CN102481276A - 基于化学感受受体配体的治疗法 - Google Patents

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Abstract

本文提供含有化学感受受体配体的用于治疗糖尿病、肥胖症及其它代谢疾病、病症或病况的组合物和用化学感受受体配体治疗糖尿病、肥胖症及其它代谢疾病、病症或病况的组合物方法。本文还提供可用于本发明的方法的药物组合物。

Description

基于化学感受受体配体的治疗法
交叉引用
本申请要求保护2009年4月20日提交的美国临时申请号61/170,657的权益，其通过引用结合到本文中。
发明背景
尽管在开发对糖尿病、代谢综合征、肥胖症和相关代谢病况的有效治疗方面做出长期的大量努力，但是全球患有这些病况的人数仍在快速增加。这些病况导致多种医学并发症，使生命质量降低，寿命缩短，工作生产力丧失，对医疗***造成压力，并且给医疗保险提供者带来负担，所有这些都会转化为成本增加。
设计了正在应用或开发当中的II型糖尿病治疗方法以降低血糖水平。它们包括一种在调节胰岛素、葡萄糖和饥饿方面起关键作用的激素GLP-1(胰高血糖素样肽-1)的模拟物。模拟物的实例为GLP-1受体激动剂艾塞那肽(Byetta)和GLP-1类似物利拉糖肽。其它药物抑制DPP-IV，一种快速降解内源性GLP-1的酶。艾塞那肽是GLP-1受体激动剂，更慢地被DPP-IV降解。利拉糖肽，一种GLP-1类似物，与结合白蛋白并减缓GLP-1释放速率及其降解的脂肪酸分子连接(参见例如Nicolucci等，2008，“Incretin-based therapies：a new potentialtreatment approach to overcome clinical inertia in type 2 diabetes(基于肠降血糖素的治疗：一种在2型糖尿病中克服临床惰性的新的潜在治疗方法)”，Acta Biomedica 79(3)：184-91和美国专利号5,424,286“Exendin-3 and exendin-4 polypeptides，and pharmaceutical compositionscomprising same(毒蜥外泌肽-3和毒蜥外泌肽-4多肽及包含所述多肽的药物组合物)”。
现行的肥胖症治疗包括两种FDA批准的药物。奥利司他(Xenical)通过抑制胰脂肪酶来减少肠脂吸收。***(Meridia)通过抑制神经递质去甲肾上腺素、5-羟色胺和多巴胺的失活来降低食欲。已经报道了这些药物的不良副作用，包括对胆固醇水平的作用(参见例如“Prescription Medications for the Treatment of Obesity(用于治疗肥胖症的处方药)”，http://win.niddk.nih.gov/publications/prescription.htm#/fdameds)。可采用手术治疗，包括胃分流术和胃囊带术，但只是在极端情况下进行。这些手术可能有危险，而且对于目标是较适度减轻体重的患者而言不是合适的选择。
已经报道了某些肠细胞即L细胞因响应葡萄糖和氨基酸刺激而产生GLP-1。这些细胞和其它这类“肠内分泌细胞”也产生参与葡萄糖代谢相关过程的其它激素，包括据报道改善葡萄糖耐受不良和抑制食欲的泌酸调节肽(oxyntomodulin)、也观察到抑制食欲的PYY(肽YY)、刺激脂肪和蛋白质消化并且还降低食物摄取的CCK(缩胆囊素)、诱导肠细胞增殖的GLP-2和从增加葡萄糖依赖性胰岛素分泌的肠K细胞中分泌的肠降血糖素GIP(肠抑胃肽，亦称葡萄糖依赖性促胰岛素肽)(参见例如Jang等，2007，“Gut-expressed gustducin and taste receptorsregulate secretion of glucagon-like peptide-1(肠表达的味转导素和味觉受体调节胰高血糖素样肽-1分泌)”，PNAS 104(38)：15069-74及Parlevliet等，2007，“Oxyntomodulin ameliorates glucose intolerance inmice fed a high-fat diet(泌酸调节肽改善饲喂高脂饮食的小鼠的葡萄糖耐受不良)”，Am J Physiol Endocrinol Metab 294(1)：E142-7)。
还报道了在肠的L细胞和K细胞上有味觉受体存在(Hofer等，1996，“Taste receptor-like cells in the rat gut identified by expression ofalpha-gustducin(大鼠肠中通过α-味转导素的表达而鉴定的味觉受体样细胞)”Proc Natl Acad Sci USA 93：6631-6634)。甜味受体是T1R2和T1R3 GPCR的异二聚体，而且与味蕾上存在的受体相同。鲜味(umami)受体为T1R1和T1R3异二聚体(Xu等，2004，“Different functional rolesof T1R subunits in the heteromeric taste receptors(异聚味觉受体中T1R亚基的不同功能作用)”，Proc Natl Acad Sci USA 101：14258-14263以及Sternini等，2008，“Enteroendocrine cells：a site of′taste′in gastrointestinalchemosensing(肠内分泌细胞：胃肠化学感受中的′味觉′部位)”，CurrOpin Endocrinol Diabetes Obes 15：73-78)。腔内营养物对这些受体的刺激导致L细胞产物(例如GLP-1、PYY、泌酸调节肽和肠高血糖素)和K细胞产物(例如GIP)的顶端分泌，并进入门静脉(Jang等，2007，PNAS 104(38)：15069-74)。按葡萄糖依赖性方式，GLP-1和GIP增加胰岛素从β细胞中释放(一种称为肠降血糖素作用的作用)。另外，GLP-1抑制胰高血糖素释放和胃排空。GLP-1、泌酸调节肽和PYY 3-36被认为是饱感信号(Strader等，2005，“Gastrointestinal hormones andfood intake(胃肠激素与食物摄取)”，Gastroenterology 128：175-191)。脂肪酸的受体(例如GPR40和/或GPR120)(Hirasawa等，2005，Free fattyacids regulate gut incretin glucagon-like peptide-1 secretion throughGPR120(游离脂肪酸通过GPR120调节肠的肠降血糖素胰高血糖素样肽-1分泌)，Nat Med 11：90-94)和胆汁酸的受体(例如Gpbar1/M-Bar/TGR5)(Maruyama等，2006，“Targeted disruption of Gprotein-coupled bile acid receptor 1(Gpbar 1/M-Bar)in mice(小鼠中G蛋白偶联的胆汁酸受体1(Gpbar1/M-Bar)的靶向破坏)”.J Endocrinol 191：197-205和Kawamata等，2003，“A G protein-coupled receptor responsiveto bile acids(胆汁酸反应性G蛋白偶联受体)”，J Biol Chem 278：9435-9440)也存在于肠内分泌细胞系中。还有大量包含苦味受体的T2R。可能包含离子通道的酸味和咸味受体还未得到充分表征。据报道，味觉受体的活化，例如甜味受体受葡萄糖刺激的活化，引起GLP-1和其它肠内分泌细胞产物释放。
虽然已鉴定出许多非代谢的被味觉受体识别的“味元”，但是目前无一获准用于增加GLP-1或相关激素的产生(生物合成)。此外，许多报道指出，甜味元的口服递送与GLP-1释放无关(参见例如Ma等，2009，“Effect of the artificial sweetener，sucralose，on gastric emptyingand incretin hormone release in healthy subjects(健康受试者中人工甜味剂三氯半乳蔗糖对胃排空和肠降血糖素激素释放的作用)”，AmericanJournal Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.，2009，296(4)：G735-9，2009年2月12日网上发表以及Fujita等，2009，“Incretin release from gut isacutely enhanced by sugar but not by sweeteners in vivo(从肠中的肠降血糖素释放体内极受糖但不受甜味剂的促进)”，American JournalPhysiol.Endocrinol.Metab.296(3)：E473-9。2008年12月23日网上发表)。因此，确定如何使用化学感受受体配体(chemosensory receptorligand)以通过调节肠内分泌细胞激素来治疗与化学感受受体相关的病症，在治疗糖尿病、代谢综合征、肥胖症和相关病症方面会具有极大价值。
发明概述
本文提供具有至少一种化学感受受体配体的组合物和使用所述组合物的治疗方法。待用本文所述组合物治疗的疾病包括代谢综合征、I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病相关病况、肥胖症、葡萄糖耐受不良、妊娠糖尿病(GDM)、血脂异常(dyslipidemia)、餐后血脂异常、炎性肠病(IBD)包括溃疡性结肠炎和克罗恩病(Crohn’s disease)、过敏性肠综合征(IBS)、短肠综合征、多囊性卵巢综合征(PCOS)、非酒精性脂肪性肝病(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、食欲缺乏、食瘾、体重减轻、抑郁症和心境障碍。本文还提供至少一种化学感受受体配体和至少一种代谢物的组合物。本文所述组合物可递送至上胃肠道、下胃肠道或两者中。
本文提供治疗受试者的与化学感受受体相关的病况的方法，所述方法包括将至少一种化学感受受体配体给予受试者。在一个实施方案中，至少一种化学感受受体配体是不可代谢的。在另一个实施方案中，至少一种化学感受受体配体选自甜味受体配体、苦味受体配体、鲜味受体配体、脂肪受体配体、胆汁酸受体配体或其任何组合。甜味受体配体包括葡萄糖、三氯半乳蔗糖、阿司帕坦、蛇菊苷(Stevioside)、瑞鲍迪苷(Rebaudioside)、纽甜(Neotame)、乙酰舒泛钾和糖精。苦味受体配体包括黄烷酮、黄酮、黄酮醇、黄烷(flavans)、酚类类黄酮(phenolicflavonoid)、异黄酮、柠檬苦素类化合物糖苷配基、芥子油苷或其水解产物和异硫氰酸酯。鲜味受体配体包括谷氨酸盐、谷氨酰胺、乙酰甘氨酸或阿司帕坦。脂肪受体配体包括亚油酸、油酸、棕榈酸酯(palmitate)、油酰基乙醇酰胺、混合脂肪酸乳液和N-乙酰磷脂酰乙醇胺(NAPE)。胆汁酸包括脱氧胆酸、牛磺胆酸和鹅脱氧胆酸。
本文提供通过将至少两种化学感受受体配体给予受试者来治疗受试者的与化学感受受体相关的病况的方法。
本文提供通过给予至少一种化学感受受体配体和至少一种对应于至少一种化学感受受体配体的化学感受受体代谢物来治疗受试者的与化学感受受体相关的病况的方法。在一些实施方案中，在给予化学感受受体配体后给予化学感受代谢物(chemosensory metabolite)。在另一个实施方案中，化学感受代谢物与化学感受受体配体共同给予。在其它实施方案中，化学感受受体配体与受试者的食物摄取共同给予或化学感受配体在受试者摄取食物前给予。
本文提供通过将具有至少一种化学感受受体配体的组合物给予受试者的肠下部来治疗与化学感受受体相关的病况的方法。在另一个实施方案中，将包含至少一种化学感受受体配体的组合物给予受试者的肠上部。在又一个实施方案中，将包含至少一种化学感受受体配体的组合物给予受试者的肠上部和肠下部。在某些情况下，肠上部和肠下部的化学感受受体配体是相同的化学感受受体配体。在某些情况下，肠上部和肠下部的化学感受受体配体是不同的化学感受受体配体。
本文提供通过将具有至少一种化学感受受体配体的组合物给予十二指肠、空肠、回肠或结肠来治疗与化学感受受体相关的病况的方法。在另一个实施方案中，将包含至少一种化学感受受体配体的组合物给予受试者的十二指肠。在另一个实施方案中，将包含至少一种化学感受受体配体的组合物给予受试者的空肠。在另一个实施方案中，将包含至少一种化学感受受体配体的组合物给予受试者的回肠。在另一个实施方案中，将包含至少一种化学感受受体配体的组合物给予受试者的结肠。在另一个实施方案中，将包含至少一种化学感受受体配体的组合物给予受试者的十二指肠、空肠、回肠和结肠。
本文提供通过给予具有至少一种化学感受受体配体的组合物来治疗与化学感受受体相关的病况的方法，所述组合物在给予受试者后约15分钟-约45分钟、约105分钟-约135分钟、约165分钟-约195分钟或约225分钟-约255分钟释放。
本文提供通过给予具有至少一种化学感受受体配体的组合物来治疗与化学感受受体相关的病况的方法，所述组合物在给予受试者后约30分钟、约120分钟、约180分钟或约240分钟释放。在一个实施方案中，组合物在给予受试者后约30分钟释放。在一个实施方案中，组合物在给予受试者后约120分钟释放。在一个实施方案中，组合物在给予受试者后约180分钟释放。在一个实施方案中，组合物在给予受试者后约240分钟释放。在一个实施方案中，组合物在给予受试者后约30分钟、约120分钟、约180分钟和约240分钟释放。
本文提供通过给予具有至少一种化学感受受体配体的组合物来治疗与化学感受受体相关的病况的方法，所述组合物在给予受试者后在约pH 5.5、约pH 6.0、约pH 6.5或约pH 7.0下释放。
本文提供通过给予具有至少一种化学感受受体配体的组合物来治疗与化学感受受体相关的病况的方法，所述组合物在给予受试者后在两种pH范围内释放，其中所述两种pH范围选自约pH 5.0-约pH6.0、约pH 6.0-约pH 7.0和约pH 7.0-约pH 8.0。
本文提供通过将具有至少一种化学感受受体配体的组合物给予受试者的肠下部来调节肠下部的激素谱(hormonal profile)的方法。在一个实施方案中，激素谱为GLP-1、泌酸调节肽和肽YY。
本文提供通过将具有至少一种化学感受受体配体的组合物给予受试者的肠上部来调节肠上部的激素谱的方法。在一个实施方案中，激素谱为GLP-1、GLP-2、泌酸调节肽、肽YY、GIP、胰岛素C肽、胰高血糖素、胰岛素、CCK或其任何组合。
本发明还提供通过刺激肠上部的化学感受受体来敏化肠下部化学感受受体的方法。
本文所述组合物可用肠溶衣制备。在一些实施方案中，组合物具有肠溶衣，且不需要化学感受受体激动剂的吸收。另一方面，本文所述组合物可用择时释放***配制。
本文提供用本文所述组合物治疗与化学感受受体相关的病况的的方法。与化学感受受体相关的病况包括代谢综合征、I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病相关病况、肥胖症、葡萄糖耐受不良、妊娠糖尿病(GDM)、血脂异常、餐后血脂异常、炎性肠病(IBD)包括溃疡性结肠炎和克罗恩病、过敏性肠综合征(IBS)、短肠综合征、多囊性卵巢综合征(PCOS)、非酒精性脂肪性肝病(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、食欲缺乏、食瘾、体重减轻、抑郁症和心境障碍。在一些实施方案中，配制组合物以在肠下部释放。在其它实施方案中，配制组合物以在肠上部释放，因此所述组合物对治疗与化学感受受体相关的病况有效。在另外的其它实施方案中，配制组合物以在肠上部和肠下部释放。
通过引用结合
本说明书提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用结合到本文中，其程度与每个独立出版物、专利、专利申请具体而单独指明通过引用结合到本文中一样。
发明详述
本发明涉及使用刺激肠衬细胞上存在的化学感受受体的配体组合，治疗与化学感受受体相关的病况(例如包括肥胖症和糖尿病在内的代谢病况)的方法和组合物。配体与这些化学感受受体结合调节激素分子的产生，所述激素分子是代谢过程(例如葡萄糖代谢)中的关键调节因子，例如GLP-1、GLP-2、泌酸调节肽、PYY、GIP、胰岛素C肽、肠高血糖素、胰高血糖素和CCK。所产生的具体激素随所刺激的受体而变化。在实施方案中，将非代谢的化学感受受体配体(味元)与作为代谢物的化学感受受体配体组合。除肠内分泌细胞化学感受受体的活化以外，食物配体的代谢还可引起激素生成的刺激提高。
本发明还考虑将化学感受受体配体定向给予肠内的特定部位。因响应化学感受刺激而各自表达不同的代谢激素组的肠内分泌细胞(例如L细胞、K细胞和I细胞)出现在肠全长内。这些肠内分泌细胞类型的浓度和比例在不同肠段中不同，且每种细胞类型具有不同的代谢激素表达谱。例如，通过使用设计用于在所需肠段内释放的制剂，将本发明的治疗定向给予特定肠段，为参与代谢的激素的产生提供额外的控制水平。
因此，本发明通过经由肠内分泌化学感受受体活化调节代谢激素的表达来治疗重大化学感受受体相关病况的新的方法。本发明还提供选择组合治疗的能力，所述组合治疗为具有不同激素表达谱的个体的特殊需要而定制。
化学感受受体
例如，在标题名同为“Modulation of Chemosensory receptors andLigands Associated Therewith(化学感受受体及其相关配体的调节)”的两个美国专利申请公布号2008/0306053和2008/0306093以及标题名为“T2R taste receptors and genes encoding same(T2R味觉受体和编码所述受体的基因)”的美国专利号7,105,650中，描述了哺乳动物化学感受受体和配体。目前已知多种人和其它真核生物化学感受受体的完整序列或部分序列(参见例如Pilpel，Y.等，Protein Science，8：969 77(1999)；Mombaerts，P.，Annu.Rev.Neurosci.，22：487 50(1999)；EP0867508A2；美国专利号5,874,243、WO 92/17585、WO 95/18140、WO 97/17444、WO 99/67282)。
甜味受体和鲜味受体：在人中，C类G蛋白偶联受体家族T1R的不同组合响应甜味和鲜味刺激。T1R2和T1R3识别甜味刺激。例如，Xu等人(2004，Proc Natl Acad Sci USA 101：14258-14263)描述了包含异聚甜味和鲜味受体的T1R亚基。Xu等人报导了阿司帕坦和纽甜需要T1R2的N端胞外结构域，G蛋白偶联需要T1R2的C端一半，而环拉酸盐和lactisole需要T1R3的跨膜结构域。他们的结果表明在该受体上存在多个甜味剂相互作用部位。
T1R1和T1R3识别鲜味刺激物L-谷氨酸盐。据报导，5’核糖核苷酸提高这种反应(Xu等，2004)。
苦味受体：通过约30个T2R受体(GPCR)家族成员检出苦味化学物质(Adler等，2000，Cell 100：693-702；Chandrashekar等，2000，Cell100：703-711；Matsunami等，2000，Nature 404：601-604)。例如，在美国专利申请公布号2008/0306053和美国专利号7,105,650中描述了某些T2R和表达T2R的方法。
胆汁受体：有多种胆汁酸受体。具有亚基Gpbar1和M-Bar的胆汁酸受体参与胆汁酸对脂肪增溶、胆固醇维持和胆汁酸稳态的影响(Maruyama等，2006，J.Endocrinol.191，197-205)。Maruyama等人报导了Gpbar在能量稳态中的可能作用。Kawamata等人(“A Gprotein-coupled receptor responsive to bile acids(响应胆汁酸的G蛋白偶联受体)”J.Biol.Chem.278，9435-9440，2003)报导了胆汁酸受体TGR5在抑制巨噬细胞功能中的可能作用。
酸味和咸味受体：已提出了感觉酸味和咸味的许多候选受体和转导机制(Miyamoto等，2000，Prog.Neurobiol.62：135-157)。例如，有研究提出酸感受离子通道-2(ASIC2)在大鼠中起酸味受体的作用(Ugawa等，2003，J.Neurosci.23：3616-3622；Ugawa等，1998，Nature395：555-556)。HCN1和HCN4(超极化激活环核苷酸门控通道(HCN)的成员)也是候选酸味受体通道(Stevens等，2001，Nature 413：631-635)。在TRP通道家族中，PKD家族的成员(多囊性肾病，亦称TRPP或多囊蛋白)具有独特性质(Delmas等，2004，Biochem.Biophys.Res.Commun.322：1374-1383；Nauli和Zhou，2004，Bioessays 26：844-856)。两个TRP通道成员PKD 1L3(Genbank登记号AYl 64486，鼠，核酸；AAO32799，鼠，氨基酸；AYl 64485，人，核酸和AAO32798，人，氨基酸)和PKD2L1(Genbank登记号NM_181422，鼠，核酸；NP_852087，鼠，氨基酸；NM_016112，人，核酸和NP_057196，人，氨基酸)在与苦味、甜味或鲜味感觉细胞无关的味觉受体细胞亚类中特异性表达。所述蛋白质定位于检出味元的味细胞顶端。PKD1L3和PKD2L1异聚体形成是功能性细胞表面表达所需要的，每当PKD1L3和PKD2L1在异源细胞中表达时，它们都被酸味溶液激活。因此，PKD1L3和PKD2L1在哺乳动物中共同起酸味受体的作用，虽然对机制的了解不是实施本发明所必需的，而且本发明不限于任何特定的作用机制。
脂肪受体：本文使用的脂肪受体意指任何转运蛋白受体或与摄取的脂肪结合的其它分子。已对脂肪的化学感受受体进行了充分表征，虽然有可能涉及已知存在于胃肠道的脂肪酸转运蛋白。已经报导了小鼠脂肪酸转运蛋白CD36是潜在的脂肪味觉受体(Laugerette等，2005，“CD36 involvement in orosensory detection of dietary lipids，spontaneousfat preference，and digestive secretions(CD36参与膳食脂质、本能脂肪喜好和消化性分泌的口感觉查)”，Journal of Clinical Investigation115(11)：3177-84)。研究发现在大鼠中，与肠粘膜远端相比，CD36在近端以较高水平表达(Chen等，2001，“Gut expression and regulationof FAT/CD36：possible role in fatty acid transport in rat enterocytes(脂肪/CD36的肠表达和调节：大鼠肠细胞中脂肪酸转运的可能作用)”，Am JPhysiol Endocrinol Metab.281(5)：E916-23)。
据推测，当配体与GPCR结合时，受体经历导致G蛋白活化的构象变化。G蛋白由3个亚基组成：结合鸟苷酸的α亚基、β亚基和γ亚基。G蛋白在两种形式之间循环，这取决于GDP或GTP是否与α亚基结合。如果结合GDP，则G蛋白以异三聚体存在：Gαβγ复合体。如果结合GTP，则α亚基从异三聚体中解离，留下Gβγ复合体。如果Gαβγ复合体与细胞膜中的活化G蛋白偶联受体有效缔合，以GTP交换结合的GDP的比率提高，而结合的Gα亚基从Gαβγ复合体上解离的比率提高。游离Gα亚基和Gβγ复合体因此能够将信号转导至各种信号转导途径的下游元件上。这些事件形成不同细胞信号转导现象的多样性的基础，包括例如鉴定为神经感官知觉(例如味觉和/或嗅觉)的信号转导现象(参见例如美国专利号5,691,188)。
激素
本发明提供用于调节循环肠内分泌细胞激素的水平的组合物和方法，所述激素包括但不限于GLP-1、GLP-2、GIP、泌酸调节肽、PYY、CCK、肠高血糖素、胰岛素、胰高血糖素、胰岛素C肽、SGLT-1等，所述方法包括将至少一种化学感受受体配体给予受试者以治疗与化学感受受体相关的病况。通过将激动剂或激动剂的组合给予甜味受体、鲜味受体、苦味受体、脂肪酸受体和/或胆汁酸受体来实现激素调节。在实施方案中，通过给予顶端钠依赖性胆汁酸转运蛋白(ASBT)抑制剂，使胆汁酸水平升高并延伸到下胃肠道。
在具体的实施方案中，甜味、鲜味、苦味、游离脂肪酸和胆汁酸受体的一种或多种激动剂的组合和/或ABST抑制剂可刺激从肠内分泌细胞中同时释放重要的激素和神经信号，因此有利于膳食营养物的同化和处置(disposition)。重要的是要注意，这些激素中的一些当单独给予时没有重大作用，但一起释放时可起累加和/或协同作用。例如，PYY 3-36作为单一疗法时在临床上是令人失望的(Nastech PressRelease)。因此，在实施方案中，本发明提供肠激素的共同协调并同时释放，而不把特定活性只归于单一激素。由于肠内分泌细胞刺激，可以预期一种或多种下列已知激素的释放发生改变：GLP-1、GLP-2、GIP、泌酸调节肽、PYY、CCK、胰岛素、胰高血糖素、胰岛素C肽、肠高血糖素、SGLT-1以及有待表征的由诸如L细胞、K细胞和I细胞等肠内分泌细胞释放的激素。激素释放的这种调节可导致有益的治疗效果，例如，在糖尿病和相关病症(前驱糖尿病、多囊卵巢病)、炎性肠病、肠损伤和骨质疏松症的治疗中更好地控制葡萄糖(例如通过GLP-2的释放)；在高脂血症的治疗中降低循环脂质以及在肥胖症的治疗中减少食物摄取和调节能量稳态(体重减轻)。与DPP-IV抑制剂一起给予这些成分的一种或多种可提高治疗效果，因为GLP-1、GLP-2和GIP被DPP-IV快速清除。
表明甜味、鲜味、游离脂肪酸和胆汁酸受体和/或ABST抑制剂可用来提高GLP-1水平的体内证据，包括：
人体中十二指肠内葡萄糖递送期间GLP-1的释放(参见例如Kuo等，2008，“Transient，early release of glucagon-like peptide-1 during lowrates of intraduodenal glucose delivery(低速十二指肠内葡萄糖递送期内胰高血糖素样肽-1的早期短暂释放)”，Regul Pept 146，1-3)。
人体中，给予α-葡糖苷酶抑制剂米格列醇后观察到餐后GLP-1水平升高(参见例如Lee等，2002，“The effects of miglitol onglucagon-like peptide-1 secretion and appetite sensations in obese type 2diabetics(肥胖2型糖尿病中米格列醇对胰高血糖素样肽-1分泌和食欲感的作用)”，Diabetes Obes Metab 4，329-335)。
在大鼠中，给予米格列醇后GLP-1的增加与给予DPP-IV抑制剂协同作用(Goto等，2008，Poster P-470ADA)。
菊粉型果聚糖(不易消化的果糖聚合物)刺激GLP-1分泌(参见例如Delzenne等，2007，“Modulation of glucagon-like peptide 1 and energymetabolism by inulin and oligofructose：experimental data(菊粉和低聚果糖对胰高血糖素样肽1和能量代谢的调节：实验数据)”，J Nutr 137，2547S-2551S和Niness等，1999，“Inulin and oligofructose：what are they(菊粉和低聚果糖：它们是什么)？”J Nutr 129，1402S-1406S)。
将谷氨酸盐，一种鲜味激动剂，给予大鼠导致体重增加减缓和腹部脂肪减少(参见例如Kondoh等，2008，“MSG intake suppresses weightgain，fat deposition，and plasma leptin levels in male Sprague-Dawley rats(雄性Sprague-Dawley大鼠中MSG摄入抑制体重增加、脂肪沉积和血浆瘦蛋白水平)”，Physiol Behav 95，135-144)。
经口给予小鼠游离脂肪酸导致门静脉和全身GLP-1浓度升高(参见例如Hirasawa等，2005，“Free fatty acids regulate gut incretinglucagon-like peptide-1 secretion through GPR120(游离脂肪酸通过GPR120调节肠降血糖素胰高血糖素样肽-1分泌)”，Nat Med 11，90-94)。
与对照小鼠相比，G蛋白偶联胆汁酸受体1缺陷型小鼠具有显著较高的脂肪蓄积和体重增加(参见例如Maruyama等，2006，引用如上)。
用三氯半乳蔗糖和谷氨酸盐灌注大鼠空肠的体内研究表明，甜味和鲜味受体调节葡萄糖、肽和谷氨酸盐吸收(参见例如Mace等，2008，“An energy supply network of nutrient absorption coordinated by calciumand T1R taste receptors in rat small intestine(大鼠小肠中通过钙和T1R味觉受体协调的营养吸收的能量供应网络)”，J Physiol)。
通过直肠给药向人提供胆汁酸引起PYY的释放(参见例如Adrian等，1993，“Deoxycholate is an important releaser of peptide YY andenteroglucagon from the human colon(脱氧胆酸盐是人结肠的肽YY和肠高血糖素的重要释放物)”，Gut 34(9)：1219-24)。
化学感受受体配体
许多化学感受受体配体或味元是本领域已知的，在文献中已有报导。鲜味受体配体的非限制性实例包括谷氨酸盐、谷氨酰胺、乙酰甘氨酸和阿司帕坦。除本文和引用的文献原稿中列举的以外，更多的鲜味受体配体是本领域技术人员已知的，可采用本领域已知的和本文描述的方法鉴定出甚至更多的鲜味受体配体。
脂肪受体配体的非限制性实例包括亚油酸、油酸、棕榈酸酯、油酰基乙醇酰胺、混合脂肪酸乳液和N-乙酰磷脂酰乙醇胺(NAPE)、肉豆蔻脑酸、棕榈油酸、α-亚麻酸(linolinic acid)、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸和二十二碳六烯酸。除本文和引用的文献原稿中列举的以外，更多的脂肪受体配体是本领域技术人员已知的，可采用本领域已知的和本文描述的方法鉴定出甚至更多的脂肪受体配体。
胆汁酸包括胆酸、脱氧胆酸、牛磺胆酸和鹅脱氧胆酸。除本文和引用的文献原稿中列举的以外，更多的胆汁酸受体配体是本领域技术人员已知的，可采用本领域已知的和本文描述的方法鉴定出甚至更多的胆汁酸受体配体。
非限制性的苦味受体配体包括黄烷酮、黄酮、黄酮醇、黄烷、酚类类黄酮、异黄酮、柠檬苦素类化合物糖苷配基、芥子油苷或其水解产物、咖啡因、奎宁、苦瓜(Momordica charantia)(bitter melon)提取物和异硫氰酸酯。例如在Drewnowski和Gomez-Carneros，AmericanJournal of Nutrition，72(6)：1424(2000)中描述了某些苦味元。除本文和引用的文献原稿中列举的以外，更多的苦味受体配体是本领域技术人员已知的，可采用本领域已知的和本文描述的方法鉴定出甚至更多的苦味受体配体。下表中列举了可为苦味受体配体的普通植物性食物中的示例性苦味植物性营养素(phytonutrient)。
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非限制性的甜味受体配体包括三氯半乳蔗糖、阿司帕坦、瑞鲍迪苷、蛇菊苷、纽甜、乙酰舒泛钾和糖精。更多的甜味受体配体和味元参见例如Kim等，2002，“Highly sweet compounds of plant origin(植物来源的高甜味化合物)”，Arch Pharm Res.25(6)：725-46和Kinghorn等，1989，“Intensely sweet compounds of natural origin(天然来源的强甜味化合物)”，Medicinal Research Reviews 9(1)：91-115。除本文和引用的文献原稿中列举的以外，更多的甜味受体配体是本领域技术人员已知的，可采用本领域已知的和本文描述的方法鉴定出甚至更多的甜味受体配体。下表列举了改编自Kim等人(2002)的示例性植物来源的甜味受体配体。
Figure BPA00001482422400182
Figure BPA00001482422400191
Figure BPA00001482422400211
Figure BPA00001482422400221
Figure BPA00001482422400231
Figure BPA00001482422400241
a重量比较基础上对于蔗糖(＝1.0)的相对甜度值
b天然产物的半合成衍生物。
cN.S.＝甜度效价未给出。
d相对甜度随蔗糖浓度而变化。
e旧称戈司维若果(Momordica grosvenorii Swingle)和罗汉果(Thladianthagrosvenorii(Swingle)C.Jeffrey)(Kinghorn和Kennelly，1995)。
f鉴定为这6种物种的甜味组分。然而，该化合物在植物界有更广的分布。
g可将植物源压碎或发酵以产生叶甜素
与本文所列举的和所引用文献原稿相比，更多的非代谢化学感受器配体或味元是本领域技术人员已知的，可采用本领域已知的和本文描述的方法鉴定出甚至更多的化学感受器配体或味元。
在实施方案中，本发明提供味元或非代谢的配体与代谢配体(即同样也是代谢物的化学感受受体配体)的共同给予。例如，甜味受体味元及其关联代谢物(cognate metabolite)的组合可以是三氯半乳蔗糖和葡萄糖。其它代谢的甜味受体配体包括例如果糖和半乳糖。预期阿司帕坦在与甜味受体活化和氨基酸代谢两者有关的反应中起作用。
在一些情况下，预期将味元与代谢物组合提高所产生的激素调节。在相关实施方案中，将一种受体的味元与不同受体的代谢配体组合提高所引起的激素表达的调节。在实施方案中，用味元和代谢物的不同组合刺激L细胞产生不同的激素表达谱。取决于待治疗的病况或甚至待治疗的特定个体，某些表达谱更为所需的。
在大多数内分泌细胞***(例如胰岛的β细胞)中，为了产生适当的激素分泌水平，细胞需要感受刺激物(在β细胞的情况下为葡萄糖)，而且在营养物驱动的激素释放的情况下，感受的营养物的代谢需要完全分泌活化。已认识到，感受和代谢两者都可引起激素的分泌释放。例如，钙感受足以满足甲状旁腺激素释放。因此，对于完全肠内分泌活化，重要的是营养物既被合适的味觉受体感受又发生代谢。
在实施方案中，可通过共同给予甜味受体激动剂(例如三氯半乳蔗糖、阿司帕坦或蛇菊苷等)和一定量的D-葡萄糖(例如介于0.1-10mg/kg/分钟)，来实现甜味受体激动作用。根据目标激素，与仅味元或葡萄糖相比，共同给予可产生对激素释放更显著的作用。
非代谢化学感受配体的鉴定
可采用本领域已知的和文献中描述的许多测定法来测定味觉转导。例如，美国专利号7,105,650描述了体外结合测定法、荧光偏振测定法、固态和可溶性高通量测定法、基于计算机的测定法、基于细胞的结合测定法和利用表达味觉受体的转基因动物的测定法。
可使用人胃肠细胞或细胞膜测试与直接或间接参与代谢、消化或食欲的味觉信号转导蛋白和/或胃肠蛋白质激素、神经递质或可溶性介质相互作用的化合物，例如味元、激活物、抑制剂、增强剂、刺激物、激动剂、拮抗剂、调节剂和模拟物。可以采用味觉调节的测定法，其中参与代谢、消化或食欲的味觉信号转导蛋白和/或胃肠蛋白质激素、神经递质或可溶性介质起化合物对信号转导的作用的直接或间接报道分子的作用。可将人胃肠细胞或其膜用于这类测定法，例如以测定或检测由细胞合成或分泌的一种或多种味觉信号转导蛋白和/或一种或多种胃肠蛋白质激素、神经递质或可溶性介质的水平的变化，或者检测或测定膜电位、电流、离子流、转录、磷酸化、去磷酸化、信号转导、受体-配体相互作用、第二信使浓度等的变化。
可如下鉴定味觉转导的调节剂：通过使人胃肠细胞或其膜与味元接触，其中所述细胞或膜包含一种或多种味觉信号转导蛋白；使所述细胞或其膜与化合物接触，并评价所述化合物对味元介导的味觉转导的作用，其中改变味元介导的味觉转导的化合物为调节剂。人胃肠细胞或其膜可用于间接报道分子测定法以检测化合物、味元、代谢物或其组合是否影响参与代谢的一种或多种胃肠蛋白质激素、神经递质或可溶性介质的味觉转导和/或信号转导(参见例如Mistili和Spector，1997，Nature Biotechnology，15，961-64)。
可通过研究例如光谱性质(例如荧光、吸光度、折射率)或流体动力学性质(例如形状)、色谱性质或溶解性质的变化，将胃肠细胞或其膜用于测定影响信号转导的化合物、味元、代谢物或其组合的结合。人胃肠细胞或其膜可用来研究化合物、味元、代谢物或其组合对受体和G蛋白之间相互作用的影响。例如，可研究G蛋白与受体的结合或G蛋白从受体中的释放。在缺乏GTP时，激活物将导致G蛋白所有3个亚基与受体形成紧密的复合体。如上所述，可用多种方法检测这种复合体。可对这类测定法进行改进以搜寻味觉转导的抑制剂或一种或多种胃肠蛋白质激素、神经递质或可溶性介质的信号转导的抑制剂。例如，可在缺乏GTP时，将激活物加至受体和G蛋白，使得形成紧密复合体，然后可通过研究受体-G蛋白复合体的解离来筛选抑制剂。在GTP存在时，从其它2个G蛋白亚基中G蛋白α亚基的释放作为活化的标准。
被激活或受抑制的G蛋白进而可影响信号转导途径的下游步骤，这影响例如目标酶、通道和其它效应物的性质。下游步骤的实例包括cGMP磷酸二酯酶被视觉***中的转导蛋白激活、腺嘌呤环化酶被刺激性G蛋白激活、磷脂酶C被Gq和其它关联G蛋白激活以及不同通道被Gi和其它G蛋白调节。在一些实施方案中，人胃肠细胞或其膜可用来研究化合物、味元、代谢物或其组合对信号转导的中间步骤的作用，例如通过磷脂酶C产生二酰基甘油和IP3，进而由IP3引起钙动员。在一些实施方案中，化合物、味元、代谢物或其组合可直接作用于例如G蛋白，这间接影响下游事件。在一些实施方案中，化合物、味元、代谢物或其组合可直接影响下游效应物。测定味觉信号转导和胃肠蛋白激素信号转导的一般性综述和方法参见例如载于以下文献的方法：Enzymology，第237和238卷(1994)和第96卷(1983)；Bourne等，Nature，10，117-27(1991)；Bourne等，Nature，348，125-32(1990)；Pitcher等，Annu.Rev.Biochem.，67，653-92(1998)；Brubaker等，Receptors Channels，8，179-88(2002)；Kojima等，Curr.Opin.Pharmacol.，2，665-68(2002)；Bold等，Arch Surg.，128，1268-73(1993)。
可通过进行本文所述的和本领域已知的测定法，来研究化合物、味元、代谢物或其组合对味觉信号转导多肽和/或胃肠蛋白质激素、神经递质或可溶性介质的作用。影响这些信号转导途径的任何适当的生理变化都可用来评价化合物对本发明细胞的影响。
在任何上述测定法中，可用各种方法检测或测定化合物、味元、代谢物或其组合对信号转导的作用。例如，可以检测或测定诸如递质释放、激素释放等的作用、已知的和未表征的遗传标记的转录改变(例如RNA印迹)、细胞代谢(例如细胞生长)的改变或pH改变、离子流、磷酸化、去磷酸化以及胞内第二信使(例如Ca2+、IP3、DAG、PDE、cGMP或cAMP)的改变。第二信使水平的改变可任选采用例如荧光Ca2+指示剂染料和荧光成像测定。
在一些实施方案中，可通过使用带有报道受体活性的离子或电压敏感染料的细胞来测定化合物、味元、代谢物或其组合对G蛋白偶联受体的作用。研究这类蛋白质的活性的测定法还可使用其它G蛋白偶联受体的已知激动剂和拮抗剂作为阴性或阳性对照以评价受试化合物的活性。为了鉴定调节化合物，可分别采用离子敏感或膜电压荧光指示剂，来监测胞质中的离子或膜电压水平的变化。可以采用的离子敏感指示剂和电压探针有由Molecular Probes或Invitrogen销售的离子敏感指示剂和电压探针。对于G蛋白偶联受体，可将松弛(lax)G蛋白(例如Ga15和Ga16)用于选定的测定法(Wilkie等，1991，PNAS 88，10049-53)。这类松弛G蛋白可供多种受体偶联。
可通过计算胞质钙离子水平的变化来测定化合物、味元、代谢物或其组合的作用。在一些实施方案中，可测定第二信使(例如IP.sub.3)的水平以评价G蛋白偶联受体功能(Berridge和Irvine，1984，Nature，312，315-21)。表达这类G蛋白偶联受体的细胞的胞质钙水平可因来自胞内储备和通过离子通道的活化两者的贡献而提高，在这种情况下可能需要但不一定在任选补充螯合剂(例如EGTA)的无钙缓冲液中进行这类测定法，以辨别由内部储备释放的钙引起的荧光反应。
化合物、味元、代谢物或其组合的作用可通过测定蛋白质的活性来测定，所述蛋白质当被激活时，通过激活或抑制酶(例如腺嘌呤环化酶)使胞内环核苷酸(例如cAMP或cGMP)水平改变。存在环核苷酸门控离子通道，例如，在通过cAMP或cGMP结合活化时可透过阳离子的视杆光感受器细胞通道和嗅觉神经元通道(参见例如Altenhofen等，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，88，9868-72和Dhallan等，1990，Nature，347，184-87)。在其中蛋白质的活化导致环核苷酸水平降低的情况下，在该测定法中优选在将化合物加到细胞中之前，将细胞暴露于提高胞内环核苷酸水平的物质中，例如毛喉素。
可应用免疫测定法或生物测定法，通过计算胞内cAMP或cGMP水平的改变(Simon，1995，J.Biol.Chem.，270，15175-80；Felley-Bosco等，1994，Am.J.Resp.Cell and Mol.Biol.，11，159-64；以及美国专利号4,115,538)，或者按照例如美国专利号5,436,128，通过分析磷脂酰肌醇(PI)水解，来测定化合物、味元、代谢物或其组合的作用。
转录水平还可为转录计算的。可使含有目标蛋白质的人细胞或其膜与化合物、味元、代谢物或其组合接触足够的时间以引起任何相互作用，然后测定基因表达的水平。可以凭经验确定引起这类相互作用的时间量，例如通过运行一个时程并测定随时间而变化的转录水平。可通过采用本领域技术人员已知是适当的任何方法来测定转录的量。例如，目标蛋白质的mRNA表达可应用RNA印迹法检测，或者多肽产物可应用免疫测定法或生物测定法进行鉴定。或者，可按照美国专利号5,436,128中的描述，采用使用报道基因的基于转录的测定法。报道基因可以是例如氯霉素乙酰基转移酶、萤火虫萤光素酶、细菌萤光素酶、β半乳糖苷酶和碱性磷酸酶。此外，目标蛋白质可通过与第二报道分子(例如绿色荧光蛋白质)连接而用作间接报道分子(参见例如Mistili和Spector，1997，Nature Biotechnology，15，961-64)。
然后将转录的量与缺乏化合物、味元、代谢物或其组合情况下的相同细胞中的转录的量进行比较。或者，可将转录的量与缺乏目标蛋白质的基本相同的细胞中转录的量进行比较。例如，基本相同的细胞可来源于从其中制备重组细胞但未通过导入异源DNA修饰的相同细胞。转录的量的任何差异表明化合物、味元、代谢物或其组合以某种方式改变了目标蛋白质的活性。在一些实施方案中，化合物、味元、代谢物或其组合与已知的转录激动剂或拮抗剂组合给予，以测定化合物、味元、代谢物或其组合是否可改变激动剂或拮抗剂的活性。
受测化合物、味元、代谢物或其组合可以是任何小的化合物或生物实体，例如蛋白质、氨基酸、糖、核酸或脂质。或者，化合物可以是味觉信号转导蛋白的变体。化合物通常可为化学小分子和肽。在本发明的测定法中，基本上任何化合物可用作潜在的味元、代谢物或其组合，虽然最常使用溶于水溶液或有机溶液的化合物。可通过使测定步骤自动化(例如在自动测定法中微量滴定板上的微量滴定形式中)，应用所述测定法来筛选大的化学文库。
局部激素浓度
由肠内分泌细胞分泌的肠激素从其基底外侧面释放到肠系膜静脉循环中。因此，这些激素穿过引流所有肠系膜静脉流出物的门静脉区。肠激素(通常为肽)也是神经递质，因此可刺激从肠中传出的传入神经末梢。普遍认可的是，CCK引起传入迷走神经活化，且其生理作用几乎无例外地是由这种神经活化引起的。诸如GLP-1、泌酸调节肽、PYY和GIP等激素及其DPP-IV降解后的分解产物在肠神经水平上可具有生理作用，并且可激活门静脉受体/信号转导途径以引起肝传入的活化。GLP-1引起葡萄糖依赖性胰岛素分泌的作用被认为主要是通过神经活化引起的，因为其在释放后被DPP-IV的降解立即开始，这引起其循环半寿期少于2分钟。此外，GLP-1的门静脉∶动脉梯度大(＞4∶1)，因此使其内分泌功能极为不足。考虑到其门静脉∶外周梯度及其作为神经递质激活肠传入神经的作用以及其引起肝传入的门静脉活化的作用，似乎可能的是，可在没有大的循环外周(动脉或肝后静脉)浓度波动(甚至可能为不可检测的变化)情况下产生GLP-1生理作用和药理作用。因此GLP-1类似于作为神经递质但溢出到循环中的去甲肾上腺素；像GLP-1一样，可在外周注入去甲肾上腺素以起激素作用以再现其许多的生理功能。因此，在实施方案中，本文提供的组合物和方法通过提高肠激素的门静脉浓度同时最低程度地增加外周浓度，而对血液葡萄糖和体重减轻产生有益效果。
组合
本发明的化学感受受体配体可以单独给予或彼此组合给予。在其它实施方案中，化学感受受体配体或其组合还与一种或多种代谢物一起给予。各种化学感受受体配体(即结合和/或调节甜味、鲜味、苦味、脂肪、酸味和/或胆汁酸受体的配体)的剂量可通过本文公开的和存在于实施例中的方法确定。可通过本文描述的和存在于实施例中的动物和人实验方案确定最大反应剂量和最大耐受剂量。通过所述方案容易地得到用最大反应剂量或最大耐受剂量的百分比表示的其它相对剂量。
在一个示例性剂量反应实验中，在动物模型(例如糖尿病或肥胖大鼠模型)中，分别给予与5种化学感受受体相应的化学感受受体配体(例如三氯半乳蔗糖、MSG、奎宁、脂肪酸乳液和鹅脱氧胆酸)和葡萄糖，以测定各种化学感受受体配体的最佳剂量以及代谢物剂量。以渐增量(mg/kg/分钟)分别给予化学感受受体配体和葡萄糖，其中将设定的mg/kg/分钟剂量给予各受试者，并且将剂量保持在该设定水平达规定时间。在整个期间以常用间隔(例如每隔1、2或5分钟)采集血样并测定激素水平。所测定的激素包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素C-肽和GLP-2。测定各种化学感受受体配体和代谢物的50％最大反应剂量和50％最大耐受剂量。
在一些实施方案中，以作为最大反应剂量的50％的浓度给予至少一种化学感受受体配体。在其它实施方案中，以作为最大耐受剂量的50％的浓度给予至少一种化学感受受体配体。可以最大反应剂量或最大耐受剂量的5％、10％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％(其中的所有整数也包括在内)给予化学感受受体配体和代谢物。
或者，本发明的化学感受受体配体可按重量计量给予。举例来讲，可以约0.01-约100mg/kg(其中的所有整数也包括在内)的量给予甜味、鲜味和苦味受体配体(例如三氯半乳蔗糖、葡萄糖、谷氨酸一钠、奎宁)。脂肪或脂肪酸受体配体(例如Intralipid
Figure BPA00001482422400311
)可以按0.5-10ml/分钟递送的浓度范围为约0.5％-约20％溶液的乳液/溶液给予。同样，胆汁酸受体配体(例如鹅脱氧胆酸或CDC)可按1-10ml/分钟递送的浓度范围为约1-约50mMol的溶液给予。代谢物，包括诸如葡萄糖和谷氨酸盐等非限制性实例，可以约0.1-约10mg/kg的范围(其中的所有整数也包括在内)的量给予。
化学感受受体配体和代谢物的组合以单一组合物或多种组合物给予。可同时或在不同时间给予组合物。可以不同的递送形式(即片剂、散剂、胶囊剂、凝胶剂、液体制剂、可食用食物制品(例如药用食物、食物棒(bars)、冻胶、流质食品等)和这类形式的任何组合给予组合物。在一个非限制性实例中，含有至少一种化学感受受体配体和/或代谢物的片剂与另一种含有至少一种化学感受受体配体和/或代谢物的片剂同时给予以提供所需剂量。在另一个实例中，在不同时间给予2种片剂。在另一个非限制性实例中，给予含有所需要的化学感受受体配体和/或代谢物的组合的片剂以提供完全剂量。本文考虑递送形式、组合物和递送时间的任何组合。本发明提供的组合物的组分可根据各个组分和组分的相对比例而变化。在实施方案中，使组分的相对比例最优化以从药物组合中产生所需要的协同活性。例如，在包含两种组分(例如2种化学感受受体配体)的组合物中，或者在包括给予两种组分(例如2种化学感受受体配体)的方法中，所述组分可按以下比率或大致按以下比率存在：例如1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8、1∶9、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40、1∶45、1∶50、1∶60、1∶70、1∶80、1∶90、1∶100、1∶200、1∶300、1∶400、1∶500、1∶1000等。在包含三种组分(例如两种化学感受受体配体和一种对应于至少一种化学感受受体配体的化学感受受体代谢物)的组合物中，或者在包括给予三种组分(例如两种化学感受受体配体和一种对应于至少一种化学感受受体配体的化学感受受体代谢物)的方法中，所述组分可按以下比率或大致按以下比率存在：例如1∶1∶1、2∶1∶1、2∶2∶1、3∶1∶1、3∶3∶1、3∶2∶2、3∶3∶2、3∶2∶1、4∶1∶1、4∶4∶1、4∶2∶2、4∶4∶2、4∶2∶3、4∶3∶3、4∶4∶3、4∶2∶1、5∶1∶1、5∶5∶1、5∶2∶1、5∶3∶1、5∶3∶2、5∶3∶4、5∶5∶2、5∶5∶3、5∶5∶4、10∶1∶1、10∶10∶1等。
在一些实施方案中，本发明提供经选择以模拟混合膳食的组合治疗。例如，一种或多种碳水化合物(甜味)和一种或多种蛋白质(鲜味)可以二重组合和三重组合使用。可采用本发明的方法和本文描述的方法评价组合。例如，对于待治疗的病况，合乎要求的组合可产生所需要的激素释放、葡萄糖降低和食欲抑制。在实施方案中，可以评价对其它化学感受受体有特异性的其它味元，并将之包括在采用本发明的方法适当确定的组合中。如果考虑5种味元T1-T5(分别为甜味、苦味、鲜味、脂肪和胆汁酸)，则所有5种味元的有1种组合(T1T2T3T4T5)；四重味元组合有5种可能的组合(T1T2T3T4、T1T2T3T5、T1T2T4T5、T1T3T4T5、T2T3T4T5)；三重组合有10种可能性(T1T2T3、T1T2T4、T1T2T5、T1T3T4、T1T3T5、T1T4T5、T2T3T4、T2T3T5、T2T4T5、T3T4T5)和二重组合有10种可能性(T1T2、T1T3、T1T4、T1T5、T2T3、T2T4、T2T5、T3T4、T3T5、T4T5)。
在一些实施方案中，本发明提供一种或多种不可代谢化学感受受体配体与一种或多种可代谢化学感受受体配体的组合。在一些实施方案中，不可代谢化学感受受体配体在可代谢化学感受受体配体之前给予。在其它实施方案中，不可代谢化学感受受体配体在可代谢化学感受受体配体之后给予。在另外的其它实施方案中，不可代谢化学感受受体配体与可代谢化学感受受体配体相似的时间给予。在某些情况下，一种或多种可代谢化学感受受体配体来源于食物。在某些方面，合乎要求的组合可提高和增强由于食物给予的激素信号转导和分泌。组合的非限制性实例包括在给予糖之前、之后或同时给予三氯半乳蔗糖。在一些方面，将不可代谢化学感受受体配体递送到肠下部，而将可代谢化学感受受体配体递送到肠上部。可代谢化学感受受体配体也可以位于或不位于肠下部。在其它方面，将不可代谢化学感受受体配体递送到与可代谢化学感受受体配体相同的胃肠区域。
当与至少一种其它配体或化合物组合使用不止一种化学感受受体配体时，要了解的是，组合治疗方案包括这样的治疗方案，其中在用组合中的第二物质或其它物质治疗之前、期间或之后开始给予一种化合物，并持续到用组合中的任何其它物质治疗期间或用任何其它物质治疗终止后的任何时间。治疗方案还包括同时或不同时间给予和/或在治疗期内以递减或递增的间隔给予用于组合的物质的方案。组合治疗包括在不同时间开始和停止的周期治疗以有助于患者的临床管理。
适应症
本发明的方法适用于治疗与化学感受受体相关的病况或病症。准确地讲，这些病况包括其中受化学感受受体刺激调节的代谢激素的调节产生不良作用的病况。预期采用本发明的方法治疗的与化学感受受体有关的病况有代谢综合征、I型糖尿病、II型糖尿病、肥胖症、暴食症(binge eating)、不良嗜食癖(undesired food cravings)、食瘾、减少食物摄取或减轻体重或保持体重减轻的欲望、食欲缺乏、葡萄糖耐受不良、妊娠糖尿病(GDM)、血脂异常、餐后血脂异常、骨丢失病症、骨质减少、骨质疏松症、肌肉萎缩病、肌肉变性病症(muscledegenerative disease)、多囊性卵巢综合征(PCOS)、非酒精性脂肪性肝病(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、抑郁症、心境障碍、肠免疫疾病(例如乳糜泻)、肠紊乱(bowel irregularity)、过敏性肠综合征(IBS)或炎性肠病(IBD)，包括例如溃疡性结肠炎、克罗恩病和短肠综合征。
作为一个具体实例，本发明提供用于治疗其中由于调节肠内分泌细胞激素(例如GLP-1或GIP)而产生的胰岛素分泌增加或葡萄糖水平控制可能是有益的病况的组合物和方法。这些病况包括但不限于代谢综合征、I型糖尿病、II型糖尿病、妊娠糖尿病、葡萄糖耐受不良和相关病况，包括其中患者患有葡萄糖耐受不良的相关病况。
本发明还提供用于通过因响应腔内化学感受刺激而从肠中传出的神经和激素信号的释放，调节产生和分泌胰岛素的细胞(β细胞)的生长(增殖)和/或生殖(新生)和/或防止所述细胞的细胞死亡(细胞凋亡)的组合物和方法。肠激素(例如GLP-1、PYY、GLP-2和促胃液素)均参与β细胞保护或β细胞大量扩繁的过程。一方面，化学感受刺激提供与神经信号偶联的激素信号。激素信号可在神经信号之前、之后或在类似的时帧内产生。
本发明还提供用于治疗其中由于调节例如PYY、泌酸调节肽和/或CCK所引起的食欲抑制可能是有益的病况的组合物和方法。这些病况包括但不限于肥胖症、暴食症、不良嗜食癖、减少食物摄取或减轻体重或保持体重减轻的欲望和相关病况。
还提供用于治疗其中由于调节例如GLP-2引起的肠细胞增殖可能是有益的病况的组合物和方法，所述病况包括但不限于短肠综合征、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎和导致肠损伤的其它病况，包括骨质疏松症。
治疗方法
葡萄糖代谢病症
本发明提供用于治疗葡萄糖代谢病症及其相关病况的组合物和方法。
例如，本文提供用于治疗患有包括原发性特发性糖尿病(例如I型糖尿病或II型糖尿病(NIDDM))和继发性非特发性糖尿病在内的糖尿病的哺乳动物受试者的方法，所述方法包括给予受试者至少一种本文所述的化学感受受体配体。按照本发明的方法，可减轻糖尿病的症状或减少发生糖尿病的症状的机会，例如动脉粥样硬化、肥胖症、高血压、高脂血症、脂肪性肝病、肾病、神经病、视网膜病、足溃疡和白内障，各种这类症状都与糖尿病有关。
本发明提供的方法和组合物可用于预防或改善与高血糖症和胰岛素抵抗或胰岛素水平低有关的疾病和症状。虽然在各患者中可同时存在多种相关的体征和症状，但是由于受累于胰岛素抵抗的许多生理***易损性的个体差异所致，在许多情况下可能只有一种症状占优势。虽然如此，由于高血糖症和胰岛素抵抗是许多病况的主要促成因素，因此克服这些细胞和分子缺陷的物质可用于预防或改善可由高血糖症和胰岛素抵抗引起或加重的几乎任何器官***的任何症状。
代谢综合征是一系列的代谢异常，包括腹部肥胖症、胰岛素抵抗、葡萄糖耐受不良、糖尿病、高血压和血脂异常。已知这些异常与血管性事件风险升高有关。
除上述与胰岛素抵抗有关的代谢病症以外，高血糖症继发的疾病症状也发生在NIDDM患者中。这些包括肾病、外周神经病、视网膜病、微血管疾病、肢端溃疡和蛋白质非酶促糖基化的后果，例如胶原和其它***损伤。减轻高血糖症降低发病率和这些糖尿病后果的严重程度。因为本发明的组合物和方法有助于减轻糖尿病的高血糖症，因此可用于预防和改善慢性高血糖症的并发症。
血液中甘油三酯和游离脂肪酸水平升高影响相当一部分人口，而且是动脉粥样硬化和心肌梗死的重要风险因子。本文提供可用于降低高脂血症患者的循环甘油三酯和游离脂肪酸的组合物和方法。高脂血症患者还常常具有高的血液胆固醇水平，其同样增加心血管疾病的风险。除了本发明的化学感受受体配体组合物以外，可将任选掺入同一药物组合物中的降胆固醇药(例如HMG-CoA还原酶抑制剂(“他汀类”))给予高脂血症患者。
相当一部分人口受累于脂肪性肝病，亦称为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；NASH常与肥胖症和糖尿病有关。肝性脂肪变性(肝细胞中存在甘油三酯液滴)，使肝易患慢性炎症(在活检样品检出炎性白细胞浸润)，这可导致纤维变性和肝硬变。一般通过观察肝特异性酶(例如用作肝细胞损伤指数的转氨酶ALT和AST)的血清水平升高以及通过包括疲倦和肝区疼痛在内的症状的出现来检测脂肪性肝病，虽然最后的诊断常常需要活组织检查。预计益处是减轻肝炎并减少脂肪含量，这将引起NASH发展成纤维变性和肝硬变的进程减缓、停止或逆转。
血内胰岛素不足是其中低于正常量的胰岛素在整个机体内循环，且其中一般不涉及肥胖症的病况。这种病况包括I型糖尿病。
2型糖尿病或葡萄糖代谢异常可由多种因素引起，并且可以表现出多种多样的症状。以前，2型糖尿病被视为相对独特的疾病实体，但是现在的认识揭示了2型糖尿病(及其相关高血糖症或血糖代谢障碍)常常表现出广泛得多的潜在病症，其包括上述代谢综合征。这种综合征有时称为X综合征，并且是一系列心血管疾病风险因子，所述风险因子除了葡萄糖耐受不良外，还包括高胰岛素血症、血脂异常(dyslipidaemia)、高血压、内脏性肥胖症、凝固性过高和微白蛋白尿。
本文还提供用于治疗肥胖症的组合物和方法，所述方法包括以有效治疗所述病况的量将至少一种本文所述的化学感受受体配体给予受试者。可口服给予所述配体，备选地，可根据本发明使用的其它给药途径包括直肠和胃肠外、通过注射(例如通过管腔内肠注射)给予。
可按照本发明的方法治疗人和非人类哺乳动物受试者。在实施方案中，本发明提供用于预防或治疗多种受试哺乳动物的糖尿病的组合物和方法，所述哺乳动物特别是患有糖尿病、已患有糖尿病、疑患糖尿病或易患糖尿病的人类患者。糖尿病选自胰岛素依赖性糖尿病(IDDM或I型糖尿病)和非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM或II型糖尿病)。已经披露了糖尿病相关病症的实例，包括但不限于葡萄糖耐量减低(IGT)；青春晚期糖尿病(MODY)；矮妖精貌综合征(胰岛素受体突变)、热带糖尿病、胰腺疾病或胰腺手术继发性糖尿病；遗传性综合征(例如Prader-Willi综合征)相关糖尿病；胰腺炎；内分泌病继发的糖尿病；肥胖症；以及代谢综合征(X综合征)。
医师可容易地识别适于使用本发明提供的组合物和方法治疗的糖尿病受试者，其通过例如空腹高血糖症、葡萄糖耐量减低、糖基化血红蛋白以及在某些情况下与创伤或病症有关的酮酸中毒来表征。高血糖症或高血糖是其中过量葡萄糖在血浆中循环的病况。血糖水平一般为10+mmol/L，但是症状和影响并不是一开始便能察觉，直到后来达到例如15-20+mmol/L。NIDDM患者在空腹时有异常高的血糖浓度，并且在餐后或在称为葡萄糖耐量试验的诊断性试验后葡萄糖的细胞摄取延迟。根据公认标准诊断NIDDM(American DiabetesAssociation，Physician′s Guide to Insulin-Dependent(Type I)Diabetes(美国糖尿病协会，胰岛素依赖性(I型)糖尿病医师指导)，1988；American Diabetes Association，Physician′s Guide toNon-Insulin-Dependent(Type II)Diabetes(美国糖尿病协会，非胰岛素依赖性(II型)糖尿病医师指导)，1988)。在临床背景下，可由临床技术人员确定用于特定受试者的具体的本发明治疗的最适剂量。
慢性肾病、糖尿病性肾病、黄斑变性和糖尿病相关病况
本文提供的组合物和方法可用于预防或治疗肾病。糖尿病是慢性肾病和肾衰竭最常见的原因，占新病例的几乎44％。甚至当糖尿病得到控制时，该疾病也可导致慢性肾病和肾衰竭。大多数患有糖尿病的人不会发展成严重到足以发展成为肾衰竭的慢性肾病。在美国几乎有2400万人患有糖尿病，差不多18万人忍受因糖尿病引起的肾衰竭。高血压是患有糖尿病的人发生肾脏问题的主要因素。
导致肾小球硬化症的肾小球系膜胞外基质(ECM)蓄积是糖尿病性肾病和其它慢性肾病中的普遍结果。若干方面的证据表明，这类慢性肾病中的ECM蓄积是由ECM成分的合成增加和降解降低两者引起的，普遍认为，肾小球和肾小球细胞中的ECM降解受纤溶酶原激活物-纤溶酶-基质金属蛋白酶-2(MMP)-2级联所介导。另外，许多研究报道了在从带有已知导致肾小球系膜基质蓄积的实验性诱导的肾小球损伤的动物获得的肾小球中，纤溶酶原激活物(PA)活性降低、纤溶酶活性降低或PA抑制剂1(PAI-1；主要的PA抑制剂)水平升高(Baricos等，“Extracellular Matrix Degradation by Cultured Mesangial Cells：Mediators and Modulators(由培养的肾小球系膜细胞引起的胞外基质降解：介质与调质)”(2003)Exp.Biol.Med.228：1018-1022。
黄斑变性(AMD)是负责高敏度视力的中心视网膜部分(称为黄斑)中的光感受器丧失。黄斑变性与胞外基质成分和其它碎片在视网膜色素上皮和脉络膜血管之间的膜中异常沉积有关。这种碎片样物质称为玻璃疣。用眼底镜的眼检查来观察玻璃疣。正常眼可具有不含玻璃疣的黄斑，然而在视网膜周边可富含玻璃疣。在不存在黄斑视觉(macularvision)的任何损失时，黄斑中软玻璃疣的存在被视为AMD的早期。
除其它眼病以外，脉络膜新生血管(CNV)通常发生在黄斑变性中，并且与脉络膜内皮细胞增殖、胞外基质过量产生和视网膜下纤维血管膜形成有关。视网膜色素上皮细胞增殖和血管生成因子的产生似乎影响脉络膜新生血管。
糖尿病性视网膜病(DR)是由毛细血管基底膜增厚以及周细胞和毛细血管内皮细胞之间缺乏接触所致而发生在糖尿病中的眼病。周细胞丢失增加毛细血管渗漏，并导致血-视网膜屏障被破坏。
增生性玻璃体视网膜病变与玻璃体膜内和视网膜表面上具有细胞膜和纤维变性膜的细胞增殖有关。伴随这种眼病的视网膜色素上皮细胞增殖和迁移是普遍的。与增生性玻璃体视网膜病变相关的膜含有胞外基质成分，例如I、II和IV型胶原和纤连蛋白，并且逐步变得纤维化。
需要时，可将本发明的化合物与本领域已知的一种或多种标准治疗性治疗组合给予。例如，为了治疗糖尿病性肾病，本发明的化合物可与例如ACE抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(ARBS)或任何其它常用的治疗(例如葡萄糖管理)组合给予。
肥胖症和进食障碍
本文还提供可用于预防或治疗肥胖症的组合物和方法。特征在于其高腰臀比的向心性肥胖是代谢综合征的重大风险。如上所述，代谢综合征是常常包括2型糖尿病、高血压、高血液胆固醇和甘油三酯水平的综合性医学病症(Grundy SM(2004)，J.Clin.Endocrinol.Metab.89(6)：2595-600)。肥胖症和其它进食障碍可参见例如美国专利申请公布号2009/0062193，“Compositions and Methods for the Control，Prevention and Treatment of Obesity and Eating Disorders(用于控制、预防和治疗肥胖症和进食障碍的组合物和方法)。”
“肥胖症”一般定义为其中体重指数超过30的一种状态，但需要或希望减轻体重或防止体重增加的任何受试者，包括体重指数小于30的受试者，都可被视为肥胖或体重超重。例如，BMI小于30和25以及超过或低于25的受试者也包括在本发明的受试者中。病态肥胖症通常是指其中BMI为40或更大的状态。在实施方案中，受试者可患有或易患与进食有关的病况，例如暴食症或嗜食癖。
“受试者’可包括任何哺乳动物，包括人。“受试者”还可包括作为宠物或家畜饲养的其它哺乳动物(例如狗、猫、马、牛、绵羊、猪、山羊)。可获益于本文提供的方法的受试者可能体重超重或肥胖；然而，他们也可能是瘦的。可获益于本文提供的方法的受试者可能渴望减轻体重或可能患有进食障碍(例如暴食症)或进食病况(例如嗜食癖)。可获益于本文提供的方法的受试者可能渴望改善偏食。除了这些病况外，他们可患有代谢紊乱或代谢病况。示例性代谢紊乱包括糖尿病、代谢综合征、胰岛素抵抗和血脂异常。受试者可以是任何年龄。因此，这些病症可存在于年青成人和成人(例如65岁或以下的人)以及婴幼儿、儿童、青少年和老年人(例如65岁以上的人)中。
“代谢率”意指每单位时间释放/消耗的能量。每单位时间的代谢可通过食物消耗、作为热能释放的能量或用于代谢过程的氧气来估算。如果希望减轻体重，则一般要求具有较高的代谢率。例如，与对活动具有低代谢率的人相比，具有高代谢率的人进行该活动可能能够消耗更多能量(燃烧更多卡)。
本文使用的“瘦质量(lean mass)”或“瘦体质量”是指肌肉和骨骼。瘦体质量不一定表示无脂肪质量。在中枢神经***(脑和脊髓)、骨髓和内部器官内，瘦体质量含有小比例的脂肪(大约3％)。瘦体质量是根据密度测量的。测量脂肪质量和瘦质量的方法包括但不限于水下称重法、排气量体积描记器(air displacement plethysmograph)、X射线、双能X射线吸收测定(DEXA)扫描、MRI和CT扫描。在一个实施方案中，使用水下称重法测量脂肪质量和瘦质量。
所谓“脂肪分布”意指体内脂肪沉积的部位。脂肪沉积的这类部位包括皮下、内脏和异位脂肪库。
所谓“皮下脂肪”意指脂质沉积正好在皮肤表面下。可采用可获得的测量皮下脂肪的任何方法测量受试者中皮下脂肪的量。测量皮下脂肪的方法是本领域已知的，例如美国专利号6,530,886中描述的方法。
所谓“内脏脂肪”意指脂肪沉积成为腹内脂肪组织。内脏脂肪包绕重要器官，并且可被肝代谢以产生血液胆固醇。内脏脂肪一向与诸如多囊性卵巢综合征、代谢综合征和心血管疾病等病况的风险增加有关。
所谓“异位脂肪贮存”意指脂质在构成瘦体质量的组织和器官(例如骨骼肌、心脏、肝、胰、肾、血管)内和周围沉积。异位脂肪贮存一般是脂质在机体的典型脂肪组织库以外蓄积。
脂肪质量可用总体质量的百分比表示。在一些方面，在疗程期间，脂肪质量降低至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％或至少25％。一方面，在疗程期间，受试者的瘦质量不降低。
另一方面，受试者的瘦质量在疗程期间保持或增加。另一方面，受试者进行减热量饮食或限制饮食。所谓“减热量饮食”意指与同一受试者的正常饮食相比，受试者每天摄取较少热量。在一种情况下，受试者每天少消耗至少50卡。在其它情况下，受试者每天少消耗至少100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900、1000卡。在一些实施方案中，所述方法包括以大于皮下脂肪至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％的速率进行内脏脂肪的代谢或异位脂肪的代谢或者两者的代谢。一方面，所述方法导致有利的脂肪分布。在一个实施方案中，有利的脂肪分布是皮下脂肪与内脏脂肪、异位脂肪或两者的比率增加。一方面，所述方法包括例如由于肌肉细胞质量增加所致瘦体质量增加。在一个实施方案中，受试者的皮下脂肪的量减少至少约5％。在其它实施方案中，与给予本发明的化学感受受体配体治疗前的受试者相比，皮下脂肪的量减少至少约10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％。
本文所述方法可用于减少受试者的内脏脂肪的量。在一种情况下，受试者的内脏脂肪减少至少约5％。在其它情况下，与给予化学感受受体配体治疗之前的受试者相比，受试者的内脏脂肪减少至少约10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％。可通过可获得的测定受试者的内脏脂肪的量的任何方法测量内脏脂肪。这类方法包括例如通过CT扫描和MRI的腹部断层照相术。用于测量内脏脂肪的其它方法可参见例如美国专利号6,864,415、6,850,797和6,487,445。
在一个实施方案中，提供用于在受试者中防止异位脂肪蓄积或减少异位脂肪的量的方法，其中所述方法包括将在受试者中有效防止异位脂肪蓄积或减少异位脂肪的量的化学感受受体配体治疗给予有需要的受试者。要了解的是，治疗可以是在一定时间内向受试者提供的一系列的单独剂量或治疗方案。在一种情况下，与未治疗受试者相比，受试者中异位脂肪的量减少至少约5％。在其它情况下，异位脂肪的量减少至少约10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％。或者，与受试者的皮下脂肪相比，异位脂肪的量按比例减少5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。可采用可获得的用于测量异位脂肪的任何方法测量受试者的异位脂肪。
在另一个实施方案中，提供用于改变诸如腰围、臀围和腰臀比等人体测量参数的方法。腰围是腹部肥胖症的衡量。在一个实施方案中，提供用于减小受试者腰围的方法，其中所述方法包括以有效减小受试者腰围的量将胰岛淀粉样多肽或胰岛淀粉样多肽激动剂给予有需要的受试者。在一个实施方案中，受试者腰围减小至少约1％。在其它实施方案中，与给予本文提供的化学感受配体受体配体治疗之前的受试者相比，受试者腰围减小至少约2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％。在一个实施方案中，受试者腰围减小至少约1cm。在其它实施方案中，与给予治疗前的受试者相比，受试者腰围减小至少约2cm、3cm、4cm、5cm或6cm。
在另一个实施方案中，提供用于减小受试者臀围的方法，其中所述方法包括以有效减小受试者臀围的量将本文提供的治疗给予有需要的受试者。在一个实施方案中，受试者臀围减小至少约1％。在其它实施方案中，与给予治疗前的受试者相比，受试者腰围减小至少约2％、3％、4％、5％或6％。在一个实施方案中，受试者腰围减小至少约1cm。在其它实施方案中，与给予治疗前的受试者相比，受试者腰围减小至少约2cm、3cm、4cm、5cm或6cm。
还提供减轻病态性肥胖受试者体重的方法，该方法通过首先降低受试者的体重至低于病态性肥胖水平以下的水平，然后给予有效量的化学感受受体配体治疗以进一步减轻受试者的体重。减轻受试者的体重至低于病态肥胖症的体重的方法包括减少热量摄取、增加体力活动、药物疗法、肥胖病手术(例如胃分流术)或上述方法的任何组合。一方面，给予治疗导致热量摄取减少，这进一步减轻受试者的体重。在另一个实施方案中，提供通过以有效地进一步减轻受试者的体重的量和方案给予治疗来减少BMI为40或更小的受试者的体重指数(BMI)的方法。
在实施方案中，提供降低形成代谢紊乱的风险的方法，其中所述方法包括以有效减轻体重或控制受试者的血糖的量将化学感受受体配体治疗给予受试者。
在另一个实施方案中，提供用于控制或改变进食行为的方法，其中所述方法包括将有效控制或改变受试者的进食行为的本发明的治疗给予有需要的受试者。在一个实施方案中，提供用于控制暴食症的方法，其中所述方法包括以有效控制或克制受试者的暴食症的量将治疗给予有需要的受试者。在一个实施方案中，在受试者一天最可能暴食的时间给予化学感受受体配体治疗。一方面，暴食症的特征在于：1)在不连续的时期内(例如在任何2小时时期内)进食以下量的食物，所述量无疑超过大多数人在相似时期内和在类似情况下可能进食的量，和2)在发作期间对进食缺乏控制的感觉(例如感觉无法停止进食或者控制吃什么或吃多少)。暴食症的减轻包括与缺乏本发明的化学感受受体配体治疗时的这类频率、持续时间、量和抵抗相比，暴食症发作的频率、暴食症发作的持续时间、暴食症发作期间消耗的总量、抵抗暴食症发作开始的难度的降低/减少及其任何组合。例如，在一个实施方案中，方法可包括降低暴食症发作频率。在另一个实施方案中，方法可包括缩短暴食症发作的持续时间。在又一个实施方案中，方法可包括减少暴食症发作期间消耗的总量。在又一个实施方案中，方法可包括降低抵抗暴食症发作开始的难度。
暴食症的一些体征包括无身体饥饿时进食大量食物、快速进食、因为个人对他/她吃多少感到尴尬而藏匿食物、进食直到过饱不舒服，或其任何组合。许多暴食者是情绪化食者，即其暴食症由其情绪状态引发(例如有些暴食者在悲伤时进食，有些在高兴时进食，而一些则在压力下进食)。很多暴食者患有焦虑障碍，例如强迫性障碍；冲动控制问题；或人格障碍，例如边缘型人格障碍或抑郁症。在一个实施方案中，暴食症是对压力条件的反应。其它暴食者是物质滥用者，例如药物滥用者或酒精滥用者。不是每个患有暴食障碍的人都会体重超重，例如诊断为贪食症的暴食者。
暴食的受试者常常在一天的特定时间内如此，因此应根据受试者最可能暴食的时间调节治疗。例如，如果受试者最可能在夜晚7p.m暴食，则受试者应在7p.m或7p.m前不久给予治疗。在一个实施方案中，在受试者易受暴食症影响的时间给予受试者治疗。在其它实施方案中，在受试者易受暴食症影响前至少约15分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约1小时、至少约1小时30分钟或至少约2小时给予受试者治疗。在该实施方案中，化学感受受体配体治疗的有效量是有效克制或控制受试者暴食欲望的量。因此，治疗的有效量将随受试者和他们暴食欲望的水平而改变。此外，如果受试者的暴食欲望在一天的某一点比另一点少，则可由此调节剂量以在受试者当天具有较低暴食欲望的时间提供较低的剂量，并且在受试者当天具有较高暴食欲望的时间提供较高的剂量。在一个实施方案中，在受试者具有强列暴食欲望的时间向他们给予治疗的峰值剂量。在其它实施方案中，在受试者具有强列暴食欲望之前至少约15分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约1小时、至少约1小时30分钟或至少约2小时向他们给予治疗激动剂的峰值剂量。
在另一个实施方案中，提供用于改善受试者的偏食的方法，其中所述方法包括以有效改善受试者的偏食的量将化学感受配体受体治疗给予有需要的受试者。被治疗靶定的化学感受受体可影响受试者进食相应食物的欲望。例如，包括甜味受体的配体的治疗可降低受试者对甜味食物的欲望。因此，在实施方案中，受治疗影响的受试者的偏食可包括对甜味食物、美味食物(savory food)、高脂肪食物、咸味食物、酸味食物及其任何组合的偏好。
偏食的改善可包括与在缺乏治疗时的这类频率、持续时间、强度或抵抗力相比，对这类食物的偏好降低、摄入这类食物的量减少、对一种食物类型超过另一种食物类型的偏好的提高、在渴望这类食物的频率、渴望这类食物的持续时间、渴望这类食物的强度、抵抗渴望这类食物的难度、因响应渴望这类食物而进食的频率方面的改变及其任何组合。在又一个实施方案中，方法可包括降低受试者对甜味食物、美味食物、高脂肪食物、咸味食物、酸味食物和任何组合的偏好。
在一个实施方案中，方法可包括降低受试者渴望甜味食物、美味食物、高脂肪食物、咸味食物、酸味食物及其任何组合的频率。在另一个实施方案中，方法可包括缩短受试者渴望甜味食物、美味食物、高脂肪食物、咸味食物、酸味食物和任何组合等的持续时间。在又一个实施方案中，方法可包括减轻受试者渴望甜味食物、美味食物、高脂肪食物、咸味食物、酸味食物及其任何组合的强度。在又一个实施方案中，方法可包括降低受试者抵抗渴望甜味食物、美味食物、高脂肪食物、咸味食物、酸味食物及其任何组合的难度。在又一个实施方案中，方法可包括降低受试者因响应渴望甜味食物、美味食物、高脂肪食物、咸味食物、酸味食物及其任何组合而进食的频率。在又一个实施方案中，方法可包括减少受试者对甜味食物、美味食物、高脂肪食物、咸味食物、酸味食物及其任何组合的摄入。
肠损伤的治疗
本文提供的组合物和方法可用于治疗短肠综合征和肠功能受损(例如小肠切除、结肠炎、小肠炎、炎性肠综合征、肠缺血和肠的化疗损伤)。短肠综合征是指由肠切除术引起的症状集合。其症状包括难治性腹泻、脱水、常量营养物吸收不良、体重减轻、维生素和微量元素吸收不良和营养不良。已知GLP-2减缓胃排空，延长肠通过时间和抑制假饲诱导的胃酸分泌。经空肠造口术的患者常常有膳食刺激的GLP-2反应受损，而且吸收因此受损。研究表明，将GLP-2给予经空肠造口术的患者改善能量的肠吸收和肠湿重吸收以及延长固形物和液态物的胃排空。参见Jeppesen，P.B.，2003，“Clinical significance ofGLP-2in short-bowel syndrome(GLP-2在短肠综合征中的临床重要性)”，Journal of Nutrition 133(11)：3721-4。另已知GLP-2除抑制胃分泌和胃蠕动以外还刺激肠生长。Burrin等，2001，“Glucagon-like peptide2：a nutrient-responsive gut growth factor(胰高血糖素样肽2：营养物反应性肠生长因子)”，Journal of Nutrition 131(3)：709。通过给予本文所述组合物调节GLP-2分泌可供治疗短肠综合征和治疗肠功能受损，包括但不限于小肠切除、结肠炎、小肠炎、炎性肠综合征、肠缺血和肠的化疗损伤。
递送至特定的肠部位
出乎意料的是，L细胞的密度沿肠的长度增加，其中在十二指肠水平上的密度最低，直肠中最高。用肽YY含量来评价，L细胞密度从十二指肠到直肠增加至约80倍。参见Adrian等，Gastroenterology1985；89：1070-77。已知不应认为营养物或胆汁盐会到达结肠，更不用说直肠，尚不清楚的是这些L细胞在代谢调节中起什么作用。虽然是推测的，但是有可能的是，由结肠菌群产生的产物可通过L细胞感受器报告肠微生物的量和组成，这种信息进而可通过结肠区和直肠区传出的激素和神经信号传送到CNS，其中结肠区和直肠区受到的神经支配十分不同于小肠。不论结肠和直肠中神经内分泌细胞的作用，本发明的基本原理是通过提供味觉和/或营养物受体的一种或多种刺激物以及用于治疗代谢病症目的的其它刺激物来刺激这些细胞，无论细胞可位于什么位置(例如预期不同的个体和糖尿病患者可具有这些细胞的不同分布和数量)。
在本发明的实施方案中，肠内给予各种味元和刺激物在例如啮齿动物或人中进行。在轻度麻醉的患者中，插管/套管***用硅橡胶管进行。将管置入幽门后区域和直肠中，并尽可能深的推入。单独和一起探查这些位置，因为肠上部感受到的食物可向肠下部提供信号，反之亦然。与肠下部相比，肠上部具有不同的EEC。例如，CCK和GIP从肠上部释放，通常不从肠下部释放，与主要位于肠上部的I细胞和K细胞相对应。相反地，L细胞主要位于肠下部。因此，激素释放模式在肠中不仅仅是味元特异性的和组合特异性的，而且还是部位特异性的。
在实施方案中，预期肠上部的感觉放大某些来自肠下部的反应。此外，位于肠上部的L细胞的表现可能不同于在下部区域的表现，为靶向激动剂和/或代谢物提供了另一种水平控制。例如，在实施方案中，递送到肠上部的某些化学感受受体配体/代谢物组合可能对治疗一种病症(例如糖尿病)的激素释放模式更有利，而递送到肠下部的同样的组合可能更适于不同的病症(例如肥胖症)。还预期相同组合当提供给肠上部和肠下部两者时，可产生更有利的激素谱。
因此，在实施方案中，本发明提供包括经工程改造的配体的组合以将某些配体递送到肠的一个或多个位置以使所得到的激素模式最优化的治疗方法。
给药
组合治疗
本发明的化合物可与用于治疗本文所述任一种病况的已知治疗共同给予。共同给予还可提供累加效应或协同效应，导致需要已知疗法、本发明的化合物或两者的较低剂量。共同给予的额外益处包括降低与任何已知疗法有关的毒性。
共同给予包括以单独的组合物同时给予、以单独的组合物在不同时间给予或以其中两种物质均存在的组合物给予。因此，在一些实施方案中，本发明的化合物和已知疗法以单一组合物给予。在一些实施方案中，本发明的化合物和已知疗法在组合物中混合给予。在一些实施方案中，本发明的化合物和已知疗法以单独的组合物给予。
本文描述的化合物和已知疗法的给予可通过任何合适的方法进行。本发明的化合物和第二化合物(例如糖尿病药物或肥胖症药物)的给予可以通过任何合适的方法进行。如果本发明的化合物和第二化合物作为单独的组合物给予，则它们可通过相同的途径或通过不同的途径给予。如果本发明的化合物和第二化合物以单一组合物给予，则它们可通过任何合适的途径给予，例如经口给予。
可与本发明的化合物一起给予用于治疗糖尿病、代谢综合征(包括葡萄糖耐受不良、胰岛素抵抗和血脂异常)和/或与之有关的疾病或病况的疗法、药物和化合物。糖尿病治疗药物和化合物包括但不限于降低甘油三酯水平、降低葡萄糖水平和/或调节胰岛素(例如刺激胰岛素产生、模拟胰岛素或是胰岛素的外源形式)的治疗药物和化合物。
降低甘油三酯水平的药物包括但不限于抗坏血酸、天冬酰胺酶、氯贝丁酯、考来替泊、非诺贝特、美伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀或ω-3脂肪酸。降低LDL胆固醇水平的药物包括但不限于氯贝丁酯、吉非贝齐和非诺贝特、烟酸、美维诺林、美伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、消胆胺(cholestyrine)、考来替泊或普罗布考。
另一方面，本发明的化合物可与降低葡萄糖的化合物组合给予。
噻唑烷二酮(亦称格列酮类)、磺酰脲类、氯茴苯酸类、双胍类、α-葡糖苷酶抑制剂、DPP-IV抑制剂和肠降血糖素模拟物的药物类型已用作高血糖症和糖尿病(2型)和相关疾病的辅助疗法。
降低葡萄糖水平的药物包括但不限于格列吡嗪、格列本脲、艾塞那肽(Byetta
Figure BPA00001482422400481
)、肠降血糖素、西格列汀(Januvia
Figure BPA00001482422400482
)、吡格列酮(pioglitizone)、格列美脲、罗格列酮、二甲双胍、维格列汀、磺酰脲、美格列奈(例如Prandin
Figure BPA00001482422400483
)、葡糖苷酶抑制剂、双胍(例如Glucophage
Figure BPA00001482422400484
)、瑞格列奈、阿卡波糖、曲格列酮、那格列奈、天然胰岛素、合成胰岛素或重组胰岛素及其衍生物以及胰岛淀粉样多肽和胰岛淀粉样多肽衍生物。
当序贯给予时，可按两次或更多次给予来给予所述组合。在一个备选实施方案中，通过不同途径给予一种或多种化学感受受体配体治疗和一种或多种其它的活性成分是可行的。技术人员还应了解，多种活性成分可与可起提高或协同促进控制性预防、改善、减轻或治疗肥胖症或进食障碍或病况的作用的化学感受受体配体治疗组合给予。
按照本文提供的方法，当与至少一种其它的减肥(或抗肥胖)或减体重药物共同给予时，化学感受受体配体治疗可以是：(1)一同配制并以组合制剂同时给予或递送；(2)作为单独的制剂交替或并行递送；或(3)通过本领域已知的任何其它组合治疗方案。当以交替疗法递送时，所提供的方法可包括例如以单独的溶液剂、乳剂、混悬剂、片剂、丸剂或胶囊剂或者用单独的注射器经不同注射序贯地给予或递送活性成分。一般来讲，在交替疗法期间，序贯(即依次)给予各种活性成分的有效剂量，而在同时疗法中，一起给予两种或更多种活性成分的有效剂量。还可采用不同顺序的间歇组合治疗。
在某些实施方案中，本文所提供的化合物可与其它市售可得的膳食助剂(diet aids)或其它抗肥胖药一起使用，其它抗肥胖药例如PYY和PYY激动剂、GLP-1和GLP-1激动剂、DPPIV抑制剂、CCK和CCK激动剂、毒蜥外泌肽和毒蜥外泌肽激动剂、GIP和GIP激动剂以及瘦蛋白和瘦蛋白激动剂。用于所提供的方法的目前尚在开发中的其它抗肥胖药也是本发明方法所关注的。其它抗肥胖药包括芬特明、芬氟拉明、***、利莫纳班和奥利司他。可将用于治疗体重减轻、暴食症、食瘾和食癖的治疗、药物和化合物与本发明的化合物一起给予。例如，还可将已知抑制饥饿或控制食欲的至少一种其它药物给予受试者。这类治疗药物和化合物包括但不限于芬特明类(phenteramines)例如Meridia
Figure BPA00001482422400491
和Xenical
Figure BPA00001482422400492
其它治疗、药物和化合物是本领域已知的，并且是本文所考虑的。
因此，一方面，化学感受受体配体治疗可用作控制、预防或治疗肥胖症或进食障碍或病况的组合治疗的组成部分。用作治疗肥胖症或减体重的组合治疗的组成部分的化合物包括但不限于影响神经递质或神经离子通道的中枢神经***药物，包括抗抑郁药(安非他酮)、去甲肾上腺素重摄取抑制剂(GW320659)、选择性5-羟色胺2c受体激动剂、选择性5HT 2c受体激动剂、抗癫痫发作药(托吡酯、唑尼沙胺)、一些多巴胺拮抗剂和***素-1受体拮抗剂(CB-1受体拮抗剂)(利莫纳班)；瘦蛋白/胰岛素/中枢神经***途径作用剂，包括瘦蛋白类似物、瘦蛋白转运促进剂和/或瘦蛋白受体促进剂(leptin receptor promoter)、睫状神经营养因子(Axokine)、神经肽Y和刺鼠相关肽拮抗剂、阿黑皮素原和***和***调节的转录促进剂、α-黑素细胞刺激激素类似物、黑皮质素-4受体激动剂和影响胰岛素代谢/活性的药物，其包括蛋白质-酪氨酸磷酸酶-1B抑制剂、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ。受体拮抗剂、短效溴隐亭(ergoset)、促生长素抑制素激动剂(奥曲肽)和脂连蛋白/Acrp30(Famoxin或脂肪酸代谢氧化诱导物)；胃肠-神经途径药物，包括提高缩胆囊素活性(CCK)、PYY活性、NPY活性和PP活性的药物、提高胰高血糖素样肽-1活性的药物(毒蜥外泌肽4、利拉糖肽、二肽基肽酶IV抑制剂)和降低生长素释放肽活性的药物以及胰岛淀粉样多肽类似物(普兰林肽)；可提高静息代谢率的药物(选择性β-3刺激物/激动剂、解偶联蛋白同源物和甲状腺受体激动剂)；其它更多种多样的药物，包括黑色素浓集激素拮抗剂、植物甾烷醇(phytostanol)类似物、功能性油脂、P57、淀粉酶抑制剂、生长激素片段、硫酸脱氢表雄酮的合成类似物、脂肪细胞11B-羟类固醇脱氢酶1型活性拮抗剂、促肾上腺皮质素释放激素激动剂、脂肪酸合成抑制剂(浅蓝菌素和C75)、羧肽酶抑制剂、印满酮/印满醇、氨基甾醇类(aminosterols)(曲度奎明/trodulamine)及其它胃肠脂肪酶抑制剂(ATL962)；***类，例如右旋***；其它拟交感神经肾上腺素能药类，包括芬特明、苄非他明、苯甲曲秦、马吲哚和安非拉酮。
其它化合物包括依考匹泮；泌酸调节肽(OM)；葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)抑制剂；胃泌素释放肽；神经调节肽B；肠抑肽；安非他酮，SR-58611；CP-045598；AOD-0604；QC-BT16；rGLP-1；1426(HMR-1426)；N-5984；ISIS-113715；索拉贝隆；SR-147778；Org-34517；美拉诺坦-II(melanotan-II)；西替司他；c-2735；c-5093；c-2624；APD-356；雷达法辛；fluasterone；GP-389255；856464；S-2367；AVE-1625；T-71；油酰雌酮；肽YY[3-36]鼻内；雄激素受体激动剂；PYY 3-36；DOV-102677；塔格糖；SLV-319；1954(Aventis Pharma AG)；泌酸调节肽，Thiakis；溴隐亭，PLIVA；糖尿病/高脂血症疗法，Yissum；CKD-502；甲状腺受体β激动剂；β-3肾上腺素受体激动剂；CDK-A激动剂；甘丙肽拮抗剂；多巴胺D1/D2激动剂；黑皮质素调节剂；verongamine；神经肽Y拮抗剂；黑色素浓集激素受体拮抗剂；双重PPAR α/γ激动剂；CGEN-P-4；激酶抑制剂；人MCH受体拮抗剂；GHS-R拮抗剂；生长素释放肽受体激动剂；DG70抑制剂；可替宁；CRF-BP抑制剂；尿皮质素(urocortin)激动剂；UCL-2000；impentamine；β-3肾上腺素能受体；五肽MC4激动剂；曲度奎明；GT-2016；C-75；CPOP；MCH-1受体拮抗剂；RED-103004；氨基甾醇类；食欲肽-1拮抗剂；神经肽Y5受体拮抗剂；DRF-4158；PT-15；PTP酶抑制剂；A37215；SA-0204；糖脂代谢物；MC-4激动剂；produlestan；PTP-1B抑制剂；GT-2394；神经肽Y5拮抗剂；黑皮质素受体调节剂；MLN-4760；PPARγ/δ双重激动剂；NPY5RA-972；5-HT2C受体激动剂；神经肽Y5受体拮抗剂(苯基脲类似物)；AGRP/MC4拮抗剂；神经肽Y5拮抗剂(苯并咪唑)；糖皮质激素拮抗剂；MCHR1拮抗剂；乙酰辅酶羧化酶抑制剂；R-1496；HOB1调节剂；NOX-B11；肽YY 3-36(eligen)；5-HT 1调节剂；胰脂肪酶抑制剂；GRC-1087；CB-1拮抗剂；MCH-1拮抗剂；LY-448100；铃蟾肽BRS3激动剂；生长素释放肽拮抗剂；MC4拮抗剂；硬脂酰辅酶去饱和酶调节剂；H3组胺拮抗剂；PPARpan激动剂；EP-01492；激素敏感性脂肪酶抑制剂；脂肪酸结合蛋白4抑制剂；硫代内酯衍生物；蛋白质酪氨酸磷酸酶1B抑制剂；MCH-1拮抗剂；P-64；PPARγ配体；黑色素浓集激素拮抗剂；噻吩胃促动力药(thiazole gastroprokinetics)；PA-452；T-226296；A-331440；免疫药疫苗；糖尿病/肥胖症治疗药(Bioagency，Biofrontera DiscoveryGmbH)；P-7(Genfit)；DT-011M；PTP1B抑制剂；抗糖尿病肽缀合物；KATP激动剂；肥胖症治疗药(Lexicon)；5-HT2激动剂；MCH-1受体拮抗剂；GMAD-1/GMAD-2；STG-a-MD；神经肽Y拮抗剂；血管生成抑制剂；G蛋白偶联受体激动剂；烟酸治疗药(ChemGenex)；抗肥胖药(Abbott)；神经肽Y调节剂；黑色素浓集激素；GW-594884A；MC-4R激动剂；组胺H3拮抗剂；孤儿(orphan)GPCR调节剂；MITO-3108；NLC-002；HE-2300；IGF/IBP-2-13；5-HT2C激动剂；ML-22952；神经肽Y受体拮抗剂；AZ-40140；抗肥胖疗法(NisshinFlour)；GNTI；黑皮质素受体调节剂；α-淀粉酶抑制剂；神经肽Y1拮抗剂；β-3肾上腺素受体激动剂；ob基因产物(Eli Lilly&Co.)；SWR-0342-SA；β-3肾上腺素受体激动剂；SWR-0335；SP-18904；口服胰岛素模拟物；β3肾上腺素受体激动剂；NPY-1拮抗剂；β-3激动剂；肥胖症治疗药(7TM Pharma)；11β-羟类固醇脱氢酶(HSD)1抑制剂；QRX-431；E-6776；RI-450；黑皮质素-4拮抗剂；黑皮质素4受体激动剂；肥胖症治疗药(CuraGen)；瘦蛋白模拟物；A-74498；第二代瘦蛋白；NBI-103；CL-314698；CP-114271；β-3肾上腺素受体激动剂；NMI-8739；UCL-1283；BMS-192548；CP-94253；PD-160170；烟酸激动剂；LG-100754；SB-226552；LY-355124；CKD-711；L-751250；PPAR抑制剂；G蛋白治疗药；肥胖症疗法(Amylin PharmaceuticalsInc.)；BW-1229；单克隆抗体(ObeSys/CAT)；L-742791；(S)-***；MBU-23；YM-268；BTS-78050；tubby样蛋白质基因；基因组学(genomics)(进食障碍；Allelix/Lilly)；MS-706；GI-264879A；GW-409890；FR-79620类似物；肥胖症疗法(Hybrigenics SA)；ICI-198157；ESP-A；5-HT2C激动剂；PD-170292；AIT-202；LG-100641；GI-181771；抗肥胖治疗药(Genzyme)；瘦蛋白调节剂；GHRH模拟物；肥胖症疗法(Yamanouchi Pharmaceutical Co.Ltd.)；SB-251023；CP-331684；BIBO-3304；胆甾烯-3-酮类；LY-362884；BRL-48962；NPY-1拮抗剂；A-71378；.RTM.--双去甲基***；酰胺衍生物；肥胖症治疗药(Bristol-Myers Squibb Co.)；肥胖症治疗药(LigandPharmaceuticals Inc.)；LY-226936；NPY拮抗剂；CCK-A激动剂；FPL-14294；PD-145942；ZA-7114；CL-316243；SR-58878；R-1065；BIBP-3226；HP-228；他利勃隆(talibegron)；FR-165914；AZM-008；AZM-016；AZM-120；AZM-090；梨骨外激素(vomeropherin)；BMS-187257；D-3800；AZM-131；基因发现(gene discovery)(Axys/Glaxo)；BRL-26830A；SX-013；ERR调节剂；降脂蛋白；AC-253；A-71623；A-68552；BMS-210285；TAK-677；MPV-1743；肥胖症治疗药(Modex)；GI-248573；AZM-134；AZM-127；AZM-083；AZM-132；AZM-115；exopipam；SSR-125180；肥胖症治疗药(MelacureTherapeutics AB)；BRL-35135；SR-146131；P-57；AZM-140；CGP-71583A；RF-1051；BMS-196085；马尼法辛；β-3激动剂；DMNJ(Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology)；BVT-5182；LY-255582；SNX-024；甘丙肽拮抗剂；神经激肽-3拮抗剂；右芬氟拉明；马吲哚；安非拉酮；苯甲曲秦；苄非他明；安非他酮；舍曲林；二甲双胍；AOD-9604；ATL-062；BVT-933；GT389-255；SLV319；HE-2500；PEG-axokine；L-796568和ABT-239。
在一些实施方案中，与本文提供的化学感受受体配体治疗组合使用的化合物包括利莫纳班、***、奥利司他、PYY或其类似物、CB-1拮抗剂、瘦蛋白、芬特明和毒蜥外泌肽类似物。示例性剂量范围包括芬特明树脂(30mg，早晨)、盐酸芬氟拉明(20mg，一天三次)、分特明树脂(15mg，早晨)和盐酸芬氟拉明(30mg，晚餐前)的组合，以及***(10-20mg)。Weintraub等(1984)Arch.Intern.Med.144：1143-1148。
可在例如调节代谢综合征(或治疗代谢综合征及其相关症状、并发症和病症)中利用组合治疗，其中本文提供的化学感受受体配体治疗可有效地与例如上述活性剂联用以调节或治疗糖尿病、肥胖症、高脂血症、动脉粥样硬化和/或其相应的相关症状、并发症和病症。
制剂
本文所提供的本发明化合物的制剂包括适于口服或直肠给药的制剂，虽然大多数合适的给予途径可取决于例如接受者的病况和病症。制剂可适宜地以单位剂型提供，并且可通过制药领域熟知的任何方法制备。所有方法包括将活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体混合的步骤。
适于口服给药的制剂可以各含有预定量的活性成分的离散单位提供，例如胶囊剂、扁囊剂或片剂；以散剂或颗粒剂提供；以水性液体或非水性液体中的溶液剂或混悬剂提供；或者以水包油液体乳胶或油包水液体乳胶提供。
可口服使用的组合物制剂包括片剂、由明胶制成的推入配合胶囊剂(push-fit capsule)以及由明胶和增塑剂(例如甘油或山梨糖醇)制成的软密闭胶囊剂。片剂可任选与一种或多种辅助成分一起通过压片或塑型制备。可通过把自由流动形式的活性成分(例如粉末或颗粒)，任选与粘合剂(例如聚维酮、明胶、羟丙基甲基纤维素)、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如羟基乙酸淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)或润滑剂、表面活性剂或分散剂混合，在合适的机器上压片而制备压制片。可将用惰性液体稀释剂湿润的粉状化合物的混合物在合适的机器中塑型来制备模制片。片剂可任选包衣或划痕，并且可以如此制备，以供其中的活性成分缓慢释放或受控释放。片剂可任选与肠溶衣一起提供，以使得在胃以外的肠部分中释放。用于口服给药的所有制剂应为适于这类给药的剂量。推入配合胶囊剂可含有与填充剂(例如乳糖)、粘合剂(例如淀粉)和/或润滑剂(例如滑石粉或硬脂酸镁)和任选稳定剂混合的活性成分。在软胶囊剂中，可将活性化合物溶于或悬浮于合适的液体制剂中，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外，可加入稳定剂。糖衣丸芯(Dragee core)用合适的包衣材料提供。为此，可使用浓的糖溶液，其可任选含有***树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡巴普胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液(lacquer solution)和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可将染料或色素加入片剂或糖衣丸包衣材料中用于识别或表征活性化合物剂量的不同组合。
对于口腔或舌下给药，组合物可呈片剂、锭剂、软锭剂的形式或按常规方式配制的凝胶剂。这类组合物可包含调味基料(例如蔗糖和***树胶或西黄蓍胶)中的活性成分。可配制这类组合物以将化学感受受体物质递送到所需要的胃肠***部位。
应理解的是，除上文特别提及的成分以外，本文所述化合物和组合物可包括与上述制剂类型相应的常用于本领域的其它成分，例如适于口服给药的其它成分可包括矫味剂。
本文所述组合物还可含有适于口服用形式的活性成分，例如呈片剂、含片、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂或者糖浆剂或酏剂。可按照本领域已知的制备药物组合物的任何方法制备预定口服用的组合物，以非限制性实例为例，这类组合物可含有选自以下的一种或多种物质以提供制药上精致适口的制剂：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂。
片剂含有活性成分和药学上可接受的适于制备片剂的赋形剂的混合物。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或***树胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可以是未包衣的，或者通过已知技术包衣以遮掩药物气味或在胃肠道中延迟崩解和吸收，从而在较长时间内提供持续作用。适当时，可使用例如水溶性掩味材料(例如羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素)或者延时材料例如乙基纤维素或乙酸丁酸纤维素。口服用制剂还可以硬明胶胶囊剂提供，其中活性成分与诸如碳酸钙、磷酸钙或高岭土等惰性固体稀释剂混合，或者以软明胶胶囊剂提供，其中将活性成分与诸如聚乙二醇或油介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)等水溶性载体混合。
在本发明的各种实施方案中，本文提供的药物组合物呈液体形式。以非限制性实例为例，液体形式包括纯净液体制剂、溶液剂、混悬剂、分散剂、胶体剂、泡沫剂等。在某些情况下，液体形式还含有营养成分或基质(例如来源于牛奶、酸奶、奶昔或果汁)。在一些方面，化学感受受体配体被微粉化或作为液体形式中的纳米粒。在某些情况下，将化学感受受体配体包衣以遮掩味元性质。在其它情况下，将化学感受受体配体包衣以改进向肠和结肠的递送。
水性溶液剂或混悬剂含有活性物质和适于制备水性混悬剂的赋形剂的混合物。这类赋形剂为助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和***树胶；分散剂或润湿剂可以是天然存在的磷脂(例如卵磷脂)，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七碳亚乙基氧基十六醇)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯失水山梨醇单油酸酯)。水性溶液剂或混悬剂还可含有一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。
可通过将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)中或悬浮于矿物油(例如液体石蜡)中来配制油性混悬剂。油性混悬剂可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入甜味剂(例如上文给出的甜味剂)和矫味剂以提供适口的口服制剂。可提高加入抗氧化剂，例如丁基化羟基茴香醚(butylated hydroxyanisol)或α-生育酚来保存这些组合物。
适于通过加入水来制备水性溶液剂或混悬剂的可分散粉剂和颗粒剂提供与分散剂或润湿剂、助悬剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和助悬剂以上文已提及过的来例示。还可存在其它赋形剂，例如甜味剂、矫味剂和着色剂。可通过加入抗氧化剂(例如抗坏血酸)来保存这些组合物。
组合物也可呈水包油乳液的形式。油相可以是植物油(例如橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)或这些油的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的磷脂(例如大豆卵磷脂)及衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯(例如失水山梨醇单油酸酯)和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物(例如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)。乳剂还可含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧化剂。
糖浆剂和酏剂可用甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖)配制。这类制剂还可含有缓和剂、防腐剂、矫味剂和着色剂和抗氧化剂。
组合物还可以配制成直肠组合物，例如栓剂或滞留型灌肠剂，其含有例如可可脂、聚乙二醇或其它甘油酯等常用栓剂基质。可通过将抑制剂与合适的无刺激性的赋形剂混合来制备这些组合物，所述赋形剂在常温下为固体但在直肠温度下为液体，因此可在直肠中融化释放药物。这类材料包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、不同分子量的聚乙二醇的混合物和聚乙二醇的脂肪酸酯。
组合物可呈例如适于口服给药的形式，如片剂、胶囊剂、扁囊剂、丸剂、锭剂、散剂或颗粒剂、缓释制剂、溶液剂、液体制剂或混悬剂。药物组合物可呈适于一次给予精确剂量的单位剂型。药物组合物可包含常用的药用载体或赋形剂和作为活性成分的本发明的化合物。另外，可包含其它药物或药剂、载体、辅料等
合适的载体包括惰性稀释剂或填充剂、水和各种有机溶剂。如有需要，组合物可含有其它成分，例如矫味剂、粘合剂、赋形剂等。因此对于口服给药，含有各种赋形剂(例如柠檬酸)的片剂可与各种崩解剂(例如淀粉或其它纤维素材料、藻酸和某些络合硅酸盐)和粘合剂(例如蔗糖、明胶和***树胶)一起使用。另外，润滑剂(例如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石粉)常常用于压片目的。还可加入诸如抑制剂、表面活性剂或增溶剂、增塑剂、稳定剂、增粘剂或成膜剂等其它试剂。相似类型的固体组合物也可用于软充填和硬充填明胶胶囊剂中。材料包括乳糖或奶糖和高分子量聚乙二醇。当需要口服给予水性混悬剂或酏剂时，可将本文的活性化合物与各种甜味剂或矫味剂、着色剂或染料和乳化剂或助悬剂(如有需要)以及稀释剂(例如水、乙醇、丙二醇、甘油或其组合)混合。
本发明还考虑含有本文所述的本发明化合物的药用食物组合物和制剂。掺入本发明的化合物的药用食物包括可食用的形式，例如条棒、糖果、粉、胶和液体。可配制药用食物组合物，以控制代谢物的含量及化学感受受体配体的量和类型以及其它可食用添加剂和成分(例如碳水化合物、蛋白质、脂肪、填充剂、赋形剂)的含量。示例性的药用食物组合物包括但不限于具有确定和/或限定的代谢物和化学感受受体配体的条棒。还可用具有确定的成分以及本文所述的本发明化合物制成可食用糖果、胶和液体。
改进释放制剂
在不同实施方案中，以控释、缓释或延释制剂(统称为“改进释放”制剂)的形式提供针对化学感受受体配体的方法和组合物。可通过本领域普通技术人员熟知的改进释放方法或通过递送装置给予化合物。实例包括但不限于美国专利号3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123、4,008,719、5,674,533、5,059,595、5,591,767、5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556和5,733,566中描述的方法和装置。这类剂型可用来提供一种或多种活性成分的改进释放，使用不同比例的例如羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、凝胶、透性膜、渗透***、多层包衣材料、微粒子、脂质体、微球或其组合，以提供所需要的释放性质。可容易地将本领域普通技术人员已知的(包括本文所述的)合适的改进释放制剂选用于本发明的活性成分。本发明因此包括适于口服给药的单一单位剂型，例如但不限于适于控释或缓释的片剂、胶囊剂、软胶囊剂和囊片剂。
可实施许多策略来获得其中释放率超过化合物的代谢率和/或释放位置受控制的改进释放。例如，可通过适当选择制剂参数和成分(例如适当的控释组合物和包衣材料)来获得改进释放。实例包括单一单位或多个单位片剂或胶囊剂组合物、油溶液剂、混悬剂、乳剂、微囊剂、微球、纳米粒、贴剂和脂质体。可以控制释放机制，使得化合物按时间间隔释放，释放可以是同时的，当优选一种特定物质先于其它物质提前释放时，组合中的物质之一的延迟释放可能受到影响，或者释放位置受到控制(例如在下胃肠道、上胃肠道或两者中释放，这取决于待给予化合物的数量和类型、化合物的所需作用和所需要的各种化合物的释放位置)。本文所述不同的递送***也可以联合以在多个时间间隔(例如口服给药后约30分钟、约120分钟、约180分钟和约240分钟)或在不同的位置(例如在下胃肠道、上胃肠道、十二指肠、空肠、回肠、结肠等释放)或其组合释放。例如，pH依赖性***可与择时释放***或本文所述的任何其它***联合以达到所需要的释放特征。
在不同实施方案中，按改进释放制剂与即释成分联合的形式以单位剂型提供针对化学感受受体配体的方法和组合物。即释成分可通过任何已知方法配制，例如包住改进释放成分的层等。示例性的即释(“IR”)活性剂与改进释放(“MR”)活性剂的比率为约10％IR∶约90％MR、约15％IR∶约85％MR、约20％IR∶约80％MR、约25％IR∶约75％MR、约30％IR∶约70％MR、约35％IR∶约65％MR、约40％IR∶约60％MR、约45％IR∶约55％MR或约50％IR∶约50％MR。在某些实施方案中，即释的活性剂与改进释放的活性剂之比为约25％IR∶约75％MR。在其它实施方案中，即释的活性剂与改进释放的活性剂之比为约20％IR∶约80％MR。
择时释放***
在一个实施方案中，释放机制是在给药后的某些时间点释放活性剂(例如化学感受受体配体)的“择时”或按时释放***。择时释放***是本领域众所周知的，合适的择时释放***可包括任何已知的赋形剂和/或包衣材料。例如，基质、层或包衣材料中的赋形剂可通过减缓活性剂扩散到环境中来延迟活性剂的释放。合适的择时释放赋形剂包括但不限于***树胶(acacia/gum arabic)、琼脂、硅酸镁铝、藻酸盐(藻酸钠)、硬脂酸钠、墨角藻、皂土、卡波姆、角叉菜胶、卡巴普(Carbopol)、纤维素、微晶纤维素、长角豆属(ceratonia)、角叉菜、葡萄糖、红藻胶、明胶、印度树胶、瓜尔胶、半乳甘露聚糖、锂蒙脱石、乳糖、蔗糖、麦芽糖糊精、甘露糖醇、山梨糖醇、蜂蜜、玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、刺梧桐树胶、黄原胶(xanthum gum)、山萮酸甘油酯(例如Compritol 888 ato)、二硬脂酸甘油酯(例如Precirol ato5)、聚乙二醇(例如PEG 200-4500)、聚氧化乙烯、己二酸、西黄蓍胶、乙基纤维素(例如乙基纤维素100)、乙基羟乙基纤维素、乙基甲基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素(例如K100LV、K4M、K15M)、羟丙基纤维素、聚(甲基丙烯酸羟乙酯)、醋酸纤维素(例如醋酸纤维素CA-398-10NF)、醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸丙酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、丁酸纤维素、硝酸纤维素、氧化聚明胶、果胶、聚明胶肽、聚维酮、碳酸丙烯、聚酐(polyandride)、甲基乙烯基醚马来酐共聚物(PVM/MA)、聚(甲基丙烯酸甲氧基乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲氧基乙氧基乙酯)、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠(CMC)、二氧化硅、乙烯基聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮(PVP：聚维酮)、聚乙酸乙烯酯或聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯和混合物、KollidonSR、丙烯酰基衍生物(例如聚丙烯酸脂，例如交联聚丙烯酸脂、甲基丙烯酸共聚物)、Splenda(葡萄糖、麦芽糖糊精和三氯半乳蔗糖)或其组合。择时释放赋形剂可与活性剂一起存在于基质中、存在于制剂的另一个区室或层、作为包衣材料的组成部分或其任何组合。可使用不同量的一种或多种择时释放赋形剂以获得规定的释放时间。
在一些实施方案中，配制择时释放***以在给药后以下时间释放化学感受受体配体：约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约100分钟、约110分钟、约120分钟、约130分钟、约140分钟、约150分钟、约160分钟、约170分钟、约180分钟、约190分钟、约200分钟、约210分钟、约220分钟、约230分钟、约240分钟、约250分钟、约260分钟、约270分钟、约280分钟、约290分钟、约300分钟、约310分钟、约320分钟、约330分钟、约340分钟、约350分钟或约360分钟。在具有多次释放的实施方案中，将择时释放***配制成在不止一个时间点上释放。在某些实施方案中，将择时释放***配制成在给药后约30分钟、约120分钟、约180分钟和约240分钟释放。
肠溶衣和pH依赖性***
制剂还可用肠溶衣包衣，所述肠溶衣在酸性环境(例如胃)中保护活性剂(例如化学感受受体配体)不被降解并允许延迟释放到靶区域(例如十二指肠)以摄取。
作为非限制性实例，肠溶衣可以是蜡或蜡样物质，例如巴西棕榈蜡、脂肪醇、氢化植物油、玉米醇溶蛋白、虫胶、蔗糖、***胶、明胶、糊精、欧车前果壳粉、聚甲基丙烯酸酯、阴离子聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸)与聚(甲基丙烯酸甲酯)的混合物、衍生自丙烯酸酯和/或甲基丙烯酸酯的聚合物或共聚物、醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸-1，2，4-苯三酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、丙酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸马来酸纤维素、聚乙烯醇邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)、羟丙基甲基纤维素六氢邻苯二甲酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、聚甲基丙烯酸与聚丙烯酸乙酯的混合物、乙基纤维素、甲基纤维素、丙基纤维素、脱乙酰壳多糖琥珀酸酯、脱乙酰壳多糖琥珀酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯(PVAP)、聚乙酸乙烯酯聚合物、羧甲基乙基纤维素及其相容的混合物。另外，在活性剂之间可提供无活性的中间膜，例如在化学感受受体配体和肠溶衣之间以防止活性剂与肠溶衣相互作用。
可使用肠溶聚合物的组合，将肠溶衣配制成在所需要的pH下释放活性剂，例如化学感受受体配体。众所周知的是，胃肠***不同位置具有特定的pH。例如，十二指肠可相当于pH 5.5环境，空肠可相当于pH 6.0环境。在一些实施方案中，将肠溶衣配制成在pH 1、pH 1.5、pH 2、pH 2.5、pH 3、pH 3.5、pH 4、pH 4.5、pH 5、pH 5.5、pH 6、pH 6.5或pH 7下释放化学感受受体配体。在具有多次释放的实施方案中，将肠溶衣配制成在两种或更多种pH值下释放。在某些实施方案中，将肠溶衣配制成在pH 5.5、6.0、6.5和7.0下释放。在其它实施方案中，将肠溶衣配制成在十二指肠、空肠、回肠和结肠中释放。在另外的其它实施方案中，肠溶衣与其它释放***(例如择时释放***)联用。
胃滞留***
本文描述了胃驻留延长、对胃肠道存在的用作推动物质穿过其中的蠕动波形式有某种抵抗力的剂型。在一些实施方案中，这通过同时提供具有胃驻留延长性质的组合的剂型来实现，所述胃驻留延长性质包括漂浮在胃液中、粘附在胃肠道粘膜表面和溶胀至延迟通过幽门的大小。在一些实施方案中，在暴露于胃液时形成微凝胶。
按照本文描述的教导，本领域技术人员能够制备和使用本发明方法所包括的组合物。在一些实施方案中，将本文所述胃滞留(缓释)***应用于本发明的方法中。
漂浮性质
设计剂型的漂浮性质以具有低密度，因此在胃液中漂浮直到剂型或者崩解(和所得颗粒从胃中排空)或者吸收流体到不再漂浮的点上，并且可随负责胃排空的蠕动波更容易地从胃中通过。
在本文描述的一些实施方案中，在该***漂浮在胃内容物中的同时，药物以所需要的速度慢慢从***释放出来。在药物释放后，余留***从胃中排空。该***可能需要达到适当漂浮原理所需要的最少胃内容物(至少约200mL)，这可通过用一杯水服用剂型来实现。还需要最小的漂浮力(F)水平以保持剂型确实浮在胃内容物/膳食的表面上。
根据所需要的组合物的性质，可能有益的是使用一个或多个下列***：单一单位和多个单位流体动力学平衡***(HBS)、单一单位和多个单位的产气***、空心微球和筏形成***(raft-forming system)。多种因素例如胃肠生理学、剂型特征和患者相关因素可影响剂型浮力。按照本领域的知识和本文提供的教导，技术人员容易了解如何运行这些***。
可制备漂浮剂型，其中浮力通过3种可能的机制产生。第一种机制是以足够低的密度掺入制剂成分使之能够在胃内容物中漂浮。这类***不需要崩解成小片从胃中排空，而是慢慢地蚀解，逐渐失去浮力，并最终从胃中排出。这种方法尤其可用于以低剂量给予(几百毫克每天或更少)或具有低的水溶解度的药物。然而，这些性质限制了其中需要较高剂量或具有高水溶性药物的应用。在这些情况下，可能需要大量的聚合物延迟药物释放。根据聚合物的量，胶囊剂剂型由于大小制约可能不适用。此外，药物在这种形式的片剂中均匀分布可能伴有药物不良的快速初始释放。此外，这最常见于极具水溶性的药物。
第二种机制是双层剂型的形成，其中浮力来源于药物层的隔离层。这种方法可克服上述***所遇到的一些问题。
第三中机制是掺入一种或多种气体发生剂。气体发生剂与胃液反应产生气体。这种气体随后陷入剂型内，这导致在胃液中漂浮。这种方法可对漂浮程度、开始时间和持续提供改进的控制。美国专利号4,844,905描述了具有被气体发生层包绕的载药芯的***，气体发生层进而被负责控制药物从***中释放的聚合物层包围。在一些实施方案中，气体发生成分在与胃液相互作用时产生陷入胶凝剂的水化微凝胶基质内的二氧化碳或二氧化硫。
用于本文所述组合物的气体发生成分包括但不限于一种或多种I族和II族金属的碳酸氢盐和碳酸盐的组合，包括钠、钾和钙的水溶性碳酸盐、亚硫酸盐和碳酸氢盐，例如碳酸钾、碳酸氢钠、焦亚硫酸钠、碳酸钙。气体发生成分可以约2-50％重量的量存在。
漂浮片剂可具有小于胃液的容积密度，使得它们浮在胃中而又不影响胃排空率达延长的时间。
漂浮剂型的限制包括需要与合适量的流体一起给予(正常胃内容物可小至几十毫升)及其可能的***依赖性。患者坐直可确保浮力剂型的胃驻留延长，而仰卧患者可允许将漂浮剂型准备好呈递到幽门，因此允许剂型从胃中快速排除(参见Timmermans等，J.Pharm.Sci.1994，83，18-24)。
生物粘附性质
设计生物粘附递送***吸收胃液，使得外层变成粘附在胃粘膜/粘膜层上的粘滞粘性材料。这延长了胃滞留，直到粘附力例如通过剂型的外层持续水化或通过持续施加剪切力而弱化。聚卡波非已被鉴定为用于使口服给予的剂型与胃粘膜粘附的合适聚合物(参见Longer等，J.Pharm.Sci.，1985，74，406-411)。应注意的是，发现在动物模型用这类***观察到的成功事例由于动物与人间的粘液量差异、稠度和更新差异，而在转用于人时是不可靠的。
如本文所述，生物粘附性与低密度材料(即密度小于胃液)的组合保持漂浮，同时通过使组合物漂浮胃的上部区域而延长胃滞留时间(GRT)。在一些实施方案中，由于剂型还具有生物粘附特征，因此剂型自身也可与胃粘膜粘附。
溶胀性质
本文所述组合物应具有允许吞下剂型的大小。摄入后，本文所述组合物溶胀。在一些实施方案中，组合物溶胀到妨碍通过幽门的大小直到药物释放进行到所需要的程度。
本文所述剂型可包含亲水易蚀聚合物。在这些实施方案中，在吸收胃液时，剂型在短时间内溶胀到可促进胃滞留延长的大小。这可供药物持续递送到吸收部位。在一些实施方案中，药物的吸收部位位于上胃肠道。
当剂型由易蚀亲水聚合物制成时，它们容易在合理的时间内蚀解以允许通过胃。膨胀的时间是膨胀不会发生在食管中的时间，而且如果剂型以部分溶胀状态穿过肠，则水化聚合物的蚀解度和弹性性质将会排除肠被剂型阻塞的机会。
可获得各种类型的聚合物以提供可溶胀然后逐渐从溶胀剂型中释放药物的***。例如，药物溶出剂型可包含线性亲水聚合物。水化时，不具有共价交联结构的这些线性亲水聚合物可在剂型的表面形成胶状层。这种胶状层的厚度和耐久性取决于许多因素，例如构成剂型的聚合物的浓度、分子量和粘度。在较高浓度下，线性聚合物链以较大程度缠结成。这可导致实际上的交联，并形成较强的凝胶层。随着亲水聚合物的溶胀线性链溶解，凝胶层蚀解，并释放出药物。在这些实施方案中，剂型蚀解的速率有助于控制药物的释放率。
在剂型基质中可使用交联聚合物(例如聚丙烯酸聚合物(PAA))。在干燥状态下，用交联聚丙烯酸聚合物制成的剂型含有截留在玻璃样芯中的药物。随着片剂的外表面水化，其形成胶状层。一般认为，该层与传统基质不同，因为水凝胶不是聚合物的缠结链，而是由许多聚合物颗粒构成的分散微凝胶。交联网能够将药物截留在水凝胶范围内。因为这些水凝胶不是水溶性的，它们不会以与线性聚合物相同的方式溶解或蚀解。反而是当水凝胶完全水化时，来自内部的渗透压通过使分散的水凝胶片崩塌而产生分解结构的作用。药物能够以均匀速率通过凝胶层扩散。
尽管不希望受任何特定理论的束缚，但假设随着药物浓度在凝胶基质内增加及其热力活性或化学势增加，药物芯周围的凝胶层起控速膜的作用，这导致药物的线性释放。至于这些***，药物溶出率受各聚合物水凝胶的水化率和溶胀率细微差异的影响。聚合物水凝胶的这些性质取决于多种因素，例如聚合物的分子结构，包括聚合物基质的交联密度、链缠结和结晶度。溶胀的程度和速率还取决于pH和溶解介质。聚合物水凝胶间形成的通道还受聚合物的浓度和溶胀度的影响。增加聚合物的量或聚合物的溶胀度降低通道的大小。
交联聚丙烯酸聚合物在模拟胃液(SGF)和模拟肠流体(SIF)两者中提供快速有效的溶胀特性，并产生硬度优良和脆碎度低的剂型。此外，交联聚丙烯酸聚合物还可以较低的浓度提供比其它赋形剂长的溶解时间。
化合物溶解度对于从包含交联聚丙烯酸聚合物的剂型中释放药物也是重要的。难溶化合物易于分配到***更疏水的区域，例如聚合物的丙烯酸骨架。极溶于水的化合物由于药物通过在微凝胶之间的无满水的缝隙空间快速溶解而进行控释扩散。
由于充分溶胀、漂浮和/或生物粘附性质的组合，本发明描述和使用的剂型实现了胃滞留，不论受试者是处于饱腹态还是空腹态。
获得可溶胀颗粒的一种方法是将药物分散在固体基质中，所述固体基质由吸收胃液并因所吸收的流体而溶胀的物质形成(参见例如美国专利号5,007,790、5,582,837和5,972,389及WO 98/55107)。
聚合物基质可用于实现药物在长的一段时间内控释。通过限制周围的胃液可通过基质扩散并达到药物、溶解药物并再次与溶解的药物一起扩散出来的速率，或者通过使用缓慢蚀解的基质，来实现这类缓释或控释(参见例如美国专利号4,915,952、5,328,942、5,451,409、5,783,212、5,945,125、6,090,411、6,120,803、6,210,710、6,217,903和WO 96/26718和WO 97/18814)。
美国专利号4,434,153描述了使用吸收流体以溶胀并且达到促进胃滞留延长的大小的水凝胶基质。这种基质包围大量由药物组成的微小丸，其中脂肪酸和蜡的释放率控制壁(release rate controlling wall)包围各丸。
美国专利号5,007,790和5,582,837和WO 93/18755描述了溶胀水凝胶聚合物，其中药物颗粒包埋在溶胀水凝胶聚合物中。一旦水凝胶基质水化，则这些颗粒溶解。溶胀基质具有促进胃滞留的大小，而且仅溶解的药物达到粘膜，这可以持续方式递送。因此，这类***不会用刺激性药物的固体颗粒损伤粘膜，并且适于将药物递送至上胃肠道。这些***只在有限水溶性的药物的情况下适用。
分层胃滞留***
披露于例如美国专利号6,685,962的分层胃滞留药物递送***(layered gastroretentive drug delivery system)可用于本文所述的缓释递送方法。一般来讲，这类递送***具有与附在膜上或连接在膜上的基质缔合的活性剂或药物。该膜防止从胃中排除，从而允许活性剂/基质在胃中保留3-24小时。
基质/膜***可以是多层***，包括但不限于双层***。另外，可以胶囊剂(包括但不限于明胶胶囊剂)内的折叠构型给予基质/膜。
这类递送***的基质可以是单层或多层，并具有二维或三维几何构型。基质可包含选自可降解聚合物的聚合物，包括但不限于并非立即溶于胃液的亲水聚合物、在pH小于5.5时基本不溶解的肠溶聚合物、疏水聚合物或其任何混合物。另外，基质可包含不可降解聚合物；或至少一种可降解聚合物和至少一种不可降解聚合物的混合物。
这类递送***的亲水聚合物可以是任何亲水聚合物，包括但不限于蛋白质、多糖、聚丙烯酸脂、水凝胶或其任何衍生物。仅举例来讲，这类蛋白质是来源于***的蛋白质(例如明胶和胶原)，或白蛋白，例如血清白蛋白、乳清蛋白或大豆白蛋白。仅举例来讲，这类多糖是藻酸钠或羧甲基纤维素。仅举例来讲，其它亲水聚合物可以是聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮或聚丙烯酸脂，例如聚羟乙基甲基丙烯酸酯。另外，亲水聚合物可与合适的交联剂交联。这类交联剂是本领域众所周知的，包括但不限于醛(例如甲醛和戊二醛)、醇、二价、三价或四价离子(例如铝、铬、钛或锆离子)、酰氯(例如癸二酰氯、四邻苯二甲酰氯)或任何其它合适的交联剂，例如脲、双-重氮基联苯胺、苯酚-2，4-二磺酰氯、1，5-二氟-2，4-二硝基苯、3，6-双-(汞甲基(mercuromethyl))-二
Figure BPA00001482422400681
烷脲、己二亚氨酸二甲酯(dimethyl adipimidate)、N，N′-亚乙基-双-(碘乙酰胺)或N-乙酰基高半胱氨酸硫代内酯。在例如Handbook ofBiodegradable Polymers[A.J.Domb，J.Kost & D.M.Weisman，Eds.(1997)Harwood Academic Publishers]中列举了其它合适的水凝胶及其合适的交联剂。
用于这类分层递送***的肠溶聚合物是在pH小于5.5时基本上不溶解的聚合物。仅举例来讲，这类肠溶聚合物包括虫胶、醋酸邻苯二甲酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯或甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物。
用于这类分层递送***的不可降解疏水聚合物包括但不限于乙基纤维素、丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、聚乙烯、聚酰胺、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯及其混合物。
用于这类分层递送***的可降解疏水聚合物包括但不限于聚(α-羟基酸)，例如聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、其共聚物和混合物。
用于这类分层递送***的膜具有相当的机械强度，并且可以是连续的或不连续的。仅举例来讲，这类膜可包含纤维素醚及其它纤维素衍生物，例如硝酸纤维素、醋酸纤维素、醋酸丁酸纤维素或醋酸丙酸纤维素；聚酯，例如聚对苯二甲酸乙二醇酯；聚苯乙烯，包括聚苯乙烯的共聚物和混合物；聚丙交酯，包括其与对二
Figure BPA00001482422400691
烷酮、聚乙交酯、丙交酯乙交酯共聚物(polylactidglycolides)的共聚物；聚烯烃，包括聚乙烯和聚丙烯；氟塑料，例如聚偏二氟乙烯和聚四氟乙烯，包括所述化合物与六氟丙烯或乙烯的共聚物；聚氯乙烯、聚偏二氯乙烯共聚物、乙烯乙烯醇共聚物、聚乙烯醇、铵-甲基丙烯酸酯共聚物及其它聚丙烯酸脂和聚甲基丙烯酸酯；聚丙烯腈；聚氨酯；聚邻苯二酰胺；聚酰胺；聚酰亚胺；聚酰胺-酰亚胺；聚砜；聚醚砜；聚环硫乙烷(polyethylenesulfides)；聚丁二烯；聚甲基戊烯；聚苯醚(其可以是改性的)；聚醚酰亚胺；多羟基链烷酸酯；酪氨酸衍生的多芳基化合物和聚碳酸酯包括聚酯碳酸酯、聚酐、聚苯醚、开环聚环烯烃、缩醛聚合物、聚烯丙基类、酚醛聚合物、聚三聚氰胺甲醛(polymelamine formaldehydes)、环氧聚合物、聚酮、聚乙酸乙烯酯和聚乙烯咔唑。
与基质缔合的活性剂或化合物可呈微粒形式或可呈未加工的粉末形式，或者溶于、分散于或包埋在合适的液体、半固体、微粒或纳米粒、微球或纳米球、片剂或胶囊剂中。任何这类形式的化合物或化合物的混合物都可包埋在递送***基质的至少一层中。或者，在多分层基质(包括但不限于双分层基质)中，药物可包封在任两层之间，不论是游离形式或装在含有化合物的装置中，仅举例来讲，装在片剂或胶囊剂中。
微囊剂胃滞留***
美国专利号6,022,562、5,846,566和5,603,957中描述的微囊剂胃滞留***(microcapsules gastroretentive system)可用于本文所述缓释递送方法。活性剂或药物的微粒子通过用由成膜聚合物衍生物、疏水增塑剂、功能剂和含氮聚合物的混合物组成的材料喷雾包衣。所得微囊剂的大小小于或等于1000微米(μm)，在某些情况下，这类微囊剂介于100微米和500微米之间。这些微囊剂在小肠中保留至少5小时。
用于这类微囊剂的成膜聚合物衍生物包括但不限于乙基纤维素、醋酸纤维素和非水溶性纤维素衍生物。含氮聚合物包括但不限于聚丙烯酰胺、聚-N-乙烯基酰胺、聚-N-乙烯基-内酰胺和聚乙烯基吡咯烷酮。用于这类微囊剂的增塑剂包括但不限于甘油酯、邻苯二甲酸酯、柠檬酸酯、癸二酸酯、鲸蜡醇酯、蓖麻油和角质。用于这类微囊剂的表面活性剂和/或润滑剂包括但不限于阴离子表面活性剂，例如脂肪酸、硬脂酸和/或油酸的碱金属或碱土金属盐；非离子型表面活性剂，例如失水山梨醇的聚氧乙烯化酯和/或失水山梨醇的聚氧乙烯化酯和/或蓖麻油的聚氧乙烯化衍生物；和/或润滑剂例如硬脂酸盐，例如硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸锌、硬脂基富马酸盐、硬脂基富马酸钠和山萮酸甘油酯。
在一个非限制性实例中，脱乙酰壳多糖和脱乙酰壳多糖与羧甲基纤维素钠(CMC-Na)的混合物用作药物缓释的溶媒，参见Inouye等，Drug Design and Delivery 1：297-305，1987。这些化合物与本发明组合的药物的混合物当在200kg/cm2压片时，形成片剂，在给予受试者时从片剂中慢慢释放出活性剂。释放性质可通过改变脱乙酰壳多糖、CMC-Na和活性剂的比率而改变。片剂还可含有其它添加剂，包括乳糖、CaHPO4二水合物、蔗糖、结晶纤维素或交联羧甲纤维素钠。
在另一个非限制性实例中，Baichwal在美国专利号6,245,356中描述了包括非晶型的治疗活性药物、胶凝剂、可电离胶凝强度增强剂和惰性稀释剂的团聚颗粒的缓释口服固体剂型。胶凝剂可以是黄原胶和刺槐豆胶的混合物，当所述胶暴露于环境流体中时，刺槐豆胶能够与黄原胶交联。优选可电离凝胶增强剂起提高黄原胶和刺槐豆胶之间的交联强度的作用，从而延长制剂中的药物成分的释放。除黄原胶和刺槐豆胶以外，还可使用的可接受的胶凝剂包括本领域众所周知的胶凝剂。实例包括天然存在的树胶或改良的天然存在的树胶，例如藻酸盐、角叉菜胶、果胶、瓜尔胶、改性淀粉、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素及其它纤维素材料或聚合物，例如羧甲基纤维素钠和羟丙基纤维素及上述成分的混合物。
在用于本发明组合的另一种非限制性的制剂中，Baichwal和Staniforth在美国专利号5,135,757中描述了用作药用赋形剂的自由流动慢释颗粒，药用赋形剂包括约20％-约70％或更高重量的亲水材料，亲水材料包括杂多糖(例如黄原胶或其衍生物)和能够在水溶液存在下使杂多糖交联的多糖材料(例如半乳甘露聚糖，最优选刺槐豆胶)；以及约30％-约80％重量的惰性药用填充剂(例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、木糖醇、果糖或其混合物)。在将赋形剂与该发明的三环化合物/皮质甾类组合或组合物质混合后，将混合物直接压制成固体剂型，例如片剂。由此形成的片剂当摄入和暴露于胃液中时慢慢释放出药物。通过改变赋形剂相对于药物的量，可实现慢释性质。
在另一个非限制性实例中，Shell在美国专利号5,007,790中描述了在溶液中以受药物溶解度控制的速率释放药物的缓释口服药物剂型。所述剂型包括片剂或胶囊剂，其包括大量有限溶解性药物在亲水性水可溶胀交联聚合物中的分散体的颗粒，所述聚合物在剂量寿命期间保持其物理完整性但之后快速溶解。一旦摄入，颗粒溶胀以延长胃滞留，并允许胃液渗入颗粒，溶解药物并使之从颗粒中滤出，确保了药物以溶液状态到达胃，这与固体状态药物相比对胃的损伤较小。聚合物程序化的最终溶解取决于聚合物的性质和交联的程度。非交联状态的聚合物是非原纤维状和大致水溶性的，交联的程度足以使聚合物能够保持不溶解达所需要的一段时间，通常至少约4小时到8小时直到12小时，其选择取决于所掺入的药物和所包括的医药治疗。可用于本发明的合适的交联聚合物的实例为明胶、白蛋白、藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙烯醇和壳多糖。根据聚合物，可通过热处理或照射处理或者通过使用例如醛、聚氨基酸、金属离子等交联剂来实现交联。
在其它的非限制性实例中，Carelli等人(Int.J.Pharmaceutics 179：73-83，1999)描述了用于pH控制的胃肠药物递送的硅酮微球。微球是由不同比例的甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物(Eudragit L100或Eudragit S100)和交联聚乙二醇8000制成的pH敏感性半互穿聚合物水凝胶，其被包封在硅酮微球中。慢释制剂可包括包衣材料，包衣材料不易溶于水，但被水慢慢侵蚀并除去，或者水可通过包衣材料慢慢渗入。因此，例如，可按照例如Kitamori等人(美国专利号4,036,948)所述，在连续流化条件下，用粘合剂溶液喷涂本发明的联合药物。水溶性粘合剂的实例包括预胶化淀粉(例如预胶化玉米淀粉、预胶化马铃薯淀粉)、预胶化改性淀粉、水溶性纤维素(例如羟丙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素)、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、糊精、***树胶和明胶、可溶于有机溶剂的粘合剂，例如纤维素衍生物(例如醋酸邻苯二甲酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、乙基纤维素)。
具有缓释性质的本发明的联合药物或其成分也可通过喷雾干燥技术配制。缓释联合药物的又一种形式可通过将组合物质颗粒在膜中微囊化来制备，所述膜起微量渗析单元的作用。在这类制剂中，胃液渗入微囊剂壁中，并溶胀微囊剂，使活性剂透析出来(参见例如Tsuei等，美国专利号5,589,194)。一种市售可得的这种类型的缓释***由具有***树胶/明胶/乙醇的膜的微囊组成。这种产品可以商品名DiffucapsTM获自Eurand Limited(France)。如此配制的微囊剂可在常规明胶胶囊中携带或压片。双层片剂可配制用于本发明的联合药物，其中不同的定制颗粒(custom granulation)由联合药物的各种物质组成，而且两种物质被压缩在双层压片中以制成单一片剂。
需要时，制剂可用适于缓释或控释给予活性成分的肠溶衣制备。可用于本发明目的的控释制剂的一种普通类型包含惰性片芯(例如糖球)，该惰性片芯用内层含药层和控制药物从内层释放的外膜层包衣。用于将化合物在胃肠道靶向释放的其它制剂也是本领域已知的，并考虑与本文所述本发明一起应用。用于将物质靶向递送至上胃肠道和/或下胃肠道的示例性***包括TIMERx
Figure BPA00001482422400721
***的制剂。这种控释制剂***提供变化的按时释放(SyncroDoseTM)以及两阶段释放(Geminex
Figure BPA00001482422400722
)(参见例如Staniforth和Baichwal，TIMERxnovel polysaccharidecomposites for controlled/programmed release of drugs in thegastrointestinal tract(TIMERx
Figure BPA00001482422400731
用于药物在胃肠道中控释/程控释放的新型多糖复合材料)，Expert Opin.Drug Deliv.，2(3)：587-89(2005))。使用制剂(例如本文所述的本发明的这些制剂)，除了在时间上控制这类化合物在任何这些位置的释放以外，还可制备靶向上胃肠道、下胃肠道或两者的组合物。
下胃肠道递送制剂的一个非限制性实例包含下胃肠道递送的片剂。片剂的内部组成包含约0.01％重量-约10.0％重量的合适药物；约50％重量-约98％重量的可获自高等植物的水胶体树胶；及约2％重量-约50％重量的药学上可接受的赋形剂，例如粘合剂。可存在其它任选材料，这些材料可有助于建立所需要的药物组合物的特性。这些包括可促进药物在下胃肠道吸收、可保护药物不被降解、可防止溶解等的材料。任选包围片剂内部组成的是优选为肠溶聚合物材料的包衣材料。
设计制剂以利用：(1)可获自高等植物的水胶体在上胃肠道中的保护特征，和(2)在下胃肠道中的水胶体的崩解特征。因此，片剂的内部组成可为以下若干设计之一：(a)它可以是治疗有效量的遍及均匀分散的活性成分以及高比例的水胶体和一般较少量的其它赋形剂的基质；(b)它可以是片芯，其中活性成分是浓缩的，片芯被不含活性成分的并具有高比例的水胶体和通常较少量的其它赋形剂的材料层包围；(c)它可具有活性成分的浓度梯度，使得片剂片芯中有较大的量，包围片芯的多层有较少的量，而外层几乎没有或没有活性成分。不论片剂设计是上述(a)、(b)或(c)中的哪一种，通过用合适的肠溶衣材料对片剂进行肠溶材料包衣而提高区域性递送至下胃肠道的特异性。
水胶体可获自高等植物。所谓“高等植物”意指缺乏运动能力、具有纤维素细胞壁、通过合成无机物质生长的植物界的生物，包括种子植物门，特别是被子植物纲的维管植物(或导管植物)。可从根、荚果、豆荚、浆果、树皮等中提取树胶。可获自高等植物的代表性水胶体树胶，包括瓜尔胶、西黄蓍胶、刺梧桐树胶(亦称刺槐树胶)和刺槐豆胶(亦称角豆胶)。其它树胶对于本领域技术人员而言是极显而易见的。参见例如Smith和Montgomery，″The Chemistry of Plant Gums andMucilages″，来源于ACS专著系列第141期，1959，Reinhold PublishingCompany和Merck Index第18版。一种特别适宜和有用的水胶体为瓜尔胶，是一种中性多糖，由长的半乳甘露聚糖分子与一些侧链连接部分组成。用于主题发明的水胶体一般在水化时具有高粘度，通常为线性的(化合物的至少约50％重量为主链)，并且通常具有高分子量，常约3×105道尔顿，更常常大于约1×106道尔顿。水胶体一般呈水胶体树胶粉，以1％浓度在中性水溶液中在25℃下24小时后，使用带有3号轴的Brookfield粘度计(LDF型)在90rpm下测定的粘度至少约75厘泊/秒(cps)，优选至少1×103cps，最优选至少约2×103cps。粘度一般随分子量增加而增加。参见Meer Corporation，″An Introduction toPolyhydrocolloids″。最有用的水胶体树胶是其中水胶体是化学命名为半乳甘露聚糖的多糖水胶体的水胶体树胶。半乳甘露聚糖是由α-D-吡喃半乳糖基的单一单元侧链通过(1→6)键与之连接的长链(1→4)-β-D-吡喃甘露糖基单元组成的多糖。半乳甘露聚糖存在于多种植物中，但分子大小和D-半乳糖基侧链数不同。用于本发明的半乳甘露聚糖通常存在于豆科的胚乳中。
可从例如四棱叶瓜尔豆(cyamopsis tetragonolobus)获得半乳甘露聚糖，通常称为瓜尔胶。这种胶的甘露糖残基百分比约为64％，半乳糖残基百分比为约36％。市售可得的瓜尔胶为约66-82％半乳甘露聚糖多糖，杂质构成了组成成分的其余部分。按照国家处方集(NationalFormulary，NF)标准，瓜尔胶可含有多达15％重量水、多达10％重量蛋白质、多达7％重量酸不溶性材料和多达约1.5％灰分。市售可得的瓜尔胶的来源为Aqualon Company，Wilmington，Del.；Meer Corporation，Cincinnati，Ohio；Stein Hall & Company and TIC Gums，Inc.，Belcamp，Md。
其它水胶体是本领域已知的。参见例如″The Chemistry of PlantGums and Mucilages″，Smith和Montgomery，A.C.S.专著系列，#141，1959，Reinhold Publishing Co.和The Merck Index第18版。一般来讲，要使用的水胶体的量是允许组合物穿过上胃肠道而无明显崩解并且在上胃肠道中没有释放明显量的药物的量，即提供延释特征。水胶体的量一般大于约50％但小于约98％。根据个体差异，不论受试者已进食或空腹及其它因素，片剂可在约3-6小时内穿过胃和上肠道。在这段时间内，几乎没有药物(小于20％，优选小于10％)从本发明的片剂中释放。一旦片剂到达下胃肠道，半乳甘露聚糖树胶的酶促降解引发药物的释放。
用于上胃肠递送的制剂的一个非限制性实例包含用作药用赋形剂的自由流动慢释颗粒，其包括约20％-约70％或更高重量的亲水材料，该亲水材料包括杂多糖(例如黄原胶或其衍生物)和能够在水溶液存在下交联杂多糖的多糖材料(例如半乳甘露聚糖、最优选刺槐豆胶)，以及约30％-约80％重量的惰性药用填充剂(例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、木糖醇、果糖或其混合物)。在将赋形剂与本发明的化合物混合后，把混合物直接压制成固体剂型，例如片剂。由此形成的片剂当摄入和暴露于胃液时慢慢释放药物。通过改变赋形剂相对于药物的量，可实现慢释性质。
延缓胃肠递送制剂的一个非限制性实例包含大量分散于亲水性水可溶胀的交联聚合物中的有限溶解性药物的颗粒，所述交联聚合物在剂量寿命期间保持其物理完整性但之后快速溶解。一旦摄入，颗粒溶胀促进胃滞留，并允许胃液渗入颗粒，溶解药物并使之从颗粒中滤出，确保了药物以溶液状态到达胃，与固体状态药物相比，这对胃的损伤较小。聚合物程序化的最终溶解取决于聚合物的性质和交联的程度。非交联状态的聚合物是非原纤维状的和大致水溶性的，交联的程度足以使聚合物能够保持不溶解达所需要的一段时间。可用于本发明的合适的交联聚合物的实例为明胶、白蛋白、藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙烯醇和壳多糖。根据聚合物，可通过热处理或照射处理或者通过使用例如醛、聚氨基酸、金属离子等交联剂来实现交联。
用于上胃肠递送、下胃肠递送、前两者或在上、下胃肠中的区域(例如横结肠)的其它制剂是本领域已知的。药物靶向肠的不同区域参见例如Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，James Swarbrick和James Boylan，Informa Health Care，1999，第287-308页。用于部位特异性递送和/或特定时间递送(即延释、控释、延长释放或缓释)的胃肠递送的任何合适制剂都可与本发明一起使用，并在本文中加以考虑。在一个非限制性实例中，单一组合物包含将至少一种化学感受受体配体递送至上胃肠道的第一制剂和将至少一种化学感受受体配体递送至下胃肠道的第二制剂。因此，单一组合物可供将化学感受受体配体递送至上胃肠道和下胃肠道。其它非限制性实例包括具有将至少一种化学感受受体配体递送至上胃肠道的制剂的组合物和具有将至少一种化学感受受体配体递送至下胃肠道的制剂的组合物。可配制本文所述的化学感受受体配体的不同组合以治疗特定病况并递送至肠道的特定位置。
本文描述的任何递送***都可与实现多重释放特征和/或特定释放特征的其它***联用。在一些实施方案中，活性剂是在给药后在胃肠位置中实现多重释放的制剂。在某些实施方案中，活性剂是在给药后约30分钟、约120分钟、约180分钟、约240分钟或其组合释放的多重释放制剂。在某些实施方案中，活性剂是在给药后约15分钟-约45分钟、约105分钟-约135分钟、约165分钟-约195分钟、约225分钟-约255分钟或其组合释放的多重释放制剂。在其它实施方案中，活性剂是在给药后在十二指肠、空肠、回肠、结肠或其组合中释放的多重释放制剂。在另外的其它实施方案中，活性剂是在给药后在约pH5.5、约pH 6.0、约pH 6.5、约pH 7.0或其组合下释放的多重释放制剂。在另外的其它实施方案中，活性剂是在给药后在约pH 5.0-约pH 6.0、约pH 6.0-约pH 7.0、约pH 7.0-约pH 8.0或其组合的范围内释放的多重释放制剂。在另外的其它实施方案中，活性剂是释放部分活性剂作为即释而通过本文描述的改进方法释放活性剂的其余部分的多重释放制剂
赋形剂
本文所述的任何组合物或制剂包括任何药剂学中常用的赋形剂，并根据与活性剂的相容性和所需剂型的释放特征性质加以选择。赋形剂包括但不限于粘合剂、填充剂、助流剂(flow aid/glident)、崩解剂、润滑剂、稳定剂、表面活性剂等。本文所述赋形剂的概要可参见例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版(Easton，PA：Mack Publishing Company，1995)；Hoover，John E.，Remington’sPharmaceutical Sciences，(Easton，PA：Mack Publishing Co 1975)；Liberman，H.A.和Lachman，L.主编，Pharmaceutical Dosage Forms(New York，NY：Marcel Decker 1980)；以及Pharmaceutical DosageForms and Drug Delivery Systems，第17版(Lippincott Williams &Wilkins 1999)，通过引用以其整体结合到本文中。
粘合剂赋以粘结性质，包括例如藻酸及其盐；纤维素衍生物，例如羧甲基纤维素、甲基纤维素(例如Methocel
Figure BPA00001482422400771
)、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素(例如Klucel
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)、乙基纤维素(例如Ethocel
Figure BPA00001482422400773
)和微晶纤维素(例如Avicel
Figure BPA00001482422400774
)；微晶葡萄糖；直链淀粉；硅酸镁铝；多糖酸；皂土；明胶；聚乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物；交联聚维酮；聚维酮；淀粉；预胶化淀粉；西黄蓍胶；糊精；糖，例如蔗糖(例如Dipac
Figure BPA00001482422400775
)、葡萄糖、右旋糖、糖蜜、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇(例如Xylitab
Figure BPA00001482422400776
)和乳糖；天然树胶或合成树胶，例如***树胶、西黄蓍胶、印度树胶、isapol壳的胶浆、聚乙烯基吡咯烷酮(例如Polyvidone
Figure BPA00001482422400777
CL，Kollidon
Figure BPA00001482422400778
CL，Polyplasdone
Figure BPA00001482422400779
XL-10)、落叶松阿半乳聚糖、Veegum
Figure BPA000014824224007710
聚乙二醇、蜡、藻酸钠等。
崩解剂促进给药后口服固体剂型的分解或崩解。崩解剂的实例包括淀粉，例如诸如玉米淀粉或马铃薯淀粉等天然淀粉、诸如National1551或Amijel
Figure BPA00001482422400781
等预胶化淀粉或者诸如Promogel
Figure BPA00001482422400782
或Explotab
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等羟基乙酸淀粉钠；纤维素，例如木制品；甲基结晶纤维素(methylcrystallinecellulose)，例如Avicel
Figure BPA00001482422400784
Avicel
Figure BPA00001482422400785
PH101、AvicelPH102、Avicel
Figure BPA00001482422400787
PH105、Elcema
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P100、Emcocel
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Vivacel
Figure BPA000014824224007810
Ming Tia
Figure BPA000014824224007811
和Solka-Floc
Figure BPA000014824224007812
甲基纤维素、交联羧甲纤维素；或交联纤维素，例如交联羧甲基纤维素钠(Ac-Di-Sol
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)、交联羧甲基纤维素或交联羧甲纤维素；交联淀粉，例如羟基乙酸淀粉钠；交联聚合物，例如交联聚维酮；交联聚乙烯基吡咯烷酮；藻酸盐，例如藻酸或藻酸盐，例如藻酸钠；粘土，例如Veegum
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HV(硅酸镁铝)；树胶，例如琼脂、瓜尔胶、刺槐豆胶、刺梧桐树胶、果胶或西黄蓍胶；羟基乙酸淀粉钠；皂土；天然海绵；树脂，例如阳离子交换树脂；柑桔浆(citrus pulp)；十二烷基硫酸钠；组合淀粉中的十二烷基硫酸钠，等等。
润滑剂是防止、减少或抑制材料的粘附或摩擦的化合物。示例性的润滑剂包括例如硬脂酸；氢氧化钙；滑石粉；硬脂酰醇富马酸钠；烃，例如矿物油、氢化蓖麻油或氢化植物油(例如氢化大豆油(Sterotex
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))；高级脂肪酸及其碱金属和碱土金属盐，例如铝、钙、镁、锌盐；硬脂酸、硬脂酸钠、硬脂酸镁、甘油、滑石粉、蜡、Stearowet
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硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇(例如CarbowaxTM)、环氧乙烷聚合物、油酸钠、山萮酸甘油酯(例如Compritol 888 Ato)、二硬脂酸甘油酯(Precirol Ato 5)、聚乙二醇、十二烷基硫酸镁或十二烷基硫酸钠、胶态硅石(例如SyloidTM、Carb-O-Sil)、DL-亮氨酸、淀粉(例如玉米淀粉)、硅油、表面活性剂，等等。
助流剂改进粉末混合物的流动特性。这类化合物包括例如胶态二氧化硅(例如Cab-o-sil
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)；磷酸三钙、滑石粉、玉米淀粉、DL-亮氨酸、十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸钠、高岭土和微粉化无定型二氧化硅(Syloid)等。
增塑剂有助于口服固体剂型的包衣。示例性的增塑剂包括但不限于柠檬酸三乙酯、三醋精(三乙酸甘油酯)、乙酰基柠檬酸三乙酯、聚乙二醇(PEG 4000、PEG 6000、PEG 8000)、Carbowax 400(聚乙二醇400)、邻苯二甲酸二乙酯、癸二酸二乙酯、乙酰基柠檬酸三乙酯、油酸、单硬脂酸甘油酯(glyceralmonosterate)、柠檬酸三丁酯、乙酰化单甘油酯、甘油、脂肪酸酯、丙二醇和邻苯二甲酸二丁酯等。
上述赋形剂仅作为实例给出，并不意味着包括所有可能的选择。其它合适的赋形剂类别包括着色剂、成粒剂、防腐剂、消泡剂、增溶剂等。另外，许多赋形剂可能具有不止一种作用或功能，或者可归类到不止一个组别；所述分类也只是说明性的，并非旨在限制具体赋形剂的任何用途。
评价治疗的方法
激素谱
预期激素随着激动剂(有或没有其相应的营养物)的给予同时释放。在给予激动剂期间屡次进行激素取样。可在有和没有全身性抑制二肽基肽酶IV(DPP-IV)以提高相关激素的循环半寿期时，对试验动物和受试者进行研究。
对于降低葡萄糖，适于治疗血液葡萄糖升高的激素谱由以下成分组成：例如，1)GLP-1，循环浓度高于3倍基础浓度；3)GIP，循环浓度高于1.5倍基础浓度，和3)PYY 3-36，循环浓度高于2倍基础浓度。
对于体重减轻，适于治疗血液葡萄糖升高的激素谱由以下成分组成：例如，1)PYY，循环浓度高于3倍基础浓度；2)泌酸调节肽，循环浓度高于2倍基础浓度；3)GPL-1，循环浓度高于3倍基础浓度；和4)CCK，循环浓度高于2倍基础浓度。
激素测定法
在实施方案中，按照文献中描述的标准方法，检测与本发明方法相关的测定的激素水平，包括但不限于GLP-1、GLP-2、GIP、泌酸调节肽、PYY、CCK、肠高血糖素、胰岛素、胰高血糖素、胰岛素C肽、SGLT-1。例如，可通过免疫测定法来测定蛋白质，以及通过核酸扩增技术来测定转录产物，。适当时，还可采用本领域描述的功能测定法。在实施方案中，所测定的样品包含培养细胞、患者细胞或组织样品、患者体液(例如血液或血浆)等。
例如，免疫荧光可用于测定GLP-1。可将细胞在12孔板上的基质胶包被的盖片上于37℃生长成汇合的单层培养物，在4％低聚甲醛的磷酸缓冲盐溶液(PBS)中固定，并与第一抗血清(例如兔抗α味转导素，1∶150；Santa Cruz Biotechnology和兔抗GLP-1，Phoenix)一起在4℃下培育过夜，接着用0.4％曲通-X(Triton-X)的PBS溶液透化处理10分钟，并在室温下封闭1小时。在用封闭缓冲液进行3次洗涤步骤后，在室温下加入合适的第二抗体(AlexaFluor 488抗兔免疫球蛋白，1∶1000；Molecular Probes)达1小时。在3次洗涤步骤后，可将细胞固定在Vectashield介质中，并观察免疫荧光。
可采用RT-PCR测定自细胞分离的GLP-1 RNA。从细胞分离RT-PCR RNA可应用标准方法进行。可使用已发表的引物序列(Integrated DNA Technologies)，在Peltier循环变温加热器(PTC-225DNA Engine Tetrad Cycler；MJ Research)中，以50μl的体积进行RT-PCR反应。在95℃15分钟的最初活化步骤之后，反转录可在50℃下进行30分钟。可通过在94℃下1分钟变性，在55℃下1分钟退火，在72℃下1分钟延伸40次循环，接着72℃10分钟的最后延伸步骤，来进行PCR。适当时，可包括阴性对照，例如用水替换省略的反转录酶或模板。对照可以是从例如大鼠舌上皮分离的RNA。可将PCR产物在2％琼脂糖凝胶与溴化乙锭中分离，并在紫外线下观察。
患者血样的总GLP-1的放射免疫测定法(RIA)可按本领域所述方法进行，例如Laferrere等，2007，“Incretin Levels and Effect are MarkedlyEnhanced 1 Month after Roux-en-Y Gastric Bypass Surgery in ObesePatients with Type 2 Diabetes(2型糖尿病肥胖患者中Roux-en-Y胃分流术1个月后肠降血糖素水平和作用显著提高)，Diabetes Care30(7)：1709-1716(使用获自Phoenix Pharmaceutical，Belmont，CA的市售材料)。该文作者描述了通过测定在响应口服葡萄糖耐量试验和同等血糖(isoglycemic)静脉内葡萄糖试验时胰岛素分泌(曲线下面积或AUC)的差异，来测定GIP和GLP-1对胰岛素分泌的作用。
例如Toft-Nielsen等人(2001，“Determinants of the ImpairedSecretion of Glucagon-Like Peptide-1 in Type 2 Diabetic Patients(2型糖尿病患者中胰高血糖素样肽-1分泌受损的决定因素)”，J.Clin.End.Met.86(8)：3717-3723)描述了GLP-1、GIP、胰高血糖素、胰岛素、C肽、胰肽、非酯化脂肪酸、谷氨酸脱羧酶抗体和胰岛抗原抗体的血浆浓度的测定。该作者描述了使用抗体代码号89390利用GLP-1的放射免疫测定法测定酰胺化GLP-1-(7-36)的血浆浓度。该测定法测定了GLP-1-(7-36)及其代谢物GLP-1-(9-36)的总和。该作者描述了使用与人GIP 100％反应但不与8-kDA GIP反应的C端定向抗体代码号R65(RIA)，来测定GIP。
按照例如Claustre等人(1999，“Stimulatory effect of β-adrenergicagonists on ileal L cell secretion and modulation by α-adrenergicactivation(β-肾上腺素能激动剂对被α-肾上腺素能激活的回肠L细胞分泌和调节的刺激作用)，J.Endocrin.162：271-8)所述，在来自静脉流出物的上清液中直接测定GLP-1和PYY。(另参见Plaisancie′等，1994，“Regulation of glucagon-like peptide-1-(7-36)amide secretion byintestinal neurotransmitters and hormones in the isolated vascularlyperfused rat colon(分离的血管灌注大鼠结肠中通过肠神经递质和激素调节胰高血糖素样肽-1-(7-36)酰胺分泌)”，Endocrinology135：2398-2403和Plaisancie′等，1995，“Release of peptide YY byneurotransmitters and gut hormones in the isolated，vascularly perfused ratcolon(分离的血管灌注大鼠结肠中神经递质和肠激素引起的肽YY的释放)”，Scandinavian Journal of Gastroenterology 30：568-574)。在该方法中，以1∶250000稀释度使用199D抗GLP-1抗体。该抗体与GLP-1-(7-36)酰胺的反应为100％，与GLP-1-(1-36)酰胺的反应为84％，与GLP-1-(1-37)、GLP-1-(7-37)、GLP-2和胰高血糖素的反应小于0.1％。用1∶800000稀释度的A4D抗猪PYY抗血清对PYY进行测定。
在本领域的其它地方还描述了用于测定GLP-1和GIP的方法，例如Jang等，PNAS，2007。
还可按照例如Weickert等人(2006，“Soy isoflavones increasepreprandial peptide YY(PYY)，but have no effect on ghrelin and bodyweight in healthy postmenopausal women(大豆异黄酮增加餐前肽YY(PYY)但对健康绝经后女性的生长素释放肽和体重没有影响)”Journalof Negative Results in BioMedicine，5：11)所述，利用放射免疫测定法测定血液中的PYY。在冰冷的EDTA管中收集血液用于葡萄糖、生长素释放肽和PYY的分析。在4℃下以1600g离心10分钟后，立即将等分样品在-20℃下冷藏直到测定。在同一测定中测定了各受试者的全部样品。该作者描述了通过市售可得的放射免疫测定(PhoenixPharmaceuticals，Mountain View，CA，USA)测定免疫反应性总生长素释放肽。(另参见Weickert等，2006，“Cereal fiber improves whole-bodyinsulin sensitivity in overweight and obese women(谷类纤维改善体重超重和肥胖女性的整体胰岛素敏感性)”，Diabetes Care 29：775-780)。使用125I标记的生物活性PYY作为示踪剂以及PYY抗血清，通过市售可得的放射免疫测定(LINCO Research，Missouri，USA)，测定免疫反应性总人PYY，所述PYY抗血清通过双重抗体/PEG技术测定活性PYY水平。PYY抗体在豚鼠中产生，并识别人PYY的PYY 1-36和PYY 3-36形式两者。
SGLT-1，即肠钠依赖性葡萄糖转运蛋白1，是参与向机体提供葡萄糖的蛋白质。据报道，它在响应肠腔中的糖时通过涉及T1R3的途径表达(Margolskee等，2007“T1R3 and gustducin in gut sense sugars toregulate expression of Na+-glucose cotransporter 1(T1R3和味转导素在肠中感觉糖从而调节Na+-葡萄糖协同转运蛋白1的表达)”，Proc NatlAcad Sci USA 104，15075-15080”)。可按照例如Margolskee等人所述，采用例如本领域已知的定量PCR和蛋白质印迹方法，检测SGLT-1的表达。文献中描述了葡萄糖转运的测定，例如Dyer等，1997，Gut41：56-9和Dyer等，2003，Eur.J.Biochem 270：3377-88。可进行刷状缘膜囊中葡萄糖转运的测定，例如通过将100μl含有100mM NaSCN(或KSCN)、100mM甘露糖醇、20mM Hepes/Tris(pH 7.4)、0.1mMMgSO4、0.02％(wt/vol)NaN3和0.1mM D-[U14C]葡萄糖的培育培育基加入BBMV(100μg蛋白质)中开始D-葡萄糖摄取。3秒钟后，通过加入1ml含有150mM KSCN、20mM Hepes/Tris(pH 7.4)、0.1mMMgSO4、0.02％(wt/vol)NaN3和0.1mM根皮苷的冰冷的终止缓冲液，终止反应。取出0.9ml份的反应混合物，通过0.22μm微孔醋酸纤维素/硝酸纤维素过滤器(GSTF02500；Millipore，Bedford，MA)真空过滤。过滤器用1ml终止缓冲液洗涤5次，通过液体闪烁计数测定保留在过滤器上的放射性。
糖尿病治疗的评价
可按照本领域已知的方法和治疗糖尿病受试者的医师常实施的方法评价本发明的化学感受受体配体治疗对糖尿病方面的作用。
可采用本领域已知的测定法和方法评价用本文所述组合物和方法治疗糖尿病/代谢综合征和糖尿病相关病况的效果。举例来讲，定量评价肾功能和肾功能障碍的参数是本领域众所周知的。用于测定肾功能/肾功能障碍的测定法的实例包括血清肌酸酐水平；肌酸酐清除率；半胱氨酸蛋白酶抑制剂C清除率、24小时尿肌酸酐清除率、24小时尿蛋白分泌；肾小球滤过率(GFR)；尿白蛋白肌酸酐比(ACR)；白蛋白排出率(AER)和肾活组织检查。
胰功能和胰功能障碍或胰功能不全的参数的定量评价也是本领域众所周知的。用于测定胰功能/功能障碍的测定法的实例包括利用生物学和/或生理学参数评价胰功能，例如评价胰岛大小、生长和/或分泌活性、β细胞大小、生长和/或分泌活性、胰岛素分泌和循环血液水平、葡萄糖血液水平、胰成像和胰活组织检查、通过口服葡萄糖攻击研究葡萄糖摄取、细胞因子概况的评价、血气分析、组织血液灌注程度和组织内的血管生成。
用于治疗糖尿病和糖尿病相关病况的其它测定法是本领域已知的，并包括在本文中。
治疗肥胖症和进食障碍的评价
在肥胖症的治疗中，需要减轻受试者的体重和/或减少脂肪。所谓减轻体重，意指受试者在疗程(不论疗程是数天、数周、数月还是数年)期内失去他/她总体重的一部分。或者，减轻体重可定义为脂肪质量与瘦质量的比例减轻(换句话说，受试者失去脂肪质量，但维持或获得瘦质量，总体重不一定相应减轻)。在该实施方案中给予的化学感受受体配体治疗的有效量是在疗程期间有效减轻受试者体重的量，或者是在疗程期间有效减少受试者的脂肪质量百分比的量。在某些实施方案中，受试者的体重在疗程期间减轻至少约1％、至少约5％、至少约10％、至少约15％或至少约20％。或者，在疗程期间受试者的脂肪质量百分比降低至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％或至少25％。
可在规定饮食期结束时测定总体重和脂肪含量。在大鼠中，测定整体脂肪的常用方法是手术取出和称重腹膜后脂肪垫、位于腹膜后腔、后腹壁和后腹膜壁层之间的区域的脂肪体。脂垫重量被认为与动物的体脂肪百分比直接相关。由于在大鼠中体重和体脂肪呈线性关系，因此肥胖动物具有相对较高的体脂肪百分比和腹膜后脂肪垫重量。
在其中提供治疗、减轻或预防受试者的嗜食癖的方法的实施方案中，可利用问卷(不论是本领域已知的或研究嗜食癖的个人创建的)，来测定嗜食癖。这类问卷可优选按照数值刻度排列嗜食癖的水平，其中如果受试者没有嗜食癖，则将其标记为0，如果受试者有严重嗜食癖则标记为10(如果是1-10的刻度)。问卷还优选包括受试者渴求什么类型的食物的问题。
暴食症可使用问卷和暴食症量表(BES)来确定或测定。可根据总BES分值(通过汇总各单独项目的分值来计算)，将暴食症严重程度分为三类(轻微、中度和重度)。因此，本文提供降低受试者的BES分值的方法，所述方法包括将有效降低受试者的BES分值的量将化学感受受体配体治疗给予有需要的受试者。在一些实施方案中，给予化学感受受体配体治疗改变受试者的BES类别，例如从重度变为中度，从重度变化轻微，或从中度变为轻微。
患者激素谱的治疗前评价
在本发明的实施方案中，用本文所述方法对患者的代谢激素的表达进行了初步评价。向个体提供的治疗可因此瞄准他或她的具体需求。在实施方案中，对患者的激素谱进行初步评价，根据医师希望实现的改变，给予某种化学感受受体配体/代谢物组合。可以重复该评价过程，并由此在治疗期间或治疗后的任何时间调整治疗。
本文所用的“化学感受受体”包括例如在受试者的胃肠***中表达的G蛋白偶联受体(GPCR)。化学感受受体包括味觉受体家族，并按照其味觉特征进一步分类。它们包括甜味受体、鲜味受体(亦称为美味(savory)受体)、苦味受体、脂肪或脂肪酸受体、胆汁酸受体、咸味受体和酸味受体。化学感受受体可以是与化学感受感觉或化学感受配体引发的信号转导(例如经由在味蕾、胃肠道等中表达的味觉受体或味觉相关受体)有关的任何受体。
示例性的化学感受受体包括特异性结合和/或响应甜味、鲜味、苦味、胆汁酸、酸味、咸味、脂肪或任何其它化学感受相关配体(包括激活物、抑制剂和增强剂)的T1R(例如T1R1、T1R2、T1R3)、T2R、脂肪酸受体、胆汁酸受体、甜味受体、咸味受体、变体、等位基因、突变体、直向同源物(ortholog)及其嵌合体。化学感受受体还包括在人或其它哺乳动物表达的味觉受体(种间同源物)，例如，与味觉和/或部分胃肠***有关的细胞，胃肠***包括而不限于食管、胃、肠(小肠和大肠)、结肠、肝、胆管、胰、胆囊等。同样，T1R多肽包括来源于不同种类的特定T1R多肽(例如T1R1、T1R2或T1R3)的部分或通过将不同T1R的部分组合的嵌合序列，其中这类嵌合T1R序列结合产生功能性甜味或鲜味受体。例如，嵌合T1R可包含一种T1R(即T1R1或T1R2)的胞外区和另一种T1R(T1R1或T1R2)的跨膜区。
从拓扑结构来看，某些化学感受GPCR具有“N端结构域”、“胞外结构域”、包含7个跨膜区的“跨膜结构域”和相应的胞质环和胞外环、“胞质区”和“C端区”(参见例如Hoon等，Cell 96：541-51(1999)；Bucket等，Cell 65：175-87(1991))。可采用本领域技术人员已知的方法在结构上鉴定这些区域，例如鉴定疏水和亲水结构域的序列分析程序(参见例如Stryer，Biochemistry，(第3版，1988)；另参见许多以互联网为基础的序列分析程序的任一种，例如dot.imgen.bcm.tmc.edu中的分析程序)。这些区域可用于制备嵌合蛋白并用于本发明的体外测定法，例如配体结合测定法。
因此，“胞外结构域“是指自细胞膜伸出并暴露于细胞的胞外面的化学感受受体(例如T1R多肽)的结构域。这类区域可包括暴露于细胞胞外面的“N端结构域”以及暴露于细胞胞外面的跨膜结构域的胞外环，即在跨膜区2和3、跨膜区4和5以及跨膜区6和7之间的胞外环。“N端结构域”始于N端，并延伸接近跨膜区起始处的区域。这些胞外区可用于既是可溶相也是固体相的体外配体结合测定法。另外，下述跨膜区还可单独参与配体结合或与胞外区组合参与配体结合，因此也可用于体外配体结合测定法。
包含7个跨膜“区”的“跨膜结构域”是指某些化学感受受体的结构域，例如位于血浆膜内的T1R或T2R多肽，还可包括相应的胞质(胞内)环和胞外环，亦称跨膜“区”。
“胞质结构域”是指面对细胞内部的化学感受受体(例如T1R或T2R蛋白)的结构域，例如跨膜结构域的“C端结构域”和胞内环，例如在跨膜区1和2、跨膜区3和4及跨膜区5和6之间的胞内环。“C端结构域”是指自最后一个跨膜区的末端跨越至蛋白质C端的区域，其通常位于胞质内。
术语“7-跨膜受体”包括属于具有跨越血浆膜7次的7个区域的跨膜蛋白超家族的多肽(因此，7个区域称为“跨膜”或“TM”结构域TMI-TM VII)。
在所公开的配体和用于测试调节化学感受受体，例如提高化学感受受体家族成员介导的信号转导(例如甜味、鲜味、苦味、脂肪、胆汁酸、酸味或咸味受体功能作用或活性)的化合物的测定法的情况下，“活性”或“功能作用”包括测定间接或直接在特定化学感受受体影响下的任何参数。在无任何限制的情况下，它包括体外、体内和离体的配体结合、在离子流、膜电位、电流、转录、G蛋白结合、GPCR磷酸化或去磷酸化、信号转导、受体-配体相互作用、第二信使浓度(例如cAMP、cGMP、IP3或胞内Ca2+)方面的变化，并且还包括其它生理作用，例如增加或降低神经递质或激素释放和测定这类释放的下游生理作用。
术语“测定功能作用”或受体“活性”意指提高或降低间接或直接在化学感受受体影响下的参数的化合物的测定法，参数为例如功能、生理和化学作用。这类参数还包括诸如GIP、GLP-1、GLP-2、泌酸调节肽、胰岛素、胰高血糖素、胰岛素肽C、肽YY、SGLT-1和CCK等激素的分泌。这类功能作用可通过本领域技术人员已知的任何方法测定，例如在以下方面的改变：光谱性质(例如荧光、吸光度、折射率)、流体动力学性质(例如形状)、色谱性质或溶解性质的改变、膜片钳、压敏性染料、全细胞电流、放射性同位素流出物、诱导型标记、***化学感受受体，例如T1R基因表达；组织培养细胞化学感受受体，例如T1R表达；化学感受受体的转录激活，例如T1R基因；配体结合测定法；电压、膜电位和电导的改变；离子流测定法；胞内第二信使的改变，例如cAMP、cGMP和肌醇三磷酸(IP3)；胞内钙水平的改变；神经递质释放等等。还包括测定激素或神经递质分泌和/或活性的增加或降低的测定法。还可通过激素或神经递质分泌的改变引起的生理作用，间接测定激素或神经递质分泌和/或活性的改变。
本文使用的“化学感受受体配体”包括化学感受受体的“味元”、“激动剂”、“拮抗剂”和“改性剂”和调节化学感受受体的“化合物”，所述受体为例如T1R受体、T2R受体、胆汁酸受体、酸味和咸味受体、脂肪受体。这些术语可互换使用，用来指使用化学感受信号转导的体外和体内测定法已知的和/或鉴定的激活、抑制或调节分子，例如配体/味元(激动剂、拮抗剂、调节剂)及其同源物和模拟物。
拮抗剂/抑制剂是例如结合、部分或全部阻断刺激、降低、防止、延迟活化、钝化、脱敏或减量调节化学感受受体和/或味觉转导的化合物。激动剂/激活物是例如结合、刺激、增加、开启、激活、促进、提高活化、敏化或增量调节化学感受受体信号转导的化合物。
改性剂包括例如直接或间接改变受体的活性或受体与其配体(例如受体配体)相互作用和任选与激活物或抑制剂结合或相互作用的化合物；G蛋白；激酶(例如参与受体失活和脱敏的视紫红质激酶和β肾上腺素能受体激酶的同源物)；以及阻止物(arresting)，其同样也使受体失活和脱敏。改性剂包括例如活性发生改变的化学感受受体(例如T1R家族成员)的遗传修饰形式，以及天然存在的和合成配体、拮抗剂、激动剂、化学小分子等。在本发明中，在没有任何限制的情况下，这包括甜味受体配体、鲜味受体配体、苦味受体配体、脂肪酸配体、胆汁受体配体(激动剂或拮抗剂)。
在一些实施方案中，任何病况、疾病或病症的“治疗”是指改善疾病或病症(即阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在其它实施方案中，“治疗”是指改善至少一个物理参数，其可以是不被患者察觉的。在另外的其它实施方案中，“治疗”是指从身体方面(例如可识别症状的稳定)、生理方面(例如物理参数的稳定)或两个方面抑制疾病或病症。在另外的其它实施方案中，“治疗”是指延缓疾病或病症的发作。
“治疗有效量”意指当给予患者治疗疾病时，足以实现疾病的这类治疗的化合物的量。“治疗有效量”可随化合物、疾病及其严重程度和待治疗患者的年龄、体重等而变化。
实施例
实施例1
糖尿病大鼠中一种化学感受受体配体和代谢物的上胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗测定单一化学感受受体配体(甜味)和代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖和关联代谢物葡萄糖。动物按剂量分组，采用递增剂量(范围0.01-100mg/kg)。经由通过轻度麻醉动物的口***十二指肠的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予化学感受受体配体和代谢物以治疗糖尿病大鼠的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
按照上述方案，进行了5种化学感受受体配体类型(甜味、鲜味、脂肪、苦味和胆汁酸)的实验方案。示例性配体和相应的剂量范围如下：
三氯半乳蔗糖：0.01-100mg/kg
MSG：0.01-100mg/kg
脂肪酸乳液：10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行。
奎宁：0.01-100mg/kg
鹅脱氧胆酸(CDC)：1-50mMol溶液，在10秒钟-5分钟范围内以1-10ml/分钟进行。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例2
糖尿病大鼠中一种化学感受受体配体和代谢物的下胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗测定单一化学感受受体配体(甜味)和关联代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖和关联代谢物葡萄糖。动物按剂量分组，并采用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg)。经由通过轻度麻醉的动物的直肠***降结肠中上部的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
按照上述方案，进行了5种化学感受受体配体类型(甜味、鲜味、脂肪、苦味和胆汁酸)的实验方案。示例性配体和相应的剂量范围如下：
三氯半乳蔗糖：0.01-100mg/kg
MSG：0.01-100mg/kg
脂肪酸乳液：10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行。
奎宁：0.01-100mg/kg
鹅脱氧胆酸(CDC)：1-50mMol溶液，在10秒钟-5分钟范围内以1-10ml/分钟进行。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例3
糖尿病大鼠中两种化学感受受体配体和代谢物的上胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗测定两种化学感受受体配体和代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体和代谢物和/或葡萄糖及适当的对照干扰(仅味元、仅盐水、仅葡萄糖)。动物按剂量分组，并采用递增剂量(递增的味元剂量与代谢物的固定剂量)。经由通过轻度麻醉动物的口***十二指肠的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予化学感受受体配体和代谢物治疗糖尿病大鼠的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
按照上述方案，进行了两种包括化学感受受体配体类型甜味、鲜味、脂肪、苦味和胆汁酸在内的化学感受受体配体的组合的实验方案。示例性配体和相应的剂量范围如下：
三氯半乳蔗糖：0.01-100mg/kg
MSG：0.01-100mg/kg
脂肪酸乳液：10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行。
奎宁：0.01-100mg/kg
鹅脱氧胆酸(CDC)：1-50mMol溶液，在10秒钟-5分钟范围内以1-10ml/分钟进行。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例4
糖尿病大鼠中两种化学感受受体配体和代谢物的下胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗测定两种化学感受受体配体和代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的两种化学感受受体配体和代谢物和/或葡萄糖。动物按剂量和递增剂量分组。经由通过轻度麻醉的动物的直肠***降结肠中上部的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予化学感受受体配体和代谢物以治疗糖尿病大鼠的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
按照上述方案，进行了两种包括化学感受受体配体类型甜味、鲜味、脂肪、苦味和胆汁酸在内的化学感受受体配体的组合的实验方案。示例性配体和相应的剂量范围如下：
三氯半乳蔗糖：0.01-100mg/kg
MSG：0.01-100mg/kg
脂肪酸乳液：10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行。
奎宁：0.01-100mg/kg
鹅脱氧胆酸(CDC)：1-50mMol溶液，在10秒钟-5分钟范围内以1-10ml/分钟进行。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例5
糖尿病大鼠中3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和脂肪)和代谢物的上胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗(优于单一化学感受受体配体的增加功效、协同作用等)测定3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和脂肪)和代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的配体三氯半乳蔗糖、谷氨酸一钠(MSG)和脂肪酸乳液及其代谢物。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。鲜味受体配体MSG也是代谢物。动物按剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/.kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行)。经由通过轻度麻醉动物的口***十二指肠的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予化学感受受体配体和代谢物以治疗糖尿病大鼠的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例6
糖尿病大鼠中3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和脂肪)和代谢物的下胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗(优于单一化学感受受体配体的增加功效、协同作用等)测定3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和脂肪)和代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、谷氨酸一钠(MSG)和脂肪酸乳液。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。动物按剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422400961
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行)。经由通过轻度麻醉的动物的直肠***降结肠中上部的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予化学感受受体配体和代谢物治疗糖尿病大鼠的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例7
糖尿病大鼠中3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和苦味)和代谢物的上胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗(优于单一化学感受受体配体的增加功效、协同作用等)测定3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和苦味)和代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的配体三氯半乳蔗糖、谷氨酸一钠(MSG)和奎宁及其关联代谢物。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。动物按剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由通过轻度麻醉动物的口***十二指肠的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予化学感受受体配体和代谢物治疗糖尿病大鼠的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例8
糖尿病大鼠中3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和苦味)和代谢物的下胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗(优于单一化学感受受体配体的增加功效、协同作用等)测定3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和苦味)和代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、谷氨酸一钠(MSG)和奎宁及其关联代谢物。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。动物按剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由通过轻度麻醉的动物的直肠***降结肠中上部的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例9
糖尿病大鼠中3种化学感受受体配体(甜味、脂肪和苦味)和关联代谢物的上胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗(优于单一化学感受受体配体的增加功效、协同作用等)测定3种化学感受受体配体(甜味、脂肪和苦味)和关联代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的配体三氯半乳蔗糖、脂肪酸乳液和奎宁及其关联代谢物。葡萄糖是三氯半乳蔗糖的关联代谢物。奎宁和脂肪或脂肪酸配体不需要关联代谢物。动物按剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422400991
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由通过轻度麻醉动物的口***十二指肠的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例10
糖尿病大鼠中3种化学感受受体配体(甜味、脂肪和苦味)和关联代谢物的下胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗(优于单一化学感受受体配体的增加功效、协同作用等)测定3种化学感受受体配体(甜味、脂肪和苦味)和关联代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、脂肪酸乳液和奎宁及其关联代谢物。葡萄糖是三氯半乳蔗糖的关联代谢物。奎宁和脂肪或脂肪酸不需要关联代谢物。动物按剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422401001
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由通过轻度麻醉的动物的直肠***降结肠中上部的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例11
糖尿病大鼠中4种化学感受受体配体(甜味、鲜味、脂肪和苦味)和关联代谢物的上胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗(优于单一化学感受受体配体的增加功效、协同作用等)测定4种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪和苦味)和关联代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的配体三氯半乳蔗糖、谷氨酸一钠(MSG)、脂肪酸乳液和奎宁及其关联代谢物。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。动物按剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422401011
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由通过轻度麻醉动物的口***十二指肠的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例12
糖尿病大鼠中4种化学感受受体配体(甜味、鲜味、脂肪和苦味)和关联代谢物的下胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗(优于单一化学感受受体配体的增加功效、协同作用等)测定4种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪和苦味)和关联代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、谷氨酸一钠(MSG)、脂肪酸乳液和奎宁及其关联代谢物。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。动物按剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422401021
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由通过轻度麻醉的动物的直肠***降结肠中上部的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例13
糖尿病大鼠中5种化学感受受体配体(甜味、鲜味、脂肪、苦味和胆汁酸)和关联代谢物的上胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗(优于单一化学感受受体配体的增加功效、协同作用等)测定5种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪、苦味和胆汁酸)和关联代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予配体三氯半乳蔗糖、谷氨酸一钠(MSG)、脂肪酸乳液、奎宁、鹅脱氧胆酸(CDC)及其关联代谢物以治疗糖尿病。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。动物按剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422401041
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg；CDC范围1-50mMol溶液，在10秒钟-5分钟范围内以1-10ml/分钟进行)。经由通过轻度麻醉动物的口***十二指肠的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例14
糖尿病大鼠中5种化学感受受体配体(甜味、鲜味、脂肪、苦味和胆汁酸)和关联代谢物的下胃肠道给药。
存在多个已建立和公认的用于评价治疗糖尿病的疗法的糖尿病大鼠模型。可按照下面实施例的详述，在该已建立的糖尿病大鼠模型中，针对糖尿病治疗(优于单一化学感受受体配体的增加功效、协同作用等)测定5种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪、苦味和胆汁酸)和关联代谢物。
选择糖尿病大鼠和Wistar大鼠给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、谷氨酸一钠(MSG)、脂肪酸乳液、奎宁、鹅脱氧胆酸(CDC)及其关联代谢物。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。动物按剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg；CDC范围1-50mMol溶液，在10秒钟-5分钟范围内以1-10ml/分钟进行)。经由通过轻度麻醉的动物的直肠***降结肠中上部的硅橡胶管，给动物滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(10mg/kg)来实现。
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用产业标准饮食诱导的肥胖大鼠和合适对照(健康大鼠)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例15
糖尿病受试人中一种化学感受受体配体和关联代谢物的上胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定单一化学感受受体配体(甜味)和关联代谢物。
选择糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖和关联代谢物葡萄糖。包括用于对照的非糖尿病受试人。受试者按照剂量分组，使用递增剂量(例如0.01-100mg/kg的范围)。经由***十二指肠/空肠区的专用管(例如赖尔管(Ryle’s tube))，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。经鼻胃将管***，使之通过蠕动深入到最终位置。
任选在试验受试者的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样。将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例16
糖尿病受试人中一种化学感受受体配体和关联代谢物的下胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定单一化学感受受体配体(甜味)和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖和关联代谢物葡萄糖。受试者按照剂量分组，并采用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg)。经由通过受试人的直肠***降结肠中上部的鼻胃管，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样。将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例17
糖尿病受试人中两种化学感受受体配体和关联代谢物的上胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定两种化学感受受体配体和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体和关联代谢物和/或葡萄糖。受试者按照剂量分组，使用递增剂量。经由***十二指肠/空肠区的专用管(例如赖尔管)，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。经鼻胃将管***，使之通过蠕动深入到最终位置。
任选在试验受试者的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样。将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
按照上述方案，进行了两种包括化学感受受体配体类型甜味、鲜味、脂肪、苦味和胆汁酸在内的化学感受受体配体的组合的实验方案。示例性配体和相应的剂量范围如下：
三氯半乳蔗糖：0.01-100mg/kg
MSG：0.01-100mg/kg
脂肪酸乳液：10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行。
奎宁：0.01-100mg/kg
鹅脱氧胆酸(CDC)：1-50mMol溶液，在10秒钟-5分钟范围内以1-10ml/分钟进行。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例18
糖尿病受试人中两种化学感受受体配体和关联代谢物的下胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定两种化学感受受体配体和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体和关联代谢物和/或葡萄糖。受试者按照剂量分组，并采用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg)。经由通过受试人的直肠***降结肠中上部的鼻胃管，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样。将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
按照上述方案，进行了两种包括化学感受受体配体类型甜味、鲜味、脂肪、苦味和胆汁酸在内的化学感受受体配体的组合的实验方案。示例性配体和相应的剂量范围如下：
三氯半乳蔗糖：0.01-100mg/kg
MSG：0.01-100mg/kg
脂肪酸乳液：10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行。
奎宁：0.01-100mg/kg
鹅脱氧胆酸(CDC)：1-50mMol溶液，在10秒钟-5分钟范围内以1-10ml/分钟进行。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例19
糖尿病受试人中3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和脂肪)和关联代谢物的上胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和脂肪)和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、MSG、脂肪酸乳液和关联代谢物。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。受试者按照剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422401111
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行)。经由***十二指肠/空肠区的专用管(例如赖尔管)，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。经鼻胃将管***，使之通过蠕动深入到最终位置。
任选在试验受试者的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例20
糖尿病受试人中3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和脂肪)和关联代谢物的下胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和脂肪)和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、MSG、脂肪酸乳液和关联代谢物。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。受试者按照剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行)。经由通过受试人的直肠***降结肠中上部的鼻胃管，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验动物的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样。将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例21
糖尿病受试人中3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和苦味)和关联代谢物的上胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和苦味)和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、MSG、奎宁和关联代谢物。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。受试者按照剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由***十二指肠/空肠区的专用管(例如赖尔管)，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。经鼻胃将管***，使之通过蠕动深入到最终位置。
任选在试验受试者的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例22
糖尿病受试人中3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和苦味)和关联代谢物的下胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定3种化学感受受体配体(甜味、鲜味和苦味)和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、MSG、奎宁和关联代谢物。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。受试者按照剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由通过受试人的直肠***降结肠中上部的鼻胃管，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验受试者的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例23
糖尿病受试人中3种化学感受受体配体(甜味、脂肪和苦味)和关联代谢物的上胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定3种化学感受受体配体(甜味、脂肪和苦味)和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、脂肪酸乳液、奎宁和关联代谢物以治疗糖尿病。葡萄糖是三氯半乳蔗糖的关联代谢物。奎宁、脂肪和脂肪酸不需要关联代谢物。受试者按照剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422401151
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由***十二指肠/空肠区的专用管(例如赖尔管)，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。经鼻胃将管***，使之通过蠕动深入到最终位置。
任选在试验受试者的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例24
糖尿病受试人中3种化学感受受体配体(甜味、脂肪和苦味)和关联代谢物的下胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定3种化学感受受体配体(甜味、脂肪和苦味)和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、脂肪酸乳液、奎宁和关联代谢物。葡萄糖是三氯半乳蔗糖的关联代谢物。奎宁、脂肪和脂肪酸不需要关联代谢物。受试者按照剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422401161
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由通过受试人的直肠***降结肠中上部的鼻胃管，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验受试者的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例25
糖尿病受试人中4种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪和苦味)和关联代谢物的上胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定4种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪和苦味)和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖和关联代谢物葡萄糖。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。受试者按照剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422401181
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由***十二指肠/空肠区的专用管(例如赖尔管)，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。经鼻胃将管***，使之通过蠕动深入到最终位置。
任选在试验受试者的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例26
糖尿病受试人中4种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪和苦味)和关联代谢物的下胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定4种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪和苦味)和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖和关联代谢物葡萄糖。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。受试者按照剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg)。经由通过受试人的直肠***降结肠中上部的鼻胃管，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验受试者的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例27
糖尿病受试人中5种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪、苦味和胆汁酸)和关联代谢物的上胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定5种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪、苦味和胆汁酸)和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、MSG、奎宁、脂肪酸乳液、鹅脱氧胆酸(CDC)和关联代谢物葡萄糖。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。受试者按照剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422401201
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg；CDC范围1-50mMol溶液，在10秒钟-5分钟范围内以1-10ml/分钟进行)。经由***十二指肠/空肠区的专用管(例如赖尔管)，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。经鼻胃将管***，使之通过蠕动深入到最终位置。
任选在试验受试者的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例28
糖尿病受试人中5种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪、苦味和胆汁酸)和关联代谢物的下胃肠道给药。
对于用于治疗糖尿病的疗法的功效，可对糖尿病受试人进行评价。可按照下面实施例的详述，针对糖尿病治疗测定5种化学感受受体配体(甜味、MSG、脂肪、苦味和胆汁酸)和关联代谢物。
选择糖尿病和非糖尿病受试人给予用于治疗糖尿病的化学感受受体配体三氯半乳蔗糖、MSG、奎宁、脂肪酸乳液、鹅脱氧胆酸(CDC)和关联代谢物葡萄糖。葡萄糖用作三氯半乳蔗糖的关联代谢物。受试者按照剂量分组，使用递增剂量(三氯半乳蔗糖范围0.01-100mg/kg；MSG范围0.01-100mg/kg；脂肪酸乳液(例如Intralipid
Figure BPA00001482422401211
)10％溶液，在10秒钟-5分钟范围内以0.5-10ml/分钟进行；奎宁范围0.01-100mg/kg；CDC范围1-50mMol溶液，在10秒钟-5分钟范围内以1-10ml/分钟进行)。经由通过受试人的直肠***降结肠中上部的鼻胃管，给受试者滴注化学感受受体配体和关联代谢物。
任选在试验受试者的指定组或全部组中抑制二肽基肽酶IV(DPPIV)以防止目标激素被内源肽酶降解。DPP IV抑制通过在化学感受受体配体和关联代谢物滴注前至少1小时共同给予西格列汀(100mg/受试者)来实现。
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
或者，用肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，如上所述进行激素测定法。
实施例29
单独和组合的化学感受受体配体和代谢物的剂量反应研究。
将每一种化学感受受体相应的化学感受受体配体(三氯半乳蔗糖、MSG、奎宁、脂肪酸乳液和鹅脱氧胆酸)和葡萄糖分别给予糖尿病大鼠上胃肠道和下胃肠道***以及糖尿病人上胃肠道和下胃肠道***(参见前述关于在上胃肠道和下胃肠道两者中用于大鼠和人***的给药方案的实施例)，以确定各种化学感受受体配体以及代谢物葡萄糖的最佳剂量。在化学感受受体配体和葡萄糖输注前至少60分钟，分别在大鼠和人中以10mg/kg或100mg/受试者将西格列汀(DPP IV抑制剂)给予受试者。
化学感受受体配体和葡萄糖分别以增量(mg/kg/分钟)给予，其中以设定的mg/kg/分钟剂量给予各受试者，并且保持剂量在此设定水平达30分钟时间。在整个30分钟时间内以频繁间隔(例如每1、2或5分钟)采集血样，并测定激素水平。所测定的激素包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。应用标准ELISA方法对激素进行测定。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
确定每种化学感受受体配体的50％最大反应剂量和50％最大耐受剂量。确定葡萄糖的25％最大反应剂量。
或者，用饮食诱导的肥胖大鼠、肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康大鼠或受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，按上述实施例1-28中所述进行激素测定法。
实施例30
使用实施例29中所述的人和大鼠***，进行测定与化学感受受体配体共同给予代谢物的作用的实验。
在化学感受受体配体和葡萄糖共同输注前至少60分钟，分别在大鼠和人中以10mg/kg或100mg/受试者将西格列汀(DPP IV抑制剂)给予受试者(大鼠和人，在上胃肠道和下胃肠道两者中)。以50％最大反应剂量单独与25％最大反应剂量的葡萄糖共同给予化学感受受体配体。
在整个30分钟时间内以频繁间隔(例如每1、2或5分钟)采集血样，并通过标准ELISA方法测定激素水平。CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
因此测定了代谢物(葡萄糖)与各种化学感受受体配体的共同给予的作用以及50％最大剂量和50％最大耐受剂量。
或者，用饮食诱导的肥胖大鼠、肥胖受试人或体重超重受试人和合适对照(健康大鼠或受试人)进行上述实验方案。根据已知的标准测定条件修改肥胖症***特有的参数。收集样品，按上述实施例1-28中所述进行激素测定法。
实施例31
按实施例1-28中所述，在大鼠和人***中进行了测定给予化学感受受体配体的组合的作用的实验。
以50％最大反应剂量(按照实施例25和26中所述方法测定)给予存在于实施例1-28中的组合的各种化学感受受体配体。进行了一式两份实验，其中葡萄糖以25％最大反应剂量(按实施例29和30中所述方法测定)共同给予。
大鼠血样采集
通过尾静脉的***套管采集血样，在基线、滴注后15、30、60和120分钟抽取样品。在装有肽酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
人血样采集
在基线、在滴注后第1小时以15分钟的间隔并且在滴注后第2-4小时以30分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂(例如SigmaP8340-1/100稀释度和缬氨酸吡咯烷--100μM终浓度)和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。对血样测定与胰岛素调节相关的激素的存在情况，包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2。激素的测定采用标准ELISA方法进行。对给予用于治疗糖尿病大鼠的化学感受受体配体和关联代谢物的功效的结果进行了分析。还对包括葡萄糖、游离脂肪酸、甘油三酯、钙、钾、钠、镁、磷酸盐在内的代谢物及其它分析物浓度进行了评价。
实施例32
针对甜味受体配体称重的示例性的组合物及其给予。
单一口服固体剂型(例如片剂、丸剂、胶囊剂等)包括所列化学感受受体配体成分。给药的单一剂量为一套4个单位的口服固体剂型(例如4粒片剂或4粒胶囊剂)。4个单位的每一个含有相同的化学感受受体配体成分；然而将每一各别单位制成分别在以下不同pH下释放80％化学感受受体配体成分：pH 5.5、pH 6.0、pH 6.5和pH 7.0。20％化学感受受体配体成分立即释放。一日两次的给药发生在早餐前30分钟-1小时和午餐前30分钟-1小时。
实施例33
评价按照实施例32中所述的组合物和给药在肥胖受试人中的功效。
本项研究的目的是评价按照实施例32中所述的组合物和给药对肥胖受试人的体重减轻和血糖控制的功效。研究设计为3个试验中心持续16周的安慰剂对照随机双盲试验。
总患者群：N＝300。根据大于或等于30的体重指数选择患者。患者群的20％可为糖尿病患者(D&E，或稳定的二甲双胍)。
仅随机提供膳食指导，且不包括低热量饮食。每月用体重测量结果和血液取样以及患者问卷对患者进行评价。通过A1C(糖化血红蛋白)浓度测定血样的代谢激素(包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2)以及血浆葡萄糖的存在情况。
实施例34
评价按照实施例32中所述的组合物和给药在健康受试人中的作用。
本项研究的目的是评价按照实施例32中所述的组合物和给药对健康受试人两餐后的激素偏移的作用。研究设计为6天安慰剂对照的交叉试验。健康患者分成两组，在第1-3天每天两次早餐和午餐前30分钟-1小时接受实施例32中所述的安慰剂或组合物。在第3天，在给予组合物前和餐后2小时内以15分钟的间隔采集血样。在装有蛋白酶抑制剂和防腐剂的标准混合物的收集管中收集血样，并将样品保存在-25℃下直到测定。第4-6天重复该过程，其中安慰剂组接受组合物，而组合物组此时则接受安慰剂。
通过A1C(糖化血红蛋白)浓度测定血样代谢激素(包括CCK、GIP、GLP-1、泌酸调节肽、肽YY、胰岛素、胰高血糖素、C-肽和GLP-2)以及血浆葡萄糖的存在情况。阳性患者结果和对本研究的响应定义为相对于安慰剂，用实施例32中描述的组合物时GLP-1、GIP、肽YY或泌酸调节肽血浆AUC增加和/或相对于安慰剂用实施例32中描述的组合物时葡萄糖AUC降低。将激素增加20％或葡萄糖降低20％定义为非常显著。
虽然本文说明和描述了本发明的某些实施方案，但是对于本领域技术人员而言显而易见的是，这类实施方案仅以实例提供。本领域技术人员现可想出多种变更、变动和替换而不背离本发明。应理解的是，可采用本文所述的本发明实施方案的各种备选方案实施本发明。企图的是，随附权利要求定义了本发明的范围，并且由此涵盖了这些权利要求及其等同内容的范围内的方法和结构。

Claims (24)

1.一种治疗受试者的与化学感受受体相关的病况的方法，所述方法包括将至少一种化学感受受体配体给予受试者。
2.权利要求1的方法，其中至少一种化学感受受体配体是不可代谢的。
3.权利要求1的方法，其中至少一种化学感受受体配体选自甜味受体配体、苦味受体配体、鲜味受体配体、脂肪受体配体、胆汁酸受体配体或其任何组合。
4.权利要求3的方法，其中甜味受体配体选自葡萄糖、三氯半乳蔗糖、阿司帕坦、蛇菊苷、瑞鲍迪苷、纽甜、乙酰舒泛钾或糖精。
5.权利要求3的方法，其中苦味受体配体选自黄烷酮、黄酮、黄酮醇、黄烷、酚类类黄酮、异黄酮、柠檬苦素类化合物糖苷配基、芥子油苷或其水解产物或异硫氰酸酯。
6.权利要求3的方法，其中鲜味受体配体选自谷氨酸盐、谷氨酰胺、乙酰甘氨酸或阿司帕坦。
7.权利要求3的方法，其中所述脂肪受体配体选自亚油酸、油酸、棕榈酸酯、油酰基乙醇酰胺、混合脂肪酸乳液或N-乙酰磷脂酰乙醇胺(NAPE)。
8.权利要求3的方法，其中所述胆汁酸选自脱氧胆酸、牛磺胆酸或鹅脱氧胆酸。
9.权利要求1的方法，其还包括给予至少一种对应于至少一种化学感受受体配体的化学感受受体代谢物。
10.权利要求1的方法，其中至少一种化学感受受体配体与受试者的食物摄取共同给予。
11.权利要求1的方法，其中将所述组合物给予至肠上部、肠下部或两者。
12.权利要求1的方法，其中将所述组合物给予至十二指肠、空肠、回肠、结肠或其组合。
13.权利要求1的方法，其中所述组合物在给予受试者后约15分钟-约45分钟、约105分钟-约135分钟、约165分钟-约195分钟、约225分钟-约255分钟或其组合释放。
14.权利要求1的方法，其中所述组合物在给予受试者后在约pH5.5、约pH 6.0、约pH 6.5、约pH 7.0或其组合下释放。
15.权利要求1的方法，其中所述化学感受受体配体调节肠下部的激素谱，所述激素谱包含GLP-1、泌酸调节肽和肽YY。
16.权利要求1的方法，其中所述化学感受受体配体调节肠上部的激素谱，所述激素谱包含GLP-1、GLP-2、泌酸调节肽、肽YY、GIP、胰岛素C肽、胰高血糖素、胰岛素、CCK或其任何组合。
17.权利要求1的方法，其中所述化学感受受体配体通过刺激肠上部的化学感受受体而敏化肠下部的化学感受受体。
18.权利要求1的方法，其中所述与化学感受受体相关的病况选自代谢综合征、I型糖尿病、II型糖尿病、肥胖症、暴食症、不良嗜食癖、食瘾、减少食物摄取或减轻体重或保持体重减轻的欲望、食欲缺乏、葡萄糖耐受不良、妊娠糖尿病(GDM)、血脂异常、餐后血脂异常、骨丢失病症、骨质减少、骨质疏松症、肌肉萎缩病、肌肉变性病症、多囊性卵巢综合征(PCOS)、非酒精性脂肪性肝病(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、抑郁症、心境障碍、肠免疫疾病(例如乳糜泻)、肠紊乱、过敏性肠综合征(IBS)或炎性肠病(IBD)，包括例如溃疡性结肠炎、克罗恩病和短肠综合征。
19.一种组合物，所述组合物包含至少一种化学感受受体配体，由此所述组合物对治疗与化学感受受体相关的病况有效。
20.权利要求19的组合物，其中将所述组合物配制成在肠下部、肠上部或两者中释放，由此所述组合物对治疗与化学感受受体相关的病况有效。
21.权利要求19的组合物，其中将所述组合物配制成在十二指肠、空肠、回肠、结肠或其组合中释放，由此所述组合物对治疗与化学感受受体相关的病况有效。
22.权利要求19的组合物，其中将所述组合物配制成在给药后约15分钟-约45分钟、约105分钟-约135分钟、约165分钟-约195分钟、约225分钟-约255分钟或这些时间的组合释放，由此所述组合物对治疗与化学感受受体相关的病况有效。
23.权利要求19的组合物，其中将所述组合物配制成在给药后在约pH 5.5、约pH 6.0、约pH 6.5、约pH 7.0或其组合下释放，由此所述组合物对治疗与化学感受受体相关的病况有效。
24.权利要求19的组合物，其中所述与化学感受受体相关的病况选自代谢综合征、I型糖尿病、II型糖尿病、肥胖症、暴食症、不良嗜食癖、食瘾、减少食物摄取或减轻体重或保持体重减轻的欲望、食欲缺乏、葡萄糖耐受不良、妊娠糖尿病(GDM)、血脂异常、餐后血脂异常、骨丢失病症、骨质减少、骨质疏松症、肌肉萎缩病、肌肉变性病症、多囊性卵巢综合征(PCOS)、非酒精性脂肪性肝病(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、抑郁症、心境障碍、肠免疫疾病(例如乳糜泻)、肠紊乱、过敏性肠综合征(IBS)或炎性肠病(IBD)，包括例如溃疡性结肠炎、克罗恩病和短肠综合征。
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