CN102668885A - 一种黄伞新菌株及其子实体栽培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黄伞新菌株及其子实体栽培方法。本发明所提供的黄伞具体为黄伞(Pholiota adipose)HS5,它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.6063。本发明所提供的黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCCNo.6063出菇早,菌丝长满菌袋后10-15d即可完成头潮菇采收,较现有黄伞(Pholiota adipose)1号栽培品种提前8-9d,且产量高,头两潮菇的生物学效率达67.88%,远大于现有黄伞(Pholiota adipose)1号栽培品种的42.67%,这表明黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCC No.6063适合工厂化栽培。
Description
技术领域
本发明涉及一种黄伞新菌株及其子实体栽培方法。
背景技术
黄伞学名Pholiota adipose(Fr)Quél.,俗名黄柳菇、多脂鳞伞、柳蘑、黄蘑、肥柳菇、柳松菇、柳树菌、刺儿菌、黄环锈菌、肥鳞儿、柳钉、黄丝菌等。在分类学上属菌物界,担子菌门,伞菌纲,伞菌亚纲,伞菌目,球盖菇科。黄伞子实体色泽鲜艳呈金黄色,菌盖菌柄上布满黄褐色鳞片。该菌富含蛋白质、碳水化合物、维生素及多种矿物质元素,食之黏滑爽口,味道鲜美,风味独特;菌盖上有一种特殊的黏液,据生化分析表明,这种物质是一种核酸,对人体精力、脑力的恢复有良好效果。黄伞是一种中低温型食用菌,产量较高,市场售价较好,是大有发展前途的食用菌新品种之一。
黄伞子实体单生或丛生,菌盖直径5-12cm,初期半球形边缘常内卷,后渐平展,有一层粘液;盖面色泽金黄至黄褐色,附有褐色近似平状的鳞片,中央较密。菌肉白色或淡黄色。菌褶直生密集,浅黄色至锈褐色,直生或近弯生,稍密。菌柄纤维质长5-15cm,粗1-3cm,圆柱形,有白色或褐色反卷的鳞片稍粘,下部常弯曲。菌环淡黄色,毛状,膜质,生于菌柄上部,易脱落。孢子椭圆形,光滑,锈色,7.5-10μm×5-6.5μm。菌丝初期白色,逐渐浓密,生理成熟时分泌黄褐色素。
发明内容
本发明提供了一种黄伞新菌株及其子实体栽培方法。
本发明提供的黄伞新菌株采自北京市海淀区紫竹院公园柳树上,经中国科学院微生物所卯晓岚先生鉴定为黄伞,并组织分离获得原始菌株,将该菌株命名为黄伞(Pholiota adipose)HS5,该菌株已于2012年4月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号),保藏编号为CGMCC No.6063。
所述黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063在作为亲本进行杂交育种中的应用也属于本发明的保护范围。
栽培所述黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063得到的子实体也属于本发明的保护范围。
培养所述黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063得到的菌丝体也属于本发明的保护范围。
本发明所提供的所述黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063的子实体的栽培方法,可包括如下步骤:
(1)接种及发菌:将所述黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063的栽培种接入栽培培养基,在环境温度为23℃-25℃,空气相对湿度为50%-60%,通风良好,暗光条件下培养30-32d,菌丝可长满培养基;
(2)低温刺激:转移至-5℃-5℃条件下处理3-5d;
(3)出菇:转移至环境温度为15℃-20℃,空气相对湿度80%-90%,光照300-600Lux,通风良好,二氧化碳浓度在2000-2300ppm之间的条件下培养7-10d至子实体原基形成,继续培养;
(4)采收:3-5d后,子实体菌柄长至10cm左右,菌盖尚未完全展开,即可采收。
在上述栽培方法中,所述栽培培养基具体由棉籽壳、木屑、麦麸、玉米粉、石膏、石灰和水混合而成;其中,所述棉籽壳、所述木屑、所述麦麸、所述玉米粉、所述石膏和所述石灰的质量百分配比为60%∶18%∶15%∶5%∶1%∶1%;所述水在所述栽培培养基中的质量百分含量为60%-65%。
在上述栽培方法中,所述栽培种可通过如下方法获得:
(1)母种制备:将所述黄伞(p.adipose)HS5CGMCC No.6063接种到母种培养基上,24℃-28℃避光培养10-12d,得到的菌丝体作为母种;所得母种若不及时使用,可贮藏于4℃。
(2)原种制备:将步骤(1)所得的母种转接到原种培养基上,培养温度为23℃-25℃,空气相对湿度为50%-60%,通风良好,避光培养至菌丝长满容器,得到所述原种。原种一般室温存放期不超过15d,低温存放不超过20d,过期菌种不能使用。
(3)栽培种制备:将步骤(2)所得的原种转接到栽培培养基上,在环境温度为23℃-25℃、空气相对湿度为50%-60%、通风良好、避光的条件下,培养30-32d菌丝长满菌袋,获得所述栽培种。
所述黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063的子实体在食品加工中的应用也属于本发明的保护范围。
所述黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063的子实体干后香味浓,食用时质地特脆。
本发明所提供的黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063出菇早,菌丝长满菌袋后10-15d即可完成头潮菇采收,较现有黄伞(P.adipose)1号栽培品种提前8-9d;且产量高,头两潮菇的生物学效率达67.88%,远大于现有黄伞(P.adipose)1号栽培品种的42.67%。黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063适合工厂化栽培。
保藏说明
建议分类命名:黄伞
拉丁名:(Pholiota adipose)
参椐的生物材料:HS5
保藏机构:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称:CGMCC
地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期:2012年4月26日
保藏中心登记入册编号:CGMCC No.6063
附图说明
图1为黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCC No.6063的子实体形态。
图2为黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCC No.6063的孢子形态。
图3为黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCC No.6063的菌丝形态,箭头所指为菌丝的锁状联合。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
黄伞(Pholiota adipose)1号:孟俊龙,梁志英,刘靖宇等.黄伞高产优质栽培模式研究.中国食用菌.2006(25):27-30.
下述实施例所用各种培养基的配方如下:
(1)母种培养基:马铃薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨2g、MgSO4 0.2g、KH2PO40.25g、K2HPO4 0.25g、VB1 0.5mg、琼脂粉15g、水1000mL、pH7.0。
(2)原种培养基:由木屑、麸皮、石膏、石灰和水混合而成;其中,所述木屑、所述麸皮、所述石膏和所述石灰的质量百分配比为78%∶20%∶1%∶1%;所述水在所述栽培培养基中的质量百分含量为60%-65%。
(3)栽培培养基:由棉籽壳、木屑、麦麸、玉米粉、石膏、石灰和水混合而成;其中,所述棉籽壳、所述木屑、所述麦麸、所述玉米粉、所述石膏和所述石灰的质量百分配比为60%∶18%∶15%∶5%∶1%∶1%;所述水在所述栽培培养基中的质量百分含量为60%-65%。
实施例1、黄伞(P.adipose)HS5的分离与鉴定
本发明菌株(记作HS5)的野生子实体采自北京市海淀区紫竹院公园柳树上,经中国科学院微生物所卯晓岚先生鉴定为黄伞(Pholiota adipose)。进一步,通过对其子实体、菌丝体及孢子形态特征的观察,以及基因间隔序列(ITS)测序,判断该菌株的生物学分类命名。
一、形态特征
1、子实体形态特征
本发明菌株HS5子实体一般中等大(图1)。菌盖直径2-10cm,初扁半球形,边缘常内卷,后渐平展,谷黄色、污白色至黄褐色,很粘,有褐色***伏的鳞片,中央较密。菌肉白色或淡黄色。菌褶黄色至锈褐色,直生或近弯生,稍密,不等长。菌柄长5-15cm,粗0.5-3cm,圆柱形,与盖同色,有褐色反卷的鳞片,粘或稍粘,下部常弯曲,纤维质,内实。菌环淡黄色,膜质,生菌柄之上部,易脱落。菌褶初乳白,采收时乳黄色,成熟时释放出大量锈褐色孢子,孢子椭圆形,光滑、直径(7.2-9.8)μm×(5.2-6.5)μm(图2)。在光学显微镜下,菌丝具有锁状联合(图3)。该菌子实体干后香味浓,食用时质地特脆。
2、菌丝体形态特征
本发明菌株HS5的菌丝初期菌丝白色至淡黄色,边缘整齐,较密;后期菌丝颜色逐渐加深至深黄色或黄褐色。
通过上述形态学鉴定,将本发明菌株HS5初步判断为黄伞(Pholiota adipose)。
二、rDNA-ITS测序
采用分子生物学方法对从采集的子实体中分离得到的菌丝体进行rDNA-ITS测序,其测序结果如序列表中序列1所示。将序列1与Genbank No.:FJ810180(黄伞(Pholiota adipose)进行DNAMAN剪切比对处理,发现其同源性达99.41%,Renske等在对土层中分布的外生菌根菌群落进行分子鉴定的研究中提出,供试的rDNA ITS序列通过与NCBI的GenBank数据库进行BLAST检索比对,序列相似性≥99%,可以鉴别为相同种;序列相似性为95%~99%,可以鉴别为相同属;序列相似性≤95%,可以鉴别为相同科(Renske L,Paula L,Thom W K,et al.Molecular identification ofectomycorrhizal mycelium in soil horizons.Applied and environmental microbiology,2003,69(1):327-333.)。因此,rDNA-ITS测序结果表明本发明菌株HS5与Genbank No.:FJ810180(黄伞(Pholiota adipose)为同一个种,均为黄伞菌株,这进一步证实了形态学观察鉴定结果的正确性。
鉴于上述形态特征、rDNA-ITS测序鉴定结果,将本发明菌株HS5鉴定为真菌界,担子菌门,层菌纲,伞菌目,球盖菇科,环锈伞属的黄伞(Pholiota adipose)。该菌株已于2012年4月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号),保藏编号为CGMCC No.6063。
实施例2、黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCC No.6063子实体的人工栽培
一、菌种的制备
(1)母种制备:将实施例1获得的所述黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCCNo.6063接种到母种培养基上,24℃-28℃避光培养10-12d,得到的菌丝体作为母种;所得母种若不及时使用,可贮藏于4℃。
(2)原种制备:将步骤(1)所得的母种转接到原种培养基上,培养温度为23℃-25℃,空气相对湿度为50%-60%,通风良好,避光培养至菌丝长满容器,得到原种。原种一般室温存放期不超过15d,低温存放不超过20d,过期菌种不能使用。
(3)栽培种制备:将步骤(2)所得的原种转接到栽培培养基上,在环境温度为23℃-25℃、空气相对湿度为50%-60%、通风良好、避光的条件下培养30-32d菌丝长满菌袋,获得所述栽培种。
二、栽培方法
黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063的栽培流程具体如下:
培养基制作→冷却接种→发菌→低温刺激→出菇→采收
(1)培养基制作及装袋
按照上文栽培培养基的配方配制得到栽培培养基,将其按照常规方法制备菌袋,使用的菌袋规格为17cm×33cm×0.04cm的耐高压塑料袋,每袋装干料(栽培培养基中除水外的其他组分)0.40kg。经高压灭菌,冷却后得到待接种菌袋。
(2)接种及发菌:将经过上述步骤一获得的所述黄伞(P.adipose)HS5CGMCCNo.6063的栽培种均匀接入步骤(1)制备的菌袋,每袋接种量为3.14×10-5m3。接种后在环境温度为23℃-25℃,空气相对湿度为50%-60%,通风良好,避光条件下培养,30-32d后菌丝可长满培养基;
(2)低温刺激:转移至-5℃-5℃条件下处理3-5d;
(3)出菇:转移至环境温度为15℃-20℃,空气相对湿度80%-90%,光照300-600Lux,通风良好,二氧化碳浓度在2000-2300ppm之间的条件下培养7-10d至子实体原基形成,继续培养;
(4)采收:3-5d后,子实体菌柄长至10cm左右,菌盖尚未完全展开,即可采收第一潮菇。采摘后进行搔菌,进入菌丝恢复期,待菌丝回复后重新恢复上述操作进行出菇,采收第二潮菇,一般可采3-4潮菇。
实施例3、黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063菌丝生长速度、产量及营养成分的检测
本实施例以黄伞(P.adipose)1号为对照,检测黄伞(P.adipose)HS5 CGMCCNo.6063的菌丝生长速度、产量及营养成分。
一、菌丝生长速度的测定
1、实验材料
黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063和黄伞(P.adipose)1号菌株的母种、原种和栽培种,其制备方法同实施例2步骤一。
2、实验方法
母种菌丝平均生长速度测定:将两种黄伞母种分别接种于母种培养基表面的中央,培养2-3d后,记录菌丝位置(A),3-5d后记录菌丝位置(B),用直尺测量A与B之间的距离,除以两位置之间的天数即为菌丝的日平均生长速度,实验设置五个重复,结果取平均值。
栽培种菌丝平均生长速度测定:将黄伞原种接种于装有栽培培养基的栽培袋中央,使均匀分布,待菌丝萌发3-5d后,记录菌丝位置(A),5-7d后记录菌丝位置(B),用直尺测量A与B之间的距离,除以两位置之间的天数即为菌丝的日平均生长速度,实验设置五个重复,结果取平均值。
3、实验结果
对母种菌丝生长速度的测定结果如表2所示,黄伞(P.adipose)HS5 CGMCCNo.6063母种的菌丝生长速度可达5.59±0.19mm/d,高于对照黄伞(P.adipose)1号母种的菌丝生长速度4.33±0.05mm/d。
表2母种菌丝生长速度的测定结果(单位:mm/d)
菌株 | 重复1 | 重复2 | 重复3 | 重复4 | 重复5 | 平均值±标准差 |
HS5 | 5.30 | 5.60 | 5.55 | 5.75 | 5.75 | 5.59±0.19 |
1号 | 4.30 | 4.40 | 4.30 | 4.30 | 4.35 | 4.33±0.05 |
对栽培种菌丝生长速度的测定结果如表3所示,黄伞(P.adipose)HS5CGMCCNo.6063栽培种的菌丝生长速度可达2.56±0.03mm/d,而对照黄伞(P.adipose)1号栽培种的菌丝生长速度为2.51±0.02mm/d,两者相比,无差异。
表3栽培种菌丝生长速度的测定结果(单位:mm/d)
菌株 | 重复1 | 重复2 | 重复3 | 重复4 | 重复5 | 平均值±标准差 |
HS5 | 2.56 | 2.58 | 2.53 | 2.54 | 2.59 | 2.56±0.03 |
1号 | 2.50 | 2.53 | 2.51 | 2.52 | 2.49 | 2.51±0.02 |
二、产量的测定
将本发明的黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063与作为对照的黄伞(P.adipose)1号分别按照实施例2的栽培方法进行栽培,均收获头两潮菇,对其栽培周期及产量进行比对。实验设置三个重复,每个重复栽培150个菌袋,结果取平均值。
1、栽培周期
在实施例2所述栽培条件下,黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063的发菌期需要30-32d,低温刺激3-5d,出菇条件下子实体原基形成期7-10d,子实体分化至采收3-5d,计算从接种至采收第一潮菇需要43-52d。菇潮间隔10-13d,第二潮菇子实体分化至采收5-7d。出两潮菇的整个生产周期共58-72d。黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063农艺性状的一致性良好,表现为出菇整齐,批量栽培的子实体头潮菇从进入出菇房(对应于实施例2栽培方法中的(3))到采收10-15d即可完成。
在实施例2所述栽培条件下,黄伞(Pholiota adipose)1号发菌期为34-38d,低温刺激3-5d,出菇条件下子实体原基形成期10-12d,子实体分化至采收4-6d,计算从接种至采收第一潮菇共需要51-61d。菇潮间隔12-15d,第二潮菇子实体分化至采收5-8d。出两潮菇的整个生产周期为68-84d。
统计上述结果,黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063较作为对照的黄伞(P.adipose)1号栽培品种提前8-9d完成头潮菇采收,适合工厂化栽培。
2、产量
以“生物学效率”表示产量。所述生物学效率是指食用菌鲜重与所用的培养料干重(栽培培养基中除水外的其他组分)之比,常用百分数表示。如100kg干培养料生产了80kg新鲜食用菌,则这种食用菌的生物学效率为80%。
在实施例2所述栽培条件下,黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063头两潮菇的生物学效率可达67.88±1.33%,远高于作为对照的黄伞(P.adipose)1号头两潮菇的生物学效率42.67±1.35%,详见表4。
表4头两潮菇的产量(生物学效率)统计(单位:%)
菌株 | 重复1 | 重复2 | 重复3 | 平均值±标准差 |
HS5 | 69.19 | 67.91 | 66.53 | 67.88±1.33 |
1号 | 41.52 | 42.33 | 44.15 | 42.67±1.35 |
三、营养成分的分析
从步骤二收获的黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063和作为对照的黄伞(P.adipose)1号的头两潮菇中各自随机选取500g进行营养成分(氨基酸含量及维生素含量)的分析,由谱尼测试中心测定。氨基酸(表5中的18种氨基酸)中除色氨酸外,参照食品中氨基酸的测定参照GB/T 5009.124-2003;硫胺素(维生素B1)的测定参照GB/T 5009.84-2003;核黄素(维生素B2)的测定参照GB/T 5009.85-2003;维生素B6的测定参照GB/T 5009.154-2003;烟酸和烟酰胺(维生素B3、PP)的测定参照GB5413.15-2010。实验设置3个重复,结果取平均值。
其氨基酸及维生素含量如表5和表6所示。黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063与作为对照的黄伞(P.adipose)1号的子实体氨基酸含量相比相差不大;而在维生素水平上,黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063的维生素B2含量是黄伞(P.adipose)1号的近8倍,维生素B6是黄伞(P.addiose)1号的2倍,维生素B1和B3含量相差不大;因此,综合以上分析,黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063菌株的营养成分大于对照菌株黄伞(P.adipose)1号,可作为黄伞(P.adipose)1号的替代菌株进行推广应用。
表5黄伞(P.adipose)HS5CGMCC No.6063与黄伞(P.adipose)1号子实体中的18种氨基酸含量比较(单位:g/100g)
氨基酸 | 1号 | HS5 | 氨基酸 | 1号 | HS5 |
天门冬氨酸 | 1.47±0.01 | 1.25±0.05 | 蛋氨酸 | 1.04±0.02 | 1.05±0.05 |
苏氨酸 | 0.76±0.01 | 0.69±0.03 | 异亮氨酸 | 0.74±0.01 | 0.72±0.04 |
丝氨酸 | 0.78±0.01 | 0.67±0.03 | 亮氨酸 | 1.20±0.01 | 1.13±0.06 |
谷氨酸 | 3.23±0.05 | 2.32±0.09 | 酪氨酸 | 0.40±0.00 | 0.38±0.02 |
脯氨酸 | 0.71±0.03 | 0.57±0.05 | 苯丙氨酸 | 0.81±0.01 | 0.70±0.03 |
甘氨酸 | 0.67±0.01 | 0.58±0.02 | 赖氨酸 | 0.83±0.01 | 0.89±0.04 |
丙氨酸 | 0.89±0.01 | 0.79±0.03 | 组氨酸 | 0.33±0.00 | 0.33±0.02 |
胱氨酸 | 0.14±0.01 | 0.14±0.01 | 色氨酸 | 0.20±0.00 | 0.24±0.00 |
缬氨酸 | 0.71±0.00 | 0.65±0.03 | 精氨酸 | 1.11±0.02 | 0.85±0.04 |
注:单位g/100g,指的是每100g干子实体中含有相应氨基酸的克数。
表6黄伞(Pholiota adipose)黄伞HS5CGMCC No.6063与黄伞(Pholiota adipose)
1号子实体中的维生素含量比较(单位:mg/100g)
维生素 | 1号 | HS5 |
维生素B2 | 0.30±0.01 | 2.27±0.00 |
维生素B1 | 0.21±0.00 | 0.23±0.00 |
维生素B6 | 0.37±0.01 | 0.78±0.01 |
维生素B3 | 75.00±2.00 | 72.50±3.50 |
注:单位mg/100g,指的是每100g干子实体中含有相应维生素的毫克数。
综合上述结果,本发明所提供的黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCC No.6063菌丝生长速度较快,产量高,营养成分丰富,可作为常规生产菌株黄伞(Pholiotaadipose)1号的替代菌株进行推广应用。
Claims (7)
1.黄伞(Pholiota adipose)HS5,它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.6063。
2.权利要求1所述黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCC No.6063在作为亲本进行杂交育种中的应用。
3.栽培权利要求1所述黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCC No.6063得到的子实体。
4.培养权利要求1所述黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCC No.6063得到的菌丝体。
5.权利要求3所述子实体的栽培方法,包括如下步骤:
(1)接种及发菌:将权利要求1所述黄伞(Pholiota adipose)HS5CGMCC No.6063的栽培种接入栽培培养基,在环境温度为23℃-25℃,空气相对湿度为50%-60%,避光的条件下进行培养,至菌丝长满培养基;
(2)低温刺激:待菌丝长满培养基后,转移至-5℃-5℃条件下处理3-5d;
(3)出菇:转移至环境温度为15℃-20℃,空气相对湿度80%-90%,光照300-600Lux,,二氧化碳浓度在2000-2300ppm之间的条件下培养得到子实体。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:所述栽培培养基由棉籽壳、木屑、麦麸、玉米粉、石膏、石灰和水混合而成;其中,所述棉籽壳、所述木屑、所述麦麸、所述玉米粉、所述石膏和所述石灰的质量百分配比为60%∶18%∶15%∶5%∶1%∶1%;所述水在所述栽培培养基中的质量百分含量为60%-65%。
7.权利要求3所述子实体在食品加工中的应用。
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