CN102746412A - 一种苦瓜多糖的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种苦瓜多糖的提取方法。以苦瓜为原料，加入热水，进行超声或微波协助浸提，收集上层清液进行浓缩、脱色、干燥，得到苦瓜粗多糖，将苦瓜粗多糖溶解于水中，离心分离得上清液，对上清液再进行除杂、透析、层析、醇析得沉析物，再经洗涤、干燥得苦瓜多糖纯品，本发明方法不生成有害物质，苦瓜多糖的活性成分能被保存完整，不污染环境，提取的苦瓜多糖纯度高，收率高，能使苦瓜资源得以充分利用，该工艺是一种资源节约型、环境友好型的绿色生产工艺。

Description

一种苦瓜多糖的提取方法

技术领域    

本发明涉及属于农、林副产品深加工领域，具体涉及一种苦瓜多糖的提取方法。

背景技术    

苦瓜（Momordica charantiap），别名凉瓜、锦荔枝、癞葡萄、癞瓜、为葫芦科、苦瓜属一年生攀援草本苦瓜的果实，叶互生，掌状5～7深裂。花小，单性、雌雄同株，黄色，长不超过2cm。果实纺锤形，有瘤状凸起，成熟时橙黄色。味苦，瓤鲜红色、味甜 明代以前医书没有记载苦瓜，明代《救荒本草》、《本草纲目》始列入，疑为三宝太监下西洋时，从南洋群岛移至过来。明代医学家李时珍在不《本草纲目》中称苦瓜“味苦，性寒凉，无毒，具有除邪，解疲乏，清心明目、益气壮阳之功”。现代中医认为，苦瓜有清暑涤热、明目解毒、赤眼疼痛、热病烦渴等病症。苦瓜是一种人工栽培的可再生绿色资源，全国各地均有种植，资源丰富。苦瓜不仅是佳蔬，也是良药，它是一种药食两用的食疗佳品，从苦瓜中提取的多糖物质，具有降低血糖、抑菌抗炎、抗氧化性等多种作用，并能提高免疫力，是一种有益于人类健康的环境友好产品。苦瓜多糖产品外观为淡黄色至黄棕色固体粉末，易吸湿，可溶于热水，难溶于醇、酮、醚、氯仿等有机溶剂。多糖具有提高人体的免疫功能等多种生物活性，现代医学研究表明，苦瓜多糖具有降低血糖、抑菌抗炎、抗氧化性等多种作用。

发明内容    

本发明公开一种苦瓜多糖的提取方法，以苦瓜为原料，采用热水浸提粗多糖，然后用Sevag法除蛋白质、双氧水脱色，乙醇沉析分离，再经层析法纯化，低温干燥，粉碎，得多糖纯品。本发明方法不生成有害物质，苦瓜多糖的活性成分能被保存完整，不污染环境，提取的苦瓜多糖纯度高，收率高。  

为实现上述目的本发明采用如下技术方案：

一种苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：以苦瓜为原料，采用热水浸提法或水提膜离法提取粗多糖，然后用Sevag法除蛋白质、双氧水脱色，乙醇沉析分离，再经层析法纯化，低温干燥，粉碎，得多糖纯品，具体步骤如下：

（1）热水浸提法提取粗多糖  

a、备料：以新鲜的苦瓜为原料，洗净、晾干、粉碎过20目，待用；

b、水提：将经过粉碎的苦瓜料投入浸提器中，加入蒸馏水，搅拌混匀，微波处理1～2min或超声波处理10～15min，于pH值7-8和温度85-95℃左右的条件下浸提3-4h，过滤分离，得第一次浸提滤液，残渣再加入适当的蒸馏水，搅拌，于95-100℃条件下浸提1-2h，过滤分离，得第二次浸提滤液，合并两次浸提滤液，待用，浸提时料液比为1；（18-22）；

c 、浓缩：把浸提滤液投入真空浓缩器中，减压、低温浓缩至浸提滤液原体积1/4左右，得浓缩液，待用；

d、脱色：把苦瓜粗多糖浓缩液投入脱色釜中，在搅拌的条件下加入少量的浓度为20%～30%的双氧水，混合均匀，静置，脱色待用；

e、醇析：把脱色液投入醇析釜中，在搅拌的条件下，慢慢加入浓度为90-95%的乙醇，直至料液中乙醇体积浓度达到75%～85%为止，然后于-10～-15℃静置过夜，醇析完全后，再进行离心分离，得下层沉析物为苦瓜粗多糖，再用95%乙醇洗涤苦瓜粗多糖，收集上层液相和洗液，回收乙醇；

f、干燥：把洗涤后的苦瓜粗多糖沉析物进行低温干燥，然后粉碎，得到苦瓜粗多糖；

（2）粗多糖纯化

a、溶解：把苦瓜粗多糖用适量的蒸馏水溶解，置于高速离心机中，收集上层清液，弃去下层物质；

b、除杂：在所得到的苦瓜粗多糖清液中，加入Sevag试剂震荡，静置，再离心分离，弃去下层杂质，收集上层液体，将收集的上层液体静置待分层后，将水相与有机相分开,有机相回收氯仿和正丁醇循环使用，水相为苦瓜粗多糖澄清液，待用, 苦瓜粗多糖清液与Sevag试剂的体积比为： 1：（1-1.5）；

c、透析：把苦瓜粗多糖澄清液进行透析除杂，透析处理完毕后，取出透析内液，待用；

d、层析：把苦瓜粗多糖透析液经过DEAE-32柱层析纯化，再上Sephadex G-25柱分离，用氯化钠水溶液洗脱， 收集含多糖的洗脱液，得苦瓜多糖纯品洗脱液，待用； 

e、醇析：把含苦瓜多糖的层析液经适当的浓缩之后，进行醇析，再离心分离，收集的下层沉析物为苦瓜多糖，待用，液相的乙醇回收；

f、干燥：把苦瓜多糖沉析物洗涤后再进行低温干燥处理，然后粉碎过80-85目筛，得到苦瓜多糖纯品。

所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：粗糖纯化时所用的Sevag试剂中氯仿与正丁醇的体积比为=（4-5）：1 。

所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：粗糖纯化时所述的透析具体操作方法为：先用自来水透析45-50h，再用蒸馏水或去离子水透析22-25h。

所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：所述的水提膜离法提取粗多糖的具体步骤如下：

a、备料：以新鲜的苦瓜为原料， 洗净、晾干、粉碎过20目，待用；

b、水提：粉碎的鲜苦瓜加入其重量的20%～50%的蒸馏水，于打浆机中匀浆，然后微波处理10min，适当的加热，浸提1H左右，过滤，回收残渣加以利用；得上清液，待用。

c、脱色：把上清液投入脱色釜中，在搅拌的条件下加入少量浓度为20%～30%的双氧水，混合均匀，静置，脱色，待用。

d、膜离;取褪脱色后的上清液，将其至于膜分离器中，在压力为0.05～0.150MPa的条件下，使使上清液过截留分子量≥6000的中空纤维膜，得到苦瓜粗多糖的浓缩液，待用，采用热水浸提法相同的方法醇析、干燥得干粗多糖。

本发明的有益效果在于：

本发明方法采用热水提法从苦瓜中提取苦瓜多糖的工艺过程为物理分离过程，不生成有害物质，工艺过程可实现清洁生产；以水作为浸提剂，可以节省大量的有机溶剂，并减少了有机溶剂对苦瓜多糖生理活性的破坏作用，提高了产品的质量，减少了对环境的污染。在水提膜离法中，可同时得到苦瓜多糖和苦瓜皂甙两种活性物质，使苦瓜资源得以充分利用。因此，该工艺是一种资源节约型、环境友好型的绿色生产工艺。

 附图说明

图1为本发明的工艺流程图。

具体实施方式   

实施例1  热水提取法提取粗多糖

（1）备料：将新鲜的苦瓜洗净、晾干、粉碎过20目，待用；

（2）水提：将经过粉碎的苦瓜料投入浸提器中，加入20倍量的蒸馏水，搅拌混匀，微波处理1～2min（或超声波处理10～15min）于pH值7.5和90℃左右的条件下浸提3H，过滤分离，得第一次浸提滤液，残渣加入10倍量的 蒸馏水，搅拌，于100℃条件下浸提1h，过滤分离，收集残渣另行综合利用，合并两次浸提滤液，待用；

（3）浓缩：把浸提滤液投入真空浓缩器中，减压、低温浓缩至料液原体积1/4左右，得浓缩液，待用；

（4）脱色：把苦瓜粗多糖浓缩液投入脱色釜中，在搅拌的条件下加入少量的浓度为30%的双氧水，混合均匀，静置，脱色待用；

（5）醇析：把脱色液投入醇析釜中，在搅拌的条件下，慢慢将适量的95%乙醇，直至料液中乙醇浓度打到75%～85%（V/V）为止，静置于冰箱，于-10～-15℃过夜，让醇析完全，离心分离，得沉析物为苦瓜粗多糖，再用95%乙醇洗涤2次，待用；收集液相和洗液，回收乙醇；

（6）干燥：把洗涤后的苦瓜粗多糖沉析物置于真空干燥中于减压和低温条件下干燥；或者移至冷冻干燥机中，于减压和-57℃的条件下冷冻干燥。然后粉碎，得到苦瓜粗多糖。

实施例2  水提膜离法提取粗多糖

（1）备料： 将新鲜的苦瓜洗净、晾干、粉碎过20目，待用；

（2）水提：把粉碎的鲜苦瓜加入其重量的20%～50%的蒸馏水，于打浆机中匀浆，然后微波处理10min，适当的加热，浸提1H左右，过滤，回收残渣加以利用；得上清液，待用；

（3）脱色：把上清液投入脱色釜中，在搅拌的条件下加入少量浓度为20%～30%的双氧水，混合均匀，静置，脱色，待用；

（4）膜离：取褪脱色后的上清液，将其至于膜分离器中，在压力为0.05～0.150MPa的条件下，使使上清液过截留分子量≥6000的中空纤维膜，得到含苦瓜粗多糖的浓缩液，待用，收集透过液，用于提取苦瓜皂甙；

（5）醇析：把苦瓜粗多糖浓缩液投入醇析釜中没在搅拌的条件下，慢慢加人适量的95%的乙醇，直至料液中乙醇浓度达到75%～85%（V/V）为止，静置于-10-15℃过夜，让醇析完全，离心分离，得到沉析物我ikugua粗多糖，再用95%乙醇洗涤2次，待用，收集液相和洗液，回收乙醇；

（6）把洗涤后的苦瓜粗多糖沉析物置于真空干燥中于减压和低温条件下干燥；或者移至冷冻干燥机中，于减压和-55℃的条件下冷冻干燥。然后粉碎，得到苦瓜粗多糖。

实施例3  苦瓜粗多糖纯化

（1）溶解： 将实施例1和2所得苦瓜粗多糖用适量的蒸馏水溶解，置于高速离心机中，离心分离0.5h左右，以除去少量不溶物，得清液，待用；

（2）除杂：在所得到的苦瓜粗多糖清液中，加入约1倍量的Sevag试剂（氯仿：正丁醇=4：1，V/V），震荡0.5h左右，静置，让游离蛋白等杂质充分析出，再离心分离，去除蛋白等杂质，按此处理合格后静置、分层，将水相与有机相分开，有机相供回收氯仿和正丁醇循环使用，水相为苦瓜粗多糖澄清液，待用；

（3）透析：把苦瓜粗多糖澄清液装入透析设备透析袋中，用自来水透析48h，再用蒸馏水或去离子水透析24h以除去无机盐、低分子量杂质，透析处理完毕后，取出透析内液，待用；

（4）层析：把苦瓜粗多糖透析液经过DEAE-32柱纯化，再上Sephadex G-25柱分离，用氯化钠水溶液洗脱，检测多糖洗脱峰，用自动分段收集器收集含多糖的洗脱液，得苦瓜多糖纯品洗脱液，待用，收集其他洗脱液加以综合利用；

（5）醇析：把含苦瓜多糖的层析液经真空低温适当的浓缩之后，投入沉析釜中，在常温的条件下，搅拌，慢慢加入适量的95%乙醇，使料液中含乙醇浓度75%～85%（V/V）为止，静置于-10～-15℃过夜，让苦瓜多糖充分析出，然后进行离心分离，液相送减压蒸发回收乙醇，沉析物为苦瓜多糖，待用；

（6）干燥：把苦瓜多糖沉析物依次用无水乙醇、丙酮、***各洗涤2次，有机洗液送减压蒸发回收有机溶剂，把洗净后的苦瓜粗多糖沉析物置于真空干燥器中，于减压和低温条件下干燥， 然后粉碎过80目筛，得到苦瓜多糖纯品。

Claims (4)

1.一种苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：以苦瓜为原料，采用热水浸提法或水提膜离法提取粗多糖，然后用Sevag法除蛋白质、双氧水脱色，乙醇沉析分离，再经层析法纯化，低温干燥，粉碎，得多糖纯品，具体步骤如下：

（1）热水浸提法提取粗多糖  

a、备料：以新鲜的苦瓜为原料，洗净、晾干、粉碎过20目，待用；

b、水提：将经过粉碎的苦瓜料投入浸提器中，加入蒸馏水，搅拌混匀，微波处理1～2min或超声波处理10～15min，于pH值7-8和温度85-95℃左右的条件下浸提3-4h，过滤分离，得第一次浸提滤液，残渣再加入适当的蒸馏水，搅拌，于95-100℃条件下浸提1-2h，过滤分离，得第二次浸提滤液，合并两次浸提滤液，待用，浸提时料液比为1；（18-22）；

c 、浓缩：把浸提滤液投入真空浓缩器中，减压、低温浓缩至浸提滤液原体积1/4左右，得浓缩液，待用；

d、脱色：把苦瓜粗多糖浓缩液投入脱色釜中，在搅拌的条件下加入少量的浓度为20%～30%的双氧水，混合均匀，静置，脱色待用；

e、醇析：把脱色液投入醇析釜中，在搅拌的条件下，慢慢加入浓度为90-95%的乙醇，直至料液中乙醇体积浓度达到75%～85%为止，然后于-10～-15℃静置过夜，醇析完全后，再进行离心分离，得下层沉析物为苦瓜粗多糖，再用95%乙醇洗涤苦瓜粗多糖，收集上层液相和洗液，回收乙醇；

f、干燥：把洗涤后的苦瓜粗多糖沉析物进行低温干燥，然后粉碎，得到苦瓜粗多糖；

（2）粗多糖纯化

a、溶解：把苦瓜粗多糖用适量的蒸馏水溶解，置于高速离心机中，收集上层清液，弃去下层物质；

b、除杂：在所得到的苦瓜粗多糖清液中，加入Sevag试剂震荡，静置，再离心分离，弃去下层杂质，收集上层液体，将收集的上层液体静置待分层后，将水相与有机相分开,有机相回收氯仿和正丁醇循环使用，水相为苦瓜粗多糖澄清液，待用, 苦瓜粗多糖清液与Sevag试剂的体积比为： 1：（1-1.5）；

c、透析：把苦瓜粗多糖澄清液进行透析除杂，透析处理完毕后，取出透析内液，待用；

d、层析：把苦瓜粗多糖透析液经过DEAE-32柱层析纯化，再上Sephadex G-25柱分离，用氯化钠水溶液洗脱， 收集含多糖的洗脱液，得苦瓜多糖纯品洗脱液，待用； 

e、醇析：把含苦瓜多糖的层析液经适当的浓缩之后，进行醇析，再离心分离，收集的下层沉析物为苦瓜多糖，待用，液相的乙醇回收；

f、干燥：把苦瓜多糖沉析物洗涤后再进行低温干燥处理，然后粉碎过80-85目筛，得到苦瓜多糖纯品。

2.根据权利要求1所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：粗糖纯化时所用的Sevag试剂中氯仿与正丁醇的体积比为=（4-5）：1 。

3.根据权利要求1所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：粗糖纯化时所述的透析具体操作方法为：先用自来水透析45-50h，再用蒸馏水或去离子水透析22-25h。

4.根据权利要求1所述的苦瓜多糖的提取方法，其特征在于：所述的水提膜离法提取粗多糖的具体步骤如下：

a、备料：以新鲜的苦瓜为原料， 洗净、晾干、粉碎过20目，待用；

b、水提：粉碎的鲜苦瓜加入其重量的20%～50%的蒸馏水，于打浆机中匀浆，然后微波处理10min，适当的加热，浸提1H左右，过滤，回收残渣加以利用；得上清液，待用；

c、脱色：把上清液投入脱色釜中，在搅拌的条件下加入少量浓度为20%～30%的双氧水，混合均匀，静置，脱色，待用；

d、膜离;取褪脱色后的上清液，将其至于膜分离器中，在压力为0.05～0.150MPa的条件下，使使上清液过截留分子量≥6000的中空纤维膜，得到苦瓜粗多糖的浓缩液，待用，采用热水浸提法相同的方法醇析、干燥得干粗多糖。

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