CN102660459A - 一种缺氧培养盒及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种缺氧培养盒及其使用方法，是一种用于缺氧环境中培养动物细胞的医疗实验设备，培养盒要求快速清除培养环境中的氧气，并维持盒内外压力平衡。该缺氧培养盒有密封盒盖(1)、盒体(2)和碱性焦性没食子酸溶液袋(3)三部分构成，密封盒盖内侧设有压力缓冲气囊(12)；盒体(2)壁上设有加液阀门(23)、加取培养基阀门及通道(24)、加液盘肠(25)。方法包括如下步骤：在密封塑料袋中配制碱性焦性没食子酸溶液；去除氧气后加入柠檬酸溶液，构成缓冲液；加入二氧化碳气体，维持细胞或细菌代谢需要及培养环境中的酸碱度。优点是：实现无氧速度快，可计时缺氧时间，结构简单，操作简单，经济适用，体积小，可大量生产。

Description

一种缺氧培养盒及其使用方法
技术领域
本发明属于医学技术领域，涉及一种医学实验设备及其使用方法，具体涉及一种缺氧培养盒及其使用方法。
背景技术
组织缺氧是临床常见的病理现象，是多种疾病中导致细胞损伤的常见因素。为研究体外培养的细胞对无氧条件的反应，各国科学家采取多种方式建立细胞无氧培养条件，典型的几种缺氧模型如下：有研究者向常规培养箱中充入氮气替换氧气，并检测培养箱中氧气浓度；有研究者在密闭容器中放入细胞，进行真空抽吸后，充入95％N2+5％CO2。
现有技术中的以上设计存在以下几点缺点：1、氮气替换氧气不充分，需要较长时间才能达到无氧要求，另外开关细胞培养箱又需较长时间达到无氧条件，且所需时间不能把握，不易准确计算缺氧时间；2、在密闭容器抽真空，容器内负压可对细胞造成损伤，影响实验结果；3、所需设备昂贵，设计复杂不易操作。
简单快速地建立培养细胞的无氧条件有助于实验室准确研究细胞对无氧的病理生理反应及其分子机制，而现存的条件无法满足这一要求。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种缺氧培养盒及其使用方法，本发明的缺氧培养盒能够快速达到缺氧条件，并能长时间满足无氧条件，且本发明简单易于操作，造价低，可大量生产，可重复使用，可消毒。
具体技术方案为：
一种缺氧培养盒，包括密封盒盖1、盒体2和碱性焦性没食子酸溶液袋3，其特征是：密封盒盖1内侧设有压力缓冲气囊12，气囊通过通气阀门11与外界相通，盒体2底部设有培养器皿支架25，盒体2壁上设有加液阀门23、加取培养基阀门及通道24、加液盘肠25，碱性焦性没食子酸溶液袋3内溶液通过输液器输32及加液阀门23加入到缺氧培养盒内。
在密封盒盖1内侧设有压力缓冲气囊12通过气囊通气阀门11与外界相通，来平衡缺氧培养盒与外界的压力，且，所述压力缓冲囊12可拆卸。
所述加液盘肠25开有喷洒液小孔。
所述盒体2壁上设有加取培养液阀门及通道24。
碱性焦性没食子酸溶液袋3是真空密封袋或医疗用弃的250ml输液袋，经蒸馏水冲洗后用注射器抽成真空。其使用方法特征是：先将18.87g焦性没食子酸溶于水中配成100ml溶液，用注射器加入到真空密封袋中，再将17.96g氢氧化钠溶于水中，配成50ml溶液，用注射器加入到真空密封袋中，混匀，置于25℃水浴缸中，预热后使用。
一种缺氧培养盒的使用方法，包括以下步骤：在加碱性焦性没食子酸溶液去除盒内氧气后，并用注射器通过加液阀门23向缺氧盒内加入柠檬酸溶液，使柠檬酸、氢氧化钠和焦性没食子酸构成缓冲液。其配比特征是：如果实验设计不需加二氧化碳，可不加柠檬酸；如果实验需清除过多二氧化碳蓄积，可加柠檬酸24g溶于50ml水中配成的溶液；如实验不需清除蓄积的二氧化碳，可加柠檬酸28g溶液50ml水中配成的溶液。
在加柠檬酸溶液后，如果发明设计所用氢氧化钠为分析纯，含有碳酸钠1.5％，则不需加入二氧化碳，所生成的二氧化碳已能满足细胞培养所需；如果所用氢氧化钠纯度较高，则需进一步加入二氧化碳气体60ml。
缺氧培养盒工作原理：碱性焦性没食子酸能快速与氧发生反应，吸收空气中的氧气，达到清除培养盒内氧气的作用，而不与培养基接触。
3NaOH+C6H3(OH)3→C6H3(ONa)3+H2O
4C6H3(ONa)3+O2→2(KO)3C6H2-H2C6(OK)3+2H2O
缺氧培养盒工作过程：预先配制吸氧液，氢氧化钠17.96g溶于40ml水中，焦性没食子酸18.87g溶于80ml水中，先后注入到真空密封的塑料袋中，混匀，置于25℃水浴中预热。将培养瓶或培养板置于缺氧盒内支架上，盖上盒盖，打开缺氧盒通气阀，用50ml注射器向压力缓冲袋内注入100ml空气，关闭通气阀，用输液器将配好的吸氧液袋连接于加液阀门，打开加液阀门，打开压力缓冲袋通气阀门，使用输液器将吸氧液袋内的吸氧液通过加液阀门加入到缺氧培养盒内，关闭加液阀门。将缺氧培养盒置于摇床上，震荡5分钟，此时培养环境中氧浓度可低于0.6％。将缺氧培养箱置于37℃环境中，半小时后。用50ml注射器经加液孔加入柠檬酸溶液(预热温度为20℃)50ml溶有24g柠檬酸。使之构成缓冲液，PH值在7-8之间，用以缓冲盒内而过多蓄积的二氧化碳。如果试验中不需加二氧化碳可考虑不用加柠檬酸，如果实验中不需清除蓄积的二氧化碳，可加入柠檬酸28g。摇床震荡，1分钟。经气体阀门加入二氧化碳气体60ml(不需加二氧化碳的实验，此步可省去)。将缺氧培养箱置于37℃中进行培养。
本发明的有益效果：本发明的缺氧培养盒能够快速达到缺氧条件，并能长时间满足无氧条件，且本发明简单易于操作，造价低，可大量生产，可重复使用，可消毒。
附图说明
图1为本发明缺氧培养盒的结构图示意图。
具体实施方式
下面结合附图具体实施方式对本发明的方法作进一步详细地说明。
参照图1，一种缺氧培养盒由透明盒塑料制成，盒内容积为1.4升，包括密封盒盖1、盒体2和碱性焦性没食子酸溶液袋3，密封盒盖1内侧设有压力缓冲气囊12，密封盒盖通过与盒体连接的锁扣13固定于盒体上，密封盒盖与盒体连接锁扣13设计中置于密封盒盖1的侧边，设有卡槽可与盒体2侧壁上的卡槽相扣，密封盒盖1周边有与盒体衔接槽14，槽装有橡胶密封条15，压力缓冲气囊12有密封塑料袋制成，带有连接冒与压力缓冲气囊通气阀门11相连；盒体2壁上设有通气阀门21、取液阀门及通道22、加液阀门23、加取培养基阀门及通道24、加液盘肠道26，加入到盒内的液体27为经过加液阀门23及加液盘肠26加入到盒内的碱性焦性没食子酸溶液与柠檬酸溶液的混合液体，加取培养基通道、取液通道及加液盘肠道有塑料软管制成，加液盘肠道26上均匀开有直径约1mm小孔，小孔开口向下，盘肠道螺旋向下粘于盒体2内侧壁，盒体底部设有培养器皿支架25，培养皿支架有塑料制成并焊接与盒体2底部；碱性焦性没食子酸溶液袋3有塑料制成的密封袋，容积250ml，一端设有橡皮塞，加取试剂使用注射可实现，或使用医疗废弃的输液袋代替塑料密封袋，使用前用注射器加入蒸馏水进行冲洗，并抽出里面空气。
使用时，预先配制碱性焦性没食子酸溶液31，氢氧化钠17.96g溶于40ml水中，焦性没食子酸18.87g溶于80ml水中，先后注入到碱性焦性没食子酸溶液袋3中，混匀，置于25℃水浴中预热。将培养瓶、培养板或培养皿置于缺氧盒内支架25上，盖上密封盒盖1，打开缺氧盒通气阀21，用50ml注射器经压力缓冲气囊通气阀门11向压力缓冲囊12内注入100ml空气，关闭通气阀11，用输液器将配好的碱性焦性没食子酸溶液袋3连接于加液阀门23，打开加液阀门23，打开压力缓冲囊通气阀门11，使用输液器将碱性焦性没食子酸溶液31通过加液阀门加入到缺氧培养盒内，关闭加液阀门23。将缺氧培养盒置于摇床上，震荡5分钟。将缺氧培养箱置于37℃环境中，半小时后。用50ml注射器经加液孔加入柠檬酸溶液50ml(预热温度20℃)溶有24g柠檬酸。如果试验中不需加二氧化碳可考虑不用加柠檬酸，如果实验中不需清除蓄积的二氧化碳，可加入柠檬酸28g。摇床震荡，1分钟。经气体阀门加入二氧化碳气体60ml(如果不需加二氧化碳的实验，此步可省去)。将缺氧培养箱置于37℃中进行培养。在培养过程中，可通过加取培养基阀门及通道24在保证无氧的条件下加取培养基，并进行相关实验。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (7)

1.一种缺氧培养盒，其特征在于，包括密封盒盖(1)、盒体(2)和碱性焦性没食子酸溶液袋(3)，其特征是：密封盒盖(1)内侧设有压力缓冲气囊(12)，气囊通过通气阀门(11)与外界相通，盒体(2)底部设有培养器皿支架(25)，盒体(2)壁上设有加液阀门(23)、加取培养基阀门及通道(24)、加液盘肠(25)，碱性焦性没食子酸溶液袋(3)内溶液通过输液器输(32)及加液阀门(23)加入到缺氧培养盒内。
2.根据权利要求1所述的缺氧培养盒，其特征在于，在密封盒盖(1)内侧设有压力缓冲气囊(12)通过气囊通气阀门(11)与外界相通，所述压力缓冲囊(12)可拆卸。
3.根据权利要求1所述的缺氧培养盒，其特征在于，所述加液盘肠(25)开有喷洒液小孔。
4.根据权利要求1所述的缺氧培养盒，其特征在于，所述盒体(2)壁上设有加取培养液阀门及通道(24)。
5.根据权利要求1所述的缺氧培养盒，其特征在于，碱性焦性没食子酸溶液袋(3)是真空密封袋或医疗用弃的250ml输液袋，经蒸馏水冲洗后用注射器抽成真空。
6.根据权利要求1所述的缺氧培养盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：在加碱性焦性没食子酸溶液去除盒内氧气后，并用注射器通过加液阀门(23)向缺氧盒内加入柠檬酸溶液，使柠檬酸、氢氧化钠和焦性没食子酸构成缓冲液。
7.根据权利要求6所述的缺氧培养盒的使用方法，其特征在于，在加柠檬酸溶液后，通过加液阀门(23)加入二氧化碳气体60ml。
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