CN102715352A

CN102715352A - 板栗总苞提取物在改善畜禽健康提高其生长性能中的应用

Info

Publication number: CN102715352A
Application number: CN2012101482286A
Authority: CN
Inventors: 郭凯军; 石恩慧; 鲁琳
Original assignee: Beijing University of Agriculture
Current assignee: Beijing University of Agriculture
Priority date: 2012-05-11
Filing date: 2012-05-11
Publication date: 2012-10-10

Abstract

本发明公开了板栗总苞提取物在改善畜禽健康提高其生长性能中的应用。本发明研究发现采用不同提取方法所得到的板栗总苞提取物植物多酚含量占60％以上。板栗总苞提取物能够促进动物细胞和组织增生、提高其抗抗氧化性能，将其作为饲料添加剂添加到基础日粮中，具有改善动物生产性能、增强动物免疫力和降低死亡率的功效。

Description

板栗总苞提取物在改善畜禽健康提高其生长性能中的应用

技术领域

本发明属于饲料添加剂技术领域，涉及板栗总苞提取物作为饲料添加剂在改善畜禽健康并提高其生长性能中的应用。

背景技术

板栗(castanea mollissina Blume)属壳斗科(Fagceae)栗属乔木经济植物，素有“千果之王”的美称，是世界著名的干果之一。我国大部分地区均有分布，尤其以华北和长江流域栽培集中，产量居世界第一。近年来，我国板栗产量达到全世界年产量的60％以上，现在仍以年11％的速度增加。板栗产业蓬勃发展，对于板栗总苞、壳、叶、皮等废弃物的开发和综合利用，不尽具有重要的经济意义，而且减少环境污染，建设***新农村具有重要的生态和社会效益。

据中药大词典记载，板栗总苞又名风栗壳、板栗壳斗，性甘、平、味涩、无毒，具有健脾益气、补肾强筋、散结解毒之功效，可用于治疗丹毒、肿毒、瘰疬等疾病，在民间常作为抗菌、消炎用药。焦启扬(2009，沈阳药科大学硕士论文)在板栗总苞中已分离得到21个化合物。分别鉴定为5-羟甲基糠醛、没食子酸、对羟基苯甲酸、对苯二酚、麦角甾-6，22-二烯-3β，5a，8a三醇、莽草酸、豆甾-4-烯-6β-3酮、Ganschisandrin、齐墩果酸、山柰酚-3-O-(6-反式-对-香豆酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷、山柰酚-3-O-(6”，4”-双-反式-对-香豆酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷、2-羟基-丁二酸二丁酯、槲皮素、大黄素、3′，3″-dimethoxylarreatricin、原儿茶酸、乌素酸、山柰酚、苹果酸二丁酯、胡萝卜苷、β-谷甾醇。叶君(2011，陕西中医学院硕士论文)研究表明板栗总苞提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及藤黄微球菌均有不同程度的抑制活性。张琳等(2010，沈阳药科大学学报)发现板栗总苞含有抗糖尿病活性成分。目前没有发现将板栗总苞或板栗壳用作饲料添加剂的报道。

鉴于板栗总苞所含化合物多数为植物多酚，而植物多酚具有较强的抗菌作用、抗凝血作用、抗自由基、抗衰老作用、抗糖尿病、抗氧化性作用，应用于畜禽生产可以替代抗生素、改善畜禽健康并提高其生长性能。这在世界各国都已经或正在逐步取缔饲用抗生素的形势下显得尤为重要。目前没有发现将板栗总苞或板栗壳用作饲料添加剂改善畜禽健康并提高其长性能的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高畜禽生长性能的天然添加剂，研究了板栗总苞提取物作为饲料添加剂对于改善畜禽健康并提高其生长性能的功效。

本发明通过试验发现，板栗总苞提取物添加到小鼠肠上皮细胞(IEC-6)细胞培养液中能够增强细胞增殖活力，改善细胞抗氧化性能。

本发明通过试验发现，将板栗总苞提取物作为饲料添加剂到畜禽的基础日粮中，再将其饲喂畜禽，能够改善畜禽健康，并提高畜禽生长性能。

本发明进一步试验发现，将板栗总苞提取物按照0.01-0.05wt％的比例添加到畜禽的基础日粮中，有利于改善畜禽健康、提高畜禽生长性能，其中0.03wt％的添加剂量在方面效果最为明显，具有显著性差异(P＜0.05)。

本发明中所述的术语“畜禽”包括但不局限于：肉鸡、蛋鸡、鸭、鹅、猪、肉牛、奶牛、羊。

本发明中所述的术语“板栗总苞提取物”可以是采用不同的提取方法从板栗总苞中所得到的各种提取物。所采用的方法可以是以下一种：

超声辅助法制备板栗总苞提取物：将板栗总苞粉末加入至乙醇水溶液中得到所述板栗总苞的乙醇水散液，对所述乙醇水散液进行超声辅助提取后，离心，真空旋转蒸发上清液，定容，将提取液泵入已平衡好的LSA-21大孔树脂柱，先用蒸馏水冲洗柱子，再用乙醇水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压旋蒸浓缩，干燥至粉末，得到棕红色的板栗总苞提取物粉末。

水浴法制备板栗总苞提取物，主要步骤包括：

(1)干燥粉碎：把采摘来的板栗总苞风干、粉碎、过筛；

(2)浸提：取一定量板栗总苞粉末于锥形瓶中，按一定料液比加入乙醇水溶液，充分混匀，一定温度水浴中密闭浸提，得到浸提液；

(3)离心和浓缩：将浸提液倒入离心管中，离心，收集上清液，在旋转蒸发仪上减压浓缩除去乙醇，定容一定体积，得到粗提液；

(4)纯化：将粗提液泵入已经平衡好的的大孔吸附树脂，对多酚进行吸附，先用蒸馏水冲洗柱子，再用30％-70％的乙醇水溶液(按体积百分比)洗脱多酚，收集洗脱液；

(5)浓缩和干燥：将洗脱液减压浓缩，冷冻干燥，得到板栗总苞提取物。

板栗总苞提取物作为饲料添加剂到畜禽的基础日粮中，可根据不同的饲喂对象，采用不同的添加比例，作为参考，所添加的比例如下：

乳猪专用型：乳猪型，每吨配合饲料中添加100-500克板栗总苞提取物；普通型：肥育猪、肉鸡、蛋鸡：每吨配合饲料中添加100-400克板栗总苞提取物；反刍动物：每吨精料中添加200-600克板栗总苞提取物。

本发明公开了采用不同的提取方法从板栗总苞中所得到的提取物，作为饲料添加剂到畜禽的基础日粮后，可以减少饲用抗生素的使用、预防畜禽腹泻、改善畜禽健康、提高畜禽生长性能等方面的应用。

具体实施方式

下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应当理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不能限制本发明的保护范围。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1板栗总苞提取物的制备

将板栗总苞粉碎至60目，称取10g板栗总苞粉末加入200mL的30％乙醇水溶液混合，在60℃水浴锅中密闭浸提110min，在4000r/min条件下离心15min，，残渣重复上述浸提60min，料液比为1∶10，收集2次上清液，真空减压旋蒸上清液(40℃、0.1MP)除去乙醇，定容，将提取液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔树脂柱，先用2倍柱体积的蒸馏水冲洗柱子，再用2倍50％乙醇水溶液以2mL/min的流速洗脱，收集洗脱液，于40℃、0.1MP下减压旋蒸浓缩，冷冻干燥至粉末，提取物的得率为9.58％，其中多酚含量为70.28％。

实施例2板栗总苞提取物的制备

将板栗总苞粉碎至60目，称取10g板栗总苞粉末加入200mL的30％乙醇水溶液混合，与55℃、500W功率下超声提取30min，在4000r/min条件下离心15min，真空减压旋蒸浸提液(40℃、0.1MP)，将浓缩浸提液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔树脂柱，先用2倍柱体积的蒸馏水冲洗柱子，再用70％乙醇水溶液以2mL/min的流速洗脱，收集70％乙醇洗脱液，于40℃、0.1MP 下减压旋蒸浓缩，干燥至粉末.得到1.368g棕红色的板栗总苞提取物粉末，提取物的得率为13.68％，其中多酚的含量为74.90％。

试验例1板栗总苞提取物促进IEC-6细胞增殖和提高其抗氧化性能试验

一、试验材料

IEC-6细胞株购自中国协和医药科技大学细胞保藏室。

供试板栗总苞提取物：取实施例1制备的板栗总苞提取物10mg，用5mL DMEM完全培养液溶解后，经Φ0.22μm滤膜过滤，4℃保存。

二、试验方法

IEC-6细胞融合率达95％以上时，用0.25％的胰酶进行消化后加DMEM完全培养液。倒置显微镜下进行细胞计数和细胞活力计算后，调整细胞浓度为1×10⁵个/mL，向96孔细胞培养板分别加入90μL细胞悬液，试验组：再加入10μL100μg/mL板栗总苞提取物，对照组加10μL DMEM完全培养液。于37℃、5％CO₂细胞培养箱44h，每孔加入10μL 5mg/mL的MTT液，在37℃下继续培养4h后加入100μLDMSO液混匀，于570nm处检测OD值。IEC-6SOD、GSH-Px活力和MDA含量的测定按照试剂盒说明书进行。

所有数据用Mean±SD表示。采用SPSS 11.0统计软件进行数据处理和单因子方差分析和多重比较。

三、试验结果

板栗总苞提取物对IEC-6细胞增殖和抗氧化指标的影响见表1，和对照组相比，板栗总苞提取物能够显著提高IEC-6细胞增殖活力和SOD、GSH-Px活力，降低MDA含量，说明板栗总苞提取物能够促进IEC-6细胞生长，并提高其抗氧化性能。

表1板栗总苞提取物对细胞增殖和抗氧化指标的影响

注：同一列不同字母表示差异显著P＜0.05。

试验例2：板栗总苞提取物对肉鸡生长性能的影响

一、试验材料与方法

100只1日龄AA雏鸡，按肉鸡的正常免疫程序进行免疫。自由取食和饮水。在试验前2周，按照标准育雏实践在室内供暖以达到所需室温。在第14天，对雏鸡进行称重，随机分配并饲喂2种日粮：对照组饲喂基础日粮(表2)，试验组按0.03wt％的比例将板栗总苞提取物添加到基础日粮中饲喂肉鸡。每种日粮设3个重复(15只鸡/圈)。每个圈(1.7平方米)铺有稻壳和木屑(重量比50∶50)作为垫料。每只鸡在鸡翅标记以认定身份。试验持续6周。每天记录死亡率，每周称量每只鸡体重和每个圈饲料采食量。计算平均日增重、日采食量、料肉比和死淘率。

表2基础日粮成分和化学组成

项目	数量
		成分(％)
玉米	32.50
		小麦	20.00
豆饼(粗蛋白44％)	36.40
		动物脂肪	6.10
碳酸钙	1.70
		磷酸二钙	1.30
氯化钠	0.19
		DL-蛋氨酸	0.19
L-赖氨酸	0.12
		植酸酶	0.10
维生素-矿物质预混料¹	5.00
		化学组成分析(％物质)
干物质	87.50
		粗蛋白	22.90
粗脂肪	14.20
		粗纤维	2.30
灰分	8.40
		代谢能²(MJ/kg)	12.34

²按每kg日粮添加：维生素A，8000IU；维生素D3，2000IU；维生素B1，1.5mg；核黄素，3.0mg；维生素B6，1.5mg；维生素B12，15μg；DL-α-醋酸生育酚，75IU；尼亚新，25.0mg；D-泛酸，8.0mg；氯化胆碱，500.0mg；钴，0.2mg；铁，30.0mg；碘，1.4mg；镁，80mg；铜，1.5mg；锌，30.0mg。

³基于NRC(1994)成分组成表。

二、试验结果

板栗总苞提取物对14-56日龄肉鸡生长性能影响见表3。使用本发明板栗总苞提取物的试验组的平均日增重显著高于对照组，在采食量相当的情况下，试验组料肉比显著高于对照组，同时试验表明添加本发明板栗总苞提取物后肉鸡死淘低、出栏率高。所以利用本发明天然添加剂可以缩短出栏时间，生长速度快，鸡群周转速度快，并且试验组的料肉比明显小于对照组，可以节省饲料。

表3板栗总苞提取物对14-56日龄肉鸡生长性能的影响

分组	平均日增重(g)	平均采食量(g)	料肉比	出栏率(％)
					对照组	64.22±1.93^b	138.20±4.91	2.14±0.03^a	91.8
试验组	67.97±0.69^a	139.34±2.54	1.95±0.04^b	95.3

注：同一列不同字母表示差异显著P＜0.05。

试验例3：板栗总苞提取物对肥育猪生长性能的影响

一、试验材料与方法

按照“胎次一致、体重接近、公母各半”的原则选择体重30kg左右健康大白杂交育肥猪60头，随机分为2组，分别为对照组和试验组，每组3个重复，每个重复10头猪，封闭式栏舍水泥地面平养，各组饲养密度相同，自由采食和自由饮水。除试验组向基础日粮中按0.03wt％的比例添加板栗总苞提取物外，其他饲养管理条件完全一致。预试期7d，试验期90天。每天记录腹泻数量，每周称量每只猪体重和每个圈饲料采食量。计算平均日增重、日采食量、料肉比和腹泻率。

基础日粮：配方按照猪的营养需要配制，主要成分按重量百分比为单位：玉米64％，次粉5.6％，豆粕22％，鱼粉3％，碳酸氢钙0.6％，石粉1％，乳清粉3％，维生素矿物质添加剂0.45％。

二、试验结果

板栗总苞提取物对肥育猪生长性能的影响见表4，可以看出，采用本发明天然添加剂的试验组的日增重明显高于对照组，且料肉比和腹泻率低于对照组，所以缩短出栏时间，节省饲料，降低成本。

表4板栗总苞提取物对肥育猪生长性能的影响

分组	平均日增重(g)	平均采食量(g)	料肉比	腹泻率(％)
					对照组	558.25±10.67^b	1875.74±20.23	3.36±0.23^a	20
实验组	682.83±22.01^a	1904.27±16.92	2.79±0.17^b	12

注：同一列不同字母表示差异显著P＜0.05。

Claims

1.板栗总包提取物在改善畜禽健康提高其生长性能中的应用。

2.根据权利要求1的应用，其特征在于，板栗总苞提取物有效成分为植物多酚，又称鞣质、单宁。

3.根据权利要求2的应用，其特征在于，板栗总苞提取物有效成分含50％以上的植物多酚。

4.根据权利要求1的应用，其特征在于，将板栗总苞提取物添加到畜禽的基础日粮中混合均匀，饲喂畜禽。

5.根据权利要求4的应用，其特征在于，将板栗总苞提取物添加到畜禽的基础日粮中按照0.01-0.05wt％的比例添加到畜禽的基础日粮中，混合均匀。

6.根据权利要求4的应用，其特征在于，将板栗总苞提取物添加到畜禽的基础日粮中按照0.03wt％的比例添加到畜禽的基础日粮中，混合均匀。

7.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述板栗总苞提取物按照以下方法制备得到：将板栗总苞粉末加入至乙醇水溶液中得到所述板栗总苞的乙醇水散液，对所述乙醇水散液进行超声辅助提取后，离心，真空旋转蒸发上清液，定容，将提取液泵入已平衡好的LSA-21大孔树脂柱，先用蒸馏水冲洗柱子，再用乙醇水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压旋蒸浓缩，干燥至粉末，得到棕红色的板栗总苞提取物粉末。

8.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述板栗总苞提取物制备条件：板栗总苞粉末的粒度为60目-80目，乙醇水溶液中乙醇质量百分含量为30％-70％，乙醇水溶液为液料比：每1g板栗总苞粉末加10-35mL的乙醇水溶液，超声温度为25-75℃，超声时间为20-60min，大孔吸附树脂纯化多酚提取液用40％-70％乙醇水溶液洗脱。

9.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述板栗总苞提取物制备包括下列步骤：

(1)干燥粉碎：把采摘来的板栗总苞风干、粉碎、过筛；

(3)离心利浓缩：将浸提液倒入离心管中，离心，收集上清液，在旋转蒸发仪上减压浓缩除去乙醇，定容一定体积，得到粗提液；

(4)纯化：将多酚粗提液泵入已经平衡好的的大孔吸附树脂，对多酚进行吸附，先用蒸馏水冲洗柱子，再用30％-70％的乙醇水溶液(按体积百分比)洗脱多酚，收集洗脱液；

10.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：所述畜禽包括：肉鸡、蛋鸡、鸭、鹅、猪、肉牛、奶牛、羊。