CN102533932B - 一种中间普氏菌培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中间普氏菌培养基。其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有：蛋白胨15g；牛心浸粉8g；氯化血红素5mg；维生素K110mg；氯化钠5.5g；琼脂15g；多西环素4mg；甲硝唑20mg；无菌绵羊血90ml；蒸馏水加至1000ml。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、中间普氏菌分离率高的特点。
Description
技术领域
本发明涉及检验口腔微生物培养领域，具体涉及一种中间普氏菌培养基。
背景技术
牙周病是常见的口腔疾病，在世界范围内有很高的发病率。中间普氏菌（Prevotella intermedia，Pi）属产黑色素类的G-厌氧杆菌，大量的研究显示Pi与牙周炎、根尖周病和冠周炎等感染性疾病关系密切。目前的Pi检验手段主要是龈下菌斑采样进行聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR），该种方法需要对样本进行DNA提取和PCR引物设计，且需要配备PCR相关仪器设备，成本昂贵，操作复杂。微生物培养是一种用人工方法使微生物生长繁殖的技术，而选择性培养基是用来促进或抑制一定类型的生物体（如细胞或细菌等）而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。非选择性厌氧菌基础培养基培养牙垢标本，很难将厌氧链球菌、牙龈卟啉菌、梭菌属等分离出去，影响中间普氏菌的生长。
发明内容
本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种适合于中间普氏菌生长的培养基。
本发明解决其技术问题的技术方案是：一种中间普氏菌培养基，其特征在，配制1000ml培养基的配方中含有：蛋白胨15g；牛心浸粉8g；氯化血红素5mg；维生素K1 10mg；氯化钠5.5g；琼脂15g；多西环素4mg；甲硝唑20mg；无菌 绵羊血90ml；蒸馏水加至1000ml。
优化方案中，每1000ml培养基还含有杆菌肽锌2mg。
优化方案中，每1000ml培养基还含有L-谷氨酰胺0.1g。
优化方案中，每1000ml培养基还含有胆盐1.8g。
优化方案中，每1000ml培养基还含有浓度200g/L的射干水煮液200ml。
其中所述的蛋白胨提供碳氮源和能量；牛心浸粉含有各种多肽、脂肪、生长因子、激素等，这些物质对促进中间普氏菌的繁殖和生长都是很重要的因素；氯化血红素和维生素K1为厌氧菌营养剂；氯化钠维持均衡的渗透压，且由于中间普氏菌较其他的口腔厌氧菌更为耐受高盐环境，所以高氯化钠水平还有利于抑制其他口腔厌氧菌生长；琼脂是培养基的凝固剂；多西环素可以有效的抑制链球菌等革兰氏阳性菌、放线菌属、炭疽杆菌、李斯特菌、梭状芽孢杆菌、奴卡菌属、弧菌、布鲁菌属、弯曲杆菌、耶尔森菌、放线杆菌、黄褐色嗜二氧化碳菌；既往研究表明，甲硝唑抑制牙龈卟啉菌能力64倍于中间普氏菌；无菌绵羊血提供能量环境；杆菌肽锌可以广谱抑制革兰氏的阳性菌和阴性球菌、肺炎双球菌、葡萄球菌、***、脑膜炎双球菌及螺旋体；L-谷氨酰胺属氨基酸类，为营养剂；胆盐抑制革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌；射干为鸢尾科植物射干的干燥根茎，现代研究表明，射干煎剂或浸剂，在试管中对常见的致病性皮肤癣菌有抑制作用；在体外对外感及咽喉疾患中的某些病毒，也有抑制或延缓作用。
本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、中间普氏菌分离率高的特点。
具体实施方式
以下结合实际情况，对本发明的具体实施方式作详细说明。
实施例1，配制1000ml培养基的配方中含有：蛋白胨15g；牛心浸粉8g；氯化血红素5mg；维生素K1 10mg；氯化钠5.5g；琼脂15g；多西环素4mg；甲硝唑20mg；无菌绵羊血90ml；蒸馏水加至1000ml。制备方法为称取蛋白胨、牛心浸粉、氯化钠；琼脂；多西环素；甲硝唑混匀，蒸馏水溶解，210℃灭菌15min，冷却到45℃，加入无菌绵羊血、灭菌氯化血红素、灭菌维生素K1，混匀后灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。
实施例2，配制1000ml培养基的配方中含有：蛋白胨15g；牛心浸粉8g；氯化血红素5mg维生素K1 10mg；氯化钠5.5g；琼脂15g；多西环素4mg；甲硝唑20mg；无菌绵羊血90ml；杆菌肽锌2mg；蒸馏水加至1000ml。制备方法为称取蛋白胨、牛心浸粉、氯化钠；琼脂；多西环素；甲硝唑；杆菌肽锌混匀，蒸馏水溶解，210℃灭菌15min，冷却到45℃，加入无菌绵羊血、灭菌氯化血红素、灭菌维生素K1，混匀后灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。
实施例3，配制1000ml培养基的配方中含有：蛋白胨15g；牛心浸粉8g；氯化血红素5mg；维生素K1 10mg；氯化钠5.5g；琼脂15g；多西环素4mg；甲硝唑20mg；无菌绵羊血90ml；L-谷氨酰胺0.1g；胆盐1.8g；蒸馏水加至1000ml。制备方法为称取蛋白胨、牛心浸粉、氯化钠；琼脂；多西环素；甲硝唑；L-谷氨酰胺；胆盐混匀，蒸馏水溶解，210℃灭菌15min，冷却到45℃，加入无菌绵羊血、灭菌氯化血红素、灭菌维生素K1，混匀后灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。
实施例4，配制1000ml培养基的配方中含有：蛋白胨15g；牛心浸粉8g；氯化血红素5mg；维生素K1 10mg；氯化钠5.5g；琼脂15g；多西环素4mg；甲硝唑20mg；无菌绵羊血90ml；浓度200g/L的射干水煮液200ml；蒸馏水加至1000ml。制备方法为：取射干加水煮沸1小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得射干水煮液；将蛋白胨、牛心浸粉、氯化钠；琼脂；多西环素；甲硝唑；射干水煮液和蒸馏水混匀，在涡旋器上震荡15min，过滤，滤液210℃灭菌15min，冷却到45℃，加入无菌绵羊血、灭菌氯化血红素、灭菌维生素K1，混匀后灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。
实施例5，配制1000ml培养基的配方中含有：蛋白胨15g；牛心浸粉8g；氯化血红素5mg；维生素K1 10mg；氯化钠5.5g；琼脂15g；多西环素4mg；甲硝唑20mg；无菌绵羊血90ml；L-谷氨酰胺0.1g；胆盐1.8g；浓度200g/L的射干水煮液200ml；蒸馏水加至1000ml。制备方法为取射干加水煮沸1小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得射干水煮液；将蛋白胨、牛心浸粉、氯化钠；琼脂；多西环素；甲硝唑；L-谷氨酰胺；胆盐；射干水煮液和蒸馏水混匀，在涡旋器上震荡15min，过滤，滤液210℃灭菌15min，冷却到45℃，加入无菌绵羊血、灭菌氯化血红素、灭菌维生素K1，混匀后灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。
所述的射干水煮液浓度为200g/L，指的是每升射干水煮液中含有生药200g。
本发明所得中间普氏菌培养基用于牙垢标本具有检出可靠、中间普氏菌分离率高的特点，为临床资料充分证明，有关资料如下。
1对象与方法
1.1培养基制备：共设6组，分别为实施例1方案组、实施例2方案组、实施例3方案组、实施例4方案组、实施例5方案组和对照组，对照组为厌氧血琼脂培养基（CDC培养基）。
1.2龈下菌斑采集培养方法：隔湿唾液，龈上刮治器去除龈上牙石，碘酊消毒后，用无菌Gracey刮治器采集2颗下颌中切牙唇侧近中至远中的龈下菌斑。将采集的菌斑悬浮于1ml生理盐水，用接种环分区划线接种，在37℃，10%CO2、10%H2和80%N2的厌氧罐内培养48h，挑取细小菌落进行菌属鉴定。
1.3目标菌的菌落形态观察、显微镜镜检：取出培养皿，观察培养基上黑色或棕色、光亮、圆形、低突、直径0.5~2mm的菌落的生长情况，挑选目标菌涂片，革兰氏染色，显微镜镜检。
1.3统计学分析用SPSS13.0进行统计分析，P<0.05表示有显著性意义。
2结果：在19份经由PCR确定中间普氏菌阳性的牙垢标本，细菌培养分离并鉴定为中间普氏菌的，48h实施例1方案组为16例，实施例2方案组为16例，实施例3方案组为18例，实施例4方案组为16，实施例5方案组为17例，对照组CDC培养基为11例，经统计学处理，本发明各实施例组与对照组比较具有明显差异（P<0.05）。结果表明，本发明实施例中间普氏菌分离率明显高现有的培养基。
Claims (5)
1.一种中间普氏菌培养基，其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有：
蛋白胨15g；
牛心浸粉8g；
氯化血红素5mg；
维生素K1 10mg；
氯化钠5.5g；
琼脂15g；
多西环素4mg；
甲硝唑20mg；
无菌绵羊血90ml；
蒸馏水加至1000ml。
2.根据权利要求1所述的一种中间普氏菌培养基，其特征在于每1000ml培养基还含有杆菌肽锌2mg。
3.根据权利要求1所述的一种中间普氏菌培养基，其特征在于每1000ml培养基还含有L-谷氨酰胺0.1g。
4.根据权利要求1所述的一种中间普氏菌培养基，其特征在于每1000ml培养基还含有胆盐1.8g。
5.根据权利要求1所述的一种中间普氏菌培养基，其特征在于每1000ml培养基还含有浓度200g/L的射干水煮液200ml。
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