CN102784183A - 一种红参多糖提取物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种红参多糖提取物及其制备方法，包括如下步骤：(1)取红参或经过70％--100％乙醇溶液提取后的红参药渣，加入溶剂进行提取，得提取液；提取液浓缩，得浓缩液；(2)浓缩液加入75-100％乙醇溶液至适量进行醇沉，得沉淀；(3)沉淀加入溶剂提取，得提取液；(4)提取液浓缩、干燥、粉碎，得红参多糖提取物。

Description

一种红参多糖提取物的制备方法

技术领域

本发明属于中药提取物的制备方法，具体地说，涉及红参多糖提取物的制备方法。

背景技术

红参为五加科植物人参Panax ginseng经蒸制后的干燥根。作为名贵传统滋补中药，具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津、安神等功效。临床上红参常用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，久病虚赢，惊悸失眠，阳痿宫寒；心力衰竭，心源性休克。红参多糖是红参的主要活性成分之一，具有增强免疫***功能、免疫抗肿瘤和辅助抗肿瘤、降血糖及调控血细胞生成的作用。目前，红参多糖提取物的制备通常是以水提醇沉，其中中性多糖、酸性多糖含量低。采用红参或红参醇提药渣开发较高含量的红参多糖提取物具有重要的意义。

发明内容

本发明提供一种从红参或红参醇提后药渣中制备红参多糖提取物的方法，采用溶剂提取，浓缩，醇沉，沉淀二次提取，浓缩，干燥，粉碎等工艺过程得到红参多糖提取物，提取物中中性多糖含量高于60％，酸性多糖含量高于10％，红参多糖提取物得率达到25％以上。

本发明通过下述技术方案予以实施。

本发明的红参多糖提取物的制备方法，按顺序包括如下步骤：

(1)取红参或经过70％--100％乙醇溶液提取后的红参药渣，加入溶剂进行提取，得提取液；提取液浓缩，得浓缩液；

(3)浓缩液加入75-100％乙醇溶液适量进行醇沉，得沉淀；

(3)沉淀加入5-40％乙醇溶液提取，得提取液；

(4)提取液浓缩、干燥、粉碎，得红参多糖提取物。

其中，步骤(1)中所述70％--100％乙醇溶液提取后的红参药渣为1-3次乙醇提取后的药渣，步骤(1)的溶剂选自：水或0-40％含醇量的乙醇溶液，用量为1-50倍原料量；步骤(3)的5-40％含醇量的乙醇溶液，用量为0.01-20倍原料量。

步骤(1)所述的选自红参湿品或红参干品的整根、切制的饮片或者粉碎的颗粒或粉末；步骤(1)所述的红参药渣是用红参湿品或红参干品的整根、切制的饮片或者粉碎的颗粒或粉末经过70％-100％乙醇溶液提取后产生的红参药渣。

步骤(1)所述的红参或红参药渣可以是湿品直接进行提取或干燥成干品后进行提取。

步骤(1)和(4)中所述的干燥方式采用常压干燥或减压干燥或流化干燥或冷冻干燥或微波干燥或远红外干燥或超临界干燥或折射窗干燥。

步骤(1)和(3)中所述的提取方式为煎煮法或浸渍法或渗滤法或超临界流体提取法或加压提取法获亚临界水提取法或破碎提取法或酶法辅助提取或半仿生提取法或超声提取法或微波提取法或动态逆流提取法。

步骤(1)和(4)中所述的浓缩方式为常压浓缩或减压浓缩或膜浓缩。

步骤(1)所述的浓缩液量的量控制在浓缩液的体积∶药材或药渣的重量＝1∶0.05-10或浓缩液的比重为1.01-1.40。

步骤(2)所述的醇沉溶液中含醇量为55％-90％。

步骤(2)所述的沉淀采用固液分离方式，如管式离心或碟式离心或膜过滤或线隙过滤或板框过滤或滤布过滤或纸浆板过滤或滤纸过滤或直接移取上清液。

步骤(4)所述的浓缩液的量控制在浓缩液的体积∶药材或药渣的重量＝1∶0.05-10或浓缩液的比重为1.01-1.45。

优选的制备方法如下：

(1)取红参或70％--100％乙醇溶液提取后的红参药渣，加入水进行提取，得提取液；提取液浓缩，得浓缩液；

(2)浓缩液加入75-100％乙醇溶液适量进行醇沉，得沉淀；

(3)沉淀加入5-40％乙醇溶液提取，得提取液；

(4)提取液浓缩、干燥、粉碎，得红参多糖提取物。

更优选的制备方法如下：

(1)取红参或80％--100％乙醇溶液提取后的红参药渣，加入2-30倍量的水提取1-3次，合并提取液；提取液浓缩，得浓缩液；

(2)浓缩液加入95％的乙醇进行醇沉，醇沉液含醇量为60-80％，得沉淀；

(3)沉淀加入0.5-2倍量的15-25％乙醇溶液提取，得提取液；

(4)提取液浓缩、干燥、粉碎，得红参多糖提取物。

最优选的方法

1、提取：取85％--95％乙醇溶液提取后的湿红参药渣为原料加水提取3次，加水量为4，3，2倍原料量；沸腾提取1.5、1.5、1小时。提取液过滤，合并后备用；提取后药渣弃去。

2、浓缩：将提取液减压浓缩至体积与原料量比为1∶1，浓缩液备用。

3、醇沉：将95％乙醇搅拌加入浓缩液中，控制混合溶液中乙醇含量65％-69％，静置12小时以上。

4、固液分离：将醇沉液进行固液分离，沉淀备用，上清液弃去。

5、二次提取：沉淀加20％乙醇二次提取，加入量为1倍原料量，提取时间为1.5小时；固液分离，上清液备用；沉淀弃去。

6、浓缩：上清液减压浓缩至稠膏。

7、干燥：将稠膏减压干燥。

8、粉碎：将干膏粉碎，过100目筛，即得红参多糖提取物。

本发明红参多糖提取物中性多糖含量测定方法：

对照品溶液取10mgD-无水葡萄糖用蒸馏水定容于50ml容量瓶中，摇匀。分别取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml至10ml具塞试管中，分别加水使至2ml。

供试品溶液精密称取原料20mg用蒸馏水定容至100ml，摇匀静置。移取1ml上清液至10ml具塞试管中，加蒸馏水1ml。

蒽酮-硫酸试液取95-98％硫酸80ml，加入到20ml水中，先配制成80％硫酸溶液，然后将0.1g蒽酮加入到80％硫酸中即可，溶液呈草绿色。

分别向以上对照品和供试品溶液中加入8ml蒽酮-硫酸试液，并迅速在沸水浴中加热10min，冷却至室温。作为供试品溶液，于625nm处测定吸光度。

酸性多糖含量测定方法：

对照品溶液精密称取D-半乳糖醛酸对照品10mg，用蒸馏水定容至100ml。分别移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml至10ml容量瓶中，定容。

供试品溶液精密称取原料20mg，用蒸馏水定容至100ml。

硫酸-四硼酸钠溶液取476.3mg四硼酸钠溶于100ml浓硫酸中即可。

间羟联苯显色剂配置方法取15mg间羟联苯，用0.5％NaOH溶解定容至10ml，即得。

取以上对照品和供试品上清液各1ml，加入10ml具塞试管中，冰水浴预冷10min后，加入硫酸-四硼酸钠溶液6ml，摇匀后放入沸水浴中煮沸5min，冰浴至室温，加入间羟联苯显色剂0.2ml，充分振摇，显色20min后，于520nm处测定吸光度。

用本发明方法制备的红参多糖提取物中性多糖含量高于60％，酸性多糖含量高于10％，提取物得率达到25％以上。

本发明所制备的红参多糖提取物可单独或者与其他活性成分合用制备成适合服用的药物组合物，如与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸、羟丙基-β-环糊精等混合制成的各种药物剂型，例如，可制成注射剂、片剂、缓释片、滴丸、颗粒剂、粉针剂、胶囊剂、微粒剂。

本发明的红参多糖提取物具有以下医药用途：

红参多糖是红参的主要活性成分之一，具有增强免疫***功能、免疫抗肿瘤和辅助抗肿瘤、降血糖及调控血细胞生成的作用。在临床上可用于治疗肺癌、卵巢癌、鼻咽癌、消化道肿瘤等疾病，具有很好的研究前景。

与现有技术相比，本发明的红参多糖提取物提取方法的提取得率高，中性多糖及酸性多糖含量高，可保持更高的生理活性。

具体实施方式

参考下列实施例将更易于理解本发明，给出实施例是为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1

取红参加水煮沸提取三次，第一次为药材量的4倍水量，第二次为药材量的4倍水量，第三次为药材量的2倍水量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶3.5，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为70％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加1倍原料量的20％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶2，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。(中性多糖含量62.7％，酸性多糖含量11.8％，得率27.3％)

实施例2

取红参加80％乙醇溶液提取三次，每次加醇量为8倍；红参药渣烘干；干药渣加水煮沸提取三次，第一次为药材量的4倍量，第二次为药材量的3倍量，第三次为药材量的2倍量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至比重1.25(65℃)，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为69％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加3倍原料量的15％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至比重1.35(60℃)，将浓缩液减压微波干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。(中性多糖含量69.7％，酸性多糖含量15.6％，得率26.7％)

实施例3

取红参加95％乙醇溶液提取两次，每次加醇量为8倍；红参药渣烘干；干药渣加5％乙醇溶液煮沸提取三次，第一次为药材量的4倍水量，第二次为药材量的3倍水量，第三次为药材量的2倍水量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至比重1.30(60℃)，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为80％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加20％乙醇溶液煎煮提取两次，1倍原料量/次，1.5小时/次；提取液过滤，浓缩至比重1.30(60℃)，将浓缩液减压微波干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。(中性多糖含量75.8％，酸性多糖含量20.1％，得率25.3％)

实施例4

取红参加95％乙醇溶液提取两次，每次加醇量为8倍；红参药渣烘干；干药渣水煮沸提取三次，第一次为药材量的50倍水量，第二次为药材量的50倍水量，第三次为药材量的50倍水量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶3.5，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为70％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加1倍原料量的20％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶2，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。

实施例5

取红参加水煮沸提取三次，第一次为药材量的13倍水量，第二次为药材量的10倍水量，第三次为药材量的6倍水量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶3.5，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为70％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加1倍原料量的20％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶2，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。

实施例6

取红参加水煮沸提取三次，第一次为药材量的1倍水量，第二次为药材量的1倍水量，第三次为药材量的1倍水量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶3.5，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为70％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加1倍原料量的20％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶2，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。

实施例7

取红参加40％乙醇煮沸提取三次，第一次为药材量的13倍量，第二次为药材量的10倍量，第三次为药材量的6倍量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶3.5，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为70％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加1倍原料量的20％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶2，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。

实施例8

取红参加5％乙醇煮沸提取三次，第一次为药材量的13倍量，第二次为药材量的10倍量，第三次为药材量的6倍量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶3.5，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为70％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加1倍原料量的20％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶2，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。

实施例9

取红参加水煮沸提取三次，第一次为药材量的13倍水量，第二次为药材量的10倍水量，第三次为药材量的6倍水量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶2，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为70％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加1倍原料量的10％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶2，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。

实施例10

取红参加水煮沸提取三次，第一次为药材量的13倍水量，第二次为药材量的10倍水量，第三次为药材量的6倍水量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶3.5，过滤，滤液加100％乙醇使含醇量为90％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加1倍原料量的20％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶2，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。

实施例11

取红参加水煮沸提取三次，第一次为药材量的20倍水量，第二次为药材量的20倍水量，第三次为药材量的20倍水量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶1，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为55％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加1倍原料量的40％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶1，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。

实施例12

取红参加水煮沸提取三次，第一次为药材量的1倍水量，第二次为药材量的1倍水量，第三次为药材量的1倍水量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶10，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为70％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加20倍原料量的5％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶10，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。

实施例13

取红参加水煮沸提取三次，第一次为药材量的50倍水量，第二次为药材量的50倍水量，第三次为药材量的50倍水量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶0.01，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为70％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加20倍原料量的20％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶0.01，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。

实施例14

取红参加水煮沸提取三次，第一次为药材量的50倍水量，第二次为药材量的50倍水量，第三次为药材量的50倍水量；煎煮提取，沸后分别保持1.5、1.5、1小时；药液合并减压浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶5，过滤，滤液加95％乙醇使含醇量为70％，静置12小时以上；醇沉液采用滤布抽滤，分离出沉淀，沉淀加20倍原料量的20％乙醇溶液煎煮提取1.5小时；提取液过滤，浓缩至V_浓缩液∶M_{药材或药渣}＝1∶5，将浓缩液减压干燥，粉碎，过筛，得红参多糖提取物。

实施例15

取实施例一的红参多糖提取物170g，与80g微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，600℃干燥30～45分钟，整粒，加入10g滑石粉，混匀，充于胶囊中，即得。

实施例16

取实施例一的红参多糖提取物170g，与80g微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，600℃干燥30～45分钟，整粒，加入10g滑石粉，混匀，压片即得。

实施例17

取实施例一的红参多糖提取物170g，与100g蔗糖，80g微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，600℃干燥30～45分钟，整粒，包装，得到颗粒剂。

Claims (10)

1.一种红参多糖提取物的制备方法，按顺序包括如下步骤：

(1)取红参或经过70％--100％乙醇溶液提取后的红参药渣，加入溶剂进行提取，得提取液；提取液浓缩，得浓缩液；

(2)浓缩液加入75-100％乙醇溶液进行醇沉，得沉淀；

(3)沉淀加入5-40％含醇量的乙醇溶液提取，得提取液；

(4)提取液浓缩、干燥、粉碎，得红参多糖提取物；

其中，步骤(1)中所述70％--100％乙醇溶液提取后的红参药渣为1-3次乙醇提取后的药渣，步骤(1)的溶剂选自：水或0-40％含醇量的乙醇溶液，用量为1-50倍原料量；步骤(3)的5-40％含醇量的乙醇溶液，用量为0.01-20倍原料量。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的红参选自红参湿品或红参干品的整根、切制的饮片或者粉碎的颗粒或粉末；红参药渣是用红参湿品或红参干品的整根、切制的饮片或者粉碎的颗粒或粉末经过70％-100％乙醇溶液提取后产生的红参药渣。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的红参或红参药渣可以是湿品直接提取或干燥成干品后进行提取。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)和(4)中的干燥方式选自常压干燥、减压干燥、流化干燥、冷冻干燥、微波干燥、远红外干燥、超临界干燥或折射窗干燥。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)和(3)中的提取方式选自煎煮法、浸渍法、渗滤法、超临界流体提取法、加压提取法、亚临界水提取法、破碎提取法、酶法辅助提取、半仿生提取法、超声提取法、微波提取法或动态逆流提取法。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)和(4)中的浓缩方式选自常压浓缩或减压浓缩或膜浓缩。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的浓缩液的量控制在浓缩液的体积∶药材或药渣的重量＝1∶0.05-10或浓缩液的比重为1.01-1.40。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的浓缩液加入75-100％乙醇溶液适量至溶液中含醇量为55％-90％。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中的浓缩液的的量控制在浓缩液的体积∶药材或药渣的重量＝1∶0.05-10或浓缩液的比重为1.01-1.45。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤如下：

(1)提取：以湿红参药渣为原料加水提取3次，加水量为4，3，2倍原料量；沸腾提取1.5、1.5、1小时。提取液过滤，合并后备用；提取后药渣弃去；

(2)浓缩：将提取液减压浓缩至体积与原料量比为1∶1，浓缩液备用；

(3)醇沉：将高浓度乙醇搅拌加入浓缩液中，控制混合溶液中乙醇含量65％-69％，静置12小时以上；

(4)固液分离：将醇沉液进行固液分离，沉淀备用，上清液弃去；

(5)二次提取：沉淀加20％乙醇二次提取，加入量为1倍原料量，提取时间为1.5小时；固液分离，上清液备用；沉淀弃去；

(6)浓缩：上清液减压浓缩至稠膏；

(7)干燥：将稠膏减压干燥；

(8)粉碎：将干膏粉碎，过100目筛，即得红参多糖提取物。