CN102631351A

CN102631351A - 齐墩果酸在制药中的应用

Info

Publication number: CN102631351A
Application number: CN2012100831186A
Authority: CN
Inventors: 何立群; 王东; 杨雪军; 王琛; 林日阳
Original assignee: Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of TCM
Current assignee: Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of TCM
Priority date: 2012-03-27
Filing date: 2012-03-27
Publication date: 2012-08-15

Abstract

本发明公开了齐墩果酸在制药中的应用。涉及齐墩果酸在制备抑制肾成纤维细胞和系膜细胞活化的药物中的应用、制备降低肾纤维化的药物中的应用、制备改善尿蛋白的药物中的应用、制备改善肾功能的药物中的应用、制备减轻肾脏炎症及胶原沉积的药物中的应用及在制备减轻肾脏纤维化指标相关基因和蛋白的药物中的应用。本发明设计了以TGF-β1诱导的大鼠肾成纤维细胞和系膜细胞活化的筛选平台，发现4.56×10^-5g/ml～4.56×10^-6g/ml的齐墩果酸可抑制TGF-β1诱导的大鼠肾成纤维细胞和系膜细胞的活化。本发明还设计了齐墩果酸对UUO模型和Platt模型大鼠作用的体内实验，发现齐墩果酸中剂量(6mg/kg/d)及高剂量(7mg/kg/d)均能降低UUO模型和Platt模型大鼠的尿蛋白、肾功能及肾脏纤维化相关基因和蛋白。

Description

齐墩果酸在制药中的应用

技术领域

本发明属中药领域，涉及齐墩果酸的用途，尤其涉及齐墩果酸在制药中的应用。

背景技术

肾脏纤维化，以肾小球硬化和肾小管间质纤维化为特征，是多种慢性肾脏疾病最终结局。本质上，肾纤维化是以细胞外基质的过度积聚和沉积为特征的过程。产生基质的细胞活化是肾纤维化形成的关键。生理情况下，成纤维细胞产生适量的胶原基质充填肾单位、血管和肾被膜之间的空隙。随年龄增长肾脏体积逐渐增大，成纤维细胞主要起肾间质重塑作用。当损伤及炎症因素持续存在时，成纤维细胞增殖并产生过量的细胞外基质。新合成的成纤维胶原成分在肾组织沉积。此外，肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞是主要的产生细胞外基质的细胞。肾纤维化早期，系膜细胞和纤维母细胞发生活化，晚期出现肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化。很多细胞因子可以促进肾脏成纤维细胞和系膜细胞的活化，加速肾脏纤维化的进程，其中以转化生长因子-β1(TGF-β1)作用最强。

目前，国外对肾脏纤维化的机制研究较为深入，但是尚无安全有效的治疗肾脏纤维化的药物，而我国在该领域研究活血化瘀中药的疗效取得了一定的成绩。

牛膝是苋科植物牛膝(怀牛膝)和川牛膝(甜牛膝)的根，性苦、甘、酸，平，具有活血通经、补肝肾、强筋骨、利水通淋、引火(血)下行等功效。齐墩果酸是牛膝的提取物，分子式为C₃₀H₄₈O₃，分子量是456.71，不溶于水，可溶于乙醇、***、丙酮和氯仿。齐墩果酸除具有护胃、强心、抗心律失常、降血糖、降血脂、抗高血压的生物活性外，还具有抗炎、抗病毒、免疫调节、抑制血小板聚集和抗过氧化等多种药理作用。

近年来研究发现齐墩果酸还有保护肝细胞的作用。许仄平等研究齐墩果酸预处理对大鼠肝脏缺血再灌注时糖原含量的影响及其意义，结果发现齐墩果酸能抑制糖原磷酸化酶的特性，增加术前肝脏中糖原的储备，在肝脏缺血再灌注期间有助于增加能量供给，从而起到减轻肝脏的损伤。何明枫等观察了对大鼠肝脏缺血再灌注损伤过程中IKK/I-κB/NF-κB信号转导通路的影响，结果发现肝脏缺血再灌注能促进胞浆内IKK2蛋白的表达，使I-κB磷酸化水解，NF-κB活化进入细胞核内介导炎症反应，损伤肝细胞。缺血前使用齐墩果酸可抑制IKK/I-κB/NF-κB信号传导通路的激活，从而发挥其对肝细胞保护作用。

目前，对齐墩果酸在抑制肾成纤维细胞和系膜细胞活化中的作用、降低UUO模型和Platt模型大鼠尿蛋白(24h尿蛋白定量、α1-MG、NAG、β2-MG、TRF)、肾功能(Scr、BUN)、减轻肾脏炎症及胶原沉积中的作用及改善肾纤维化相关基因和蛋白(TGF-β1、CTGF、CollagenIII、LN、Collagen I、FN)的作用尚未见相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供齐墩果酸的新用途，即齐墩果酸在制药中的新应用。

为解决上述技术问题，在本发明的一方面，提供齐墩果酸在制备抑制肾成纤维细胞和系膜细胞活化的药物中的应用。所述齐墩果酸抑制TGF-β1诱导的肾成纤维细胞和系膜细胞活化的有效浓度为4.56×10^-5g/ml～4.56×10^-6g/ml。

在本发明的另一方面，提供齐墩果酸在制备降低肾纤维化的药物中的应用。所述齐墩果酸降低肾纤维化的有效剂量为6mg/kg/d或7mg/kg/d。

在本发明的另一方面，提供齐墩果酸在制备改善尿蛋白的药物中的应用。所述改善尿蛋白包括改善24h尿蛋白定量、α1-MG、NAG、β2-MG、TRF。

在本发明的另一方面，提供齐墩果酸在制备改善肾功能的药物中的应用。所述改善肾功能包括改善肾功能Scr、BUN。

在本发明的另一方面，提供齐墩果酸在制备减轻肾脏炎症及胶原沉积的药物中的应用。

在本发明的另一方面，提供齐墩果酸在制备改善肾脏纤维化相关基因和蛋白的药物中的应用。所述改善肾脏纤维化相关基因和蛋白包括改善纤维化相关基因和蛋白TGF-β1、CTGF、Collagen III、LN、Collagen I、FN。

本发明以TGF-β1为刺激因子，在体外用MTT法观察不同浓度梯度的齐墩果酸对TGF-β1刺激下大鼠肾成纤维细胞和系膜细胞活化的作用，并在体内观察其对UUO模型和Platt模型大鼠尿蛋白、肾功能以及肾脏纤维化相关基因和蛋白的影响。本发明设计了以TGF-β1诱导的大鼠肾成纤维细胞和系膜细胞活化的筛选平台，观察各浓度梯度的齐墩果酸对大鼠肾成纤维细胞和系膜细胞活化的抑制作用及有效工作浓度。结果显示：浓度为4.56×10^-5g/ml～4.56×10^-6g/ml的齐墩果酸可抑制TGF-β1诱导的大鼠肾成纤维细胞和系膜细胞活化，两个浓度作用效果之间无统计学差异。此外，本发明设计了齐墩果酸对大鼠肾纤维化作用的体内实验，观察齐墩果酸中剂量(6mg/kg/d)及高剂量(7mg/kg/d)对UUO模型和Platt模型大鼠尿蛋白、肾功能以及肾脏纤维化相关基因和蛋白的影响，结果中剂量(6mg/kg/d)及高剂量(7mg/kg/d)的齐墩果酸均能降低UUO模型和Platt模型大鼠尿蛋白、肾功能以及肾脏纤维化相关基因和蛋白。从而本发明从体内体外实验验证了齐墩果酸能抑制肾成纤维细胞和系膜细胞活化，降低肾纤维化大鼠尿蛋白、肾功能以及肾脏纤维化相关基因和蛋白，即本发明验证了齐墩果酸可用于制备降低肾纤维化的药物。

附图说明：

图1-图6是试验例2中齐墩果酸在UUO模型大鼠肾脏炎症及胶原沉积研究中光镜下肾组织结构示意图；其中，图1-图3为HE染色(100×)，图1代表A组，图2代表B组，图3代表C组；图4-图6为Masson染色(100×)，图4代表A组，图5代表B组，图6代表C组。

图7-图14是试验例2中齐墩果酸在Platt模型大鼠肾脏炎症及胶原沉积研究中光镜下肾组织结构示意图；其中，图7-图10为HE染色(100×)，图7代表A组，图8代表B组，图9代表C组，图10代表D组；图11-图14为Masson染色(100×)，图11代表A组，图12代表B组，图13代表C组，图14代表D组。

具体实施方式

以下通过试验例对本发明齐墩果酸的药理活性试验及结果作进一步的阐述：

试验例1：体外实验

一、材料与方法

(一)材料

实验细胞：正常大鼠肾脏成纤维细胞株(NRK-49F)和系膜细胞株(HBZY-1)，均购自上海复盟基因生物科技有限公司。

齐墩果酸购自上海融禾医药科技发展有限公司，批号：110531；TGF-β1生长因子购自PeproTech公司，产品编号：100-21C。

胎牛血清，产品编号：S1840-500；DMEM高糖培养基，产品编号：L01103-500；0.25％胰蛋白酶-0.02％乙二胺四乙酸，产品编号：L0932-500；青霉素-链霉素产品编号：03-050-1B；以上均购自Biowest公司。MTT粉末，化学名为3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四唑，购自Amresco公司，产品编号：0793。

(二)方法

1.实验步骤

11 MTT法：先用0.25％胰蛋白酶-0.02％乙二胺四乙酸(Trypsin0.25％-0.02％EDTA)消化NRK-49F和HBZY-1细胞株，再用含10％胎牛血清的DMEM培养液配成单个细胞悬液，以每孔1×10⁴/ml个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积100μl。待细胞贴壁后，吸去培养板中的培养液，每孔加入无血清的DMEM培养液100μl，置37℃、5％的CO₂孵箱中孵育24h，使细胞生长同步化。之后加入TGF-β1生长因子和齐墩果酸，24h后每孔加入MTT溶液(5mg/ml)10μl，37℃继续孵育4h，终止培养，小心吸去孔内培养上清液(尽量洗净残留的培养液)。每孔加入100μl DMSO(二甲基亚砜)，振荡10min，使针状结晶充分溶解。选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值(OD值)。

1.2 ELISA法：先用0.25％胰蛋白酶-0.02％乙二胺四乙酸(Trypsin0.25％-0.02％EDTA)消化NRK-49F和HBZY-1细胞株，再用含10％胎牛血清的DMEM培养液配成单个细胞悬液，以每孔1×10⁴/ml个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积100μl。待细胞贴壁后，吸去培养板中的培养液，每孔加入无血清的DMEM培养液100μl，置37℃、5％的C0₂孵箱中孵育24h，使细胞生长同步化。之后加入TGF-β1生长因子和齐墩果酸，收集24h细胞上清液，按照ELISA试剂盒说明书操作。

2.实验分组

2.1观察NRK-49F细胞株分7组，每组设5个复孔，分组如下：

A组(空白对照组)、B组(TGF-β1 2ng/ml组)、C组(TGF-β1 5ng/ml组)、D组(TGF-β12ng/ml+齐墩果酸4.56×10^-5g/ml组)、E组(TGF-β1 2ng/ml+齐墩果酸4.56×10^-6g/ml组)、F组(TGF-β1 5ng/ml+齐墩果酸4.56×10^-5g/ml组)、G组(TGF-β1 5ng/ml+齐墩果酸4.56×10^-6g/ml组)。B组和C组为模型组。

2.2观察HBZY-1细胞株分4组，每组设6个复孔，分组如下：

A组(空白对照组)、B组(TGF-β1 2ng/ml组)、C组(TGF-β1 2ng/ml+齐墩果酸4.56×10^-5g/ml组)、D组(TGF-β1 2ng/ml+齐墩果酸4.56×10^-6g/ml组)。B组为模型组。

3.观察指标

3.1采用MTT法观察24h齐墩果酸对两种细胞株的作用。

3.2采用ELISA法观察细胞上清液中TGF-β的分泌情况。

二、结果

1.齐墩果酸能抑制活化的大鼠成纤维细胞株(NRK-49F)的增殖

空白对照组NRK-49F的OD值为0.355±0.034，加入TGF-β1生长因子(2ng/ml和5ng/ml)NRK-49F的OD值为0.508±0.026和0.457±0.042，明显高于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。说明TGF-β1生长因子可以促进NRK-49F的活化。齐墩果酸高剂量(4.56×10^-5g/ml)及中剂量(4.56×10^-6g/ml)组OD值分别为0.413±0.033、0.391±0.019和0.427±0.019、0.393±0.014，低于模型组(P＜0.05～0.01)(见表1)。

表1齐墩果酸对活化的大鼠成纤维细胞株(NRK-49F)的抑制作用

注：与A组比较，*P＜0.05；与B组比较，#P＜0.01；与C组比较，^▲P＜0.05。

2.齐墩果酸能抑制活化的大鼠系膜细胞株(HBZY-1)的增殖

空白对照组HBZY-1的OD值为0.204±0.018，加入TGF-β1生长因子(2ng/ml)HBZY-1的OD值为0.229±0.019，明显高于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。说明TGF-β1生长因子可以促进HBZY-1的活化。齐墩果酸高剂量(4.56×10^-5g/m1)及中剂量(4.56×10^-6g/ml)组OD值分别为0.195±0.021和0.186±0.015，低于模型组(P＜0.05)(见表2)。

表2齐墩果酸对活化的大鼠HBZY-1的抑制作用

注：与A组比较，*P＜0.05；与B组比较，^▲P＜0.05。

3.齐墩果酸能抑制活化的大鼠成纤维细胞株(NRK-49F)TGF-β的分泌

空白对照组NRK-49F的TGF-β浓度为(15.682±2.396)pg/ml，加入TGF-β1生长因子(2ng/ml和5ng/ml)NRK-49F的TGF-β浓度为(122.664±10.397)pg/ml和(401.252±31.856)pg/ml，明显高于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)。说明TGF-β1生长因子可以促进NRK-49F TGF-β的分泌。齐墩果酸高剂量(4.56×10^-5g/ml)及中剂量(4.56×10^-6g/ml)组TGF-β浓度分别为(100.592±14.387)pg/ml、(154.502±17.174)pg/ml和(94.272±23.439)pg/ml、(253.286±32.112)pg/ml，低于模型组(P＜0.05～0.01)(见表3)。

表3齐墩果酸对活化的大鼠NRK-49F TGF-β的分泌

注：与A组比较，*P＜0.01；与B组比较，^●P＜0.01，#P＜0.05；与C组比较，^▲P＜0.01。

4.齐墩果酸能抑制活化的大鼠系膜细胞株(HBZY-1)TGF-β的分泌

空白对照组HBZY-1的TGF-β浓度为(10.288±3.121)pg/ml，加入TGF-β1生长因子(2ng/ml)HBZY-1的TGF-β浓度为(100.338±12.346)pg/ml，明显高于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)。说明TGF-β1生长因子可以促进HBZY-1 TGF-β的分泌。齐墩果酸高剂量(4.56×10^-5g/ml)及中剂量(4.56×10^-6g/ml)组TGF-β浓度分别为(82.078±9.441)pg/ml和(66.688±9.941)pg/ml，低于模型组(P＜0.01)(见表4)。

表4齐墩果酸对活化的大鼠HBZY-1 TGF-β的分泌

注：与A组比较，*P＜0.01；与B组比较，#P＜0.01。

试验例2：体内实验

一、材料与方法

(一)材料

实验动物：健康成年SD雄性大鼠27只(UUO)，健康成年SD雄性大鼠40只(Platt法)，体重200-240g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。大鼠分笼饲养于上海中医药大学实验动物中心，予12h光照，45％湿度的环境中，自由饮水，进食标准普通饲料。

齐墩果酸购自上海融禾医药科技发展有限公司，批号：110531；科素亚购自杭州默沙东制药有限公司，批准文号：国药准字H20000371，生产批号：100676。

(二)方法

1.实验步骤

11单侧输尿管结扎模型(UUO法)：大鼠以2％戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉，将大鼠右侧卧位固定于手术台上，备皮，用碘酒、75％酒精消毒手术区后铺巾，选择左侧腹纵行切口，依次切开皮肤至腹腔，游离输尿管，将左侧输尿管用组织钳托起中段，1号丝线分别结扎输尿管，两结扎线相距5mm，不剪断输尿管，手术时注意不碰伤肾包膜并保护好周围组织，手术后把将肾脏、输尿管复位，然后连续缝合腹膜，间断缝合皮肤。术中严格遵守无菌操作。另取正常SD大鼠9只，仅作背部切口，分两次剥离左右肾包膜，保留肾上腺，作为假手术组。

1.2 5/6肾切除大鼠慢性肾衰肾纤维化模型(Platt法)：大鼠以2％戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉，备皮，用碘酒、75％酒精消毒手术区后铺巾，距左脊肋骨1.5cm处斜向外方切口，经后腹膜取肾，暴露肾脏，分离肾周脂肪后，弧型切除2/3肾组织(主要切除皮质部分)，用明胶海绵压迫止血片刻，再滴加数滴纤维蛋白原和凝血酶溶液，稍等片刻，当切面上不再有活动性出血后复位剩余左肾，缝合；1周后再次手术切除整个右肾。另取正常SD大鼠10只，仅作背部切口，分两次剥离左右肾包膜，保留肾上腺，作为假手术组。

2.实验分组

2.1 UUO法将大鼠按体重编号后，随机分为3组：假手术组(A组)、模型组(B组)、齐墩果酸组(C组)，每组为9只，使各组之间的体重无统计学差异(P＞0.05)。

2.2 Platt法：术后1周目内眦采血，测定肾功能，根据肌酐随机分为4组：假手术组(A组)、模型组(B组)、齐墩果酸组(C组)、科素亚组(D组)，每组为10只，使各组之间无统计学差异(P＞0.05)。

3.用药方法

3.1 UUO法：按体重随机分组后，齐墩果酸组按6mg/kg/d的剂量灌胃，假手术组和模型组均予等量蒸馏水灌胃，每日灌胃，共2周。

3.2 Platt法：模型制备成功后按照血清肌酐分组后，齐墩果酸组按7mg/kg/d的剂量灌胃，科素亚按8.6mg/kg/d的剂量灌胃，假手术组和模型组均予等量蒸馏水灌胃，每日灌胃，共8周。

4.观察指标

4.1肾功能的测定：心脏采血，检测血清肌酐(Scr)及尿素氮(BUN)水平，用常规生化检测方法检测。

4.2尿蛋白的测定：处死前一天收集各大鼠24h尿液，检测24h尿蛋白、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、α1-微球蛋白(α1-MG)、β2-微球蛋白(β2-MG)及转铁蛋白(TRF)这5项指标，采用ELISA法，用酶标仪测定，按试剂盒说明书进行操作。

4.3肾组织病理学检测：将肾组织固定10％中性***缓冲液中，石蜡包埋，组织切片，行常规苏木素-伊红(HE)染色和马松三色(Masson)染色。

4.4大鼠的肾组织RT-PCR、WB相关指标的检测：转化生长因子β1(TGF-β1)、***生长因子(CTGF)、I型胶原蛋白(Collagen I)、III型胶原蛋白(Collagen III)层黏连蛋白(LN)及纤维连接蛋白(FN)。

二、结果

(一)UUO模型

1.齐墩果酸能降低UUO模型大鼠的肾功能：模型组的血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)为(46.44±10.33)umol/l和(8.11±2.58)mmol/l，明显高于假手术组的血清肌酐和尿素氮(22.67±5.39)umol/l和(4.14±0.51)mmol/l，差异有统计学意义(P＜0.01)。说明模型成功。齐墩果酸组的血清肌酐和尿素氮为(33.44±3.28)umol/l和(6.94±0.61)mmol/l，显著低于模型组(P＜0.01)(见表5)。

表5齐墩果酸对UUO模型大鼠的肾功能的比较

注：与A组比较，*P＜0.01。

2.齐墩果酸能降低UUO模型大鼠的尿蛋白：模型组的24h尿蛋白定量、α1-MG、NAG、β2-MG和TRF为(0.94±0.32)ug/24H、(226.00±15.25)ng/L、(37.21±17.33)U/L、(38.68±1.92)ng/L和(239.33±26.27)nmol/L，明显高于假手术组，差异有统计学意义(P＜0.01)。齐墩果酸组的24h尿蛋白定量、α1-MG和NAG为(0.39±0.10)ug/24H、(204.20±9.02)ng/L和(29.74±6.89)U/L，显著低于模型组(P＜0.01)。齐墩果酸组的β2-MG和TRF为(36.45±3.65)ng/L和(222.96±29.90)nmol/L，低于模型组(P＞0.05)(见表6)。

表6齐墩果酸对UUO模型大鼠的尿蛋白比较

注：与A组比较，*P＜0.01。

3.齐墩果酸能减轻UUO模型大鼠肾脏炎症及胶原沉积：假手术组大鼠肾小球、小管结构基本正常，胶原染色主要位于肾小管基底膜、系膜区和毛细血管周围，小管周围间质无增宽。模型组大鼠上皮细胞胞浆疏松、浊肿和空泡变性，间质水肿伴有炎症细胞浸润，纤维组织增生，部分肾小管萎缩、管腔闭塞或扩张、坏死，部分管腔内有红细胞管型，小管间质区增宽，小管结构遭到严重破坏。而齐墩果酸组与之相比病变明显减轻(见图1-6)。

4.齐墩果酸能改善UUO模型大鼠的纤维化指标

4.1齐墩果酸能降低相关纤维化指标的基因：齐墩果酸组的TGF-β1 mRNA、CTGFmRNA、Collagen IIImRNA、LN mRNA、Collagen I mRNA和FN mRNA分别为2.23±0.44、1.14±0.14、14.42±1.02、1.14±0.21、4.22±0.92和18.52±1.78，显著低于模型组(P＜0.01～P＜0.001)(见表7)。

表7齐墩果酸对TGF-β1 mRNA、CTGF mRNA、Collagen IIImRNA、LN mRNA、CollagenImRNA和FN mRNA的作用(用2^-△△CT表示)

注：与模型组(B组)比较，*P＜0.001，#P＜0.01，^▲P＜0.05。

4.2齐墩果酸能降低相关纤维化指标的蛋白：齐墩果酸组的TGF-β1、CTGF、CollagenIII、LN、Collagen I和FN分别为1.68±0.13、1.79±0.15、5.65±0.50、2.38±0.23、4.97±0.53和2.37±0.27，显著低于模型组(P＜0.01～P＜0.001)(见表8)。

表8齐墩果酸对TGF-β1、CTGF、Collagen III、LN、Collagen I和FN的作用(用

表示)

注：与模型组(B组)比较，*P＜0.001，#P＜0.01，^▲P＜0.05。

(二)Platt模型

1.齐墩果酸能降低Platt模型大鼠的肾功能：模型组的血清肌酐和尿素氮为(57.44±5.23)umol/l和(10.84±1.40)mmol/l，明显高于假手术组的血清肌酐和尿素氮(25.46±3.40)umol/l和(6.01±0.58)mmol/l，差异有统计学意义(P＜0.01)。说明模型成功。齐墩果酸组的血清肌酐和尿素氮为(44.85±6.42)umol/l和(7.13±1.08)mmol/l，低于模型组(P＜0.05)(见表9)。

表9齐墩果酸对Platt模型大鼠的肾功能的比较

注：与A组比较，**P＜0.01，*P＜0.05。

2.齐墩果酸能降低Platt模型大鼠的尿蛋白：模型组的24小时尿蛋白定量为(29.34±12.17)ug/24H，明显高于假手术组，差异有统计学意义(P＜0.01)。齐墩果酸组的24小时尿蛋白定量为(28.48±12.51)ug/24H，低于模型组(P＜0.05)。(见表10)。

表10齐墩果酸对Platt模型大鼠的尿蛋白比较

注：与A组比较，*P＜0.05。

3.齐墩果酸能减轻Platt模型大鼠肾脏炎症及胶原沉积：假手术组肾小球未见明显异常，系膜细胞无增生，毛细血管襻开放，血管壁正常，间质无明显炎性细胞浸润；大鼠可见肾小球增生、肥大，系膜细胞轻度增生，可见局灶节段性球囊黏连和硬化，基质增宽不明显，肾小管偶有轻中度变性，偶见小管内蛋白管型，间质有炎性细胞浸润，蓝染纤维在系膜区、小球周围明显增加；而各治疗组(齐墩果酸组，即C组)与之相比病变明显减轻(见图7-14)。

4.齐墩果酸能改善Platt模型大鼠的纤维化指标

4.1齐墩果酸能降低相关纤维化指标的基因：齐墩果酸组的TGF-β1 mRNA、CTGFmRNA、Collagen IIImRNA、LN mRNA、Collagen I mRNA和FN mRNA分别为0.98±0.20、1.08±0.18、1.64±0.36、1.30±0.13、2.94±0.65和1.63±0.47，显著低于模型组(P＜0.05～P＜0.01)(见表11)。

表11齐墩果酸对TGF-β1 mRNA、CTGF mRNA、Collagen IIImRNA、LN mRNA、CollagenImRNA和FN mRNA的作用(用2^-△△CT表示)

注：与模型组(B组)比较，*P＜0.01，#P＜0.05。

4.2齐墩果酸能降低相关纤维化指标的蛋白：齐墩果酸组的TGF-β1、CTGF、Collagen III、LN、Collagen I和FN分别为1.90±0.15、1.68±0.26、7.31±0.57、1.64±0.21、1.73±0.27和2.44±0.33，显著低于模型组(P＜0.01～P＜0.05)(见表12)。

表12齐墩果酸对TGF-β1、CTGF、Collagen III、LN、Collagen I和FN的作用(用

表示)

注：与模型组(B组)比较，*P＜0.01，_#P＜0.05。

以下通过实施例对本发明作进一步的阐述：

实施例1

按本领域技术人员公知的方法将本发明齐墩果酸制成片剂。齐墩果酸片剂，每片含齐墩果酸50mg，微晶纤维素60mg，微粉硅胶20mg，乳糖10mg，硬脂酸镁0.7mg。用法：每次1片，每日2-3次，每周用药5-6天，每3-4周为一疗程。

实施例2

按本领域技术人员公知的方法将本发明齐墩果酸制成胶囊剂。齐墩果酸胶囊剂，每粒含齐墩果酸50mg。用法：每次1粒，每日2-3次，每周用药5-6天，每3-4周为一疗程。

实施例3

按本领域技术人员公知的方法将本发明齐墩果酸制成颗粒剂。齐墩果酸颗粒剂，每袋含齐墩果酸50mg，微晶纤维素60mg，微粉硅胶20mg，硬脂酸0.7mg，乳糖20mg。用法：每次1袋，每日2-3次，每周用药5-6天，每3-4周为一疗程。

实施例4

按本领域技术人员公知的方法将本发明齐墩果酸制成注射剂。齐墩果酸注射剂，每支含齐墩果酸60mg。用法：每次1支，每日1次，每周用药5-6天，每3-4周为一疗程。

Claims

1.齐墩果酸在制备抑制肾成纤维细胞和系膜细胞活化的药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述齐墩果酸抑制TGF-β1诱导的肾成纤维细胞和系膜细胞活化的有效浓度为4.56×10^-5g/ml～4.56×10^-6g/ml。

3.齐墩果酸在制备降低肾纤维化的药物中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述齐墩果酸降低肾纤维化的有效剂量为6mg/kg/d或7mg/kg/d。

5.齐墩果酸在制备改善尿蛋白的药物中的应用，其特征在于，所述改善尿蛋白包括改善24h尿蛋白定量、α1-MG、NAG、β2-MG、TRF。

6.齐墩果酸在制备改善肾功能的药物中的应用，其特征在于，所述改善肾功能包括改善肾功能Scr、BUN。

7.齐墩果酸在制备减轻肾脏炎症及胶原沉积的药物中的应用。

8.齐墩果酸在制备改善肾脏纤维化相关基因和蛋白的药物中的应用，其特征在于，所述改善肾脏纤维化相关基因和蛋白包括改善纤维化相关基因和蛋白TGF-β1、CTGF、CollagenIII、LN、Collagen I、FN。