常会聚集。因为喷雾器喷嘴和管道被暴露于通常的流化床型装置中的热空气中，必须小心地确保：悬浮液保持活跃地移动穿过该装置，以冷却管道和喷嘴。具体地，当使用HPMCAS时，适当地在施加之前如下将悬浮液冷却至低于20℃，以冷却管道和喷嘴：在开始抽吸所述悬浮液之前，抽吸小量冷水穿过它们，并使用具有小直径的供给管道，因为这时的喷洒速率会使得，所述悬浮液可以保持在管道中快速地移动。

在一个实施方案中，每当可能的时候，可以施加作为水溶液的肠溶聚合物。通过中和聚合物（具体地使用氨），可以实现聚合物的溶解。可以如下中和聚合物：仅仅通过将氨（优选地以氢氧化铵水溶液的形式）加入聚合物在水中的悬浮液中；完全中和会导致聚合物在约pH 5.7-5.9完全溶解。当通过加入小于当量（equivalent amount）的氨来部分地中和聚合物时，也得到良好的结果。在这样的情况下，尚未中和的聚合物保持在悬浮形式，悬浮在中和的聚合物的溶液中。当要使用这样的方法时，可以控制聚合物的粒度。与使用悬浮的聚合物相比，使用中和的聚合物会更容易地提供光滑的、粘着的肠溶层，且使用部分地中和的聚合物会提供中间程度的光滑性和粘着。具体地，当将肠溶层施加在非常光滑的分离层上时，可以从部分地中和的肠溶聚合物得到优良的结果。

中和程度可以在一定范围内变化，而不会不利地影响运行的结果或容易。例如，中和程度的范围可以是约25%至约100%中和。另一个具体的条件是约45%至约100%中和，且另一个条件是约65%至约100%。另一种具体的中和方式是约25%至约65%中和。但是，可能发现，在干燥以后，在得到的产物中的肠溶聚合物被中和至比施加时更低的程度。

为了改善的结果，可以与肠溶聚合物一起使用增塑剂。一种具体的增塑剂可以是柠檬酸三乙酯，在使用水性悬浮液的情况下，其用量是肠溶聚合物的量的约15%-30%。可以需要更低水平增塑剂或无增塑剂。也常使用小量成分，诸如消泡剂、助悬剂(当聚合物处于悬浮形式时)或表面活性剂，以辅助使膜光滑。例如，有机硅消泡剂、表面活性剂诸如聚山梨酯80、月桂基硫酸钠等等和助悬剂诸如羧甲基纤维素、植物胶等等，通常可以在最高达产品的1%的一般范围内的量使用。

可以给肠溶层填充粉末化的赋形剂诸如滑石、单硬脂酸甘油酯或水合的二氧化硅，以增加该层的厚度，以强化它，以减少静电荷，且从而减少颗粒粘结力。可以将在终产物的约1%至约10%范围内的这种固体的量加入肠溶聚合物混合物中，而肠溶聚合物本身的量可以在约5%至约25%、更具体地约10%至约20%的范围内。

肠溶层向弹丸的施加，遵循以前讨论的相同的一般规程，其中使用流化床型装置，同时喷洒肠溶聚合物溶液或悬浮液并温风干燥。干燥空气的温度和循环的弹丸团块的温度通常保持在肠溶聚合物的生产商建议的范围内。

D.涂饰层（finishing layer）

在每种情况下，在肠溶层上面的涂饰层不是必需的，但是可以改善产品的美观和它的操纵、贮存和机械能力（machinability），并且还可以提供其它益处。最简单的涂饰层仅仅是小量（大约小于1%）的防静电成分诸如滑石或二氧化硅，其简单地撒在弹丸的表面上。另一种简单的涂饰层是小量（约1%）的蜡诸如蜂蜡，其熔化在循环的弹丸团块上，以进一步使弹丸光滑、减少静电荷、防止弹丸粘结到一起的任何趋势、并增加表面的疏水性。

更复杂的涂饰层可以构成最后喷洒的成分层。例如，可以使用诸如羟丙甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等聚合材料的薄层，其量为诸如约2%至约10%。所述聚合材料也可以携带遮光剂、填充剂（诸如滑石）或着色剂（具体地，不透光的精细粉碎的着色剂诸如黄色或黄色氧化铁）的悬浮液。这样的层在胃中会快速地溶解掉，剩下肠溶层来保护活性成分，但是会提供药物美观的额外措施，并保护产物免于机械损伤。

要施加于本发明的产品上的涂饰层属于制药科学中经常用于使肠溶产品光滑、密封和着色的基本上相同的类型，且可以以常见方式配制和施加。

以制药科学中常见的方式，彻底测试了根据上述实施例制备的弹丸和填充了不同批次的这种弹丸的明胶胶囊剂。稳定性实验结果证实，弹丸和胶囊剂具有足以以常规制药方式分配、销售和使用的贮存稳定性。

认为所述弹丸和胶囊剂会通过在胃中的优势条件下的肠溶保护的常规实验。认为当弹丸暴露于小肠中占优势的条件时，其会可接受地快的释放出它们的药物产品负荷。

可以将肠溶包衣的颗粒装入HDP#1胶囊中。基于美国药典规程，可以做出所述胶囊批次在HCl 0.1N中的溶解曲线。可以测量所述胶囊在磷酸盐缓冲液中的溶解曲线。预期所述溶解曲线会证实，肠溶包衣可有效地保护弹丸免于在胃中溶解，且在肠样条件中可容易地溶解。

本发明包括片剂和胶囊剂，其中活性成分的量是在例如0.5-50mg（包括1-10mg，进一步包括5mg）范围内。

实施例1:外消旋的5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶半半乳糖二酸盐（hemigalactarate）：

在氩下，将三氟醋酸(1.2cm³,15.6mmol)逐滴加入0.43g(1.56mmol)外消旋的3-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯在6cm³二氯甲烷中的溶液中，并将其冷却至0℃。将所述反应混合物在该温度搅拌0.5h，然后在22℃温度搅拌20小时，并在减压下(2.7kPa)将其浓缩至干燥。将油状残余物溶解于5cm³水中，并通过加入28%氨水溶液使得到的溶液呈碱性(pH=8)，然后用3×25cm³二氯甲烷萃取。用25cm³水洗涤合并的有机相，经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下(2.7kPa)浓缩至干燥，得到0.126g橙色油，其通过硅胶上的色谱法[洗脱液:二氯甲烷/甲醇(9/1，然后8/2，按体积计算)]进行纯化。在减压下(2.7kPa)浓缩所述级分，得到0.1g(0.57mmol)橙色油。将半乳糖二酸(0.06g,0.28mmol)加入该油在2cm³甲醇中的溶液中，已经向所述溶液中加入了0.5cm³水。使所述混合物达到回流，并冷却至22℃的温度，并通过过滤去除不溶物。在减压下(2.7kPa)浓缩滤液至干燥，并将油状残余物溶解于2cm³乙醇中。滤出沉淀的固体，用2cm³乙酸异丙酯和2cm³二异丙基醚洗涤，然后在真空下(2.7kPa)在40℃干燥，得到0.1g外消旋的5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶半半乳糖二酸盐，为赭石固体形式。质谱(DCI):m/z 176(MH⁺)。¹H NMR谱(300MHz,(CD₃)₂SO d6含有几滴CD₃COOD d4,δ按ppm计):1.82(m:1H);2.18(m:1H);2.98(dd,J=11和8.5Hz:1H);3.10(m:1H);3.20(m:1H);3.33(m:1H);3.42(dd,J=11和7.5Hz:1H);3.79(s:1H);4.24(s:1H);6.55(限制AB:2H);8.87(s:2H);9.04(s:1H)。

外消旋的3-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯可以如下制备：

在氩下，将乙酸钯(0.117g,0.52mmol)、0.678g(16mmol)氯化锂和7.25cm³(42mmol)乙基二异丙胺相继加入0.822g(5.17mmol)5-溴嘧啶和1.2g(5.17mmol)外消旋的3-乙烯基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯在15cm³二甲基甲酰胺中的溶液中。在搅拌下在110℃加热3小时以后，在22℃温度搅拌所述反应混合物2小时，然后在减压下(2.7kPa)浓缩至干燥。将所述油状残余物溶解于50cm³乙酸乙酯中，并用下述物质相继洗涤得到的溶液：用25cm³水、25cm³饱和碳酸氢盐溶液洗涤2次，用25cm³水和25cm³饱和氯化钠溶液洗涤2次，然后经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下(2.7kPa)浓缩至干燥，得到1.1g褐色油。通过硅胶上的色谱法[洗脱液:环己烷/乙酸乙酯(8/2，按体积计)]，纯化该残余物。在减压下(2.7kPa)浓缩所述级分，得到0.43g外消旋的3-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，为油形式。

¹H NMR谱(300MHz,(CD₃)₂SO d6,δ按ppm计):1.42(s:9H);1.78(m:1H);2.05(m:1H)；从2.90至3.15(m:2H)；从3.15至3.60(m:3H);6.51(d,J=16.5Hz:1H);6.64(dd,J=16.5和7Hz:1H);8.89(s:2H);9.04(s:1H)。

实施例2:(S)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶半乳糖二酸盐（galactarate）：

在氩下，将在22℃温度的碘代三甲基硅烷(0.2cm³,1.4mmol)加入0.26g(0.944mmol)(S)-3-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯在10cm³二氯甲烷中的溶液中。在该温度搅拌2小时以后，将所述反应混合物与15cm³5%氨水溶液相混合，并在22℃温度搅拌1小时，并使其沉降。分离水相，并用二氯甲烷萃取。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机相2次，然后经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下(2.7kPa)浓缩至干燥，得到0.06g橙色油。将半乳糖二酸(0.035g,0.16mmol)加入该油在6cm³甲醇中的溶液中，已经向所述溶液中加入了0.6cm³水。使所述混合物达到回流，并冷却至22℃的温度，在减压下(2.7kPa)浓缩至干燥。在有5cm³二异丙基醚存在下，研磨油状残余物，滤出形成的固体，然后在45℃在真空下(2.7kPa)干燥，得到0.072g(S)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶半乳糖二酸盐，为黄色固体形式。质谱(DCI):m/z=176(MH⁺)。¹H NMR谱(300MHz,(CD₃)₂SOd6含有几滴CD₃COOD d4,δ按ppm计):1.81(m:1H);2.19(m:1H);2.98(dd,J=11和9Hz:1H);3.10(m:1H);3.21(m:1H);3.33(m:1H);3.43(dd,J=11和8Hz:1H);3.79(s:2H);4.25(s:2H);6.56(限制AB:2H);8.88(s:2H);9.05(s:1H)。

(S)-3-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯可以如下制备：

将3-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯的外消旋混合物(0.5g)分成2份注射上8cm直径柱，所述柱含有1.2kg手性固定相Chiralpak AS^TM 20μm[流速：130ml/min，洗脱液：庚烷/甲醇/乙醇(98/1/1，按体积计)]。在减压下(2.7kPa)浓缩所述级分，得到0.24g(S)-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯和0.27g(R)-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯。在4.6mm直径和250mm长度Chiralpak AS^TM 20μm柱[流速:1ml/min,洗脱液:庚烷/甲醇/乙醇(98/1/1，按体积计)]上，(+)-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯在第一位置洗脱，保留时间为14.2min。¹H NMR谱(300MHz,(CD₃)₂SO d6,δ按ppm计):1.43(s:9H);1.79(m:1H);2.06(m:1H)；从2.95至3.15(m:2H)；从3.20至3.35(m:1H);3.44(ddd,J=11-8.5和3Hz:1H);3.53(宽dd,J=10和7.5Hz:1H);6.52(d,J=16.5Hz:1H);6.63(dd,J=16.5和7Hz:1H);8.89(s:2H);9.04(s:1H)。

在4.6mm直径和250mm长度Chiralpak AS^TM 20μm柱[流速:1ml/min,洗脱液:庚烷/甲醇/乙醇(98/1/1，按体积计)]上，(R)-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯在第二位置洗脱，保留时间为17min。¹H NMR谱(300MHz,(CD₃)₂SO d6,δ按ppm计):1.43(s:9H);1.79(m:1H);2.06(m:1H)；从2.95至3.15(m:2H)；从3.20至3.35(m:1H);3.44(ddd,J=11-8.5和3Hz:1H);3.53(宽dd,J=10和7.5Hz:1H);6.52(d,J=16.5Hz:1H);6.63(dd,J=16.5和7Hz:1H);8.89(s:2H);9.04(s:1H)。

实施例3:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶半乳糖二酸盐：

在氩下，将在22℃温度的碘代三甲基硅烷(0.2cm³,1.4mmol)加入0.29g(1.053mmol)(-)-3-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯在10cm³二氯甲烷中的溶液中。在该温度搅拌2小时以后，将所述反应混合物与15cm³5%氨水溶液相混合，并在22℃温度搅拌1小时，并使其沉降。分离水相，并用二氯甲烷萃取。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机相2次，然后经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下(2.7kPa)浓缩至干燥，得到0.1g橙色油。将半乳糖二酸(0.06g,0.28mmol)加入该油在10cm³甲醇中的溶液中，已经向所述溶液中加入了1cm³水。使所述混合物达到回流，并冷却至22℃的温度，在减压下(2.7kPa)浓缩至干燥。在有5cm³二异丙基醚存在下，研磨油状残余物，滤出形成的固体，然后在45℃在真空下(2.7kPa)干燥，得到0.094g(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶半乳糖二酸盐，为黄色固体形式。质谱(DCI):m/z=176(MH⁺)。

¹H NMR谱(300MHz,(CD₃)₂SO d6含有几滴CD₃COOD d4,δ按ppm计):1.82(m:1H);2.19(m:1H);2.98(dd,J=11和9Hz:1H);3.10(m:1H);3.21(m:1H);3.32(m:1H);3.43(dd,J=11和7.5Hz:1H);3.79(s:2H);4.24(s:2H);6.57(限制AB:2H);8.88(s:2H);9.05(s:1H)。

(R)-3-((E)-2-嘧啶-5-基乙烯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯可以如在实施例2中所述进行制备。

实施例4.合成(R)-3-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2)

规程A：向在-20至-30℃的(R)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200g,1.07mol)和三乙胺(167g,1.63mol)在甲苯(700mL)中的溶液中，逐滴加入甲磺酰氯(156g,1.36mol)，同时维持温度在-10至-20℃。将所述溶液温热至环境温度，并进行搅拌。每小时对反应液取样，并通过HPLC进行分析，以确认反应结束。在反应结束后，过滤所述悬浮液，以去除三乙胺盐酸盐。用约600mL稀碳酸氢钠水溶液洗涤滤液。在减压下干燥和浓缩有机层，得到2，为粘稠的油(260g,92%)，其不经进一步纯化地使用。¹H NMR(CDCl₃,400MHδ5.27(m,1H),3.44-3.76(m,4H),3.05(s,3H),2.26(m,1H),2.15(m,1H),1.47(s,9H)。

规程B：给反应器装入(R)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.00kg,10.7mol)、甲苯(8.70kg)和三乙胺(1.75kg,17.3mol)。用氮冲洗该反应器15min。搅拌所述混合物，并冷却至3℃。在连续冰浴冷却下，缓慢地加入甲磺酰氯(1.72kg,mol)(经历2h时段)(放热反应)(加入结束后，温度是14℃)。将所述混合物（现在是含有沉淀的三乙胺盐酸盐的粘稠物）搅拌12h，同时将它温热至20℃。GC和TLC分析(茚三酮染色)都指示，没有剩余原料。过滤所述混合物，以去除三乙胺盐酸盐，并将滤液返回反应器。然后用5%碳酸氢钠水溶液(2×3kg)洗涤滤液，对于每次洗涤，使用15min搅拌和15min沉降时间。得到的有机层经无水硫酸钠干燥，并过滤。如下在真空下从滤液中去除挥发物：首先在50℃4h，然后在环境温度10h。残余物称重为3.00kg(106%产率)，通过色谱和NMR分析证实与以前制备的样品相同，例外是，它含有甲苯。

实施例5.合成(R)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)丙二酸二乙酯(3)

制备A：向叔丁醇钾(187g,1.62mol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(1.19L)中的溶液中，加入丙二酸二乙酯(268g.1.67mol)，同时维持温度低于35℃。将所述溶液加热至40℃，并搅拌20-30min。加入(R)-3-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(112g,420mmol)，并将所述溶液加热至65℃，并搅拌6h。每2h对反应液取样，并通过HPLC进行分析，以确认反应结束。在反应结束后(10-12h)，将所述混合物冷却至约25℃。将去离子水(250mL)加入该溶液中，并通过加入2N盐酸(650mL)，调节pH至3-4。过滤得到的悬浮液，并加入水(1.2L)和氯仿(1.4L)。彻底混合所述溶液，并在减压下收集和蒸发氯仿层，得到黄色油。将所述油溶解在己烷(2.00L)中，并用去离子水(2x1.00L)洗涤。在减压下在50-55℃浓缩有机层，得到淡黄色油(252g)，¹H NMR分析指示，其是49.1%的3(123.8g)以及48.5%的丙二酸二乙酯(122g)和2%的1-甲基-2-吡咯烷酮(5g)。所述物质不经进一步纯化用于下一步。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ4.20(q,4H),3.63(m,1H),3.48(m,1H),3.30(m,1H),3.27(d,J=10Hz,1H),3.03(m,1H),2.80(m,1H),2.08(m,1H),1.61(m,1H),1.45(s,9H),1.27(t,6H)。

制备B：给维持在氮气氛下的反应器装入200标准强度的乙醇（200proof ethanol）(5.50kg)和在乙醇(7.00kg,21.6mol)中的21%(按重量计)乙醇钠。搅拌所述混合物，并温热至30℃。在20min时段内加入丙二酸二乙酯(3.50kg,21.9mol)。然后将所述反应混合物在40℃温热1.5h。加入(R)-3-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.00kg来自实施例2规程B的产物，10.7mol)在200标准强度的乙醇(5.50kg)中的溶液，并将得到的混合物回流(78℃)加热2h。GC和TLC分析(茚三酮染色)都指示，没有剩余原料。然后将搅拌的混合物冷却至25℃，用水(2.25kg)稀释，并用浓盐酸(1.27kg,12.9mol)在水(5.44kg)中的溶液缓慢地处理。用甲基叔丁基醚(MTBE)(14.1kg和11.4kg)洗涤该混合物2次，对于每次洗涤，使用15min搅拌和15min沉降时间。合并的MTBE洗液经无水硫酸钠(1kg)干燥，过滤，并在真空下在50℃浓缩6h。残余物(红色油)称重为4.45kg，通过GC分析测得含有49%的目标产物(从(R)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯开始，62%总产率)。

实施例6.合成(R)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)丙二酸(4)

规程A：向实施例3规程A的产物(232g)（含有123.8g(380mmol)3和121.8g(760mmol)丙二酸二乙酯）在四氢呋喃(1.2L)中的溶液中，加入21%氢氧化钾溶液(450g，在0.50L去离子水中)，同时维持温度低于25℃。将所述反应混合物加热至45℃，并搅拌1h。每小时对反应液取样，并通过HPLC进行分析，以确认反应结束。在反应结束后(2-3h)，将所述混合物冷却至约25℃。收集水层，并冷却至5℃。通过加入4N盐酸(750mL)，将pH调至2，并将得到的悬浮液在5-10℃保持30min。过滤混合物，并用己烷(1L)洗涤滤饼。用氯仿(1L)萃取水性滤液，并储存氯仿层。通过加热至40℃，将在过滤步骤中收集的固体重新溶解于氯仿(1L)中。过滤该溶液，以去除未溶解的无机固体。合并氯仿层，并在减压下在50-55℃浓缩，得到灰白色固体(15g)。合并所述固体，并溶解于乙酸乙酯(350mL)中，得到悬浮液，将其温热至55-60℃持续2h。趁热过滤该悬浮液，并用乙酸乙酯(2×150mL)和己烷(2×250mL)洗涤得到的滤饼，得到83.0g(80.1%)4，为白色固体，其不经进一步纯化用于下一步骤。¹H NMR(d₄-CH₃OH,400MHz)δ3.60(m,1H),3.46(m,1H),3.29-3.32(m,2H),2.72(m,1H),2.09(m,1H),1.70(m,1H),1.45(s,9H)。

规程B：在氮气氛下，向实施例3规程B的产物(4.35kg)（含有2.13kg(6.47mol)3）在四氢呋喃(13.9kg)中的溶液中，加入搅拌的、冷却的氢氧化钾(1.60kg,40.0mol)在去离子水(2.00kg)中的溶液，同时维持温度低于35℃。将所述反应混合物加热，并在40-45℃维持24h，在此时，GC和TLC分析指示反应结束。将该混合物冷却至25℃，并用MTBE(34kg)洗涤，其中使用15min搅拌和15min沉降时间。收集水层，并冷却至1℃。然后缓慢地加入浓盐酸(2.61kg,26.5mol)在去离子水(2.18kg)中的混合物，在加入过程中保持混合物的温度<15℃并在加入后保持15min。通过另外加入盐酸，将溶液的pH调至3.7。通过过滤来收集白色固体，用水(16kg)洗涤，并在环境温度真空干燥6天。干燥的固体称重为1.04kg。将滤液冷却至<10℃，并在保持于该温度的同时，通过加入更多的盐酸，降低pH(使用1.6L 6N盐酸；9.6mol；最终pH=2)。通过过滤来收集白色固体，用水(8L)洗涤，并在40℃真空干燥3天。干燥的固体称重为0.25kg。通过色谱法确定合并的固体(1.29kg,73%产率)与以前制备的样品相同。

实施例7.合成(R)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)乙酸(5)

规程A：将(R)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)丙二酸(83g)在1-甲基-2-吡咯烷酮(0.42L)中的溶液在氮下在110-112℃搅拌2h。每小时对反应液取样，并通过HPLC进行分析，以确认反应结束。在反应结束后，将反应液冷却至20-25℃。将该溶液与去离子水(1.00L)混合，并加入MTBE(1.00L)。分离各相，并收集有机层。用MTBE(1.00L)、然后用氯仿(1.00L)萃取水相。合并有机层，并在减压下在50-55℃浓缩，得到油。将该油溶解于MTBE(2.00L)中，并用0.6N盐酸(2×1.00L)洗涤2次。收集有机层，并在减压下在50-55℃浓缩，得到半固体。将所述半固体悬浮于1:4乙酸乙酯/己烷(100mL)中，加热至50℃，保持30min，冷却至-10℃，并过滤。在减压下浓缩滤液，得到油，将其溶解于MTBE(250mL)中，并用0.6N盐酸(2x100mL)洗涤2次。在减压下在50-55℃浓缩有机层，得到半固体，将其悬浮于1:4乙酸乙酯/己烷(50mL)中，加热至50℃，保持30min，冷却至-10℃，并过滤。收集固体，悬浮于己烷(200mL)中，并通过过滤进行收集，得到54.0g(77.6%)5。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ11.00(br s,1H),3.63(m,1H),3.45(M,1H),3.30(M,1H),2.97(m,1H),2.58(m,1H),2.44(m,2H),2.09(m,1H),1.59(M,1H),1.46(s,9H)。

规程B：将(R)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)丙二酸(1.04kg,3.81mol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(6.49kg)中的溶液在氮下在110℃搅拌5h，此时TLC和HPLC分析指示反应结束。将所述反应混合物冷却至25℃(4h)，并与水(12.8kg)和MTBE(9.44kg)相混合。剧烈搅拌所述混合物20min，允许各相分离(10h)。收集有机相，将水相与MTBE(9.44kg)相混合，搅拌15min，并进行沉降(45min)。收集有机相，将水相与MTBE(9.44kg)相混合，搅拌15min，并进行沉降(15min)。合并3个有机相，用1N盐酸(8.44kg份)洗涤3次，用水(6.39kg)洗涤1次，对于每次洗涤，使用15min搅拌和15min沉降时间。得到的溶液经无水硫酸钠(2.0kg)干燥，并过滤。在减压下在31℃浓缩滤液(2h)，得到固体。将该固体在真空下加热4h、在39℃加热4h和在25℃加热16h，剩下704g(81%)5(通过GC测得99.7%纯度)。

规程C(5的改进合成，使用2作为原料)：将搅拌的乙醇钠在乙醇(21重量%,343g,1.05mol)、乙醇(无水,300mL)和丙二酸二乙酯(168g,1.05mol)中的混合物加热至40℃持续1.5h。向该混合物中，加入(R)-叔丁基3-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1-甲酸酯(138g,0.592mol)在乙醇(100mL)中的溶液，并将所述反应混合物加热至78℃持续8h。用水(2.0L)稀释冷却的反应混合物，并用6M HCl(100mL)酸化至pH=3。用甲苯(1.0L)萃取含水的乙醇混合物，并在真空下浓缩有机相，得到230g红色油。将在85℃的红色油加入22.5重量%的氢氧化钾水溶液(748g,3.01mol)中。加入结束以后，使反应温度缓慢地升高至102℃，同时接着蒸馏乙醇。当反应温度已经达到102℃时，蒸馏已经平静下来，继续加热另外90min。将所述反应混合物冷却至环境温度，并用甲苯(2×400mL)洗涤。向该水层中加入600mL 6M盐酸，同时保持内部温度低于20℃。这导致沉淀物形成，在pH约4-5开始。过滤悬浮液，并用300mL水洗涤滤饼。在真空下干燥固体，得到77g(R)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)丙二酸，为灰白色固体(关于(R)-叔丁基3-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1-甲酸酯，54%产率)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz):3.47(m,1H);3.32(m,1H);3.24(m,1H);3.16(m,1H);3.92(m,1H);2.86(m,1H);1.95(m,1H);1.59(m,1H);1.39(s,9H)。

将(R)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)丙二酸(15g,55mmol)在甲苯(150mL)和二甲基亚砜(2mL)中的悬浮液加热至回流2h的时段。使该混合物达到环境温度，并用MTBE(150mL)稀释。用10%柠檬酸水溶液(2×200mL)洗涤有机溶液，并在真空下去除溶剂，得到11.6g(R)-2-(1-(叔丁氧基羰基)-吡咯烷-3-基)乙酸，为灰白色固体(92%产率)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz):δ12.1(s,1H);3.36-3.48(m,1H);3.20-3.34(m,1H);3.05-3.19(m,1H;2.72-2.84(m,1H);2.30-2.42(m,1H),2.22-2.30(m,2H);1.85-2.00(m,1H);1.38-1.54(m，1H),1.35(2,9H)。

实施例8.合成(R)-3-(2-羟乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(6)

规程A：将(R)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)乙酸(49.0g,214mmol)在四氢呋喃(THF)(200mL)中的溶液冷却至-10℃。将250mL(250mmol)在THF中的1M硼烷溶液缓慢地加入烧瓶中，同时维持温度低于0℃。将所述溶液温热至环境温度，并搅拌1h。每小时对溶液取样，并通过HPLC进行分析，以确认反应结束。在反应结束后，将溶液冷却至0℃，并在30分钟时段内逐滴加入10%氢氧化钠溶液(80mL)，以控制气体形成。用500mL 1:1己烷/乙酸乙酯溶液萃取该溶液。用饱和氯化钠溶液洗涤有机层，并用10g硅胶干燥。通过过滤去除硅胶，并用100mL 1:1己烷/乙酸乙酯洗涤。合并有机层，并在真空下浓缩，得到6(42g,91.3%)，为浅橙色油，其在静置后固化。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ3.67(m,2H),3.38-3.62(m,2H),3.25(m,1H),2.90(m,1H),2.25(m,1H),1.98-2.05(m,1H),1.61-1.69(m,2H),1.48-1.59(m,2H),1.46(s,9H)。

规程B：将硼烷-THF复合物(3.90kg或L在THF中的1M溶液,mol)缓慢地加入保持在氮气下的搅拌的(R)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)乙酸(683g,3.03mol)在THF(2.5kg)中的溶液中，并使用水浴保持温度在23-28℃。加入进行1.75h。继续在25℃搅拌1h，该时间以后，GC分析指示完全反应。将所述反应混合物冷却至<10℃，并维持低于25℃，同时缓慢地加入10%氢氧化钠水溶液(1.22kg)。加入进行40min。在25℃搅拌所述混合物1h，然后与1:1(v/v)庚烷/乙酸乙酯(7L)相混合。搅拌所述混合物15min，并允许分离成各相(1h)。取出有机相，将水相与第2份7L的1:1庚烷/乙酸乙酯部分相混合。将其搅拌15min，并允许分离成各相(20min)。再次取出有机相，并用饱和氯化钠水溶液(4.16kg)洗涤合并的有机相，其中使用15min混合时间和1h沉降时间。将有机相与硅胶(140g)相混合，并搅拌1h。加入无水硫酸钠(700g)，并将该混合物搅拌1.5h。过滤该混合物，并用1:1庚烷/乙酸乙酯(2L)洗涤滤饼。在真空下在<40℃浓缩滤液6h。得到的油称重为670g(103%产率)，且含有痕量的庚烷，但是通过NMR分析证实在其它方面与以前制备的6的样品相同。

实施例9：(R)-3-(2-(甲磺酰氧基)乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(7)

规程A：向(R)-3-(2-羟甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(41.0g,190mmol))的溶液中，加入在甲苯(380mL)中的三乙胺(40mL)，并冷却至-10℃。缓慢地加入甲磺酰氯(20.0mL,256mmol)，从而维持温度在-5至0℃左右。将所述溶液温热至环境温度，并搅拌1h。每小时对溶液取样，并通过HPLC进行分析，以确认反应结束。在反应结束后，过滤溶液，并用5%碳酸氢钠溶液(250mL)洗涤滤液。收集有机层，并用饱和氯化钠水溶液(250mL)洗涤。收集有机层，经硅胶(10g)干燥，并在真空下浓缩，得到7(53.0g,92.8%)，为浅黄色粘稠的油。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ4.26(t,J=6.8Hz,2H),3.41-3.63(m,2H),3.27(m,1H),3.02(s,3H),2.92(m,1H),2.28(m,1H),2.05(m,1H),1.83(m,2H),1.50-1.63(m,1H),1.46(s,9H)。

规程B：在氮气氛下，搅拌三乙胺(460g,4.55mol)和(R)-3-(2-羟甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(来自实施例7规程B的整个样品，3.03mol)在甲苯(5.20kg)中的溶液，并冷却至5℃。在1.25h内缓慢地加入甲磺酰氯(470g,4.10mol)，使用冰浴冷却，保持温度低于15℃。将该混合物逐渐温热(经历1.5h)至35℃，并维持该温度1.25h，在此时，GC分析指示反应结束。将该混合物冷却至25℃，并滤出固体，用甲苯(1.28kg)洗涤滤饼。与10%碳酸氢钠水溶液(4.0kg)一起搅拌滤液15min，允许各相分离30min。然后与饱和氯化钠水溶液(3.9kg)一起搅拌有机相30min，并允许各相分离20min。将有机相与硅胶(160g)相混合，并搅拌1h。加入无水硫酸钠(540g)，并将该混合物搅拌另外40min。然后过滤该混合物，并用甲苯(460g)洗涤滤饼。在真空下在50℃浓缩滤液5h，将得到的油在真空下在23℃保持另外8h。这剩下798g 7，通过GC分析证实93%纯度。

实施例10：合成(R)-3-乙烯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(9)

规程A：将(R)-3-((甲磺酰氧基)乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(49.0g,167mmol)、碘化钠(30.0g,200mmol)和1,2-二甲氧基乙烷(450mL)的溶液在50-60℃搅拌4h。每小时对溶液取样，并通过HPLC进行分析，以确认反应结束。在反应结束后，将溶液冷却至-10℃，加入固体叔丁醇钾(32.0g,288mmol)，同时维持温度低于0℃。将所述反应混合物温热至环境温度，并搅拌1h。每小时对该混合物取样，并通过HPLC进行分析，以确认反应结束。在反应结束后，通过硅藻土垫(25g干基)过滤该混合物。用1,2-二甲氧基乙烷(100mL)洗涤滤饼。在真空下浓缩合并的滤液，得到含有悬浮的固体的橙色油。将该油溶解于己烷(400mL)中，搅拌30min，并过滤，以去除固体。有机层经硅胶(10g)干燥，并在真空下浓缩，得到9(26.4g,82.9%)，为无色油。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ5.77(m,1H),5.10(dd,J=1.2Hz,J=16Hz,1H),5.03(dd,J=1.2Hz,J=8.8Hz,1H),3.41-3.59(m,2H),3.29(m,1H),3.05(m,1H),2.78(m,1H),2.01(m,1H),1.62-1.73(m,1H),1.46(m,9H)。

规程B：将(R)-3-(2-(甲磺酰氧基)乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(792g实施例7规程B的产物，约2.5mol)、碘化钠(484g,3.27mol)和1,2-二甲氧基乙烷(7.2L)的溶液在氮下在55℃搅拌4.5h，在此时，GC分析指示反应结束。将溶液冷却至<10℃，并逐份加入固体叔丁醇钾(484g,4.32mol)(1.25h加入时间)，同时维持温度低于15℃。将所述反应混合物在5℃搅拌1h，缓慢地温热(6h)至20℃，并在20℃搅拌1h。通过硅藻土垫(400g干重)过滤溶液。用1,2-二甲氧基乙烷(1.6kg)洗涤滤饼。在真空下浓缩合并的滤液，并与庚烷(6.0L)一起搅拌半固体残余物2h。通过过滤来去除固体(用440mL庚烷洗涤滤饼)，并在真空下在20℃浓缩滤液，得到455g 9(90.7%纯度)。在20-23托耳分级蒸馏该物质的样品(350g)，得到296g纯化的9(bp 130-133℃)(通过GC分析，证实>99%纯度)。

实施例11：合成(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶(11)

用氮将(R)-叔丁基3-乙烯基吡咯烷-1-甲酸酯(25g,127mmol)、5-溴嘧啶(30.3g,190mmol)、1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁(2.11g,3.8mmol)和醋酸钠(18.8gr,229mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(250mL)中的溶液鼓泡1h，并加入乙酸钯(850mg,3.8mmol)。以40℃/h的速率，将所述反应混合物加热至150℃，并搅拌16h。将该混合物冷却至10℃，并用水(750mL)猝灭，同时维持内部温度低于20℃。加入MTBE(300mL)，随后加入硅藻土(40g,干重)。将该悬浮液在环境温度搅拌1h，并通过硅藻土床进行过滤。用MTBE(2×100mL)洗涤残余物，并将滤液转移至配有顶置式搅拌器的2-L容器，装载活性炭(40g)。将该悬浮液在环境温度搅拌2h，并通过硅藻土进行过滤。用MTBE(2×100mL)洗涤残余物，并在真空中浓缩滤液，得到28.6g橙色油。将该油溶解于MTBE(100mL)中，并加入(2.0g,1.46mmol硫醇/g,Silicycle Inc.)。将该悬浮液在氮下在环境温度搅拌3h，通过细滤器过滤，并保持在玻璃容器中。

在30min的时段内向6M HCl溶液(70mL)中加入滤液，同时维持内部温度在20℃至23℃之间。将所述混合物剧烈搅拌1h，并去除有机层。用45wt%KOH(50mL)碱化剩余的水层，并用氯仿(300mL)萃取得到的悬浮液1次。在真空中蒸发溶剂(浴温在45℃)，得到16.0g(71.8%)(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱，为红色油，立即将其溶解于异丙醇(50mL)中，并用于形成盐。

实施例12：合成(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐

在55℃，向柠檬酸(17.6g,91.6mmol)在异丙醇(250mL)和水(25mL)中的溶液中，逐滴加入(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(16.0g,91.2mmol)在异丙醇(50mL)中的溶液。给得到的溶液接种(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐形式II(200mg)，并搅拌15min。将该悬浮液加热至65℃，并搅拌1h，然后以-10℃/h将悬浮液冷却至20℃，并在20℃静置12h。通过粗玻璃滤器，过滤悬浮液，并用异丙醇(64mL)和甲基叔丁基醚(64mL)洗涤收集的固体。在真空中在70℃干燥得到的自由流动的褐色固体，得到17.4g(36%)(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐(形式II和III的混合物)，为褐色固体。¹H NMR(D₂O,400MHδ8.85(s,1H),8.70(s,1H),6.50(d,J=17Hz,1H),6.35(dd,J=7Hz,J=17Hz,1H),3.43-3.50(m,1H),3.34-3.43(m,1H),3.20-3.30(m,1H),3,08-3.19(m,1H),3.00-3.08(m,1H),2.77(d;J=16Hz,2H),2.65(d,J=16Hz,2H),2.16-2.26(m,1H),1.80-1.92(m,1H)。

实施例13：(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶的盐酸加成盐的筛选

将(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱溶解于乙酸异丙酯、四氢呋喃、甲基异丁基酮、乙腈或异丙醇中。用以下述形式之一递送的1当量的HCl，处理得到的溶液：在二***中的1M溶液，在水中的1M溶液，在异丙醇中的5M溶液，或在二噁烷中的4M溶液。将该混合物在50℃/环境温度(4h循环)温育24h。在实验产生稳定的固体的情况下，通过XRPD分析该物质。

实施例14：(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶的“单”酸加成盐的筛选

将(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(10mg,0.057mmol)溶解于乙酸异丙酯或乙腈中。用1当量的对应酸(参见下面)处理该溶液，温热至50℃，并缓慢地冷却至环境温度过夜。然后在真空下在没有加热下蒸发溶剂，并通过XRPD分析残余物。然后将固体保存在40℃和75%相对湿度的湿度室中1周，并通过XRPD重新分析。

在实验没有产生结晶固体的情况下，使样品在四氢呋喃和异丙醇中成熟，并在得到固体的情况下，通过XRPD分析该固体，并在湿度室中保存1周，以评估稳定性。

使用上述的形成“单”酸加成盐的规程，筛选了下述酸：盐酸、硫酸、甲磺酸、马来酸、磷酸、1-羟基-2-萘甲酸、酮戊二酸、丙二酸、L-酒石酸、富马酸、柠檬酸、L-苹果酸、马尿酸、L-乳酸、苯甲酸、琥珀酸、脂肪酸、醋酸、烟酸、丙酸、乳清酸、4-羟基苯甲酸和二-对甲苯酰基-D-酒石酸。

实施例15：(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶的“半”酸加成盐的筛选

将(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(10mg,0.057mmol)溶解于乙酸异丙酯或乙腈中。用0.5当量的对应酸(参见下面)处理该溶液，温热至50℃，并缓慢地冷却至环境温度过夜。然后在真空下在没有加热下蒸发溶剂，并通过XRPD分析残余物。然后将固体保存在40℃和75%相对湿度的湿度室中1周，并通过XRPD重新分析。

在实验没有产生结晶固体的情况下，使这些样品在四氢呋喃和异丙醇中成熟，并在得到固体的情况下，通过XRPD分析该固体，并在湿度室中保存1周，以评估稳定性。

使用上述的形成“半”酸加成盐的规程，筛选了下述酸：硫酸、马来酸、磷酸、酮戊二酸、丙二酸、L-酒石酸、富马酸、柠檬酸、L-苹果酸、琥珀酸、脂肪酸和二-对甲苯酰基-D-酒石酸。

实施例16：(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶的选定盐的一般放大（scale-up）规程

选择许多(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶盐，以放大至约200mg，用于进一步表征。这些盐形式包括：柠檬酸盐(单盐和半盐)、乳清酸盐(单盐)、4-羟基苯甲酸盐(单盐)、二-对甲苯酰基-D-酒石酸盐(单盐和半盐)、马来酸盐(单盐和半盐)和富马酸盐(单盐和半盐)。

将(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(189mg,1.077mmol,溶解于乙腈中。然后用1.1当量（用于制备单盐）和0.5当量（用于制备半盐）的对应酸处理该溶液。将该混合物温热至50℃，并缓慢地冷却至环境温度过夜。

过滤得到的固体，并在抽吸下干燥，然后通过XRPD和¹H-NMR进行分析。进行TGA实验，以测定水或其它溶剂的含量，并进行DSC实验，以确定分离的形式的稳定性和每种盐的新形式的可能性。使用DVS实验来评估盐的吸湿性。还测量了每种盐的HPLC纯度和热力学溶解度。

实施例17：(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐形式I

根据单盐筛选规程，从乙酸异丙酯，通过蒸发和在四氢呋喃中成熟，得到(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐形式I。或者，根据单盐筛选规程，从乙腈，通过蒸发和在异丙醇中成熟，得到单柠檬酸盐形式I。

实施例18:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐形式II

将(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐形式II和III混合物在甲醇中的悬浮液加热至50℃，并搅拌1h。随后以-30℃/h的速率将该悬浮液冷却至20℃，然后立即以+30℃/h的速率加热回50℃。在达到50℃以后，停止加热，并冷却悬浮液，在环境温度搅拌16h。过滤该悬浮液，用另外的甲醇冲洗在烧瓶中的任何残余物。在真空中在70℃干燥残余物16h，得到(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐形式II。

实施例19：无定形的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐

通过冷冻干燥(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐形式II在水中的溶液，制备无定形的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐。

实施例20:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐形式III

通过使无定形的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐在环境温度静置2小时，制备(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐形式III。

实施例21:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐形式IV

通过使形式II在丙酮/甲基异丁基酮中成熟，得到(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单柠檬酸盐形式IV。

实施例22:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-(R)-(-)-乳清酸盐

将乳清酸(0.965g,6.18mmol)固体加入在圆底烧瓶内的搅拌的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(1.084g,6.18mmol)在2-丙醇(10mL)中的热溶液中。将得到的固体混合物在回流下加热5min，冷却至环境温度，并搅拌过夜。过滤浅米色粉末，用2-丙醇(10,8mL)洗涤，并在真空干燥箱(抽气)中在50℃干燥20h，得到1.872g(77.9%)灰白色至白色的凹凸不平的固体，熔点230-233℃。¹H NMR(D₂O):δ8.80(s,1H),8.60(s,2H),6.40(d,1H),6.25(dd,1H),5.93(s,1H,乳清酸的=CH，指示单盐化学计量学),3.38(dd,1H),3.29(m,1H),3.17(m,1H),3.04(m,1H),2.97(dd,1H),2.13(m,1H),1.78(m,1H)。元素分析结果提示过量的乳清酸的存在和1:1.1的碱:乳清酸盐化学计量学。元素分析：C₁₀H₁₃N₃的计算值。C₅H₄N₂O₄:(C,54.38%;H,5.17%,N,21.14%)；实测：(C,53.49%,53.44%;H,5.04%,5.10%;N,20.79%,20.84%)。

实施例23:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-乳清酸盐形式I

将(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(189mg,1.077mmol，新鲜制备)溶解于乙腈(5ml)中。然后用在环境温度的1.1当量的乳清酸溶液(1M在乙醇中)处理该溶液。将该混合物温热至50℃，并缓慢地冷却至环境温度过夜。过滤得到的固体，并在抽吸下干燥，然后通过XRPD和¹H-NMR进行分析。

实施例24:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-马来酸盐形式I

将(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(189mg,1.077mmol，新鲜制备)溶解于乙腈(5ml)中。然后用在环境温度的1.1当量的马来酸溶液(1M在四氢呋喃中)处理该溶液。将该混合物温热至50℃，并缓慢地冷却至环境温度过夜。过滤得到的固体，并在抽吸下干燥，然后通过XRPD和¹H-NMR进行分析。

实施例25:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-马来酸盐形式II

将(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-马来酸盐(形式I)在乙醇中制作浆料，并在50℃/室温（4h循环）温育48h。固体的XRPD分析证实形式II。

实施例26:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-草酸盐

将草酸(0.516g,5.73mmol)固体加入搅拌的、温热的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶(1.00g,5.70mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中。在进一步温热溶液以后，盐沉淀出来。为了促进搅拌，用乙醇(6mL)稀释该混合物，并用药刀破碎团块。将该混合物冷却至环境温度，并静置过夜。过滤浅米色粉末，用乙醇洗涤，并在真空干燥箱中在50℃干燥6h，得到1.40g(92.3%)乳白色的松散粉末，熔点149-151℃.¹HNMR(DMSO-d₆):δ9.03(s,1H),8.86(s,2H),6.56(m,2H),3.40(dd,1H),3.31(m,1H),3.18(m,1H),3.08(m,1H),2.96(dd,1H),2.15(m,1H),1.80(m,1H),¹³C NMR(DMSO-d₆):δ164.90(草酸的C=O),156.97,154.17,133.66,130.31,124.20,48.70,44.33,40.98,30.42。元素分析：C₁₀H₁₃N₃的计算值.C₂H₂O₄(C,54.33%;H,5.70%,N,15.84%)；实测(C,54.39%,54.29%;H,5.68%,5.66%;N,15.68%,15.66%)。

实施例27:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶半-二-对甲苯酰基-D-酒石酸盐

根据“半”盐筛选规程，如下从乙酸异丙酯或乙腈得到固体二-对甲苯酰基-D-酒石酸盐：通过蒸发，或通过蒸发乙酸异丙酯，随后用四氢呋喃成熟，或通过蒸发乙腈，随后用异丙醇成熟。

使用下述规程来制备更大量的盐。将(+)-O,O’-二-对甲苯酰基-D-酒石酸(1.103g,2.85mmol)固体加入搅拌的、温热的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(1.007g,5.74mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中。小量不溶性的固体沉淀出来，其在加热所述混合物至回流以后没有溶解。将所述浅琥珀色溶液(含有小量细固体)搅拌4-5h，然后在环境温度静置过夜。缓慢地沉淀出盐，为浅米色粉末。搅拌15天以后，过滤固体，用乙醇(5mL)洗涤，并在真空干燥箱中在50℃干燥21h，得到1.50g(71.5%)灰白色至浅黄色的淡色粉末，熔点178-180℃。¹HNMR(DMSO-d₆)证实1:0.5的碱:酸盐化学计量学。¹H NMR(DMSO-d₆):δ10.30(宽s,~1H),9.02(s,1H),8.80(s,2H),7.87(d,2H,-C₆H₄-，指示半盐化学计量学),7.27(d,2H,-C₆H₄-，指示半盐化学计量学),6.40(dd,1H),6.34(d,1H),5.58(s,1H,酸部分的CH(CO₂H)-O-，指示半盐化学计量学),3.21(dd,1H),3.14(m,1H),3.00(m,1H),2.86(m,1H),2.75(dd,1H),2.30(s,3H,酸部分的-CH₃，指示半盐化学计量学),1.93(m,1H),1.61(m,1H)。

实施例28:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶半-二-对苯甲酰基-D-酒石酸盐

将(+)-O,O’-二-苯甲酰基-D-酒石酸(1.025g,2.72mmol)固体加入搅拌的、温热的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(1.003g,5.72mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中。在热板上将该混合物加热至接近回流，生成浅琥珀色溶液。将得到的溶液冷却至环境温度，并静置过夜。因为不存在固体，在通风橱中缓慢地蒸发溶液，得到黄褐色-褐色胶状固体。加入乙酸异丙酯(10mL)，并用药刀刮擦和搅拌，沉积出浅米色固体。搅拌所述混合物过夜。过滤固体，用乙酸异丙酯(2x5mL)洗涤，并在真空干燥箱中在50℃干燥24h，得到1.93g(95.2%)灰白色粉末，熔点155-160℃。¹H NMR(DMSO-d₆)证实1:0.5碱:酸盐化学计量学。¹H NMR(DMSO-d₆):δ10.25(宽s,~1H),9.02(s,1H),9.80(s,2H),7.98(d,2H C₆H₅-),7.57(m,1H,C₆H₅-),7.48(m,2H,C₆H₅-),6.38(m,2H),5.61(s,1H,酸部分的-CH(CO₂H)-O-，指示半盐化学计量学),3.22(dd,1H),3.14(dt,1H),3.00(dt,1H),2.88(m,1H),2.77(dd,1H),1.92(m,1H),1.61(m,1H)。

实施例29:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶半-二-对茴香酰基-D-酒石酸盐

将(+)-二-对茴香酰基-D-酒石酸(1.199g)固体加入搅拌的、温热的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(0.999g)在乙醇(10mL)中的溶液中。搅拌和加热得到的溶液（存在小量固体），以尝试溶解所有固体。所述溶液变成厚团块。在环境温度静置4-5h以后，加入另外的乙醇(10mL)。将含有浅米色至乳色固体的混合物搅拌过夜。过滤固体，用乙醇(10mL)洗涤，并在真空干燥箱中在50℃干燥21h，得到1.91g(87.3%)白色粉末，熔点173-177℃。¹H NMR(DMSO-d₆)证实1:0.5碱:酸盐化学计量学。¹H NMR(DMSO-d₆):δ10.20(宽s,~1H),9.02(s,1H),8.80(s,2H),7.93(d,2H,-C₆H₄-，指示半盐化学计量学),7.00(d,2H,-C₆H₄-，指示半盐化学计量学),6.40(dd,1H),6.34(d,1H),5.56(s,1H,酸部分的CH(CO₂H)-O-，指示半盐化学计量学),3.76(s,3H,酸部分的-OCH₃，指示半盐化学计量学),3.22(dd,1H),3.14(m,1H),3.01(m,1H),2.85(m,1H),2.75(m,1H),1.92(m,1H),1.61(m,1H)。

实施例30:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-二-对甲苯酰基-D-酒石酸盐

根据“单”盐筛选规程，通过蒸发，从乙酸异丙酯或乙腈得到固体二-对甲苯酰基-D-酒石酸盐。

使用下述规程来制备更大量的盐。将(+)-O,O’-二-对甲苯酰基-D-酒石酸(2.205g,5.71mmol)固体加入搅拌的、温热的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(1.000g,5.70mmol)在乙醇(21mL)中的溶液中。盐立即沉淀出来。在轻轻加热以后，在热板上搅拌混合物至接近回流，将得到的混合物冷却至环境温度。过滤得到的固体，用乙醇(3×5mL)洗涤，并在真空干燥箱中在50℃干燥13h，得到3.081g(96.1%)浅米色粉末，熔点181-184℃。¹H NMR(DMSO-d₆)证实1:1盐化学计量学。¹H NMR(DMSO-d₆):δ9.60(宽s,~1H),9.03(s,1H),8.82(s,2H),7.83(d,4H,-C₆H₄-，指示单盐化学计量学),7.27(d,4H,-C₆H₄-，指示单盐化学计量学),6.44(d,2H),5.62(s,2H,酸部分的CH(CO₂H)-O-，指示单盐化学计量学),3.30(dd,1H),3.23(m,1H),3.09(m,1H),2.95(m,1H),2.85(dd,1H),2.33(6H,酸部分的-CH₃，指示单盐化学计量学),2.02(m,1H),1.69(m,1H)。

实施例31:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-二-对苯甲酰基-D-酒石酸盐

将(+)-O,O’-二-苯甲酰基-D-酒石酸(2.05g,5.72mmol)固体加入在圆底烧瓶内的搅拌的、温热的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(0.999g,5.69mmol)在乙醇(21mL)中的溶液中，生成溶液。在搅拌并进一步加热以后，在温热的溶液中沉淀出盐。在2天周末内，将得到的混合物冷却至环境温度。在布氏漏斗上过滤得到的固体，用乙醇(4×5mL)洗涤，并在真空干燥箱(抽气)中在50℃干燥13h，得到2.832g(93.0%)浅米色至灰白色粉末，熔点165-171℃。¹H NMR(DMSO-d₆)证实1:1盐化学计量学。¹H NMR(DMSO-d₆):δ9.65(宽s,~1H),9.03(s,1H),9.83(s,2H),7.94(d,4H,C₆H₅-),7.60(m,2H,C₆H₅-),7.50(m,4H,C₆H₅-),6.45(m,2H),5.67(s,2H,酸部分的-CH(CO₂H)-O-，指示单盐化学计量学),3.31(dd,1H),3.22(m,1H),3.08(m,1H),2.96(m,1H),2.85(dd,1H),2.01(m,1H),1.69(m,1H)。

实施例32:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-(1S)-10-樟脑磺酸盐

将(1S)-(+)-10-樟脑磺酸(1.329g,5.72mmol)固体加入在圆底烧瓶内的搅拌的、温热的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(1.00g)在2-丙醇(23mL,5.70mmol)中的溶液中。在冷却至环境温度以后，没有固体沉淀出来。将溶液静置过夜。观察到含有白色固体的凝胶状物。在搅拌2天以后，用2-丙醇(10.5mL)稀释该混合物，因为难以搅拌该果冻样白色团块。搅拌过夜以后，在布氏漏斗上过滤得到的白色粉末，用2-丙醇(5mL)洗涤(注：所述固体似乎在2-丙醇中具有某种溶解度)，并在真空干燥箱(抽气)中在50℃干燥6h，得到1.47g(63.2%)白色粉末，熔点172-173℃。¹H NMR(DMSO-d₆)证实1:1盐化学计量学。静置7天以后，在结晶液中观察到第二批浅米色针状物。过滤该物质，用2-丙醇(10mL)洗涤，并在真空干燥箱(抽气)中在50℃干燥21h，得到0.245g浅米色针状物，熔点173-174℃。¹H NMR(DMSO-d₆):δ9.03(s,1H),8.87(s,2H),6.57(m,2H),3.41(dd,1H)3.33(m,1H,被H₂O部分地掩蔽),3.21(m,1H),3.10(m,1H),2.98(dd,1H),2.89(d,1H,酸部分的-CH₂-，指示单盐化学计量学),2.64(m,1H),2.41(d,1H,酸部分的-CH₂-，指示单盐化学计量学),2.25(t,0.5H),2.20(t0.5H),2.15(m,1H),1.93(t,1H),1.82(m,3H),1.28(m,2H,酸部分的-CH₂-，指示单盐化学计量学),1.03(s,3H,酸部分的-CH₃，指示单盐化学计量学),0.73(s,3H,酸部分的-CH₃，指示单盐化学计量学)。

实施例33:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-(1R,2S)-(+)-樟脑酸盐

将(1R,2S)-(+)-樟脑酸(1.149g,5.74mmol)固体加入在圆底烧瓶内的搅拌的、温热的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(1.00g,5.70mmol)在乙醇(14mL)中的溶液中。加热后，所有固体溶解，得到黄色溶液。在环境温度静置过夜以后，没有沉淀形成。通过旋转蒸发，将溶液浓缩成琥珀色-褐色泡沫，将其在真空下在50℃(抽气)干燥6h，得到2.098g粘稠的琥珀色油。加入乙酸异丙酯(10mL)，并将溶液在环境温度静置过夜。有一些证据表明在胶状的红色-琥珀色油中的晶体成核（neucleation）。加入更多的乙酸异丙酯(10mL)和2-丙醇(20滴)，并将该混合物轻轻加热和搅拌48h。用药刀破碎得到的乳状的奶油色的固体（含有一些橙色团块），并搅拌所述混合物(无色液体)过夜。在布氏漏斗上过滤灰白色固体，用冷的乙酸异丙酯(10mL)洗涤，并在真空干燥箱(抽气)中在50℃干燥21h，得到2.034g(94.9%)灰白色至奶油色粉末，熔点157-159℃。¹H NMR(DMSO-d₆)证实1:1盐化学计量学。¹H NMR(DMSO-d₆):δ9.00(s,1H),8.85(s,2H),6.58(dd,1H),6.47(d,1H),3.17(dd,1H),3.08(m,1H),2.97(m,1H),2.92(dd,1H)2.74(dd,1H),2.61(dd,1H),2.30(六重峰,1H),2.00(m,2H),1.65(m,2H),1.32(m,1H),1.15(s,3H,酸部分的-CH₃，指示单盐化学计量学),1.07(s,3H,酸部分的-CH₃，指示单盐化学计量学),0.75(s,3H,酸部分的-CH₃，指示单盐化学计量学)。

实施例34:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-二-对茴香酰基-D-酒石酸盐

将(+)-二-对茴香酰基-D-酒石酸(2.388g,5.71mmol)固体加入在圆底烧瓶内的搅拌的、温热的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(1.008g,5.75mmol)在乙醇(22mL)中的溶液中。在已经加入所有(+)-二-对茴香酰基-D-酒石酸之前，盐沉淀出来。所述盐在加热后没有溶解，但是固体的外观发生变化，转变成松散的浅白色粉末。将该混合物冷却至环境温度，并搅拌48h。在布氏漏斗上过滤得到的固体，用乙醇(5×5mL)洗涤，并在真空干燥箱(抽气)中在50℃干燥13h，得到3.20g(94.4%)灰白色至白色白垩样粉末，熔点173-176℃。¹H NMR(DMSO-d₆)证实1:1盐化学计量学。¹H NMR(DMSO-d₆):δ9.65(宽s,~1H),9.03(s,1H),8.82(s,2H),7.89(d,4H,-C₆H₄-，指示单盐化学计量学),7.01(d,4H,-C₆H₄-，指示单盐化学计量学),6.44(m,2H),5.60(s,2H,酸部分的CH(CO₂H)-O-，指示单盐化学计量学),3.79(s,6H,酸部分的-OCH₃，指示单盐化学计量学),3.30(dd,1H),3.22(m,1H),3.09(m,1H),2.95(m,1H),2.84(m,1H),2.01(m,1H),1.69(m,1H)。

实施例35:(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶单-(R)-(-)-Phencyphos盐

将(R)-(-)-Phencyphos(1.391g,5.77mmol)固体加入在圆底烧瓶内的搅拌的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游离碱(1.006g,5.73mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中。在环境温度搅拌后大部分固体溶解，且在轻轻加热下所有固体溶解。将搅拌的琥珀色溶液加热至回流，冷却至环境温度，并静置过夜。在布氏漏斗上过滤得到的白色针样晶体，用冷乙醇(5mL)洗涤，并在真空干燥箱(抽气)中在50℃干燥18h，得到0.811g(33.9%)灰白色晶体，熔点197-201℃。¹H NMR(DMSO-d₆)证实1:1盐化学计量学。¹H NMR(DMSO-d₆):δ9.81(宽s,~1H),9.02(s,1H),8.85(s,2H),7.27(m,5H,C₆H₅-),6.56(dd,1H),6.48(d,1H),5.00(d,1H,酸部分的-O-CH-，指示单盐化学计量学),4.00(d,1H,酸部分的-O-CH₂-，指示单盐化学计量学),3.48(dd,1H,酸部分的-O-CH₂-，指示单盐化学计量学),3.36(dd,1H),3.30(m,1H),3.17(m,1H),3.07(m,1H),2.93(dd,1H),2.12(m,1H),1.78(m,1H),0.79(s,3H,酸部分的-CH₃，指示单盐化学计量学),0.60(s,3H,酸部分的-CH₃，指示单盐化学计量学)。

实施例36：在IBS中的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶肠溶制剂

使用5mg化合物A胶囊剂进行试验。合并从2个子批制成的胶囊剂(共120单位)，并表征，以产生批次释放数据。以罩外观、ID、试验(90-110%)、相关物质(按照未包衣的胶囊剂CofA)和溶解度(美国药典关于延迟释放的规范)的方式，表征批次。

对包衣的活性成分批次进行短期稳定性研究，以支持贮存期限覆盖预期的给药时段。在受控的环境条件(15-25℃)下，将胶囊剂散装保存在6个玻璃瓶或HDPE容器(10单位/容器)中，在2个时间点(例如7和35天)进行分析。使用这些数据来支持贮存期限覆盖包衣和给药之间的总时间。

另外，进行短期‘使用中’稳定性研究，以支持贮存期限覆盖产品的患者包装，例如Pharmadose或Venalink Cold Seal构型，用于预期的给药时段。在受控的环境条件(15-25℃)下保存胶囊剂，在1个时间点(例如8天)进行分析。

使用药典崩解方法(按照USP<701>)，初步表征肠溶包衣的胶囊剂制剂的酸抗性。另外，对肠溶包衣的化合物A胶囊剂进行药典的2阶段酸-缓冲液溶解度试验(按照USP<711>)，其中使胶囊剂处于酸性条件，以证实包衣保持在合适的位置，然后转移至pH 6.8介质，以证实药物从肠溶包衣的释放。选择适当的溶解介质，以确保实现渗漏条件。

实施例37：(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶的结合结果

化合物A是α₄β₂和α₃β₄神经元烟碱受体的激动剂。在人α₄β₂中，化合物A表现出17nM的Ki，在大鼠α₄β₂中，表现出34nM的Ki。

细胞系

在含有10%马血清(Gibco brl)、5%胎牛血清(Hyclone,LoganUT)、1mm丙酮酸钠、4mm l-谷氨酰胺的Dulbecco氏改良的伊格尔培养基(Gibco/brl)中，将Sh-ep1/人α4β2(Eaton等人,2003)、sh-ep1/人α4β4(Gentry等人,2003)、sh-ep1/α6β3β4α5(Grinevich等人,2005)、te671/rd和sh-sy5y细胞系(来自Ron Lukas博士,BarrowNeurological Institute,St.Joseph’s Hospital and Medical Center,Phoenix,Arizona)维持在增殖生长期。为了维持稳定的转染子，给α4β2和α4β4细胞培养基补充0.25mg/ml zeocin和0.13mg/ml潮霉素B。使用0.25mg/ml zeocin、0.13mg/ml潮霉素B、0.4mg/ml遗传霉素和0.2mg/ml杀稻瘟素，维持α6β3β4α5细胞的选择。

在含有10%胎牛血清(Hyclone,Logan UT)、1mm丙酮酸钠、4mm l-谷氨酰胺、0.4mg/ml遗传霉素、0.2mg/ml潮霉素B的Dulbecco氏改良的伊格尔培养基(Gibco/brl)中，将HEK/人α7/RIC3细胞(来自J.Lindstrom,U.Pennsylvania,Philadelphia,Pennsylvania)维持在增殖生长期。

受体结合试验

从大鼠组织制备膜。从分析生物学服务公司（analytical bioloticalservices,incorporated）(ABS,Wilmington,Delaware)得到大鼠皮层。从雌性Sprague-Dawley大鼠切离组织，冷冻，并干冰上运输。在-20℃保藏组织，直到需要用于膜制备。合并来自10只大鼠的皮层，并在10体积(重量:体积)的冰冷的制备缓冲液(KCl,11mM;KH₂PO₄,6mM;NaCl 137mM;Na₂HPO₄ 8mM;HEPES(游离酸),20mM；碘乙酰胺,5mM;EDTA,1.5mM;0.1mM PMSF pH 7.4)中通过polytron(Kinematica gmbh,Switzerland)匀浆化。将得到的匀浆物在4℃在40,000g离心20分钟，并将得到的沉淀物重新悬浮于20体积的冰冷的水中。在4℃温育60-分钟以后，通过在4℃在40,000g离心20分钟，收集新的沉淀物。将最终的沉淀物重新悬浮于制备缓冲液中，并在-20℃保存。在试验当天，融化组织，在40,000g离心20分钟，然后重新悬浮于PBS(Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水,Life Technologies,pH 7.4)中，至2-3mg蛋白/ml的终浓度。使用Pierce BCA蛋白测定试剂盒(Pierce Biotechnology,Rockford,IL)，使用牛血清白蛋白作为标准品，测定蛋白浓度。

从克隆细胞系制备膜。将细胞收获在冰冷的PBS（pH 7.4）中，然后用Polytron(Brinkmann Instruments,Westbury,NY)匀浆化。将匀浆物在40,000g离心20分钟(4℃)。将沉淀物重新悬浮于PBS中，并使用Pierce BCA蛋白测定试剂盒(Pierce Biotechnology,Rockford,IL)测定蛋白浓度。

与膜制品中的受体的竞争结合。使用从公开的规程(Lippiello和Fernandes,1986;Davies等人,1999)改进的标准方法，在膜上测定与烟碱受体的结合。简而言之，从冷冻储备物(大约0.2mg蛋白)重构膜，并在有竞争剂化合物(0.001nM至100mM)和放射性配体存在下在冰上在150ml试验缓冲液(PBS)中温育2h。将[³H]-烟碱(L-(-)-[N-甲基-3H]-烟碱、69.5Ci/mmol,Perkin-Elmer Life Sciences)用于人α4β2结合研究。将[³H]-地棘蛙素(52Ci/mmol,Perkin-Elmer Life Sciences)用于对其它受体亚型的结合研究。通过在多歧管（multimanifold）组织采集器(Brandel,Gaithersburg,MD)上快速过滤，终止温育，其中使用在0.33%聚乙烯亚胺(w/v)中预浸渍的GF/B过滤器来减少非特异性的结合。洗涤过滤器3次，并通过液体闪烁计数来测定保留的放射性。

结合数据分析。将结合数据表示为总对照结合的百分比。取每个点的副本的平均值，并相对于药物浓度的对数绘图。使用GraphPadPrism软件(GraphPAD,San Diego,CA)，通过最小二乘法非线性回归，测定IC₅₀(产生50%结合抑制的化合物浓度)。使用Cheng-Prusoff方程式(Cheng和Prusoff，1973)，计算K_i。

实施例38：在IBS中的(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶

已经描述了在从背侧运动迷走神经核伸出至肠的不同部分中的神经元中的烟碱α₄β₂介导的药理学作用。在自主神经***中，α₃β₄受体似乎存在于肠嗜铬细胞上。在胃肠能动性受损的情况下，靶向这些亚型的激动剂可能改善病理状态。参见：Lee K,Miwa S,Koshimura K,Ito A.Characterization of nicotinic acetylcholine receptors on culturedbovine adrenal chromaffin cells using modified L-[3H]nicotine bindingassay.Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol.1992;345(4):363-9；和Racke K,Schworer.Nicotinic and muscarinic modulation of5-hydroxytryptamine(5-HT)release from procine and canine smallintestine.Clin Investig.1992;70:190-200。

在临床前，在2个神经性疼痛动物模型中，化合物A的重复施用会造成显著的镇痛。更具体地，化合物A在链脲霉素诱发的糖尿病异常疼痛模型和化学疗法诱发的神经性疼痛模型中表现出有效的镇痛。参考WO 08/157365，大鼠链脲霉素诱发的糖尿病神经病模型是糖尿病神经病的临床上相关的模型，其复制人情形糖尿病条件（诸如高葡萄糖水平、四肢的神经性疼痛和通常较差的健康）的要素。该研究表现出渐进性的疼痛敏感性（通过在第4和6周后爪的异常疼痛试验测得），且实验物在第6周时显著反转该疼痛，在这些组中血糖水平没有任何变化。与媒介物治疗的动物相比，胰岛素治疗组表现出降低的血糖水平，但是没有显著改善疼痛敏感性。这证实，在该糖尿病神经病模型中，在血糖水平和异常疼痛水平之间缺少对应，这与文献的报道相一致(Maneuf，等人,2004，关于这样的模型的内容通过引用并入本文)。在该研究中证实的结果指示在糖尿病神经病的STZ-大鼠模型中测试的所有3种剂量的化合物A。此外，泰素（Taxol）发的神经病的研究证实了长期施用的实验化合物(化合物A)以及急性施用的加巴喷丁的镇痛作用。值得注意的是，在4周异常疼痛评估时，媒介物异常疼痛应答与3周评估相比已经下降，这指示可以证实减轻的更大程度的异常疼痛。因而，在施用泰以后3周时，在约10g力的50%阈值时实现了媒介物组表现出的异常疼痛的显著反转，而在第4周时仅需要约7.5g。

和从动物模型中观察到的镇痛一起，在正常的健康受试者中进行的单个(SRD)和多个递增剂量(MRD)研究中，恶心、呕吐和腹泻是最常见的不利事件。在MRD研究中，每天施用≥10mg的下述剂量4次，恶心和呕吐通常在给药30min内发生-先于显著的全身吸收。腹泻通常在给药以后超过5小时观察到，此时全身浓度是C_max值的大约20%。观察到，化合物A具有约1小时或更小的全身(血浆)半衰期。这样的药效动力学胃肠能动性应答似乎主要与局部效应(可能是位于肠嗜铬细胞上的α3β4受体的激动)而不是全身血浆浓度有关。因而，也在健康的人受试者中观察到胃肠能动性的增加，所以化合物A的药理学可以帮助减轻与便秘突出的IBS有关的便秘、疼痛和胃气胀。

经由肠溶包衣(EC)将化合物A选择性地递送至下胃肠道，可以减轻IBS-C的症状，同时避免由药物在上胃肠道中的暴露引起的呕吐和恶心。

研究设计

进行随机化的、双盲的、安慰剂对照的、平行组的、证实原理的研究，以评价化合物A在便秘突出的肠易激综合征的治疗中的安全性、耐受性和效力。

该研究的目的包括下述的：评估化合物A在便秘突出的肠易激综合征(IBS-C)的治疗中的效力；和评估当作为肠溶包衣的胶囊剂施用28天时段时，化合物A在IBS-C受试者中的安全性、耐受性和药代动力学特征。

通过ROME III标准，具有便秘突出的肠易激综合征(IBS-C)的受试者定义为：每个月复发的腹痛或不适至少3天，在前3个月中，伴有下述的2项或更多项：(1)排便减少（relieved by defecation）；(2)开始与大便频率的变化有关；和/或(3)开始与大便外观的变化有关。

治疗包括：每天5mg(作为肠溶包衣的胶囊剂)持续14天，随后每天2次5mg持续另外14天。一个终点包括：总IBS症状缓解(7-点量表)。另一个终点包括：排便频率、疼痛、胃气胀、用力、大便稠度和援救药物的频率(泻药)。在统计上，将α设定为0.1。

结果

化合物A通常被良好地耐受。所有不利事件都是轻度至中度的。最常报道的不利事件是头痛或胃肠道不适（gastrointestinal）。

化合物A会造成自发排便(SBM)的稳健增加，其维持至少1个月，但是似乎缺少镇痛性质。在该研究中的样品大小没有大至足以检测到主观变化。在第1周，用力(p=0.024)、疼痛(p=0.059)和总体缓解评分(p=0.101)都有利于化合物A。

化合物A可以主要是结肠能动性促进剂，研究的结果提示，它在具有不同作用机理的慢性特发性便秘(CIC)中是优选的药剂，因为疼痛不是CIC的主要组成（primary component）。化合物A可以与疼痛缓解剂相组合，作为IBS-C的增强疗法。

图2是几种治疗剂之间的SBM相对比较的条形图表示。将化合物A与现有的和提议的疗法（即替加色罗（以前在商标名称下销售，现在被撤回）、芦比前列酮（在商品名下销售）和利那洛肽（目前处于III期临床试验中））以及安慰剂（在每种情况下）进行比较。如图示的，在第4周时，化合物A在具有IBS-C的受试者中相对有利于SBM。

从NDA申请号021200得到替加色罗(以前在商标名称下销售，现在被撤回)的数据，特别注意批准基础的总结（Summary ofthe Basis for Approval）。从NDA申请号021908得到芦比前列酮（在商品名下销售）的数据，特别注意批准基础的总结。从下述文献得到利那洛肽（目前处于III期临床试验中）的数据：Johnston等人,Linaclotide Improves Abdominal Pain and Bowel Habits in aPhase IIb Study of Patinets with Irritable Bowel Syndrome withConstipation,Gastronenterology 2010;139:1877-1886,Lembo等人,Efficacy of Linaclotide for Patients with Chronic Constipation,Gastroenterology 2010;138(3):886-895 e1,和Lembo等人,Efficacyand Safety of Once Daily Linaclotide Administered Orally for 12 Weeksin Patients with Chronic Constipation:Results from Two Randomized，Double-Blind，Palcebo-Controlled Phase 3 Trials,Digestive DiseaseWeek(DDW)2010年于纽奥尔良市,LA 2010；摘要286。这些参考文献中的每一篇关于在图2中提供的数据的内容以及数据来源通过引用并入。

如本文指出的，5mg(或<100μg/kg)的总剂量表现出效力。对此一种可能有效的剂量是：10μg/kg<剂量<100μg/kg。

以游离形式或盐形式使用实验化合物。如果没有另外指出，实验物化合物A作为它的半半乳糖二酸盐白色粉末来提供。

观察到的具体的药理学应答可能随下述因素而变化，并取决于下述因素：选择的具体活性化合物，或是否存在药用载体，以及制剂的类型和采用的给药模式，且根据本发明的实践预见到结果中的这样的预期的变化或差异。

尽管在本文中详细地例证和描述了本发明的具体实施方案，本发明不限于此。上面的详细描述作为本发明的示例而提供，不应解释为构成本发明的任何限制。本领域技术人员会明白修改，并且在所附权利要求的范围内意图包括没有脱离本发明精神的所有修改。

Claims

1.(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其药学上可接受的盐在药物生产中的用途，所述药物用于增加结肠能动性。

2.权利要求1的用途，所述药物靶向肠嗜铬细胞上的α₃β₄和α₄β₂受体。

3.权利要求1的用途，所述药物用作结肠能动性促进剂。

4.权利要求1的用途，所述药物用作在慢性特发性便秘中的药剂。