CN102641317A - 金鸡菊提取物及其在制备抗糖尿病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种金鸡菊经甲醇加热回流提取后得到含马里苷、金鸡菊查尔酮和金鸡菊苷的提取物，金鸡菊或用水加热回流提取后得到含马里苷、金鸡菊查尔酮，但不含金鸡菊苷的提取物。所得的金鸡菊提取物，其体外具有DPPIV抑制活性，可以提高2型糖尿病小鼠的糖耐量，并且有降低空腹血糖的作用，提取物中含有金鸡菊苷比不含金鸡菊苷的药效更好。

Description

金鸡菊提取物及其在制备抗糖尿病药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及从金鸡菊中提取具有抗糖尿病的有效药物成份。

背景技术

金鸡菊（Coreopsis tinctoria Nuff.）又名雪菊，系菊科（compositae）金鸡菊属（Coreopsis）的干燥头状花序，单瓣、重瓣或半重瓣，舌状花黄色或金黄色，花期6～9月。大花金鸡菊属于北温带植物，原产于北美，弗罗里达州及墨西哥州，我国1936年作为观赏植物引种子至庐山、南岳等地栽培，目前各地除供观赏外，还用全草入药，而且从花中提取的食用色素，具有清热解毒和降压之功效。新疆金鸡菊广泛分布于和田地区海拔高3000米左右的昆仑山区，有较丰富的野生资源，在民间经常将其干花用来泡茶。

发明内容

本发明的目的是从金鸡菊提取出具有抗糖尿病的有效药物成份。

本发明实现上述目的所采用的技术方案如下：

金鸡菊提取物，其提取方法为：将金鸡菊头状花序粉碎，于质量浓度为60～80%的甲醇中加热回流提取，温度为50～70℃，减压浓缩回收提取液中的甲醇得到流浸膏，流浸膏用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩、干燥得到金鸡菊提取物，提取物中含马里苷、金鸡菊查尔酮和金鸡菊苷。

进一步，回流提取时金鸡菊头状花序粉与质量浓度为60～80%的甲醇的质量比为1：（25～30）。

另一种金鸡菊提取物，其提取方法为：将金鸡菊头状花序粉碎，于水中加热回流提取，温度为60-80℃，减压浓缩得到流浸膏，流浸膏上聚酰胺柱，用质量浓度为30～95%的乙醇进行梯度洗脱，洗脱液经浓缩、干燥得到金鸡菊提取物，提取物中含马里苷和金鸡菊查尔酮，不含金鸡菊苷。

进一步，回流提取时金鸡菊头状花序粉与水的质量比为1：（25～30）。

进一步，上述金鸡菊提取物在制备抗糖尿病药物中的应用。

所述马里苷具有如下的结构式：

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所述金鸡菊查尔酮具有如下的结构式：

 

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所述金鸡菊苷具有如下的结构式：

 

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有益效果：植物中有效药物成份的提取通常采用醇提或水提两种方法，本发明发现用甲醇或水均可从金鸡菊中提取出含马里苷和金鸡菊查尔酮，与水提物相比，用甲醇提取时，提取物还含金鸡菊苷，所制得的醇提物或水提物对2型糖尿病小鼠进行了药效实验，结果表明金鸡菊提取物可以提高2型糖尿病小鼠的糖耐量，并且有降低空腹血糖的作用，提取物中含有金鸡菊苷比不含金鸡菊苷的药效更好,金鸡菊提取物体外具有抑制DPPIV的作用，其降低血糖的机制可能与此作用有关。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步说明。

提取物的化学成分采用液质联用仪（LC/MS）进行定性分析。

实施例1

新疆金鸡菊头状花序经粉碎过20-50目筛，用质量浓度为60-80%的甲醇、50-70℃回流提取2次，每次2h，料液质量比为1:25，合并2次的提取液，减压浓缩回收溶剂得流浸膏。甲醇提物流浸膏用等体积乙酸乙酯萃取1-3次，合并萃取液，经旋转蒸发仪浓缩后，得到乙酸乙酯萃取浸膏；恒温干燥箱干燥，得到橘黄色粉末。

实施例2

新疆金鸡菊头状花序经粉碎过20-50目筛，加水，60-80℃回流提取2次，每次2h，料液质量比为1:25，合并2次的提取液，减压浓缩得流浸膏。水提物流浸膏上聚酰胺柱，用质量浓度为30%-95%的乙醇进行梯度洗脱，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，恒温干燥箱干燥，得到棕色粉末。

实施例3 提取物成分的鉴定

精密称取实施例1和实施例2制得的提取物各10mg，分别置于10ml容量瓶中，加甲醇超声使其溶解，定容至刻度，滤膜（0.22μm）过滤两次，备用。分别精密称取马里苷对照品、金鸡菊苷对照品及金鸡菊查尔酮对照品4.69mg、4.97mg和4.82mg，以色谱甲醇溶解并定容至10mL容量瓶中，得到浓度分别为0.469mg/mL、0.497mg/mL及0.482 mg/mL的标准溶液。LC/MS色谱条件：色谱柱：HyPersil BDS C₁₈ (4.6mm×250nm，5μm)；色谱峰采集范围：190nm～400nm；流动相：甲醇(A)-0.5%（质量）甲酸溶液(B)，梯度洗脱程序见下表；流速：0.8ml·min^-1；柱温：25℃；进样量：10μl；检测波长：290nm；MS条件：100-800质核比全离子扫描。

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LC/MS结果表明，实施例1所得提取物中含有马里苷、金鸡菊查尔酮和金鸡菊苷三种有效物，实施例2所得提取物中含有马里苷和金鸡菊查尔酮，无金鸡菊苷。

实施例4 药效学实验

一、2型糖尿病小鼠模型的建立  

清洁级雄性昆明小鼠140只，体重18-22g，其中10只作为正常对照组基础饲料喂养，另130只作为模型组用高糖高脂饲料喂养一周，禁食8小时后，腹腔注射链脲佐菌素(STZ溶液)180mg/kg（正常对照组给予相同体积的无菌柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液）。72小时后，禁食12小时，进行2h糖耐量试验（OGTT），血糖≥11.1mmol/L者造模成功。

二、成模小鼠分组及给药 

成模小鼠的分组

取成模小鼠88只，按照体重随机分为8组：模型组、二甲双胍阳性对照药组、实施例1所得提取物分大剂量组、中剂量组、小剂量组，实施例2所得提取物分大剂量组、中剂量组、小剂量组，加前述正常对照组共9组，每组保证10只以上。

成模小鼠的给药

各组于每天上午灌胃，1次/天，正常组和模型组灌生理盐水，连续给药30天。小鼠每周尾尖取血测一次空腹血糖（FBG）和口服糖耐量实验（OGTT）。

三、实验结果

给药前，模型组与各给药组FBG和OGTT无显著性差异。从给药2周后开始，二甲双胍组的FBG和OGTT持续降低明显，实施例1大剂量组FBG和OGTT也降低；给药4周后，实施 例1大剂量组FBG和OGTT与模型组比较有明显差异(P<0.01)，并且实施例1中剂量组FBG和OGTT与模型组比较也有统计学差异（P<0.05），实施例2大剂量与中剂量组FBG和OGTT与模型组比较都有统计学差异（P<0.05），实施例1小剂量组、实施例2小剂量组FBG和OGTT与模型组比较无差异性。具体结果如下：

 

实施例5 金鸡菊提取物体外对二肽基肽酶IV（DPP IV）的影响

将实施例1和实施例2所得的两种金鸡菊提取物的干燥粉末，配制成不同浓度梯度的溶液。实验分为4个组，每组设3个复孔，分别为空白对照组（缓冲液+底物），阴性对照组（酶+缓冲液+底物），实验空白对照组（提取物+缓冲液+底物）（提取物为有色物，在405nm处检测时会出现自身颜色干扰，因此在检测时设置每种提取物各浓度的空白尽量避免假阳性现象），实验组（提取物+酶+缓冲液+底物），观察不同浓度的抑制率变化。首先将各提取物、DPPIV、底物及缓冲液在37℃温度下水浴30min，然后按照提取物、酶、缓冲液、底物的顺序依次加入96孔板中，加入量如表1；37℃孵育60min，于405nm波长下测得OD值。

   实验结果如下：

 

以上实验表明金鸡菊提取物可以提高2型糖尿病小鼠的糖耐量并且有降低空腹血糖的作用，其中，实施例1制得提取物的效果要优于实施例2制得提取物的效果，说明提取物中含有金鸡菊苷比不含金鸡菊苷的药效更好，两种金鸡菊提取物体外具有抑制DPPIV的作用，其降低血糖的机制可能与此作用有关。

Claims (5)

1.金鸡菊提取物，其特征在于，该提取物是按如下提取方法得到：将金鸡菊头状花序粉碎，于质量浓度为60～80%的甲醇中加热回流提取，温度为50～70℃，减压浓缩回收提取液中的甲醇得到流浸膏，流浸膏用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩、干燥得到金鸡菊提取物，提取物中含马里苷、金鸡菊查尔酮和金鸡菊苷。

2.根据权利要求1所述的金鸡菊提取物，其特征在于：回流提取时金鸡菊头状花序粉与质量浓度为60～80%的甲醇的质量比为1：（25～30）。

3.另一种金鸡菊提取物，其特征在于，该提取物是按如下提取方法得到：将金鸡菊头状花序粉碎，于水中加热回流提取，温度为60～80℃，减压浓缩得到流浸膏，流浸膏上聚酰胺柱，用质量浓度为30%～95%的乙醇进行梯度洗脱，洗脱液经浓缩、干燥得到金鸡菊提取物，提取物中含马里苷和金鸡菊查尔酮，不含金鸡菊苷。

4.根据权利要求3所述的金鸡菊提取物，其特征在于：回流提取时金鸡菊头状花序粉与水的质量比为1：（25～30）。

5.权利要求1至4任意一项所述的金鸡菊提取物，其特征在于：所述金鸡菊提取物在制备抗糖尿病药物中的应用。