CN102492666A - 一种酶制剂及其用于提取葛根总黄酮的应用和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种酶制剂及其用于提取葛根总黄酮的应用和方法,属于酶制剂的应用领域。本发明的技术方案是:提供一种酶制剂,包括以下重量份的组分:纤维素酶1-5份、木聚糖酶1-5份、蛋白酶1-5份、淀粉酶1-5份,本发明还给出了将此酶制剂用于提取葛根总黄酮的应用,并给出了具体的操作步骤,最终实现了葛根总黄酮提取率70mg/g以上。本发明的有益效果是:反应条件温和,能保持天然产物的构象,不破坏其立体结构和生物活性,有利于保持有效成分原有的药效;能够去除体系内杂质,提高提取液的澄清度,提高了中药有效成分的提取率;对反应条件进行了优化组合,实现了提取得率的最大化。
Description
技术领域
本发明涉及一种酶制剂及其用于提取葛根总黄酮的应用和方法。
背景技术
葛根(Puerana labata)是豆科葛属多年生藤本植物,是一种传统的中药材,其总黄酮是葛根中主要有效成分,具有抗炎解热、扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉血流量的作用,同时也有降低血压的作用。作为医药和保健食品的原料或添加剂,目前,葛根总黄酮国际市场需求量约500~800吨/年,我国需求量约150吨/年,葛根总黄酮的开发越来越引起研究者及开发商的关注。
传统的提取分离方法,如煎煮法、浸渍法、渗滤法、回流法等,存在有效成分提取率不高、杂质清除率低等问题。酶工程技术是近几年来用于重要工业的一项生物工程技术。通过酶反应温和地将植物组织分解,加速有效成分的释放提取,选用相应的酶可将影响液体制剂澄清度的杂质如淀粉、蛋白质、果胶等分解去除,并且针对根中含有脂溶性成分多,通过葡萄糖苷酶或转糖苷酶,使脂溶性成分转化成水溶性糖苷类,酶反应提取温度低,可破坏植物细胞壁,促进有效成分提取;改变提取的目的成分的性质,加强药物活性;去除体系内杂质,提高提取体系澄清度、改变药材质地。
发明内容
本发明的目的在于提供一种酶制剂,并将其应用在提取葛根总黄酮,进一步给出了具体的操作方法,该方法能在温和的条件下对植物有效成分进行高选择性转化,不仅可以克服工业中常用的醇水提取方法中有效成分提取率低、工序复杂等问题,提高提取体系澄清度、改变药材质地,还可以在提取中改变原有天然成分的结构,增加提取物的生理活性,具有潜在的工业应用价值。
为实现该目的,本发明采用以下技术方案:
一种酶制剂,其特征在于:包括以下重量份的组分:
所述蛋白酶选用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶中的至少一种。
所述淀粉酶选用中温α-淀粉酶和β-淀粉酶中的至少一种。
上述酶制剂用于提取葛根总黄酮的应用。
上述酶制剂用于提取葛根总黄酮的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)将葛根烘干粉碎,过筛,取葛根粉加入蒸馏水溶解;
(2)调节pH至4.0-6.0,加入一定量的酶制剂,在40-60℃的温度下酶解1-6小时;
(3)高温灭酶;
(4)离心,沉淀用70%乙醇加热回流提取1-3h,过滤,提取2-4次。
(5)合并上清液和滤液,减压浓缩回收乙醇,浓缩液为葛根总黄酮浸膏。
上面提到的提取葛根总黄酮的方法中,所述植物粉碎至40-100目,植物材料与加入的蒸馏水的质量比为1∶10-30。
所述的酶制剂与蒸馏水的质量比为1∶5-15。
步骤(2)中所述的酶制剂添加量为葛根粉添加量的0.1-1%。
步骤(3)中所述的灭酶温度为80-100℃,时间5-10min。
步骤(4)中所述的70%乙醇与沉淀的质量比为1∶8-15,回流提取温度为60-80℃。
本发明选用此种酶制剂的原理是:纤维素酶,可以降解植物纤维素;木聚糖酶可以水解植物中的木聚糖;蛋白酶,可以水解提取物中的蛋白质,提高提取物的纯度;淀粉酶,可以水解淀粉。这几种酶相互作用,能够破坏葛根细胞壁的纤维结构,甚至将其分解成小分子物质,减少提取传质阻力,有效释放葛根黄酮等活性成分;
与现有技术相比,本发明具有以下优点:
(1)本发明采用酶法提取葛根总黄酮,反应条件温和,能保持天然产物的构象,不破坏其立体结构和生物活性,有利于保持有效成分原有的药效。
(2)本发明选用酶不仅能够去除体系内杂质,提高提取液的澄清度,同时又提高了中药有效成分的提取率。
(3)本发明对酶制剂的配比、提取时间、提取温度、加酶量、pH值进行了优化组合,实现了葛根总黄酮提取得率的最大化。
(4)本发明酶制剂用于提取葛根总黄酮的方法中,采用酶提和醇提结合的条件下,提高了活性成分的得率。
(5)采用本发明从中药葛根中提取总黄酮,葛根总黄酮提取率在7%以上,而一般的水提取法,提取率一般仅为1-2%,醇提取法,提取率一般仅为4-5%,因此酶提法提取得率高。
(6)本发明工艺简单、操作方便、投资少、不会产生噪音和污染,适应工艺生产应用。
具体实施方式
实施例1
(1)取葛根烘干粉碎至80目,取该粉末10g,加入蒸馏水100mL溶解;
(2)取酶制剂:纤维素酶0.0037g,木聚糖酶0.0056g,木瓜蛋白酶0.0018g,中温α-淀粉酶0.0037g加入葛根溶液中,调节pH至4.0,在40℃条件下酶解1小时;
(3)80℃灭酶10min;
(4)离心,沉淀加入10倍体积的70%乙醇,80℃加热回流提取1小时,过滤,提取2次。
(5)合并上清液和滤液,减压浓缩回收乙醇,浓缩液为葛根总黄酮浸膏。
采用分光光度法测定总黄酮含量,葛根总黄酮提取率为7.34%。
实施例2
(1)取葛根烘干粉碎至80目,取该粉末10g,加入蒸馏水150mL溶解;
(2)取酶制剂:纤维素酶0.0062g,木聚糖酶0.0093g,碱性蛋白酶0.0031g,中温α-淀粉酶0.0062g,加入葛根溶液中,调节pH至4.5,在45℃条件下酶解2小时;
(3)85℃灭酶10min;
(4)离心,沉淀加入12倍体积的70%乙醇,70℃回流提取3小时,趁热过滤,提取3次;
(5)合并上清液和滤液,减压浓缩回收乙醇,浓缩液为葛根总黄酮浸膏。
采用分光光度法测定总黄酮含量,葛根总黄酮提取率为7.49%。
实施例3:
(1)取葛根烘干粉碎至100目,取该粉末15g,加入蒸馏水400ml溶解;
(2)取酶制剂:纤维素酶0.0125g,木聚糖酶0.0375g,中性蛋白酶0.0325g,β-淀粉酶0.065g加入葛根溶液中,调节pH至5.0,在50℃条件下酶解3小时;
(3)85℃灭酶10min;
(4)离心,沉淀加入10倍体积的70%乙醇,75℃回流提取2小时,趁热过滤,提取2次;
(5)合并上清液和滤液,减压浓缩回收乙醇,浓缩液为葛根总黄酮浸膏。
采用分光光度法测定总黄酮含量,葛根总黄酮提取率为7.82%。
实施例4
(1)取葛根烘干粉碎至80目,取该粉末10g,加入蒸馏水300mL溶解;
(2)取酶制剂:纤维素酶0.02g,木聚糖酶0.01g,中性蛋白酶0.02,中温α-淀粉酶0.03g加入葛根溶液中,调节pH至5.0,在40℃条件下酶解1.5小时;
(3)85℃灭酶10min;
(4)离心,沉淀加入8倍体积的70%乙醇,75℃回流提取3小时,趁热过滤,提取2次;
(5)合并上清液和滤液,减压浓缩回收乙醇,浓缩液为葛根总黄酮浸膏。
采用分光光度法测定总黄酮含量,葛根总黄酮提取率为7.82%。
实施例5:
(1)取葛根烘干粉碎至80目,取该粉末10g,加入蒸馏水100mL溶解;
(2)取酶制剂(纤维素酶∶木聚糖酶∶木瓜蛋白酶∶中温α-淀粉酶=2∶2∶3∶1)0.05g,调节pH至6.0,在60℃条件下酶解1小时;
(3)85℃灭酶10min;
(4)离心,沉淀加入10倍体积的70%乙醇,85℃回流提取3小时,趁热过滤,提取3次;
(5)合并上清液和滤液,减压浓缩回收乙醇,浓缩液为葛根总黄酮浸膏。
采用分光光度法测定总黄酮含量,葛根总黄酮提取率为8.59%。
实施例6:
(1)取葛根烘干粉碎至100目,取该粉末10g,加入蒸馏水200mL溶解;
(2)取酶制剂(纤维素酶∶木聚糖酶∶碱性蛋白酶∶中温α-淀粉酶=2∶3∶1∶2)0.08g,调节pH至4.5,在45℃条件下酶解2小时;
(3)90℃灭酶10min;
(4)离心,沉淀用75%乙醇80℃回流提取3小时,趁热过滤,提取3次;
(5)合并上清液和滤液,减压浓缩回收乙醇,浓缩液为葛根总黄酮浸膏。
采用分光光度法测定总黄酮含量,葛根总黄酮提取率为7.55%。
实施例7:
(1)取葛根烘干粉碎至80目,取该粉末10g,加入蒸馏水200ml溶解;;
(2)取酶制剂(纤维素酶∶木聚糖酶∶中性蛋白酶∶中温α-淀粉酶=1∶2∶2∶5)0.1g,调节pH至4.5,在45℃条件下酶解3小时;
(3)85℃灭酶10min;
(4)离心,沉淀加入10倍体积的70%乙醇,65℃回流提取80mim,趁热过滤,提取3次;
(5)合并上清液和滤液,减压浓缩回收乙醇,浓缩液为葛根总黄酮浸膏。
采用分光光度法测定总黄酮含量,葛根总黄酮提取率为7.73%。
实施例8:
(1)取葛根烘干粉碎至80目,取该粉末10g,加入蒸馏水150ml溶解;
(2)取酶制剂(纤维素酶∶木聚糖酶∶中性蛋白酶∶β-淀粉酶=1∶1∶3∶2)0.22g,调节pH至5.0,在60℃条件下酶解3小时;
(3)100℃灭酶10min;
(4)离心,沉淀用75%乙醇75℃回流提取80mim,趁热过滤,提取3次;
(5)合并上清液和滤液,减压浓缩回收乙醇,浓缩液为葛根总黄酮浸膏。
采用分光光度法测定总黄酮含量,葛根总黄酮提取率为7.25%。
Claims (8)
2.权利要求1所述的一种酶制剂,其特征在于:所述蛋白酶选用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶中的至少一种。
3.权利要求1所述的一种酶制剂,其特征在于:所述淀粉酶选用中温α-淀粉酶和β-淀粉酶中的至少一种。
4.权利要求1所述的酶制剂用于提取葛根总黄酮的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)将葛根烘干粉碎,过筛,取葛根粉加入蒸馏水溶解;
(2)调节pH至4.0-6.0,加入一定量的酶制剂,在40-60℃的温度下酶解1-6小时;
(3)高温灭酶;
(4)离心,沉淀用70%乙醇加热回流提取1-3h,过滤,提取2-4次。
(5)合并上清液和滤液,减压浓缩回收乙醇,浓缩液为葛根总黄酮浸膏。
5.权利要求3所述的酶制剂用于提取葛根总黄酮的方法,其特征在于步骤(1)中所述的植物粉碎至40-100目,植物材料与加入的蒸馏水的质量比为1∶10-30。
6.权利要求3所述的酶制剂用于提取葛根总黄酮的方法,其特征在于:步骤(2)中所述的酶制剂添加量为葛根粉添加量的0.1-1%。
7.权利要求3所述的酶制剂用于提取葛根总黄酮的方法,其特征在于:步骤(3)中所述的灭酶温度为80-100℃,时间5-10min。
8.权利要求3所述的酶制剂用于提取葛根总黄酮的方法,其特征在于:步骤(4)中所述的70%乙醇与沉淀的质量比为1∶8-15,回流提取温度为60-80℃。
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