CN102741243A - 新型化合物拟无枝酸菌糖衍生物、它们的生产方法和应用 - Google Patents

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Abstract

通过在酸性条件下分解从属于拟无枝酸菌属的微生物得到的拟无枝酸菌霉素或其盐，得到本发明的新型化合物或其盐，它们由下述通式(1)表示，并具有细胞增殖抑制活性。在下述通式(1)中，“R”表示氢原子或烷基。通式(1)

Description

新型化合物拟无枝酸菌糖衍生物、它们的生产方法和应用
技术领域
本发明涉及新型化合物拟无枝酸菌糖(amycolose)衍生物、它们的生产方法以及它们的应用。
背景技术
从发育到死亡，生物体重复地进行细胞增殖、细胞分化和细胞凋亡等同时来维持生命。当细胞调节机制受损时，则形成各种疾病。其中，癌症是这样的疾病：细胞增殖的调节变得异常导致细胞无限生长。癌症是难以治疗的一种疾病，从排在世界上人口的死亡原因的前列这一方面来说是个问题。
尽管最近癌症治疗取得了进展，仍然尚未提供具有令人满意的细胞增殖抑制活性的、能够抑制癌细胞增殖的治疗性药物。因而，现在需要迅速提供具有优良的细胞增殖抑制活性的新型化合物。
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的课题是解决上述现有的诸问题，并实现下述目的。即，本发明的目的是，提供：可容易地生产并具有优良的细胞增殖抑制活性的新型化合物及其盐、及它们的生产方法、和利用了所述新型化合物及其盐的药物组合物。
解决课题的手段
为了解决上述现有的问题，发明人进行了深入的研究的结果获得了下述发现：用酸性水溶液水解由下述结构式(4)表示的化合物，可以生成由下述结构式(1)表示的新型化合物；用酸性醇溶液溶剂分解由下述结构式(4)表示的化合物，可以生成由下述结构式(2)和(3)中的至少一个表示的新型化合物；并且这些新型化合物具有优良的细胞增殖抑制活性。通过分析这些新规化合物的化学结构，发明人还证实了它们是新型化合物，并完成了本发明。需要说明的是，发明人将这些新型化合物命名为“拟无枝酸菌糖(amycolose)衍生物”。
Figure BDA0000137273150000021
结构式(4)
结构式(1)
Figure BDA0000137273150000023
结构式(2)
Figure BDA0000137273150000024
结构式(3)
需要说明的是，由上述结构式(4)表示的化合物是申请人以前发现的化合物，并被命名为“拟无枝酸菌霉素(amycolamicin)”。上述拟无枝酸菌霉素由拟无枝酸菌属MK575-fF5菌株(FERM P-21465)生产，并具有优良的抗细菌活性。
本发明基于发明人得到的上述发现。作为解决上述课题的手段，如下所示。即：
<1>一种由下述通式(1)表示的化合物及其盐，
通式(1)
其中“R”表示氢原子或烷基。
<2>根据<1>所述的化合物及其盐，其中所述“R”是氢原子。
<3>根据<1>所述的化合物及其盐，其中所述“R”是甲基。
<4>一种由下述通式(1)表示的结构的化合物及其盐的方法，
Figure BDA0000137273150000032
通式(1)
其中“R”表示氢原子或烷基，
所述生产方法包括以下步骤：
培养属于拟无枝酸菌属且具有生产由下述结构式(4)表示的化合物及其盐的能力的微生物；
结构式(4)
从所述培养得到的培养物中分离出由该结构式(4)表示的化合物及其盐；知
分解由下述结构式(4)表示的化合物或其盐。
<5>根据<4>所述的化合物及其盐的生产方法，所述生产方法是由下述结构式(1)表示的化合物及其盐的生产方法，
Figure BDA0000137273150000042
结构式(1)
其中所述分解通过酸性水溶液的水解来实现，
<6>根据<5>所述的化合物及其盐的生产方法，其中所述酸性水溶液含有醋酸、硫酸、硝酸和盐酸中的至少一种：。
<7>根据<4>所述的化合物及其盐的生产方法，所述生产方法是由下述结构式(2)和(3)中的至少一个表示的化合物及其盐的生产方法，
Figure BDA0000137273150000043
结构式(2)
Figure BDA0000137273150000051
结构式(3)
其中所述分解通过醇溶液的溶剂分解来实现。
<8>根据<7>所述的化合物及其盐的生产方法，其中所述醇溶液是含有醋酸、硫酸、硝酸和盐酸中的至少一种的酸性醇溶液。
<9>根据<4>至<8>中任一项所述的方法，其中所述微生物是在登录号FERM P-21465下保藏的拟无枝酸菌属MK575-fF5菌株的微生物。
<10>一种药物组合物，特征在于含有由下述通式(1)表示的化合物及其盐，
Figure BDA0000137273150000052
通式(1)
其中“R”表示氢原子或烷基。
<11>根据<10>所述的药物组合物，其中所述药物组合物是细胞增殖抑制剂。
发明效果
根据本发明，能够解决上述现有的问题，并实现上述目的；能够提供可以容易地生产并具有优良的细胞增殖抑制活性的新型化合物及其盐、它们的生产方法、以及利用了所述新型化合物及其盐的药物组合物。
附图说明
图1是通过KBr片方法测得的拟无枝酸菌霉素的红外吸收光谱图，其中，纵坐标为透光度(％)，横坐标为波数(em-1)。
图2是在甲醇中测得的拟无枝酸菌霉素的紫外吸收光谱图，其中，纵坐标为吸光度(Abs)，横坐标为波长(nm)。
图3是在30℃下在氘化的甲醇中测得的拟无枝酸菌霉素在600MHz的1H核磁共振谱图，其中，横坐标的单位为ppm。
图4是在30℃在氘化的甲醇中测得的拟无枝酸菌霉素在150MHz的13CNMR谱图，其中，横坐标的单位为ppm。
图5是拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、化合物2以及化合物3)表现出的细胞增殖抑制活性的图，其中，纵坐标为细胞增殖速率(％)，横坐标为拟无枝酸菌糖衍生物的浓度(μg/mL)。
具体实施方式
(化合物及其盐)
本发明的化合物的特征在于由下述通式(1)表示。由通式(1)表示的化合物是由发明人得到的新型化合物，以下有时称作“拟无枝酸菌糖衍生物”，
Figure BDA0000137273150000061
通式(1)
其中“R”表示氢原子或烷基。
<化合物1>
拟无枝酸菌糖衍生物是由下述结构式(1)表示的化合物，上述通式(1)中“R”是氢原子：
结构式(1)
作为由结构式(1)表示的化合物(在下文中有时称作“化合物1”)的物理化学性质，如下所示。即：
(1)外观：无色糖浆
(2)分子式：C14H20Cl2N2O5
(3)根据高分辨率质谱法(HRESIMS：阳离子模式)，实验值为m/z 389.0640(M+Na)+，计算值为m/z 389.0641(作为C14H20Cl2N2O5Na)
(4)比旋光[α]D23＝+15°(c0.51，氯仿)
(5)在30℃和600MHz在氘化的氯仿中测得的1H核磁共振谱的峰如下。
-化合物1的α形式-
δpm：1.20(3H，d，J＝6.9Hz)，1.20(3H，d，J＝6.2Hz)，1.72(1H，dd，J＝3.8，14.1Hz)，1.84(1H，dd，J＝1.4，14.1Hz)，2.23(3H，s)，3.07(1H，d，J＝9.2Hz)，3.16(1H，t，J＝9.2Hz，)，3.88(1H，dq，J＝9.2，6.2Hz)，4.32(1H，pent.，J＝7.2Hz)，4.97(1H，s)，5.09(1H，dd，J＝3.3，8.0Hz)，5.32(1H，d，J＝9.0Hz)，6.74(1H，d，J＝6.8Hz)，10.20(1H，brs)
-化合物1的β形式-
δpm：1.19(3H，d，J＝6.2Hz)，1.20(3H，d，J＝6.9Hz)，1.42(1H，dd，J＝9.3，13.1Hz)，1.80(1H，dd，J＝2.1，13.1Hz)，2.23(3H，s)，3.02(1H，d，J＝8.9Hz)，3.11(1H，t，8.9Hz，)，3.58(1H，dq，J＝8.9，6.2Hz)，3.92(1H，s)，4.24(1H，d，J＝6.2Hz)，4.31(1H，pent.，J＝7.4Hz)，4.94(1H，ddd，J＝2.1，6.2，9.3Hz)，6.70(1H，d，J＝6.6Hz)，10.20(1H，brs)
(6)在30℃和150MHz在氘化的氯仿中测得的13C核磁共振谱的峰如下。
-化合物1的α形式-
δpm：11.1(q)，16.2(q)，18.5(q)，38.8(t)，52.3(d)，71.1(d)，74.3(d)，76.3(s)，92.7(d)，110.3(s)，111.5(s)，119.8(s)，129.7(s)，161.0(s)
-化合物1的β形式-
δpm：11.1(q)，16.2(q)，18.6(q)，34.8(t)，52.3(d)，65.1(d)，74.5(d)，77.2(s)，93.3(d)，110.2(s)，111.7(s)，119.6(s)，129.5(s)，161.2(s)
作为证实化合物1是否具有由结构式(1)表示的结构的分析方法没有特别限制，可以根据预期目的从各种分析方法中适当地选择。例如，可以举出通过进行质谱、1H核磁共振谱、13C核磁共振谱或红外吸收光谱等分析来确认的方法。
并且，化合物1可以是盐的形式。所述盐没有特别限制，且可以根据预期目的适当地选择。例如可以举出：用与诸如盐酸、硫酸形成的无机酸加成盐；与诸如甲酸、醋酸、三氟醋酸、酒石酸形成的有机酸加成盐；与诸如钠和钾形成的碱金属盐；与诸如钙和镁形成的碱土金属盐；和与诸如甲胺、乙胺和二乙醇胺形成的有机胺盐等。
值得注意的是，化合物1具有互变异构现象，因而上述化合物1包括其互变异构体。
化合物1及其盐可以是源自具有由下述结构式(4)表示的结构的化合物(在下文中可以称作“拟无枝酸菌霉素”)衍生的得到的，也可以通过化学合成得到。其中，化合物1及其盐优选通过下述的本发明的所述化合物及其盐的生产方法得到。
Figure BDA0000137273150000081
结构式(4)
<化合物2和3>
作为通式(1)所表示的化合物中“R”是烷基的化合物，没有特别限制，只要“R”是烷基，可以根据预期目的适当地选择，优选其中“R”是甲基的化合物，更优选由下述结构式(2)和(3)中的至少一个表示的化合物：
结构式(2)
Figure BDA0000137273150000083
结构式(3)
《化合物2》
作为由结构式(2)表示的化合物(在下文中有时称作“化合物2”)的物理化学性质，如下所示。即：
(1)外观：无色糖浆
(2)分子式：C15H22Cl2N2O5
(3)根据高分辨率质谱法(HRESIMS：阳离子模式)，实验值为m/z 403.0788(M+Na)+，计算值为m/z 403.0798(作为C15H22Cl2N2O5Na)
(4)比旋光[α]D23＝-113°(c0.24，氯仿)
(5)在30℃和600MHz在氘化的氯仿中测得的1H核磁共振谱的峰如下。
δpm：1.30(3H，d，J＝7.3Hz)，1.34(3H，d，J＝6.2Hz)，1.49(1H，dd，J＝9.3，13.1Hz)，1.92(1H，dd，J＝2.1，13.1Hz)，2.28(3H，s)，2.50(1H，brs)，3.17(1H，brt，J＝7.9Hz)，3.48(3H，s)，3.64(1H，dq，J＝9.3，6.2，Hz)，4.42(1H，dq，J＝7.3，6.2Hz)，4.69(1H，dd，J＝2.1，9.3Hz)，5.22(1H，brs)，6.63(1H，d，J＝6.2Hz)，9.5-9.6(1H，brs)
(6)在30℃和150MHz在氘化的氯仿中测得的13C核磁共振谱的峰如下。
δpm：11.4(q)，16.1(q)，18.0(q)，36.3(t)，52.6(d)，55.6(q)，70.4(d)，74.2(s)，76.2(d)，99.7(d)，111.1(s)，112.4(s)，117.4(s)，128.7(s)，161.3(s)
确认化合物2是否具有由结构式(2)表示的结构的分析方法没有特别限制，可以根据预期目的从各种分析方法中适当地选择。例如，可以通过进行质谱、1H核磁共振谱、13C核磁共振谱或红外吸收光谱等分析来确认的方法。
并且，化合物2可以是盐的形式。作为所述盐没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择。例如可以举出与诸如盐酸和硫酸形成的无机酸加成盐；与诸如甲酸、醋酸、三氟醋酸和酒石酸形成的有机酸加成盐；与诸如钠和钾形成的碱金属盐；与诸如钙和镁形成的碱土金属盐；和与诸如甲胺、乙胺和二乙醇胺形成的有机胺盐等。
化合物2及其盐可以源自拟无枝酸菌霉素，或可以通过化学合成得到。其中，化合物2及其盐优选通过下述的本发明的所述化合物或其盐的生产方法制得。
《化合物3》
作为由结构式(3)表示的化合物(在下文中有时称作“化合物3”)的物理化学性质，如下所示。即：
(1)外观：无色糖浆
(2)分子式：C15H22Cl2N2O5
(3)根据高分辨率质谱法(HRESIMS：阳离子模式)，实验值为m/z 403.0788(M+Na)+，计算值为m/z 403.0798(作为C15H22Cl2N205Na)。
(4)比旋光[α]D23＝+83°(c0.13，氯仿)
(5)在30℃和600MHz在氘化的氯仿中测得的1H核磁共振谱的峰如下。
δpm：1.27(3H，d，J＝6.8Hz)，1.33(3H，d，J＝6.5Hz)，1.82(1H，dd，J＝3.8，14.4Hz)，1.99(1H，dd，J＝1.1，14.4Hz)，2.27(3H，s)，2.30(1H，brs)，3.24(1H，brd，J＝9.4Hz)，3.38(3H，s)，3.68(1H，dq，J＝9.4，6.5，Hz)，4.14(1H，brs)，4.42(1H，dq，J＝8.6，6.8Hz)，4.84(1H，brd，J＝3.1Hz)，6.84(1H，d，J＝8.6Hz)，9.74(1H，brs)
(6)在30℃和150MHz在氘化的氯仿中测得的13C核磁共振谱的峰如下。
δpm：11.3(q)，16.3(q)，17.9(q)，35.0(t)，50.6(d)，55.2(q)，65.3(d)，73.4(s)，74.2(d)，98.2(d)，110.3(s)，110.9(s)，118.7(s)，127.6(s)，159.3(s)
作为确认化合物3是否具有由结构式(3)表示的结构的分析方法没有特别限制，可以根据预期目的从各种分析方法中适当地选择。例如可以举出通过进行质谱、1H核磁共振谱、13C核磁共振谱或红外吸收光谱分析来进行确认的方法。
并且，化合物3可以是盐的形式。作为所述盐没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择。例如，可以举出与诸如盐酸和硫酸形成的无机酸加成盐；与诸如甲酸、醋酸、三氟醋酸和酒石酸形成的有机酸加成盐；与诸如钠和钾形成的碱金属盐；与诸如钙和镁形成的碱土金属盐；和与诸如甲胺、乙胺和二乙醇胺形成的有机胺盐。
化合物3及其盐可以为源自拟无枝酸菌霉素的衍生物，也可以通过化学合成得到。其中，化合物3及其盐优选通过下述的本发明的所述化合物或其盐的生产方法得到。
<用途>
如下述的试验例1所示，上述的拟无枝酸菌糖衍生物及其盐具有优良的细胞增殖抑制活性。因而，所述拟无枝酸菌糖衍生物及其盐例如可以适当地用作下述的本发明的药物组合物的活性成分。
(化合物及其盐的生产方法)
本发明的化合物(即，拟无枝酸菌糖衍生物)及其盐的生产方法的特征在于包括：培养属于拟无枝酸菌属且具有生产拟无枝酸菌霉素及其盐的能力的微生物；从培养得到的培养物中分离出拟无枝酸菌霉素及其盐；和分解拟无枝酸菌霉素及其盐。
一般而言，由微生物生产的生理活性化合物具有复杂的结构，因而难以通过合成有机化学来生产。但是，可以容易地得到衍生物(它们的部分结构是生理活性的发展所必需的)，并用于合成具有更高细胞增殖抑制活性的化合物，这是有利的。
<拟无枝酸菌霉素的生产方法>
如下生产拟无枝酸菌霉素。具体地，将生产所述拟无枝酸菌霉素的微生物(在下文中有时称作“生产拟无枝酸菌霉素的微生物”)接种进营养培养基中，并在适合生产拟无枝酸菌霉素的温度进行培养，由此得到含有拟无枝酸菌霉素的培养物。
作为用于如上述培养的营养培养基，使用可以用于培养放线菌的营养培养基。作为营养来源，例如可以使用诸如可商业得到的大豆粉、蛋白胨、酵母浸出物、肉膏、玉米浆、硫酸铵等氮源。还可以使用碳水化合物、或脂肪等碳源，所述碳水化合物包括诸如番茄酱、甘油、淀粉、葡萄糖、半乳糖糊精等。另外，还可以将诸如氯化钠和碳酸钙等无机盐加入培养基中来使用。另外，根据需要还可以将痕量的金属盐加入培养基中来使用。这些材料，只要有助于利用上述拟无枝酸菌霉素的生产菌来生长所述拟无枝酸菌霉素即可，可以使用用于培养放线菌的任意已知物质。
拟无枝酸菌霉素的生产使用属于拟无枝酸菌属且能够生产拟无枝酸菌霉素的微生物。具体地，拟无枝酸菌属MK575-fF5菌株(FERM P-21465)的微生物可以生产上述拟无枝酸菌霉素。并且，通过用于分离所述生产菌的常规方法，可以从自然界中分离出能够生产拟无枝酸菌霉素的其它菌株。值得注意的是，通过对包括拟无枝酸菌属MK575-fF5菌株在内的所述拟无枝酸菌霉素的生产菌进行放射线照射或其他突变处理，能够提高所述拟无枝酸菌霉素的生产能力。此外，可以通过基因工程技术，生产拟无枝酸菌霉素。
作为用于生产拟无枝酸菌霉素的种子培养物可以是，例如，通过生产拟无枝酸菌霉素的细菌在琼脂培养基上的斜面培养物得到的生长培养物。为了生产拟无枝酸菌霉素，优选地，在适当培养基中好氧地培养拟无枝酸菌霉素的生产菌。并且，为了从得到的培养物分离出靶化合物，可以使用常规方法。培养温度没有特别限制，只要拟无枝酸菌霉素的生产菌的生长实质上不被抑制，并在可以生产拟无枝酸菌霉素的范围内，可以根据生产拟无枝酸菌霉素的微生物的类型来确定。其中，优选为25℃-35℃范围内的温度。
例如，源自拟无枝酸菌属MK575-fF5菌株的拟无枝酸菌霉素生产通常在第3天至第9天达到最大。通过例如HPLC或圆筒板方法(使用金黄色葡萄球菌或其它细菌作为测试细菌)，可以测量该培养物中拟无枝酸菌霉素的效价随时间的变化。
在上述的生产方法中，从得到的培养物中分离出拟无枝酸菌霉素。作为分离方法，可以适当地利用用于分离微生物生产的代谢物的方法。例如，可以单独利用或并用使用与水不混溶的溶剂进行萃取的方法、利用对不同吸附剂的吸附亲和力的差异的方法、凝胶过滤、利用反流分布的色谱法等来分离拟无枝酸菌霉素。另外，可以通过使用适当有机溶剂的提取方法，或通过破碎微生物的洗脱方法，从分离的菌体分离所述分离出拟无枝酸菌霉素，并进行与上述相同的分离/纯化。
执行如上所述，可以得到所述拟无枝酸菌霉素。值得注意的是，拟无枝酸菌霉素具有互变异构现象，因而包括其互变异构体。
由于拟无枝酸菌霉素是酸性化合物，通常可以采用已知的方法，使用例如药学上可接受的各种金属(例如，碱金属)或有机碱(例如，季铵盐)，来生产拟无枝酸菌霉素及其盐。
-微生物-
上述的微生物属于拟无枝酸菌(Amycolatopsis)属，特征在于具有生产拟无枝酸菌霉素(Amycolamicin)及其盐的能力。由于所述微生物属于拟无枝酸菌属且具有生产拟无枝酸菌霉素及其盐的能力，在所述拟无枝酸菌霉素及其盐的生产方法中没有特别限制，只要它属于拟无枝酸菌属，且能够生产拟无枝酸菌霉素及其盐即可，可以根据预期目的适当地选择。
具体地，优选使用从宫城省(Miyagi)仙台市(Sendai-shi)的土壤中分离出的放线菌，其在1996年5月被微生物化学研究基金会(Microbial ChemistryResearch Foundation)的微生物化学研究中心赋予登录号MK575-fF5菌株。所述MK575-fF5菌株的真菌学特征如下。
1.形态
基质菌丝以之字形式(zig-zag form)良好分枝。并观察到有***。气生菌丝在有些情况下生长，在其它情况下不生长。当气生菌丝生长时，气生菌丝相对较长，呈直线，或不规则地弯曲，并***成圆柱形孢子。表面是平滑的，且大小是(约0.4μm～0.6μm)×(约0.8μm～2.2μm)。气生菌丝也可以纠结在一起，形成球形。没有观察到轮生体、菌丝链、孢子囊和自动孢子。
2.在不同培养基中的生长条件
在方括号中的关于颜色的标准是基于美国Container Corporation的色彩和谐手册(color harmony manual)。
(1)酵母-麦芽琼脂培养基(ISP-培养基2，在27℃培养)
该菌株生长成淡黄色[2gc，竹色]，并在有些情况下稍微形成白色气生菌丝而在其它情况下不形成它们。没有观察到可溶性的染料。
(2)燕麦片琼脂培养基(ISP-培养基3，在27℃培养)
该菌株生长成淡黄色[2gc，竹色]，并在有些情况下稍微形成白色气生菌丝而在其它情况下不形成它们。没有观察到可溶性的染料。
(3)淀粉-无机盐琼脂培养基(ISP-培养基4，在27℃培养)
该菌株生长成淡黄色[2ea，淡麦色]至暗黄色[3nc，琥珀色]，并在有些情况下略微形成白色气生菌丝。没有观察到可溶性的染料。
(4)甘油-天冬酰胺琼脂培养基(ISP-培养基5，在27℃培养)
该菌株生长成暗微黄橙色[3lc，琥珀色]，并在有些情况下形成淡橙色[4ea，淡杏色]的气生菌丝而在其它情况下不形成它们。没有观察到可溶性的染料。
(5)酪氨酸琼脂培养基(ISP-培养基7，在27℃培养)
该菌株生长成淡黄色[3ca，珍珠粉红色]至暗微黄橙色[3lc，琥珀色]，并在有些情况下形成淡橙色[4ca，鲜粉红色]的气生菌丝而在其它情况下不形成它们。没有观察到可溶性的染料。
(6)蔗糖-硝酸盐琼脂培养基(在27℃培养)
该菌株生长成无色至淡黄橙色[3ea，淡甜瓜黄色]，并在有些情况下稍微形成白色气生菌丝而在其它情况下不形成它们。没有生成可溶性的染料。
3.生理学性质
(1)生长温度范围
在10℃、20℃、24℃、27℃、30℃、37℃、45℃以及50℃的温度，使用葡萄糖-天冬氨酸琼脂培养基(葡萄糖：1.0质量％，L-天冬氨酸：0.05质量％，磷酸氢二钾：0.05质量％，菜豆琼脂：3.0质量％，pH 7.0)进行试验。其结果，所述菌株在10℃、45℃以及50℃不生长，但是在20℃至37℃生长。最适生长温度是30℃附近。
(2)淀粉的水解(淀粉-无机盐琼脂培养基，ISP-培养基4，在27℃培养)
通过21天的培养，呈阴性。
(3)黑色素样染料的生成(胰蛋白胨-酵母-培养液，ISP-培养基1；蛋白胨-酵母-铁琼脂培养基，ISP-培养基6；酪氨酸琼脂培养基，ISP-培养基7；对于任一种培养基，均在27℃培养)
对于任一种培养基，均为阴性。
(4)碳源的利用性(Pridham-Godleave琼脂培养基，ISP-培养基9；在27℃培养)
该菌株利用D-葡萄糖、L-***糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、肌醇、鼠李糖、棉子糖和D-甘露醇进行生长。
(5)硝酸盐的还原反应(含有0.1质量％硝酸钾的蛋白胨水，ISP-培养基8，在27℃培养)
为阳性。
4.菌体组分
(1)细胞壁的组成
细胞壁含有内消旋-2，6-二氨基庚二酸。
(2)每种菌体中的还原糖
含有***糖和半乳糖，为A型。
(3)类异戊二烯醌
含有MK-9(H4)和小量MK-10(H4)作为主要的甲基萘醌。
(4)磷脂
PII型(含有磷脂酰乙醇胺，但是不含有磷脂酰胆碱和未知的含有葡糖胺的磷脂)。
(5)分枝菌酸
不含有。
5.16S rRNA基因的分析
测定了16S rRNA基因的部分核苷酸序列(1,455个核苷酸)，并基于国际核苷酸序列数据库(GenBank/DDBJ/EMBL)，检索同源性。结果，如下所示，MK575-fF5菌株的核苷酸序列与属于拟无枝酸菌属的放线菌的16SrRNA基因的核苷酸序列显示出高同源性，即，Amycolatopsis kentuckyensis(99.1％)，Amycolatopsis rifamycinica(99.03％)，Amycolatopsis mediterranei(98.9％)，和Amycolatopsis balhimycetica(98.82％)等。应当指出，在括号中的值是所述核苷酸序列之间的同源性。
总之，MK575-fF5菌株的基质菌丝是之字形式，并***。气生菌丝呈直线，或不规则地弯曲，并***成圆柱形孢子。没有观察到轮生体、菌丝链、孢子囊和自动孢子。MK575-fF5菌株在不同的培养基中生长成无色至黄橙色。在有些情况下形成白色至淡橙色的气生菌丝而在其它情况下不形成。没有观察到可溶性的染料。最适生长温度是约30℃。在黑色素样染料生成和淀粉水解方面，该菌株是阴性的，但是在硝酸盐的还原反应方面，是阳性的。
关于MK575-fF5菌株的菌体组分，所有菌体的水解产物含有内消旋-2，6-二氨基庚二酸、***糖和半乳糖，细胞壁是IV型，且所有的还原糖是A型。并且，不含有分枝菌酸，且磷脂是PII型(含有磷脂酰乙醇胺，但是不含有磷脂酰胆碱和未知的含有葡糖胺的磷脂)，主要的甲基萘醌是MK-9(H4)。
通过对比16S rRNA基因的部分核苷酸序列和已知细菌菌株的数据，发现所述核苷酸序列与属于拟无枝酸菌属的放线菌的核苷酸序列具有高同源性。
综上所述，认为MK575-fF5菌株属于拟无枝酸菌属(International Journalof Systematic Bacteriology，Vol.36，第29-37页，1986)。然后，将MK575-fF5菌株命名为拟无枝酸菌属MK575-fF5菌株。需要说明的是，在2007年12月12日将MK575-fF5菌株保藏在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(National Institute of Advanced Industrial Science and Technology，International Patent Organism Depositary)，保藏号为FERM P-21465。
<拟无枝酸菌糖衍生物的生产方法>
所述拟无枝酸菌糖衍生物或其盐的生产方法没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，但优选通过分解来生产拟无枝酸菌霉素及其盐的方法。
作为上述分解方法，没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出水解方法和溶剂分解方法等。其中，为了生产化合物1及其盐，优选使用水解方法；为了生产化合物2和3中的至少一种及其盐，优选使用溶剂分解方法。
-水解方法-
作为上述水解方法没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，但优选用酸性水溶液进行水解。
作为上述酸性水溶液没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出醋酸水溶液、硫酸水溶液、硝酸水溶液和盐酸水溶液等。上述的酸性水溶液可以单独使用也可并用。
作为进行水解的温度没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，但是优选为0℃-100℃、更优选为20℃-40℃。
作为进行上述水解的时间没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，但是优选为0.5小时-24小时、更优选为1小时-3小时。
作为终止上述水解反应的方法没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择。例如，可以用饱和碳酸氢钠水溶液和各种缓冲液中的任一种来终止水解反应。
优选地，用溶剂萃取进行上述水解以后得到的反应混合物，因为可以以较高的浓度得到上述化合物1及其盐。
作为所述溶剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出乙酸乙酯、二***、氯仿和二氯甲烷。
作为对萃取以后的化合物1进行纯化的方法没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以单独使用或并用如下方法：利用对不同吸附剂的吸附亲和力的差异的方法，凝胶过滤，利用反流分布的色谱法。
-溶剂分解方法-
作为进行上述溶剂分解的方法没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，但优选用醇溶液进行溶剂分解的溶剂分解方法，更优选用酸性醇溶液进行溶剂分解的溶剂分解方法。
作为上述醇溶液没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇和正丁醇等。上述的醇溶液可以单独使用也可并用。
作为上述酸性醇溶液中含有的酸没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出醋酸、硫酸、硝酸和盐酸等。这些酸可以单独使用也可并用。
作为进行溶剂分解的温度没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，但是优选为0℃-100℃、更优选为20℃-40℃。
作为进行溶剂分解的时间没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，但是优选为0.5小时-24小时、更优选为1小时-3小时。
作为终止溶剂分解的方法没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择。例如，可以举出用饱和碳酸氢钠水溶液、各种缓冲液等来终止溶剂分解。
优选地，对上述溶剂分解以后得到的反应混合物进行溶剂萃取，因为可以以较高的浓度得到化合物2和3中的至少一种及其盐。
作为所述溶剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出乙酸乙酯、二***、氯仿和二氯甲烷等。
作为对上述萃取以后的化合物2和3中的至少一种及其盐进行纯化的方法没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以单独使用或并用如下方法：利用对不同吸附剂的吸附亲和力的差异的方法，凝胶过滤，利用反流分布的色谱法。
(药物组合物)
本发明的药物组合物含有上述的拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、2和3中的至少一种)及其盐；并且，根据需要还可以含有其它成分。
<拟无枝酸菌糖衍生物>
作为在药物组合物中所含有的拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、2和3中的至少一种)及其盐的含量没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择。并且，所述药物组合物可以是拟无枝酸菌糖衍生物及其盐本身。
<其它成分>
作为上述其它成分没有特别限制，可以根据预期目的适当地选自药理学上可接受的载体。作为具体实例包括乙醇、水和淀粉等。作为在药物组合物中所含有的其它成分的含量没有特别限制，在不妨碍拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、2和3中的至少一种)或其盐的效应的范围内，可以根据预期目的适当地选择。
<剂型>
作为上述药物组合物的剂型没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出口服固体制剂、口服液体制剂、注射剂和吸入粉末等。
-口服固体制剂-
作为上述口服固体制剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出片剂、包衣片剂、颗粒剂、散剂和胶囊剂等。
作为上述口服固体制剂的生产方法没有特别限制，可以是常规方法。例如，可以如下生产口服固体制剂：将赋形剂和(如果必要的话)上述的其它成分和各种添加剂加入拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、2和3中的至少一种)及其盐中。在这里，作为所述赋形剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出乳糖、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、淀粉、碳酸钙、高岭土、微晶纤维素和硅酸等。另外，作为所述添加剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出结合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂和甜味剂/矫味剂等。
作为所述结合剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出水、乙醇、丙醇、单糖浆、葡萄糖液、淀粉液、明胶液、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟基丙基淀粉、甲基纤维素、乙基纤维素、紫胶、磷酸钙和聚乙烯吡咯烷酮等。
作为所述崩解剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出干淀粉、海藻酸钠、琼脂粉、碳酸氢钠、碳酸钙、月桂基硫酸钠、硬脂酸甘油单酯和乳糖等。
作为所述润滑剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出纯化的滑石、硬脂酸盐、硼砂和聚乙二醇等。
作为所述着色剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出氧化钛和氧化铁等。
作为所述甜味剂/矫味剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出蔗糖、橙皮、柠檬酸和酒石酸等。
-口服液体制剂-
作为所述口服液体制剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出内服液、糖浆和酏剂等。
作为所述口服液体制剂的生产方法没有特别限制，可以是常规方法，例如，可以如下生产口服液体制剂：将赋形剂和(如果必要的话)上述的其它成分和各种添加剂加入拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、2和3中的至少一种)及其盐中。在这里，添加剂没有特别限制，且可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出甜味剂/矫味剂、缓冲剂和稳定剂等。
作为上述甜味剂/矫味剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出蔗糖、橙皮、柠檬酸和酒石酸等。
作为上述缓冲剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出柠檬酸钠等。
作为上述稳定剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出黄蓍胶、***树胶和明胶等。
-注射剂-
作为上述注射剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出溶液、混悬液和在使用前重构的固体制剂等。
作为上述注射剂的生产方法没有特别限制，可以是常规方法，例如，可以如下生产注射剂：根据需要，将上述的其它成分、pH调节剂、缓冲剂、稳定剂、等渗剂和局部麻醉剂加入上述拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、2和3中的至少一种)及其盐中。在这里，作为上述pH调节剂及缓冲剂没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出柠檬酸钠、醋酸钠和磷酸钠等。另外，作为上述稳定剂也没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出焦亚硫酸钠、EDTA、巯基乙酸和硫代乳酸等。作为上述等渗剂也没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出氯化钠和葡萄糖等。作为上述局部麻醉剂也没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出盐酸普鲁卡因和盐酸利多卡因等。
<给药>
作为上述药物组合物的给药方法、给药剂量、给药时机和要给药的受试者没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择。
作为上述给药方法没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如包括口服给药法、通过注射的方法和通过吸入的方法。
作为上述给药剂量没有特别限制，可以考虑要给药的受试者的年龄、体重、体质、征状以及是否存在含有其它活性成分的药物的给药等各种因素进行适当地选择。
作为用作要给药的受试者的动物物种没有特别限制，可以根据预期目的适当地选择，例如可以举出人、猴、猪、牛、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠和鸟等，其中，药物组合物合适地施用给人。
<用法>
所述药物组合物可以单独使用，或与以其它成分为有效成分的药物并用。另外，还可以将上述药物组合物配制在以其它成分为有效成分的药物中来使用。
<用途>
由于所述药物组合物作为有效成分而含有拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、2和3中的至少一种)及其盐，如在下述的试验例1中所述，具有优良的细胞增殖抑制活性。因此，所述药物组合物可以适当地用作细胞增殖抑制剂，并可用于预防或治疗癌症。
实施例
接下来将通过实施例详细地描述本发明，当不应当解释为本发明限于所述实施例。
(实施例1：化合物1的生产)
<拟无枝酸菌霉素的生产>将在琼脂斜面培养基中培养的拟无枝酸菌属MK575-fF5菌株(保藏为FERM P-21465)的细胞接种于如下形成的液体培养基中：分别在500mL锥形瓶中注入110mL含有半乳糖2质量％、糊精2质量％、甘油1质量％、Bacto Soytone(Difco Co.，Ltd.的产品)1质量％、玉米浆0.5质量％、硫酸铵0.2质量％和碳酸钙0.2质量％的液体培养基(将液体培养基的pH调至7.4)，随后在120℃常规灭菌20min。将上面培养的细胞接种进所述液体培养基中。此后，在30℃旋转摇动以培养4天，从而得到种子培养液。
在200L培养罐中制备具有下述组成的培养基(100L)：甘油0.5质量％、糊精0.5质量％、Bacto Soytone(Difco Co.，Ltd.的产品)0.25质量％、酵母浸出物(日本制药株式会社的产品)0.075质量％、硫酸铵0.05质量％和碳酸钙0.05质量％(将培养基的pH调至7.4)，随后灭菌，从而得到生产培养基。将2体积％的每种种子培养物接种进生产培养基中，随后在下述条件下，在罐中培养4天：27℃，200rpm，空气流速100L/min。
离心如上得到的培养物，从而分离成80L培养物滤液和2.5kg菌体。随后，在菌体中加入12L甲醇并彻底搅拌，进而用甲醇从菌体中提取由下述结构式(4)表示的化合物(在下文中可以称作“拟无枝酸菌霉素”)。将其在减压下去除甲醇，得到2L含有拟无枝酸菌霉素的菌体萃取液。然后，将6L乙酸乙酯加入2L的菌体萃取液中，充分搅拌得到的混合物，用乙酸乙酯萃取的拟无枝酸菌霉素。用无水硫酸钠干燥得到的用6L乙酸乙酯萃取的拟无枝酸菌霉素，然后在减压下浓缩和干燥，从而得到18g含有拟无枝酸菌霉素的粗产物。将己烷(200mL)加入18g含有拟无枝酸菌霉素的粗产物，去除己烷可溶性的成分，从而得到3.3g含有拟无枝酸菌霉素的己烷不溶性的级分。将含有拟无枝酸菌霉素的己烷不溶性的级分(3.3g)溶解于甲醇中，用Sephadex LH-20(内径28mm×长度450mm，Pharmacia Biotech Inc.的产品)柱，色谱分离得到的溶液。每8g(一个级分)分级分离溶液，结果，活性级分被洗脱为级分12-15。收集上述级分，并在减压下浓缩干燥，从而得到1,584mg含有拟无枝酸菌霉素的粗产物。将该1,584mg粗产物溶解于少量甲醇中，将50mL硅藻土(Merck Co.的产品)加入得到的溶液中，在减压下浓缩和干燥溶剂。将硅藻土载于硅胶柱(内径32mm×长度175mm，Merck Co.的产品)，以进行色谱分析。作为展开溶剂依次使用氯仿∶甲醇∶水＝100∶0∶0(200mL)、95∶5∶0(450mL)、1∶95∶5∶0.25(450mL)和1∶90∶10∶0.5(450mL)。对分离溶液按一个级分18g进行分级，结果，拟无枝酸菌霉素被洗脱为级分76-103，对其进行收集并在减压下浓缩和干燥，从而得到827mg纯的拟无枝酸菌霉素。
Figure BDA0000137273150000211
结构式(4)
通过分析得到的拟无枝酸菌霉素的物理化学性质，发现它具有下述的物理化学性质。从所述物理化学性质，确认拟无枝酸菌霉素是由下述结构式(4)表示的化合物。并且，发现该拟无枝酸菌霉素具有互变异构现象。
(1)外观：白色粉末
(2)分子式：C44H60Cl2N4O14
(3)根据高分辨率质谱法(HRESIMS：阴离子模式)分析，实验值为m/z937.3386(M+Na)+，计算值为m/z 937.3405(作为C44H59Cl2N4O14)
(4)比旋光[α]D23＝-21.6°(c0.5，甲醇)
(5)红外吸收光谱如图1所示。
(6)紫外吸收光谱如图2所示。
(7)在30℃和600MHz在氘化的甲醇中测得的1H核磁共振谱如图3所示。
(8)在30℃和150MHz在氘化的甲醇中测得的13C核磁共振谱如图4所示。
(9)作为薄层色谱法，在硅胶60F254(Merck Co.的产品)的薄层色谱法中，作为展开溶剂而使用氯仿∶甲醇(90∶10，按体积计)且展开时的Rf值为0.31。
Figure BDA0000137273150000221
结构式(4)
<拟无枝酸菌霉素的水解>将4M盐酸(1mL)与拟无枝酸菌霉素(2.05mg，2.18nmol)的四氢呋喃溶液(0.5mL)混合，并在室温搅拌2小时以进行水解。在已经用10mL饱和碳酸氢钠水溶液终止水解反应以后，用乙酸乙酯萃取反应混合物3次。用饱和盐水洗涤得到的有机层，并用硫酸镁脱水。在已经通过过滤去除硫酸镁以后，在减压下蒸发溶剂。通过薄层硅胶色谱法(展开溶剂乙酸乙酯∶甲醇(90∶10，按体积计))纯化残余物，作为水解产物得到化合物1。化合物1的产量是0.78mg，其摩尔产率为97％。
通过对得到的化合物1的物理化学性质进行分析，发现它具有下述的物理化学性质，并确认了该化合物1是由下述结构式(1)表示的化合物。另外，发现该化合物1具有互变异构现象。
(1)外观：无色糖浆
(2)分子式：C14H20Cl2N2O5
(3)根据高分辨率质谱法(HRESIMS：阳离子模式)分析，实验值为m/z389.0640(M+Na)+，计算值为m/z 389.0641(作为C14H20Cl2N2O5Na)
(4)比旋光[α]D23＝+15°(c0.51，氯仿)
(5)在30℃和600MHz在氘化的氯仿中测得的1H核磁共振谱的峰如下。
-化合物1的α形式-
δpm：1.20(3H，d，J＝6.9Hz)，1.20(3H，d，J＝6.2Hz)，1.72(1H，dd，J＝3.8，14.1Hz)，1.84(1H，dd，J＝1.4，14.1Hz)，2.23(3H，s)，3.07(1H，d，J＝9.2Hz)，3.16(1H，t，J＝9.2Hz，)，3.88(1H，dq，J＝9.2，6.2Hz)，4.32(1H，pent.，J＝7.2Hz)，4.97(1H，s)，5.09(1H，dd，J＝3.3，8.0Hz)，5.32(1H，d，J＝9.0Hz)，6.74(1H，d，J＝6.8Hz)，10.20(1H，brs)
-化合物1的β形式-
δpm：1.19(3H，d，J＝6.2Hz)，1.20(3H，d，J＝6.9Hz)，1.42(1H，dd，J＝9.3，13.1Hz)，1.80(1H，dd，J＝2.1，13.1Hz)，2.23(3H，s)，3.02(1H，d，J＝8.9Hz)，3.11(1H，t，8.9Hz，)，3.58(1H，dq，J＝8.9，6.2Hz)，3.92(1H，s)，4.24(1H，d，J＝6.2Hz)，4.31(1H，pent.，J＝7.4Hz)，4.94(1H，ddd，J＝2.1，6.2，9.3Hz)，6.70(1H，d，J＝6.6Hz)，10.20(1H，brs)
(6)在30℃和150MHz在氘化的氯仿中测得的13C核磁共振谱的峰如下。
-化合物1的α形式-
δpm：11.1(q)，16.2(q)，18.5(q)，38.8(t)，52.3(d)，71.1(d)，74.3(d)，76.3(s)，92.7(d)，110.3(s)，111.5(s)，119.8(s)，129.7(s)，161.0(s)
-化合物1的β形式-
δpm：11.1(q)，16.2(q)，18.6(q)，34.8(t)，52.3(d)，65.1(d)，74.5(d)，77.2(s)，93.3(d)，110.2(s)，111.7(s)，119.6(s)，129.5(s)，161.2(s)
Figure BDA0000137273150000231
结构式(1)
(实施例2：化合物2和3的生产)
将5质量％的盐酸甲醇溶液(1mL)与拟无枝酸菌霉素(19.5mg，20.7nmol)的甲醇溶液(1mL)相混合，将得到的混合物在室温搅拌3小时，以进行溶剂分解。在已通过10mL饱和碳酸氢钠水溶液来终止溶剂分解反应以后，用乙酸乙酯萃取反应混合物3次。用饱和盐水洗涤得到的有机层，并用硫酸镁脱水。在通过过滤去除硫酸镁以后，在减压下蒸发溶剂。通过薄层硅胶色谱法(展开溶剂乙酸乙酯∶甲醇(95∶5，按体积计))，纯化残余物，从而得到β-甲基糖苷化合物(化合物2)和α-甲基糖苷化合物(化合物3)。发现化合物2的产量是4.8mg，其摩尔产率是64％。发现化合物3的产量是2.5mg，其摩尔产率是33％。
通过对得到的化合物2的物理化学性质进行分析，发现它具有下述的物理化学性质，并确认了化合物2是由下述结构式(2)表示的新型化合物。
(1)外观：无色糖浆
(2)分子式：C15H22Cl2N2O5
(3)根据高分辨率质谱法(HRESIMS：阳离子模式)分析，实验值为m/z403.0788(M+Na)+，计算值为m/z 403.0798(作为C15H22Cl2N2O5Na)
(4)比旋光[α]D23＝-113°(c0.24，氯仿)
(5)在30℃和600MHz在氘化的氯仿中测得的1H核磁共振谱的峰如下。
δpm：1.30(3H，d，J＝7.3Hz)，1.34(3H，d，J＝6.2Hz)，1.49(1H，dd，J＝9.3，13.1Hz)，1.92(1H，dd，J＝2.1，13.1Hz)，2.28(3H，s)，2.50(1H，brs)，3.17(1H，brt，J＝7.9Hz)，3.48(3H，s)，3.64(1H，dq，J＝9.3，6.2，Hz)，4.42(1H，dq，J＝7.3，6.2Hz)，4.69(1H，dd，J＝2.1，9.3Hz)，5.22(1H，brs)，6.63(1H，d，J＝6.2Hz)，9.5-9.6(1H，brs)
(6)在30℃和150MHz在氘化的氯仿中测得的13C核磁共振谱的峰如下。
δpm：11.4(q)，16.1(q)，18.0(q)，36.3(t)，52.6(d)，55.6(q)，70.4(d)，74.2(s)，76.2(d)，99.7(d)，111.1(s)，112.4(s)，117.4(s)，128.7(s)，161.3(s)
Figure BDA0000137273150000241
结构式(2)
通过对得到的化合物3的物理化学性质进行分析，发现它具有下述的物理化学性质，并确认了化合物3是由下述结构式(3)表示的新型化合物。
(1)外观：无色糖浆
(2)分子式：C15H22Cl2N2O5
(3)根据高分辨率质谱法(HRESIMS：阳离子模式)分析，实验值为m/z403.0788(M+Na)+，计算值为m/z 403.0798(作为C15H22Cl2N2O5Na)
(4)比旋光[α]D23＝+83°(c0.13，氯仿)
(5)在30℃和600MHz在氘化的氯仿中测得的1H核磁共振谱的峰如下。
δpm：1.27(3H，d，J＝6.8Hz)，1.33(3H，d，J＝6.5Hz)，1.82(1H，dd，J＝3.8，14.4Hz)，1.99(1H，dd，J＝1.1，14.4Hz)，2.27(3H，s)，2.30(1H，brs)，3.24(1H，brd，J＝9.4Hz)，3.38(3H，s)，3.68(1H，dq，J＝9.4，6.5，Hz)，4.14(1H，brs)，4.42(1H，dq，J＝8.6，6.8Hz)，4.84(1H，brd，J＝3.1Hz)，6.84(1H，d，J＝8.6Hz)，9.74(1H，brs)
(6)在30℃和150MHz在氘化的氯仿中测得的13C核磁共振谱的峰如下。
δpm：11.3(q)，16.3(q)，17.9(q)，35.0(t)，50.6(d)，55.2(q)，65.3(d)，73.4(s)，74.2(d)，98.2(d)，110.3(s)，110.9(s)，118.7(s)，127.6(s)，159.3(s)
Figure BDA0000137273150000251
结构式(3)
在下述的试验例1中，测量每种得到的拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、2和3)的细胞增殖抑制活性。
(试验例1：细胞增殖抑制活性)
将人***基质细胞PrSC(Bio Whittaker的产品)加入含有10质量％FBS(胎牛血清)(ICN Biomedicals的产品)的DMEM(日本制药株式会社的产品)中，以制备浓度为5×104细胞/mL的细胞悬浮液。将细胞悬浮液放入96-孔板中，每孔的量为0.1mL。将每种拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、2和3)加入孔中，以使终浓度分别为0.024μg/mL、0.098μg/mL、0.391μg/mL、1.563μg/mL、6.25μg/mL、25μg/mL以及100μg/mL，随后在37℃、5％CO2下在培养箱中培养3天。然后，将已经用磷酸盐缓冲液调节至浓度为5mg/mL的MTT(3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基溴化四氮唑)(Sigma Co.的产品)每孔10μL的量加入各孔中，，随后在37℃、5％CO2下在培养箱中培养4小时。随后，在各孔中加入100μL的用10mM盐酸制备的20质量％的SDS(月桂基硫酸钠)，将该96-孔板在37℃静置过夜，以溶解从MTT形成的甲臜(formazan)。此后，用吸光测定计在570nm测量平吸光度(在下文中有时称作“加入拟无枝酸菌糖衍生物的样品的吸光度”)。以未加入拟无枝酸菌糖衍生物情况下的吸光度为100％(在下文中有时称作“对照吸光度”)，使用下述方程(1)，计算在上述各浓度的拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、2和3)中的细胞增殖速率。结果如图5所示。
细胞增殖速率(％)＝加入拟无枝酸菌糖衍生物的样品的吸光度/对照吸光度×100......方程(1)
从图5可见，发现拟无枝酸菌糖衍生物(化合物1、2和3)表现出细胞增殖抑制活性，其中，化合物1表现出显著的细胞增殖抑制活性。
工业上的可利用性
根据本发明的拟无枝酸菌糖衍生物及其盐具有优良的细胞增殖抑制活性，因而可以适当地用作抑制癌等细胞增殖的药物组合物的活性成分。

Claims (9)

1.一种具有由下述通式(1)表示的结构的化合物及其盐，
Figure FDA0000137273140000011
通式(1)
其中“R”表示氢原子或烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物及其盐，其中所述“R”是氢原子。
3.根据权利要求1所述的化合物及其盐，其中所述“R”是甲基。
4.一种化合物及其盐的生产方法，其特征在于，所述生产方法为具有由下述通式(1)表示的结构化合物及其盐的生产方法，
Figure FDA0000137273140000012
通式(1)
其中“R”表示氢原子或烷基，
所述生产方法包括以下步骤：
培养属于拟无枝酸菌属且具有生产由下述结构式(4)表示的化合物及其盐的能力的微生物；
Figure FDA0000137273140000013
结构式(4)
从所述培养得到的培养物中分离出由该结构式(4)表示的化合物及其盐；知
分解由该结构式(4)表示的化合物及其盐。
5.根据权利要求4所述的化合物及其盐的生产方法，所述生产方法是由下述结构式(1)表示的化合物及其盐的生产方法，
Figure FDA0000137273140000021
结构式(1)
其中所述分解通过酸性水溶液的水解来实现。
6.根据权利要求5所述的化合物及其盐的生产方法，其中所述酸性水溶液含有醋酸、硫酸、硝酸和盐酸中的至少一种。
7.根据权利要求4所述的化合物及其盐的生产方法，所述生产方法是由下述结构式(2)和(3)中的至少一个表示的化合物及其盐的生产方法，
Figure FDA0000137273140000022
结构式(2)
Figure FDA0000137273140000023
结构式(3)
其中所述分解通过醇溶液的溶剂分解来实现。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述醇溶液是含有醋酸、硫酸、硝酸和盐酸中的至少一种的酸性醇溶液。
9.一种药物组合物，其特征在于，含有由下述通式(1)表示的化合物及其盐：
Figure FDA0000137273140000031
通式(1)
其中“R”表示氢原子或烷基。
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