CN102552330A - 美洲大蠊提取物的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的美洲大蠊提取物的新用途:美洲大蠊提取物在制备骨折治疗药物中的应用。美洲大蠊提取物能够促进骨痂纤维细胞数量和物质含量的增加、促进骨小梁面积增大、促进成骨细胞的增加、促进骨细胞的增加、有助破骨细胞的减少,进而促进骨痂生成;美洲大蠊提取物还能够促进骨折部位皮肤愈合。美洲大蠊提取物单独使用或者与其他药物配合制备成的药物用于治疗骨折,能促进骨痂生成、骨折部位皮肤愈合,缩短治疗时间,价格低廉,疗效显著,为临床治疗骨折提供了一种新的选择。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,具体涉及美洲大蠊提取物的新用途。
背景技术
骨折,多为直接或间接暴力所致的一种急性创伤性疾病,治疗应以消肿止痛,促进骨折愈合为目的。常用活血、理气和补肾药物,灌胃或外用治疗。治疗骨折重要,常具有活血、散瘀、消炎、止痛等辅助功效。
骨折愈合的治疗分为三个周期,采用三种不同的治疗原则,即著名的三期治疗法:血肿机化期(骨折后第一期,骨折后的1~2周内),主要运用丹参、川芎、桃仁、红花等活血化瘀药,这些药物可以加快微循环血流速度,增加毛细血管网的通透性,这样就可以改善骨折断端局部血液循环,消除血凝块及代谢产物;随后是骨痂形成期(骨折后第二期,骨折后的3~6周内),骨折断端由于局部缺氧,机会通过正常代偿反应诱导软骨细胞线粒体重Ca2+释放于基质中,刺激成骨细胞分化繁殖,此时过多使用活血化瘀药可破坏这种相对未定的代偿机制,应适时转向以续损接骨药为主,如虎骨(现已禁用)、自然铜等还有丰富钙盐、微量元素,有利于骨质修复;最后是骨痂改造期(骨折后第三期,骨折后的7~12周左右,甚至更长,视骨折的类型与部位而不同),选择补益肝肾、强筋健骨的中药,如鹿茸、骨碎补、续断、枸杞子、黄精等可明显改善蛋白及代谢,促进蛋白质、多糖合成及钙化,以顺利完成新骨的替代过程。
研究既具有活血、散瘀、消炎、止痛的药,又具有续损接骨作用的药物是现在药物学研究的方向。
美洲大蠊属蜚蠊科,原产于南美洲,具有通利血脉,养阴生肌的功效。临床上外用常用于金创、外伤、溃疡、瘘管、烧伤、烫伤、褥疮之创面的治疗,灌胃用于淤血阻滞,胃痛出血,胃、十二指肠溃疡,以及阴虚肺痨,肺结核的辅助治疗。
公告号为CN 100525781C,名称为“美洲大蠊提取物、含该提取物的药物组合物及其制备方法”、和公告号为CN 1943600B,名称为“含有美洲大蠊及其乙醇提取物的药物组合物及其新用途”是申请人于2006年申请的两项与美洲大蠊提取物相关的专利文献,其公开了本发明依据的美洲大蠊提取物的制备方法和部分医药用途。近年来,随着对美洲大蠊提取物的进一步研究,其在医药上的用途得到了进一步地发展。
尚未见美洲大蠊或其提取物关于治疗骨折的相关报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供美洲大蠊提取物的新用途。
本发明提供的美洲大蠊提取物的新用途为:美洲大蠊提取物在制备骨折治疗药物中的应用。
所述骨折治疗药物的作用为促进骨痂生成。
所述骨折治疗药物的作用为骨折部位皮肤愈合。
所述骨折治疗药物包含云南白药。
本发明所述的美洲大蠊提取物可通过下述方法得到:
A、取美洲大蠊粉碎,加石油醚,在温度5~20℃下浸泡,过滤,滤渣挥干;
B、取步骤A所得滤渣,采用水提醇或醇提水沉法提取,静置;静置后的药液,弃上层油脂,过滤,得下层药液;
其中,水提醇沉法煎煮时的加水量为滤渣质量3~5倍,60~80℃浸泡,浸泡时间0.5~2小时,煎煮时间4~8小时,煎煮次数1~3次;另,加入的乙醇浓度为:75~95%w/w;
其中,醇提水沉法时采用乙醇煎煮提取,加入滤渣质量3~8倍量60~80%w/w乙醇,浸泡温度60~80℃,浸泡时间0.5~2小时,煎煮时间6~10小时,煎煮次数1~3次;另,加入的乙醇浓度为:60~80%w/w;
C、取B步骤所得药液,浓缩至相对密度为1.20~1.25,得清膏;
D、按每1000g美洲大蠊使用40~60ml甘油的用量取甘油,与C步骤所得的清膏混合,即得美洲大蠊提取物。
本发明的实验结果表明,美洲大蠊提取物能够促进骨痂纤维细胞数量和物质含量的增加、促进骨小梁面积增大、促进成骨细胞的增加、促进骨细胞的增加、有助破骨细胞的减少,进而促进骨痂生成;美洲大蠊提取物还能够促进骨折部位皮肤愈合。美洲大蠊提取物单独使用或者与其他药物配合制备成的药物用于治疗骨折,能促进骨痂生成、骨折部位皮肤愈合,缩短治疗时间,价格低廉,疗效显著,为临床治疗骨折提供了一种新的选择。
具体实施方式
下面结合实施例和试验例对本发明做详细的说明,但它们不是对本发明的进一步限制。
实施例1:美洲大蠊提取物的制备
将干燥的美洲大蠊粗碎1000kg,加4倍量70%乙醇,浸泡1小时后,温度70℃,提取二次,第一次8小时;第二次加乙醇3倍量,提取6小时合并二次提取液,过滤,滤液浓缩至相对密度为1.09~1.16(70℃)的清膏时,加入水,70℃保温搅拌60分钟,静置12小时,弃去上层油脂,下层药液过滤,滤液回收乙醇,减压浓缩至相对密度为1.16~1.22的药液(70℃),每1000ml加50ml甘油,充分搅拌均匀,过滤,滤液煮沸30分钟后,分装成瓶,再经125℃,压力为0.1Mpa,灭菌30分钟,冷却至室温,即得。
实施例2:美洲大蠊提取物的制备
将干燥的美洲大蠊粗碎1000kg,每100kg粗粉加400kg水,浸泡1小时后,温度约在70℃,提取三次,第一次8小时;第二次加水300kg;提取6小时;第三次加水300kg,提取4小时。合并三次提取液,过滤,滤液浓缩至相对密度为1.10~1.20(70℃)时,加入95%的乙醇,70℃保温搅拌30分钟,静置12小时,弃去上层油脂,下层药液过滤,滤液回收乙醇,减压浓缩至相对密度为1.20~1.25(70℃),加入甘油(每1000ml加50ml甘油),充分搅拌均匀,滤过,即得。
实施例3:美洲大蠊提取物的制备
将干燥的美洲大蠊粗碎1000kg,每100kg粗粉加500kg水,浸泡2小时后,温度约在80℃,提取三次,第一次8小时;第二次加水300kg,提取6小时;第三次加水300kg,提取4小时。合并三次提取液,过滤,滤液浓缩至相对密度为1.10~1.20(70℃)时,加入95%的乙醇,70℃保温搅拌30分钟,静置12小时,弃去上层油脂,下层药液过滤,滤液回收乙醇,减压浓缩至相对密度为1.20~1.25(70℃),加入甘油(每1000ml加60ml甘油),充分搅拌均匀,滤过,即得。
实施例4:美洲大蠊提取物的制备
将干燥的美洲大蠊粗碎1000kg,每100kg粗粉加300kg水,浸泡0.5小时后,温度约在60℃,提取三次,第一次8小时;第二次加水300kg,提取6小时;第三次加水300kg,提取4小时。合并三次提取液,过滤,滤液浓缩至相对密度为1.10~1.20(70℃)时,加入95%的乙醇,70℃保温搅拌30分钟,静置12小时,弃去上层油脂,下层药液过滤,滤液回收乙醇,减压浓缩至相对密度为1.20~1.25(70℃),加入甘油(每1000ml加40ml甘油),充分搅拌均匀,滤过,即得。
试验例:
一、药液配制:
1、美洲大蠊提取物(由实施例2提供的美洲大蠊提取物):原液及减压浓缩为原液浓度2倍的浓缩液,其中原液用于灌胃使用,浓缩液用于外用使用;
2、云南白药:每瓶装云南白药4g,含保险子1例,重0.05g。将保险子研磨成细粉,与云南白药粉混合均匀外用;
3、硫酸庆大霉素注射液:每2ml中加入生理盐水1ml混匀,即得稀释液供肌内注射。
二、试验分组:
取SD大鼠144只,雌雄各半,动物骨折造模后按性别体重随机分批分组。
1、分为三批(每批48只,雌雄各24只):
①第一批为骨折造模给药3天批次;
②第二批为骨折造模给药7天批次;
③第三批为骨折造模给药30天批次;
2、每批分组(每组12只,雌雄各6只):
①模型对照组;②美洲大蠊提取物外用组;③美洲大蠊提取物灌胃组;④美洲大蠊提取物联合云南白药外用组;
三、造模方法及给药:
1、造模方法:术前用手术剪剪去大鼠左前臂毛,于左前臂前侧直切口,切开皮肤及深筋膜,从拇长展肌及桡侧腕长伸肌之间分离,骨膜外暴露桡骨(正面内侧),用手术剪在桡骨中段横行剪断,造成大鼠桡骨骨缺损骨折模型。同时,前臂完整的尺骨可将桡骨断端两端稳固固定,进行肌肉、皮肤的分层缝合伤口。
2、预防感染处理:造模前1天、造模当天和造模后2天,大鼠骨折伤口局部涂敷(美洲大蠊提取物原液适量)和后肢肌内注射硫酸庆大霉素注射液(稀释液按0.1ml/只/天给予)各一次,连续给药4天。同时,动物造模后3天内均用创可贴包扎伤口,并作为外用给药载体。
3、给药方法和给药剂量:
每只动物按200g计,给予以下剂量药物,根据实际体重这算给药量:
①模型对照组:外用生理盐水0.5ml,灌胃生理盐水1ml;
②美洲大蠊提取物外用组:外用美洲大蠊提取物浓缩液0.5ml;
③美洲大蠊提取物灌胃组:灌胃美洲大蠊提取物原液1ml;
④美洲大蠊提取物联合云南白药外用组:云南白药粉0.05g联合美洲大蠊提取物浓缩液0.5ml外用。
四、检测样本制备:
1、骨折部位骨痂样本:动物处死后,取包括骨折部分两端肱骨和尺骨、桡骨部分,放入10%甲醛固定24小时后,再放入脱钙液中脱钙,脱钙程度以大头针刺检测脱钙程度,脱钙结束后经过自来水冲洗,取骨折部分及其两端骨部分,逐级酒精脱水、二甲苯透明,石蜡包埋,切片4μm,HE染色,光镜下观察;
2、骨折部位皮肤样本:动物处死后,取骨折部位皮肤创伤处,酒精脱水,石蜡包埋,切片4~6μm,HE染色,光镜下观察。
五、试验观察指标:
1、骨折部位新生骨痂病理形态学定性及定量观察:
①纤维细胞数量和相对含量:在中倍视野下选择3个纤维组织最明显的区域,用Mias2000图像分析***测量纤维组织内纤维细胞核的面积,表示纤维细胞的数量;并测量积分光密度总和,即测量范围面积内的纤维细胞光密度总和,可反映纤维细胞中物质的相对含量;
②骨小梁面积测定:在中倍下选择骨折断端处骨小梁最大的区域3个,用Mias2000图像分析***测量骨小梁的面积,用3个测量的骨小梁面积之和表示骨小梁的面积;
③成骨细胞数、骨细胞数、破骨细胞数:在中倍下选择骨折断端处骨小梁最大的区域3个,在显微镜下直接计数成骨细胞数和骨细胞数,表示成骨细胞和骨细胞的数量。在中倍下选择骨折断端处破骨细胞最多处3个区域,显微镜下计数破骨细胞数目,表示破骨细胞的数量。
2、骨折部位皮肤病理形态学定性观察:采用***评分法分为0~4评分;
①0分(未愈合);②1分(开始愈合);③2分(部分愈合);④3分(基本愈合);⑤4分(完全愈合)。
六、数据比较方法:
1、同一批次各给药组与模型对照组比较;
2、不同批次同一类型组别(给药组或模型对照组)之间比较。
七、试验结果:
1、第一批次(骨折造模给药3天)试验结果
表1:第一批次(骨折造模给药3天)骨折骨痂部位病理形态学计量观察表
注:各给药组与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;
从表1可以看出,对骨折后3天骨痂纤维组织面积总和指标,与模型对照组比较,美洲大蠊提取物灌胃组有显著性差异,P<0.05,显著增加26.23%;从整体上说,各给药组均能增加骨折后纤维细胞生产的数量,促进骨折愈合。对骨折后3天骨痂纤维细胞积分光密度总和指标,与模型对照组比较,美洲大蠊提取物外用组有极显著性差异,P<0.01,显著增加56.67;从整体上说,各给药组均能增加骨折后纤维细胞中物质的含量,促进骨折愈合。
结合纤维细胞面积总和综合分析,在治疗骨折3天时,对骨折的促进骨痂生成作用,药物仍以灌胃给药疗效较好。
表2:第一批次(骨折造模给药3天)骨折部位皮肤病理形态学计量观察表
注:各给药组与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;
从表2可以看出,对骨折后3天皮肤愈合情况看,与模型对照组比较,美洲大蠊提取物灌胃组有显著性差异,P<0.05,显著增加700%,美洲大蠊提取物外用组、美洲大蠊提取物联合云南白药外用组有极显著性差异,P<0.01,说明各给药组均能显著促进骨折处破损皮肤的愈合;美洲大蠊提取物联合云南白药外用效果更加显著。
2、第二批次(骨折造模给药7天)试验结果
表3:第二批次(骨折造模给药7天)骨折骨痂部位病理形态学计量观察表一
注:括号中数据为给药组与模型对照组均值比较的增加率。
表4:第二批次(骨折造模给药7天)骨折骨痂部位病理形态学计量观察表二
注:(1)各给药组与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;
(2)括号中数据为给药组与模型对照组均值比较的增加率或减少率。
从表3可以看出,对骨折后7天骨痂部位病理形态学指标,其中骨小梁面积总和,与模型对照组比较,各给药组均有骨小梁面积总和增大的趋势。纤维组织面积总和,与模型对照组比较,各给药组均能增加骨折后纤维细胞生产的数量。纤维细胞面积积分光密度总和,与模型对照组比较,各给药组均能增加骨折后纤维细胞中物质的含量。
从表4可以看出,成骨细胞数,与模型对照组比较,各给药组均有极显著性差异,P均<0.01,美洲大蠊提取物外用组、美洲大蠊提取物灌胃组、美洲大蠊提取物联合云南白药外用组分别增加115.28%、104.59%、138.46%,其中以美洲大蠊提取物联合云南白药外用组效果最佳。破骨细胞数,与模型对照组比较,只有美洲大蠊提取物联合云南白药外用组有减少,减少4.55%。骨细胞数,与模型对照组比较,各给药组均有显著或极显著性差异,其中美洲大蠊提取物外用组、美洲大蠊提取物灌胃组、美洲大蠊提取物联合云南白药外用组分别增加100.70%、52.29%、73.79%。
综合分析,在治疗骨折7天后,对骨折的促进骨痂生成作用,药物治疗仪外用药物疗效优于灌胃给药;且美洲大蠊提取物联合云南白药外用效果更佳。
表5:第二批次(骨折造模给药7天)骨折部位皮肤病理形态学计量观察表
注:各给药组与模型对照组比较,**P<0.01;
从表5中可以看出,对骨折后7天皮肤愈合情况看,与模型对照组比较,各给药组均有极显著性差异,P均<0.01,分别增加40~45%,说明各给药组均能显著促进骨折处破损皮肤的愈合。
3、第三批次(骨折造模给药30天)试验结果
表6:第三批次(骨折造模给药30天)骨折骨痂部位病理形态学计量观察表
注:(1)各给药组与模型对照组比较,*P<0.05;
(2)括号中数据为给药组与模型对照组均值比较的增加率或减少率。
从表6可以看出,对骨折后30天骨痂部位病理形态学指标,其中骨小梁面积总和,与模型对照组比较,美洲大蠊提取物联合云南白药外用组增大27.22%。成骨细胞数,与模型对照组比较,各给药组均有增加趋势,增加13.90~34.76%,其中美洲大蠊提取物联合云南白药外用组有显著性差异,P<0.05,增加34.76%。破骨细胞数,与模型对照组比较,各给药组均有减少趋势,减少8.33%~22.22%。骨细胞数,与模型对照组比较,各给药组均有增加趋势,其中美洲大蠊提取物联合云南白药外用组具有显著性差异,P<0.05,增加61.32%。
从表6可以看出,对于骨折造模给药后期,各给药组与模型对照组比较,虽然各给药组的骨痂部位病理形态学指标基本都有增加的趋势(对破骨细胞是减少的趋势),但各给药组与模型对照组之间基本无统计学差异,骨折部分基本已经处于自然愈合状态。由此看出,对于骨折的治疗来说,各给药组的疗效和特色应该在于骨折早期促进骨痂生成。
综合分析,在治疗骨折30天后,对骨折的促进骨痂生成作用,药物治疗以外用药物疗效优于灌胃给药;且美洲大蠊提取物联合云南白药外用效果更佳。
表7:第三批次(骨折造模给药30天)骨折部位皮肤病理形态学计量观察表
注:各给药组与模型对照组比较,**P<0.01;
从表7中可以看出,对骨折后30天皮肤愈合情况看,与模型对照组比较,各给药组均能显著促进骨折处破损皮肤的愈合,其中美洲大蠊提取物联合云南白药外用组有显著性差异,显著增加21.88%,说明美洲大蠊提取物联合云南白药外用更佳。
综上所述,美洲大蠊提取物不管是灌胃给药还是外用给药,都能够有效促进骨折后骨痂生成和骨折部位皮肤愈合,且美洲大蠊提取物联合云南白药外用效果更佳。
Claims (7)
1.美洲大蠊提取物在制备骨折治疗药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述美洲大蠊提取物由下述方法得到:
A、取美洲大蠊粉碎,加石油醚,在温度5~20℃下浸泡,过滤,滤渣挥干;
B、取步骤A所得滤渣,采用水提醇或醇提水沉法提取,静置;静置后的药液,弃上层油脂,过滤,得下层药液;
其中,水提醇沉法中醇沉时,加入的乙醇浓度为:75~95%w/w;
或,醇提水沉法时,加入的乙醇浓度为:60~80%w/w;
C、取B步骤所得药液,浓缩至相对密度为1.20~1.25,得清膏;
D、按每1000g美洲大蠊使用40~60ml甘油的用量取甘油,与C步骤所得的清膏混合,即得美洲大蠊提取物。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:步骤B中水提醇沉法煎煮时的加水量为滤渣质量的3~5倍,60~80℃浸泡,浸泡时间0.5~2小时,煎煮时间4~8小时,煎煮次数1~3次。
4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:步骤B中醇提水沉法时采用乙醇煎煮提取,加入滤渣质量3~8倍量60~80%w/w乙醇,浸泡温度60~80℃,浸泡时间0.5~2小时,煎煮时间6~10小时,煎煮次数1~3次。
5.根据权利要求1至4任一所述的应用,其特征在于:所述骨折治疗药物的作用为促进骨痂生成。
6.根据权利要求1至4任一所述的应用,其特征在于:所述骨折治疗药物的作用为促进骨折部位皮肤愈合。
7.根据权利要求1至4任一所述的应用,其特征在于:所述骨折治疗药物包含云南白药。
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