CN102458404A - 以性类固醇前驱物组合选择性***受体调节物治疗热潮红、血管舒缩症状及夜汗的技术 - Google Patents

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Abstract

用于在包括人类在内之易感染的温血动物中减少或消除热潮红、血管舒缩症状及夜汗之发生同时降低罹患乳癌、子宫癌或子宫内膜癌之风险及更藉由抑制骨质疏松症、高胆固醇血症、高脂血症、动脉粥状硬化、高血压、胰岛素抗性、第2型糖尿病、肌肉耗失、肥胖症、阿滋海默氏(Alzheimer)症、认知丧失、失忆或***干燥之发生而具有有利效应的新颖方法，其涉及投予一量的性类固醇前驱物特别是去氢表雄固酮(DHEA)与一种抗***或一种选择性***受体调节物特别是具有下列通式结构之化合物。另外，还公开了用于输送适用于本发明的活性成分与套组之药物组合物。

Description

以性类固醇前驱物组合选择性***受体调节物治疗热潮红、血管舒缩症状及夜汗的技术
相关申请案的交互引述
本申请案主张于2009年6月16日提出申请的第61/187,549号美国暂准申请案与于2010年6月1日提出申请的度第12/791,174号美国正式申请案的优先权，其内容皆在此并入本案以为参考数据。
发明领域
本发明是有关于用于女性热潮红、血管舒缩症状及夜汗的新的疗法。尤其，该疗法包括一种性类固醇前驱物组合一种用于降低罹患乳癌或子宫内膜癌的风险的选择性***受体调节物(SERM)的投药作用。本发明亦提供用于实施前述组合物的套组与药物组合物。在病患中投予前述组合物的投药作用，减少或消除热潮红、血管舒缩症状、夜汗及睡眠障碍的发生。此外，据信降低接受该合并疗法的病患罹患乳癌及/或子宫内膜癌的风险。亦提供诸如减少罹患骨质疏松症、高胆固醇血症、高脂血症、动脉粥状硬化、高血压、阿滋海默氏(Alzheimer)症、认知丧失、失忆、失眠症、心血管疾病、胰岛素抗性、糖尿病及肥胖症(特别是腹部肥胖)的可能性或风险的附加效益。
发明背景
如下是后述所论及参考文献的使用较简略引述格式的完全引述。
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已知多种疾病、病况及不良症状对于外源性类固醇或其前驱物的投药作用的反应良好。例如，据信***降低骨质流失速率，而雄激素已显示藉由刺激骨形成作用而增加骨质量。荷尔蒙补充疗法(如***的投药作用)可用于治疗停经症状。黄体素通常用于抵消子宫内膜增生作用及***所引发的子宫内膜癌风险。在广泛种类的症状与失调症的治疗或预防性目的上使用***、雄激素化合物及/或黄体素，是具有多种缺点。以雄激素化合物治疗女性可能具有造成一些男性化副作用的不良副作用。同时，在病患中投予性类固醇可能增加病患罹患一些疾病的风险。例如***活性造成女性乳癌的恶化。
此外，已发现雄激素化合物有利于治疗经常由HRT引起的***疼痛(Pye等人于1985乙文)。事实上，***补充疗法可能造成严重的***疼痛，而可能导致治疗中断。
需要更有效的荷尔蒙疗法及减少副作用与风险。据信本发明的合并疗法及可用于该等疗法中的药物组合物与套组因应该等需求。
发明内容
本发明的一个目标是提供治疗或降低热潮红、血管舒缩症状、夜汗及睡眠障碍的发生或罹患风险的方法。
另一目标是提供治疗上述疾病或降低罹患风险的方法，同时将罹患乳癌及/或子宫内膜癌、骨质疏松症、心血管疾病、高胆固醇血症、高脂血症、动脉粥状硬化、高血压，胰岛素抗性、糖尿病、肥胖症(特别是腹部肥胖)及***干燥的风险降至最低。
另一目标是提供适用于上述方法中的套组与药物组合物。该等产品较佳与说明书一起包装，该说明书是供使用其内容物以降低或消除选自由热潮红、血管舒缩症状及夜汗所组成的组的症状发生的作用。
在一实施例中，本发明提供降低或消除热潮红、血管舒缩症状、夜汗及睡眠障碍的发生的方法，该方法包括对于需要该项消除或减少作用的病患投予一治疗有效量的一种性类固醇前驱物或其前驱药，及合并对该病患投予一治疗有效量的一种选择性***受体调节物或一种抗***或其前驱药。
性类固醇前驱物较佳的是选自由去氢表雄固酮、硫酸去氢表雄固酮、雄甾-5-烯-3β，17β-二醇、4-雄甾烯-3，17-二酮及前述任一附加药剂的前驱药所组成的组。
在另一实施例中，本发明提供附加的有利效应或降低选自由骨质疏松症、高胆固醇血症、高脂血症、动脉粥状硬化、高血压、阿滋海默氏(Alzheimer)症、胰岛素抗性、糖尿病、肌肉耗失、肥胖症所组成的组之一病况的罹患风险，藉由对于需要该有利效应的病患投予治疗有效量的一种性类固醇前驱物或其前驱药及合并对该病患投予治疗有效量的一种选择性***受体调节物或其前驱药，而获致该有利效应。
在另一实施例中，本发明提供一种药物组合物，其包括：
a)一种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载剂；
b)一治疗有效量的至少一种性类固醇前驱物或其前驱药；及
c)一治疗有效量的至少一种选择性***受体调节物或一种抗***或前驱药。
在另一实施例中，本发明提供一种丸剂、一种锭剂、一种胶囊剂、一种凝胶剂、一种乳膏剂、一种卵形栓剂或一种栓剂，其包括：
a)一种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载剂；
b)一治疗有效量的至少一种性类固醇前驱物或其前驱药；及
c)一治疗有效量的至少一种选择性***受体调节物或一种抗***或前驱药。
在另一实施例中，本发明提供一套组，其包括一个第一容器，其中所含有的一种药学配方包含一治疗有效量的至少一种性类固醇前驱物或其前驱药；及该套组进一步包括一个第二容器，其中所含有的一种药学配方包含一治疗有效量的至少一种选择性***受体调节物或一种抗***或其前驱药。
在另一实施例中，本发明是有关治疗或降低热潮红、血管舒缩症状、夜汗及睡眠障碍的发生的方法，其是藉由在需要该项治疗或该项减少作用的一病患中，增加选自由去氢表雄固酮(DHEA)、硫酸去氢表雄固酮(DHEA-S)、雄甾-5-烯-3β，17β-二醇(5-二醇)及4-雄甾烯-3，17-二酮所组成的组的性类固醇前驱物的水平，及其进一步包括对于该病患投予一治疗有效量的一种选择性***受体调节物(SERM)作为合并疗法的一部分。
如用于这样的“纯SERM”，是指生理或药用浓度的SERM在***与子宫内膜组织中并不具有任何***活性。
在另一实施例中，本发明提供一套组，其包括其中含有一治疗有效量的至少一种性类固醇前驱物之一个第一容器，及进一步包括其中含有一治疗有效量的至少一种选择性***受体调节物之一个第二容器。
在另一实施例中，本发明在一容器中提供一种药物组合物，其包括：
a)一种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载剂；
b)一治疗有效量的至少一种性类固醇前驱物；及
c)一治疗有效量的至少一种选择性***受体调节物。
在另一实施例中，本发明提供减少或消除选自由热潮红、血管舒缩症状及夜汗所组成的组的症状发生的方法，该方法包括对于需要该项消除或减少作用的一病患投予(i)一治疗有效量的一种性类固醇前驱物或其前驱药合并(ii)一治疗有效量的一种选择性***受体调节物或一种抗***或其中任一者的前驱药。
在另一实施例中，本发明提供用于减少或消除选自由热潮红、血管舒缩症状及夜汗所组成的组的症状的药物组合物，其包括：
a)一种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载剂；
b)至少一种性类固醇前驱物或其前驱药；及
c)至少一种选择性***受体调节物或一种抗***或其中任一者的前驱药；
其中该药物组合物是提供于包装中，该包装指导使用该组成物以减少或消除选自由热潮红、血管舒缩症状及夜汗所组成的组的至少一种症状。
在另一实施例中，本发明提供用于减少或消除选自由热潮红、血管舒缩症状及夜汗所组成的组的症状的一套组，其包括(i)其中具有至少一种性类固醇前驱物或其前驱药的一个第一容器；(ii)其中具有至少一种选择性***受体调节物或一种抗***或前述任一者的前驱药的一个第二容器；及(iii)使用该套组以减少或消除选自由热潮红、血管舒缩症状及夜汗所组成的组的至少一种症状的说明书。
如用于此的与其它化合物“合并”投药至一病患的化合物，其投药作用是与该其它化合物的投药作用充分接近，藉此一病患同时获得该二化合物的生理效应，即使该等化合物并非在相近的时间投予。当化合物投药作为一种合并疗法的一部分时，它们是彼此合并投药。在此所论及的较佳的选择性***受体调节物，较佳与较佳的性类固醇前驱物即去氢表雄固酮、硫酸去氢表雄固酮、雄甾-5-烯-3β，17β-二醇或4-雄甾烯-3，17-二酮及特别是去氢表雄固酮组合使用。
***补充疗法常用于停经后妇女，以预防与治疗起因于停经的疾病，即骨质疏松症、热潮红、***干燥、冠状动脉心脏病(Cummings于1991年乙文)，但该疗法出现与长期***投药作用相关的一些不良效应。特别是因***所产生的子宫癌及/或乳癌知觉风险的增加(Judd、Meldrum等人于1983年乙文；Colditz、Hankinson等人于1995年乙文)，是该疗法的主要缺点。本发明的作者已发现在性类固醇前驱物的投药作用中添加一种选择性***受体调节物(SERM)，而抑制该等不良效应。
另一方面，SERM本身对于一些停经症状如热潮红与盗汗具有极少或全无有利效应。本案申请者相信在停经症状的SERM疗法中添加一种性类固醇前驱物，而减少或甚至消除热潮红与盗汗。重要地是指明热潮红与盗汗为停经的最初表现，而病患对于停经疗法的接受与否通常取决于是否成功地减少热潮红与盗汗。
如用于此的选择性***受体调节物(SERM)是一化合物，其在***组织直接或经由其活性代谢物作用为一种***受体拮抗剂(“抗***”)，然而在骨骼组织与在血清胆固醇水平(亦即藉由降低血清胆固醇)上提供***或类***效应。在试管内或在人类或大鼠***组织作用为***受体拮抗剂的非类固醇化合物(尤其若该化合物在人类乳癌细胞上作用为一种抗***)，可能作用为一种SERM。反之，类固醇抗***倾向于不作用为SERM，因它们在血清胆固醇上具有于不展现任何有利效应的倾向。经我们试验发现作用为SERM的非类固醇抗***包括EM-800、EM-652.HCl、雷洛昔芬(Raloxifene)、泰莫西芬(Tamoxifen)、4-羟基-泰莫西芬(Tamoxifen)、托瑞米芬(Toremifene)、4-羟基-托瑞米芬(Toremifene)、屈洛昔芬(Droloxifene)、LY 353 381、LY 335 563、GW-5638、拉索昔芬(Lasofoxifene)、巴多昔芬(Bazedoxifene)(TSE 424；WAY-TSE 424；WAY 140424；1-[[4-[2-(六氢-1H-氮杂卓-1-基)乙氧基]苯基]甲基]-2-(4-羟苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚)、哌喷昔芬(Pipendoxifene)(ERA923；2-(4-羟苯基)-3-甲基-1-[[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲基]-1H-吲哚-5-酚)及艾多昔芬(Idoxifene)，但不限于该等化合物。
但我们亦发现并非所有的SERM皆以相同方式反应，及其可分为二个子类：“纯SERM”与“混合SERM”。因此，在生理或药用浓度的一些SERM如EM-800与EM-652.HCl，在***与子宫内膜组织中并未具有任何***活性，及在大鼠中具有降低胆固醇与降血脂的效应。该等SERMS可称作“纯SERM”。理想的SERM是EM-652.HCl类型的一种纯SERM，因其在乳腺中的强力与纯的抗***活性。其它如雷洛昔芬(Raloxifene)、泰莫西芬(Tamoxifen)、屈洛昔芬(Droloxifene)、4-羟基-泰莫西芬(Tamoxifen)(1-(4-二甲基胺基乙氧基苯基)-1-(4-羟苯基)-2-苯基-丁-1-烯)、托瑞米芬(Toremifene)、4-羟基-托瑞米芬(Toremifene)[(Z)-(2)-2-[4-(4-氯-1-(4-羟苯基)-2-苯基-1-丁烯基)苯氧基]-N，N-二甲基乙胺)、LY 353 381、LY 335 563、GW-5638、拉索昔芬(Lasofoxifene)、艾多昔芬(Idoxifene)及巴多昔芬(Bazedoxifene)在***与子宫内膜中具有一些***活性。该第二系列的SERM可称作“混合SERM”。如第5与6图的试管内试验及第7图的乳癌的一活体内试验中所示，可藉由添加纯的“SERM”而抑制该等“混合SERM”的无用的***活性。因裸鼠中的人类乳癌异种移植物是最接近人类乳癌的可利用的模式，我们因此比较单独与组合投予的EM-800与泰莫西芬(Tamoxifen)对于裸鼠中的ZR-75-1乳癌异种移植物生长的效应。
本案申请者相信本发明的SERM在***、子宫与子宫内膜组织中作用为纯抗***是非常重要的，因SERM必须抵消***的可能副作用，特别是自可增加该等组织中的癌症风险的外源性类固醇前驱物所形成的该等副作用。尤其，本案申请者相信本发明的在位置2具有绝对构型2S的苯并哌喃衍生物，是比其外消旋混合物更加适合。因此，在第6,060,503号美国专利中，揭露用于治疗***恶化型乳癌与子宫内膜癌的具有2S构型的光学活性苯并哌喃抗***，及显示该等化合物显著地比外消旋混合物更加有效(见第,060,503号美国专利的第1至5图)。
在工业上很难制得纯态的2S构型镜像异构物，本案申请者认为以低于10重量％、较佳低于5重量％及更佳低于2重量％的2R镜像异构物掺杂程度为较佳。
图式简单说明
第1图显示在大鼠中以DHEA(每日以经皮方式投予10毫克一次)或EM-800(每日口服投予75微克一次)单独或组合治疗9个月对于血清三酸甘油酯(A)与胆固醇(B)水平的效应。数据是以平均值±SEM表示。**：实验组相对于个别对照组的P＜0.01。
第2图显示在切除卵巢的大鼠中以所投予的EM-800或雷洛昔芬(Raloxifene)的递增剂量(0.01、0.03、0.1、0.3及1毫克/公斤)治疗37周对于总血清胆固醇水平的效应。比较未切除卵巢的大鼠与带有一个17β-***(E2)植入物的切除卵巢的动物；**实验组相对于切除卵巢的(OVX)对照组大鼠的p＜0.01。
第3图显示：A)在增补雌甾酮的切除卵巢的(OVX)裸鼠中，每日以经皮方式投予二次DHEA的递增剂量(0.3毫克、1.0毫克或3.0毫克)对于平均ZR-75-1肿瘤尺寸的效应。使用仅领受载剂的对照组OVX小鼠作为附加对照组。以初始的肿瘤尺寸为100％。DHEA是以50％乙醇-50％丙二醇的0.02毫升溶液，以经皮方式(p.c.)投药在背侧皮肤上。B)在增补雌甾酮的OVX裸鼠中，以单独或组合投予的DHEA或EM-800(本发明的一种SERM)的递增剂量治疗9.5个月对于ZR-75-1肿瘤重量的效应。**：经治疗组相对于增补雌甾酮的对照组OVX小鼠的p＜0.01。
第4图显示在增补雌甾酮的切除卵巢的(OVX)裸鼠中，9.5个月的抗***EM-800(15微克、50微克或100微克)的递增口服剂量(B)或组合EM-800(15微克)的经皮投药的DHEA递增剂量(0.3、1.0或3.0毫克)或单独投予的EM-800(A)，对于平均ZR-75-1肿瘤尺寸的效应。以初始的肿瘤尺寸为100％。使用仅领受载剂的对照组OVX小鼠作为附加对照组。每日以皮下方式投予0.5微克剂量的雌甾酮一次，而DHEA是溶于50％乙醇-50％丙二醇中及每日以0.02毫升的体积施用在背侧皮肤区域二次。亦与仅领受载剂的OVX动物进行比较。
第5图显示EM-800、(Z)-4-羟基-泰莫西芬(Tamoxifen)、(Z)-4-羟基-托瑞米芬(Toremifene)及雷洛昔芬(Raloxifene)的递增浓度对于人类石川氏(Ishikawa)细胞中的碱性磷酸酶活性的效应。在1.0nM E2存在或不存在下，在暴露于所示化合物的递增浓度5天之后，测量碱性磷酸酶的活性。数据是以四个孔的平均值±SEM表示。当SEM与所用符号重迭时，仅显示该符号(Simard、Sanchez等人于1997年乙文)。
第6图显示在人类石川氏(Ishikawa)恶性肿瘤细胞中，藉由抗***EM-800封阻(Z)-4-羟基-泰莫西芬(Tamoxifen)、(Z)-4-羟基-托瑞米芬(Toremifene)、屈洛昔芬(Droloxifene)及雷洛昔芬(Raloxifene)对于碱性磷酸酶活性的刺激效应。在30或100nM EM-800存在或不存在下，在暴露于3或10nM的所示化合物5天之后，测量碱性磷酸酶的活性。数据是以8个孔的平均值±SD表示，除了对照组的数据是自16个孔取得之外(Simard、Sanchez等人于1997年乙文)。
第7图显示泰莫西芬(Tamoxifen)对于人类乳癌ZR-75-1异种移植物生长的刺激效应，完全被同时投药的EM-652.HCl封阻。在泰莫西芬(Tamoxifen)不存在下，与其纯抗***活性相符的EM-652.HCl本身对于肿瘤生长并无效应。
第8图显示标准ERT(***)或HRT(***+黄体素)及去氢表雄固酮与SERM阿考比芬(Acolbifene)的组合物对于停经参数的效应的比较。在去氢表雄固酮中添加阿考比芬(Acolbifene)，将抵消自去氢表雄固酮所形成的***的可能负面效应。
第9图显示大鼠乳腺切片：
A)未经治疗的动物。小叶(L)包括数个乳腺泡。***图。高放大率显示乳腺泡。
B)经EM-800(每日0.5毫克/公斤体重)治疗12周的动物。小叶(L)的尺寸缩小。***图。高放大率显示萎缩的乳腺泡细胞。
第10图显示大鼠子宫内膜切片：
A)未经治疗的动物。管腔上皮细胞(LE)的特征在于柱状上皮细胞，而腺体上皮细胞(GE)是相当立方形。基质含有数种细胞分子与胶原纤维。
B)在12周期间经EM-800(每日0.5毫克/公斤体重)治疗的动物。管腔上皮细胞的高度明显地降低。腺体上皮细胞具有无活性迹象的未染色的细胞胞浆。因基质的细胞间分子减少之故，基质具高度的多孔性。
第11图显示在同时以雌甾酮治疗的切除卵巢的小鼠中，以口服方式投予EM-652.HCl、拉索昔芬(Lasofoxifene)(游离碱；活性与无活性镜像异构物)及雷洛昔芬(Raloxifene)的递增浓度9天对于子宫重量的效应。*为相对于经E1治疗的对照组的p＜0.05，**为p＜0.01。
第12图显示在同时以雌甾酮治疗的切除卵巢的小鼠中，以口服方式投予EM-652.HCl、拉索昔芬(Lasofoxifene)(游离碱；活性与无活性镜像异构物)及雷洛昔芬(Raloxifene)的递增浓度9天对于***重量的效应。**为相对于经E1治疗的对照组的p＜0.01。
第13图显示在切除卵巢的小鼠中，以口服方式投予1微克与10微克的EM-652.HCl、拉索昔芬(Lasofoxifene)(游离碱；活性与无活性镜像异构物)及雷洛昔芬(Raloxifene)达9天对于子宫重量的效应。**为相对于OVX对照组的p＜0.01。
第14图显示在切除卵巢的小鼠中，以口服方式投予1微克与10微克的EM-652.HCl、拉索昔芬(Lasofoxifene)(游离碱；活性与无活性镜像异构物)及雷洛昔芬(Raloxifene)达9天对于***重量的效应。**为相对于OVX对照组的p＜0.01。
第15图显示在切除卵巢的大鼠中，单独以去氢表雄固酮(DHEA)或组合氟他胺(Flutamide)或EM-800治疗12个月对于骨小梁体积的效应。增加未切除卵巢的动物作为附加对照组。数据是以平均值±SEM呈现，**为相对于OVX对照组的p＜0.01。
第16图显示在切除卵巢的大鼠中，单独以去氢表雄固酮(DHEA)或组合氟他胺(Flutamide)或EM-800治疗12个月对于骨小梁数目的效应。增加未切除卵巢的动物作为附加对照组。数据是以平均值±SEM呈现，**为相对于OVX对照组的p＜0.01。
第17图显示来自未切除卵巢的对照组(A)、切除卵巢的对照组(B)及单独以DHEA治疗(C)或组合氟他胺(Flutamide)(D)或EM-800(E)治疗的切除卵巢的大鼠的近端胫骨干骺端。察知在切除卵巢的对照组动物(B)中的骨小梁(T)量减少，及在DHEA投药作用(C)后所引发的骨小梁体积(T)的显著增加。在DHEA中添加氟他胺(Flutamide)，部分地封阻DHEA对于骨小梁体积(D)的效应，而DHEA与EM-800的组合物提供对抗与卵巢切除相关联的骨质流失的完全保护作用。曼森-戈德纳(Masson-Goldner)改良型三色骨染料，magn.x80。T：小梁，GP：生长板。
第18图显示抗***对于ZR-75-1肿瘤生长的效应。在切除卵巢的裸鼠中，以7种抗***治疗161天对于雌甾酮所引发的人类ZR-75-1***肿瘤生长的效应。肿瘤尺寸是以初始的肿瘤面积(第1天为100％)的百分比表示。数据是以平均值±SEM表示(n＝18至30个肿瘤/组)；##为相对于EM-652.HCl的p＜0,01；**为相对于OVX的p＜0,01。在以含有比例为1∶25的雌甾酮与胆固醇的0.5公分的皮下硅胶植入物所得的雌甾酮刺激作用下，每日以50微克/小鼠的口服剂量投予抗***一次。
第19图显示抗***对于ZR-75-1肿瘤生长的效应。在切除卵巢的裸鼠中，以7种抗***治疗161天对于人类ZR-75-1***肿瘤生长的效应。肿瘤尺寸是以初始的肿瘤面积(第1天为100％)的百分比表示。数据是以平均值±SEM表示(n＝18至30个肿瘤/组)；##为相对于EM-652.HCl的p＜0,01；**为相对于OVX的p＜0,01。在***刺激作用不存在下，每日以100微克/小鼠的口服剂量投予抗***一次。
第20图显示抗***对于ZR-75-1肿瘤生长的效应。在切除卵巢的裸鼠中，以抗***泰莫西芬(Tamoxifen)、EM-652.HCl(阿考比芬(Acolbifene))及泰莫西芬(Tamoxifen)与EM-652.HCl的组合物治疗161天对于人类ZR-75-1***肿瘤生长的效应。肿瘤尺寸是以初始的肿瘤面积(第1天为100％)的百分比表示。数据是以平均值±SEM表示(n＝18至30个肿瘤/组)；##为相对于EM-652.HCl的p＜0,01；**为相对于OVX的p＜0,01。在***刺激作用不存在下，每日以200微克/小鼠的口服剂量投予抗***一次。
第21图显示抗***对于反应类别的效应。在切除卵巢的裸鼠中，投予7种抗***161天对于人类ZR-75-1***肿瘤的反应类别的效应。完全消退是指在治疗结束时无法侦测到的该等肿瘤；部分消退是对应于消退≥它们原有尺寸的50％的肿瘤；稳定反应是指消退＜50％或恶化≤50％的肿瘤；及恶化是指它们恶化超过50％，相较于它们原有尺寸而言。在以含有比例为1∶25的雌甾酮与胆固醇的0.5公分的皮下硅胶植入物所得的雌甾酮刺激作用下，每日以50微克/小鼠的口服剂量投予抗***一次。
第22图显示抗***对于反应类别的效应。在切除卵巢的裸鼠中，投予7种抗***161天对于人类ZR-75-1***肿瘤的反应类别的效应。完全消退是指在治疗结束时无法侦测到的该等肿瘤；部分消退是对应于消退≥它们原有尺寸的50％的肿瘤；稳定反应是指消退＜50％或恶化≤50％的肿瘤；及恶化是指它们恶化超过50％，相较于它们原有尺寸而言。在***刺激作用不存在下，每日以200微克/小鼠的口服剂量投予抗***一次。
第23图显示抗***对于反应类别的效应。在切除卵巢的裸鼠中，投予抗***泰莫西芬(Tamoxifen)、EM-652.HCl(阿考比芬(Acolbifene))及泰莫西芬(Tamoxifen)与EM-652.HCl的组合物161天对于人类ZR-75-1***肿瘤的反应类别的效应。完全消退是指在治疗结束时无法侦测到的该等肿瘤；部分消退是对应于消退≥它们原有尺寸的50％的肿瘤；稳定型反应是指消退＜50％或恶化≤50％的肿瘤；及恶化是指它们恶化超过50％，相较于它们原有尺寸而言。在***刺激作用不存在下，每日以200微克/小鼠的口服剂量投予抗***一次。
第24图显示在16周的治疗期间，每日剂量的DHEA或安慰剂对于中等至严重热潮红的平均次数的效应(*为DHEA相对于安慰剂的p＜0.05)。
第25图显示在16周的治疗期间，以每日50毫克剂量的DHEA或安慰剂的治疗对于所有热潮红(轻微、中等及严重)的平均次数的效应(*为DHEA相对于安慰剂的p＜0.05)。
第26图显示对于40至75岁停经后妇女每日投予含有0％、0.5％、1.0％或1.8％的DHEA的***栓剂之后，在第1天与第7天所测得的成熟指数。数据是以平均值±SEM表示(n＝9或10)。*为第7天的数据相对于第1天的数据的p＜0.05，**为p＜0.01。
第27图显示对于40至75岁停经后妇女每日投予含有0％、0.5％、1.0％或1.8％的DHEA的***栓剂之后，在第1天与第7天所测得的***pH值。数据是以平均值±SEM表示(n＝9或10)。*为第7天的数据相对于第1天的数据的p＜0.05，**为p＜0.01。
具体实施方式
DHEA的有利效应
有关停经的最广为公认的事实是在于卵巢的***分泌作用渐进性地减少及最后停止。卵巢的***分泌作用的中止，是由循环17β-***(E2)水平的明显降低所例证。可轻易测量该循环E2水平的变化加上***对于停经症状与骨质吸收作用的有利效应，已使得大部分的荷尔蒙补充疗法研究集中在各种形式的***以及***与黄体素的组合物，以避免单独使用***对于子宫内膜的可能有害的刺激效应而可能造成子宫内膜增生与癌症。
在停经时，循环17β-***(E2)迅速降低，加上外源***对于停经症状与骨质吸收作用的有利效应，已使得大部分的荷尔蒙补充疗法研究集中在各种形式的***以及***与黄体素的组合物，以避免单独投予***所引发的子宫内膜癌风险。
在停经后妇女中的***与黄体素的荷尔蒙补充疗法(HRT)，是用于因***缺乏所产生的急性症状特别是热潮红及夜汗，及用于长期预防骨质疏松症及可能的心血管疾病。虽然黄体素有效地保护子宫免于长期***暴露的刺激效应，其本身亦具有副作用，特别是功能失调性子宫出血(Archer等人于1999年乙文)。其是一常见的副作用，及为女性在头6至12个月内提早停止荷尔蒙补充疗法的一个共同理由。在追踪5.2年的数据显示普力马林(Premarin)与普维拉(Provera)的组合物(倍美安(Prempro))造成乳癌发生率增加26％及对于心血管事件具有一潜在的负面影响(妇女健康关怀研究(Women’s Health Initiative)于2002年乙文)之后，传统的HRT近来已受到严重质疑，许多妇女甚至放弃该疗法。
我们认为称作细胞内分泌学的对于雄激素与激素在***标的组织中的形成与作用的了解增加(Labrie于1991年乙文；Labrie等人于1992年乙文a；Labrie等人于1992年乙文b；Labrie等人于1994年乙文；Labrie等人于1995年乙文；Luu-The等人于1995年乙文a；Labrie等人于1996年乙文；Labrie等人于1997年乙文a；Labrie等人于1997年乙文b；Labrie等人于1997年乙文c；Labrie等人，1997d)，以及我们最近的观察显示在大鼠切除卵巢之后，雄激素在阻止骨质流失方面所扮演的优势角色是超过***(Martel等人于1998年乙文)及在停经后妇女中观察到一类似情况(Labrie等人于1997年乙文c)，已为性类固醇补充疗法与老化领域中的及时与可能高度显著的进展铺路。我们的观察非常支持该一可能性。
在Berger等人(2005年)乙文中，显示DHEA对于大鼠***的三层***壁即一种高度黏液化的上皮细胞的特别感兴趣的效应，造成固有层中的肌层厚度增加与胶原纤维紧密度增加。因此DHEA在***黏膜上同时展现雄激素与***效应，而提供一种更具生理性的补充疗法。
本发明因此是基于我们对于了解男性与女性的性类固醇生理学的最近进展(Labrie于1991年乙文；Labrie等人于1992年乙文a；Labrie等人于1992年乙文b；Labrie等人于1994年乙文；Labrie等人于1995年乙文a；Luu-The等人于1995年乙文a；Labrie等人于1997年乙文a；Labrie等人于1997年乙文b；Labrie等人于1997年乙文c；Labrie等人，1997d)，及认知女性在停经时，不仅因卵巢活性降低而缺乏***活性，亦已数年来处于雄激素暴露降低的情况。事实上，正常女性所产生的雄激素量是相当于男性所分泌的雄激素的三分之二(Labrie等人于1997年乙文a)。
女性的雄激素储备自30岁开始渐进地减少，及平行发生DHEA与DHEA-S的血清浓度的降低(Labrie等人于1997年乙文b)。因而，在近停经期与停经后同时使用雄激素与***的补充疗法似乎是合乎逻辑的，藉此在各细胞与组织中维持该二类别的性类固醇的生理平衡，然而唯有在***组织中藉由自类固醇前驱物DHEA局部形成雄激素与***，方可达成该目标。
DHEA-雄激素的主要来源
DHEA在***性类固醇形成作用中所扮演的角色
人类与其它一些灵长类动物在动物物种中是独特的，因其肾上腺分泌大量的无活性前驱物类固醇DHEA及特别是DHEA-S，而DHEA与DHEA-S在***组织中转化成为强力的雄激素及/或***。在成人与女性血浆中的DHEA-S水平是比罩固酮高500倍及比***高10,000倍，因此大量供应用于雄激素及/或***形成作用的受质。如上述，已将性类固醇在***标的组织中的局部合成与效应称作细胞内分泌学(Labrie等人于1988年乙文；Labrie于1991年乙文)。藉由将编码类固醇生成酵素的大部分的组织专一性基因的结构阐明，而该等酵素是负责将DHEA-S与DHEA在***组织局部转换成为雄激素及/或***(Labrie等人于1992年乙文a；Labrie等人，1992c；Labrie等人于1995年乙文；Luu-The等人于1995年乙文b；Labrie等人于1996年乙文；Labrie等人，1997d)，使得该领域的新近与快速的进展成为可能。
DHEA与DHEA-S在人类性类固醇生理学中的主要重要性，可由估计成年男性约50％的总雄激素是衍生自该等肾上腺类固醇前驱物所说明(Labrie等人于1985年乙文；Bélanger等人于1986年乙文；Labrie等人于1993年乙文)；而在女性中，我们最佳的估计是***组织中的***的细胞内形成作用在停经前达到75％的程度，及在停经后接近100％(Labrie于1991年乙文)。
几乎独占地集中于卵巢***所扮演的角色的焦点，已将注意力自业已发生在20岁至30岁之间及40岁至50岁之间的循环DHEA惊人地降低70％移开(Migeon等人于1957年乙文；Vermeulen与Verdonck于1976年乙文；Vermeulen等人于1982年乙文；Orentreich等人于1984年乙文；Bélanger等人于1994年乙文；Labrie等人于1997年乙文b)。因DHEA在***组织中转换为雄激素与***二者，该种血清DHEA与DHEA-S的降低，解释为何女性在停经时如上述地不仅缺乏***亦缺少雄激素。
如上述，最近的数据显示黄体素对于乳癌具有负面影响(Clarke与Sutherland于1990年乙文；Musgrove等人于1991年乙文；Horwitz于1992年乙文)，及报导显示该疾病的风险增加(Colditz等人于1995年乙文)。就该情境而言，重要之处在于指出若DHEA对于人类子宫内膜的刺激效应不存在(Labrie等人于1997年乙文c)，则消除投予一种黄体素以中和***对于子宫内膜的强力效应的需求。
就***而言，已知DHEA在大鼠中预防二甲基苯并蒽***肿瘤的发生(Luo等人于1997年乙文)及抑制其生长(Li等人于1993年乙文)。此外，DHEA在裸鼠中抑制人类乳癌异种移植物的生长(见第1例与Couillard等人于1998年乙文)。因此，与展现刺激效应的***与黄体素相反，预期DHEA同时抑制女性乳癌的发生与生长。
如我们的先前研究中所清楚论证者，以生理量的外源DHEA所进行的增补作用，仅在含有专一性类固醇生成酵素的适当标的组织中容许雄激素与***的生物合成作用。依此方式所合成的活性雄激素与***留存在原产细胞中，及极少渗漏进入循环中。事实上，DHEA投药作用的最明显的效应是在于DHT代谢物的葡萄糖醛酸衍生物即ADT-G与3α-二醇-G的循环水平，该等代谢物是在***胞内分泌组织中产生，而该等组织所具有的适当的类固醇生成酵素是自肾上腺前驱物DHEA与DHEA-S合成DHT及之后进一步将DHT代谢成为无活性的共轭物(Labrie于1991年乙文；Labrie等人于1996年乙文)。雄激素在标的组织中的局部生物合成作用与效应，消除其它组织对于雄激素的暴露，及因此将不良的雄性化或其它雄激素相关副作用的风险降至最低。该相同论述亦适用于***，虽然我们认为目前尚未获得总***分泌作用的可信赖的参数(相较于用于雄激素的葡萄糖醛酸类而言)。
雄激素与***在骨生理学所扮演的角色
雄激素在骨生理学所扮演的主要角色的相关文献记录完整(Labrie等人于1997年乙文c；Martel等人于1998年乙文)。事实上，罩固酮与DHT二者均在类成骨细胞的骨肉瘤细胞中增加α(I)原胶原mRNA的转录作用(Benz等人于1991年乙文)。在切除罩丸的大鼠中，亦已显示DHT的治疗刺激内化骨发育(Kapur与Reddi于1989年乙文)。此外，停经后妇女在24个月的治疗期间，在腰椎、股骨粗隆及全身测得的骨质密度因***+罩固酮植入物所增加者，是超过因单独投予E2所增加者(Davis等人于1995年乙文)。
此外，已报导在重度骨质疏松症中，同化性类固醇有助于阻止骨质流失(Hennernan与Wallach于1957年乙文)。类似地，已发现皮下的E2与固酮植入物在预防停经后妇女的骨质疏松症方面，是比口服***更有效(Savvas等人于1988年乙文)。虽然在该研究中所观察到的差异已被归因于不同的***投药途径，造成该差异的原因亦可能为罩固酮的作用。相较于单独领受***者，在领受甲基罩固酮加上***的停经后妇女中发现血清中的骨形成作用的标记即骨钙化素的增加，其是作为骨形成作用增加的指标(Raisz等人于1996年乙文)。停经后妇女以经皮的DHEA治疗12个月之后，观察到对于血清骨钙化素的类似的刺激效应(Labrie等人于1997年乙文c)。此外，已发现雄激素疗法，如在癸酸诺龙(nandrolone)情况所观察到者，增加停经后妇女的脊骨质密度(Need等人于1989年乙文)。雄激素虽因它们在停经后妇女中的独特作用而日益获得赞同，然而在罩固酮的使用中观察到男性化效应(Burger等人于1984年乙文；Studd等人于1987年乙文)。
DHEA与腹部肥胖
腹部肥胖症是与胰岛素抗性、第2型糖尿病及动脉粥状硬化风险的增加相关联(Shimokata等人于1989年乙文；Cefalu等人于1995年乙文；Ferrannini等人于1997年乙文；Kopelman于2000年乙文)。除了其它因子之外，荷尔蒙变化及尤其肾上腺的DHEA与DHEA-S分泌作用的降低被认为是涉及的因子之一(Tchernof等人于1996年乙文)。在大鼠与小鼠模式中，DHEA投药作用在饮食引发的肥胖症中降低内脏脂肪的累积(Yen等人于1977年乙文；Cleary与Zisk于1986年乙文；Mohan等人于1990年乙文；Hansen等人于1997年乙文)。亦已观察到DHEA在降低随老化发生的胰岛素抗性方面的有利效应(Han等人于1998年乙文)。
在针对领受一种DHEA乳膏剂达12个月的停经后妇女所进行的一研究中，我们已发现胰岛素抗性减少及大腿部位的皮下脂肪亦减少(Diamond等人于1996年乙文)。此外，对于65至78岁的男性与女性每日投药50毫克的DHEA达6个月，在女性中减少腹部内脏脂肪10.2％而在男性中减少7.4％(Villareal与Holloszy于2004年乙文)。在同一研究中，女性与男性的腹部皮下脂肪皆减少6％。此外，血清胰岛素对于葡萄糖耐量试验的反应性降低13％而葡萄糖反应并无变化，因此在DHEA投药作用之后导致胰岛素灵敏度指标改善34％。亦已在罹患高胆固醇血症的中年男性发现DHEA作用的改善(Kawano等人于2003年乙文)。
在该相同团队先前所进行的一研究中，6个月的DHEA投药作用减少总体脂肪质量1.4公斤，而非脂肪质量增加0.9公斤(Villareal等人于2000年乙文)。雄激素对于***、热潮红及生活质量的效应。
以小区为基础的研究显示，女性自我提报的性功能障碍是自8％至50％。事实上，女性自30岁开始(Laumann等人于1999年乙文)以及在卵巢切除之后(Nathorst-Boos与vonSchoultz于1992年乙文)，低***与性功能障碍即随年龄而增加。虽然兴奋与***程度低是涉及社会心理与健康因子(Dennerstein等人于1997年乙文)，然而据信雄激素扮演一独立的角色(Bachmann等人于2002年乙文；Miller等人于2004年乙文)。
已知雄激素在女性的性兴奋、愉悦以及高潮的强度与容易性方面扮演一角色。雄激素亦涉及肿胀与润滑作用增加的神经血管平滑肌反应(Basson于2004年乙文)。***影响阴门与***的充血反应。因***亦影响心情，它们对于性致具有影响力(Basson于2004年乙文)。应记得DHEA在***中转换成为雄激素与***二者(Sourla等人于1998年乙文)(Berger等人于2005年乙文)。
此外，亦曾述及在ERT或HRT添加雄激素，对于整体良好状态、体力、心情及整体生活质量的详细效益(Sherwin与Gelfand于1985年乙文；Sherwin于1988年乙文)。已在***补充疗法(ERT)中添加雄激素之后，观察到主要的心理与身心症状即易怒、神经质、记忆及失眠症的改善(Notelovitz等人于1991年乙文)。
丧失***及/或性满足在停经后阶段的早期是常见的。已知在荷尔蒙补充疗法(HRT)中添加雄激素对于该等问题具有有利的效应。Shifren等人(2000年乙文)已发现罩固酮藉由贴剂的经皮投药作用，改善经手术停经的女性的***频率、愉悦程度及心情。在每日300微克的罩固酮剂量观察到该效应，该剂量导致血清罩固酮水平处于正常值的上限。亦已在抱怨***减少的非雄激素缺乏型女性中，研究罩固酮疗法(Goldstat等人于2003年乙文)。相较于安慰剂而言，以罩固酮进行的该项治疗改善***、性功能以及生活质量。类似地，在具有正常的雄激素水平的停经女性中，在***中添加甲基罩固酮增加***与频率，相较于单独投药的***而言(Lobo等人于2003年乙文)。在具有性致、***功能障碍的女性中，曾建议游离血清罩固酮水平位于参考范围的低分位数内的该等女性采用雄激素疗法(Bachmann等人于2002年乙文)。事实上，使用罩固酮治疗***缺乏(HSDD)的情形已增加(Sherwin与Gelfand于1987年乙文；Davis等人于1995年乙文；Shifren等人于2000年乙文；Goldstat等人于2003年乙文)。该等随机临床试验证实，罩固酮在患有HSDD的女性中具有效用。
DHEA的雄激素效应，应该亦适用于减少热潮红。事实上，雄激素疗法成功地在性腺低能的男性中(DeFazio等人于1984年乙文)及在停经过渡期的女性中(Overlie等人于2002年乙文)减少热潮红。此外，在无法藉由单独投予***获致满意结果的女性中，已发现添加雄激素有效纾解热潮红(Sherwin与Gelfand于1984年乙文)。热潮红是女性最初寻求HRT疗法的主要原因之一，及***在减轻该症状方面非常有效。
藉由肾上腺机能不足的案例，提供有关源自肾上腺的雄激素缺乏症的性质的一个清楚实例。(Arlt等人于1999年乙文)曾研究在罹患肾上腺机能不足的女性族群中，投予每日50毫克的DHEA与安慰剂达4个月的效应。DHEA的治疗将位于低的正常范围的血清罩固酮提高。该项治疗增加***思想的频率、性致及满意度。亦改善良好状态、忧郁症与焦虑。在每日以300毫克的高剂量投予DHEA的一研究中，观察到针对色情录像带的主观的精神(p＜0.016)与肢体(p＜0.030)反应较大(Hackbert与Heiman于2002年乙文)。在每日领受50毫克DHEA的女性中所进行的一研究，在70岁以上的女性观察到***的改善，但并未在60至70岁的女性中观察到(Baulieu于1999年乙文)。DHEA亦已显示对于热潮红的有利效应(Baulieu于1999年乙文；Stomati等人于2000年乙文)。根据加拿大最近的一项调查，70.8％的开业医师在***中添加雄激素以增进生活质量(Gelfand于2004年乙文)。
DHEA的其它潜在效益
在老化期间，肾上腺所形成的DHEA与DHEA-S减少70至95％，造成***标的组织中的雄激素与***形成作用显著地减少，其极可能涉及与老化相关的疾病的致病机转，诸如胰岛素抗性(Coleman等人于1982年乙文；Schriock等人于1988年乙文)与肥胖症(Nestler等人于1988年乙文；MacEwen与Kurzman于1991年乙文；Tchernof等人于1995年乙文)。事实上已在患有乳癌的病患中发现DHEA-S与DHEA的循环水平低(Zumoff等人于1981年乙文)，及已发现DHEA在一系列的动物模式中展现抗肿瘤基因活性(Schwartz等人于1986年乙文；Gordon等人于1987年乙文；Li等人于1993年乙文)。DHEA亦已显示在试管内(Suzuki等人于1991年乙文)及在活体内的真菌与病毒疾病(Rasmussen等人于1992年乙文)包括HIV(Henderson等人于1992年乙文)中具有免疫调节效应。另一方面，曾述及DHEA在停经后妇女中对于免疫***的刺激效应(Casson等人于1993年乙文)。
在女性中以DHEA所获得的先前数据
***补充疗法的使用需要添加黄体素，以抵消***所引发的子宫内膜增生作用，同时***与黄体素二者可增加乳癌的风险(Bardon等人于1985年乙文；Colditz等人于1995年乙文)。为避免标准***(ERT)或荷尔蒙补充疗法(HRT)的限制，我们曾研究在60至70岁女性中投予DHEA达12个月对于骨质密度、骨形成与代谢的参数、血清脂质、葡萄糖与岛素、脂肪组织质量、肌肉质量、体力、良好状态以及对于***与子宫内膜组织结构的效应(Diamond等人于1996年乙文；Labrie等人于1997年乙文c)。DHEA是以经皮方式投予，以避免类固醇前驱物通过肝脏的首渡效应。
我们因此在60至70岁女性(N＝15)中，评估藉由每日施用10％的DHEA乳膏剂一次达12个月的长期补充疗法的效应。人体测量显示，在12个月时体重并无变化，但皮下脂肪厚度减少9.8％(p＜0.05)(Diamond等人于1996年乙文)。髋部的骨质密度增加2.3％，髋部华氏(Ward)三角增加3.75％，及腰椎部位增加2.2％(皆p＜0.05)。骨质密度的该等变化伴随在12个月时尿中羟脯胺酸与血浆骨碱性磷酸酶分别地显著减少38％与22％(皆p＜0.05)。伴随地观察到血浆骨钙化素比对照组增加135％(p＜0.05)，因此显示DHEA对于骨形成作用的刺激效应。
藉由计算机断层摄影测量大腿中段的脂肪与肌肉面积，显示在12个月时股部脂肪减少3.8％(p＜0.05)及股部肌肉面积增加3.5％(p＜0.05)(Diamond等人于1996年乙文)。在腹部脂肪测量方面并无显著的变化。体脂肪与肌肉表面积的该等变化，是伴随着禁食血浆葡萄糖减少12％(p＜0.05)及禁食血浆胰岛素水平减少17％(p＜0.05)。以DHEA进行的治疗对于脂质或脂蛋白廓型并无不良效应。事实上，在总胆固醇及其脂蛋白部分的整体趋势是减少3％至10％。血浆三酸甘油酯不受影响。
在12个月的DHEA疗法之后，皮脂分泌作用的指标增加79％，及在中止治疗3个月后回复至治疗前的数值。对于治疗开始时成熟值为零的10名女性中的8名，DHEA投药作用具有刺激***上皮细胞成熟作用的效应，而在治疗前具有中级***成熟作用的3名女性中亦观察到刺激作用。最重要地，在***所观察到的***刺激效应并未在子宫内膜发现，所有女性的子宫内膜在DHEA治疗12个月之后仍维持完全萎缩性(Labrie等人于1997年乙文c)。
目前的数据清楚地显示，DHEA疗法经由其在特定的胞内分泌标的组织中转换成为雄激素及/或***，在停经后妇女中展现有利效应而无显著的副作用。因DHEA缺乏对于子宫内膜的刺激作用，而消除对于黄体素补充疗法的需求，因此免于黄体素引发乳癌的恐惧。所观察的DHEA对于骨质密度的刺激效应及增加血清中的骨形成作用的一标记即骨钙化素，对于骨质疏松症的预防与治疗特别具有益处及显示DHEA在骨生理学即对于骨形成作用的独特活性，而ERT与HRT只能降低骨质流失速率。
曾提出雄激素在忧郁症、失忆、认知丧失及脑细胞活性方面扮演一角色(Almeida等人于2008年乙文、Azad等人于2003年乙文及Hajszan等人于2008年乙文)。在脑中亦可自DHEA合成的***，已显示在阿滋海默氏(Alzheimer)症、失忆及认知丧失方面扮演一有利角色(Rocca等人于2007年乙文)。三种统合分析已显示在停经后使用***的女性中，阿滋海默氏(Alzheimer)症的风险减少20至40％(Yaffe等人于1998年乙文、Leblanc等人于2001年乙文、Hogovorst等人于2000年乙文)。***减少β-类淀粉蛋白在脑部的淀积作用，而黄体激素具有相反的效应(Xu等人于1998年乙文、Huang等人于2004年乙文)。
实验室数据证实缺乏***与认知障碍或失智症之间的关联性。其中在卵巢切除的大鼠，***增进海马回中的树状突脊上的突触形成作用(Mc Ewen与Alves于1999年乙文、Monk与Brodatz于2000年乙文)。此外，***增进大脑血流与葡萄糖代谢作用，及其可作用为一种抗氧化剂(Mc Ewen与Alves于1999年乙文；Monk与Brodatz于2000年乙文；Gibbs与Aggamal于1998年乙文)。亦已发现***阻止B-类淀粉蛋白1-42引发细胞内钙的上升，及阻止造成粒线体损伤(Chen等人于2006年乙文、Morrison等人于2006年乙文)。
目前有来自临床研究的确实证据显示，***在神经保护作用(Rocca等人于2007年乙文)、心血管疾病(Manson等人于2006年乙文)及总死亡率(Rocca等人于2006年乙文)方面的有利效应存在一临界年龄范围。当以E2进行的治疗是在停经后的早期开始时，可观察到最佳效益；当治疗是在停经后的晚期开始时，则有时无效或具有负面效应(妇女健康关怀(WHI)研究)。***减少β-类淀粉蛋白在脑部的淀积作用，而黄体激素具有相反的效应(Xu等人于1998年乙文、Huan等人于2004年乙文)。
DHEA的效益：类***与雄激素效应的组合
已观察到雄激素对于ZR-75-1的生长展现一种直接的抗增生活性。亦已显示雄激素在大鼠中抑制由DMBA所引发的乳癌的生长，而纯的抗雄激素氟他胺(Flutamide)的同时投药作用将逆转该抑制作用(Dauvois等人于1989年乙文)。综合言之，该等数据显示雄激素受体涉及DHEA对于乳癌的试管内人类乳癌细胞的抑制性作用，及雄激素的该种抑制性效应是辅助抗***的抑制性效应(Poulin与Labrie于1986年乙文；Poulin等人于1988年乙文)。已在裸鼠的ZR-75-1异种移植物上，观察到活体内的类似的抑制性效应(Dauvois等人于1991年乙文)。
我们已显示在雌性大鼠(Luo等人于1997年乙文)与停经后妇女(Labrie等人于1997年乙文c)中，DHEA皆展现对于骨的有利效应。因此，在未切除卵巢的雌性大鼠中，以DHEA进行的治疗增加全骨骼、腰椎及股骨的骨质密度(BMD)(Luo等人于1997年乙文)。
本发明是以我们对于女性性类固醇生理学的了解的新近进展为基础，及认知到女性在停经时，不仅因卵巢的***分泌作用停止而缺乏***，亦已数年来处于雄激素暴露降低的情况。事实上，正常女性所产生的雄激素量是相当于男性所分泌的雄激素的三分之二(Labrie等人于1997年乙文a)。女性的雄激素储备自30岁开始渐进地减少，及平行发生DHEA与DHEA-S的血清浓度的降低(Labrie等人于1997年乙文b)。因而，在近停经期与停经后同时使用雄激素与***的补充疗法似乎是合乎逻辑的，藉此在各细胞与组织中维持该二类别的性类固醇的生理平衡，然而唯有在***组织中藉由自类固醇前驱物DHEA局部形成雄激素与***，方可达成该目标。添加如阿考比芬(Acolbifene)的一种SERM，是增加对于乳癌防护作用以及对于SERM投药作用的其它益处的正面效应。在第8图中，与传统ERT的正面与负面效应进行比较。
先前的数据显示，DHEA疗法经由其在特定的胞内分泌标的组织中转换成为雄激素及/或***，在停经后妇女中展现有利效应而无显著的副作用。事实上，我们在大鼠中所得的数据清楚地证实，DHEA可提供的有利效应是单独使用一种选择性***受体调节物(SERM)时所缺乏者。
阿考比芬(Acolbifene)的有利效应：
在第7图中可见，藉由同时以EM-652HCl治疗，而完全封阻泰莫西芬(Tamoxifen)对于肿瘤生长的约100％的刺激效应。EM-652.HCl依据其纯的抗***活性，并未对于裸鼠中的人类乳癌ZR-75-1异种移植物的生长展现任何刺激效应。
我们已测试类固醇抗***氟维司群(fluvestrant)(法洛德(Faslodex)、ICI 182,780)，及发现其是作用为抗***而非一种SERM，氟维司群(fluvestrant)亦可在本发明中与DHEA组合用于预防乳癌。依据本发明，SERM可依技艺中所知的相同剂量投药，即使该技艺是使用它们作为抗***而非作为SERM。
我们亦已察知在SERM对于血清胆固醇的有利效应与对于骨的有利的***或类***效应之间的相关性。SERM对于高血压、胰岛素抗性、糖尿病及肥胖症(特别是腹部肥胖)亦具有有利的效应。在无意受限于理论的前提下，据信其中多者较佳具有由一或二个碳原子连接的二个芳族环的SERM，预期凭借该受体最能辨识的该分子的前述部分而与***受体交互作用。较佳的SERM具有侧链，其可在***及通常在子宫组织中选择性地引起拮抗性质，而在其它组织中不具有显著的拮抗性质。因此，SERM可适合需要地在***中作用为抗***，同时意外与适合需要地在骨与血液(在其中有利地影响脂质与胆固醇的浓度)中作用为***(或提供类***活性)。对于胆固醇与脂质的有利效应是转换为对抗动脉粥状硬化的有利效应，及已知动脉粥状硬化受到不当的胆固醇与脂质水平的不利影响。
如第9图中所说明，观察到乳腺明显地萎缩，虽然未切除卵巢的动物中的17β-***的循环水平自95.9±32.4皮克/毫升上升至143.5±7.8皮克/毫升(在经每日口服投予0.5毫克/公斤的EM-800治疗达12周的动物中上升50％)。类似地，在第10图中，在领受EM-800(0.5毫克/公斤)的动物中，观察到子宫内膜明显地萎缩。在领受纯的抗***EM-800的该等未切除卵巢的动物中，下视丘-脑下垂体水平的***的抑制性效应被移除，因此造成LH的增加，然后进而造成卵巢的17β-***分泌作用的增加。
热潮红、心血管症状、阿滋海默氏(Alzheimer)症、认知功能丧失及失眠症显然涉及位于中枢神经***的***受体。或许，脑部低水平的***可至少部分解释该等病况。外源***及特别是该等藉由投予性类固醇前驱物所形成者(亦即***)可通过脑障壁，及与***受体结合而回复正常的***作用。另一方面，本发明的SERM及更详细地该等来自阿考比芬(Acolbifene)家族者，无法通过脑障壁，如第8例中所示。因此，它们无法拮抗***在脑中的正面效应，但它们拮抗***在***、子宫与子宫内膜组织中的负面效应，使得该组成物(SERM+性类固醇前驱物)在用于治疗上述病况或减少其罹患风险方面特别具吸引力。
如上述，亦曾提出雄激素在所有该等症状中扮演一角色。事实上，DHEA可依据生理需求而在脑中提供***与雄激素二者。
组合一种性类固醇前驱物与一种SERM或一种抗***的整体附加效益
女性在停经时咨询其医师的主要原因，在于发生热潮红，而热潮红是众所周知可藉由***补充疗法解决的一问题。因造成热潮红的地址是中枢神经***(CNS)及EM-652进入中枢神经***的能力非常差(如所附数据)，预期性类固醇前驱物的投药作用将增加中枢神经***中的***浓度，及因此将控制热潮红而不受SERM的干扰。另一方面，SERM将消除***在其它地址的所有负面效应，特别是乳癌与子宫癌的风险。事实上，在性类固醇前驱物中添加EM-652，将封阻所形成的***对于乳腺与子宫的刺激效应，同时EM-652在其它组织中将展现其本身的有利效应，例如其在骨中部分地逆转卵巢切除作用对于骨质密度的效应。
因我们的数据显示DHEA可减少热潮红、血管舒缩症状及夜汗，我们藉由除去E2而降低乳癌的风险。然而，DHEA可略微地转换成为***，因此需要一种SERM。
当EM-652在预防与治疗乳癌与子宫癌方面应展现明显的有利效应之际，并未观察到其对于任一参数上的不良效应。
在此所论及的较佳的SERM或抗***是有关于：(1)本发明所述的易罹患的所有疾病；(2)治疗性与预防性应用；及(3)较佳的药物组合物与套组。
需要治疗一特定疾病或降低其发生风险之一病患，是业已诊断患有该疾病的一个体，或易罹患该疾病的一个体。
除非另外说明的，本发明的活性化合物用于治疗性与预防性目的的较佳剂量(浓度与投药模式)是相同的。不论所治疗的疾病为何(或降低其发生可能性的疾病为何)，在此所论及各活性组分的剂量是相同的。
除非当另外说明或自上下文中明显可见时，剂量在此是指未受药学赋形剂、稀释剂、载剂或其它成分影响的活性化合物的重量，虽然如此处实例中所示而适合需要地包括该等附加成分。常用于制药产业的任一剂型(胶囊剂、丸剂、锭剂、注射液剂等)皆适用于此，及“赋形剂”、“稀释剂”或“载剂”等词是包括典型与活性成分一起包括在业界的该等剂型中的该等非活性成分。例如，可包括典型的胶囊剂、丸剂、肠溶膜衣、固体或液体稀释剂或赋形剂、矫味剂、防腐剂等。
用于在此所论及的任一疗法中的所有活性成分，可配制在亦包括一或多种其它活性成分的药物组合物中。任择地，它们的投药作用可各自分开但在时间上充分同时，藉此一病患最终具有上升的血中水平或在其它情况下同时享有各活性成分(或策略)的效益。例如在本发明的一些较佳实施例中，是将一或多种活性成分配制成单一的药物组合物。在本发明的其它实施例中，提供包括至少二个分开的容器的一套组，其中就其中所含有的活性成分而言，至少一个容器的内容物是与至少一个其它容器的内容物完全或部分不同。
在此所论及的合并疗法亦包括在用于治疗所论及的疾病(或降低风险)的一药剂的制造中使用(该组合物的)一活性成分，其中该治疗或预防作用进一步包括如本发明的组合物的另一活性成分。例如在一实施例中，本发明提供一种SERM在制备一药剂的用途，该药剂是与一种性类固醇前驱物组合用于活体内治疗本发明的合并疗法据信具有效用的任一疾病(亦即热潮红、盗汗、月经不规则及与停经相关的任一症状)。
众所周知***刺激***上皮细胞的增生作用，及细胞增生作用本身被认为藉由累积可能造成赘瘤的随机基因错误而增加癌症风险(Preston Martin等人于1990年乙文)。基于该概念，已将抗***引入用于预防乳癌，其目标是降低***所刺激的细胞***速率。
我们亦已藉由新颖的抗***(EM-800)与性类固醇前驱物(DHEA)的合并投药作用，而研究该二药物对于裸鼠中的人类ZR-75-1乳癌异种移植物生长的抑制性效应的潜在交互作用。第3与4图显示DHEA本身在所用剂量引起50至80％的肿瘤生长抑制作用，而低剂量的抗***所达成的几近完全的肿瘤生长抑制作用并未受到DHEA的影响。
骨质密度(BMD)测量的限制是众所周知的。举例而言，在经类固醇抗***ICI 182780治疗的大鼠中，BMD测量显示并无变化(Wakeling于1993年乙文)，而藉由组织型态测量法却观察到抑制性变化(Gallagher等人于1993年乙文)。在泰莫西芬(Tamoxifen)亦报导过类似的差异(Jordan等人于1987年乙文；Sibonga等人于1996年乙文)。
应指出骨质密度降低并非唯一与骨强度降低相关联的异常。因此重要之处在于分析各种化合物与疗法所引发的骨代谢作用的生化参数变化，以更加了解它们的作用。
特别重要之处在于指出DHEA与EM-800的组合物展现对于骨代谢作用的重要生化参数的意外的有利效应。事实上，DHEA本身并不影响尿中羟脯胺酸/肌酐的比例，其是骨质吸收作用的一标记。此外，无法侦测到DHEA对于每日尿中钙或磷排出作用的效应(Luo等人于1997年乙文)。EM-800使尿中羟脯胺酸/肌酐比例减少48％，及类似于DHEA，未观察到EM-800对于尿中钙或磷排出作用的效应。此外，EM-800对于骨形成作用的一标记即血清碱性磷酸酶活性并无效应，而DHEA使该参数的数值增加约75％(Luo等人于1997年乙文)。
DHEA与EM-800的组合物的意外效应的一，是与骨质吸收作用的一标记即尿中羟脯胺酸/肌酐比例有关，当合并DHEA与EM-800二者时其降低69％，该数值与单独投予EM-800所达到的48％抑制作用是统计上不同(p＜0.01)，而DHEA本身未显示任何效应。因此，在EM-800中添加DHEA，使EM-800对于骨再吸收作用的抑制性效应增加50％。最重要地，在EM-800中添加DHEA的另一意外效应，是分别使尿中钙减少约84％(自23.17±1.55至3.71±0.75微莫耳/24小时/100克(p＜0.01)及尿中磷减少55％(自132.72±6.08至59.06±4.76微莫耳/24小时/100克(p＜0.01)(Luo等人于1997年乙文)。
重要地，在切除卵巢的大鼠中，经EM-800与DHEA的组合物治疗12个月对于骨的形态量度具有有利效应。骨小梁体积对于骨强度及预防骨折而言特别重要。因此，在上述研究中，在切除卵巢的大鼠中，单独投予DHEA的胫骨的骨小梁体积自4.1±0.7％增加至11.9±0.6％(p＜0.01)，而在DHEA中添加EM-800使骨小梁体积进一步增加至14.7±1.4％，该数值是与未切除卵巢的对照组中所见者类似(第15图)。
相较于切除卵巢的对照组而言，以DHEA进行的治疗造成骨小梁数量自切除卵巢的大鼠中的每毫米0.57±0.08的数值增加137％。DHEA的刺激效应因而达到每毫米1.27±0.1；而同时以EM800与DHEA进行的治疗造成骨小梁数量额外地增加28％(p＜0.01)，相较于单独投予DHEA所达成者(第16图)。类似地，在DHEA疗法中添加EM-800，造成骨小梁间距额外地减少15％(p＜0.05)，相较于单独投予DHEA所达成者，因此所得数值并非不同于该等在未切除卵巢对照组中所见者。
如补充第15、16图及第17图中所呈现的数值数据的说明显示，相较于切除卵巢的对照组而言(B)，在经治疗的切除卵巢动物(C)中由DHEA所引发的近端胫骨干骺端的骨小梁体积的增加，以及在DHEA疗法中添加氟他胺(Flutamide)(D)之后对于DHEA的刺激效应的部分抑制作用。另一方面，DHEA组合EM-800的投药作用完全地阻止因卵巢切除所引发的骨量减少(E)，而骨小梁体积可与未切除卵巢的对照组(A)中所见者相比。
第1表
Figure BPA00001481534000451
第2表
以单独投予去氢表雄固酮(DHEA)或组合氟他胺(Flutamide)(FLU)或EM-800治疗12个月对于骨标记与血清脂质的效应
Figure BPA00001481534000461
*为相对于OVX对照组的p＜0.05；**为p＜0.01。
雄激素组分在DHEA对于骨组织型态测量的刺激效应的重要性，亦获得DHEA对于骨形成与吸收作用标记的效应的证实。骨形成作用的一标记即血清碱性磷酸酶浓度(Meunier等人于1987年乙文、Lauffenburger等人于1977年乙文)，自OVX对照组中的51±4国际单位/公升增加至经DHEA治疗的动物中的201±25国际单位/公升，显示DHEA对于骨形成作用的刺激效应(第2表)。FLU逆转DHEA对于该参数的刺激效应达65％，而EM-800并无显著的效应。另一方面，因胶原降解作用期间所释出的羟脯胺酸并未在胶原合成作用中予以再利用，其是胶原代谢作用或蚀骨性骨质吸收作用的适用标记。在本研究中，尿中羟脯胺酸/肌酐比例自OVX对照组中的11.7±1.2微莫耳/毫莫耳减少至经DHEA治疗的大鼠中的7.3±1.0微莫耳/毫莫耳(p＜0.05)(第2表)。FLU的投药作用完全地阻止DHEA对于该参数的抑制性效应，而EM-800对于DHEA的效应并无统计上显著的影响。
此外，藉由DHEA的治疗将血清胆固醇自2.29±0.16降至1.78±0.16毫莫耳/公升(p＜0.05)而降低22％，而纯的抗雄激素FLU的相伴治疗将该效应中和。另一方面，纯的抗***EM-800的添加作用，将总血清胆固醇进一步降至0.63±0.09毫莫耳/公升(p＜0.01)，因此达到65％的抑制性效应。所用的任一治疗皆未在血清三酸甘油酯水平观察到统计上显著的变化(第2表)。
有利地亦察知，以DHEA同时进行的治疗并未阻止EM-800对于血清胆固醇的强力的抑制性效应(Luo等人于1997年乙文)。
在女性停经时所观察到的骨质流失，据信是与骨质吸收速率的增加无法藉由骨形成作用中的次级增加而完全地补偿相关。事实上，在骨质疏松症中，骨形成作用与骨质吸收作用二者的参数皆增加，及骨质吸收作用与形成作用皆受到***补充疗法的抑制。因此相信***补充作用对于骨形成作用的抑制性效应，是得自骨质吸收作用与骨形成作用之间的偶合机制，藉此***所引发的初始的骨质吸收作用减少，其导致骨形成作用的减少(Parfitt于1984年乙文)。
海绵质骨的强度与后续的骨折抗力并非单依海绵质骨的总量而定，亦依如藉由小梁数量、尺寸及分布所决定的小梁微结构而定。停经后妇女的卵巢功能丧失，是伴随发生骨小梁总体积的显著减少(Melsen等人于1978年乙文；Vakamatsou等人于1985年乙文)，其主要与数量的减少有关，及较次要地与小梁宽度的减少有关(Weinstein与Hutson于1987年乙文)。
为有助于本发明的合并疗法方面，就在此所论及的任一适应症而言，本发明考虑在单一组成物中包括SERM与性类固醇前驱物以供同时投药的药物组合物。该组成物可适用于任一习用的投药方式，包括但不限于口服投药、皮下注射、肌内注射或经皮投药。在其它实施例中提供一套组，其中该套组包括置于分开的容器或置于一容器中的一或多种SERM与性类固醇前驱物。该套组可包括用于口服投药的适当物质如锭剂、胶囊剂、糖浆剂等，及用于经皮投药的适当物质如软膏剂、洗剂、凝胶剂、乳膏剂、持续释出型贴剂等。
本案申请者相信SERM或抗***与性类固醇前驱物的投药作用在治疗热潮红与盗汗及/或减少其发生方面具有效用。本发明的活性成分(SERM、抗***或前驱物或其它者)可以多种方式配制与投药。当如本发明一起投药时，该等活性成分可同时或分开投药。
用于经皮或经黏膜投药的活性成分较佳为自0.01％至1％的DHEA或5-二醇。任择地，可将活性成分置入具有技艺中所知构造例如诸如第0279982号欧洲专利中所说明的该等构造的一种***环或一种经皮贴剂中，或置入一种***内乳膏剂、凝胶剂、***栓剂或栓剂。
当配制成为一种软膏剂、洗剂、凝胶剂、乳膏剂、***栓剂或栓剂等时，该活性化合物是与一种适宜的载剂掺合，该载剂与人类皮肤或黏膜相容及增进化合物通过皮肤或黏膜的经皮或经黏膜渗透作用。适宜的载剂是技艺中所知，及包括但不限于克鲁塞尔(Klucel)HF与葛拉萨(Glaxal)基质。部分可以商品取得，如可自加拿大葛拉萨有限公司(Glaxal Canada Limited Company)取得葛拉萨(Glaxal)基质。其它适宜的载剂可见Koller与Buri于1987年期刊“S.T.P.Pharma”第3(2)期第115-124页乙文。该载剂较佳为活性成分在环境温度与在活性成分的使用浓度可溶于其中的载剂。该载剂所具有的黏度，应足以将抑制剂维持在该组成物所施用的皮肤或黏膜的一局部区域，在一时间周期内不至于流动或蒸发，而该时间周期是足以容许前驱物实质渗透通过皮肤或黏膜的局部区域及进入血流及在该处产生一种适合需要的临床效应。该载剂典型地为数种组分如药学上可接受的溶剂与一种增稠剂的混合物。有机与无机溶剂的混合物如水与一种醇诸如乙醇，能有助于亲水性与亲脂性溶解度。
当配制成一种卵形栓剂或一种***栓剂等时，该活性化合物是与具人类***黏膜兼容性的一种适宜载剂掺合。较佳的载剂为硬脂(饱和脂肪酸的甘油酯类的混合物)，特别是威特普索(Witepsol)，及尤其是威特普索(Witepsol)H-15基质(可自加拿大蒙特娄的米迪斯卡(Medisca)公司取得)。可使用其它任何的亲脂性基质，诸如费堤贝斯(Fattibase)、威可比(Wecobee)、可可脂、可可油或威特普索(Witepsol)基质的其它组合物。
较佳的性类固醇前驱物是去氢表雄固酮(DHEA)(例如可自墨西哥韦拉克鲁斯州(Veracruz)奥里萨巴(Orizaba)的普洛昆纳(Proquina)公司取得)。
载剂亦可包括常用于软膏剂、洗剂与栓剂中及化妆品与医药技艺中所熟知的各种添加剂。例如可存在香料、抗氧化剂、香水、胶凝剂、增稠剂诸如羧甲基纤维素、表面活性剂、安定剂、柔软剂、着色剂及其它类似药剂。
如本发明的治疗是适于无限地持续。SERM或抗***化合物及性类固醇前驱物亦可藉由口服途径投药，及可与习用的药学赋形剂如喷雾干燥型乳糖、微晶纤维素及硬脂酸镁配制成为口服用锭剂或胶囊剂。
可藉由与固态、粉状载剂物质诸如柠檬酸钠、碳酸钙或磷酸二钙及黏合剂诸如聚乙烯吡咯啶酮、明胶或纤维素衍生物混合，亦可藉由添加润滑剂诸如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠、“卡波蜡(Carbowax)”或聚乙二醇，而将活性物质制成锭剂或糖衣锭核心。当然，在口服投药形式的情况下，可添加改善味道的物质。
就其它形式而言，可使用如硬质明胶材质的栓塞型胶囊剂，以及包含一种软化剂或塑化剂如甘油的封闭式软质明胶胶囊剂。栓塞型胶囊剂所含有的较佳为粒状形式的活性物质，是例如与填料诸如乳糖、蔗糖、甘露糖醇、淀粉诸如马铃薯淀粉或支链型淀粉、纤维素衍生物或高度分散型硅酸混合。在软质明胶胶囊剂中，活性物质较佳溶解或悬浮于适宜的液体诸如植物油或液态聚乙二醇中。
应将洗剂、软膏剂、凝胶剂或乳膏剂彻底地涂擦入皮肤中，藉此不会清楚见到剩余量，及不应清洗该区域的皮肤，直至大部分的经皮渗透作用已发生较佳至少4小时及更佳至少6小时。
经皮贴剂可用于依据已知技术输送前驱物。其典型地施用一段较长的时间如1至4天，但典型地让活性成分所接触的表面积较小，以容许缓慢与恒定的活性成分输送作用。
已发展出及目前使用中的数种经皮的药物输送***，是适用于输送本发明的活性成分。典型地藉由一种基质扩散作用或藉由让活性成分通过一种控制膜，而控制释出速率。
经皮装置的机械方面是技艺中所熟知，及例如说明于第5,162,037号、第5,154,922号、第5,135,480号、第4,666,441号、第4,624,665号、第3,742,951号、第3,797,444号、第4,568,343号、第5,064,654号、第5,071,644号、第5,071,657号美国专利，其揭露内容在此并入本案以为参考数据。第0279982号欧洲专利与第2185187号英国专利申请案提供附加的背景说明。
该装置可为技艺中所知的任一通用类型，包括黏着性基质与储器类型的经皮输送装置。该装置可包括其中纳入吸收活性成分的纤维及/或载剂的含有药物的基质。在储器类型的装置中，该储器可由载剂与活性成分无法渗透的一种聚合物膜所界定。
在经皮装置中，该装置本身维持活性成分与所欲的局部皮肤表面接触的状态。在该种装置中，用于活性成分的载剂黏度所受到的关注程度，不如在一种乳膏剂或凝胶剂的情况。用于经皮装置的溶剂***可包括例如油酸、直链醇乳酸酯及二丙二醇，或技艺中所知的其它溶剂***。活性成分可溶解或悬浮于载剂中。
为黏着至皮肤，经皮贴剂可固定在中间打有一孔的一种手术用胶带上。胶带较佳由一个离形膜覆盖，以提供使用前的保护作用。适用于离形的典型材质包括聚乙烯与经聚乙烯涂覆的纸，及较佳经硅氧烷涂覆以方便移除。在施用该装置时，简单地将离形膜撕除及将胶带黏至病患的皮肤上。在第5,135,480号美国专利中，其揭露内容在此并入本案以为参考数据，Bannon等人述及一种替代装置，其具有将该装置固定于皮肤的非黏着性构件。
仅需以足以容许各者的血清浓度达到所欲水平的一方式与一剂量，投予SERM、抗***与性类固醇前驱物。依据本发明的合并疗法，在性类固醇前驱物的浓度维持在所欲参数内的同时，SERM的浓度亦维持在所欲参数内。
一种较佳的性类固醇前驱物为DHEA，虽然就下列所述的原因而言，DHEA-S与后述的类似物亦为特别有效的。
本发明的一种选择性***受体调节物所具有的分子式具下列特点：a)由1至2个居间的碳原子隔开的二个芳族环，该二芳族环是未经取代或经一羟基或在活体内转化为羟基的一基取代；及b)具有一芳族环与一种三级胺官能度或其盐类的一侧链。
本发明的较佳的SERM是阿考比芬(Acolbifene)：
阿考比芬(Acolbifene)(亦称作EM-652.HCl；EM-1538)是强力的抗***EM-652的盐酸盐。其是揭露于第6,710,059B1号美国专利。另一种较佳的SERM为拉索昔芬(Lasoxifene)(欧波利亚(Oporia)；CP-336,156；(-)-顺式-(5R，6S)-6-苯基-5-[4-(2-吡咯啶-1-基乙氧基)苯基]-5，6，7，8-四氢萘-2-酚，D-(-)-酒石酸盐)(可自美国辉瑞(Pfizer)有限公司取得)。
另一种较佳的SERM是惠氏(Wyeth Ayers)公司(美国)所研发及揭露于第10036347号日本专利(美国家庭用品公司(American home products corporation))及在美国经核准用于预防停经后骨质疏松症的巴多昔芬(Bazedoxifene)(TSE424；WAY-TSE 424；WAY 140424；1-[[4-[2-(六氢-1H-氮杂卓-1-基)乙氧基]苯基]甲基]-2-(4-羟苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚，乙酸盐)，及WO 97/32837中所述的非类固醇***衍生物。本发明的其它较佳的SERM包括泰莫西芬(Tamoxifen)((Z)-2-[4-(1，2-二苯基-1-丁烯基)苯氧基]-N，N-二甲基乙胺)(可自英国捷利康(Zeneca)公司取得)、托瑞米芬(Toremifene)((Z)-2-[4-(4-氯-1，2-二苯基-1-丁烯基)苯氧基]-N，N-二甲基乙胺)可自芬兰奥利安(Orion)公司的弗瑞斯(Fareston)或先灵葆雅(Schering-Plough)商标下取得)、屈洛昔芬(Droloxifene)((E)-3-[1-[4-[2-(二甲基胺基)乙氧基]苯基]-2-苯基-1-丁烯基]苯酚)及自美国艾里莉丽(Eli Lilly)公司取得的雷洛昔芬(Raloxifene)([2-(4-羟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-甲酮盐酸盐)、LY335124、LY 326315、.LY 335563(6-羟基-3-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-羟苯基)苯并[b]噻吩盐酸盐)及阿佐昔芬(Arzoxifene)(LY353381，6-羟基-3-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯氧基]-2-(4-甲氧基苯基)苯并[b]噻吩盐酸盐)。其它较佳的SERM为艾多昔芬(Idoxifene)((E)-1-[2-[4-[1-(4-碘苯基)-2-苯基-1-丁烯基]苯氧基]乙基]吡咯啶)(美国史克必成(Smith Kline Beecham)公司)；左美洛昔芬(Levormeloxifene)(3，4-反式-2，2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯啶-1-基)乙氧基)苯基]-7-甲氧基)(3，4-trans-2，2-dimethyl-3-phenyl-4-[4-2-(2-(pyrrolidin-1-yl)ethoxy)phenyl]-7-methoxychroman)(丹麦诺和诺德(Novo Nordisk，A/S)公司)及其是揭露于Shalmi等人的WO 97/25034、WO 97/25035、WO 97/25037、WO 97/25038及Korsgaard等人的WO 97/25036；GW5638(述于Willson等人于1997年乙文)及吲哚衍生物(由Miller等人揭露于第0802183A1号欧洲专利)。亦包括来自大宝(Taiho)公司(日本)的易泼昔芬(Iproxifene)(TAT59；(E)-4-[1-[4-[2-(二甲基胺基)乙氧基]苯基]-2-[4-(1-甲基乙基)苯基]-1-丁烯基]苯酚磷酸二氢盐)、可自芬兰奥利安-伐莫斯制药(Orion-Farmos Pharmaceutica)公司取得的奥培米芬(Ospemifene)(FC1271；((Z)-2-[4-(4-氯-1，2-二苯基-1-丁烯基)苯氧基]乙醇)、SERM 3471、来自赛诺菲安万特(Sanofi-Aventis)公司(法国)的HMR 3339与HMR 3656、来自德国先灵(Schering AG)公司的SH646、惠氏(Wyeth Ayers)公司所研发的哌喷昔芬(Pipendoxifene)(ERA 923)、WO97/3283中所述的非类固醇***衍生物、由QuatRx公司(美国)所研发的非培米芬(Fispemifene)及由美国塞尔基因(Celgene)公司所研发的CC 8490。
可使用如功效所需、如制造商所建议使用的任一SERM。适当剂量是技艺中所知者。如本发明可使用能以商品取得的其它任一非类固醇抗***。可使用具有类似于SERM的活性的任一化合物(实例：雷洛昔芬(Raloxifene))。
如本发明所投予的SERM，当以口服方式投药时，较佳以每日0.01至10毫克/公斤体重(较佳为0.05至1.0毫克/公斤)之间的剂量范围投药，对于具正常体重的个体而言较佳以二个均分的剂量每日投予5毫克，特别是每日10毫克；或当以非经肠方式投药(亦即肌内、皮下或经皮投药)时，较佳以每日0.003至3.0毫克/公斤体重(较佳0.015至0.3毫克/毫升)之间的剂量范围投药，对于具正常体重的个体而言较佳以二个均分的剂量每日投予1.5毫克，特别是3.0毫克。SERM较佳与如后述的药学上可接受的稀释剂或载剂一起投药。
本发明的较佳的抗***为氟维司群(fulvestrant)(法洛德(Faslodex)；ICI 182 7807；α-[9-(4，4，5，5，5-五氟-戊基亚磺酰基)壬基]雌甾-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二醇)，其是以每月250毫克的剂量以肌内方式投药，及可自加拿大安大略省(Ontario)米希索加(Mississauga)的加拿大阿斯特拉捷利康(AstraZeneca Canada Inc.)有限公司取得。
就在此建议的所有剂量而言，临床主治医师应监督个别病患的反应及相应地调整剂量。
实例
第1例
在乳腺中，雄激素是自类固醇前驱物去氢表雄固酮(DHEA)形成。临床证据显示，雄激素对于乳癌具有抑制性效应。另一方面，***刺激乳癌的发育与生长。我们研究单独投予DHEA或组合前述的纯抗***EM-800对于切除卵巢的裸鼠中藉由人类乳癌细胞是ZR-75-1所形成的肿瘤异种移植物的生长的效应。
小鼠在卵巢切除之后，紧接着以皮下注射方式领受每日0.5微克的雌甾酮(一种***荷尔蒙)。每日以口服方式投予EM-800(15、50或100微克)一次。每日二次在背侧皮肤单独施用DHEA(总剂量0.3、1.0或3.0毫克)或组合每日15微克的EM-800口服剂量。相对于在第1天所进行的测量，定期评估针对治疗反应的肿瘤尺寸变化。在实验结束时，摘除肿瘤及加以称重。
相较于未领受雌甾酮的小鼠，在仅领受雌甾酮的切除卵巢的小鼠中观察到肿瘤尺寸在9.5个月中增加9.4倍。在增补雌甾酮的切除卵巢组中投予15、50或100微克的EM-800，分别导致88％、93％及94％的肿瘤尺寸抑制作用。另一方面，0.3、1.0或3.0毫克剂量的DHEA对于最终肿瘤重量的抑制作用分别为67％、82％及85％。以具有或不具有经皮投予的不同DHEA剂量的每日15微克的EM-800口服剂量，在肿瘤尺寸方面获得可相比的抑制作用。DHEA与EM-800独立地抑制裸鼠中的经雌甾酮刺激的ZR-75-1小鼠异种移植肿瘤的生长。所界定剂量的DHEA投药作用并未改变EM-800的抑制性效应。
材料与方法
ZR-75-1细胞
自美国菌种保存中心(American Type CultureCollection)(美国马里兰州洛克维尔(Rockville))取得ZR-75-1人类乳癌细胞，及如所述(Poulin与Labrie于1986年乙文；Poulin等人于1988年乙文)在95％空气/5％二氧化碳的37℃加湿气体环境下，在增补2mM L-麸酰胺酸、1mM丙酮酸钠、100国际单位的盘尼西林/毫升、100微克的链霉素/毫升及10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中，例行地进行单层培养。每周在以0.05％胰蛋白酶：0.02％EDTA(重量/体积)处理之后，进行细胞继代培养。用于本报导所述实验中的细胞培养，是衍生自第93代的ZR-75-1细胞系。
动物
自HSD(美国印第安纳州印地安那波里斯(Indianapolis))取得雌性同型接合的哈兰(Harlan)史普瑞格-道利(Sprague-Dawley)(nu/nu)无胸腺小鼠(28至42天大)。将小鼠饲养于置于层流式气流通风橱中的具有空气滤清器顶部的乙烯树酯笼中，及维持在限制病原体的条件下。笼、衬垫及食物在使用前先经过高压蒸气灭菌。水是经高压蒸气灭菌，酸化至pH 2.8，及供随意取用。
细胞接种
在藉由腹膜内注射0.25毫升/动物的阿佛丁(Avertin)(戊醇：0.8克/100毫升的0.9％氯化钠；及三溴乙醇：2克/100毫升的0.9％氯化钠)所达到的麻醉状态下接种肿瘤细胞的一周之前，切除小鼠的双侧卵巢(OVX)。在以0.05％胰蛋白酶/0.02％EDTA(重量/体积)处理单层之后，采收1.5x106个处于对数生长期的ZR-75-1细胞及悬浮于含有25％基质胶(Matrigel)的0.1毫升培养基，及如先前所述(Dauvois等人于1991年乙文)使用一个1英时长的20号注射针，以皮下方式接种在动物的二侧腹胁肉。为促进肿瘤的生长，各动物每日皮下注射位于由0.9％氯化钠、5％乙醇、1％明胶所组成的载剂中的10微克***(E2)共5周。在出现可触知的ZR-75-1肿瘤之后，以卡尺测量肿瘤直径，及选择肿瘤直径介于0.2与0.7公分之间的小鼠用于本研究中。
荷尔蒙治疗
除了OVX对照组的动物之外，所有动物每日皮下注射位于0.2毫升的0.9％氯化钠、5％乙醇、1％明胶中的0.5微克雌甾酮(E1)。在所示的组别中，每日以经皮方式投予0.3、1.0或3.0毫克/动物的DHEA剂量二次，其是以0.02毫升的体积施用在肿瘤生长区域外的背侧皮肤区域。将DHEA溶于50％乙醇-50％丙二醇中。如先前所述(Gauthier等人于1997年期刊“J.Med.Chem.”第40期第2117-2122页乙文)，在CHUL研究中心的分子内分泌学实验室的医学化学部门，合成EM-800((+)-7-三甲基乙酰氧基-3-(4’-三甲基乙酰氧基苯基)-4-甲基-2-(4”-(2”’-N-哌啶基乙氧基)苯基)-2H-苯并哌喃)。将EM-800溶于4％(体积/体积)乙醇、4％(体积/体积)聚乙二醇(PEG)600、1％(重量/体积)明胶、0.9％(重量/体积)氯化钠中。所示组别中的动物每日单独领受15微克、50微克或100微克的EM-800口服剂量或组合DHEA，而OVX组的动物仅领受载剂(0.2毫升的4％乙醇、4％PEG 600、1％明胶、0.9％氯化钠)。每周以游标卡尺测量肿瘤一次。以公分为单位记录二个垂直直径(L与W)，及使用公式L/2xW/2xπ(Dauvois等人于1991年乙文)计算肿瘤面积(平方公分)。以治疗第1天所测得的面积为100％，而肿瘤尺寸变化是以初始肿瘤面积的百分比表示。在一般的皮下肿瘤的情况下，不可能正确地获取肿瘤的三维体积，因此仅测量肿瘤面积。在治疗291天(或9.5个月)之后，牺牲该等动物。
如所述(Dauvois等人于1989年乙文a；Dauvois等人于1989年乙文b；Labrie等人于1995年乙文b)，评估反应类别。简言之，部分消退是对应于肿瘤消退程度等于或大于它们原有尺寸的50％；稳定反应是指肿瘤消退程度低于原有尺寸的50％或恶化程度低于它们原有尺寸的50％，而完全消退是指该等肿瘤在治疗结束时无法侦测到。相较于它们原有尺寸而言，恶化是指肿瘤恶化超过50％。在实验结束时，藉由断头方式杀死所有动物。立即摘除肿瘤、子宫及***，除去结缔与脂肪组织，及加以称重。
统计分析
使用评估归因于DHEA、EM-800及时间的效应的变异数分析(ANOVA)，评估治疗对于肿瘤尺寸的效应的统计显著性，及在治疗开始与治疗结束时在相同动物中进行重复测量(组别内的个体因子)。在0时及在治疗9.5个月后的重复测量，构成动物的随机区集。因此时间是当作为一个区集内效应而分析，而该二种治疗是当作为区集间效应而分析。主要效应之间的所有交互作用皆包括在该模式中。使用组内个体作为误差项，分析治疗因子与它们的交互作用的显著性。进行数据的对数转换。作为ANOVA基础的假设，是假定残差的常态性及变异数的均齐性。
使用用于最小显著差异的费雪(Fisher)检定，进行事后成对比较。使用具交互作用的标准双向ANOVA，分析治疗对于体重与器官重量的主要效应与交互作用。使用SAS程序进行所有ANOVA(美国北卡罗莱纳州喀里(Cary)的赛仕计算机软件(SAS Institute)公司)。使用整体水平为5％的双尾检定，说明差异的显著性。以用于等级类别反应变量(完全型反应、部分型反应、稳定型反应及肿瘤的恶化)的克鲁斯卡尔-瓦利斯(Kruskall-Wallis)检定，分析类别数据。在整体评估一治疗效应之后，调整用于多重比较的临界p值，分析第4表所示结果的子集。使用StatXact程序(美国麻州剑桥(Cambridge)的西图(Cytel)公司)计算确切的p值。数据是以各组中的12至15只小鼠的平均值±平均值的标准差(SEM)表示。
结果
如第3A图中所说明，在每日经皮下方式投予的0.5微克雌甾酮剂量治疗的切除卵巢的裸鼠中，人类ZR-75-1肿瘤在291天(9.5个月)增加9.4倍；而在仅领受载剂的对照组OVX小鼠中，肿瘤尺寸在研究期间减少为初始数值的36.9％。
以经皮投予的递增剂量的DHEA治疗，对于经E1刺激的ZR-75-1肿瘤生长造成渐进性的抑制作用。在9.5个月的治疗期间，以各动物每日0.3毫克、1.0毫克及3.0毫克的DHEA剂量，分别达到50.4％、76.8％及80.0％的抑制作用(第3A图)。与总肿瘤负荷的降低一致，以DHEA进行的治疗导致在实验结束时所留存肿瘤的平均重量的明显减少。事实上，平均肿瘤重量是自增补E1的切除卵巢的对照组裸鼠中的1.12±0.26克，分别减少为每日领受0.3、1.0及3.0毫克的DHEA剂量的动物组别中的0.37±0.12克(P＝.005)、0.20±0.06克(P＝.001)及0.17±0.06克(P＝.0009)(第3B图)。
当与对照组动物在9.5个月时的肿瘤尺寸相比较，每日15微克、50微克及100微克的抗***EM-800剂量，对于经***刺激的肿瘤尺寸的抑制作用分别为87.5％(P＜.0001)、93.5％(P＜.0001)及94.0％(P＝.0003)(第4A图)。以三种EM-800剂量所减少的肿瘤尺寸，在彼此之间并非显著不同。如第3B图中所说明，在9.5个月的研究结束时的肿瘤重量，是自对照组的增补E1的OVX小鼠的1.12±0.26克，分别减少为每日经15微克、50微克及100微克的EM-800剂量治疗的动物中的0.08±0.03克、0.03±0.01克及0.04±0.03克，(在所有的EM-800剂量相对于增补E1的OVX的p＜.0001)。
如上述，每日口服剂量为15微克的抗***EM-800，在9.5个月时所测量的对于经雌甾酮刺激的肿瘤生长的抑制作用为87.5％。在所用的三种剂量中添加DHEA，对于以每日15微克的抗***EM-800剂量所达到的业已明显的肿瘤尺寸抑制作用，并无显著的效应(第4B图)。因此，平均肿瘤重量自增补雌甾酮的对照组小鼠中的1.12±0.26克，分别惊人地减少至单独领受每日15微克的抗***剂量或组合0.3、1.0及3.0毫克的DHEA剂量的动物中的0.08±0.03克(P＜.0001)、0.11±0.04克(P＝.0002)、0.13±0.07克(P＝.0004)及0.08±0.05克(P＜.0001)(在该4组之间并未察知显著的差异)(第3B图)。
亦感兴趣之处是检视以上述治疗所达成的反应类别。因此，虽然未达统计显著性的水平(P＝.088)，递增剂量的DHEA治疗将恶化肿瘤数目自增补雌甾酮的OVX对照组动物中的87.5％，减少至以每日0.3、1.0或3.0毫克的DHEA剂量治疗的动物中的50.0％、53.3％及66.7％的数值(第3表)。另一方面，完全型反应是自增补雌甾酮的小鼠中的0％，增加至每日经皮领受0.3、1.0及3.0毫克的DHEA剂量的动物中的28.6％、26.7％及20.0％。另一方面，在增补E1的对照组小鼠与在领受上述DHEA剂量的三组动物中，所测得的稳定型反应分别为12.5％、21.4％、20.0％及13.3％。在切除卵巢的对照组小鼠中，所测得的完全、部分及稳定型反应的比率分别为68.8％、6.2％及18.8％，而仅在6.2％的肿瘤中观察到恶化现象(第3表)。
在单独领受抗***EM-800(P＝.0006)(15微克)或组合0.3毫克、1.0毫克或3.0毫克的DHEA的动物中，所得的完全型反应或肿瘤消失是分别为29.4％、33.3％、26.7％及35.3％。另一方面，在相同的动物组别中，分别在35.3％、44.4％、53.3％及17.6％的肿瘤中观察到恶化现象。在单独以EM-800或组合DHEA治疗的组别之间，并无显著的差异。
在就肿瘤重量调整过的体重上，并未观察到DHEA或EM-800治疗的显著效应。以雌甾酮治疗OVX小鼠，使得子宫重量自OVX对照组小鼠中的28±5毫克增加至132±8毫克(P＜.01)，而递增剂量的DHEA对于雌甾酮的刺激效应引起渐进但相对小的抑制作用，其在所用的DHEA最高剂量达到26％(P＝.0008)。在同一图中可见，经雌甾酮刺激的子宫重量是自增补雌甾酮的对照组小鼠中的132±8毫克，分别减少至每日15微克、50微克或100微克的EM-800口服剂量(整体p＜.0001)的49±3毫克、36±2毫克及32±1毫克(所有剂量相对于对照组的p＜.0001)。在15微克EM-800组合每日0.3毫克、1.0毫克或3.0毫克的DHEA剂量所测得的子宫重量分别为46±3毫克、59±5毫克及69±3毫克。
另一方面，雌甾酮的治疗使***重量自OVX动物中的14±2毫克增加至31±2毫克(P＜.01)，而添加DHEA并无显著的效应。在以每日15微克、50微克或100微克的EM-800剂量治疗之后，***重量分别降至23±1毫克、15±1毫克及11±1毫克(所有剂量相对于对照组的整体p与成对P皆＜.0001)。组合0.3毫克、1.0毫克或3.0毫克的DHEA剂量及EM-800剂量所测得的***重量分别为22±1毫克、25±2毫克及23±1毫克(所有组别相对于15微克的EM-800皆不显著)。应提及EM-800在所用的最高剂量即每日100微克，将增补雌甾酮的OVX动物中的子宫重量降至与OVX对照组并非不同的一数值，而***重量是降至低于OVX对照组所测得的一数值(P＜.05)。DHEA可能因为其雄激素效应，而部分地抵消EM-800对于子宫与***重量的效应。
第3表
9.5个月的单独或组合的DHEA经皮投药作用或EM-800口服投药作用对于裸鼠中的人类ZR-75-1***肿瘤异种移植物的反应(完全型、部分型、稳定型及恶化)的效应
Figure BPA00001481534000641
E1＝雌甾酮；DHEA＝去氢表雄固酮；OVX＝切除卵巢
第2例
本发明的较佳化合物的合成作用实例
(S)-(+)-7-羟基-3-(4’-羟苯基)-4-甲基-2-(4”-(2”’-N-哌啶基乙氧基)苯基)-2H-1-苯并哌喃盐酸盐EM-01538的合成作用(EM-652，盐酸盐)
流程图1
Figure BPA00001481534000651
步骤A：BF3 ·Et2O、甲苯；100℃；1小时。
步骤C：3，4-二氢哌喃、对-甲苯磺酸单水合物、乙酸乙酯；在25℃及氮气下16小时，然后在异丙醇中结晶。
步骤D、E及F：
(1)哌啶、甲苯、迪恩史塔克(Dean&Stark)装置，在氮气下回流；
(2)1，8-二吖双环[5，4，0]十一碳-7-烯、DMF，回流3小时；
(3)CH3MgCl、THF，-20至0℃，然后在室温24小时；
步骤G、H：(1S)-(+)-10-樟脑磺酸、丙酮、水、甲苯，在室温48小时。
步骤HH：95％乙醇，70℃，然后在室温3天。
步骤HHR：将母液与步骤HH的清洗液回收；(S)-10-樟脑磺酸，回流；36小时，然后在室温16小时。
步骤I：
(1)含水的DMF、碳酸钠、乙酸乙酯；
(2)乙醇、稀盐酸；
(3)水。
2-四氢哌喃基氧-4-羟基-2’-(4”-四氢哌喃基氧苯基)苯乙酮(4)的合成作用。2，4-二羟基-2’-(4”-羟苯基)苯乙酮3(97.6克，0.4莫耳)(可自美国堪萨斯州列内克沙(Lenexa)的凯森科学实验室(Chemsyn Science Laboratories)公司取得)于3，4-二氢哌喃(218毫升，3.39莫耳)与乙酸乙酯(520毫升)中之一悬浮液，在约25℃以对-甲苯磺酸单水合物(0.03克，0.158毫莫耳)处理。在无外部加热的情况下，反应混合物在氮气下搅拌约16小时。然后以碳酸氢钠(1克)与氯化钠(5克)于水(100毫升)中的一溶液，清洗混合物。将相分离，及以盐水(20毫升)清洗有机相。以50毫升的乙酸乙酯反萃取各清洗液。将所有的有机相合并，及过滤通过硫酸钠。藉由在大气压力的蒸馏作用除去溶剂(约600毫升)，及添加异丙醇(250毫升)。在大气压力蒸馏除去附加的溶剂(约300毫升)，及添加异丙醇(250毫升)。在大气压力蒸馏除去附加的溶剂(约275毫升)，及添加异丙醇(250毫升)。在搅拌下，在约25℃冷却该溶液，及约12小时之后，将结晶固体物过滤，以异丙醇清洗及加以干燥(116.5克，70％)。
4-羟基-4-甲基-2-(4’-[2”-N-哌啶基]-乙氧基)苯基-3-(4”’-四氢哌喃基氧)苯基-7-四氢哌喃基氧-烷的合成作用(10)。在氮气下，2-四氢哌喃基氧-4-羟基-2’-(4”-四氢哌喃基氧苯基)苯乙酮4(1公斤，2.42莫耳)、4-[2-(1-N-哌啶基)乙氧基]苯甲醛5(594克，2.55莫耳)(可自美国堪萨斯州列内克沙(Lenexa)的凯森科学实验室(Chemsyn ScienceLaboratories)公司取得)及哌啶(82.4克，0.97莫耳)(可自美国威斯康星州密尔瓦基的艾尔迪希(Aldrich)化学有限公司取得)于甲苯(8公升)中的一溶液，以迪恩史塔克(Dean&Stark)装置进行回流，直至收集到一当量的水(44毫升)。藉由在大气压力的蒸馏作用，自该溶液中除去甲苯(6.5公升)。添加二甲基甲酰胺(6.5公升)与1，8-二吖双环[5，4，0]十一碳-7-烯(110.5克，0.726莫耳)。在室温搅拌该溶液约8小时，以将查耳酮(chalcone)8异构化成为烷酮9，然后添加至水与冰(8公升)及甲苯(4公升)的一混合物中。将相分离，及以水(5公升)清洗甲苯层。以甲苯(3x4公升)萃取合并后的含水清洗液。最后以盐水(3x4公升)清洗合并后的甲苯萃取物，在大气压力浓缩至5.5公升，然后冷却至-10℃。在氮气下，在持续的外部冷却作用与搅拌作用下，添加氯化甲基镁于THF中的3M溶液(2.5公升，7.5莫耳)(可自美国威斯康星州密尔瓦基的艾尔迪希(Aldrich)化学有限公司取得)，将温度维持在0℃以下。在添加所有的格林纳(Grignard)试剂之后，移除外部冷却作用，及让混合物回温至室温。在该温度搅拌混合物约24小时。将混合物再度冷却至约-20℃，及在持续的外部冷却作用与搅拌作用下，缓慢地添加饱和的氯化铵溶液(200毫升)，将温度维持在20℃以下。搅拌该混合物2小时，然后添加饱和的氯化铵溶液(2公升)与甲苯(4公升)及搅拌5分钟。将相分离，及以甲苯(2x4公升)萃取水层。以稀盐酸清洗合并后的甲苯萃取物直至该溶液成为均质，然后以盐水(3x4公升)清洗。最后在大气压力将甲苯溶液浓缩至2公升。该溶液是直接用于下一步骤。
(2R，S)-7-羟基-3-(4’-羟苯基)-4-甲基-2-(4”-[2”’-N-哌啶基]乙氧基)苯基)-2H-1-苯并哌喃(1S)-10-樟脑磺酸盐(±12)的合成作用。在4-羟基-4-甲基-2-(4’-[2”-N-哌啶基]-乙氧基)-苯基-3-(4”’-四氢哌喃基氧)苯基-7-四氢哌喃基氧烷(10)的甲苯溶液中，添加丙酮(6公升)、水(0.3公升)及(S)-10-樟脑磺酸(561克，2.42莫耳)(可自美国威斯康星州密尔瓦基的艾尔迪希(Aldrich)化学有限公司取得)。在氮气下搅拌该混合物48小时，之后将固态(2R，S)-7-羟基-3-(4’-羟苯基)-4-甲基-2-(4”-[2”’-N-哌啶基]乙氧基)苯基)-2H-1-苯并哌喃(1S)-10-樟脑磺酸盐(12)过滤，以丙酮清洗及加以干燥(883克)。该物质未经进一步纯化即用于下一个(HH)步骤。
(2S)-7-羟基-3-(4’-羟苯基)-4-甲基-2-(4”-[2”’-N-哌啶基]乙氧基)苯基)-2H-1-苯并哌喃(1S)-10-樟脑磺酸盐(13，(+)-EM-652(1S)-CSA盐)的合成作用。(2R，S)-7-羟基-3-(4’-羟苯基)-4-甲基-2-(4”-[2”’-N-哌啶基]乙氧基)苯基)-2H-苯并哌喃(1S)-10-樟脑磺酸盐±12(759克)于95％乙醇中之一悬浮液，在搅拌下加热至约70℃直至固态物溶解为止。让该溶液在搅拌下冷却至室温，然后植入(2S)-7-羟基-3-(4’-羟苯基)-4-甲基-2-(4”-[2”’-N-哌啶基]乙氧基)苯基)-2H-1-苯并哌喃(1S)-10-樟脑磺酸盐13的一些晶体。在室温搅拌该溶液总共约三天。将晶体过滤，以95％乙醇清洗及加以干燥(291克，76％)。产物的de为94.2％及纯度为98.8％。
(S)-(+)-7-羟基-3-(4’-羟苯基)-4-甲基-2-(4”-(2”’-N-哌啶基乙氧基)苯基)-2H-1-苯并哌喃盐酸盐EM-01538(EM-652，盐酸盐)的合成作用。化合物13(EM-652-(+)-CSA盐，500毫克，0.726毫莫耳)于二甲基甲酰胺(11微升，0.15毫莫耳)中之一悬浮液，以0.5M碳酸钠水溶液(7.0毫升，3.6毫莫耳)处理，及搅拌15分钟。以乙酸乙酯(7.0毫升)处理该悬浮液，及搅拌4小时。然后以饱和的碳酸钠水溶液(2x5毫升)与水(1x5毫升)清洗有机相，以硫酸镁干燥及加以浓缩。所得的粉红泡沫体(EM-652)于乙醇(2毫升)中的一溶液，以2N盐酸(400微升，0.80毫莫耳)处理及搅拌1小时，以蒸馏水(5毫升)处理及搅拌30分钟。将所产生的悬浮液过滤，以蒸馏水(5毫升)清洗，在空气中及在高度真空下干燥(65℃)，而得一种乳色粉末(276毫克，77％)：细微的黄白色粉末；扫描热量测定法：熔化峰在219℃开始，ΔH＝83焦耳/克；在10毫克/毫升的甲醇中的[α]24 D＝154°；1H NMR(300MHz，CD3OD)δ(ppm)1.6(宽广，2H，H-4”’)，1.85(宽广，4H，H-3””及5””)，2.03(s，3H，CH3)，3.0及3.45(宽广，4H，H-2””及6””)，3.47(t，J＝4.9Hz，2H，H-3”’)，4.26(t，J＝4.9Hz，2H，H-2”’)，5.82(s，1H，H-2)，6.10(d，J＝2.3Hz，1H，H-8)，6.35(dd，J＝8.4，2.43Hz，1H，H-6)，6.70(d，J＝8.6Hz，2H，H-3′，及H-5′)，6.83(d，J＝8.7Hz，2H，H-3”及H-5”)，7.01(d，J＝8.5Hz，2H，H-2’及H-6’)，7.12(d，J＝8.4Hz，1H，H-5)，7.24(d，J＝8.6Hz，2H，H-2”及H-6”)；13C RMN(CD3OD，75MHz)δppm 14.84，22.50，23.99，54.78，57.03，62.97，81.22，104.38，109.11，115.35，116.01，118.68，125.78，126.33，130.26，130.72，131.29，131.59，134.26，154.42，157.56，158.96，159.33.元素组成：碳、氢、氮、氯的理论值为70.51、6.53、2.84、7.18％，实测值为70.31、6.75、2.65、6.89％。
第3例
材料与方法
动物
自查尔斯河(Charles-River，Inc)有限公司(加拿大魁北克省圣康斯坦(St-Constant))取得重量18至20克的雌性BALB/c小鼠(BALB/cAnNCrlBR)，及每笼5只饲养于控制温度(23±1℃)与光(光亮期为12小时/天，光亮期自7:15开始)的环境中。以供随意取食的囓齿动物饲料与自来水喂食小鼠。动物在爱沙氟伦(Isoflurane)麻醉下，经由双侧腹胁肉切口而切除卵巢(OVX)，及随机分派至各有10只动物的组别。保留10只未切除卵巢的小鼠作为对照组。
治疗
在第一个实验(第11至14图)中，自卵巢切除2天之后开始，每日藉由胃管灌食法以口服方式投予1、3或10微克/动物的试验化合物即EM-652.HCl、拉索昔芬(Lasofoxifene)(游离碱形式；活性与无活性镜像异构物)及雷洛昔芬(Raloxifene)的剂量一次达9天。在第二个实验(第6表)中，自卵巢切除2天之后开始，每日藉由胃管灌食法以口服方式投予1、3、10或30微克/动物的TSE424剂量一次达9天。在该二实验中，为评估抗***活性，自卵巢切除5天之后开始雌甾酮(每日皮下注射0.06微克的E1二次)的治疗，及总共投药6天。将化合物溶于乙醇中(最终浓度为4％)，及置于0.4％甲基纤维素中投药。在9天期间，未切除卵巢与OVX对照组中的小鼠仅领受载剂(4％乙醇-0.4％甲基纤维素)。在卵巢切除后的第11个早晨，藉由腹部主动脉的放血而杀死动物。迅速摘除子宫与***，加以称重，及保存在10％的缓冲***中，以供进一步的组织检查。
项目I.结果
实验1：
如第11图中所说明，每日以1微克、3微克及10微克的口服剂量投予的EM-652.HCl，对于经雌甾酮刺激的子宫重量分别引发24％、48％及72％抑制作用(所有剂量相对于对照组的p＜0.01)，而以相同剂量投予的雷洛昔芬(Raloxifene)分别引起对于该参数的6％(不显著)、14％(p＜0.01)及43％(p＜0.01)抑制作用。另一方面，拉索昔芬(Lasofoxifene)(游离碱形式)在所用的最低剂量并不具有抑制性效应，而其在每日3微克与10微克的剂量分别引起对于经雌甾酮刺激的子宫重量的25％(p＜0.01)与44％(p＜0.01)抑制作用。拉索昔芬(Lasofoxifene)的无活性镜像异构物在所用的任一剂量，并未展现对于该参数的抑制性效应。
上述化合物对于***重量展现类似的效应。每日1微克、3微克及10微克剂量的EM-652.HCl口服投药作用(第12图)，分别导致对于***重量的10％(不显著)、25％及53％抑制作用(二个最高剂量的p＜0.01)，而雷洛昔芬(Raloxifene)仅在最高剂量(10微克)展现对于该参数的显著的24％(p＜0.01)抑制性效应。与雷洛昔芬(Raloxifene)类似，拉索昔芬(Lasofoxifene)(游离碱形式)仅在所用的最高剂量引起显著的37％(p＜0.01)抑制性效应，而无活性镜像异构物在所用的任一剂量并不具有对于***重量的抑制性效应。
当在切除卵巢的小鼠中，以每日1微克与10微克的口服剂量单独(在雌甾酮不存在下)投予化合物时，EM-652.HCl在所用的二个剂量对于子宫重量并无显著的刺激效应，而10微克的拉索昔芬(Lasofoxifene)与雷洛昔芬(Raloxifene)的治疗分别引起对于子宫重量的93％(p＜0.01)与85％(p＜0.01)刺激作用(第13图)，因此显示该等后者化合物对于该参数的***效应。类似地，EM-652.HCl并未展现对于***重量的显著刺激效应(第14图)，而10微克的拉索昔芬(Lasofoxifene)与雷洛昔芬(Raloxifene)的投药作用分别引起对于***重量的73％(p＜0.01)与56％(p＜0.01)刺激作用。另一方面，拉索昔芬(Lasofoxifene)的无活性镜像异构物并不具有对于子宫与***重量的刺激效应。
实验2：
如第4表中所示，以每日1微克、3微克、10微克或30微克的口服剂量投予的TSE 424，分别造成对于经雌甾酮刺激的子宫重量的12％(不显著)、47％、74％及94％抑制作用(三个最高剂量相对于E1对照组的p＜0.01)。另一方面，每日以口服方式投予3微克、10微克及30微克的TSE 424剂量，分别导致对于***重量的16％(不显著)、56％(p＜0.01)及93％(p＜0.01)抑制作用。
当在切除卵巢的小鼠中，以每日3微克与30微克的口服剂量单独(在雌甾酮不存在下)投予化合物时，TSE 424在所用的二个剂量对于子宫与***重量并无显著的刺激效应(第4表)。
第4表
在同时经或未经雌甾酮治疗的切除卵巢的小鼠中，以口服方式投予递增浓度的TSE 424达9天对于子宫与***重量的效应。**相对于经E1治疗的对照组的p＜0.01。
Figure BPA00001481534000741
第4例
对于骨质流失、血清脂质及总体脂肪的预防性效应
动物与治疗
使用在治疗开始时重量约220至270克的10至12周大的雌性史普瑞格-道利(SpragueDawley)大鼠(Crl:CD(SD)Br)((加拿大魁北克省圣康斯坦(St-Constant)的查尔斯河实验室(Charles River Laboratory)公司)。在实验开始之前，让动物适应环境条件(温度为22±3℃；湿度为50±20％；12小时光亮-12小时黑暗周期，光亮期自07:15开始)至少1周。将动物个别地饲养，及容许自由取用自来水与一种粒状的合格啮齿动物饲料(美国密苏里州圣路易市罗森普瑞纳(RalstonPurina)公司的实验室饲料(Lab Diet)5002)。实验是依据CCAC的实验动物管理与使用指南，在加拿大动物照护委员会(CCAC)与国际实验动物管理评估与认证协会(AAALAC)所核可的一动物机构中进行。
在第一个实验中，将154只大鼠随机分配在各有14只动物的11个组中，该等组别如下：1)未切除卵巢的对照组；2)OVX对照组；3)OVX+E2(1毫克/公斤)；4)OVX+EM-652.HCl(2.5毫克/公斤)；5)OVX+E2+EM-652.HCl；6)OVX+去氢表雄固酮(DHEA；80毫克/公斤)；7)OVX+DHEA+EM-652.HCl；8)OVX+DHEA+E2；9)OVX+DHEA+E2+EM-652.HCl；10)OVX+GW 5638；11)OVX+E2+GW 5638。在研究的第1天，适当组别中的动物在爱沙氟伦(Isoflurane)麻醉下切除双侧卵巢(OVX)。DHEA是以位于50％乙醇-50％丙二醇中的一溶液形式局部施用在背侧皮肤上，而其它试验化合物是以位于0.4％甲基纤维素中的悬浮液形式，藉由经口胃管灌食法投药。治疗是在研究的第2天开始，及在3个月的期间每日进行一次。
在第二个实验中，将132只大鼠随机分配在各有14或15只动物的9个组中，该等组别如下：1)未切除卵巢的对照组；2)OVX对照组；3)OVX+普力马林(Premarin)(0.25毫克/公斤)；4)OVX+EM-652.HCl(2.5毫克/公斤)；5)OVX+普力马林(Premarin)+EM-652.HCl；6)OVX+TSE 424(2.5毫克/公斤)；7)OVX+普力马林(Premarin)+TSE 424；8)OVX+拉索昔芬(Lasofoxifene)(酒石酸盐；外消旋物；2.5毫克/公斤)；9)OVX+普力马林(Premarin)+拉索昔芬(Lasofoxifene)。在研究的第1天，适当组别中的动物在爱沙氟伦(Isoflurane)麻醉下切除双侧卵巢(OVX)。试验化合物是以位于0.4％甲基纤维素中的悬浮液形式，藉由经口的胃管灌食法投药。治疗是在研究的第2天开始，及在26周的期间每日进行一次。在该二实验中，未领受试验物质的动物是在相同期间内仅以适当的载剂治疗。
骨质密度测量
在3个月(实验1)或26周(实验2)的治疗后，大鼠个别在爱沙氟伦(Isoflurane)麻醉下，使用双能量X光吸收测量仪(DEXA；美国麻州华特翰(Waltham)的豪洛捷(Hologic)公司的QDR4500A)与一种区域性高分辨率扫描软件，扫描它们的全身骨骼与腰椎。测定腰椎(脊椎骨L2至L4)的骨质密度(BMD)与总身体组成(脂肪百分比)。
血清分析
在3个月(实验1)或26周(实验2)的治疗后，自禁食过夜的动物(在爱沙氟伦(Isoflurane)麻醉下)的颈静脉收集血液试样。处理试样以用于制备血清，及在分析之前冷冻于-80℃。使用宝灵曼诊断仪器(Boehringer MannheimDiagnostic)公司日立(Hitachi)911分析仪(宝灵曼诊断仪器实验室***(Boehringer Mannheim)公司)，测定血清胆固醇水平与碱性磷酸酶活性(ALP)。
统计分析
数据是以平均值±SEM表示。依据邓肯-克拉马(Duncan-Kramer)多变域检定(Kramer CY于期刊“Biometrics”1956年第12期第307-310页乙文)，测定统计显著性。
结果
如第5表中所示，在切除卵巢3个月后，OVX对照组动物中的腰椎BMD比未切除卵巢的对照组低10％(p＜0.01)。在所用的剂量，单独投予***与EM-652.HCl的投药作用分别阻止腰椎BMD损失达98％(p＜0.01)与65％(p＜0.05)，而以E2与EM-652.HCl进行的合并治疗阻止OVX所引发的腰椎BMD降低达61％(p＜0.05)。另一方面，当单独投予DHEA的投药作用保护腰椎BMD达43％(p＜0.05)之际，以DHEA+E2+EM-652.HCl进行的合并治疗阻止OVX所引发的腰椎BMD降低达91％，及导致BMD数值与未切除卵巢的对照组并无不同。
在第6表中，在切除卵巢26周之后，腰椎BMD比未切除卵巢的对照组低18％(p＜0.01)。单独投予普力马林(Premarin)、EM-652.HCl、TSE 424及拉索昔芬(Lasofoxifene)的投药作用，分别保护腰椎BMD达54％、62％、49％及61％(相对于OVX对照组的所有p＜0.01)。在EM-652.HCl、TSE424或拉索昔芬(Lasofoxifene)中添加普力马林(Premarin)，导致腰椎BMD数值与单独投予各SERM的投药作用所得者并非显著不同(第6表)。类似地，在E2或在EM-652.HCl中添加DHEA，完全阻止OVX所引发的腰椎BMD降低(第5表)。DHEA对于BMD的正面效应，亦由其对于血清碱性磷酸酶活性(ALP)即骨形成与更新作用的一标记的效应所证实。ALP活性是自OVX对照组动物中的73±6国际单位/公升，分别增加至经DHEA、DHEA+EM-652.HCl、DHEA+E2及DHEA+E2+EM-652.HCl治疗动物中的224±18国际单位/公升、290±27国际单位/公升、123±8国际单位/公升及261±20国际单位/公升(所有p＜0.01)，因此显示DHEA对于骨形成作用的刺激效应(第7表)。
除了对于骨质流失的预防性效应之外，EM-652.HCl、TSE 424、拉索昔芬(Lasofoxifene)、GW5638、DHEA及E2的投药作用，展现对于总体脂肪百分比与血清脂质的一些有利效应。在切除卵巢3个月之后，总体脂肪增加22％(p＜0.05；Table XXX6)。EM-652.HCl的投药作用完全阻止OVX所引发的脂肪百分比增加，而在SERM中添加DHEA及/或E2导致脂肪百分比数值低于在未切除卵巢的对照组动物中所观察到者。在切除卵巢26周之后，因***缺乏所引发的脂肪增加40％，在普力马林(Premarin)、EM-652.HCl、TSE424或拉索昔芬(Lasofoxifene)的投药作用之后分别被逆转74％、78％、75％及114％，而在各SERM中添加普力马林(Premarin)完全地阻止OVX所引发的脂肪百分比增加(第8表)。
如第7表中所示，在切除卵巢3个月之后，相较于未切除卵巢的对照组，在OVX对照组大鼠中观察到血清胆固醇水平增加22％(p＜0.01)。事实上，血清胆固醇是自未切除卵巢的动物中的2.01±0.11毫莫耳/公升，增加至OVX对照组中的2.46±0.08毫莫耳/公升。单独投予E2或DHEA的投药作用分别将血清胆固醇水平减少至1.37±0.18毫莫耳/公升与1.59±0.10毫莫耳/公升，单独投予EM-652.HCl或组合E2及/或DHEA的投药作用导致胆固醇水平(介于0.65至0.96毫莫耳/公升之间)显著低于在未切除卵巢的动物中所观察到者(2.01±0.11毫莫耳/公升)。类似地，单独投予GW5638、TSE424及拉索昔芬(Lasofoxifene)或组合E2或普力马林(Premarin)的投药作用，完全阻止OVX所引发的血清胆固醇水平的增加，及导致数值低于在未切除卵巢的动物中所观察到者(第7与8表)。
第5表
以单独或组合投予的***、EM-652.HCl、GW5638或DHEA治疗切除卵巢的雌性大鼠3个月之后对于阻止骨质流失的效应
Figure BPA00001481534000791
*为实验组相对于OVX对照组大鼠的p＜0.05；**为p＜0.01。
第6表
以单独或组合普力马林(PREMARIN)投予的普力马林(Premarin)、EM-652.HCl、TSE 424或拉索昔芬(Lasofoxifene)治疗切除卵巢的雌性大鼠26周之后对于阻止骨质流失的效应
**为实验组相对于OVX对照组大鼠的p＜0.01。
第7表
以单独或组合投予的***、EM-652.HCl、GW5638或DHEA治疗切除卵巢的雌性大鼠3个月之后对于总体脂肪百分比、血清胆固醇水平及碱性磷酸酶活性的效应
*为实验组相对于OVX对照组大鼠的p＜0.05；**为p＜0.01。
第8表
以单独或组合普力马林(PREMARIN)投予的普力马林(Premarin)、EM-652.HCl、TSE424或拉索昔芬(Lasofoxifene)治疗切除卵巢的雌性大鼠26周之后对于总体脂肪百分比、血清胆固醇水平及碱性磷酸酶活性的效应
Figure BPA00001481534000821
*为实验组相对于OVX对照组大鼠的p＜0.05；**为p＜0.01。
第5例
以单独与组合DHEA投予的选择性***受体调节物(SERM)EM-652.HCl、TSE-424及ERA-923治疗切除卵巢的雌性大鼠之后对于骨质流失的预防性效应
动物与治疗
使用在治疗开始时重量约220至270克的10至12周大的雌性史普瑞格-道利(Sprague Dawley)大鼠(Crl:CD(SD)Br)((加拿大魁北克省圣康斯坦(St-Constant)的查尔斯河实验室(Charles River Laboratory)公司)。在实验开始之前，让动物适应环境条件(温度为22±3℃；湿度为50±20％；12小时光亮-12小时黑暗周期，光亮期自07:15开始)至少1周。将动物个别地饲养，及容许自由取用自来水与一种粒状的合格啮齿动物饲料(美国密苏里州圣路易市罗森普瑞纳(Ralston Purina)公司的实验室饲料(Lab Diet)5002)。实验是依据CCAC的实验动物管理与使用指南，在加拿大动物照护委员会(CCAC)与国际实验动物管理评估与认证协会(AAALAC)所核可的一动物机构中进行。
将126只大鼠随机分配在各有14只动物的9个组中，该等组别如下：1)未切除卵巢的对照组；2)OVX对照组；3)OVX+EM-652.HCl(2.5毫克/公斤)；4)OVX+TSE-424(EM-4803，2.5毫克/公斤)；5)OVX+ERA-923(EM-3527，2.5毫克/公斤)；6)OVX+去氢表雄固酮(DHEA；80毫克/公斤)；7)OVX+DHEA+EM-652.HCl；8)OVX+DHEA+TSE-424；9)OVX+DHEA+ERA-923。在研究的第1天，适当组别中的动物在爱沙氟伦(Isoflurane)麻醉下切除双侧卵巢(OVX)。DHEA是以位于50％乙醇-50％丙二醇中的一溶液形式局部施用在背侧皮肤上，而试验化合物是以位于0.4％甲基纤维素中的悬浮液形式，藉由经口的胃管灌食法投药。治疗是在研究的第2天开始，及在5周的期间每日进行一次。
骨质密度测量
在治疗5周的后，大鼠个别在爱沙氟伦(Isoflurane)麻醉下，使用双能量X光吸收测量仪(DEXA；美国麻州华特翰(Waltham)的豪洛捷(Hologic)公司的QDR4500A)与一种区域性高分辨率扫描软件，扫描它们的腰椎、股骨及胫骨。测定腰椎(脊椎骨L2至L4)、远程股骨干骺端(DFM)及近端胫骨干骺端(PTM)的骨质密度(BMD)。
统计分析
数据是以平均值±SEM表示。依据邓肯-克拉马(Duncan-Kramer)多变域检定(KramerCY于1956年乙文)，测定统计显著性。
结果
如第9表中所示，在切除卵巢5周之后，OVX对照组动物中的腰椎BMD比未切除卵巢的对照组低9％。在所用的剂量，单独投予SERM：EM-652.HCl、TSE-424或ERA-923的投药作用，分别阻止腰椎BMD损失达86％、53％及78％。另一方面，单独投予DHEA的投药作用，阻止腰椎BMD损失达44％，而以DHEA+EM-652.HCl、DHEA+TSE-424或DHEA+ERA-923进行的合并治疗，分别阻止OVX所引发的腰椎BMD降低达94％、105％及105％。
在切除卵巢5周之后，远程股骨干骺端(DFM)的骨质密度减少10％(第9表)。单独投予SERM EM-652.HCl、TSE-424或ERA-923的投药作用，分别阻止DFM BMD损失达95％、70％及83％。另一方面，单独投予DHEA的投药作用，阻止DFM BMD损失达71％，而以DHEA+EM-652.HCl、DHEA+TSE-424或DHEA+ERA-923进行的合并治疗，完全阻止OVX所引发的DFM BMD降低及导致DFM BMD数值高于在未切除卵巢的对照组动物所观察到者。在近端胫骨干骺端BMD获得类似的结果(第9表)。
Figure BPA00001481534000861
第6例
本发明的化合物对于人类子宫内膜癌石川氏(Ishikawa)细胞中的碱性磷酸酶活性的效应
材料
种细胞培养的维持
由美国纽约州纽约市西奈山医学中心(Mount SinaiMedical Center)的Erlio Gurpide博士友好地提供衍生自一种分化良好的子宫内膜癌的人类石川氏(Ishikawa)细胞系。石川氏(Ishikawa)细胞例行地维持在含有5％(体积/体积)FBS(胎牛血清)与增补100单位/毫升的盘尼西林、100微克/毫升的链霉素、0.1mM非必需胺基酸溶液的伊格氏(Eagle)最低必需培养基(MEM)中。在37℃，将细胞以1.5x106个细胞的密度涂敷于费尔康(Falcon)T75培养瓶中。
细胞培养实验
在实验开始的24小时前，将近致密生长的石川氏(Ishikawa)细胞的培养基，置换为新鲜的无***基础培养基(EFBM)，其是由无酚红的汉氏(Ham)F-12培养基与杜贝可(Dulbecco)改良型伊格氏(Eagle)培养基(DMEM)的1∶1(体积∶体积)混合物所组成及增补100单位/毫升的盘尼西林、100微克/毫升的链霉素、2mM麸酰胺酸及经聚葡萄糖涂覆型炭处理二次以移除内源类固醇的5％FBS。然后藉由0.1％胰酶(西克玛(Sigma)公司)与0.25mM HEPES采收细胞，再悬浮于EFBM中，以100微升体积与2.2x104细胞/孔的密度涂敷于费尔康(Falcon)96孔平底式微量滴定培养皿中，及让其黏着培养皿表面24小时。之后，以含有所示化合物浓度的最终体积为200微升的新鲜EFBM，置换该培养基。培养细胞5天，每48小时更换培养基。
碱性磷酸酶分析
在培养期间结束时，将微量滴定平皿倒转，及倾倒生长培养基。培养皿以每孔200微升的PBS(0.15M氯化钠、10mM磷酸钠及pH值为7.4)冲洗。然后自培养皿除去PBS，同时小心地留下一些残余的PBS，及重复该清洗程序一次。然后倾注经缓冲的食盐水，及将倒转的培养皿和缓地印渍在纸巾上。在置换覆盖物之后，培养皿于-80℃放置15分钟，接着在室温解冻10分钟。然后将培养皿置于冰上，及添加50微升的含有5mM对-硝基磷酸苯酯、0.24mM氯化镁及1M二乙醇胺(pH 9.8)的冰***液。然后将培养皿回温至室温，及让因产生对-硝基苯基而得的黄色显现(8分钟)。在一种酶联免疫吸附检定法的培养皿读数器(伯瑞(BIO-RAD)公司的2550EIA型读数器)中，于405nm观测培养皿。
计算
使用一种加权迭代非线性平方回归，计算剂量-反应曲线以及IC50数值。
Figure BPA00001481534000891
Figure BPA00001481534000901
第7例
EM-652.HCl、TSE424及拉索昔芬(Lasofoxifene)对于人类乳癌MCF-7细胞增生作用的效应
方法：
种细胞培养的维持
自美国菌种保存中心(American Type CultureCollection)取得#HTB 22第147代的MCF-7人类乳癌细胞，及例行地在无酚红的杜贝可(Dulbecco)改良型伊格氏(Eagle)-汉氏(Ham)F12、上述增补物及5％FBS培养基中生长。MCF-7人类***腺癌细胞系是衍生自一名69岁白种女性病患的肋膜渗出液。使用第148代与第165代之间的MCF-7细胞，及每周进行继代培养。
细胞增生作用研究
以0.1％胰酶(西克玛(Sigma)公司)采收处于它们的对数生长期后期的细胞，及再悬浮于含有50奈克的牛胰岛素/毫升与5％(体积/体积)经聚葡萄糖涂覆型炭处理二次以移除内源类固醇的FBS的适当的培养基中。细胞是以所示密度涂敷于24孔式费尔康(Falcon)塑料培养皿(2平方公分/孔)，及让其黏着培养皿表面72小时。之后，以新鲜培养基置换该培养基，而新鲜培养基是在E2存在或不存在下含有位于99％再蒸馏乙醇中的自1000倍储备溶液稀释的所示浓度的化合物。对照组细胞仅领受乙醇载剂(0.1％乙醇，体积/体积)。将细胞培养一指定时段及每隔2或3天更换培养基。藉由测量DNA含量而测定细胞数目。
计算与统计分析
使用一种加权迭代非线性最小平方回归，计算剂量-反应曲线以及C50数值。所有结果是以平均值±SEM表示。
第11表
实验1
Figure BPA00001481534000921
实验2
Figure BPA00001481534000922
第8例
比较EM-652.HCL、泰莫西芬(TAMOXIFEN)、托瑞米芬(TOREMIFENE)、屈洛昔芬(DROLOXIFENE)、艾多昔芬(IDOXIFENE)、GW-5638及雷洛昔芬(RALOXIFENE)对于裸鼠中的人类RZ-75-1***肿瘤生长的效应
本实例的目标是在切除卵巢的裸鼠中，比较EM-652.HCl与其它六种口服抗***(SERM)对于特性记述良好的***敏感性ZR-75-1乳癌异种移植物的生长的致效性与拮抗性效应。
材料与方法
人类ZR-75-1乳癌细胞
ZR-75-1人类乳癌细胞是自美国菌种保存中心(American Type Culture Collection)(美国马里兰州洛克维尔(Rockville))取得，及于无酚红的RPMI-1640培养基中培养。在细胞中增补2mM L-麸酰胺酸、1mM丙酮酸钠、100国际单位的盘尼西林/毫升、100微克的链霉素/毫升及10％(体积/体积)胎牛血清，及在37℃的95％空气/5％二氧化碳的加湿气体环境下培养。每周进行细胞的继代培养，及在85至90％致密度时，使用0.083％胰酶/0.3mM EDTA采收。
动物与肿瘤接种
自查尔斯河(Charles-River，Inc)有限公司(加拿大魁北克省圣康斯坦(Saint-Constant))取得同型接合雌性nu/nu Br无胸腺小鼠(28至42天大)。将小鼠(每笼5只)饲养于配备有空气滤清器盖的乙烯树酯笼中，置于层流式气流通风橱中及维持在限制病原体的条件下。光周期为12小时光亮与12小时黑暗(光亮期自07:15开始)。笼、衬垫及食物(爱格威(Agway)公司的pro-Lab R-M-H饲料#4018)在使用前先经过高压蒸气灭菌。水是经高压蒸气灭菌，及供随意取用。在爱沙氟伦(Isoflurane)所引发的麻醉作用下，进行双侧卵巢的切除。在切除卵巢之际，在皮下嵌入***(E2)植入物，以刺激初始的肿瘤生长。在1公分长的硅胶管(内径为0.062英时及外径为0.095英时)中，制备含有0.5公分的***与胆固醇的1∶10(重量/重量)混合物的E2植入物。在卵巢切除1周之后，经由一个2.5公分长的22号注射针，在切除卵巢(OVX)的各只小鼠的两侧腹胁肉，以皮下方式接种位于0.1毫升RPMI-1640培养基+30％基质胶(Matrigel)中的2x106个ZR-75-1(第93代)细胞。在4周之后，以相同尺寸的含有雌甾酮的植入物(E1∶chol的重量∶重量为1∶25)置换所有动物中的E2植入物。在1周之后开始随机分派组别与治疗。
治疗
在开始治疗的前一天，将255只带有平均面积为24,4±0,4平方毫米(介于5,7至50,7平方毫米的范围)的ZR□75□1肿瘤的小鼠随机分派至17组(就肿瘤尺寸而言)，各组包括15只小鼠(总共29或30个肿瘤)。17组中包括2个对照组(OVX与OVX+雌甾酮)，7组以一个雌甾酮植入物增补及以一种抗***治疗，及其它8组仅领受一种抗***。然后自切除卵巢的对照组(OVX)及将仅领受抗***的组别中的动物，移除雌甾酮植入物。之后每6周更换其它9组中的含雌甾酮的植入物。在肿瘤学与分子内分泌学研究中心的医学化学部门中合成EM-652·HCl、雷洛昔芬(Raloxifene)、屈洛昔芬(Droloxifene)、艾多昔芬(Idoxifene)及GW5638。泰莫西芬(Tamoxifen)是自普兰泰克斯(Plantex)公司(以色列尼坦亚(Netanya))购得，而托瑞米芬(Toremifene)柠檬酸盐是自奥利安(Orion)公司(芬兰爱斯柏(Espoo))购得。在雌甾酮刺激作用之下，每日给予悬浮于0.2毫升的0.4％(重量/体积)甲基纤维素中的50微克(平均2毫克/公斤)抗***口服剂量。在雌甾酮刺激作用不存在下，每日藉由口服途径，以200微克(8毫克/公斤平均)的各抗***治疗动物一次。在二个对照组中的动物仅领受0.2毫升的载剂。每个月制备适当浓度的抗***悬浮液，储存于4℃及在稳定搅拌下使用。粉末状备料是以气密方式储存于4℃(艾多昔芬(Idoxifene)、雷洛昔芬(Raloxifene)、托瑞米芬(Toremifene)、GW 5638、屈洛昔芬(Droloxifene))或在室温中储存(泰莫西芬(Tamoxifen)、EM-652·HCl)。
肿瘤测量与尸体剖检
记录二个垂直直径，及使用公式：L/2xW/2xπ计算肿瘤面积(平方毫米)。以治疗第1天所测得的面积为100％。
在治疗161天之后，剩余的动物以爱沙氟伦(Isoflurane)麻醉及藉由放血杀死。为进一步分析***与抗***效应的特性，立即摘除***反应性组织诸如子宫与***，除去结缔与脂肪组织及加以称重。预备子宫，以藉由使用Image Pro-Plus(美国麻里兰州的媒体塞博奈堤克(MediaCybernetics)公司)进行的影像分析，评估子宫内膜厚度。简言之，将子宫置于10％***中固定及包埋于石蜡中。分析小鼠子宫的经苏木色素与伊红染色的切片。分析每个子宫的4个影像(每个子宫角2个)。测量各组的所有动物的平均上皮细胞高度。
反应标准
在研究结束时，或者若在实验期间死亡则在各动物死亡时，评估肿瘤反应。在该情况下，在肿瘤反应分析中仅采用存活至少一半研究期间(84天)的小鼠的数据。简言之，完全消退是指在实验结束时无法侦测到的该等肿瘤；部分消退是对应于消退程度≥它们原有尺寸的50％的肿瘤；稳定反应是指消退程度＜50％或恶化程度≤50％的肿瘤；及恶化是指恶化程度≥50％的肿瘤，相较于它们原有尺寸而言。
统计分析
依据用于重复测量的ANOVA，分析第1天与第161天之间的总肿瘤表面积的变化。该模式包括治疗、时间及时间-治疗交互作用效应加上说明随机分层的项。因此藉由时间-治疗交互作用，检定在161天的不同治疗效应的显著性。残差分析显示，原始尺度的测量并不适合藉由ANOVA的分析，亦不适合所尝试的任-变换。因此选择用于该分析的等级。藉由亦包括随机分层的单向ANOVA，评估该等治疗对于上皮厚度的效应。使用最小平方平均数统计量，进行事后成对比较。将整体型一误差率(α)控制在5％，以表明差异的显著性。所有计算皆在SAS软件(美国北卡罗莱纳州喀里(Cary)赛仕计算机软件(SASInstitute)公司)上使用ProcMIXED进行。
结果
对于ZR-75-1肿瘤生长的拮抗性效应
在23周的治疗期间，雌甾酮本身(OVX+E1)造成ZR-75-1肿瘤尺寸增加707％(第18图)。在经雌甾酮刺激的小鼠中，每日以50微克的口服剂量投予纯的抗***EM-652·HCl的投药作用，完全地阻止肿瘤生长。事实上，不仅阻止肿瘤生长，在治疗23周之后，肿瘤尺寸比治疗开始时的初始数值小26％(p＜0.04)。相较于仅切除卵巢(OVX)后所观察到的肿瘤尺寸降至比初始肿瘤尺寸小61％，EM-652·HCl治疗后所得的该数值并非统计上不同。在相同的剂量(50微克)与治疗期间，其它6种抗***并未使初始的平均肿瘤尺寸减小。该等组别中的肿瘤皆显著高于OVX对照组与EM-652·HCl治疗组(p＜0,01)。事实上，相较于治疗前的数值，以屈洛昔芬(Droloxifene)、托瑞米芬(Toremifene)、GW 5638、雷洛昔芬(Raloxifene)、泰莫西芬(Tamoxifen)及艾多昔芬(Idoxifene)治疗23周，导致平均肿瘤尺寸分别比治疗前的数值高478％、230％、227％、191％、87％及86％(第18图)。
对于ZR-75-1肿瘤生长的致效性效应
在治疗161天之后，在雌甾酮增补作用不存在下，每日200微克的泰莫西芬(Tamoxifen)剂量，使得平均肿瘤尺寸增加为基线的196％(相对于OVX的p＜0,01)(第19图)。另一方面，经艾多昔芬(Idoxifene)治疗的小鼠的平均肿瘤尺寸增加(125％)(p＜0,01)，而经托瑞米芬(Toremifene)治疗的小鼠的肿瘤尺寸增加86％(p＜0,01)(第19图)。在200微克的泰莫西芬(Tamoxifen)中添加200微克的EM-652·HCl，则完全地抑制在单独投予泰莫西芬(Tamoxifen)时所观察到的增生作用(第20图)。另一方面，在实验结束时相较于OVX对照组，单独以EM-652·HCl(p＝0,44)、雷洛昔芬(Raloxifene)(p＝0，11)、屈洛昔芬(Droloxifene)(p＝0,36)或GW 5638(p＝0，17)治疗并未显著改变ZR-75-1肿瘤尺寸(第19图)。
对于类别反应的效应
50微克的抗***对于雌甾酮刺激作用的效应。除了对于肿瘤尺寸的效应之外，各个别肿瘤在实验结束时所达到的反应类别，是治疗效力的重要参数。在切除卵巢的小鼠中，分别在21％、43％及38％的肿瘤中达到完全、部分及稳定的反应，及并无肿瘤恶化。另一方面，在增补雌甾酮的OVX动物中，100％的肿瘤恶化(第21图)。在增补雌甾酮的OVX动物的EM-652·HCl治疗组中，分别在17％、17％及60％的肿瘤中观察到完全、部分及稳定的反应，及仅7％(30个肿瘤中的2个)恶化。在雌甾酮刺激作用的相同条件下，以每日50微克剂量的其它任一种抗***治疗，无法将恶化中肿瘤的百分比降至60％以下。事实上，在泰莫西芬(Tamoxifen)治疗组中，65％的肿瘤(26个中的17个)恶化；而经托瑞米芬(Toremifene)治疗的89％(28个中的25个)恶化，经雷洛昔芬(Raloxifene)治疗的81％恶化(26个中的21个)，经屈洛昔芬(Droloxifene)治疗的100％(23个中的23个)恶化，而经艾多昔芬(Idoxifene)治疗的71％(28个中的20个)恶化及经GW 5638治疗的77％(26个中的20个)恶化(第21图)。
在雌甾酮刺激作用不存在下的200微克的抗***对于类别反应的效应
如第22图中所说明，在雌甾酮刺激作用不存在下，泰莫西芬(Tamoxifen)、艾多昔芬(Idoxifene)及托瑞米芬(Toremifene)所导致的恶化中肿瘤的比例，是高于其它抗***。事实上，在以每日200微克剂量的泰莫西芬(Tamoxifen)、艾多昔芬(Idoxifene)及托瑞米芬(Toremifene)治疗之后，处于恶化类别中的肿瘤分别为62％(26个中的16个)、33％(24个中的8个)及21％(28个中的6个)。如第23图中可见，在泰莫西芬(Tamoxifen)中添加200微克的EM-652·HCl，恶化中肿瘤的百分比是自单独投予泰莫西芬(Tamoxifen)时的62％(26个中的16个)，降至当在泰莫西芬(Tamoxifen)中添加EM-652.HCl时的7％(28个中的2个)。抗***对于子宫上皮细胞厚度的效应
测量子宫内膜上皮细胞的高度，作为各化合物在子宫内膜中的致效性与拮抗性效应的最直接的参数。
在雌甾酮刺激作用存在下的每日50微克的抗***对于子宫上皮细胞厚度的效应
在每日50微克的口服剂量，EM-652·HCl抑制雌甾酮对于上皮高度的刺激效应达70％。所试验的其它6种抗***的效力显著较低(p＜0,01)。事实上，屈洛昔芬(Droloxifene)、GW 5638、雷洛昔芬(Raloxifene)、泰莫西芬(Tamoxifen)、托瑞米芬(Toremifene)及艾多昔芬(Idoxifene)分别抑制雌甾酮刺激作用达17％、24％、26％、32％、41％及50％(第12表)。
在雌甾酮刺激作用不存在下的每日200微克的抗***对于子宫上皮细胞厚度的效应
在雌甾酮刺激作用不存在下，所试验的化合物中仅EM-652·HCl与屈洛昔芬(Droloxifene)并未显著增加上皮细胞的高度(分别为OVX对照组数值的114％与101％)。泰莫西芬(Tamoxifen)(155％)、托瑞米芬(Toremifene)(135％)及艾多昔芬(Idoxifene)(176％)展现对于子宫上皮高度的显著的刺激作用(相对于OVX对照组的p＜0,01)。雷洛昔芬(Raloxifene)(122％)与GW5638(121％)亦展现对于子宫上皮高度的统计上显著的刺激作用(相对于OVX对照组的p＜0,05(第12表)。在子宫与***重量上所测量的抗***的致效性与拮抗性效应，是与在子宫上皮细胞厚度上所观察到的模式一致(数据未显示)。
第12表
Figure BPA00001481534001011
第9例
雌性大鼠在14C-EM-800的单一口服剂量(20毫克/公斤)之后的脑中放射性
第8例显示大鼠在14C-EM-800即本发明的一种SERM的单一口服剂量(20毫克/公斤)之后的脑中放射性。为比较的目的，将来自该等动物中的各者的血、血浆、肝(第13表)及子宫的数值纳入。对于雄性与雌性朗-伊凡氏(Long-Evans)大鼠投予单一的14C-EM-800口服剂量(20毫克/2毫升/公斤)之后的放射性的组织分布与排出作用。该等数值显示雌性朗-伊凡氏(Long-Evans)大鼠脑中的药物所衍生的放射性总量非常低(奈克当量/组织克数)，及在投予剂量12小时之后即无法侦测到。在2小时之际，脑中的放射性比肝低412，比子宫低21倍，比血液低8.4倍及比血浆低13倍。因一未知比例的脑部总放射性是归因于血液放射性的污染，第X1表中所示的脑部放射性数值，是脑组织本身的14C(EM-800)相关放射性水平的高估。该数据显示脑组织中的抗***水平过低，而无法抵消外源***的效应。重要之处在于察知脑组织中所侦测到的放射性的一部分，可能归因于该组织中的残余血液(第14表)。此外，本研究所用的14C-EM-800的放射化学纯度最低为96.25％。
第13表
Figure BPA00001481534001031
Figure BPA00001481534001041
第10例
临床试验ERC-205
Figure BPA00001481534001051
DE PHASE II-IIIAVEC
Figure BPA00001481534001053
PLACEBO POUR
Figure BPA00001481534001054
LES EFFETS DE LA DHEASUR LESVASOMOTEURS(
Figure BPA00001481534001056
DECHALEUR)-评估DHEA对于停经后妇女的血管舒缩症状(热潮红)的效应的第II-III期安慰剂对照研究研究设计概要
本研究是用以评估相较于安慰剂投药作用的DHEA降低血管舒缩症状(热潮红)的效应的一个随机分派的安慰剂对照研究。将每周经历≥50次中等或严重的热潮红(藉由二周的日志测定)的停经后妇女随机分派领受每日剂量的安慰剂或50毫克的DHEA。50名可评估的参与者(每组25名病患)进行治疗4个月，每日的热潮红评估是由各参与者记录在日志中。
研究设计图
Figure BPA00001481534001057
a在进行与研究相关的任一程序之前必须取得告知后同意书。
藉由二周的热潮红筛选日志确认每周的中等或严重热潮红次数≥50次的40至70岁的停经后妇女，在签署告知后同意书之后纳入研究中。该操作程序是获得拉瓦尔(Laval)大学医院中心的人体试验委员会(IRB)及加拿大健康部的核准。
妇女必须符合a或b或c的条件：
a.月经已停止至少一年；或
b.停经超过6个月但不到12个月的妇女的FSH水平≥40毫国际单位(在第1天之前的60天内)，或在子宫切除之时点是处于停经期前的经***的妇女；或
c.先前的双侧卵巢切除。
在随机分派的12个月内，必须取得正常的子宫颈抹片(其包括炎性变化)及正常的双侧***X光摄影。
经***超音波检查的子宫内膜厚度需为4毫米以下。
治疗4个月之后，主要指标是第16周的每周中等至严重的热潮红频率自基线的变化。目标亦包括每周所有热潮红的频率自基线的变化及每周加权严重程度分数自基线的变化。
次级指标是DHEA的安全性评估以及生活质量。
反应指标是每日填写而具体说明热潮红的次数与类型如下的病患的纸张日志：
0无。
1轻微＝感觉到热但未发汗。
2中等＝感觉到热及发汗但不需中止活动。
3严重＝感觉到热及发汗而需中止活动。其包括夜汗。
热潮红日志是在随机分派前的二周开始作为筛选日志，藉此病患必须每日填写日志，记录热潮红的次数与严重程度。在二周期间记录每周平均50次以上的中等或严重热潮红的病患方能入选(亦即在二周的筛选日志上记录至少100次热潮红)。
一旦随机分派之后，在开始研究用药之际，病患完全成八本各二周的热潮红日志。日志必须每日填写。第一本日志在头二周完成，及在二周回诊时交回。第二本日志在头四周治疗期间的第二个二周期间完成，及在四周回诊时交回。在4、8、12及16周回诊时，收集二本各二周的热潮红日志。
日志与盲药物是在同一天开始(亦即在第1天。在病患规划开始服用研究药物的同一天，当她一醒来即开始记录热潮红)。
如第24图与第15表中所说明，中等至严重的热潮红次数自筛选时的每周70.7±4.5减少至第4周的50.1±5.7(相对于安慰剂不显著)，第8周的40.2±6.1，第12周的34.7±5.8(相对于安慰剂的p＜0.05)及第16周的32.2±5.8(相对于安慰剂的p＜0.05)。安慰剂造成减少32.9％，相较于DHEA的54.5％。
在所有热潮红的频率方面观察到一类似效应(第25图、第16表)，自筛选前的每周75.5±4.4次热潮红的数值降至第4周的55.3±5.8(相对于安慰剂不显著)，第8周的44.7±6.3，第12周的39.5±5.9(相对于安慰剂的p＜0.05)及第16周的36.0±5.7(相对于安慰剂的p＜0.05)。安慰剂造成减少34.9％，相较于DHEA的52.4％。
当就1为轻微、2为中等及3为严重赋予热潮红一分数时，在第16周时可观察到DHEA组中的数值自187.1±13.9降至87.2±15.8，相较于安慰剂组中的数值自196.3±13.6降至130±14.1(p＜0.05)。安慰剂造成减少18.0％，相较于DHEA的53.4％，因此显示DHEA的效力高3.0倍。
如第18表中所说明，DHEA的效应在中等至严重的热潮红上所展现的程度更大，该一效应较佳以加权严重程度分数说明，其中DHEA使该数值降低99.1±15.6，而安慰剂降低68.6±15.6。在第19表中更佳说明该效应，其中在筛选时每周热潮红次数为71次以上的妇女组中的热潮红平均次数，在安慰剂组中是自94.7±7.9降至57.8±8.3，在领受DHEA的妇女组中则自88.5±7.1降至31.6±11.6。该数据显示DHEA在最受血管舒缩症状影响的妇女中的抑制作用高达65％(DHEA为64.3％相对于安慰剂为39.0％)。事实上，对于每周中等至严重的热潮红次数介于50与70次之间的妇女，领受DHEA的妇女的次数是自筛选前的每周56.7±1.3降至第6周的32.7±6.2(减少43.3％)，相较于安慰剂的减少24.7％，因此显示优于安慰剂效应的43％的DHEA抑制作用。
因轻微热潮红的次数较低(比较第18与19表)，可在第20表中观察到类似的结论。轻微、中等加上严重热潮红的次数超过70次的妇女的热潮红次数，在领受DHEA的妇女中是自筛选前每周91.0±7.0减少至第16周的36.3±11.5(减少60％)。在领受安慰剂的妇女中，所有热潮红的次数是自筛选时的100.4±7.9降至第16周的61.3±8.9，减少39.9％。该数据显示在各种严重程度的热潮红总次数最高的妇女中，DHEA的效力高50％。
当在计算上使用一种加权严重程度分数时，可得到类似的结论(第21表)。当考虑每周热潮红次数超过70次的妇女时，领受DHEA的妇女中的该分数是自筛选时的241.6±21.1降至第16周的95.2±34.3(减少61.6％)，而该数值就安慰剂而言是自242.0±21.6减少至第16周的141.3±20.1(减少41.6％)。就筛选时每周热潮红次数介于50与70次之间的妇女而言，领受DHEA的妇女中的该数值是自筛选时的144.3±6.7降至第16周的81.6±13.6(减少43.5％)，相较于安慰剂组的154.2±3.7与118.8±20.2的数值(减少33.0％)。
结论
目前的数据，如藉由中等至严重的热潮红或所有热潮红的总次数的显著减少以及藉由每周热潮红严重程度加权分数的显著减少所评估，证明50毫克DHEA的治疗对于减轻血管舒缩症状的效力。
Figure BPA00001481534001101
Figure BPA00001481534001121
Figure BPA00001481534001131
Figure BPA00001481534001141
第11例
临床试验ERC-213
在***萎缩的停经后妇女中投予***栓剂之后的DHEA生物可利用性
研究设计概要
该研究的主要目标是每日在***内施用DHEA之后，测量***上皮细胞的成熟值。将40名停经后妇女随机分派领受一个具下列DHEA浓度的卵形栓剂的每日剂量：0.0％、0.5％(6.5毫克的DHEA/***栓剂)、1.0％(13毫克的DHEA/***栓剂)或1.8％(23.4毫克的DHEA/***栓剂)达7天。亦测量DHEA及其代谢物的全身生物可利用性。
结果
每日投予DHEA栓剂仅一周之后，在0.5％、1.0％及1.8％DHEA组中的成熟指数分别增加107％(p＜0.01)、75％(p＜0.05)及150％(p＜0.01)(第26图)。在第1天与第7天之间，并未在安慰剂组中观察到变化。另一方面，在0.5％、1.0％及1.8％DHEA组中的***pH值分别自6.29±0.21降至5.75±0.27(p＜0.05)、自6.47±0.23降至5.76±0.22(p＜0.01)及6.53±0.25降至5.86±0.28(p＜0.05)(第27图)。并未在安慰剂组中观察到***pH值的变化。
结论
目前的数据显示，DHEA的***内投药作用容许迅速达到对抗***萎缩的有利效应而未显著地改变血清***，因此避免与目前***内或全身***配方相关联的乳癌风险的增加，及在***的所有层增添在该组织的DHEA效应中最近所识别出的具雄激素性部分的局部效益。
药物组合物实例
如下藉由实例及非限制性地说明数种使用较佳的活性SERM阿考比芬(Acolbifene)(EM-652.HCl；EM-1538)与较佳的活性性类固醇前驱物去氢表雄固酮(DHEA、去氢异雄甾酮)的药物组合物。可使用本发明的其它化合物或其组合物，以取代(或加添至)阿考比芬(Acolbifene)或去氢表雄固酮。活性成分的浓度可在此述的宽广范围中变化。可包括的其它成分的量与类型是技艺中所熟知者。
第A例
供口服投药用的药物组合物(胶囊剂)
Figure BPA00001481534001161
第B例
供口服投药用的药物组合物(锭剂)
Figure BPA00001481534001162
第C例
局部投药作用(乳膏剂)
Figure BPA00001481534001171
第D例
***投药作用
***栓剂或卵形栓剂
Figure BPA00001481534001172
使用威特普索(Witepsol)H-15基质(加拿大蒙特娄的米迪斯卡(Medisca)公司)，制备DHEA栓剂。可使用其它任何的亲脂性基质诸如硬脂、费堤贝斯(Fattibase)、威可比(Wecobee)、可可脂、可可油或威特普索(Witepsol)基质的其它组合物。较佳的SERM为EM-800与阿考比芬(Acolbifene)。
套组实例
如下藉由实例及非限制性地说明数种使用较佳的活性SREM阿考比芬(Acolbifene)、较佳的抗***法洛德(Faslodex)及一种较佳的活性性类固醇前驱物DHEA的套组。活性成分的浓度可在此述的宽广范围中变化。可包括的其它成分的量与类型是技艺中所熟知者。
第D例
套组
SERM与性类固醇前驱物是口服投药供口服投药用的非类固醇抗***组成物(胶囊剂)
Figure BPA00001481534001181
+
供口服投药用的DHEA组成物
(明胶胶囊剂)
在上述配方中，可以其它SERM取代阿考比芬(Acolbifene)，以及以其它性类固醇前驱物取代DHEA。可包括一种以上的SERM或一种以上的性类固醇前驱物，在该情况下的合并后的重量百分比较佳为上述实例中所示的单一性类固醇前驱物或单一SERM的重量百分比。
第E例
套组
SERM是口服投药及性类固醇前驱物是***内投药供口服投药用的SERM组成物(胶囊剂)
Figure BPA00001481534001191
+
***栓剂
Figure BPA00001481534001192
使用威特普索(Witepsol)H-15基质(加拿大蒙特娄的米迪斯卡(Medisca)公司)，制备DHEA栓剂。可使用其它任何的亲脂性基质诸如硬脂、费堤贝斯(Fattibase)、威可比(Wecobee)、可可脂、可可油或威特普索(Witepsol)基质的其它组合物。
第F例
套组
SERM与性类固醇前驱物是***内投药***栓剂
Figure BPA00001481534001201
+
***栓剂
Figure BPA00001481534001202
使用硬脂(威特普索(Witepsol))制备阿考比芬(Acolbifene)栓剂。可使用其它任何基质诸如费堤贝斯(Fattibase)、威可比(Wecobee)、可可脂、可可油或硬脂的其它组合物。
第G例
SERM是口服投药及性类固醇前驱物是经皮投药供口服投药用的SERM组成物(胶囊剂)
+
性类固醇前驱物组成物
供口服投药用(凝胶剂)
Figure BPA00001481534001212
或
性类固醇前驱物组成物
供口服投药用(乳膏剂)
Figure BPA00001481534001221
第H例
套组
抗***是肌内投药及性类固醇前驱物是口服投药以商品取得的类固醇抗***法洛德(Faslodex)
+
供口服投药用的DHEA组成物
(明胶胶囊剂)
Figure BPA00001481534001231
在上述配方中，可以其它SERM(托瑞米芬(Toremifene)、奥培米芬(Ospemifene)、雷洛昔芬(Raloxifene)、阿佐昔芬(Arzoxifene)、拉索昔芬(Lasofoxifene)、TSE-424、ERA-923、EM-800、SERM3339、GW-5638)取代阿考比芬(Acolbifene)，以及以其它的性类固醇抑制剂取代DHEA。可包括一种以上的SERM或一种以上的前驱物，在该情况下的合并后的重量百分比较佳为上述实例中所示的单一前驱物或单一SERM的重量百分比。
曾就较佳的实施例与实例说明本发明，但本发明并非藉此而受限。该等娴熟技艺者即可察知，本发明的较广的适用性与范围是仅受限于此处的权利要求。

Claims (89)

1.一种降低或消除选自由热潮红、血管舒缩症状及夜汗所组成的组的症状发生的方法，该方法包括对于需要该项消除或减少作用的病患投予(i)治疗上有效的量的一种性类固醇前驱物或其前驱药及合并(ii)治疗上有效的量的选择性***受体调节物或抗***或其中任一者的前驱药。
2.如权利要求1所述的方法，其中该性类固醇前驱物是选自由去氢表雄固酮、硫酸去氢表雄固酮、雄甾-5-烯-3β，17β-二醇、4-雄甾烯-3，17-二酮及前述前驱物中的任何一种的前驱药所组成的群组。
3.一种用于减少或消除选自由热潮红、血管舒缩症状及夜汗所组成的组的症状的一种药物组合物，其包括：a)药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载剂；b)至少一种性类固醇前驱物或其前驱药；及c)至少一种选择性***受体调节物或一种抗***或其中任一者的前驱药；其中该药物组合物被提供于包装中，该包装指导使用该组成物以减少或消除选自由热潮红、血管舒缩症状及夜汗所组成的组的至少一种症状。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其中该性类固醇前驱物与选择性受体调节物或抗***二者是一起配制于选自由丸剂、锭剂、乳膏剂、凝胶剂、***内栓剂及***内卵形栓剂所组成的组的药学输送形式中。
5.一种用于减少或消除选自由热潮红、血管舒缩症状及夜汗所组成的组的症状的套组，其包括(i)其中具有至少一种性类固醇前驱物或其前驱药的第一容器；(ii)其中具有至少一种选择性***受体调节物或一种抗***或前述的任何之一的前驱药的第二容器；及(iii)使用该套组以减少或消除选自由热潮红、血管舒缩症状及夜汗所组成的组的至少一种症状的说明书。
6.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物所具有的分子式具有下列特点：
a)由1至2个居间的碳原子隔开的二个芳族环，这些芳族环是未经取代，或者被羟基或在活体内转化为羟基的基取代；
b)具有芳族环与三级胺官能度或其盐类的侧链。
7.如权利要求6所述的方法，其中该侧链是选自由下列所组成的组：
Figure FPA00001481533900021
8.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物是选自由三苯乙烯衍生物、吲哚衍生物、苯并哌喃衍生物、泰莫西芬Tamoxifen、托瑞米芬Toremifene、CC 8490、SERM 3471、HMR 3339、HMR 3656、雷洛昔芬Raloxifene、LY 335124、LY 326315、阿佐昔芬Arzoxifene(LY353381)、SH 646、哌喷昔芬Pipendoxifene  (ERA 923)、巴多昔芬Bazedoxifene(TSE 424、WAY 140424)、欧波利亚Oporia(拉索昔芬Lasoxifene)以及森可洛门centchroman衍生物所组成的组。
9.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的一种苯并噻吩衍生物化合物：
Figure FPA00001481533900022
a)其中R1与R2是独立地选自由氢、羟基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组；
b)其中R3与R4是(a)独立地为C1-C4烷基，或为(b)与它们所接合的氮组合的一部分，选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基及啉基所组成的组；
c)其中A是选自由-CO-、-CHOH及-CH2-所组成的组；
d)其中B选自由伸苯基、伸二氢吡啶基及-环C4H2N2-所组成的组。
10.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物是选自由雷洛昔芬Raloxifene、阿佐昔芬Arzoxifene(LY 353381)、LY 353381及LY335563所组成的组。
11.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的三苯乙烯或二苯基氢萘衍生物化合物：
a)其中D为-OCH2CH2N(R3)R4、-OCH2CH2OH或-CH＝CH-COOH(R3与R4是独立地选自由C1-C4烷基所组成的组，或R3、R4与它们所接合的氮原子一起是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基及啉基所组成的组的环结构)；
b)其中E与K独立地为氢或羟基、磷酸酯或低级烷基，其中J为氢或卤素。
12.如权利要求1所述的方法，其中选择性***受体调节物是泰莫西芬Tamoxifen、羟基-泰莫西芬Tamoxifen、屈洛昔芬Droloxifene、托瑞米芬Toremifene、艾多昔芬Iodoxifene、拉索昔芬Lasofoxifene、易泼昔芬Iproxifene、FC 1271及GW5638。
13.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的吲哚衍生物化合物：
a)其中D是选自由-OCH2CH2N(R7)R8、-CH＝CH-CO N(R7)R8、-CC-(CH2)n-N(R7)R8所组成的组(R7与R8是独立地选自由C1-C6烷基所组成的组，或R7、R8与它们所接合的氮原子一起，是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基、啉基所组成的组的环结构；
b)其中X是选自由氢与C1-C6烷基所组成的组；
c)其中R1、R2R3、R4、R5及R6是独立地选自由氢、羟基、C1-C6烷基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组。
14.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物选自由巴多昔芬Bazedoxifene(TSE 424；WAY-TSE 424；WAY 140424；1-[[4-[2-(六氢-1H-氮杂卓-1-基)乙氧基]苯基]甲基]-2-(4-羟苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚)与哌喷昔芬Pipendoxifene(ERA 923；2-(4-羟苯基)-3-甲基-1-[[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲基]-1H-吲哚-5-酚)所组成的组。
15.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的森可洛门衍生物化合物：
a)其中R1与R2是独立地选自由氢、羟基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组；
b)其中R5与R6是独立地为氢或C1-C6烷基；
c)其中D为-OCH2CH2N(R3)R4(R3与R4是独立地选自由C1-C4烷基所组成的组，或R3、R4与它们所接合的氮原子一起是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基、啉基所组成的组的环结构)。
16.如权利要求1所述的方法，其中该森可洛门衍生物为(3，4-反式-2，2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯啶-1-基)乙氧基)苯基]-7-甲氧基。
17.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物具有下列化学式：
Figure FPA00001481533900052
a)其中R1与R2是独立地为氢、羟基或在活体内转化为羟基的一部分；
b)其中Z不存在或选自由-CH2-、-O-、-S-及-NR3-(R3为氢或低级烷基)所组成的组；
c)其中R100是二价部分，其藉由4至10个居间的原子将L与B环隔开；
d)其中L是选自-SO-、-CON-、-N＜及-SON＜的组的二价或三价部分；
e)其中G1是选自由氢、C1至C5烃、与G2组合的二价部分所组成的组，及L是5至7员杂环及前述的卤代或不饱和衍生物；
f)其中G2不存在或选自由氢、C1至C5烃、与G1组合的二价部分所组成的组，及L是一个5至7员杂环及前述的卤代或不饱和衍生物；
g)其中G3是选自由氢、甲基及乙基所组成的组。
18.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物是具有下列通式结构式的苯并哌喃化合物：
或其一种药学上可接受的盐类，
a)其中D为-OCH2CH2N(R3)R4(R3与R4是独立地选自由C1-C4烷基所组成的组，或R3、R4与它们所接合的氮原子一起，是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基、啉基所组成的组的环结构)；
b)其中R1与R2是独立地选自由氢、羟基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组。
19.如权利要求第18项的方法，其中该苯并哌喃化合物因其大部分的立体异构物在碳2上具有绝对构型S而具光学活性，该化合物具有下列分子结构式：
Figure FPA00001481533900071
a)其中R1与R2是独立地选自由羟基与在活体内可转化为羟基的一部分所组成的组；
b)其中R3是选自由饱和、不饱和或经取代的吡咯啶基；饱和、不饱和或经取代的N-哌啶基；饱和、不饱和或经取代的哌啶基；饱和、不饱和或经取代的啉基；含氮的环状部分；含氮的多环状部分；及NRaRb(Ra与Rb独立地为氢、直链或分支C1-C6烷基、直链或分支C2-C6烯基及直链或分支C2-C6炔基)所组成的组的物种。
20.如权利要求19所述的方法，其中该化合物或盐类大体上缺少(2R)-镜像异构物。
21.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物为：
Figure FPA00001481533900072
及因其大部分的立体异构物具有2S构型而具有光学活性。
22.如权利要求第18项的方法，其中该选择性***受体调节物是选自由乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、反丁烯二酸、氢碘酸、氢溴酸、氢氯酸、氢氯苯噻塔酸、羟基-萘甲酸、乳酸、顺丁烯二酸、甲磺酸、甲硫酸、1，5-萘二磺酸、硝酸、棕榈酸、三甲基乙酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对苯二甲酸、对-甲苯磺酸及戊酸所组成的组的酸的苯并哌喃盐类。
23.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物为：
Figure FPA00001481533900081
及因其大部分的镜像异构物具有2S构型而具有光学活性；及其中该性类固醇前驱物是去氢表雄固酮。
24.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物在***、子宫或子宫内膜组织不具有***活性。
25.如权利要求1所述的方法，其中该治疗亦降低病患罹患乳癌、子宫癌或子宫内膜癌的风险。
26.如权利要求1所述的方法，其中该治疗亦抑制骨质疏鬆症、高胆固醇血症、高脂血症、动脉粥状硬化、高血压、胰岛素抗性、第2型糖尿病、肌肉耗失、肥胖症、阿滋海默氏Alzheimer症、认知丧失、失忆或***乾燥的发生。
27.如权利要求1所述的方法，其中该抗***是法洛德Faslodex(ICI 182780、氟维司群fulvestrant、7α-[9-(4，4，5，5，5-五氟-戊基亚磺醯基)壬基]雌甾-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二醇)。
28.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物是在***内投药。
29.如权利要求21所述的方法，其中该选择性***受体调节物是在***内投药。
30.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物是口服投药。
31.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物是经皮投药。
32.如权利要求1所述的方法，其中该选择性***受体调节物是奥培米芬Opemifene。
33.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物所具有的分子式具有下列特点：
a)由1至2个居间的碳原子隔开的两个芳族环，这些二芳族环是未经取代，或被羟基或在活体内转化为羟基的基取代；
b)具有芳族环与三级胺官能度或其盐类之一的侧链。
34.如权利要求33所述的药物组合物，其中该侧链是选自由下列所组成的组：
Figure FPA00001481533900091
35.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物是选自由三苯乙烯衍生物、吲哚衍生物、苯并哌喃衍生物、泰莫西芬Tamoxifen、托瑞米芬Toremifene、CC 8490、SERM 3471、HMR 3339、HMR 3656、雷洛昔芬Raloxifene、LY 335124、LY 326315、阿佐昔芬Arzoxifene(LY 353381)、SH 646、哌喷昔芬Pipendoxifene(ERA 923)、巴多昔芬Bazedoxifene(TSE 424、WAY 140424)、欧波利亚Oporia(拉索昔芬Lasoxifene)以及森可洛门centchroman衍生物所组成的组。
36.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的苯并噻吩衍生物化合物：
Figure FPA00001481533900101
a)其中R1与R2是独立地选自由氢、羟基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组；
b)其中R3与R4是(a)独立地为C1-C4烷基，或为(b)与它们所接合的氮组合的一部分，选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基及啉基所组成的组；
c)其中A是选自由-CO-、-CHOH及-CH2-所组成的组；
d)其中B选自由伸苯基、伸二氢吡啶基及-环C4H2N2-所组成的组。
37.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物是选自由雷洛昔芬Raloxifene、阿佐昔芬Arzoxifene(LY 353381)、LY 353381及LY 335563所组成的组。
38.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的三苯乙烯或二苯基氢萘衍生物化合物：
Figure FPA00001481533900102
a)其中D为-OCH2CH2N(R3)R4、-OCH2CH2OH或-CH＝CH-COOH(R3与R4是独立地选自由C1-C4烷基所组成的组，或R3、R4与它们所接合的氮原子一起是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基及啉基所组成的组的环结构)；
b)其中E与K独立地为氢或羟基、磷酸酯或低级烷基，其中J为氢或卤素。
39.如权利要求3所述的药物组合物，其中选择性***受体调节物是泰莫西芬Tamoxifen、羟基-泰莫西芬Tamoxifen、屈洛昔芬Droloxifene、托瑞米芬Toremifene、艾多昔芬Iodoxifene、拉索昔芬Lasofoxifene、易泼昔芬Iproxifene、FC 1271及GW5638。
40.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的吲哚衍生物化合物：
a)其中D是选自由-OCH2CH2N(R7)R8、-CH＝CH-CO N(R7)R8、-CC-(CH2)n-N(R7)R8所组成的组(R7与R8是独立地选自由C1-C6烷基所组成的组，或R7、R8与它们所接合的氮原子一起，是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基、啉基所组成的组的环结构；
b)其中X是选自由氢与C1-C6烷基所组成的组；
c)其中R1、R2R3、R4、R5及R6是独立地选自由氢、羟基、C1-C6烷基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组。
41.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物选自由巴多昔芬Bazedoxifene(TSE 424；WAY-TSE 424；WAY 140424；1-[[4-[2-(六氢-1H-氮杂卓-1-基)乙氧基]苯基]甲基]-2-(4-羟苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚)与哌喷昔芬Pipendoxifene(ERA 923；2-(4-羟苯基)-3-甲基-1-[[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲基]-1H-吲哚-5-酚)所组成的组。
42.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的森可洛门衍生物化合物：
a)其中R1与R2是独立地选自由氢、羟基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组；
b)其中R5与R6是独立地为氢或C1-C6烷基；
c)其中D为-OCH2CH2N(R3)R4(R3与R4是独立地选自由C1-C4烷基所组成的组，或R3、R4与它们所接合的氮原子一起是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基、啉基所组成的组的环结构)。
43.如权利要求3所述的药物组合物，其中该森可洛门衍生物是(3，4-反式-2，2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯啶-1-基)乙氧基)苯基]-7-甲氧基)。
44.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物具有下列化学式：
Figure FPA00001481533900122
a)其中R1与R2是独立地为氢、羟基或在活体内转化为羟基的一部分；
b)其中Z不存在或选自由-CH2-、-O-、-S-及-NR3-(R3为氢或低级烷基)所组成的组；
c)其中R100是二价部分，其藉由4至10个居间的原子将L与B环隔开；
d)其中L是选自-SO-、-CON-、-N＜及-SON＜的组的二价或三价部分；
e)其中G1是选自由氢、C1至C5烃、与G2组合的二价部分所组成的组，及L是5至7员杂环及前述的卤代或不饱和衍生物；
f)其中G2不存在或选自由氢、C1至C5烃、与G1组合的二价部分所组成的组，及L是一个5至7员杂环及前述的卤代或不饱和衍生物；
g)其中G3是选自由氢、甲基及乙基所组成的组。
45.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物是具有下列通式结构式的苯并哌喃化合物：
Figure FPA00001481533900131
或其一种药学上可接受的盐类，
a)其中D为-OCH2CH2N(R3)R4(R3与R4是独立地选自由C1-C4烷基所组成的组，或R3、R4与它们所接合的氮原子一起，是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基、啉基所组成的组的环结构)；
b)其中R1与R2是独立地选自由氢、羟基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组。
46.如权利要求45所述的药物组合物，其中该苯并哌喃化合物因其大部分的立体异构物在碳2上具有绝对构型S而具光学活性，该化合物具有下列分子结构式：
Figure FPA00001481533900141
a)其中R1与R2是独立地选自由羟基与在活体内可转化为羟基的一部分所组成的组；
b)其中R3是选自由饱和、不饱和或经取代的吡咯啶基；饱和、不饱和或经取代的N-哌啶基；饱和、不饱和或经取代的哌啶基；饱和、不饱和或经取代的啉基；含氮的环状部分；含氮的多环状部分；及NRaRb(Ra与Rb独立地为氢、直链或分支C1-C6烷基、直链或分支C2-C6烯基及直链或分支C2-C6炔基)所组成的组的物种。
47.如权利要求46所述的药物组合物，其中该化合物或盐类实质上缺少(2R)-镜像异构物。
48.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物为：
Figure FPA00001481533900142
及因其大部分的立体异构物具有2S构型而具有光学活性。
49.如权利要求45所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物是选自由乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、反丁烯二酸、氢碘酸、氢溴酸、氢氯酸、氢氯苯噻嗒酸、羟基-萘甲酸、乳酸、顺丁烯二酸、甲磺酸、甲硫酸、1，5-萘二磺酸、硝酸、棕榈酸、三甲基乙酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对苯二甲酸、对-甲苯磺酸及戊酸所组成的组的酸的苯并哌喃盐类。
50.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物是：
Figure FPA00001481533900151
及因其大部分的镜像异构物具有2S构型而具有光学活性；及其中该性类固醇前驱物是去氢表雄固酮。
51.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物在***、子宫或子宫内膜组织不具有***活性。
52.如权利要求3所述的药物组合物，其中该治疗亦降低病患罹患乳癌、子宫癌或子宫内膜癌的风险。
53.如权利要求3所述的药物组合物，其中该治疗亦抑制骨质疏鬆症、高胆固醇血症、高脂血症、动脉粥状硬化、高血压、胰岛素抗性、第2型糖尿病、肌肉耗失、肥胖症、阿滋海默氏Alzheimer症、认知丧失、失忆或***乾燥的发生。
54.如权利要求3所述的药物组合物，其中该抗***是法洛德Faslodex(ICI 182 780、氟维司群fulvestrant、7α-[9-(4，4，5，5，5-五氟-戊基亚磺醯基)壬基]雌甾-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二醇)。
55.如权利要求3所述的药物组合物，其中该组成物包括用于***内投药的剂型。
56.如权利要求48所述的药物组合物，其中该组成物包括用于***内投药的剂型。
57.如权利要求3所述的药物组合物，其中该组成物包括用于口服投药的剂型。
58.如权利要求3所述的药物组合物，其中该组成物包括用于经皮投药的剂型。
59.如权利要求3所述的药物组合物，其中该选择性***受体调节物是奥培米芬Opemifene。
60.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物所具有的分子式具有下列特点：
a)由1至2个居间的碳原子隔开的二个芳族环，这些芳族环是未经取代或被羟基或在活体内转化为羟基的基取代；
b)具有芳族环与三级胺官能度或其盐类的侧链。
61.如权利要求第60项的套组，其中该侧链是选自由下列所组成的组：
62.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物是选自由三苯乙烯衍生物、吲哚衍生物、苯并哌喃衍生物、泰莫西芬Tamoxifen、托瑞米芬Toremifene、CC 8490、SERM 3471、HMR 3339、HMR 3656、雷洛昔芬Raloxifene、LY 335124、LY 326315、阿佐昔芬Arzoxifene(LY353381)、SH 646、哌喷昔芬Pipendoxifene  (ERA 923)、巴多昔芬Bazedoxifene(TSE 424、WAY 140424)、欧波利亚Oporia(拉索昔芬Lasoxifene)以及森可洛门centchroman衍生物所组成的组。
63.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的苯并噻吩衍生物化合物：
Figure FPA00001481533900171
a)其中R1与R2是独立地选自由氢、羟基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组；
b)其中R3与R4是(a)独立地为C1-C4烷基，或为(b)与它们所接合的氮组合的一部分，选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基及啉基所组成的组；
c)其中A是选自由-CO-、-CHOH及-CH2-所组成的组；
d)其中B选自由伸苯基、伸二氢吡啶基及-环C4H2N2-所组成的组。
64.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物是选自由雷洛昔芬Raloxifene、阿佐昔芬Arzoxifene(LY 353381)、LY 353381及LY335563所组成的组。
65.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的三苯乙烯或二苯基氢萘衍生物化合物：
Figure FPA00001481533900172
a)其中D为-OCH2CH2N(R3)R4、-OCH2CH2OH或-CH＝CH-COOH(R3与R4是独立地选自由C1-C4烷基所组成的组，或R3、R4与它们所接合的氮原子一起是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基及啉基所组成的组的环结构)；
b)其中E与K独立地为氢或羟基、磷酸酯或低级烷基，其中J为氢或卤素。
66.如权利要求5所述的套组，其中选择性***受体调节物是泰莫西芬Tamoxifen、羟基-泰莫西芬Tamoxifen、屈洛昔芬Droloxifene、托瑞米芬Toremifene、艾多昔芬Iodoxifene、拉索昔芬Lasofoxifene、易泼昔芬Iproxifene、FC 1271及GW5638。
67.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的吲哚衍生物化合物：
a)其中D是选自由-OCH2CH2N(R7)R8、-CH＝CH-CO N(R7)R8、-CC-(CH2)n-N(R7)R8所组成的组(R7与R8是独立地选自由C1-C6烷基所组成的组，或R7、R8与它们所接合的氮原子一起，是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基、啉基所组成的组的环结构；
b)其中X是选自由氢与C1-C6烷基所组成的组；
c)其中R1、R2R3、R4、R5及R6是独立地选自由氢、羟基、C1-C6烷基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组。
68.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物选自由巴多昔芬Bazedoxifene(TSE 424；WAY-TSE 424；WAY 140424；1-[[4-[2-(六氢-1H-氮杂卓-1-基)乙氧基]苯基]甲基]-2-(4-羟苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-酚)与哌喷昔芬Pipendoxifene(ERA 923；2-(4-羟苯基)-3-甲基-1-[[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲基]-1H-吲哚-5-酚)所组成的组。
69.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物是具有下列化学式的森可洛门衍生物化合物：
Figure FPA00001481533900191
a)其中R1与R2是独立地选自由氢、羟基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组；
b)其中R5与R6是独立地为氢或C1-C6烷基；
c)其中D为-OCH2CH2N(R3)R4(R3与R4是独立地选自由C1-C4烷基所组成的组，或R3、R4与它们所接合的氮原子一起是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基、啉基所组成的组的环结构)。
70.如权利要求5所述的套组，其中该森可洛门衍生物为(3，4-反式-2，2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯啶-1-基)乙氧基)苯基]-7-甲氧基。
71.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物具有下列化学式：
Figure FPA00001481533900192
a)其中R1与R2是独立地为氢、羟基或在活体内转化为羟基的一部分；
b)其中Z不存在或选自由-CH2-、-O-、-S-及-NR3-(R3为氢或低级烷基)所组成的组；
c)其中R100是二价部分，其藉由4至10个居间的原子将L与B环隔开；
d)其中L是选自-SO-、-CON-、-N＜及-SON＜的组的二价或三价部分；
e)其中G1是选自由氢、C1至C5烃、与G2组合的二价部分所组成的组，及L是5至7员杂环及前述的卤代或不饱和衍生物；
f)其中G2不存在或选自由氢、C1至C5烃、与G1组合的二价部分所组成的组，及L是一个5至7员杂环及前述的卤代或不饱和衍生物；
g)其中G3是选自由氢、甲基及乙基所组成的组。
72.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物是具有下列通式结构式的苯并哌喃化合物：
Figure FPA00001481533900201
或其一种药学上可接受的盐类，
a)其中D为-OCH2CH2N(R3)R4(R3与R4是独立地选自由C1-C4烷基所组成的组，或R3、R4与它们所接合的氮原子一起，是选自由吡咯啶基、二甲基-1-吡咯啶基、甲基-1-吡咯啶基、N-哌啶基、六亚甲基亚胺基、啉基所组成的组的环结构)；
b)其中R1与R2是独立地选自由氢、羟基及在活体内转化为羟基的一部分所组成的组。
73.如权利要求72所述的套组，其中该苯并哌喃化合物因其大部分的立体异构物在碳2上具有绝对构型S而具光学活性，该化合物具有下列分子结构式：
Figure FPA00001481533900211
a)其中R1与R2是独立地选自由羟基与在活体内可转化为羟基的一部分所组成的组；
b)其中R3是选自由饱和、不饱和或经取代的吡咯啶基；饱和、不饱和或经取代的N-哌啶基；饱和、不饱和或经取代的哌啶基；饱和、不饱和或经取代的啉基；含氮的环状部分；含氮的多环状部分；及NRaRb(Ra与Rb独立地为氢、直链或分支C1-C6烷基、直链或分支C2-C6烯基及直链或分支C2-C6炔基)所组成的组的物种。
74.如权利要求73所述的套组，其中该化合物或盐类大体上缺少(2R)-镜像异构物。
75.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物为：
Figure FPA00001481533900212
及因其大部分的立体异构物具有2S构型而具有光学活性。
76.如权利要求72所述的套组，其中该选择性***受体调节物是选自由乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、反丁烯二酸、氢碘酸、氢溴酸、氢氯酸、氢氯苯噻嗒酸、羟基-萘甲酸、乳酸、顺丁烯二酸、甲磺酸、甲硫酸、1，5-萘二磺酸、硝酸、棕榈酸、三甲基乙酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对苯二甲酸、对-甲苯磺酸及戊酸所组成的组中的酸的苯并哌喃盐类。
77.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物为：
Figure FPA00001481533900221
及因其大部分的镜像异构物具有2S构型而具有光学活性；及其中该性类固醇前驱物是去氢表雄固酮。
78.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物在***、子宫或子宫内膜组织不具有***活性。
79.如权利要求5所述的套组，其中该治疗亦降低病患罹患乳癌、子宫癌或子宫内膜癌的风险。
80.如权利要求5所述的套组，其中该治疗亦抑制骨质疏鬆症、高胆固醇血症、高脂血症、动脉粥状硬化、高血压、胰岛素抗性、第2型糖尿病、肌肉耗失、肥胖症、阿滋海默氏Alzheimer症、认知丧失、失忆或***乾燥的发生。
81.如权利要求5所述的套组，其中该抗***是法洛德Faslodex(ICI 182780、氟维司群fulvestrant、7α-[9-(4，4，5，5，5-五氟-戊基亚磺醯基)壬基]雌甾-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二醇)。
82.如权利要求5所述的套组，其中该套组的至少一种组分是用于***内投药的剂型。
83.如权利要求第75项的套组，其中该套组的至少一种组分是用于***内投药的剂型。
84.如权利要求5所述的套组，其中该套组的至少一种组分是用于口服投药的剂型。
85.如权利要求5所述的套组，其中该套组的至少一种组分是用于经皮投药的剂型。
86.如权利要求5所述的套组，其中该选择性***受体调节物是奥培米芬Opemifene。
87.如权利要求3所述的药物组合物，其中该性类固醇前驱物是选自由去氢表雄固酮、硫酸去氢表雄固酮、雄甾-5-烯-3β，17β-二醇及4-雄甾烯-3，17-二酮所组成的组。
88.如权利要求5所述的套组，其中该性类固醇前驱物是选自由去氢表雄固酮、硫酸去氢表雄固酮、雄甾-5-烯-3β，17β-二醇及4-雄甾烯-3，17-二酮所组成的组。
89.如权利要求第75项的套组，其中该选择性***受体调节物是用于***内投药的剂型。
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