CN102643730B - 一种以蛹虫草培养基残基为原料的保健酒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种以蛹虫草培养基残基为原料的保健酒及其制备方法，具体涉及一种以北虫草培养基残基为主要原料，膨化后与枸杞、红景天、银杏叶提取物混合，经酒曲和酶加工处理，酿制而成的保健酒，有效利用蛹虫草子实体培养之后剩余的固体培养基这种工业废料，经膨化预处理后，与枸杞、红景天、银杏叶提取物混合，添加酿造用酶和风味剂，与酒曲发酵，制备口感良好，营养丰富和具有调节免疫力抗疲劳、降血糖、延缓衰老等特殊功效的保健酒，作为保健食品，具有较好的发展前景。

Description

一种以蛹虫草培养基残基为原料的保健酒及其制备方法

技术领域

本发明公开一种以蛹虫草培养基残基为原料的保健酒及其制备方法，具体涉及一种以北虫草培养基残基为主要原料，膨化后与枸杞、红景天、银杏叶提取物混合，经酒曲和酶加工处理，酿制而成的保健酒，属于酿酒技术领域，。

背景技术

蛹虫草又名北虫草（Cordyceps militaris）,北冬虫夏草，属于真菌门子囊菌纲肉座菌目麦角菌科虫草属，是冬虫夏草的模式种。北虫草生长过程中，会代谢出多种活性成分，具有抗肿瘤、提高免疫力、抗氧化、抗疲劳等多种功效，如虫草多糖，虫草酸，虫草素等。由于野生北虫草资源日益匮乏，目前主要通过人工培育蛹虫草子实体来满足市场的需要。人工蛹虫草与天然蛹虫草相比，化学成分基本相同，并具有相似的药理作用，长期以来人们就将其作为高级食用菌广泛用于各种营养保健食品，同时作为冬虫夏草的代用品用于各种疾病的治疗。       

用大米培养基人工培育北冬虫夏草纯子实体是近年来发展起来的新技术，但子实体采收后，长满菌丝体的大米培养基残基(以下简称培养基)却成为工业废料而被浪费。目前，每栽培瓶可产北虫草干品3克左右，而瓶中的废弃的培养料干物质约为40克，而蛹虫草固体培养残基中虫草素含量约为5‰、总糖含量为21.93%、蛋白质含量达10%左右（比培养前提高2.1%）、虫草多糖含量为12.86%，此外还含有生物碱、萜类化合物、甾醇、苷类、酚类、酶、维生素、Mn-SOD等有效成分，所以仍然有很大的利用价值。

对蛹虫草培养基残基的利用，也有一些文献报道。如钟艳梅等人利用蛹虫草培养残基制作发酵型含乳饮料，并酿制发酵酒，曾宏彬等人利用残基制备保健醋等，不过他们的制备工艺简单，成分及功能单一，且酒的口感一般，研究不深入，仍存在很大的缺点。 

发明内容

发明公开一种以蛹虫草培养基残基为原料的保健酒，具有调节免疫力抗疲劳、降血糖、延缓衰老等特殊功效的保健酒，作为保健食品，具有较好的发展前景。

本发明还提供了该保健酒的制备方法，有效利用蛹虫草子实体培养之后剩余的固体培养基这种工业废料，酿制保健酒。

本发明的目的是这样实现的：将采摘蛹虫草后的新鲜培养基残基进行烘干，干燥后的培养基残基粉碎成60目左右的粉料，将粉料加1倍体积的水混合搅拌，把混合搅拌好的培养基残基进行挤压膨化处理，向膨化后的残基中添加1g/L白糖、0.05g/L风味剂、0.02g/L酿造用酶、0.05g/L有机酸辅料，并加入1～3倍体积的枸杞、红景天、银杏叶提取物溶液，灭菌，加2%酒曲发酵8～10天，过滤后的滤液煎酒，最终得保健酒成品；

所述的枸杞、红景天、银杏叶提取物溶液：将枸杞、红景天、银杏叶洗净后，1：2：1混合后，粉碎，过筛（80目）处理，按固液比1:10比例70度热水浸提10h ，过滤得到提取物滤液。

本发明的积极效果在于：有效利用蛹虫草子实体培养之后剩余的固体培养基这种工业废料，经膨化预处理后，与枸杞、红景天、银杏叶提取物混合，添加酿造用酶和风味剂，与酒曲发酵，制备口感良好，营养丰富和具有调节免疫力抗疲劳、降血糖、延缓衰老等特殊功效的保健酒，作为保健食品，具有较好的发展前景。

本发明涉及的蛹虫草子实体培养之后剩余的固体培养基包括：

菌种：Cordycepsmilitaris(L.ex Fr.)Link（从野生蛹虫草上进行组织分离获得了纯菌种经过中国科学院微生物研究所鉴定）。

大米培养基配置方法：30g大米，添加1.7倍～1.8倍体积的营养液，115度灭菌30min。

营养液配方：葡萄糖2%，蛋白胨1%，酵母浸粉0.5%，磷酸氢二钾0.1%，水95.35%。

菌种活化培养基：葡萄糖30g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉18g/L，磷酸二氢钾3 g/L，七水硫酸镁3 g/L，VB1 0.235 g/L，氯化锌0.011 g/L，硫酸铵10 g/L。115度灭菌30min。

菌种的活化：将蛹虫草菌种接种在液面交界处, 避光静置2d, 250 mL摇瓶装入菌种活化培养基100 mL，挑取斜面保存的蛹虫草，26℃振荡(150r/min)培养3d。

菌种的培养: 250 mL摇瓶装入菌种活化培养基100 mL，接入5％的菌种培养液，26℃振荡(150 r/min)培养3.5d。

蛹虫草子实体培养：大米培养基中接入5%菌种培养液，培养瓶用黑纸包好, 放入气候培养箱, 箱外用黑布罩好, 开始避光培养(温度18℃ , 湿度60%)。7日后白色菌丝长满培养基表面, 开始见光培养, 白天见光, 夜间暗培养, 调节昼夜温差为10℃ (日22℃ , 夜12℃ ), 湿度80%。3~4d后菌丝转色完成, 继续刺激其产生子实体, 其后保持培养条件继续培养。20天后采摘子实体。

枸杞、红景天、银杏叶提取液制备：将枸杞、红景天、银杏叶洗净后，1：2：1混合后，粉碎，过筛（80目）处理，按固液比1:10比例70度热水浸提10h ，过滤得到提取物滤液。

酒曲：安琪酒曲，购自西安博亚化工有限公司。

附图说明

图1为本发明保健酒抗疲劳功能结果。

具体实施方式

实施例1

1.        原料的筛选及烘干：挑选收完子实体后的无霉烂且蛹虫草菌丝体丰满的大米培养基残基1000g，放入烘干设备进行烘干。

2.        粉碎： 将第一步干燥后的固体蛹虫草培养基残基经粉碎机粉碎后过60目筛。

3.        膨化：将第二步粉碎后的原料加1倍体积的水，混合搅拌，把混合搅拌好的原料使用双螺杆挤压膨化设备进行挤压膨化处理。

4.        枸杞、红景天、银杏叶提取制备：将枸杞、红景天、银杏叶洗净后，1：2：1混合后，粉碎，过筛（80目）处理，按固液比1:10比例70度热水浸提10h ，过滤得到提取物滤液。

5.        酒曲发酵：将第三步膨化后的残基中加1倍体积的枸杞、红景天、银杏叶提取液浸泡后，添加1g/L白糖、0.05g/L风味剂、0.02g/L酿造用酶、0.05g/L乳酸辅料， 80度微波灭菌，加2%酒曲26度发酵10天，过滤后的滤液煎酒，最终得保健酒成品。

实施例2

1.        原料的筛选及烘干：挑选收完子实体后的无霉烂且蛹虫草菌丝体丰满的大米培养基残基1000g，放入烘干设备进行烘干。

2.        粉碎： 将第一步干燥后的固体蛹虫草培养基残基经粉碎机粉碎后过60目筛。

3.        膨化：将第二步粉碎后的原料加1倍体积的水，混合搅拌，把混合搅拌好的原料使用双螺杆挤压膨化设备进行挤压膨化处理。

4.        枸杞、红景天、银杏叶提取制备：将枸杞、红景天、银杏叶洗净后，1：2：1混合后，粉碎，过筛（80目）处理，按固液比1:10比例70度热水浸提10h ，过滤得到提取物滤液。

5.        酒曲发酵：将第三步膨化后的残基中加2倍体积的枸杞、红景天、银杏叶提取液浸泡后，添加1g/L白糖、0.05g/L风味剂、0.02g/L酿造用酶、0.05g/L乳酸辅料， 80度微波灭菌，加2%酒曲26度发酵10天，过滤后的滤液煎酒，最终得保健酒成品。

实施例3

1.        原料的筛选及烘干：挑选收完子实体后的无霉烂且蛹虫草菌丝体丰满的大米培养基残基1000g，放入烘干设备进行烘干。

2.        粉碎： 将第一步干燥后的固体蛹虫草培养基残基经粉碎机粉碎后过60目筛。

3.        膨化：将第二步粉碎后的原料按加1倍体积的水，混合搅拌，把混合搅拌好的原料使用双螺杆挤压膨化设备进行挤压膨化处理。

4.        枸杞、红景天、银杏叶提取制备：将枸杞、红景天、银杏叶洗净后，1：2：1混合后，粉碎，过筛（80目）处理，按固液比1:10比例70度热水浸提10h ，过滤得到提取物滤液。

5.        酒曲发酵：将第三步膨化后的残基中加3倍体积的枸杞、红景天、银杏叶提取液浸泡后，添加1g/L白糖、0.05g/L风味剂、0.02g/L酿造用酶、0.05g/L乳酸辅料， 80度微波灭菌，加2%酒曲26度发酵10天，过滤后的滤液煎酒，最终得保健酒成品。

试验例1

保健酒抗疲劳活性研究

选择昆明种18～22g小鼠40只，随机分成4组，每组10只。分别设生理盐水空白组、实施例1剂量组、实施例2剂量组、实施例3剂量组，经口给药，每组灌胃体积分别为：0.4ml/20g。各组小鼠自由摄食和饮水。每天灌胃一次，对照组每天灌胃0.4ml生理盐水，连续进行30天。每天观察小鼠的饮食、精神、毛发和大小便等状况。于最后1次给药1h后，给每鼠尾部附加体重5%的负荷（铅块），然后将小鼠放入水温25±5℃游泳池中游泳，人工驱赶使其不停游泳。记录小鼠自放入游泳池到溺水的时间，以小鼠鼻部沉入水中8s不浮出水面为溺水指标。从入水至运动疲劳发生的时间为力竭游泳时间。比较各组小鼠负重游泳时间。并在小鼠游泳之后拔眼球采0.5ml～0.8ml，分离血清。使用试剂盒测定血清中尿素氮、肝糖原含量。

结果如图1所示。从图1可以看出，与对照组相比，高低中三个剂量组尿素氮含量明显减少，游泳时间明显增加。两外，低剂量组合高剂量组的肝糖原含量比对照组高，这说明保健酒能够明显提高小鼠抗疲劳能力，具有保健功能。

试验例2

保健酒对糖尿病小鼠降血糖活性研究

1、四氧嘧啶诱导的                                                

型糖尿病小鼠模型的建立

   待建模小鼠适应性喂养 5d 后，每日自由饮用含糖量15%的糖水，食物正常，喂养 3d，建模前12h要断粮；建模药物-四氧嘧啶（溶于注射用灭菌生理盐水，在室温下呈粉红色溶液，现用现配）；给药途径-腹腔注射；剂量 150mg/kg。注射后 3h 灌胃含 25%葡萄糖 1ml/100g；判定指标-造模 72h 后的血糖值大于 11.lmmol/L 者为糖尿病模型动物。饲养期间，每天换水，保证供水新鲜；每2d更换垫料，保证小鼠生活环境的清洁；饲养室温度为22±1℃；湿度为50～65%，无对流风，日照时间保证12h/d。

2、动物实验分组

首先对小鼠建模，然后将建模成功的小鼠分组，即是实施例1剂量组、实施例2剂量组、实施例3剂量组。保健酒给药方式为经口给药，给药保健酒体积为0.4ml/20g，阴性对照组（经口给药生理盐水）和阳性对照组（经口给药盐酸二甲双胍阳性对照组），外加一组健康的小鼠作为空白组。

空白组：正常组+生理盐水组。

阳性对照组：模型组+阳性对照药盐酸二甲双胍（125mg/kg）剂量。

    分别于给药后10d、21d，眼眶取血，测其血糖一些指标。

结果显示，实施例1、实施例2、实施例3三个剂量组血糖平均值分别为5.5mmol/L，6.2mmol/L，6.9mmol/L，均低于阴性对照组小鼠血糖平均值（12.67mmol/L），属于小鼠正常血糖值范围，且与阳性对照组血糖平均值（6.1mmo/L）比较接近，说明保健酒具有很好的降血糖功能。    

试验例3

保健酒对环磷酞胺诱导的免疫抑制小鼠的免疫调节作用研究

    将50只昆明种18～22g小鼠适应性喂养4天后随机分为5组，分别为空白组、实施例1剂量组、实施例2剂量组、实施例3剂量组，阴性对照组，每组10只。保健酒经口给药，体积为0.4ml/20g，给小鼠灌胃，1次/d，连续给药27天，空白组和阴性对照组给予蒸馏水，自由采食。第16天除空白组其余4组开始腹腔注射环磷酞胺100 mg/kg，1次/d，连续3天～5天。27天后，脱颈椎处死小鼠后无菌取脾脏、胸腺，称重。计算器官指数。脏器指数指器官与体重比值的百分数。

表1 各实施例保健酒对小鼠免疫器官指数的影响（x±s）

	脾脏器官指数	胸腺器官指数
			空白组	6.1±0.551	3.2±0.12
实施例1组	5.97±0.10	3.06±0.17
			实施例2组	6.03±0.02	3.15±0.17
实施例3组	6.08±0.10	3.14±0.24
			阴性对照组	5.90±0.21	2.85±0.13

  结果如表1所示。从表1可以看出，模型组小鼠胸腺和脾脏指数显著降低，与空白对照组比较差异显著(P<0.01)，说明造模成功；3个实施例剂量组均能提高小鼠胸腺指数和脾脏指数，与模型组比差异显著(P<0.05～P<0.01)。

试验例4

保健酒延缓衰老活性研究

1、昆明种小鼠亚急性衰老模型的建立

    将昆明种18～22g小鼠60只适应性饲养5d，然后随机分成6组，分为正常饲养组，模型组，阳性药物组和实施例1剂量组、实施例2剂量组、实施例3剂量组。每组10只，三个实施例保健酒组，阳性药物组与模型组按125 mg/kg体重每日颈背部皮下注射D-半乳糖，连续注射45 d。每3天称一次体重。正常饲养组每天注射等量生理盐水。

2、实验小鼠给药

    造模同时灌胃给药。3个实施例给药组每天按0.4ml/20g灌胃给药，阳性药物（肌肽组）组每天100 mg/(kg·d)灌胃给药，每日一次，连续45 d，模型组与正常饲养组每日灌服0.4 ml生理盐水。

    实验小鼠于末次给药后，停药禁食1 d，称体重，摘眼球采血，分离血清，并采用试剂盒检测血清中SOD、MDA活力。

实验结果如表2所示。

表2 各实施例保健酒对小鼠各项指标的影响（x±s）

	SOD活力(U)	MDA活力(U)
			正常组	134.9±26.1*	52±9.0
模型组	133.5±2.6	62.7±3.5
			实施例1	151.2±21.4	55.3±3.7
实施例2	149.2±22.2*	65.2±5.6
			实施例3	153.2±2.5*	54.3±6.4
阳性对照	132.3±29.2	59.5±11.2

    从表2可以看出，各实施例组与模型组比，SOD活力和MDA活力得到明显提高，说明增强了小鼠抗自由基的能力，能够延缓机体衰老。 

Claims (1)

1.一种以蛹虫草培养基残基为原料的保健酒，其特征在于是由以下方法酿制的：

将采摘蛹虫草后的新鲜培养基残基进行烘干，干燥后的培养基残基粉碎成60目的粉料，将粉料加1倍体积的水混合搅拌，把混合搅拌好的培养基残基进行挤压膨化处理，向膨化后的残基中添加1g/L白糖、0.05g/L风味剂、0.02g/L酿造用酶、0.05g/L有机酸辅料，并加入1～3倍体积的枸杞、红景天、银杏叶提取物溶液，灭菌，加2%酒曲发酵8～10天，过滤后的滤液煎酒，最终得保健酒成品；

所述的枸杞、红景天、银杏叶提取物溶液：将枸杞、红景天、银杏叶洗净后，1：2：1混合后，粉碎，80目过筛处理，按固液比1:10比例70度热水浸提10h ，过滤得到提取物滤液。

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