CN102614514B - Glp-1受体激动剂用于治疗疼痛 - Google Patents

Abstract

本发明涉及胰高血糖素样肽-1(glucogan-like peptide-1，GLP-1)受体激动剂(包括大分子激动剂如GLP-1及其衍生物和exendins及其衍生物，以及小分子激动剂如京尼平苷)用于治疗能够通过激活中枢神经***包括脊髓GLP-1受体而得到治疗的病症，如疼痛，尤其是慢性疼痛，包括神经源性疼痛、肿瘤疼痛、糖尿病疼痛、免疫炎症疼痛和腰背疼痛等。

Description

GLP-1受体激动剂用于治疗疼痛

技术领域

本发明涉及胰高血糖素样肽-1(glucogan-like peptide-1，GLP-1)受体激动剂对神经***中GLP-1受体的激动作用，具体来说用于治疗疼痛，尤其是慢性疼痛；还涉及利用GLP-1受体来鉴定药剂的方法。

背景技术

疼痛是临床上最常见的症状之一，很多疾病或病症都会出现疼痛症状，并严重影响患者的生活质量，治疗疼痛已经成为健康护理和疾病治疗中最多考虑的因素之一。因此疼痛已获得医药界越来越多的关注，2000-2010已被称为疼痛年代。疼痛是与急性或潜在的组织破坏相关联的不愉快的感觉和情感体验，促使人们避开或所述破坏情形，从而保护身体并避免破坏的进一步发生。大多数疼痛在疼痛刺激消除以后随即消失，但有时尽管刺激已经消除并且身体明显恢复但疼痛仍然持续。此外，有时尽管检测不到任何刺激、破坏或疾病，但仍出现疼痛。基于此，疼痛可分为急性疼痛和慢性疼痛。

慢性疼痛是当今国际疼痛研究的热点，根据发生的原因不同，可分为炎症痛、神经源性痛、肿瘤(癌症)痛、糖尿病疼痛和腰背痛等。慢性疼痛和急性疼痛的区别，在于不完全是末梢神经受刺激引起的一些非损害性刺激，如轻触、温热等刺激也可引起病变区的强烈疼痛。慢性疼痛常在损伤后一段时间发生，这种疼痛带有自发性，随机性和持久性，而且服用常用镇痛药多无效，并往往终生不愈。慢性疼痛涉及复杂的形成机理，外周的异位放电及中枢敏感化(central sensitization)是目前广泛认可的慢性疼痛包括神经源性疼痛和肿瘤疼痛形成的主要机制(Basbaum et al.Cell139：267-284，2009)。慢性疼痛发病率较高，约占总人群的10％，并随年龄增大和原发病程延长而增高(如55岁以上发病率可达13％，再如在糖尿病诊断初期为8％，而在诊断25年后可高达50％)。

疼痛(如各种形式的慢性疼痛包括癌症疼痛、神经源性痛等)治疗不充分在病房、重症监护室(ICU)、急诊等中普遍存在。可以使用药物、精神疗法、物理疗法以及传统医学疗法等来治疗疼痛。例如，可以使用镇痛剂和麻醉剂等药物来治疗急性疼痛。相对而言，慢性疼痛的治疗要困难得多，可能需要多方面的共同努力才能达到相对较好的结果。

目前临床上治疗慢性疼痛主要包括三环抗抑郁药如阿米替林(amitriptyline)，抗癫痫药如加巴喷丁和普瑞巴林，局部***如利多卡因(Lidocaine)，阿片类药(如***、二氢***酮、芬太尼和丁丙诺啡)，肾上腺素受体阻断剂如可乐定，以及5-HT再摄取抑制剂如度洛西汀和齐考诺肽等。但是由于对慢性疼痛较低的认知度，市场上现有的多数产品并不专门针对慢性疼痛，对大部分患者无效或只能适度缓解疼痛，或会引起许多不良反应，或给药不方便。如***治疗神经源性疼痛各家报道不一致；再如阿米替林不良反应较多，包括***性低血压、尿潴留、记忆模糊、心肌传导异常、嗜睡等；再如脊髓推注齐考诺肽使用不方便。总之目前药物治疗慢性疼痛成功率有限。因此寻找安全有效、无成瘾性、方便使用的新型抗慢性疼痛药物是全球具有极大挑战性的一个重大课题。

1987年Drucher等最早在大鼠胰岛瘤细胞RIN1046-38中检测到胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的结合受体(GLP-1受体)，但其克隆由Thorens等于1992年完成(Thorens，Proc.Natl.Acad.Sci.，89：8641-8645，1992)。随后，在人的胰岛、大脑、脊髓、肺、胃、小肠、肾脏及心脏组织中都发现了该受体的存在(Nishizawa et al.，J.Auton.Nerv.Syst.，80：14221，2000；Tibaduiza et al.，J.Biol.Chem.，276：37787-37793，2001)，但在葡萄糖代谢的主要外周组织(如肝脏、骨骼肌和脂肪组织)中却未发现其存在(Montrose et al.，J.Cell Physiol.，172：275-283，1997；Yang et al.，Am.J.Physiol.，275：C675-C683，1998)。DNA杂交试验显示，GLP-1受体基因位于人染色体的6p21，基因组全长40kd，至少有7个外显子。人和大鼠的GLP-1受体均含有463个氨基酸，同源性为91％；小鼠的受体蛋白有489个氨基酸，与人的GLP-1受体同源性为84％。

GLP-1受体属于G蛋白偶联受体B家族(分泌素家族)中的胰高血糖素受体亚家族。该亚家族最明显的特征是相对较长的胞外N端序列，通过三个二硫键形成一球状结构域。该区域有许多糖基修饰，在配体结合过程中起关键作用，但将该结构域分离后发现其本身并不足以与配体结合。实际上，胞外环区域和7个跨膜区段间通过特定氨基酸残基之间的相互作用形成的复杂空间构象，对配体结合也起了一定的作用(Tibaduiza etal.，J.Biol.Chem.，276：37787-37793，2001)。突变分析表明，氨基端和胞外区的带电荷氨基酸对其功能非常重要，而受体第5和第6个跨膜区段的第三个胞内环与G蛋白偶联相关。到目前为止，未曾发现该受体的功能突变与糖尿病或其他疾病的易感性有关。

目前已知的GLP-1受体的主要生理功能主要包括以下几个方面：

1.在胰岛细胞中的功能：

1)促进胰岛素的分泌：GLP-1受体属于G蛋白偶联受体中的Gs亚类，对霍乱毒素敏感。当GLP-1受体的经典激动剂GLP-1和受体结合后，偶联的G蛋白α亚基与β、γ亚基解离，并分别介导胞内不同的信号通路。在胰岛β细胞模型中，Gα亚单位被活化后，刺激腺苷酸环化酶，导致细胞内cAMP水平升高和PKA活化，引起一系列级联反应，包括离子通道活性改变、细胞内钙流变化、胰岛素分泌小泡释放等。GLP-1直接通过cAMP-PKA途径提高胰岛β细胞对葡萄糖的敏感性，刺激血糖依赖性的胰岛素持续分泌(Holz et al.，J.Biol.Chem.，274：14147-14156，1999)。葡萄糖代谢使细胞内ATP浓度增加，ATP与ADP的比值升高，促使ATP依赖性钾离子通道关闭，细胞膜去极化，膜上L型钙离子通道开启，并进一步促进细胞内钙库释放钙离子，促进含胰岛素的分泌小泡外排。GLP-1的促胰岛素分泌作用呈明显的葡萄糖依赖性，在葡萄糖浓度低于4.5mM时，无任何反应；同时，这种作用又是全方位的，影响前胰岛素基因的转录、翻译及剪接等各个功能环节。此外，β细胞中与糖代谢密切相关的基因，如葡萄糖激酶和葡萄糖转运蛋白2，其表达均被GLP-1上调。但也有研究表明，大鼠β细胞中的胰岛素基因启动子可以部分不依赖PKA的方式被激活(Bode et al.，Endocrinology，140：3919-3927，1999)。2)刺激β细胞的增生：GLP-1受体被激活后，G蛋白β、γ亚基通过磷脂酰肌醇-3-激酶(P13K)和丝裂元活化蛋白激酶(MAPK)的信号通路诱导β细胞的增殖和分化(Leech et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，278：44-47，2000)。3)抑制β细胞的凋亡：通过上调Akt1基因、Prosurvival激酶及p44MAPK表达，降低Caspase-3活性(Wang et al.，Diabetologia，45：1263-1273，2002)。4)降低胰高血糖素分泌，具体分子机制目前尚不明了。

2.在神经组织中的效应：

GLP-1受体在下丘脑、脑干及小脑中均有表达，提示其在脑内可能有一定的生理功能。GLP-1经血液循环进入大脑，在大脑皮层、海马及小脑的神经元都可检测到碘标GLP-1的低密度结合，但GLP-1受体在脑部的内源性配体至今未被发现。在离体实验中，GLP-1可促进神经元细胞的分化，其功能类似于神经生长因子，但相关的信号通道仍待阐明。最近有研究表明，GLP-1以剂量依赖性方式抑制大鼠的食欲和摄食量，而exendin(9-39)可逆转此现象(Meeran et al.，Endocrinology，140：244-250，1999)。同样，无论在正常人还是糖尿病患者中，应用GLP-1均可使其产生短暂的胀饱感觉和食欲下降。因丘脑核与饮食控制有关，该区域又有GLP-1受体表达，推测外周的GLP-1有可能通过信号传递间接地影响中枢神经而产生饱感，减少食欲。如上所述，cAMP的生成对GLP-1信号传导至关重要，而cAMP的升高又可保护神经元免于凋亡，尽管目前细胞凋亡的分子机制已有较深的认识，但对于GLP-1受体在其中可能牵涉的环节尚未***研究，有资料表明，PI3K依赖而MAPK非依赖性信号途径在此扮演了重要的角色(Hui et al.，Endocrinology，144：1444-1455，2003)。

3.对胃肠道功能的影响：

在对鼠、猪和人的一系列研究中发现，GLP-1可抑制胃肠道蠕动和胃液分泌，延迟胃排空(Meier et al.，J.Clin.Endocrinol.Metab.，88：2719-2725，2003)。

4.对心血管***的作用：

GLP-1对心脏的作用主要与其增加细胞内cAMP含量，促进钙内流，及通过作用丙酮酸脱氢酶作用减少丙酮酸在心肌的含量以及活化PKA及下游信号通路抗心肌细胞凋亡有关。

目前使用最多的GLP-1受体拮抗剂为exendin(9-39)，主要用于验证GLP-1受体的生物学作用等(Goke et al.，J.Biol.Chem.，268：19650-19655，1993；Furuse et al.，Japanese Poultry Science，35：376-380，1998)。目前已知的GLP-1受体激动剂主要包括大分子如肽类和小分子两大类。

1.肽类：1)GLP-1(Mojsov et al.，J.Biol.Chem.，261：11880-11889，1986；Nathan et al.，Diabetes Care，15：270-276，1992)及其衍生物如liraglutide、GTP-010等；2)exendin-4/exenatide(Goke et al.，J.Biol.Chem.，268：19650-19655，1993)及其衍生物等。已有美国安米林(Amylin)和礼来(Eli Lilly)公司共同开发的一天注射两次的exendin-4制剂(exenatide，商品名：Byetta)于2005年上市(美国专利5,424,286，6,858,576，6,872,700，6,902,744，6,956,026，7,297,761)治疗II型糖尿病。此外，Liraglutide已于2009年被批准上市用于治疗II型糖尿病。

2.小分子激动剂，如：1)Boc5(SH7870)和S4P(SH7871)(Chenet al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，104：943-948，2007)及其衍生物，为正构型激动剂，其生物学作用可被exendin(9-39)阻断；2)“Compound 2”(quinoxalines)及其衍生物(Knudsen et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，104：937-942，2007；Teng et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.，17：5472-5478，2007)，其为别构型调节剂，生物学作用不被exendin(9-39)阻断；3)“Compound A”和“Compound B”(pyrimidine)及其衍生物为别构型激动剂，生物学作用不被exendin(9-39)阻断(Sloop et al.，Diabetes59：3099-3107，2010)；4)京尼平苷(Liu et al.，Neurochem.Int.，51：361-369，2007)；5)ZYOG1，目前已进入I期临床研究治疗II型糖尿病和肥胖(Zydus Cadila公司网站http://www.zyduscadila.com/press/PressNote21-06-10.pdf)；6)T0632(Kopin et al.，WO2004/103310，2004)；7)“6Cu compound”(Wang etal.，Acta Pharmacologica Sinica 31：1026-1030，2010)等。

中枢神经***尤其脊髓的GLP-1受体作为治疗疼痛的靶点分子的研究未见任何报道。目前已有的GLP-1与疼痛相关的研究有3个，其一是来自于临床研究证明皮下注射GLP-1类似物GTP-010能降低肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome)产生的疼痛，其作用与抑制肠道运动有关(WO2008/134425；Regulatory Peptides 156：9-12，2009)；其二是来自于专利申请公开WO2007/028394，该专利申请公开了GLP-1受体激动剂治疗胆囊运动障碍和胆绞痛，其作用与抑制胆道运动有关。这两例中作者都认为，所涉及的疼痛与消化道***动力紊乱相关，GLP-1受体激动剂是通过抑制消化道动力而解除了疼痛。因此，它们都属于因消化道动力紊乱而导致的疼痛，与传统的疼痛尤其慢性疼痛的发生、发展和作用部位具有不同的机制。第三个关于GLP-1受体与疼痛影响的研究来自于Midwestern University的Matwyshyn博士在2009年举行的AAPSAnnual Meeting and Exposition会议以及随后在2010年世界药理大会(WorldPharm2010)上的会议报告，但他报道的结论是GLP-1受体激动剂exendin-4腹腔连续注射给药不能产生镇痛作用，对***镇痛作用及其耐受亦无影响(Matwyshyn et al.，AAPS-002278，2009)。

发明内容

发明人意外地发现，GLP-1受体激动剂能够激活神经***尤其是中枢神经***(包括脊髓)中的GLP-1受体，从而治疗能够通过激活所述GLP-1受体而得到治疗的病症，如疼痛，尤其是慢性疼痛。

因此，在一个方面，本公开内容提供了一种治疗能够通过激活所述GLP-1受体而得到治疗之病症的方法，其中包括给有此需要的对象施用有效量的GLP-1受体激动剂。

在一个实施方案中，所述能够通过激活所述GLP-1受体而得到治疗的病症是疼痛，尤其是慢性疼痛。在一个具体实施方案中，所述病症不是消化道动力紊乱导致的疼痛。

在一个具体实施方案中，所述能够通过激活所述GLP-1受体而得到治疗的病症选自慢性疼痛，神经性疼痛，慢性腰背痛，头痛，偏头痛，三叉神经痛，丛集性头痛，纤维肌痛综合征，关节痛，炎性疼痛，关节炎疼痛，骨关节炎疼痛，类风湿性关节炎疼痛，肿瘤疼痛，癌症疼痛，内脏痛，躯体痛，肌肉骨骼痛，骨痛，腰骶痛，颈痛或上背痛，糖尿病性疼痛，脊髓损伤引起的疼痛，手术疼痛，术后疼痛，急性疼痛，或与感染、镰状细胞贫血、自身免疫病、多发性硬化或炎症相关的疼痛，由损伤或手术造成的疼痛，或它们的组合。

在另一个具体实施方案中，所述能够通过激活所述GLP-1受体而得到治疗的病症选自与以下有关的疼痛：糖尿病性神经痛，外周神经痛，疱疹后神经痛，腰或颈的神经根痛，纤维肌痛，舌咽神经痛，反射交感性营养不良，灼痛，丘脑综合征，神经根撕脱，幻肢痛，开胸术后的疼痛，癌症，化学损伤，毒素，营养缺乏，病毒或细菌感染，颞下颌关节紊乱综合征，纤维肌痛综合征，骨质疏松，骨转移或其他未知原因引起的骨痛，痛风，纤维组织炎，肌筋膜痛，胸廓出口综合征，背痛或腰痛，骨盆痛，心脏性胸痛，非心脏性胸痛，脊髓损伤相关性疼痛，中枢性中风后疼痛，癌症痛，AIDS痛，抗肿瘤药物致神经疼痛，镰状细胞痛，老年痛，或它们的组合。

在另一个具体实施方案中，所述GLP-1受体激动剂可以是大分子GLP-1受体激动剂或小分子GLP-1受体激动剂。例如所述大分子GLP-1受体激动剂包括但不限于GLP-1，liraglutide，GTP-010，exendin-4(exenatide)，exendin-3和其他exendins，及其功能性变体、片段、衍生物和类似物。所述大分子GLP-1受体激动剂可以具有修饰或不具有修饰，所述修饰例如是缀合PEG或白蛋白等增加分子量的结构(moeity)以延长所述GLP-1受体激动剂的生物活性。所述功能性变体例如包括各种GLP-1变体或exendin变体。例如所述小分子GLP-1受体激动剂包括但不限于京尼平及其衍生物京尼平苷和京尼平苷酸，Boc5(SH 7870)，S4P(SH7871)，“Compound 2”(quinoxalines)及其衍生物(Knudsen et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，104：937-942，2007；Teng et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.，17：5472-5478，2007)，“Compound A”和“Compound B”(pyrimidine)及其衍生物(Sloop et al.，Diabetes 59：3099-3107，2010)，ZYOG1，T0632，“6Cu Compound”(Wang et al.，Acta PharmacologicaSinica 31：1026-1030，2010)，及其衍生物。

在一个实施方案中，通过口服或胃肠外途径施用所述GLP-1受体激动剂，例如包括皮下注射，脊髓施用，颅内施用、肌肉注射，经鼻腔施用，静脉内施用和/或腹腔内施用。

在另一个实施方案中，所述方法还包括向所述对象施用另外的疼痛治疗剂，例如所述疼痛治疗剂包括但不限于：镇痛剂如阿片类镇痛剂，抗炎药，偏头痛制剂，三环抗抑郁药，抗癫痫药，α2受体激动剂，或选择性血清素再摄取抑制剂/选择性去甲肾上腺素摄取抑制剂，或它们的组合。

在一个具体实施方案中，所述另外的疼痛治疗剂选自***类药物(如***、二氢***酮、芬太尼、丁丙诺啡和叔丁啡)，加巴喷丁，普瑞巴林，齐考诺肽，洛西汀，可乐定，利多卡因，DAO酶抑制剂(如5-氯苯并[d]异恶唑-3-醇、AS057278、苯甲酸钠、3-羟基喹啉-2-(1H)-酮和4H-噻吩并[3，2-b]吡咯-5-羧酸)，NMDA受体阻断剂(如MK-801、***、右美沙芬、苯环利定和(2R)-氨基-5-膦戊酸。

在第二方面，本公开内容还提供GLP-1受体激动剂在制备用于治疗能够通过激活神经***尤其是中枢神经***中GLP-1受体而得到治疗之病症的药物中的用途，所述病症优选地是疼痛，尤其是慢性疼痛。在所述用途的各种实施方案中，尤其包括与上述第一方面治疗方法所涉及各实施方案相对应的技术方案。

在第三方面，本公开内容还提供GLP-1受体激动剂，其用于治疗能够通过激活神经***尤其是中枢神经***中GLP-1受体而得到治疗之病症，所述病症优选地是疼痛，尤其是慢性疼痛。在所述用于治疗的GLP-1受体激动剂的各种实施方案中，尤其包括与上述第一方面治疗方法所涉及各实施方案相对应的技术方案。

此外，在第四方面，本公开内容还提供一种鉴定治疗能通过激活神经***中GLP-1受体而得到治疗之病症的药剂的方法，其包括：提供测试化合物，使所述测试化合物与GLP-1受体(如神经细胞上GLP-1受体)相接触，和测定所述GLP-1受体的活性；如果所述测试化合物能够提高GLP-1受体的活性，那么所述测试化合物可用作治疗能通过激活神经***中GLP-1受体而得到治疗之病症的药剂。在一个实施方案中，所述病症是疼痛，尤其是慢性疼痛。

在第四方面，本公开内容还提供一种使用根据上述鉴定方法所鉴定之药剂以及使用所鉴定之药剂来治疗能通过激活神经***中GLP-1受体而得到治疗之病症的方法。在一个实施方案中，所述病症是疼痛，尤其是慢性疼痛，例如本公开内容以上提到的各种疼痛。

考虑到不同国家的专利制度对保护主题有不同规定，本公开内容还提供与以上方法相对应的制药用途以及用于预定用途的药物。这些各种制药用途和药物也在本发明保护范围内，就像它们已经具体记载在本公开内容中一样。

本公开内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本公开内容中具体记载一样。

将结合附图以及以下进一步的详细说明来举例说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。

附图说明

图1示出，大鼠胰腺、脊髓、背根神经节、大脑皮层和GLP-1受体mRNA表达。使用实时PCR方法，每种组织重复3次。

图2示出，大鼠胰腺(A)和脊髓(B)GLP-1受体免疫特异性染色(棕黄色)分布。

图3示出，脊髓注射GLP-1受体肽类激动剂exenatide(A)和GLP-1(7-36)以及(B)小分子激动剂京尼平苷(C)、京尼平苷酸(D)和京尼平(E)对大鼠***致痛模型的影响。以曲线下面积计算药物对II相疼痛反应的量效关系(F)。

图4示出，脊髓注射GLP-1受体激动剂exenatide对大鼠骨癌痛模型(A)和神经源性疼痛模型(B)的抑制作用，根据给药后1小时疼痛阈值进行量效关系计算(C)。

图5示出，皮下注射给予GLP-1受体肽类激动剂exenatide对小鼠***疼痛的抑制作用。

图6示出，皮下注射和灌胃GLP-1受体小分子激动剂京尼平苷对小鼠***疼痛的影响。

图7示出，连续7日皮下注射exeantide和京尼平苷对小鼠***I相疼痛(A)和II相疼痛(B)的影响。与生理盐水+生理盐水对照组相比，^a代表P＜0.05；与生理盐水+***组比较，^b代表P＜0.05。

图8示出，脊髓注射GLP-1受体拮抗剂exendin(9-39)阻断GLP-1受体激动剂对大鼠***疼痛的抑制作用。脊髓注射GLP-1受体拮抗剂exendin(9-39)阻断exenatide、GLP-1(7-36)和京尼平苷(A，C)对大鼠***疼痛的抑制作用和***II相疼痛曲线下面积AUC(B，D)。与相应的生理盐水组比较，^a代表P＜0.05；与相应的exenatide、GLP-1(7-36)和京尼平苷组比较，^b代表P＜0.05。

图9示出，GLP-1受体拮抗剂exendin(9-39)对皮下注射京尼平苷镇痛作用的影响。与生理盐水对照组相比，^a代表P＜0.05；与京尼平苷组比较，^b代表P＜0.05。

具体实施方式

如本公开内容所用，术语“治疗”是指通过医学干预而使得待治疗对象的目标疾病或病症和/或其任何症状和/或其任何可能的并发症和/或后遗症得到根治、消除、缓解、改善、停止加剧、和/或预防，或者使得待治疗对象获得立即发生的和/或潜在的医学意义上的任何积极效果。

如本公开内容所用，术语“激动剂”是指能够结合并激活细胞受体从而诱发该细胞产生应答的化学物质。术语“GLP-1受体激动剂”是指能够结合并激活GLP-1受体的物质，它们能够诱导产生与GLP-1相类似的生物效应。需要指出的是，GLP-1本身也包括在GLP-1受体激动剂内。此外，在提及GLP-1受体激动剂时，其含义不仅包括具有这种活性的化合物、其溶剂化物、水合物和盐形式，还包括所述激动剂的前药等形式。

发明人意外地发现，GLP-1受体激动剂能够激活神经***尤其是中枢神经***(包括脊髓)中的GLP-1受体，从而治疗能够通过激活所述GLP-1受体而得到治疗的病症，如疼痛，尤其是慢性疼痛。

因此，在一个方面，本公开内容提供了一种治疗能够通过激活所述GLP-1受体而得到治疗之病症的方法，其中包括给有此需要的对象施用有效量的GLP-1受体激动剂。

在一个实施方案中，所述能够通过激活所述GLP-1受体而得到治疗的病症是疼痛，尤其是慢性疼痛。在一个具体实施方案中，所述病症不是消化道动力紊乱导致的疼痛。

在一个具体实施方案中，所述能够通过激活所述GLP-1受体而得到治疗的病症选自慢性疼痛，神经性疼痛，慢性背痛，头痛，偏头痛，三叉神经痛，丛集性头痛，纤维肌痛综合征，关节痛，炎性疼痛，关节炎疼痛，骨关节炎疼痛，类风湿性关节炎疼痛，肿瘤疼痛，癌症疼痛，内脏痛，躯体痛，肌肉骨骼痛，骨痛，腰骶痛，颈痛或上背痛，糖尿病性疼痛，脊髓损伤引起的疼痛，手术疼痛，术后疼痛，急性疼痛，或与感染、镰状细胞贫血、自身免疫病、多发性硬化或炎症相关的疼痛，由损伤或手术造成的疼痛，或它们的组合。

在另一个具体实施方案中，所述能够通过激活所述GLP-1受体而得到治疗的病症选自与以下有关的疼痛：糖尿病性神经痛，外周神经痛，疱疹后神经痛，腰或颈的神经根痛，纤维肌痛，舌咽神经痛，反射交感性营养不良，灼痛，丘脑综合征，神经根撕脱，幻肢痛，开胸术后的疼痛，癌症，化学损伤，毒素，营养缺乏，病毒或细菌感染，颞下颌关节紊乱综合征，纤维肌痛综合征，骨质疏松，骨转移或其他未知原因引起的骨痛，痛风，纤维组织炎，肌筋膜痛，胸廓出口综合征，上背部痛，下腰痛，骨盆痛，心脏性胸痛，非心脏性胸痛，脊髓损伤相关性疼痛，中枢性中风后疼痛，癌症痛，AIDS痛，抗肿瘤药物致神经疼痛，镰状细胞痛，老年痛，或它们的组合。

在另一个具体实施方案中，所述GLP-1受体激动剂可以是大分子GLP-1受体激动剂或小分子GLP-1受体激动剂。例如所述大分子GLP-1受体激动剂包括但不限于GLP-1，liraglutide，GTP-010，exendin-4(exenatide)，exendin-3和其他exendins，及其功能性变体、片段、衍生物和类似物。所述大分子GLP-1受体激动剂可以具有修饰或不具有修饰，所述修饰例如是缀合PEG或白蛋白等增加分子量的结构(moeity)以延长所述GLP-1受体激动剂的生物活性。所述功能性变体例如包括各种GLP-1变体或exendin变体。例如所述小分子GLP-1受体激动剂包括但不限于京尼平、京尼平苷和京尼平苷酸，Boc5，S4P，“Compound 2”(quinoxalines)及其衍生物(Knudsen et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，104：937-942，2007；Teng et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.，17：5472-5478，2007)，“Compound A”和“Compound B”(pyrimidine)及其衍生物(Sloopet al.，Daibetes 59：3099-3107，2010)，ZYOG1，T0632，“6Cu Compound”(Wang et al.，Acta Pharmacologica Sinica 31：1026-1030，2010)，及其衍生物。

在一个实施方案中，通过口服或胃肠外途径施用所述GLP-1受体激动剂，例如包括皮下注射，脊髓施用，颅内施用，肌肉注射，经鼻腔施用，静脉内施用和/或腹腔内施用。

在另一个实施方案中，所述方法还包括向所述对象施用另外的疼痛治疗剂，例如所述疼痛治疗剂包括但不限于：镇痛剂如阿片类镇痛剂，抗炎药，偏头痛制剂，三环抗抑郁药，抗癫痫药，α2受体激动剂，或选择性血清素再摄取抑制剂/选择性去甲肾上腺素摄取抑制剂，或它们的组合。

在一个具体实施方案中，所述另外的疼痛治疗剂选自***类药物(如***、二氢***酮、芬太尼、丁丙诺啡和叔丁啡)，加巴喷丁，普瑞巴林，齐考诺肽，洛西汀，可乐定，利多卡因，DAO酶抑制剂(如5-chlorobenzo [d]isoxazol-3-ol、AS057278、苯甲酸钠、3-hydroxyquinolin-2-(1H)-one和4H-thieno[3，2-b]pyrrole-5-carboxylicacid，NMDA受体阻断剂(如MK-801、***、右美沙芬、苯环利定和(2R)-amino-5-phosphonovaleric acid)。

在第二方面，本公开内容还提供GLP-1受体激动剂在制备用于治疗能够通过激活神经***尤其是中枢神经***中GLP-1受体而得到治疗之病症的药物中的用途，所述病症优选地是疼痛，尤其是慢性疼痛。在所述用途的各种实施方案中，尤其包括与上述第一方面治疗方法所涉及各实施方案相对应的技术方案。

在第三方面，本公开内容还提供GLP-1受体激动剂，其用于治疗能够通过激活神经***尤其是中枢神经***中GLP-1受体而得到治疗之病症，所述病症优选地是疼痛，尤其是慢性疼痛。在所述用于治疗的GLP-1受体激动剂的各种实施方案中，尤其包括与上述第一方面治疗方法所涉及各实施方案相对应的技术方案。

此外，在第四方面，本公开内容还提供一种鉴定候选药物的方法，其包括：提供测试化合物，使所述测试化合物与GLP-1受体(如神经细胞上GLP-1受体)相接触，和测定所述GLP-1受体的活性；如果所述测试化合物能够提高GLP-1受体的活性，那么所述测试化合物可用作治疗能通过激活神经***中GLP-1受体而得到治疗之病症的候选药物。在一个实施方案中，所述病症是疼痛，尤其是慢性疼痛。

疼痛可分为急性疼痛和慢性疼痛。本公开内容所使用的皮下注射***引起持续性疼痛(慢性疼痛，II相反应)，骨癌细胞注射入大鼠胫骨能引起大鼠患侧足机械性痛觉过敏(hyperalgesia)；脊神经结扎引起的神经源性患侧足机械性痛觉过敏，其作用特征均涉及到中枢敏感化(Coderreet al.Pain 54：43-50，1993；Jett et al.Pain 69：161-169，1997；Yanagisawaet al.Mol Pain 2010；6：38-50，2010)。不限于任何理论，本公开内容中所述的疼痛包括以中枢敏感化为特征的慢性疼痛。

GLP-1受体激动剂可以分为大分子GLP-1受体激动剂和小分子GLP-1受体激动剂，其中大分子GLP-1受体激动剂主要包括肽类GLP-1受体激动剂。

1.肽类：1)GLP-1(Mojsov et al.，J.Biol.Chem.，261：11880-11889，1986；Nathan et al.，Diabetes Care，15：270-276，1992)及其衍生物如liraglutide、GTP-010等；2)exendin类，如exendin-4/exenatide(Goke etal.，J.Biol.Chem.，268：19650-19655，1993)及其衍生物等。已有美国安米林(Amylin)和礼来(Eli Lilly)公司共同开发的一天注射两次的exendin-4制剂(exenatide，商品名：Byetta)于2005年上市(美国专利5,424,286，6,858,576，6,872,700，6,902,744，6,956,026，7,297,761)治疗II型糖尿病。此外Liraglutide也已于2009年被批准上市用于治疗II型糖尿病。这些肽类GLP-1受体激动剂的体内半衰期通常较短，往往需要在短时间内重复给药。已经尝试了多种策略来延长这些肽类激动剂在体内的活性。例如，通过改变这些肽的氨基酸序列来提高这些肽抵抗体内蛋白酶(包括肽酶，尤其是二肽基肽酶IV(DPP IV))降解的能力，或者抵抗其它降解作用(如氧化等)的能力。还已经尝试了在这些肽上缀合增加分子量的结构(如白蛋白和/或各种分子量的PEG等)，这也可以增加肽类激动剂的体内半衰期，从而延长其生物活性。现有技术中已经有大量专利公开以及其它非专利文献披露了这些延长GLP-1受体激动剂体内活性的方法和经此修饰而具有延长体内活性的GLP-1受体激动剂，它们都在本公开内容中所述GLP-1受体激动剂的范围内。

2.小分子激动剂，如：1)Boc 5和S4P(Chen et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，104：943-948，2007)及其衍生物，为正构型激动剂，其生物学作用可被exendin(9-39)阻断；2)“Compound 2”(quinoxalines)及其衍生物(Knudsen et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，104：937-942，2007；Teng et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.，17：5472-5478，2007)，其为别构型调节剂，生物学作用不被exendin(9-39)阻断；3)“Compound A”和“Compound B”(pyrimidine)及其衍生物，为别构型激动剂，生物学作用不被exendin(9-39)阻断(Sloop et al.，Daibetes 59：3099-3107，2010)；4)京尼平苷(Liu et al.，Neurochem.Int.，51：361-369，2007)；5)ZYOG1，目前已进入I期临床研究治疗II型糖尿病和肥胖(Zydus Cadila公司网站)；6)T0632(Kopin et al.，WO2004/103310，2004)；7)“6Cu compound”(Wanget al.，Acta Pharmacologica Sinica 31：1026-1030，2010)等。

迄今为止，中枢神经***尤其脊髓中GLP-1受体作为疼痛治疗靶标分子的研究未见任何报道。发明人意外地发现，GLP-1受体激动剂能够作用于神经***尤其是中枢神经***(包括脊髓)中的GLP-1受体，从而实现治疗疼痛的效果。

我们对这些GLP-1受体激动剂进行体内镇痛活性研究，发现脊髓和皮下给予GLP-1受体激动剂包括GLP-1，exenatide，京尼平及其衍生物京尼平苷和京尼平苷酸能够剂量依赖性地有效抑制***诱导的慢性疼痛(II相反应)、肿瘤疼痛和神经源性疼痛。此外灌胃京尼平苷亦能有效镇痛，活性生物利用度为皮下注射的83.5％。给予exenatide最大抑制率高达70-80％，脊髓和皮下半数有效剂量ED₅₀分别可低达0.5pmol/大鼠和5.4nmol/kg，可能为目前已知的最强镇痛药物。更重要的是，与***相反，7日连续给予exenatide和京尼平苷不产生耐受性，为GLP-1受体激动剂治疗慢性疼痛提供了药理学基础。此外脊髓注射GLP-1(7-36)、exenatide以及京尼平苷、京尼平苷酸和京尼平抑制大鼠***诱导的慢性疼痛ED₅₀分别为0.5pmol/大鼠、1.2pmol/大鼠、63.0nmol/大鼠、43nmol/大鼠和85nmol/大鼠，它们激动GLP-1受体活性呈正性相关。同时GLP-1(7-36)、exenatide和京尼平苷的镇痛作用均可被脊髓注射的GLP-1受体拮抗剂exendin(9-39)完全阻断，证明激活中枢神经***尤其脊髓中GLP-1受体可产生有效镇痛作用，GLP-1受体为治疗疼痛的靶点分子。

本发明将通过以下实施例进行进一步说明，其不应以任何方式解释为对本发明保护范围的限制。本申请中所有引用的参考文献的全部内容(包含文章参考、授权的专利、公开的专利申请和共同未决的专利申请)均明确地通过引用并入本文。以下实施例中，若未具体指出，所用试剂和材料是能够商业获得的至少分析纯或与此相当级别的产品。实施例实施例1大鼠脊髓GLP-1受体(GLP-1受体)mRNA的表达

雄性Wistar大鼠(上海斯莱克实验动物责任有限公司)用戊巴比妥钠(60mg/kg)(Sigma，上海，中国)麻醉，暴露其胸腔，用生理盐水进行心脏灌流，至全身血液流尽后取大鼠胰腺、骨骼肌、神经节、脊髓腰膨大部位和大脑皮层，放入准备好的1.5ml离心管中，并标记。

GLP-1受体基因表达按照100mg组织加入1ml Trizol试剂(Invitrogen，上海，中国)，加入相应体积的Trizol试剂。根据OD260/OD280和核酸电泳确定所提取RNA的质量。使用逆转录酶(Toyobo，东洋纺(上海)生物科技有限公司)，根据制造商说明，在相应的逆转录条件下，将1μg总RNA逆转录成cDNA。以逆转录产生的cDNA为模板，以GAPDH为内参，用荧光定量PCR(Mastercycler eprealplex real-time PCR system，Eppendorf，Hamburg，Germany)检测大鼠各部位目的基因GLP-1受体表达，用2-ΔΔCt方法分析目的基因GLP-1受体表达变化。3只大鼠实验结果如图1所示，大鼠胰腺能高表达GLP-1受体，脊髓GLP-1受体表达量约为胰腺的16.8％，神经节和大脑皮层GLP-1受体表达量较弱分别为胰腺的1.1％和1.3％，而骨骼肌几乎检测不到GLP-1受体的表达(0.04％)。实施例2大鼠脊髓和胰腺GLP-1受体免疫组织化学特异性染色分布

雄性Wistar大鼠(上海斯莱克实验动物责任有限公司)用戊巴比妥钠(60mg/kg)(Sigma，上海，中国)麻醉，暴露其胸腔，用生理盐水进行心脏灌流，至全身血液流尽后取大鼠胰腺、骨骼肌、神经节和脊髓腰膨大部位，放入4％多聚甲醛中固定24小时后进行脱水和透明、石蜡包埋、5μm切片、切片脱蜡，将切片置于30％H₂O₂/甲醛溶液(1∶9)室温浸泡15分钟，以灭活内源性过氧化物酶的活性，用PBST冲洗3次，每次2分钟；将切片浸入0.01M的柠檬酸钠缓冲液(pH6.0)中加热至沸腾，间隔10分钟，重复2次；冷却后用PBST洗涤2次，甩去多余液体，滴加5％BSA封闭液，室温20分钟，甩去多余液体后，滴加GLP-1受体一抗(1∶500，ab39072，Abcam，Cambridge，USA)4℃孵育过夜，PBST洗3次，每次5分钟，山羊抗兔IgG-HRP(1∶2000，SA00001-2，ProteintechGroup，Inc.，Chicago，USA)37℃孵育20分钟，PBST洗3次，每次5分钟；滴加sABC(SA1022，武汉博士德生物工程有限公司)37℃孵育20分钟，PBST洗涤4次，每次5分钟，甩去多余液体，DAB显色，15分钟后蒸馏水洗涤，进行苏木精轻度复染，脱水、透明后用中性树胶封片，24小时后用光学显微镜进行拍照，分别取5、10、20和40倍镜视野下组织进行结果分析。GLP-1受体特异染色在胰腺中主要分布在胰岛β细胞(图2A)，在骨骼肌中未见(未显示)。GLP-1受体特异染色(棕黄色)在大鼠脊髓各层均有分布，但主要分布在灰质以及白质的中间层，位于细胞膜上(图2B)。神经节也可见少量GLP-1受体特异染色(未显示)。实施例3脊髓注射GLP-1受体肽类激动剂exenatide和GLP-1(7-36)以及小分子激动剂京尼平苷、京尼平苷酸和京尼平对大鼠***致痛模型的影响

雄性Wistar大鼠(体重200～250g)每组4只。在***致痛前30分钟分别鞘内注射10μl/大鼠生理盐水、exenatide(1，3，10，30和100ng/大鼠，成都凯捷生物医药科技发展公司)、GLP-1(7-36)(1，3，10，30和100ng/大鼠，上海肽仕生物科技有限公司)、京尼平苷(3，10，30，100和300μg/大鼠，南京泽朗医药科技有限公司)、京尼平苷酸(3，10，30，100和300μg/大鼠，临川之信生物科技有限公司)和京尼平(3，10，30，100和300μg/大鼠，临川之信生物科技有限公司)。大鼠右后足背注射50μl 5％***致痛，在***注射后0-90分钟间，每隔十分钟观察1分钟内大鼠抬脚或抖脚次数作为疼痛指标。实验结果如图3所示，脊髓注射GLP-1受体肽类激动剂exenatide(图3A)和GLP-1(7-36)(图3B)、小分子激动剂京尼平苷(图3C)、京尼平苷酸(图3D)和京尼平(图3E)均呈剂量依赖式抑制***慢性疼痛(II相反应)，以曲线下面积计算，最大抑制率为分别为69.8％，60.1％、57.2％、63.7％和66.4％；ED₅₀值分别为2.0ng/大鼠(0.5pmol/大鼠)，3.8ng/大鼠(1.2pmol/大鼠)、24.4μg/大鼠(63.0nmol/大鼠)、16.1μg/大鼠(43nmol/大鼠)和19.2μg/大鼠(85nmol/大鼠)(图3F)。

行为观察表明给予GLP-1受体激动剂如GLP-1(7-36)、exenatide、京尼平苷、京尼平苷酸和京尼平无明显行为学变化如镇静、抖动、瘫痪、激怒、活动增加，说明GLP-1受体激动剂对疼痛的镇痛作用并非由于其非特异性地产生镇静作用或运动协调功能受损而产生的。实施例4脊髓注射GLP-1受体肽类激动剂exenatide对大鼠骨癌痛模型和神经源性疼痛模型的抑制作用

雌性Sprague Dawley大鼠(150～180g，上海斯莱克实验动物责任有限公司)用戊巴比妥钠(50mg/kg，i.p.)麻醉，在距胫骨头下0.5cm处钻孔，注射5μl大鼠Walker 256细胞悬液(1×10⁷个细胞/ml，中国科学院上海生科院细胞资源中心)到骨髓腔内。手术后第14天选取造模成功的骨癌痛大鼠，检测机械性痛觉阈值，大鼠手术足机械性痛觉阈值小于8g视为骨癌疼痛造模成功。选取造模成功的骨癌痛大鼠，分6组：生理盐水(10μl/大鼠)，3、10、30、100和300ng/大鼠exenatide剂量组(n＝4)，检测给药前及给药后0.5、1、2、4小时时间点的机械性痛阈的变化。实验结果如图4A所示，大鼠患侧足机械性痛阈呈明显的量效关系和时效关系，脊髓注射exenatide不影响大鼠正常肢体机械性痛觉阈值，但抑制患侧足机械性痛觉阈值，持续时间2个小时以上，给药后4小时机械性痛阈开始降低。根据给药后1小时疼痛阈值进行量效关系计算，exenatide呈剂量依赖式抑制骨癌痛痛觉过敏，最大可能镇痛效果(％MaximumPossible Effect，％MPE)为55.6％，ED₅₀为10.5ng/大鼠(2.5pmol/大鼠)(图4C)。

雄性Wistar大鼠(体重150-170g)，动物适应环境3天。用戊巴比妥钠(50mg/kg，i.p.)麻醉大鼠。在髂骨位置脊髓***PE-10导管到腰脊髓膨大处，并对大鼠左侧进行L5/L6脊神经结扎。待大鼠恢复3～7天后，使用IITC CE220(Electronic von Frey Anesthesiometer，IITC LifeScience Inc.，California，USA)检测大鼠左侧脚掌机械性痛觉阈值；挑选左侧机械性痛觉阈值小于8g的大鼠，为造模成功的大鼠。选取造模成功的神经源性疼痛大鼠，分6组：生理盐水(10μl/大鼠)，3、10、30、100和300ng/大鼠exenatide剂量组(n＝4)，检测给药前及给药后0.5、1、2、4小时时间点的机械性痛阈的变化。实验结果如图4B所示，大鼠患侧足机械性痛阈呈明显的量效关系和时效关系，脊髓注射exenatide不影响大鼠正常肢体机械性痛觉阈值，但抑制患侧足机械性痛觉阈值，持续时间2个小时以上，给药后4小时机械性痛阈开始降低。根据给药后1小时疼痛阈值进行量效关系计算，exenatide呈剂量依赖式抑制神经源性疼痛痛觉过敏，最大可能镇痛效果(％Maximum Possible Effect，％MPE)为54.3％，ED₅₀为11.3ng/大鼠(2.7pmol/大鼠)(图4C)。实施例5皮下注射给予GLP-1受体肽类激动剂exenatide对小鼠***疼痛的抑制作用

雄性Swiss小鼠(体重20～25g)，自由饮水、进食，分成5组，每组4只。在***致痛前30分钟5组小鼠分别皮下注射给予10ml/kg生理盐水和exenatide(10，30，100和300μg/kg)。小鼠右后足背注射10μl 5％***致痛，观察***注射后0-5分钟(I相反应)和20-40分钟(II相反应)小鼠持续舔足时间作为疼痛指标。实验结果表明，皮下给予exenatide呈剂量依赖式抑制***慢性疼痛(II相反应)(图5A)，最大抑制率为82.0％，ED₅₀值为22.7μg/kg(5.4nmol/kg)(图5B)。实施例6皮下和灌胃给予GLP-1受体小分子激动剂京尼平苷对小鼠***疼痛的影响

雄性Swiss小鼠(体重20～25g)，自由饮水、进食，分成7组，每组3只。在***致痛前30分钟7组小鼠分别皮下给予10ml/kg生理盐水和京尼平苷(3，10，30，100和300mg/kg)，以及灌胃(口服)给予京尼平苷(100mg/kg)。实验结果表明，皮下给予GLP-1受体小分子激动剂京尼平苷呈剂量依赖式抑制***慢性疼痛(II相反应)(图6A)，最大抑制率为71.5％，ED₅₀值为13.1mg/kg(图6B)。灌胃给予京尼平苷亦能有效抑制小鼠***慢性疼痛(II相疼痛)(图6A)。灌胃与皮下注射给予同等剂量100mg/kg京尼平苷，抑制II相疼痛分别为53.3％和63.8％。用生物活性比较，口服生物利用度为皮下注射的83.5％(图6C)。实施例7连续7日皮下注射exeantide和京尼平苷对小鼠***疼痛的影响

雄性Swiss小鼠(体重20～25g)，自由饮水、进食，分成7组，每组4只。4组小鼠分别皮下注射生理盐水(10ml/kg/每次，每日2次)，连续7日。12小时后分别皮下单剂量注射生理盐水(10ml/kg)，exenatide(100μg/kg)，京尼平苷(100mg/kg)和***(5mg/kg)；3组小鼠分别皮下注射exenatide(100μg/kg/每次，每日2次)，京尼平苷(100mg/kg/每次，每日2次)和***(10mg/kg/每次，每日2次)，连续7日。12小时后分别皮下单剂量注射exenatide(100μg/kg)，京尼平苷(100mg/kg)和***(5mg/kg)。单剂量注射30分钟后，小鼠右后足背注射10μl5％***致痛，观察***注射后0-5分钟(I相反应)和20-40分钟(II相反应)小鼠持续舔足时间作为疼痛指标。如图7A和7B所示，实验结果表明在连续7日皮下注射生理盐水的对照小鼠中，单剂量注射exenatide和京尼平苷均可抑制***II相疼痛，抑制率分别为65.0％和67.5％；单剂量注射***对***I相疼痛和II相疼痛均有抑制作用，抑制率分别为84.8％和100％。而连续7日皮下注射exeantide和京尼平苷不产生耐受性，此时单剂量注射exeantide和京尼平苷对***II相疼痛抑制率分别为67.0％和50.9％，与相应的单剂量注射对照相同；相反连续7日皮下注射***产生明显耐受性，单剂量注射***对***I相疼痛和II相疼痛的抑制率分别为12.2％和12.4％。实施例8脊髓注射GLP-1受体拮抗剂exendin(9-39)对激动剂exenatide，GLP-1(7-36)和京尼平苷抑制大鼠***疼痛的影响

雄性Wistar大鼠(体重200～250g)，自由饮水、进食，分成6组。在***致痛前30分钟分别鞘内注射10μl/大鼠生理盐水(n＝4)，30ng/大鼠exenatide(n＝4)，15μg/大鼠exendin(9-39)(n＝4)，100ng/大鼠exendin(9-39)+30ng/大鼠exenatide(n＝3)，2μg/大鼠exendin(9-39)+30ng/大鼠exenatide(n＝3)和15μg/大鼠exendin(9-39)+30ng/大鼠exenatide(n＝4)。参照大鼠***致痛模型观察实验指标，进行镇痛关系分析。实验结果如图8A和8B所示，脊髓注射GLP-1受体肽类激动剂exenatide(30ng/大鼠)能有效抑制***慢性疼痛(II相反应)，抑制率为61.2％。脊髓注射GLP-1受体肽类拮抗剂exendin(9-39)(15μg/大鼠)不影响大鼠***疼痛反应(I相和II相)。exendin(9-39)(100ng/大鼠)不能阻断exenatide(30ng/大鼠)对大鼠***II相慢性疼痛产生的镇痛作用，但当exendin(9-39)达到2μg/大鼠或以上时即能完全阻断exenatide(30ng/大鼠)产生的镇痛作用。

5组雄性Wistar大鼠(体重200～250g)，每组4只。在***致痛前30分钟分别鞘内注射10μl/大鼠生理盐水、30ng/大鼠GLP-1(7-36)、2μg/大鼠exendin(9-39)+30ng/大鼠GLP-1(7-36)、100μg/大鼠京尼平苷和2μg/大鼠exendin(9-39)+100μg/大鼠京尼平苷。参照大鼠***致痛模型观察实验指标，进行镇痛关系分析。实验结果如图8C和8D所示，脊髓注射GLP-1(7-36)和京尼平苷均能有效抑制***慢性疼痛(II相反应)，抑制率分别为57.0％和57.3％。脊髓注射GLP-1受体肽类拮抗剂exendin(9-39)(2μg/大鼠)完全阻断GLP-1(7-36)和京尼平苷的镇痛作用。这些结果证明exenatide、GLP-1(7-36)和京尼平苷通过激动脊髓GLP-1受体产生镇痛作用，并且推测京尼平苷为GLP-1受体正构型激动剂。实施例9GLP-1受体拮抗剂exendin(9-39)对京尼平苷镇痛作用的影响

雄性Swiss小鼠(体重20～25g)，自由饮水、进食，分成4组，每组4个。在***致痛前30分钟4组小鼠分别皮下给予生理盐水(10ml/kg)，京尼平苷(300mg/kg)，exendin(9-39)(60μg/kg)和exendin(9-39)(60μg/kg)+京尼平苷(300mg/kg)。参照小鼠***致痛模型观察实验指标，进行镇痛关系分析。实验结果如图9所示，皮下注射GLP-1受体小分子激动剂京尼平苷能有效抑制***慢性疼痛(II相反应)，抑制率为64.4％。皮下注射GLP-1受体肽类拮抗剂exendin(9-39)(60μg/kg)不影响大鼠***疼痛反应(I相和II相)，但能完全阻断京尼平苷对小鼠***II相慢性疼痛产生的镇痛作用，提示exendin(9-39)可透过血脑屏障阻断脊髓GLP-1受体，并进一步证明京尼平苷可正构型地激动GLP-1受体而产生镇痛作用。

基于以上内容，本领域技术人员可以理解，本申请要求保护的技术方案以及其等同技术方案将是显而易见的。此外，本领域技术人员还可以根据需要对所公开的技术方案进行适当的修改和改变，这些修改和改进的技术方案也在本申请权利要求书的保护范围内。

Claims (12)

1.GLP-1受体激动剂在制备用于治疗能够通过激活中枢神经***中GLP-1受体而得到治疗之病症的药物中的用途，所述病症是慢性疼痛，不是消化道动力紊乱导致的疼痛。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述病症选自神经性疼痛，慢性腰背痛，头痛，三叉神经痛，纤维肌痛综合征，关节痛，炎性疼痛，肿瘤疼痛，内脏痛，躯体痛，骨痛，颈痛或上背痛，糖尿病性疼痛，脊髓损伤引起的疼痛，手术疼痛，术后疼痛，或与感染、镰状细胞贫血、自身免疫病、多发性硬化相关的疼痛，由损伤或手术造成的疼痛，或它们的组合。

3.根据权利要求2所述的用途，其中所述头痛选自偏头痛，丛集性头痛；所述炎性疼痛选自关节炎疼痛，骨关节炎疼痛，类风湿性关节炎疼痛；所述肿瘤疼痛选自癌症疼痛；所述骨痛选自肌肉骨骼痛，腰骶痛。

4.根据权利要求1所述的用途，其中所述病症选自与以下有关的疼痛：糖尿病性神经痛，外周神经痛，疱疹后神经痛，腰或颈的神经根痛，纤维肌痛，舌咽神经痛，反射交感性营养不良，灼痛，丘脑综合征，神经根撕脱，幻肢痛，开胸术后的疼痛，化学损伤，毒素，营养缺乏，病毒或细菌感染，颞下颌关节紊乱综合征，纤维肌痛综合征，骨质疏松，骨转移或其他未知原因引起的骨痛，痛风，纤维组织炎，肌筋膜痛，胸廓出口综合征，上背部痛，下腰痛，骨盆痛，心脏性胸痛，非心脏性胸痛，脊髓损伤相关性疼痛，中枢性中风后疼痛，癌症痛，AIDS痛，抗肿瘤药物致神经疼痛，镰状细胞痛，老年痛，或它们的组合。

5.根据权利要求1所述的用途，其中所述GLP-1受体激动剂选自大分子GLP-1受体激动剂和小分子GLP-1受体激动剂。

6.根据权利要求5所述的用途，其中所述大分子GLP-1受体激动剂选自GLP-1，liraglutide，GTP-010，exendin-4和exendin-3，所述大分子GLP-1受体激动剂具有修饰或不具有修饰，所述修饰是缀合PEG或白蛋白以延长所述GLP-1受体激动剂的生物活性；所述小分子GLP-1受体激动剂选自京尼平苷及其衍生物京尼平苷酸和京尼平，“Chen et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，104：943-948，2007”中公开的Boc5和S4P，“Knudsen etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.，104：937-942，2007”和“Teng et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.，17：5472-5478，2007”中公开的“Compound2”和“quinoxalines”，“Sloop et al.，Diabetes59：3099-3107，2010”中公开的“Compound A”和“Compound B”，“Wang et al.，Acta PharmacologicaSinica31：1026-1030，2010”中公开的ZYOG1，T0632，“6CuCompound”。

7.根据权利要求1所述的用途，其中所述GLP-1受体激动剂配制成通过口服或胃肠外途径施用，所述胃肠外途径选自皮下注射，脊髓施用，颅内施用、肌肉注射，经鼻腔施用，静脉内施用和/或腹腔内施用。

8.根据权利要求1所述的用途，其中所述药物还包括另外的疼痛治疗剂，所述疼痛治疗剂选自：镇痛剂，抗炎药，偏头痛制剂，三环抗抑郁药，抗癫痫药，α2受体激动剂，或选择性血清素再摄取抑制剂/选择性去甲肾上腺素摄取抑制剂，或它们的组合。

9.根据权利要求8所述的用途，其中向所述镇痛剂选自阿片类镇痛剂。

10.权利要求8所述的用途，其中所述另外的疼痛治疗剂选自***类药物，加巴喷丁，普瑞巴林，齐考诺肽，洛西汀，可乐定，利多卡因，DAO酶抑制剂，NMDA受体阻断剂。

11.权利要求10所述的用途，其中所述***类药物选自***、二氢***酮、芬太尼、丁丙诺啡和叔丁啡；所述DAO酶抑制剂选自5-chlorobenzo[d]isoxazol-3-ol、AS057278、苯甲酸钠、3-hydroxyquinolin-2-(1H)-one和4H-thieno[3，2-b]pyrrole-5-carboxylicacid；所述NMDA受体阻断剂选自MK-801、***、右美沙芬、和苯环利定和(2R)-amino-5-phosphonovaleric acid。

12.一种鉴定治疗能通过激活神经***中GLP-1受体而得到治疗之病症的药剂的方法，其包括：

提供测试化合物，

使所述测试化合物与GLP-1受体相接触，和

测定所述GLP-1受体的活性，

所述测试化合物提高GLP-1受体的活性指示测试化合物能够用作治疗能通过激活神经***中GLP-1受体而得到治疗之病症的药剂；所述病症是慢性疼痛，不是消化道动力紊乱导致的疼痛。