CN102424635B - 草莓专用复合抗重茬剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于微生物复配制剂的制备，特别是指一种草莓专用复合抗重茬剂的制备方法。包括细黄链霉菌抗生菌剂的制备，微量元素添加剂的配制，将微生物菌肥生物钾磷复合肥与细黄链霉菌抗生菌剂和微量元素添加剂按比例复配制成草莓专用复合抗重茬剂。本发明解决了现有技术存在的采用化学熏蒸法解决草莓重茬病所带来的成本高、毒性大等问题，具有改善了土壤的微生态环境，为草莓生长提供了磷钾营养元素。在草莓种植中使用本发明生产的专用抗重茬剂可以有效地实现增产，并可提高果品的可溶性固形物、含糖量、糖酸比等品质。

Description

草莓专用复合抗重茬剂的制备方法

技术领域

本发明属于微生物复配制剂的制备，特别是指一种草莓专用复合抗重茬剂的制备方法。

背景技术

草莓浆果鲜红艳丽，芳香多汁，甜酸可口，营养丰富，被视为果中珍品。目前全国已有栽培草莓面积近4万公顷，产量20多万吨。草莓重茬病是草莓生产的重要问题，国内外的研究表明，造成作物重茬的主要原因是土壤营养元素的缺乏和土传病害所致，草莓在同一田块上连作2年一般减产10-15%，连作3年减产20%-25%，连作4年以上减产40%以上，严重者甚至绝收。

草莓种植过程中，特别是连作种植极易造成土壤的营养元素缺乏，合理有效地补充相关元素是现代农业种植中的一项重要措施。草莓病害以土传病害为主，常见的炭疽病、灰霉病、白粉病和根腐病等都是由细菌和霉菌传播的；病毒病主要有草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒、草莓镶脉病毒等多种植物病毒，主要由蚜虫传播；草莓的虫害主要的有草莓芽线虫、草莓根腐线虫、红蜘蛛和蚜虫。

目前草莓要连种普遍采用的方法就是化学熏蒸法。该方法使用成本高达每公顷一万五千元以上，仅当年有效，同时熏蒸用化学物质大多是剧毒物，对大气和土壤都有严重的破坏。在草莓产业化市场不断扩大的情况下，对绿色无公害产品的需求也日益扩大。草莓重茬病的生物防治，对环保和绿色食品的要求，对提高草莓国际市场竞争力都具有非常重要的意义。

随着绿色食品、绿色农业的发展，生物肥料开始大规模使用于现代化农业种植上，在生物肥料中，微生物肥料以其用量少、成本低、作用效果显著而成为首选。具有解钾作用的胶质芽孢杆菌和具有解磷作用的巨大芽孢杆菌制成的钾磷复合肥是近年来生物肥料市场的广泛使用的一种微生物活菌制剂。微生物肥料在培肥地力，提高化肥利用率，净化和修复土壤，降低农作物病害发生，保护环境，以及提高农作物产品品质和食品安全等方面都表现出了不可替代的作用。

细黄链霉菌（Streptomyces  micrcflav )是一株对多种病原菌有拮抗作用的抗生性放线菌，用此菌株生产的抗生菌肥，不但能抑制多种病原菌的生长，还具有刺激作物发芽、生根等作用。放线菌肥料在多年的使用中，取得了良好的抗病、增产效果。目前用细黄链霉菌生产抗生菌肥有固体和液体发酵两种方法，固体发酵生产周期较长，产品质量不稳定；液体发酵产品以菌丝体的形式存在，不形成孢子，一方面不利于保藏和贮存，产品保质期短，另一方面在应用中菌丝体的效果也没有孢子好。

发明内容

本发明的目的在于提供一种草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，利用液体菌种和固体发酵相结合的方法，发酵生产细黄链霉菌抗生菌肥，保证了产品质量的稳定和大量的孢子形成。根据草莓的需肥特点添加微量元素，并与具有解磷解钾功能的微生物菌肥——生物磷钾肥复配，生产出多功能防治草莓重茬病的生物制剂——草莓专用复合抗重茬剂，该产品既可以解决由土传病菌引起的重茬问题，又可以解决由土壤缺素引起的重茬问题，同时由于加入了解磷解钾菌株，在植物根部形成了有益微生物菌群，改善了土壤的微生态环境，也为草莓生长提供了磷钾营养元素。

    本发明的整体技术构思是：

草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，包括如下工艺步骤：

A、细黄链霉菌抗生菌剂的制备

A1、液体种子的制备

将原始菌种接种至灭菌后的液体培养基中进行摇床培养制成液体种子，培养条件为转速180转/分钟、培养温度28℃-30℃、培养周期24小时；接种时加入约5毫升无菌水在试管菌种中，用接种针刮起菌苔，制成菌悬液，每支斜面接种3-5个三角瓶；

上述液体培养基由如下质量百分比的原料组成：

玉米粉1.8%-2%，豆饼粉2%-2.5%，淀粉0.8%-1.2%，余量为水；

原始菌种选用菌株细黄链霉菌（Streptomyces  micrcflav ) ，其保藏编号为CGMCC4.891；

A2、固体发酵

A2-1曲盘培养：将步骤A1中制备的液体种子接种到灭菌后的曲盘培养基进行培养，接种量为液体种子与灭菌后的曲盘培养基的质量比等于5%-8%，培养条件为温度28℃-30℃、湿度50%-70%、培养周期5-6天，待基质全部出现粉色孢子，香味浓郁时出料；

曲盘培养的培养基由如下质量百分比的原料组成：

豆饼粉4%-5%，石灰1.5%-2%，甘薯粉12%-15%，锯末15%-20%，细土33%-35%，余量为水；

A2-2后熟：出料时翻动并打碎料块，在40℃-45℃条件下，干燥至含水质量百分含量为10%-15%，粉碎制成细黄链霉菌抗生菌剂；

B、微量元素添加剂的配制

按照NY1428-2007标准《微量元素水溶肥料》的要求配制微量元素添加剂，其中硼、锌、钼、锰元素含量之和不低于微量元素添加剂总质量的10%；

C、草莓专用复合抗重茬剂的复配

按照细黄链霉菌抗生菌剂：微生物菌肥生物钾磷复合肥：微量元素添加剂的质量比=30-34：65-69.2：0.8-1的比例，将上述物料混配均匀制成草莓专用复合抗重茬剂。

    本发明中具体的工艺步骤及技术参数是：

所述的步骤A1中液体种子培养基的灭菌条件是温度为121℃，时间为25-35分钟。

所述的步骤A2-1中曲盘培养基的灭菌条件是温度为121℃，时间为50-60分钟。

所述的步骤A2-1的曲盘培养基中锯末细度为10目-20目，细土的颗粒度为50目-70目，其余固体物料的颗粒度为60目-80目。

所述的步骤A2-1中曲盘培养出料前取样并用平板计数法测定孢子含量，孢子含量不低于80亿个/克。

所述的步骤B的微量元素添加剂中的微量元素可以选用多种溶于水后硼、锌、钼、锰元素以离子形态的化合物，并不脱离本发明的实质。其中较为优选的技术方案是，硼元素选自硼砂或硼酸中的一种，锌元素选自硫酸锌或氯化锌中的一种，钼元素选自钼酸铵，锰元素选自硫酸锰。

所述的步骤B的微量元素添加剂按照质量比为硼砂或硼酸：硫酸锌或氯化锌：钼酸铵：硫酸锰=45-55：25-35：15-25：10-20的比例配制。

步骤C中微生物菌肥生物钾磷复合肥选用执行GB20287-2006标准,微生物有效菌含量2亿个/克以上的生物钾磷或磷钾微生物复合肥。较为优选的是微生物菌肥生物钾磷复合肥选用河北省微生物研究所生产的“冀微”牌生物钾磷肥或复合菌剂、湖南豫园生物科技有限公司生产的“豫园”牌通用型菌种粉、北京世纪阿姆斯生物技术有限公司生产的“阿姆斯”牌生物磷钾肥中的一种。

    利用本发明的方法所制备的草莓专用复合抗重茬剂的实验结果如下：

    申请人在保定市郊选已经种植了二年草莓的连作大棚，进行抗重茬剂的使用效果试验。

草莓品种为丰香。对照组ck用溴甲烷熏蒸，试验组分别按每公顷60（处理1）和80（处理2）公斤施用抗重茬剂，定植前均匀地施入定植穴内。在种植和生长期间管理和施肥都按常规方法进行。

分次采收商品果并用电子天平称重，统计总产量；用铁***法测定可溶性糖；用标准氢氧化钠滴定法测定可滴定酸；用2.6—二氯靛酚法测定维生素C的含量；用折射仪法测定可溶性固形物。其中糖、酸和维生素C的测定方法均为植物生理生化实验测定的常规方法，可溶性固形物的测定方法符合GB/T 12295-90《水果、蔬菜制品可溶性固形物含量的测定—折射仪法》的要求。

试验结果见表1：

表1   草莓专用复合抗重茬剂对连作草莓产量和质量的影响

试验结果表明与对照ck相比，处理1和处理2 对草莓的产量和果实的品质均有较高的提高，产量增幅分别达到了6.71%和6.84%；抗重茬剂处理显著提高了草莓果实的含糖量，增加了12.87%和11.20%；糖酸比增加了19.86%和18.66%；可溶性固形物增加了15.95%和16.56%；维生素C含量增加了23.81%和23.25%。提高了果实品质，也增加了经济效益。

本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于：

经实验证明，采用本发明制备的产品既可以解决由土传病菌引起的重茬问题，又可以解决由土壤缺素引起的重茬问题，同时由于加入了解磷解钾菌株，在植物根部形成了有益微生物菌群，改善了土壤的微生态环境，也为草莓生长提供了磷钾营养元素。在草莓种植中使用本发明生产的专用抗重茬剂可以有效地减少由于重茬问题引起的减产，平均增加产量5%-10%，果品的可溶性固形物、含糖量、糖酸比等品质也有明显的提高。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步描述，但不作为对本发明的限定，本发明的保护范围以权利要求书记载的内容为准，任何依据本说明书所作出的等效技术手段替换均不脱离本发明的保护范围。

实施例1

草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，包括如下工艺步骤：

A、细黄链霉菌抗生菌剂的制备

A1、液体种子的制备

将原始菌种接种至灭菌后的液体培养基中进行摇床培养制成液体种子，培养条件为转速180转/分钟、培养温度28℃、培养周期24小时；接种时加入约5毫升无菌水在试管菌种中，用接种针刮起菌苔，制成菌悬液，每支斜面接种3-5个三角瓶；

上述液体培养基由如下质量百分比的原料组成：

玉米粉1.8%，豆饼粉2%，淀粉0.8%，余量为水；

原始菌种选用菌株细黄链霉菌（Streptomyces  micrcflav ) ，其保藏编号为CGMCC4.891；

A2、固体发酵

A2-1曲盘培养：将步骤A1中制备的液体种子接种到灭菌后的曲盘培养基进行培养，接种量为液体种子与灭菌后的曲盘培养基的质量比等于5%，培养条件为温度28℃、湿度50%、培养周期5天，待基质全部出现粉色孢子，香味浓郁时出料；

曲盘培养的培养基由如下质量百分比的原料组成：

豆饼粉4%，石灰1.5%，甘薯粉12%，锯末15%，细土33%，余量为水；

A2-2后熟：出料时翻动并打碎料块，在40℃条件下，干燥至含水质量百分含量为10%，粉碎制成细黄链霉菌抗生菌剂；

B、微量元素添加剂的配制

按照NY1428-2007标准《微量元素水溶肥料》的要求配制微量元素添加剂，其中硼、锌、钼、锰元素含量之和不低于微量元素添加剂总质量的10%；

C、草莓专用复合抗重茬剂的复配

按照细黄链霉菌抗生菌剂：微生物菌肥生物钾磷复合肥：微量元素添加剂的质量比=30：69.2：0.8的比例，将上述物料混配均匀制成草莓专用复合抗重茬剂。

    所述的步骤A1中液体种子培养基的灭菌条件是温度为121℃，时间为25分钟。

所述的步骤A2-1中曲盘培养基的灭菌条件是温度为121℃，时间为50分钟。

所述的步骤A2-1的曲盘培养基中锯末细度为10目，细土的颗粒度为50目，其余固体物料的颗粒度为60目。

所述的步骤A2-1中曲盘培养出料前取样并用平板计数法测定孢子含量，孢子含量不低于80亿个/克。

所述的步骤B的微量元素添加剂中的硼元素选自硼砂，锌元素选自硫酸锌，钼元素选自钼酸铵，锰元素选自硫酸锰。

所述的步骤B的微量元素添加剂按照质量比为硼砂：硫酸锌：钼酸铵：硫酸锰=45：30：15：10的比例配制。

步骤C中微生物菌肥生物钾磷复合肥选用执行GB20287-2006标准,微生物有效菌含量2亿个/克以上的生物钾磷或磷钾微生物复合肥。微生物菌肥生物钾磷复合肥选用河北省微生物研究所生产的“冀微”牌生物钾磷肥或复合菌剂。

实施例2

草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，包括如下工艺步骤：

A、细黄链霉菌抗生菌剂的制备

A1、液体种子的制备

将原始菌种接种至灭菌后的液体培养基中进行摇床培养制成液体种子，培养条件为转速180转/分钟、培养温度30℃、培养周期24小时；接种时加入约5毫升无菌水在试管菌种中，用接种针刮起菌苔，制成菌悬液，每支斜面接种3-5个三角瓶；

上述液体培养基由如下质量百分比的原料组成：

玉米粉2%，豆饼粉2.5%，淀粉1.2%，余量为水；

原始菌种选用菌株细黄链霉菌（Streptomyces  micrcflav ) ，其保藏编号为CGMCC4.891；

A2、固体发酵

A2-1曲盘培养：将步骤A1中制备的液体种子接种到灭菌后的曲盘培养基进行培养，接种量为液体种子与灭菌后的曲盘培养基的质量比等于8%，培养条件为温度30℃、湿度70%、培养周期6天，待基质全部出现粉色孢子，香味浓郁时出料；

曲盘培养的培养基由如下质量百分比的原料组成：

豆饼粉%，石灰%，甘薯粉15%，锯末20%，细土35%，余量为水；

A2-2后熟：出料时翻动并打碎料块，在45℃条件下，干燥至含水质量百分含量为15%，粉碎制成细黄链霉菌抗生菌剂；

B、微量元素添加剂的配制

按照NY1428-2007标准《微量元素水溶肥料》的要求配制微量元素添加剂，其中硼、锌、钼、锰元素含量之和不低于微量元素添加剂总质量的10%；

C、草莓专用复合抗重茬剂的复配

按照细黄链霉菌抗生菌剂：微生物菌肥生物钾磷复合肥：微量元素添加剂的质量比=34：65：1的比例，将上述物料混配均匀制成草莓专用复合抗重茬剂。

    所述的步骤A1中液体种子培养基的灭菌条件是温度为121℃，时间为35分钟。

所述的步骤A2-1中曲盘培养基的灭菌条件是温度为121℃，时间为60分钟。

所述的步骤A2-1的曲盘培养基中锯末细度为20目，细土的颗粒度为70目，其余固体物料的颗粒度为80目。

所述的步骤A2-1中曲盘培养出料前取样并用平板计数法测定孢子含量，孢子含量不低于80亿个/克。

所述的步骤B的微量元素添加剂中的硼元素选自硼酸，锌元素选自氯化锌，钼元素选自钼酸铵，锰元素选自硫酸锰。

所述的步骤B的微量元素添加剂按照质量比为硼酸：氯化锌：钼酸铵：硫酸锰=50：25：15：10的比例配制。

步骤C中微生物菌肥生物钾磷复合肥选用执行GB20287-2006标准,微生物菌肥生物钾磷复合肥选用湖南豫园生物科技有限公司生产的“豫园”牌通用型菌种粉。

实施例3

草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，包括如下工艺步骤：

A、细黄链霉菌抗生菌剂的制备

A1、液体种子的制备

将原始菌种接种至灭菌后的液体培养基中进行摇床培养制成液体种子，培养条件为转速180转/分钟、培养温度29℃、培养周期24小时；接种时加入约5毫升无菌水在试管菌种中，用接种针刮起菌苔，制成菌悬液，每支斜面接种3-5个三角瓶；

上述液体培养基由如下质量百分比的原料组成：

玉米粉2%，豆饼粉2.3%，淀粉1%，余量为水；

原始菌种选用菌株细黄链霉菌（Streptomyces  micrcflav ) ，其保藏编号为CGMCC4.891；

A2、固体发酵

A2-1曲盘培养：将步骤A1中制备的液体种子接种到灭菌后的曲盘培养基进行培养，接种量为液体种子与灭菌后的曲盘培养基的质量比等于5%-8%，培养条件为温度29℃、湿度60%、培养周期6天，待基质全部出现粉色孢子，香味浓郁时出料；

曲盘培养的培养基由如下质量百分比的原料组成：

豆饼粉4.5%，石灰1.8%，甘薯粉13%，锯末16%，细土35%，余量为水；

A2-2后熟：出料时翻动并打碎料块，在42℃条件下，干燥至含水质量百分含量为13%，粉碎制成细黄链霉菌抗生菌剂；

B、微量元素添加剂的配制

按照NY1428-2007标准《微量元素水溶肥料》的要求配制微量元素添加剂，其中硼、锌、钼、锰元素含量之和不低于微量元素添加剂总质量的10%；

C、草莓专用复合抗重茬剂的复配

按照细黄链霉菌抗生菌剂：微生物菌肥生物钾磷复合肥：微量元素添加剂的质量比=32：67：1的比例，将上述物料混配均匀制成草莓专用复合抗重茬剂。

    所述的步骤A1中液体种子培养基的灭菌条件是温度为121℃，时间为30分钟。

所述的步骤A2-1中曲盘培养基的灭菌条件是温度为121℃，时间为55分钟。

所述的步骤A2-1的曲盘培养基中锯末细度为10目-20目，细土的颗粒度为60目，其余固体物料的颗粒度为70目。

所述的步骤A2-1中曲盘培养出料前取样并用平板计数法测定孢子含量，孢子含量不低于80亿个/克。

所述的步骤B的微量元素添加剂中的硼元素选自硼砂，锌元素选自硫酸锌，钼元素选自钼酸铵，锰元素选自硫酸锰。

所述的步骤B的微量元素添加剂按照质量比为硼砂：硫酸锌：钼酸铵：硫酸锰=50：25：10：15的比例配制。

步骤C中微生物菌肥生物钾磷复合肥选用执行GB20287-2006标准,微生物有效菌含量2亿个/克以上的生物钾磷或磷钾微生物复合肥。微生物菌肥生物钾磷复合肥选用北京世纪阿姆斯生物技术有限公司生产的“阿姆斯”牌生物磷钾肥。

Claims (8)

1.草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，其特征在于包括如下工艺步骤：

A、细黄链霉菌抗生菌剂的制备

A1、液体种子的制备

将原始菌种接种至灭菌后的液体培养基中进行摇床培养制成液体种子，培养条件为转速180转/分钟、培养温度28℃-30℃、培养周期24小时；接种时加入约5毫升无菌水在试管菌种中，用接种针刮起菌苔，制成菌悬液，每支斜面接种3-5个三角瓶；

上述液体培养基由如下质量百分比的原料组成：

玉米粉1.8％-2％，豆饼粉2％-2.5％，淀粉0.8％-1.2％，余量为水；

原始菌种选用菌株细黄链霉菌(Streptomyces micrcflav)，其保藏编号为CGMCC4.891；

A2、固体发酵

A2-1曲盘培养：将步骤A1中制备的液体种子接种到灭菌后的曲盘培养基进行培养，接种量为液体种子与灭菌后的曲盘培养基的质量比等于5％-8％，培养条件为温度28℃-30℃、湿度50％-70％、培养周期5-6天，待基质全部出现粉色孢子，香味浓郁时出料；

曲盘培养的培养基由如下质量百分比的原料组成：

豆饼粉4％-5％，石灰1.5％-2％，甘薯粉12％-15％，锯末15％-20％，细土33％-35％，余量为水；

步骤A2-1中曲盘培养出料前取样并用平板计数法测定孢子含量，孢子含量不低于80亿个/克；

A2-2后熟：出料时翻动并打碎料块，在40℃-45℃条件下，干燥至含水质量百分含量为10％—15％，粉碎制成细黄链霉菌抗生菌剂；

B、微量元素添加剂的配制

按照NY1428-2007标准《微量元素水溶肥料》的要求配制微量元素添加剂，其中硼、锌、钼、锰元素含量之和不低于微量元素添加剂总质量的10％；

C、草莓专用复合抗重茬剂的复配

按照细黄链霉菌抗生菌剂：微生物菌肥生物钾磷复合肥：微量元素添加剂的质量比＝30-34：65-69.2：0.8-1的比例，将上述物料混配均匀制成草莓专用复合抗重茬剂。

2.根据权利要求1所述的草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，其特征在于所述的步骤A1中液体种子培养基的灭菌条件是温度为121℃，时间为25-35分钟。

3.根据权利要求1所述的草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，其特征在于所述的步骤A2-1中曲盘培养基的灭菌条件是温度为121℃，时间为50-60分钟。

4.根据权利要求1所述的草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，其特征在于所述的步骤A2-1的曲盘培养基中锯末细度为10目-20目，细土的颗粒度为50目-70目，其余固体物料的颗粒度为60目-80目。

5.根据权利要求1所述的草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，其特征在于所述的步骤B的微量元素添加剂中硼元素选自硼砂或硼酸中的一种，锌元素选自硫酸锌或氯化锌中的一种，钼元素选自钼酸铵，锰元素选自硫酸锰。

6.根据权利要求5所述的草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，其特征在于所述的步骤B的微量元素添加剂按照质量比为硼砂或硼酸：硫酸锌或氯化锌：钼酸铵：硫酸锰＝45-55：25-35：15-25：10-20的比例配制。

7.根据权利要求1所述的草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，其特征在于所述的步骤C中微生物菌肥生物钾磷复合肥选用执行GB20287-2006标准,微生物有效菌含量2亿个/克以上的生物钾磷或磷钾微生物复合肥。

8.根据权利要求1或7所述的草莓专用复合抗重茬剂的制备方法，其特征在于所述的步骤C中微生物菌肥生物钾磷复合肥选用河北省微生物研究所生产的“冀微”牌生物钾磷肥或复合菌剂、湖南豫园生物科技有限公司生产的“豫园”牌通用型菌种粉、北京世纪阿姆斯生物技术有限公司生产的“阿姆斯”牌生物磷钾肥中的一种。