CN102430340B - 一种超滤膜膜包的完整性检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种超滤膜膜包的完整性检测方法，首先对新膜包按照标准操作方法正确安装，开启机器，待运转稳定后，对取出的渗透液做HA检测，测血凝价HA，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包不完整，检测结束；如果HA≤3log2，继续进行检测；通过选取敏感病毒、针对其透出液接种鸡胚，经过培养后通过生物检测方法，测定该病毒是否存在于透出液，说明被测超滤膜膜包是否完整。本发明方法简单易行，可在线检测，相比厂家的方法更精确，可用于单个膜包的检测，多个膜包以及***的检测。
Description
技术领域
本发明涉及一种膜包的完整性检测方法，尤其是一种超滤膜膜包的完整性检测方法。
背景技术
膜分离技术依据药效活性与其分子结构及分子量水平密切相关的特性，通过选用不同截留特性的膜组件构成膜分离***对有效成分进行分离、浓缩、纯化。操作通常以压力为推动力，可在常温下完成，无需添加其它物质，具有高选择性的优点。
膜分离包括微滤，超滤与纳滤，都是以压强差为推动力的过程，其分离机理是膜孔对流体中微粒进行筛分。微滤膜是(MF)指孔径在0.1-10um间，超滤膜(UF)孔径0.01-0.1um间，纳滤膜(NF)孔径一般在0.001-0.05um间。通常病毒的粒径一般介于0.01-0.08um，菌液、病毒具有较小的相对分子量，因此使用超滤膜浓缩抗原，效果好，稳定性强，适于一定规模的生产使用。
超滤膜筛分过程，以膜两侧的压力差为驱动力，以超滤膜为过滤介质，在一定的压力下，当原液流过膜表面时，超滤膜表面密布的许多细小的微孔只允许水及小分子物质通过而成为透过液，而原液中体积大于膜表面微孔径的物质则被截留在膜的进液侧，成为浓缩液，因而实现对原液的净化、分离和浓缩的目的。
在使用超滤膜膜包对抗原进行浓缩时，完整的膜包能将水分子渗透出去，富集抗原微粒达到浓缩目的。
超滤膜分离技术有着产品收率高、效率高、能耗低、操作简单、环境友好等优势，在传统药品生产中呈现显著的技术优势，但是由于膜特殊的高分子结构，再生、清洗、利用频率较高，会出现膜渗漏现象。事实上，由于构成膜分离***的膜组件安装管路复杂，连接点较多，因此为膜工作过程中出现异常时，对分离***的查漏工作比较困难。
膜包的完整性是保证分离效果的前提，而膜包纤维的完整性检测大都依赖于膜包厂家的检测方法，而实际应用中发现厂家检测方法检测合格的膜包，对病毒分离效果仍然不好。事实上用于病毒分离，对膜包的要求较高，膜纤维细微的破损会造成病毒泄露，从而造成抗原损失和对环境的污染。
目前膜完整性检测，一般按照设备厂家提供的方法进行泡点试验法检测。打开完整性测试装置的气源，对***加压。在***加压过程中，完整性测试装置上显示的空气流速首先将提高，然后下降至一个稳定的流速。测量到的这个稳定的流速就是空气前进流(扩散流)，如果这个稳定的流速，降低到了可接受规范之下，并且与先前的量值一致，那么说明通过了膜完整性测试。
设备厂家提供的具体检测方法如下：
在对膜堆进行完整性检测之前，***应该经过充分的清洗和冲洗，残留的清洁剂会对结果有很大的影响。确定***清洗好，膜已经完全湿透后，将***内的水排空，将压力可调的气源接在膜堆的进口或回流口，将没有接气源的进口或回流口封闭，透过液口是开放的。慢慢加压到指定气压，然后稳定5分钟让残留水排出。测量并记录气压、温度和从透过口出来的气体流量，气体流量可用气体流量剂测量，比较检测的流量和规定的指标，如果超滤膜不完整，其所测得空气流量将大大超过表中流速指标的上限。
也有的报道用噪音检测法，但由于切向流过滤的压力和流速较大，噪音检测的方法不可取。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种在线检测方法，能检测膜包是否破损的超滤膜膜包的完整性检测方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种超滤膜膜包的完整性检测方法，包括以下步骤：
(1)首先对新膜包按照厂家标准操作方法正确安装，开启机器，待运转稳定后，进行检测；
(2)进行检测时，将含有作为标示抗原的新城疫病毒和需要分离的抗原的抗原液经过超滤膜膜包，取膜包渗出液，对取出的渗透液做HA检测(红细胞凝集试验)，测血凝价HA，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包不完整，检测结束；如果HA≤3log2，继续进行下面步骤(3)检测；
(3)取十日龄无特定抗体的鸡胚10个，其中8个胚每胚尿囊内接种膜包渗出液0.2ml，留2枚作对照，接种后37℃培养120小时，每日照鸡胚，观察2次，如果胚非特异性死亡不超过1个，期间发现死亡的胚立刻置于2-8℃保存，120小时后进行下面步骤(4)检测；
(4)对所有鸡胚取胚液测定血凝价HA，如果HA≤3log2，说明超滤膜膜包的完整，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包的不完整。
所述抗原液中新城疫病毒抗原液按体积比计占0.5-1％。
所述需要分离的抗原为禽流感病毒或鸡新城疫病毒。
本发明的有益效果是：利用病毒的敏感性，以及病毒对红细胞的凝集作用，通过检测凝集价，判定膜包的完整性，方法简单易行，相比厂家的方法更精确，可用于单个膜包的检测，多个膜包以及***的检测。用病毒的效价检测膜的完整性，检测方法简便易行，并且不用停止生产。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明：
本发明的超滤膜膜包的完整性检测方法，包括以下步骤：
(1)首先对新膜包按照厂家标准操作方法正确安装，开启机器，待运转稳定后，进行检测；
(2)进行检测时，将含有作为标示抗原的新城疫病毒和需要分离的抗原的抗原液经过超滤膜膜包，取膜包渗出液，对取出的渗透液做HA检测(红细胞凝集试验)，测血凝价HA，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包不完整，检测结束；如果HA≤3log2，继续进行下面步骤(3)检测；
(3)取十日龄无特定抗体的鸡胚10个，其中8个胚每胚尿囊内接种膜包渗出液0.2ml，留2枚作对照，接种后37℃培养120小时，每日照鸡胚，观察2次，如果胚非特异性死亡不超过1个，期间发现死亡的胚立刻置于2-8℃保存，120小时后进行下面步骤(4)检测；
(4)对所有鸡胚取胚液测定血凝价HA，如果HA≤3log2，说明超滤膜膜包的完整，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包的不完整。
所述抗原液中新城疫病毒抗原液按体积比计占0.5-1％。
所述需要分离的抗原为禽流感病毒或鸡新城疫病毒。
鸡新城疫病毒病毒(NDV)属于副粘病毒科，副粘病毒属，核酸为单链RNA。成熟的病毒粒子呈球形，直径为120-300nm。由螺旋形对称盘绕的核衣壳和囊膜组成。囊膜表面有放射状排列的纤突，其中含有神经氨酸酶，因此病毒能吸附在禽类的红血球表面，引起红血球的凝集。新城疫病毒的半数感染量EID50：每0.1ml病毒含量≥108EID50。鸡新城疫病毒的粒径较小，据有凝血性，稀释较高滴度时仍有灵敏的凝血现象，同时由于检测方法简单易行，可作为灵敏的指示剂。
而对抗原含量测定时以通过红细胞凝集试验，检测HA效价为主。并且测定简便、快捷、易行，在生产中便于实行。
下面具体进行说明：
测定血凝价HA的方法，又称红细胞凝集试验法，详见《中华人民共和国兽用生物制品规程》2000年版红细胞凝集试验。
所采用膜包购于颇尔公司，膜包的截留分子量100kd，本超滤膜堆，截留分子量10万分子量，有效过滤面积为0.5m2，压力0.6MPa。
另外，可以对新膜包按照标准操作方法正确安装，开启机器，待运转稳定后，取下流渗出液，分别测血凝价HA，作为完整性的参照值。下述实施例中的百分比为体积百分比。
实施例1
(1)首先对新膜包按照厂家标准操作方法正确安装，开启机器，待运转稳定后，进行检测；
(2)进行检测时，将含有0.5％作为标示抗原的新城疫病毒和99.5％需要分离的禽流感病毒的抗原液经过超滤膜膜包，取膜包渗出液10ml，对取出的渗透液做HA检测(红细胞凝集试验)，测血凝价HA，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包不完整，检测结束；如果HA≤3log2，继续进行下面步骤(3)检测；
(3)取十日龄无特定抗体的鸡胚10个，其中8个胚每胚尿囊内接种膜包渗出液0.2ml，留2枚作对照，接种后37℃培养120小时，每日照鸡胚，观察2次，如果胚非特异性死亡不超过1个，期间发现死亡的胚立刻置于2-8℃保存，120小时后进行下面步骤(4)检测；
(4)对所有鸡胚取胚液(尿囊液和羊水)测定血凝价HA，如果HA≤3log2，说明超滤膜膜包的完整，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包的不完整。
实施例2
(1)首先对新膜包按照厂家标准操作方法正确安装，开启机器，待运转稳定后，进行检测；
(2)进行检测时，将含有1％作为标示抗原的新城疫病毒和99％需要分离的禽流感病毒的抗原液经过超滤膜膜包，取膜包渗出液10ml，对取出的渗透液做HA检测(红细胞凝集试验)，测血凝价HA，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包不完整，检测结束；如果HA≤3log2，继续进行下面步骤(3)检测；
(3)取十日龄无特定抗体的鸡胚10个，其中8个胚每胚尿囊内接种膜包渗出液0.2ml，留2枚作对照，接种后37℃培养120小时，每日照鸡胚，观察2次，如果胚非特异性死亡不超过1个，期间发现死亡的胚立刻置于2-8℃保存，120小时后进行下面步骤(4)检测；
(4)对所有鸡胚取胚液(尿囊液和羊水)测定血凝价HA，如果HA≤3log2，说明超滤膜膜包的完整，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包的不完整。
实施例3
(1)首先对新膜包按照厂家标准操作方法正确安装，开启机器，待运转稳定后，进行检测；
(2)进行检测时，将新城疫病毒的抗原液经过超滤膜膜包，取膜包渗出液10ml，对取出的渗透液做HA检测(红细胞凝集试验)，测血凝价HA，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包不完整，检测结束；如果HA≤3log2，继续进行下面步骤(3)检测；
(3)取十日龄无特定抗体的鸡胚10个，其中8个胚每胚尿囊内接种膜包渗出液0.2ml，留2枚作对照，接种后37℃培养120小时，每日照鸡胚，观察2次，如果胚非特异性死亡不超过1个，期间发现死亡的胚立刻置于2-8℃保存，120小时后进行下面步骤(4)检测；
(4)对所有鸡胚取胚液(尿囊液和羊水)测定血凝价HA，如果HA≤3log2，说明超滤膜膜包的完整，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包的不完整。
综上所述，本发明的内容并不局限在上述的实施例中，相同领域内的有识之士可以在本发明的技术指导思想之内可以轻易提出其他的实施例，但这种实施例都包括在本发明的范围之内。
Claims (2)
1.一种超滤膜膜包的完整性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）首先对新膜包按照厂家标准操作方法正确安装，开启机器，待运转稳定后，进行检测；
（2）进行检测时，将含有作为标示抗原的新城疫病毒和需要分离的抗原的抗原液经过超滤膜膜包，取膜包渗出液，对取出的渗透液做HA检测，测血凝价HA，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包不完整，检测结束；如果HA≤3log2，继续进行下面步骤（3）检测，所述抗原液中新城疫病毒抗原液按体积比计占0.5-1%；
（3）取十日龄无特定抗体的鸡胚10个，其中8个胚每胚尿囊内接种膜包渗出液0.2ml，留2枚作对照，接种后37℃培养120小时，每日照鸡胚，观察2次，如果胚非特异性死亡不超过1个，期间发现死亡的胚立刻置于2-8℃保存，120小时后进行下面步骤（4）检测；
（4）对所有鸡胚取胚液测定血凝价HA，如果HA≤3log2，说明超滤膜膜包的完整，如果HA＞3log2，说明超滤膜膜包的不完整。
2.根据权利要求1所述的超滤膜膜包的完整性检测方法，其特征在于，所述需要分离的抗原为禽流感病毒或鸡新城疫病毒。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: TIANJIN RUIPU BIOTECHNOLOGY CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: TIANJIN RINGPU GAOKE BIOPHARMACEUTICAL CO., LTD. Effective date: 20120919 |
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| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 300380 XIQING, TIANJIN TO: 300308 BINHAI NEW DISTRICT, TIANJIN |
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| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20120919 Address after: 300308 Tianjin Binhai New Area Airport Economic Zone Ring Road No. 76 West Airport Business District W2 Applicant after: Tianjin Ruipu Biotechnology Co., Ltd. Address before: 300380, No. 6, Taixing Road, Xin Dao Town Industrial Park, Xiqing District, Tianjin Applicant before: Tianjin Ringpu Bio-Technology Co., Ltd. |
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Application publication date: 20120502 Assignee: Hunan Sinoland Biological Pharmaceutical Co., Ltd. Assignor: Tianjin Ruipu Biotechnology Co., Ltd. Contract record no.: 2014120000052 Denomination of invention: Method for testing integrity of ultra-filtration membrane envelope Granted publication date: 20130918 License type: Exclusive License Record date: 20140708 |
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| LICC | Enforcement, change and cancellation of record of contracts on the licence for exploitation of a patent or utility model | ||
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| EC01 | Cancellation of recordation of patent licensing contract |
Assignee: Hunan Sinoland Biological Pharmaceutical Co., Ltd. Assignor: Tianjin Ruipu Biotechnology Co., Ltd. Contract record no.: 2014120000052 Date of cancellation: 20180628 |