CN102732600A

CN102732600A - 肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法

Info

Publication number: CN102732600A
Application number: CN2011100919671A
Authority: CN
Inventors: 郜恒骏; 盛海辉
Original assignee: SHANGHAI OUTDO BIOTECH CO Ltd
Current assignee: SHANGHAI OUTDO BIOTECH CO Ltd
Priority date: 2011-04-13
Filing date: 2011-04-13
Publication date: 2012-10-17

Abstract

本发明公开了肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法，包括步骤：1)提取受检者样本DNA；2)对样本DNA进行目的基因的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记；3)荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测目的基因的SNP位点；4)根据步骤3)得到的基因分型结果，分析受检者对抗肿瘤药物疗效和毒副作用。通过相关基因分型，可以对肿瘤患者进行疗效评估，从而制订最科学的个性化治疗方案，以提高疗效、降低甚或避免毒副作用的发生。

Description

肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法

技术领域

本发明涉及一肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法，特别是涉及一种化疗疗效基因测评及套组方法。

背景技术

随着我国社会经济的发展和人民生活方式的改变，老龄化趋势越来越明显，非传染性疾病/慢性病(如恶性肿瘤、心脑血管疾病、糖尿病、高血压等)的发病率不断上升。恶性肿瘤已成为我国重要的健康问题，是我国男性的头号杀手，在女性中仅次于心脏病和脑血管疾病，排在第三位¹。近年来恶性肿瘤的诊治虽然取得了长足的进展，但长期以来，临床医生往往根据药物的临床试验，对同一种恶性肿瘤按照相同的剂量服用同样的药物，或根据临床经验对剂量做出稍微的调整，经常出现相同的药物治疗同一病症的不同病人时，产生大相径庭的疗效，甚至有些病人发生严重的副作用或无反应，除造成巨大的浪费之外，有时则直接耽搁了肿瘤的及时治疗，延误病情。现已清楚，环境因素和遗传因素是造成个体间这种药物效应差异的主要原因，因此恶性肿瘤治疗的发展将很大程度取决于药物基因组学(pharmacogemonics)的研究与应用。

人类基因组计划的完成、HapMap图谱和基因组结构图的公布，揭示了人基因组中存在着大量的SNP和拷贝数变异(copy number variation)等遗传变异，个体间基因组差异至少在15％。遗传变异通过改变基因的表达、翻译和蛋白质功能，从而产生对疾病易感或药物效应差异的表型。药物基因组学的研究焦点是鉴定与药物疗效和毒副作用相关的药物代谢、药物转运和药物靶体等基因的多态位点，根据患者的遗传特征建立最优化的治疗方案，获得最高的疗效，而毒副作用却最小，进行个性化治疗。药物基因组学为我们从恶性肿瘤的综合治疗由标准化过度到个性化指明了方向。

5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)是目前肠道等恶性肿瘤的基本化疗药物之一，是许多含有新药的实验药物配伍的基本成分之一。二氢嘧啶脱氢酶(Dihydropyrimidine dehydrogenase enzyme，DPD)是5-FU代谢的限速酶，大约80％以上的5-FU由DPD代谢成二氢尿嘧啶(Yen JL，McLeod HL.Should DPDanalysis be required prior to prescribing fluoropyrimidines？European journal ofcancer 2007；43：1011-1016)，因此在5-FU代谢的整体调节中具有重大意义，直接影响其在肿瘤患者体内的药代动力学性质、毒性及疗效。不同个体DPD活性差异较大，大约3～5％人为低DPD酶活性。DPD功能缺陷一方面可以提高5-FU活性代谢产物5-氟尿嘧啶脱氧核苷的浓度，但同时也会产生严重的甚至致命的毒副作用。5-FdUMP能与胸腺嘧啶合成酶(thymidylate synthase，TS)结合，影响dUMP与TS的结合。胸腺嘧啶合成酶基因(TYMS)中影响其表达的遗传变异，是造成个体间5-FU疗效差异的主要原因之一。TYMS启动子区有个28bp的重复序列，功能研究显示3重复序列纯合子表达水平高于2重复序列纯合子，并且预后也较好(Sharma R，Hoskins JM，Rivory LP，Zucknick M，London R，Liddle C，Clarke SJ.Thymidylate synthase and methylenetetrahydrofolate reductase genepolymorphisms and toxicity to capecitabine in advanced colorectal cancer patients.Clin Cancer Res 2008Feb 1；14(3)：817-825.)。另外，TYMS基因单倍型3R/-6bp总体生存率显著高于单倍型2R/+6bp(Dotor E，Cuatrecases M，Martinez-Iniesta M，Navarro M，Vilardell F，Guino E，Pareja L，Figueras A，Mollevi DG，Serrano T，deOca J，Peinado MA，Moreno V，Germa JR，Capella G，Villanueva A.Tumorthymidylate synthase 1494del6 genotype as a prognostic factor in colorectal cancerpatients receiving fluorouracil-based adjuvant treatment.J Clin Oncol 2006 Apr 1；24(10)：1603-1611.)。因此，通过检测DPYD和TYMS等基因遗传变异，有助于提高5-FU疗效并降低毒副作用。有鉴于此，5-FU疗效相关的基因检测已被列入***临床检验目录中(http://www.moh.gov.cn/newshtml/19264.htm)。

依立替康(Irinotecan，CPT-11)可治疗转移性结直肠癌、乳腺癌、胃及食道癌，而其在非小细胞及小细胞肺癌也有疗效。UGT1A1*28肿瘤患者体内UGTIA1酶缺乏，在应用CPT-11治疗时，体内SN-38聚集，引发腹泻或嗜中性白血球减少症，因此在服用CPT-11前需要做UGT1A1基因检测，其遗传学检测已获美国FDA批准(Marsh S.Impact of pharmacogenomics on clinical practice in oncology.Mol Diag Ther 2007；11(2)：79-82.)。

铂类药物在恶性肿瘤的治疗上有着重要的应用价值，主要是通过产生水化衍生物作用于DNA，形成链内和链间交联，从而抑制DNA的合成，产生细胞毒作用和抗肿瘤活性。GSTP1基因第105位异亮氨酸残基突变成缬氨酸残基后，对致癌物解毒能力较弱，因此纯合突变者奥沙利铂/5-FU联合用药的生存率显著提高(Watson MA，Stewart RK，Smith GB，Massey TE，Bell DA.Human glutathioneS-transferase P1 polymorphisms：relationship to lung tissue enzyme activity andpopulation frequency distribution.Carcinogenesis 1998 Feb；19(2)：275-280.)。XRCC1 Arg399Gln影响铂类药物疗效，与纯合399Arg病人相比，携带399Gln患者接受奥沙利铂/5-FU治疗效果较差，生存期短(Liu B，Wei J，Zou Z，Qian X，Nakamura T，Zhang W，Ding Y，Feng J，Yu L.Polymorphism of XRCC1 predictsoverall survival of gastric cancer patients receiving oxaliplatin-based chemotherapy inChinese population.Eur J Hum Genet 2007 Oct；15(10)：1049-1053.Stoehlmacher J，Ghaderi V，Iobal S，Groshen S，Tsao-Wei D，Park D，Lenz HJ.A polymorphism of theXRCC1 gene predicts for response to platinum based treatment in advanced colorectalcancer.Anticancer Res 2001 Jul-Aug；21(4B)：3075-3079.Martinez-Balibrea E，Manzano JL，Martinez-Cardus A，Moran T，Cirauqui B，Catot S，Taron M，Abad A.Combined analysis of genetic polymorphisms in thymidylate synthase，uridinediphosphate glucoronosyltransferase and X-ray cross complementing factor 1 genesas a prognostic factor in advanced colorectal cancer patients treated with5-fluorouracil plus oxaliplatin or irinotecan.Oncol Rep 2007Mar；17(3)：637-645.)。

5-FU、依立替康和铂类药物是肿瘤治疗的常规用药，应用非常广泛。目前与这些药物疗效反应相关的遗传变异已研究的较为清楚，并且由于遗传因素终生存在，在一生中只需检测一次，因此通过分型相关基因的功能性或标签(tag)遗传变异，就可获得个体的遗传表型，有助于医生及时找到正确的用药方案，从而有望大幅降低医疗费用，实现个性化医疗。而对于医药企业，通过选择合适的临床试验的人群，以提高药物对疾病治疗的疗效，降低药物的无效率和毒副作用，缩短药物的研究与开发的周期，提高药物的临床批准率。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法，通过对这些基因中的关键性基因遗传位点进行检测，判断具体基因型，能够评估个体患上肺癌的风险几率，从而对加强肺癌防治起到积极作用。

为解决上述技术问题，本发明的肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法，包括步骤：

1)提取受检者样本DNA；

2)对样本DNA进行目的基因的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记，所述目的基因包括：UGT1A1(UDP glucuronosyltransferase 1 family，polypeptideA1)、MTHFR(Methylenetetrahydrofolate reductase)、TYMS(thymidylate synthase)、XRCC1(x-ray repair cross-complementing 1)、ERCC1(excision repaircross-complementing group 1)、DPYD(Dihydropyrimidine dehydrogenase)、ABCB1(ATP-binding cassette，sub-family B，member 1)。

3)荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测目的基因的SNP(SingleNucleotide Polymorphism)位点，所述目的基因的SNP位点包括：UGT1A1基因rs8175347、UGT1A1基因rs35350960、MTHFR基因C677T、TYMS基因rs45445694、TYMS基因rs11280056、XRCC1基因rs25487、ERCC1基因C118T、DPYD基因G62A、DPYD基因T85C、DPYD基因I543V、DPYD基因IVS14-G1A、ABCB1基因rs1045642、ABCB1基因rs2032582、GSTP1基因I105V。

4)根据步骤3)得到的基因分型结果，分析受检者肿瘤个性化治疗的疗效。

所述步骤2)中的UGT1A1基因rs8175347和rs4148323的引物是SEQ IDNO：1～2所示序列的引物、UGT1A1基因rs35350960的引物是SEQ ID NO：3～4所示序列的引物、MTHFR基因的引物是SEQ ID NO：5～6所示序列的引物、TYMS基因rs45445694的引物是SEQ ID NO：7～8所示序列的引物、TYMS基因rs11280056的引物是SEQ ID NO：9～10所示序列的引物、XRCC1基因的引物是SEQ ID NO：11～12所示序列的引物、ERCC1基因的引物是SEQ ID NO：13～14所示序列的引物、DPYD基因G62A的引物是SEQ ID NO：15～16所示序列的引物、DPYD基因T85C的引物是SEQ ID NO：15～16所示序列的引物、DPYD基因I543V的引物是SEQ ID NO：17～18所示序列的引物、DPYD基因IVS14-G1A的引物是SEQ ID NO：19～20所示序列的引物、ABCB1基因rs1045642的引物是SEQ ID NO：21～22所示序列的引物、ABCB1基因rs2032582的引物是SEQ IDNO：23～24所示序列的引物、GSTP1基因的引物是SEQ ID NO：25～26所示序列的引物。

所述步骤2)中的片段化是将纯化的PCR产物经测定浓度后，用DNase I进行片段化；所述荧光素标记是将片段化PCR产物利用脱氧核苷酸转移酶在3’末端进行荧光素标记。

所述步骤3)基因芯片的制备是将预先设计并合成好的探针通过接触式点样或喷墨式点样点载到玻片或硅片材质的固相载体片基上，其中，探针是SEQ IDNO：27～SEQ ID NO：58所示序列的DNA探针。

本发明中的基因和SNP位点的理论依据：

DPYD编码5-FU的限速酶DPD，直接影响其在肿瘤患者体内的药代动力学性质、毒性及疗效。DPYD多态性较高，大约3～5％人为低DPD酶活性的DPYD基因型。DPD功能缺陷一方面可以提高5-FU活性代谢产物5-氟尿嘧啶脱氧核苷的浓度，但同时也会产生严重的甚至致命的毒副作用。

TYMS所编码的胸腺嘧啶合成酶(thymidylate synthase，TS)能与5-FU活性代谢产物5-氟尿嘧啶脱氧核苷结合，因而影响5-FU的疗效。TYMS表达增高，将降低5-FU疗效，进而影响肿瘤患者5年生存率。TYMS中影响其表达的遗传变异，是造成个体间5-FU疗效差异的主要原因之一。

UGTIA1功能或表达改变影响CPT-11代谢，从而影响其疗效和毒副作用。UGT1A1在人群中多态性较高，在服用CPT-11前，需检测UGT1A1基因型。

GSTP1能催化谷胱甘肽与铂类药物结合，使之失活并增加其水溶性，促使药物外排，因此与铂类药物的细胞内耐药相关。GSTP1基因第105位异亮氨酸残基突变成缬氨酸残基后，对致癌物解毒能力较弱，因此纯合突变者奥沙利铂/5-FU联合用药的生存率显著提高。

XRCC1的Arg399Gln改变了二磷酸腺苷核糖多聚酶结合域的特性，降低了DNA修复能力，从而影响铂类药物的疗效。

ERCC1是DNA修复的重要因子之一，而DNA修复参与了铂类药物耐药的形成，ERCC1多态性均与铂类耐药有关。

MTHFR是叶酸代谢过程中的关键酶，能将5，10-MTHF转变成5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)，从而使FdUMP、TS与还原型叶酸组成的三元复合物减少，削弱5-FU的抗肿瘤作用。MTHFR基因突变型的病患使用5-FU药物的有效率较高。

ABCB1参与多种抗肿瘤药物(如紫杉醇、长春新碱、阿霉素和蒽环霉素等)的吸收、分布、代谢、***及毒性反应，其多态性与这些肿瘤药物的耐药相关。

本发明的有益效果：

通过相关基因分型，可以对肿瘤患者多种抗癌药物的疗效进行预估，从而制订最科学个体化治疗方案，以提高疗效、降低甚或避免毒副作用。

附图说明

下面结合附图与具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：

图1是多重PCR扩增后的电泳检测结果图；

图2是PCR产物片段化后的电泳检测结果图；

图3是检测芯片杂交结果图；

具体实施方式

实施例1：样本DNA的提取

具体实施方式

实施例1：样本DNA的提取

采用FlexiGene DNA Kit(QIAGEN，Cat.No.51206)试剂盒抽提人外周血中基因组DNA。

具体方法为：向300μl血液样本中加入750μl Buffer FG1，上下颠倒5次使其混匀。接着在12,000rpm转速下离心1min。离心后倒掉上层清液，再加入150μl Buffer FG2及1.5μl蛋白酶溶液，立即振荡，直至沉淀完全溶解。接下来离心3～5s，然后65℃水浴5min。当溶液从红色变为橄榄绿色后，加入150μl 100％异丙醇，上下充分颠倒离心管，使其混合，直至DNA析出，呈肉眼可见的线状或块状。然后在12,000rpm转速下离心3min。离心后倒掉上层清液，再加入150μl 70％乙醇，并振荡5s。接着重新在12,000rpm转速下离心3min，离心后倒掉上层清液，自然风干沉淀，直至所有的液体都蒸发掉。最后向离心管中加入200μl Buffer FG3，振荡5s，然后65℃水浴10min，使DNA溶解。

使用ND-1000核酸浓度分析仪对所抽提的DNA定量。DNA工作液浓度校正至10ng/μl，置于-20℃冰箱保存。

实施例2：芯片杂交检测SNP位点

1.基因芯片的制备

(1)探针溶解

将SEQ ID NO：27～SEQ ID NO：58所示序列探针的每条探针用TE溶液稀释，终浓度为10mM。将浓度为10mM的探针与浓度为200mM的PBS溶液于384孔板中等体积混合，以粘胶片封好384孔板，室温下振荡2分钟，离心，-20℃保存，以备点样使用。

表1不同SNP位点的探针

(2)点样

将预先设计并合成好的探针通过接触式点样或喷墨式点样点载到玻片、硅片等材质的固相载体片基上。片基采用Cell Associates CSS-100醛基片基，GeneMachine公司的Ominigrid 100型号的点样仪，在湿度：65-75％(以FullMoon片基为准)，温度为25℃的条件下点样，点样完毕后，放置半小时后，将芯片取出，室温干燥保存。

2.待测样品的处理和标记

(1)目的基因的扩增

用UGT1A1基因rs8175347的引物(SEQ ID NO：1～2)、UGT1A1基因rs35350960的引物(SEQ ID NO：3～4)、MTHFR基因的引物(SEQ ID NO：5～6)、TYMS基因rs45445694的引物(SEQ ID NO：7～8)、TYMS基因rs11280056的引物(SEQ ID NO：9～10)、XRCC1基因的引物(SEQ ID NO：11～12)、ERCC1基因的引物(SEQ ID NO：13～14)、DPYD基因G62A的引物(SEQ ID NO：15～16)、DPYD基因T85C的引物(SEQ ID NO：15～16)、DPYD基因I543V的引物(SEQ ID NO：17～18)、DPYD基因IVS14-G1A的引物(SEQ ID NO：19～20)、ABCB1基因rs1045642的引物(SEQ ID NO：21～22)、ABCB1基因rs2032582的引物(SEQ ID NO：23～24)、GSTP1基因的引物(SEQ ID NO：25～26)对样本DNA进行PCR扩增。PCR扩增用30μl反应体系进行，反应体系是0.3mM dNTP、10mM Tris-HCl、50mM KCl、2mM MgCl2、20％Q solution(Qiagen)、上游和下游引物的浓度0.16μM、基因组DNA 10ng，Taq酶0.6U(Takara)。应用Touch-down PCR反应程序：94℃变性5min；94℃变性40s，64℃退火1min，每个循环降低0.5℃，72℃延伸50s，共10个循环；然后94℃变性40s，59℃退火40s，72℃延伸50s，共30个循环；最后72℃延伸5min。PCR结束后用1.5％琼脂糖凝胶检测扩增结果。

当进行多重PCR反应时，将SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：26所示序列的引物放入一个反应体系中进行扩增，体系为50μl。多重PCR的反应体系为：每种dNTP0.3μmol/L，Tricine-KOH(PH＝8.7)40mmol/L，KCl 16mmol/L，MgCl₂ 3.5mmol/L，BSA 3.75μg/ml，每条引物2μmol/L，DNA 80ng和2.2×Titanium Taq DNA聚合酶(Clontech，USA)。多重PCR反应条件：95℃变性3min；95℃变性30s，66℃退火2min，68℃延伸4min，共40个循环；最后68℃延长10min。PCR扩增后，取3μl PCR反应产物做琼脂糖凝胶电泳，这些PCR产物经处理后可用于下面的杂交步骤。

(2)PCR产物纯化和片段化

每个样品的所有PCR产物混合，用QIA quick PCR Purification Kit(Qiagen，Cat.No.28106)纯化。纯化的PCR产物经测定浓度后，用DNase I(脱氧核糖核酸酶I)进行片段化。片段化的反应体系包括：30μl纯化PCR产物(10μg)，4μl的10×DNase I缓冲液，0.12μl的DNase I，5.88μl的ddH₂O。反应条件为37℃温浴5min，然后95℃15min。片段化后的产物跑4％琼脂糖凝胶，保证绝大多数的片段处于30-200个碱基对。

(3)荧光素标记

利用脱氧核苷酸转移酶在3’末端进行荧光素标记，标记的40μl反应体系包括：25μl片段化PCR产物，8μl的5×脱氧核苷酸转移酶缓冲液，1μl的CY3-N6-ddCTP(1mM)，3μl的脱氧核苷酸转移酶(20U/μl)，3μl的ddH₂O。反应条件为37℃温浴120min，然后95℃加热15min。

3.杂交、洗涤和结果检测

荧光标记的PCR产物95℃变性10min，立即置于冰上，用于杂交，杂交反应20μl体系包括：荧光素标记的PCR产物15μl，20×SSPE 1.2μl，1％Triton 0.2μl，10×Denhandts 0.9μl，甲酰胺0.5μl，ddH₂O 2.2μl。反应条件为48℃温浴120min，然后相继用1×洗涤缓冲液I(5×SSC，0.1％SDS)、1×洗涤缓冲液II(2×SSC，0.1％SDS)和1×洗涤缓冲液III(1×SSC)在42℃各洗涤10min，最后用ddH₂O洗涤0.5min。

洗涤后的芯片，经甩干后，用GenePix 4000B共聚焦激光扫描仪进行扫描(也可以用其他的激光扫描仪)。扫描杂交后的芯片得到杂交结果，再用GenePix Pro处理图像得到数据文件，然后对数据文件进行分析就可以得到受检者对抗肿瘤药物疗效和毒副作用的预测结果。

实施例4：疗效预估

样本：受检者(男性，62岁，非小细胞肺癌)

按照实施例1-3的检测操作流程进行检测，其中，该受检者目的基因多重PCR扩增后的电泳检测结果见图1，PCR产物片段化后的电泳检测结果见图2，检测芯片杂交结果见图3。将基因芯片检查结果导入分析软件获得受检者抗肿瘤药物的疗效评估。抗肿瘤药物的疗效评估标准如下：MTHFR TT和TYMS基因3R/-6bp对氟类药物疗效佳；DPYD基因IVS14-1A、543V、29R或62A对氟类药物毒副作用高；UGT1A1基因7R、rs35350960 A或rs4148323A对CPT-11和依托泊甙毒性作用大；XRCC1 Arg/Arg和ERCC1 CC对铂类药物敏感性好；MDR1 CC对紫杉醇、长春新碱、阿霉素和蒽环霉素等药物治疗效果佳。该受检者对氟类药物毒副作用大，对铂类药物敏感性好，对紫杉醇、长春新碱、阿霉素和蒽环霉素高。

Claims

1.肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法，包括步骤：

1)提取受检者样本DNA；

2)对样本DNA进行目的基因的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记，所述目的基因包括UGT1A1基因、MTHFR基因、TYMS基因、XRCC1基因、ERCC1基因、DPYD基因、ABCB1基因和GSTP1基因；

3)荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测目的基因的SNP位点；

4)根据步骤3)得到的基因分型结果，分析受检者对抗肿瘤药物的疗效和毒副作用。

2.如权利要求1所述的肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤2)中的UGT1A1基因rs8175347和rs4148323的引物是SEQ ID NO：1～2所示序列的引物、UGT1A1基因rs35350960的引物是SEQ ID NO：3～4所示序列的引物、MTHFR基因的引物是SEQ ID NO：5～6所示序列的引物、TYMS基因rs45445694的引物是SEQ ID NO：7～8所示序列的引物、TYMS基因rs11280056的引物是SEQ ID NO：9～10所示序列的引物、XRCC1基因的引物是SEQ IDNO：11～12所示序列的引物、ERCC1基因的引物是SEQ ID NO：13～14所示序列的引物、DPYD基因G62A的引物是SEQ ID NO：15～16所示序列的引物、DPYD基因T85C的引物是SEQ ID NO：15～16所示序列的引物、DPYD基因I543V的引物是SEQ ID NO：17～18所示序列的引物、DPYD基因IVS14-G1A的引物是SEQ ID NO：19～20所示序列的引物、ABCB1基因rs1045642的引物是SEQ IDNO：21～22所示序列的引物、ABCB1基因rs2032582的引物是SEQ ID NO：23～24所示序列的引物、GSTP1基因的引物是SEQ ID NO：25～26所示序列的引物。

3.如权利要求1所述的肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤2)中的片段化是将纯化的PCR产物经测定浓度后，用DNase I进行片段化；

所述荧光素标记是将片段化PCR产物利用脱氧核苷酸转移酶在3’末端进行荧光素标记。

4.如权利要求1所述的肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤3)基因芯片的制备是将预先设计并合成好的探针通过接触式点样或喷墨式点样点载到玻片或硅片材质的固相载体片基上，其中，探针是SEQ IDNO：27～SEQ ID NO：58所示序列的DNA探针。

5.如权利要求1或4所述的检测芯片，其特征在于，所述探针为DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其衍生物。

6.如权利要求2所述的引物，其特征在于，所述引物含有SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：27所示序列的核苷酸链或其互补链。

7.如权利要求1所述的肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤3)目的基因的SNP位点包括：UGT1A1基因rs8175347、UGT1A1基因rs35350960、MTHFR基因C677T、TYMS基因rs45445694、TYMS基因rs11280056、XRCC1基因rs25487、ERCC1基因C118T、DPYD基因G62A、DPYD基因T85C、DPYD基因I543V、DPYD基因IVS14-G1A、ABCB1基因rs1045642、ABCB1基因rs2032582、GSTP1基因I105V。

8.如权利要求1所述的肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤4)中的基因分型结果根导入分析软件对受检者抗肿瘤药物的疗效进行评估。

9.如权利要求1或7所述的肿瘤个性化治疗基因测评及套组方法，其特征在于：所述抗肿瘤药物的疗效评估标准：MTHFR TT和TYMS基因3R/-6bp对氟类药物疗效佳；DPYD基因IVS14-1A、543V、29R或62A对氟类药物毒副作用高；UGT1A1基因7R、rs35350960A或rs4148323A对CPT-11和依托泊甙毒性作用大；GSTP1基因Val/Val、XRCC1基因Arg/Arg和ERCC1基因CC对铂类药物敏感性好；ABCB1基因rs1045642-CC和rs2032582-CC对紫杉醇、长春新碱、阿霉素和蒽环霉素等药物治疗效果佳。