CN102477034A

CN102477034A - 氨基酸修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸及其合成方法和应用

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Publication number: CN102477034A
Application number: CN2010105737891A
Authority: CN
Inventors: 彭师奇; 赵明; 白小贤
Original assignee: Capital Medical University
Current assignee: Capital Medical University
Priority date: 2010-11-30
Filing date: 2010-11-30
Publication date: 2012-05-30
Anticipated expiration: 2030-11-30
Also published as: CN102477034B

Abstract

本发明涉及氨基酸修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸及其合成方法和应用。本发明化合物如通式6a-p所示，其中，AA选自甘氨酸残基、丙氨酸残基、异亮氨酸残基、亮氨酸残基、缬氨酸残基、蛋氨酸残基、脯氨酸残基、酪氨酸残基、苏氨酸残基、丝氨酸残基、色氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、组氨酸残基、赖氨酸残基和谷氨酰胺残基。本发明采用体外抗血小板聚集实验以及体内抗血栓活性实验(颈总动脉-静脉体外循环旁路丝线模型)评价了本发明化合物的抗血小板聚集活性和抗血栓活性。试验结果表明，本发明化合物具有优异的抗血栓活性，可制备成抗血栓剂。

Description

氨基酸修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸及其合成方法和应用

技术领域

本发明涉及咔啉羧酸的衍生物，尤其涉及氨基酸修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸及其合成方法，本发明还涉及它们作为抗血栓剂的应用，本发明属于咔啉羧酸衍生物领域。

背景技术

血管栓塞性疾病是危害人们生命健康的重要疾病。血栓形成是血管栓塞性疾病发病的最重要的病因。寻找抗血栓药物是新药研究的热点之一。1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-S-羧酸是广泛存在于中草药之中的一类重要吲哚生物碱，具有抗血小板聚集活性。有文献报道，在1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的1位和/或3位引入氨基酸可以改善1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的生物利用度。还有文献报道，氨基酸修饰的1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的抗血栓活性与它们的伸展构象有关(参见：Jiawang Liu，Xueyun Jiang，MingZhao，Xiaoyi Zhang，Meiqing Zheng，Li Peng and Shiqi Peng，A class of 3S-2-aminoacyltetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acids：Their facile synthesis，inhibition forplatelet activation and high in vivo anti-thrombotic potency)。此外，在1-甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸的3位引入肼为臂链接氨基酸有利于形成伸展构象。因此，将1-甲基-四氢-β-咔啉-3-羧酸氧化为1-甲基-β-咔啉-3-羧酸并在3位引入肼为臂链接氨基酸会更加有利于形成伸展构象，可以提高生物活性。

发明内容

本发明依据血栓形成是血管栓塞性疾病发病的最重要的病因、依据1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-S-羧酸是抗血小板聚集活性的天然物质、依据在1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的1位和/或3位引入氨基酸可以改善1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的生物利用度、依据氨基酸修饰的1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的抗血栓活性与它们的伸展构象有关、依据在1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-S-羧酸的3位引入肼为臂链接氨基酸有利于形成伸展构象的设想，依据在1，2，3，4-β-咔啉-3-S-羧酸的3位引入肼为臂链接氨基酸更加有利于形成伸展构象的设想，本发明建立了制备N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-氨基酸酰基肼的通用方法、制备了一系列N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-氨基酸酰基肼化合物、采用体外抗血小板聚集活性实验和体内抗血栓活性实验(颈总动脉-静脉体外循环旁路丝线模型)评价了它们作为抗血栓剂的应用。

本发明目的之一是提供具有抗血栓活性的N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-氨基酸酰基肼，其结构式为通式6a-p所示：

通式6a-p

其中，AA选自甘氨酸残基、丙氨酸残基、异亮氨酸残基、亮氨酸残基、缬氨酸残基、蛋氨酸残基、脯氨酸残基、酪氨酸残基、苏氨酸残基、丝氨酸残基、色氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、组氨酸残基、赖氨酸残基和谷氨酰胺残基。

本发明的目的之二是提供合成上述通式6a-p化合物的中间体：

通式5a-p

本发明目的之三是提供一种合成上述具有抗血栓活性的通式6a-p化合物及其中间体通式5a-p化合物的方法，包括：

(1)制备1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸；

(2)将1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的羧基形成甲酯保护，得到1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯；

(3)将步骤(2)的产物用高锰酸钾氧化成1-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯；

(4)将步骤(3)的产物与水合联氨发生肼解生成1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼；

(5)将步骤(4)的产物与Boc保护的氨基酸或Boc保护的氨基酸苄酯进行偶联，得到通式5a-p化合物；

(6)将步骤(5)偶联后的产物脱去保护基，得到通式6a-p化合物。

其中，步骤(1)的1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸是通过L-色氨酸在稀硫酸催化下与乙醛进行Pictet-Spengler缩合制得；

步骤(5)的氨基酸选自甘氨酸、L-丙氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-缬氨酸、L-蛋氨酸、L-脯氨酸、L-酪氨酸、L-苏氨酸、L-丝氨酸、L-色氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-组氨酸、L-赖氨酸和L-谷氨酰胺。

本发明的又一目的是提供一种用于抗血栓的药物组合物，该药物组合物包括治疗上有效剂量的通式6a-p化合物，并且包括药学上可接受的赋型剂或者辅加剂。

其中，所述通式6a-p化合物的含量是所述药物组合物总重量的0.1％-99％，优选10-60％。

所述用于抗血栓的药物组合物的制备方法是将有效量的通式6a-p化合物与药学上可接受的载体或稀释剂配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一种适宜的药物组合物。

本发明采用体外抗血小板聚集实验以及体内抗血栓活性实验(颈总动脉-静脉体外循环旁路丝线模型)评价了通式6a-p化合物的抗血小板聚集活性；试验结果表明，本发明化合物具有优异的抗血栓活性，可制备成用于抗血栓的药物组合物和用于制备治疗抗血栓的药物。

附图说明

图1为本发明化合物的合成路线图。

其中，i)稀硫酸、乙醛；ii)甲醇、二氯亚砜；iii)高锰酸钾；iv)微波60℃、1h；v)二环己基羰二亚胺(DCC)、N-羟基苯并***(HOBt)、N-甲基吗啉(NMM)；vi)4NHCl/EtOAc.其中在通式5a-p和6a-p中AA代表甘氨酸残基、丙氨酸残基、异亮氨酸残基、亮氨酸残基、缬氨酸残基、蛋氨酸残基、脯氨酸残基、酪氨酸残基、苏氨酸残基、丝氨酸残基、色氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、组氨酸残基、赖氨酸残基或谷氨酰胺残基。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

实施例11-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1)的制备

将200mL水置于250mL的圆底烧瓶中，缓慢加入0.2mL 98％浓硫酸。往得到的稀硫酸水溶液中加入2.0g(9.8mmol)L-色氨酸并超声振荡至L-色氨酸完全溶解。往得到的溶液中加入2mL(18mmol)浓度为40％的乙醛溶液。反应液室温搅拌8h，TLC(二氯甲烷∶甲醇＝5∶1)显示L-色氨酸消失，终止反应。往反应溶液中缓慢滴加浓氨水，调反应液pH值到6-7，有大量白色固体沉淀析出，静置2h。减压滤出生成的沉淀并用少量水洗，将滤出的固体干燥，得1.77g标题化合物，为无色固体，产率79％。Mp 287-289℃；ESI-MS(m/z)231[M+H]⁺。

实施例21-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯(2)的制备

取30mL甲醇置于100mL的圆底烧瓶中，冰浴搅拌下缓慢滴加1.2mL SOCl₂，约10min滴加完毕，继续反应15min后，除去冰浴，加入2.0g(8.7mmol)1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸，室温反应过夜，TLC(二氯甲烷∶甲醇＝5∶1)显示原料消失，终止反应。用10％碳酸钠中和溶液至中性，有大量淡黄色固体沉淀析出，静置30min后，减压滤出析出的沉淀并用少量水洗，将滤出的固体干燥，得1.89g标题化合物，为淡黄色固体，产率89％。Mp 75-76℃；ESI-MS(m/z)245[M+H]⁺。

实施例31-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯(3)的制备

将5.0g(20mmol)1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯，溶于50ml DMF，冰盐浴搅拌下分次加入4.5g(28mmol)KMnO₄，约3h后加完，反应放出大量的热。继续反应1h后，撤去冰浴，室温反应过夜后抽滤，得到滤液和黑色滤渣。滤液室温下吹干得浅黄色固体。用150ml无水乙醇分三次浸泡所得黑色滤渣，过滤后蒸除乙醇，得黄色固体，两固体合并并用乙醇重结晶得浅黄色固体3.2g，产率65％。Mp 243-244℃；ESI-MS(m/z)241[M+H]⁺。

实施例41-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼(4)的制备

将1.0g(4.2mmol)1-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯加入20mL氯仿和5mL甲醇的混合溶液中，搅拌溶解，缓慢滴加4mL(80.0mmol)85％水合肼，混合液置于微波中，于60℃反应1h，TLC显示原料消失，终止反应，有大量白色固体析出，减压蒸除溶剂，残渣用乙醇-水(乙醇∶水＝5∶1)重结晶，得0.62g标题化合物，为无色固体，产率62％。Mp 294-295℃；ESI-MS(m/z)241[M+H]⁺。

实施例5N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-甘氨酸酰基肼(5a)的制备

将0.400g(2.29mmmol)Boc-Gly溶于15mL无水四氢呋喃(THF)中，冰浴搅拌下加入0.304g(2.25mmol)N-羟基苯并***(HOBt)，并使完全溶解；加入0.507g(2.46mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)和10mL THF构成的混合液。搅拌30min得到反应液(I)。将0.5g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼溶于10mL无水DMF中，超声溶解，得到反应液(II)。冰浴下把反应液(II)加入反应液(I)中，然后滴加N-甲基吗啉(NMM)调pH值到8，冰浴下搅拌1小时，再室温搅拌过夜。TLC显示1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼消失，终止反应。减压抽滤除二环己基脲(DCU)，滤液吹干。得到的残余物用150mL乙酸乙酯溶解，置于250mL分液漏斗中，依次用5％碳酸氢钠水溶液洗(20mL×3)、饱和氯化钠水溶液洗(20mL×3)、5％硫酸氢钾水溶液洗(20mL×3)、饱和氯化钠水溶液洗(20mL×3)、饱和碳酸氢钠水溶液洗(20mL×3)、饱和氯化钠水溶液洗(20mL×3)。合并的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩至干。所得固体用硅胶柱层析分离(二氯甲烷∶甲醇＝60∶1)，得到0.419g标题化合物，为淡黄色固体，产率50.0％。R_f＝0.32(二氯甲烷∶甲烷＝15∶1)；Mp 219-220℃；ESI-MS(m/z)398[M+H]⁺；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.01(s，1H)，10.21(s，1H)，10.17(s，1H)，8.69(s，1H)，8.37(d，J＝6.0Hz，1H)，7.64(d，J＝3.0Hz，1H)，7.60(t，J＝3.0Hz，1H)，7.30(t，J＝6.0Hz，1H)，7.06(d，J＝6.0Hz，1H)，3.73(d，J＝6.0Hz，1H)，2.86(s，3H)，1.41(s，9H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝168.7，163.7，156.3，141.7，141.2，138.3，136.6，128.8，127.7，122.7，121.9，120.5，113.1，112.7，78.5，49.1，28.7，20.8；IR(cm^-1)3382，3354，3108，3059，2978，2929，1707，1686，1621，1494，1466，1446，1392，1368，1348，1282，1249，1168，1049，735；Anal.Calcd for C₂₀H₂₃N₅O₄：C，60.44；H，5.83；N，17.62。

实施例6N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-甘氨酸酰基肼(6a)的制备

先将100mg(0.252mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-甘氨酸酰基肼溶于1mL乙酸乙酯中，再往得到的溶液中加5mL 4N氯化氢-乙酸乙酯溶液。2小时以后，TLC显示原料点消失，减压抽干溶剂后，加入5mL乙酸乙酯，抽干，反复三次，加入5mL无水***，抽干，反复三次，再加入10mL无水***，超声，过滤，得68.7mg标题化合物，为黄色固体，产率91.8％。R_f＝0.27(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝10∶1∶1∶1)；Mp 231-233℃；ESI-MS(m/z)298[M+H]⁺；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.72(s，1H)，10.85(s，1H)，10.75(s，1H)，8.99(s，1H)，8.40(m，4H)，7.72(d，J＝8.1Hz，1H)，7.67(t，J＝7.8Hz，1H)，7.37(t，J＝7.2Hz，1H)，3.74(m，2H)，2.99(s，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝170.2，165.7，162.2，142.5，142.1，136.4，130.3，128.9，123.0，121.5，121.3，114.6，113.3，65.4，19.0；IR(cm^-1)3423，2998，2962，2925，2855，1691，1625，1511，1364，1245，755；Anal.Calcd for C₁₅H₁₅N₅O₂：C，60.60；H，5.09；N，23.56。

实施例7N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)N’-Boc-L-丙氨酸酰基肼(5b)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.433g(2.29mmol)Boc-L-Ala制得0.386g标题化合物，为无色固体，产率45.2％。R_f＝0.33(二氯甲烷∶甲醇＝15∶1)；Mp 157-158℃；ESI-MS(m/z)412[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.01(s，1H)，10.22(s，2H)，8.69(s，1H)，8.37(d，J＝6.0Hz，1H)，7.67(d，J＝3.0Hz，1H)，7.60(t，J＝3.0Hz，1H)，7.30(t，J＝6.0Hz，1H)，7.01(d，J＝6.0Hz，1H)，4.19(m，J＝6.0Hz，1H)，2.86(s，3H)，1.41(s，9H)，1.32(d，J＝6.0Hz，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝172.1，163.6，155.4，141.7，141.3，138.3，136.5，128.8，127.8，122.6，121.9，120.5，113.1，112.7，78.5，55.4，28.7，20.8，19.0；IR(cm^-1)3309，3252，2978，2925，1687，1621，1523，1495，1450，1392，1368，1348，1249，1164，1049，861，726；Anal.Calcd for C₂₁H₂₅N₅O₄：C，61.30；H，6.12；N，17.02。

实施例8N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-丙氨酸酰基肼(6b)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.243mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-丙氨酸酰基肼制得70.5mg标题化合物，为淡黄色固体，产率93.2％。R_f＝0.17(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝15∶1∶1∶1)；Mp 228-229℃；ESI-MS(m/z)312[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.53(s，1H)，10.81(s，1H)，10.74(s，1H)，8.94(s，1H)，8.40(m，4H)，7.72(d，J＝8.1Hz，1H)，7.67(t，J＝7.8Hz，1H)，7.37(t，J＝7.2Hz，1H)，4.02(m，J＝7.2Hz，1H)，2.95(s，3H)，1.50(d，J＝6.9Hz，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝169.2，168.9，162.9，142.0，136.3，129.8，128.6，122.9，121.5，121.2，114.1，113.1，48.0，19.7，17.8；IR(cm^-1)3309，3252，2978，2925，1687，1621，1523，1495，1450，1392，1368，1348，1249，1164，1049，861，726；Anal.Calcd for C₁₆H₁₇N₅O₂：C，61.72；H，5.50；N，22.49。

实施例9N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-异亮氨酸酰基肼(5c)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.529g(2.29mmol)Boc-L-Ile制得标题化合物0.448g，为无色固体，产率47.5％。R_f＝0.42(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)；Mp 220-221℃；ESI-MS(m/z)454[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.00(s，1H)，10.23(s，2H)，8.69(s，1H)，8.36(d，J＝7.8Hz，1H)，7.65(d，J＝7.2Hz，1H)，7.59(t，J＝7.5Hz，1H)，7.30(t，J＝7.5Hz，1H)，6.78(d，J＝9.0Hz，1H)，4.00(m，J＝8.7Hz，1H)，2.86(s，3H)，1.75(m，1H)，1.54(m，1H)，1.41(s，9H)，1.15(s，1H)，0.96(d，J＝6.6Hz，3H)，0.86(t，J＝7.2Hz，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝170.6，163.7，155.7，141.6，141.2，138.3，136.5，128.8，127.7，122.6，121.9，120.5，113.1，112.7，78.4，60.2，45.9，28.7，24.8，20.8，15.7，9.3；IR(cm^-1)3272，2966，2929，2872，1691，1666，1621，1568，1495，1462，1392，1368，1348，1286，1249，1168，1045，1012，874，735；Anal.Calcd for C₂₄H₃₁N₅O₄：C，63.56；H，6.89；N，15.44。

实施例10N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-异亮氨酸酰基肼(6c)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.221mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-异亮氨酸酰基肼制得69.7mg标题化合物，为淡黄色固体，产率89.5％。R_f＝0.37(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝15∶1∶1∶1)；Mp 211-212℃；ESI-MS(m/z)354[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.72(s，1H)，10.89(s，1H)，10.79(s，1H)，9.03(s，1H)，8.40(m，4H)，7.75(d，J＝8.1Hz，1H)，7.67(t，J＝7.2Hz，1H)，7.37(t，J＝7.5Hz，1H)，3.82(m，1H)，3.00(s，3H)，1.94(m，1H)，1.68(m，1H)，1.32(m，1H)，1.05(d，J＝7.5Hz，3H)，0.97(t，J＝7.5Hz，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝167.2，166.9，161.7，142.8，142.2，136.1，130.6，129.2，123.0，121.7，121.2，114.9，113.4，55.7，36.9，24.6，18.6，14.6，11.8；IR(cm^-1)3440，3072，2966，2921，2876，1715，1674，1634，1507，1364，1245，1217，1057，755；Anal.Calcd for C₁₉H₂₃N₅O₂：C，64.57；H，6.56；N，19.82。

实施例11N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-亮氨酸酰基肼(5d)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.529g(2.29mmol)Boc-L-Leu制得0.464g标题化合物，为无色固体，产率48.9％。R_f＝0.38(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)；Mp 186-188℃；ESI-MS(m/z)454[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.00(s，1H)，10.23(s，1H)，10.21(s，1H)，8.69(s，1H)，8.35(d，J＝5.1Hz，1H)，7.65(d，J＝5.1Hz，1H)，7.59(t，J＝7.5Hz，1H)，7.30(t，J＝7.2Hz，1H)，6.93(d，J＝8.4Hz，1H)，4.19(m，J＝7.8Hz，1H)，2.86(s，3H)，1.71(m，1H)，1.53(t，J＝6.9Hz，2H)，1.41(s，9H)，0.92(d，J＝5.1Hz，6H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝171.9，163.7，155.7，141.6，141.2，138.3，136.5，128.8，127.7，122.6，121.9，120.5，113.1，112.7，78.4，51.7，41.7，28.7，24.6，23.5，22.1，20.8；IR(cm^-1)3329，3239，3043，2957，2929，2871，1695，1670，1625，1523，1495，1446，1397，1368，1348，1278，1249，1168，1119，1049，1025，878，730；Anal.Calcd forC₂₄H₃₁N₅O₄：C，63.56；H，6.89；N，15.44。

实施例12N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-亮氨酸酰基肼(6d)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.221mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-亮氨酸酰基肼制得70.1mg标题化合物，为淡黄色固体，产率89.9％。R_f＝0.42(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝15∶1∶1∶1)；Mp 238-239℃；ESI-MS(m/z)354[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.94(s，1H)，11.08(s，1H)，10.98(s，1H)，9.12(s，1H)，8.40(m，4H)，7.76(d，J＝8.1Hz，1H)，7.67(t，J＝8.1Hz，1H)，7.37(t，J＝7.2Hz，1H)，3.92(m，1H)，2.98(s，3H)，1.94(m，1H)，1.68(m，2H)，0.96(d，6H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝168.4，161.7，142.6，142.1，136.0，130.7，129.2，123.0，121.7，121.2，114.8，113.4，50.1，23.9，22.9，18.6；IR(cm^-1)3439，3411，3068，2961，2929，2867，1715，1679，1629，1507，1364，1249，1217，1029，755；Anal.Calcd for C₁₉H₂₃N₅O₂：C，64.57；H，6.56；N，19.82。

实施例13N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-缬氨酸酰基肼(5e)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.497g(2.29mmol)Boc-L-Val制得0.467g标题化合物，为无色固体，产率51.1％。R_f＝0.33(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)；Mp 220-221℃；ESI-MS(m/z)440[M+H]⁺；(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.00(s，1H)，10.23(s，1H)，10.21(s，1H)，8.69(s，1H)，8.35(d，J＝7.8Hz，1H)，7.64(d，J＝8.1Hz，1H)，7.60(t，J＝8.1Hz，1H)，7.30(t，J＝7.8Hz，1H)，6.72(d，J＝9.3Hz，1H)，3.98(m，J＝9.0Hz，1H)，2.86(s，3H)，1.99(m，1H)，1.41(s，9H)，1.00(d，J＝6.9Hz，6H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝170.6，163.8，155.8，141.6，141.2，138.3，136.5，128.8，127.7，122.6，121.9，120.5，113.1，112.7，78.5，58.6，30.9，28.7，20.8，19.7，18.7；IR(cm^-1)3313，3260，2969，2933，1686，1662，1621，1531，1495，1462，1392，1368，1352，1298，1249，1172，1045，1025，870，735；Anal.Calcd for C₂₃H₂₉N₅O₄：C，62.85；H，6.65；N，15.93。

实施例14N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-缬氨酸酰基肼(6e)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.228mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-缬氨酸酰基肼得71.1mg标题化合物，为淡黄色固体，产率92.1％。R_f＝0.31(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝15∶1∶1∶1)；Mp 233-235℃；ESI-MS(m/z)340[M+H]⁺；(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.69(s，1H)，10.86(s，1H)，10.79(s，1H)，9.00(s，1H)，8.40(m，4H)，7.73(d，J＝7.8Hz，1H)，7.67(t，J＝7.2Hz，1H)，7.37(t，J＝7.2Hz，1H)，3.78(m，1H)，2.98(s，3H)，2.20(m，1H)，1.02(d，6H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝167.2，162.0，142.5，142.1，136.1，130.5，129.1，123.0，121.7，121.2，114.7，113.3，56.5，30.4，18.5；IR(cm^-1)3448，3068，2965，2880，1715，1679，1629，1507，1364，1282，1249，1217，1111，1035，869，755；Anal.Calcd for C₁₈H₂₁N₅O₂：C，63.70；H，6.24；N，22.64。

实施例15N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-蛋氨酸酰基肼(5f)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.09mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.570g(2.29mmol)Boc-L-Met制得0.336g标题化合物，为无色固体，产率34.3％。R_f＝0.32(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)；Mp 203-205℃；ESI-MS(m/z)472[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.00(s，1H)，10.23(s，1H)，10.19(s，1H)，8.69(s，1H)，8.36(d，J＝8.1Hz，1H)，7.65(d，J＝8.1Hz，1H)，7.59(t，J＝7.5Hz，1H)，7.29(t，J＝7.5Hz，1H)，7.05(d，J＝8.1Hz，1H)，4.19(m，1H)，2.86(s，3H)，2.59(t，J＝7.5Hz，1H)，2.09(s，3H)，1.95(m，2H)，1.41(s，9H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝171.1，163.9，155.7，141.6，141.2，138.3，136.5，128.8，127.7，122.6，121.9，120.5，113.1，112.7，78.6，52.7，32.7，29.9，28.7，20.8，15.6；IR(cm^-1)3313，3260，2978，2912，1686，1653，1621，1568，1523，1494，1461，1446，1392，1368，1348，1282，1249，1168，1053，1021，865，726；Anal.Calcd for C₂₃H₂₉N₅O₄S：C，58.58；H，6.20；N，14.85。

实施例16N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-蛋氨酸酰基肼(6f)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.212mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-蛋氨酸酰基肼制得71.1mg标题化合物，为淡黄色固体，产率90.3％。R_f＝0.34(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝15∶1∶1∶1)；Mp 242-243℃；ESI-MS(m/z)372[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.75(s，1H)，11.06(s，1H)，10.93(s，1H)，9.09(s，1H)，8.59(m，3H)，8.37(d，J＝8.1Hz，1H)，7.75(d，J＝8.1Hz，1H)，7.67(t，J＝8.1Hz，1H)，7.39(t，J＝7.5Hz，1H)，4.14(m，1H)，3.01(s，3H)，2.71(m，2H)，2.21(m，2H)，2.12(s，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝167.8，162.5，142.4，142.1，136.2，130.2，128.8，122.9，121.4，114.5，113.2，51.0，31.6，28.2，19.2，14.9；IR(cm^-1)3427，3080，2978，2916，2843，1711，1679，1629，1511，1364，1249，1221，869，755；Anal.Calcd for C₁₈H₂₁N₅O₂S：C，58.20；H，5.70；N，18.85。

实施例17N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-脯氨酸酰基肼(5g)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.492g(2.29mmol)Boc-L-Pro制得0.476g标题化合物，为无色固体，产率52.4％。R_f＝0.39(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)；Mp 227-228℃；ESI-MS(m/z)438[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.00(s，1H)，10.21(s，1H)，10.14(s，1H)，8.72(s，1H)，8.37(d，J＝7.5Hz，1H)，7.65(d，J＝8.1Hz，1H)，7.59(t，J＝7.2Hz，1H)，7.29(t，J＝7.2Hz，1H)，4.27(m，1H)，3.43(m，1H)，3.30(m，1H)，2.88(s，3H)，2.19(m，1H)，1.80(m，3H)，1.41(s，9H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝171.1，163.6，157.1，153.7，141.6，141.2，138.3，136.5，128.8，127.7，122.6，121.9，120.5，113.1，112.7，79.1，58.7，47.9，31.5，28.6，24.9，20.8；IR(cm^-1)3382，3301，3244，3019，2974，2929，1707，1683，1629，1572，1523，1486，1458，1442，1405，1368，1352，1303，1249，1168，1115，1086，890，751；Anal.Calcd for C₂₃H₂₉N₅O₄S：C，58.58；Anal.Calcd forC₂₃H₂₇N₅O₄：C，63.14；H，6.22；N，14.63。

实施例18N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-脯氨酸酰基肼(6g)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.229mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-脯氨酸酰基肼制得68.2mg标题化合物，为淡黄色固体，产率88.4％。R_f＝0.16(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝15∶1∶1∶1)；Mp 220-222℃；ESI-MS(m/z)338[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.97(s，1H)，11.08(s，1H)，10.94(s，1H)，9.09(s，1H)，8.74(m，1H)，8.36(d，J＝7.8Hz，1H)，7.76(d，J＝8.1Hz，1H)，7.69(t，J＝7.8Hz，1H)，7.39(t，J＝7.2Hz，1H)，4.36(m，1H)，3.01(s，3H)，2.38(m，2H)，2.01(m，4H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝168.2，162.2，142.6，142.1，136.1，130.4，129.0，122.9，121.5，114.6，113.3，58.0，46.1，30.3，23.9，18.9；IR(cm^-1)3451，3325，3064，2929，2851，1715，1683，1629，1576，1511，1458，1364，1254，1041，890，755；Anal.Calcd for C₁₈H₁₉N₅O₂：C，64.08；H，5.68；N，20.76。

实施例19N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-酪氨酸酰基肼(5h)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.644g(2.29mmol)Boc-L-Tyr制得0.422g标题化合物，为无色固体，产率40.3％。R_f＝0.19(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)；Mp 164-166℃；ESI-MS(m/z)504[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.05(s，1H)，10.40(s，1H)，10.25(s，1H)，9.18(s，1H)，8.71(s，1H)，8.37(d，J＝7.8Hz，1H)，7.66(d，J＝8.1Hz，1H)，7.59(t，J＝7.2Hz，1H)，7.30(t，J＝7.5Hz，1H)，7.13(d，J＝8.1Hz，2H)，6.90(d，J＝8.7Hz，1H)，6.68(d，J＝8.4Hz，2H)，4.28(m，1H)，4.07(m，1H)，3.02(m，1H)，2.86(m，1H)，1.33(s，9H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝171.2，163.6，156.2，155.5，141.7，141.2，138.3，136.5，130.7，128.8，127.7，122.6，121.9，120.5，115.3，113.1，112.7，78.4，56.5，37.5，28.6，20.8；IR(cm^-1)3305，2978，2925，1691，1670，1621，1597，1519，1495，1462，1446，1388，1368，1348，1249，1168，1098，1049，1021，751，739；Anal.Calcdfor C₂₇H₂₉N₅O₅：C，64.40；H，5.80；N，13.91。

实施例20N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-酪氨酸酰基肼(6h)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.199mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-酪氨酸酰基肼制得71.6mg标题化合物，为淡黄色固体，产率89.4％。R_f＝0.18(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝15∶1∶1∶1)；Mp 198-200℃；ESI-MS(m/z)404[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝13.10(s，1H)，11.99(s，2H)，9.16(s，1H)，8.39(m，5H)，7.78(d，J＝8.4Hz，1H)，7.71(t，J＝7.5Hz，1H)，7.41(t，J＝7.5Hz，1H)，7.25(d，J＝8.4Hz，1H)，6.73(m，4H)，4.17(m，1H)，4.06(m，1H)，3.20(m，1H)，3.05(m，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝171.5，168.8，161.1，155.2，142.1，140.2，133.8，131.7，130.9，129.0，128.8，125.0，122.4，121.7，119.4，115.8，61.1，113.7，112.3，53.6，35.9，15.9；IR(cm^-1)3403，3158，3011，2929，1687，1629，1515，1364，1245，755；Anal.Calcd for C₂₂H₂₁N₅O₃：C，65.50；H，5.25；N，17.36。

实施例21N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-苏氨酸酰基肼(5i)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.501g(2.29mmol)Boc-L-Thr制得0.348g标题化合物，为无色固体，产率37.9％。R_f＝0.31(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)；Mp 148-149℃；ESI-MS(m/z)442[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.00(s，1H)，10.22(s，1H)，10.20(s，1H)，8.70(s，1H)，8.36(d，J＝7.8Hz，1H)，7.66(d，J＝8.1Hz，1H)，7.59(t，J＝7.2Hz，1H)，7.30(t，J＝7.8Hz，1H)，6.39(d，J＝3.9Hz，1H)，4.79(t，J＝3.6Hz，1H)，4.07(m，1H)，4.02(m，1H)，2.86(s，3H)，1.42(s，9H)，1.19(d，J＝3.6Hz，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝169.7，163.6，155.7，141.7，141.2，138.1，136.5，128.8，127.7，122.6，121.9，120.5，113.1，112.7，78.7，67.6，65.3，28.6，20.8；IR(cm^-1)3293，2978，2933，1695，1625，1601，1568，1495，1458，1397，1368，1348，1303，1282，1249，1168，1086，1057，878，751，739；Anal.Calcd for C₂₂H₂₇N₅O₅：C，59.85；H，6.16；N，15.86。

实施例22N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-苏氨酸酰基肼(6i)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.227mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-苏氨酸酰基肼制得69.7mg标题化合物，为淡黄色固体，产率90.1％。R_f＝0.36(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝15∶1∶1∶1)；Mp 214-215℃；ESI-MS(m/z)342[M+H]⁺；(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.81(s，1H)，10.95(s，2H)，9.05(s，1H)，8.39(m，4H)，7.76(d，J＝8.4Hz，1H)，7.69(t，J＝7.2Hz，1H)，7.39(t，J＝7.2Hz，1H)，3.97(m，1H)，3.74(m，1H)，3.00(m，3H)，1.37(d，J＝6.3Hz，1H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)166.3，162.2，142.6，142.1，136.2，130.3，128.9，122.9，121.5，114.5，113.2，66.5，57.7，20.1；IR(cm^-1)3391，3145，2978，2924，1715，1687，1629，1511，1364，1278，1249，1221，1111，1041，755；Anal.Calcd forC₁₇H₁₉N₅O₃：C，58.81；H，5.61；N，20.52。

实施例23N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-丝氨酸酰基肼(5j)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.469g(2.29mmol)Boc-L-Ser制得0.324g标题化合物，为无色固体，产率36.5％。R_f＝0.24(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)；Mp 144-146℃；ESI-MS(m/z)428[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.02(s，1H)，10.30(s，1H)，10.24(s，1H)，8.70(s，1H)，8.36(d，J＝4.8Hz，1H)，7.66(d，J＝4.8Hz，1H)，7.59(t，J＝4.5Hz，1H)，7.30(t，J＝4.5Hz，1H)，6.75(d，J＝5.1Hz，1H)，4.91(t，J＝3.6Hz，1H)，4.21(m，J＝3.6Hz，J＝7.8Hz，1H)，3.66(m，2H)，2.86(s，3H)，1.41(s，9H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝169.7，163.6，155.6，141.7，141.2，138.1，136.5，128.8，127.7，122.6，121.9，120.5，113.1，112.7，78.6，62.6，56.0，28.7，20.8；IR(cm^-1)3284，2982，2933，1695，1625，1597，1572，1495，1462，1392，1368，1348，1303，1282，1249，1168，1061，898，755，735；Anal.Calcd for C₂₁H₂₅N₅O₅：C，59.01；H，5.90；N，16.38。

实施例24N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-丝氨酸酰基肼(6j)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.234mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-丝氨酸酰基肼制得73.1mg标题化合物，为淡黄色固体，产率90.2％。R_f＝0.15(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝15∶1∶1∶1)；Mp 206-208℃；ESI-MS(m/z)328[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.96(s，1H)，10.98(s，1H)，10.93(s，1H)，9.06(s，1H)，8.46(m，3H)，8.37(d，J＝7.8Hz，1H)，7.76(d，J＝7.8Hz，1H)，7.69(t，J＝6.9Hz，1H)，7.39(t，J＝7.2Hz，1H)，4.04(m，1H)，3.93(m，1H)，3.83(m，1H)，3.00(s，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝166.5，162.3，142.4，142.1，136.2，130.2，128.8，122.9，121.4，114.5，113.2，61.1，54.0，19.2；IR(cm^-1)3399，3325，3146，3007，2929，2851，1715，1679，1629，1576，1507，1364，1025，755；Anal.Calcd for C₁₆H₁₇N₅O₃：C，58.71；H，5.23；N，21.39。

实施例25N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-色氨酸酰基肼(5k)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.696g(2.29mmol)Boc-L-Trp制得0.445g标题化合物，为无色固体，产率40.7％。R_f＝0.35(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)；Mp 169-171℃；ESI-MS(m/z)527[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.02(s，1H)，10.84(s，1H)，10.47(s，1H)，10.24(s，1H)，8.73(s，1H)，8.38(d，J＝3.0Hz，1H)，7.72(d，J＝6.0Hz，1H)，7.68(t，J＝3.0Hz，1H)，7.60(t，J＝3.0Hz，1H)，7.35(d，J＝3.0Hz，1H)，7.33(d，J＝3.0Hz，1H)，7.29(s，1H)，7.09(t，J＝3.0Hz，1H)，7.03(t，J＝3.0Hz，1H)，6.80(t，J＝3.0Hz，1H)，4.44(m，1H)，3.24(dd，J＝3.0Hz，J＝9.0Hz，1H)，3.03(t，J＝6.0Hz，1H)，2.88(s，3H)，1.34(s，9H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝171.2，163.6，155.6，141.7，141.2，138.3，136.5，128.8，127.9，127.8，124.8，124.4，122.6，121.9，121.2，120.9，120.5，119.0，118.6，113.7，113.1，112.7，111.7，110.7，110.4，78.4，49.1，28.6，20.8；IR(cm^-1)3427，3407，3387，3313，3051，2978，2929，1691，1666，1625，1601，1572，1531，1495，1458，1392，1368，1352，1274，1249，1172，1094，1049，1045，1008，739；Anal.Calcd for C₂₉H₃₀N₆O₄：C，66.14；H，5.74；N，15.96。

实施例26N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-色氨酸酰基肼(6k)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.190mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-色氨酸酰基肼制得73.9mg标题化合物，为淡黄色固体，产率91.3％。R_f＝0.42(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝15∶1∶1∶1)；Mp 219-220℃；ESI-MS(m/z)427[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.65(s，1H)，11.12(s，1H)，11.11(s，1H)，10.82(s，1H)，8.98(s，1H)，8.36(m，3H)，7.84(d，J＝7.8Hz，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，7.67(t，J＝7.5Hz，1H)，7.40(m，3H)，7.12(t，J＝7.5Hz，1H)，7.05(t，J＝7.5Hz，1H)，4.19(m，1H)，3.43(dd，J＝5.4Hz，J＝15.0Hz，1H)，3.25(dd，J＝8.1Hz，J＝15.0Hz，3H)，2.99(s，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝167.7，162.1，142.4，142.1，136.8，136.2，130.3，128.8，127.7，125.8，123.0，121.5，1214，119.1，118.9，114.5，113.2，111.9，107.2，52.1，28.0，19.2；IR(cm^-1)3387，3145，2974，2921，2847，1715，1679，1625，1507，1454，1364，1245，1102，747；Anal.Calcd for C₂₄H₂₂N₆O₂：C，67.59；H，5.20；N，19.71。

实施例27N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-组氨酸(Boc)酰基肼(5l)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.813g(2.29mmol)Boc-L-His(Boc)制得0.524g标题化合物，为无色固体，产率43.7％。R_f＝0.35(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)；Mp 184-185℃；ESI-MS(m/z)578[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.00(s，1H)，10.31(s，1H)，10.21(s，1H)，8.69(s，1H)，8.35(d，J＝7.8Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.66(d，J＝8.1Hz，1H)，7.59(t，J＝7.5Hz，1H)，7.30(t，J＝7.5Hz，2H)，6.96(d，J＝8.7Hz，1H)，4.42(m，1H)，2.95(m，1H)，2.86(s，4H)，1.57(s，9H)，1.37(s，9H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝170.8，163.7，155.6，147.2，141.7，141.2，139.9，138.3，137.0，136.5，128.8，127.7，122.6，121.9，120.5，114.9，113.1，112.7，85.6，78.6，54.2，31.5，28.6，20.8；IR(cm^-1)3284，2978，2929，1756，1690，1666，1625，1596，1568，1490，1457，1396，1372，1348，1282，1249，1164，1053，1008，845，775，755，739；Anal.Calcd for C₂₉H₃₅N₇O₆：C，60.30；H，6.11；N，16.97。

实施例28N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-组氨酸酰基肼(6l)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.173mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-组氨酸(Boc)酰基肼制得54.7mg标题化合物，为淡黄色固体，产率87.9％。R_f＝0.20(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝5∶1∶1∶1)；Mp 195-197℃；ESI-MS(m/z)378[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.85(s，1H)，11.14(s，1H)，11.06(s，1H)，9.14(s，1H)，9.04(s，1H)，8.77(s，3H)，8.38(d，J＝8.4Hz，1H)，7.74(d，J＝7.8Hz，1H)，7.68(m，2H)，7.38(t，J＝7.5Hz，1H)，4.64(m，1H)，3.48(m，2H)，3.04(m，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝167.1，162.6，142.5，142.2，136.2，134.5，130.3，128.8，126.6，122.9，121.5，121.3，118.9，114.6，113.2，50.7，26.8，21.2；IR(cm^-1)3415，3121，2994，2921，2851，1719，1683，1629，1507，1364，1249，1082，759；Anal.Calcd for C₁₉H₁₉N₇O₂：C，60.47；H，5.07；N，25.98。

实施例29N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-赖氨酸(Boc)酰基肼(5m)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.792g(2.29mmol)Boc-L-Lys(Boc)制得0.392g标题化合物，为无色固体，产率33.2％。R_f＝0.32(二氯甲烷∶甲醇＝25∶1)；Mp 125-127℃；ESI-MS(m/z)569[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.00(s，1H)，10.20(s，1H)，8.69(s，1H)，8.35(d，J＝7.8Hz，1H)，7.65(d，J＝7.8Hz，1H)，7.65(t，J＝7.2Hz，1H)，7.29(d，J＝7.2Hz，1H)，6.89(d，J＝8.7Hz，1H)，6.79(m，1H)，4.06(m，1H)，2.93(m，2H)，2.86(s，3H)，1.66(m，2H)，1.38(m，24H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝171.6，163.6，156.1，155.7，141.6，141.2，138.3，136.5，128.8，127.8，122.6，121.9，120.5，113.1，112.7，78.5，77.8，60.2，53.3，32.5，29.7，28.7，23.1，20.8；IR(cm^-1)3329，3268，2978，2929，2864，1687，1625，1601，1519，1495，1458，1392，1368，1348，1282，1249，1168，1053，1012，878，739；Anal.Calcd for C₂₉H₄₀N₆O₆：C，61.25；H，7.09；N，14.78。

实施例30N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-赖氨酸酰基肼(6m)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.176mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-赖氨酸(Boc)酰基肼制得58.5mg标题化合物，为淡黄色固体，产率90.3％。R_f＝0.18(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝5∶1∶1∶1)；Mp 192-194℃；ESI-MS(m/z)369[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.71(s，1H)，10.90(s，2H)，9.01(s，1H)，8.53(s，3H)，8.37(d，J＝7.8Hz，1H)，8.15(s，3H)，7.74(d，J＝8.1Hz，1H)，7.68(t，J＝7.5Hz，1H)，7.38(t，J＝7.5Hz，1H)，3.97(m，1H)，2.99(s，3H)，2.78(m，2H)，1.91(m，2H)，1.60(m，4H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝169.4，161.1，142.0，140.3，133.8，131.7，129.0，128.5，122.3，121.7，119.2，113.7，112.1，52.1，39.1，30.4，26.4，21.4，15.8；IR(cm^-1)3472，2966，2925，1715，1679，1629，1503，1364，1249，1041，759；Anal.Calcd for C₁₉H₂₄N₆O₂：C，61.94；H，6.57；N，22.81。

实施例31N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-天冬氨酸(苄酯)酰基肼(5n)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.740g(2.29mmol)Boc-L-Asp(OBzl)制得0.348g标题化合物，为无色固体，产率30.7％。R_f＝0.44(二氯甲烷∶甲醇＝15∶1)；Mp 130-132℃；ESI-MS(m/z)546[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝11.99(s，1H)，10.17(s，1H)，8.68(s，1H)，8.35(d，J＝7.8Hz，1H)，7.65(d，J＝7.8Hz，1H)，7.59(t，J＝7.2Hz，1H)，7.36(m，6H)，7.19(d，J＝8.1Hz，1H)，5.14(s，2H)，4.56(m，1H)，2.91(m，2H)，2.86(s，3H)，2.71(m，2H)，1.41(s，9H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝170.4，163.7，155.6，141.6，141.2，138.3，136.5，128.8，127.7，127.0，122.6，121.8，120.5，113.1，112.7，78.8，66.1，50.1，37.1，28.7，20.8；IR(cm^-1)3309，3260，3064，3031，2982，2929，1719，1691，1662，1625，1601，1572，1499，1462，1392，1372，1352，1278，1249，1164，1049，1025，865，751，739；Anal.Calcd for C₂₉H₃₁N₅O₆：C，63.84；H，5.73；N，12.84。

实施例32N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-天冬氨酸酰基肼(6n)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.183mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-天冬氨酸(苄酯)酰基肼制得40.0mg标题化合物，为淡黄色固体，产率60.8％。R_f＝0.29(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝10∶1∶1∶1)；Mp 260-261℃；ESI-MS(m/z)356[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝13.12(s，1H)，11.14(s，1H)，10.97(s，1H)，9.12(s，1H)，8.55(s，3H)，8.36(d，J＝8.1Hz，1H)，7.78(d，J＝8.1Hz，1H)，7.71(t，J＝7.5Hz，1H)，7.41(t，J＝7.5Hz，1H)，4.28(m，1H)，3.02(m，5H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝171.1，167.5，161.8，142.7，142.2，136.0，133.5，130.5，129.1，123.0，121.6，121.2，114.7，113.3，65.3，48.4，18.7；IR(cm^-1)3403，3084，2970，2921，2855，1715，1683，1625，1507，1364，1245，1209，1143，759；Anal.Calcd for C₁₇H₁₇N₅O₄：C，57.46；H，4.82；N，19.71。

实施例33N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-谷氨酸(苄酯)酰基肼(5o)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.771g(2.29mmol)Boc-L-Glu(OBzl)制得0.351g标题化合物，为无色固体，产率30.2％。R_f＝0.42(二氯甲烷∶甲醇＝15∶1)；Mp 191-193℃；ESI-MS(m/z)560[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝11.99(s，1H)，10.23(s，1H)，10.19(s，1H)，8.69(s，1H)，8.35(d，J＝7.8Hz，1H)，7.65(d，J＝7.8Hz，1H)，7.59(t，J＝7.5Hz，1H)，7.36(m，6H)，7.02(d，J＝8.1Hz，1H)，5.13(s，2H)，4.16(m，1H)，2.86(s，3H)，2.58(m，2H)，1.97(m，2H)，1.41(s，9H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝172.8，170.9，163.9，155.6，141.6，141.2，138.3，136.7，128.9，128.4，127.7，122.6，121.8，120.5，113.2，112.7，78.6，65.9，52.5，30.4，28.7，28.1，20.8；IR(cm^-1)3329，3276，3064，3031，3006，2982，2929，1723，1687，1662，1625，1593，1523，1491，1462，1450，1392，1368，1348，1286，1249，1168，1082，1066，1025，878，730；Anal.Calcd for C₃₀H₃₃N₅O₆：C，64.39；H，5.94；N，12.51。

实施例34N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-谷氨酸酰基肼(6o)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.179mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-谷氨酸(苄酯)酰基肼制得43.5mg标题化合物，为淡黄色固体，产率65.2％。R_f＝0.40(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝10∶1∶1∶1)；Mp 202-204℃；ESI-MS(m/z)370[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝13.06(s，1H)，11.18(s，1H)，10.97(s，1H)，9.16(s，1H)，8.60(s，3H)，8.36(d，J＝8.1Hz，1H)，7.78(d，J＝8.1Hz，1H)，7.71(t，J＝7.5Hz，1H)，7.41(t，J＝7.5Hz，1H)，4.04(m，1H)，3.02(s，3H)，2.68(m，1H)，2.11(m，3H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝173.9，167.9，162.1，142.7，142.2，136.1，130.5，129.1，123.0，121.6，121.3，114.8，113.3，50.9，29.8，27.0，18.7；IR(cm^-1)3481，3101，2966，2917，2851，1707，1674，1629，1507，1360，1249，1209，1041，755；Anal.Calcd for C₁₈H₁₉N₅O₄：C，58.53；H，5.18；N，18.96。

实施例35N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-谷酰胺酰基肼(5p)的制备

按照实施例5的操作，由0.500g(2.08mmol)1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼和0.563g(2.29mmol)Boc-L-Gln制得0.130g标题化合物，为无色固体，产率13.4％。R_f＝0.13(二氯甲烷∶甲醇＝15∶1)；Mp 215-216℃；ESI-MS(m/z)469[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.01(s，1H)，10.15(s，2H)，8.69(s，1H)，8.36(d，J＝7.5Hz，1H)，7.65(d，J＝8.1Hz，1H)，7.59(t，J＝7.5Hz，1H)，7.29(m，2H)，6.97(d，J＝8.1Hz，1H)，6.57(s，1H)，4.10(m，1H)，2.86(s，3H)，2.25(m，2H)，1.96(m，1H)，1.73(m，1H)，1.41(s，9H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝174.3，171.1，163.7，155.6，141.7，141.2，138.3，136.5，128.8，127.7，122.6，121.8，120.5，113.1，112.7，78.6，53.0，31.9，28.7，20.8；IR(cm^-1)3423，3333，3268，2978，2921，2851，1691，1646，1519，1499，1450，1392，1368，1352，1319，1278，1249，1172，1057，865，722；Anal.Calcd for C₂₃H₂₈N₆O₅：C，58.96；H，6.02；N，17.94。

实施例36N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-L-谷酰胺酰基肼(6p)的制备

按照实施例6的操作，由100mg(0.214mmol)N-(1-甲基-β-咔啉-3-甲酰基)-N’-Boc-L-谷酰胺酰基肼制得63.6mg标题化合物，为淡黄色固体，产率80.9％。R_f＝0.24(乙酸乙酯∶甲酸∶乙酸∶水＝10∶1∶1∶1)；Mp 212-214℃；ESI-MS(m/z)369[M+H]⁺；

(c＝1.0，甲醇)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝12.93(s，1H)，11.03(s，1H)，10.94(s，1H)，9.11(s，1H)，8.58(s，3H)，8.38(d，J＝8.1Hz，1H)，7.76(d，J＝8.4Hz，1H)，7.70(t，J＝8.1Hz，1H)，7.53(s，1H)，7.40(t，J＝7.5Hz，1H)，7.01(s，1H)，4.01(m，1H)，3.02(s，3H)，2.42(m，2H)，2.11(m，2H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝173.9，167.9，162.3，142.4，142.1，136.2，134.4，130.2，128.8，123.0，121.4，114.5，113.2，51.2，30.7，27.7，19.1；IR(cm^-1)3415，3158，2974，2921，2855，1666，1625，1507，1364，1245，1041，755；Anal.Calcd for C₁₈H₂₀N₆O₃：C，58.69；H，5.47；N，22.81。

实验例16a-p的体外抗血小板聚集活性测定

1)实验材料

健康猪血，由北京资源集团提供。

2)药品和试剂与仪器

二磷酸腺苷(ADP，sigma)、血小板活化因子(PAF，sigma)、花生四烯酸(AA，sigma)、3.8％枸橼酸钠、Satorus光电分析天平、电动离心机(江苏，型号800)、血小板聚集仪(CHRONO-LOG，USA，490-2D)。

3)测定方法与结果

猪颈动脉取血，用3.8％枸橼酸钠(V_枸橼酸钠∶V_猪血＝1∶9)抗凝。1000转/min离心10分钟得富血小板血浆(PRP)，再以3000转/min离心10分钟，得贫血小板血浆(PPP)。以二磷酸腺苷(ADP，终浓度为10^-5M)、花生四烯酸(AA，sigma)和血小板活化因子(PAF，终浓度为10^-7M)为诱导剂诱导血小板聚集。所有化合物用生理盐水溶解，6a-p的终浓度为1000μM、100μM、10μM和1μM。测定的结果列入表1。

表1

由表1可以看出母核4抑制ADP、PAF和AA诱导的血小板聚集的IC₅₀分别为1101μM、921μM和321μM。6a-p抑制ADP、PAF和AA诱导的血小板聚集的IC₅₀分别在230-817μM、16.5-643μM和17.2-89.6μM。6a-p对AA诱导的血小板聚集抑制活性远强于对ADP和PAF诱导的血小板聚集抑制活性。6a-p对AA有一定的选择性抑制作用。

实验例26a-p的体内抗血栓活性测定(颈总动脉-静脉体外循环旁路丝线模型，活性用血栓湿重表示)

1)实验动物

SD雄性大鼠，体重200-220g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

2)实验材料

聚乙烯管(外径1.6mm及1.3mm两种)、肝素(50IU/mL)、乌拉坦(20％)、生理盐水。

3)测定方法与结果

以生理盐水(NS，3mL/kg)为空白对照，以阿司匹林(30mg/kg)作阳性对照，1-甲基-β-咔啉-3-甲酰肼(母核，4，10nmol/kg)为原料对照。阿司匹林、4和6a-p(1nmol/kg)在临用前配成药物生理盐水溶液。将雄性SD大鼠(体重200-220g)灌胃给予6a-p，30分钟后，腹腔注射20％乌拉坦溶液进行麻醉，分离大鼠的右颈动脉和左颈静脉。在聚乙烯管的中段放入事先称重的6cm长的丝线，以肝素生理盐水(50IU/kg)充满聚乙烯管，将一端***左颈静脉，用注射器从另一端加入定量肝素钠抗凝(50IU/mL，1mL/kg)，然后***右颈动脉。血流从右颈动脉流经聚乙烯管流入左颈静脉，15min后中断血流，取出丝线称重，总重量减去丝线重量即为血栓湿重。统计各组的血栓湿重的均值和标准差(

，mg)，并作t检验，结果列入下表2。

表2

n＝12；a)与生理盐水相比，P＜0.01；b)与生理盐水及母核4相比，P＜0.05。

从表2中的数据可以看到，在1nmol/kg剂量下6a-p都具有可以与30mg/kg(167μmol/kg)剂量阿司匹林相比的抗血栓活性。其中1nmol/kg剂量下的6a、6e、6f、6h、6i、6l、6m和6n的抗血栓活性则比10nmol/kg剂量下母核4的活性强很多。

实验例36e的剂量依赖实验

按照实施例20的方法，选择活性较强的6e测定1nmol/kg、0.1nmol/kg和0.01nmol/kg三种剂量下的活性，结果见表3。

表3

n＝12；a)与生理盐水、0.1nmol/kg 6e及0.01nmol/kg 6e相比，P＜0.01；b)与生理盐水及0.1nmol/kg 6e相比，P＜0.01。

表3的数据表明，6e剂量依赖性地显示抗血栓活性。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，对本发明而言仅仅是说明性的，而非限制性的。本专业技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效，但都将落入本发明的保护范围内。

Claims

1.一种通式5a-p的化合物，

通式5a-p

2.一种通式6a-p的化合物，

通式6a-p

3.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其特征在于，

(1)L-色氨酸在稀硫酸催化下与乙醛进行Pictet-Spengler缩合，得到1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸；

(2)将1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸在SOCl₂的存在下与甲醇酯化得到1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯。

(3)将1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯用高锰酸钾氧化，得到1-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯；

(4)将1-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯与水合联氨发生肼解，得到酰肼化合物；

(5)将步骤(4)的产物与Boc保护的氨基酸或Boc保护的氨基酸苄酯偶联，得到通式5a-p化合物，

其中，所述氨基酸选自甘氨酸、L-丙氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-缬氨酸、L-蛋氨酸、L-脯氨酸、L-酪氨酸、L-苏氨酸、L-丝氨酸、L-色氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-组氨酸、L-赖氨酸和L-谷氨酰胺。

4.一种制备权利要求2所述化合物的方法，其特征在于，将权利要求3所得通式5a-p化合物在HCl和EtOAc存在下脱去保护基，得到通式6a-p化合物。

5.一种用于抗血栓的药物组合物，其特征在于，含有治疗上有效剂量的权利要求2所述的通式6a-p化合物，并含有一种或多种药学上可接受的赋型剂或者辅加剂。

6.如权利要求5所述的抗血栓的药物组合物，其特征在于，所述通式6a-p化合物在所述药物组合物中的重量含量为0.1％-99％，优选10-60％。

7.一种制备权利要求5或6所述的用于抗血栓的药物组合物的方法，其特征在于，将有效量的权利要求2所述的通式6a-p化合物与药学上可接受的载体或稀释剂配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一种适宜的药物组合物。

8.一种用于抗血栓的药物制剂，其特征在于，是将权利要求2所述通式6a-p化合物与药学上可接受的赋型剂或者辅加剂的混合物制成片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂或口服液。

9.权利要求2所述通式6a-p化合物在制备抗血栓药物中的应用。

10.权利要求5或6所述用于抗血栓的药物组合物在制备抗血栓药物中的应用。