CN102406942A - 一种制备纳豆激酶环糊精包合物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备纳豆激酶的环糊精包合物的方法，利用β-环糊精和羟丙基-β-环糊精作为包合材料制备纳豆激酶环糊精包合物。其特征在于它包括如下步骤：1)原料的选取：β-环糊精、羟丙基-β-环糊精和纳豆激酶(28000-30000IU/mg)；2)纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的β-环糊精和羟丙基-β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物；3)鉴定：通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定，测定包合率和包合比。
Description
技术领域
本发明涉及一种制备纳豆激酶的环糊精包合物的方法，属于生物合成领域。
背景技术
纳豆激酶是纳豆在发酵过程中由纳豆枯草杆菌(Bacillus subtilis/natto)产生的一种丝氨酸蛋白酶，可水解纤维蛋白成小肽和氨基酸，和蚯蚓纤溶酶、蛇毒纤溶酶一样可直接溶解血栓，研究发现，纳豆激酶具有纤溶活性，能够预防和抑制血栓产生与扩增，是治疗血栓和预防血栓病的具有潜在药用价值的物质。
环糊精系淀粉经酶解环合后得到的由6个以上葡萄糖分子连结而成的环状低聚化合物，本身基本无毒、无刺激性，因具有环状中空圆筒状结构而呈现一系列特殊性质，具有疏水性的内腔和亲水性的外表，是药物制剂、食品工业、化妆品工业等方面应用较广的新型包合材料。药物经环糊精包合后，由于其“外壳”的屏障作用，可改善环境因素对药物的降解，包合后不仅有利于溶液型制剂的制备，而且可提高口服制剂的生物利用度，减少服药剂量，药物经包合后提高了其亲脂性，易于通过血脑屏障到达组织，因此提高了纳豆激酶对脑血栓的治疗效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种制备纳豆激酶的环糊精包合物的方法。该方法工艺简单，可提高纳豆激酶的生物利用度、亲脂性和疗效。
本发明的技术方案为：
1)原料的选取：β-环糊精、羟丙基-β-环糊精和纳豆激酶(酶活为28000-30000IU/mg)
2)纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的β-环糊精和羟丙基-β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为1000-3000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率40hz和60hz，功率是600w。
3)通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定，包合率为92.15％，包合比为6∶1。
本发明的益处：
1、有利于溶液型制剂的制备，而且可提高口服制剂的生物利用度，减少服药剂量；
2、提高了其亲脂性，易于通过血脑屏障到达组织，因此提高了纳豆激酶对脑血栓的治疗
2、提高了其亲脂性，易于通过血脑屏障到达组织，因此提高了纳豆激酶对脑血栓的治疗效果；
3、提高了纳豆激酶的稳定性；
4、提高了纳豆激酶在体内的半衰期，提高了用药安全性，延长了纳豆激酶的作用时间，控制了溶栓速度以防止缺血再灌注损伤的发生。
本发明制备的包合物经动物实验表明：具有明显的溶栓效果，效果明显优于相同剂量的纳豆激酶。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明：
1、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为1000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率40hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
2、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为1000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率60hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
3、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为2000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率40hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
4、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为2000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率60hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
5、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为3000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率40hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
6、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为3000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率60hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
7、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的羟丙基-β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为1000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率40hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
8、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的羟丙基-β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为1000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率60hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
9、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的羟丙基-β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为2000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率40hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
10、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的羟丙基-β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为2000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率60hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
11、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的羟丙基-β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为3000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率40hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
12、纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的羟丙基-β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为3000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物。
所使用的超声条件是：频率60hz，功率是600w。
通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定。
Claims (5)
1.应用环糊精制备纳豆激酶包合物的方法，其特征在于包括如下制备过程：
1)原料的选取：β-环糊精、羟丙基-β-环糊精和纳豆激酶(酶活为28000-30000IU/mg)
2)纳豆激酶包合物的制备：分别配制饱和的β-环糊精和羟丙基-β-环糊***溶液和一定浓度的纳豆激酶(酶活为1000-3000IU/ml)，常温下超声振荡，再搅拌1h，过滤，滤液冷冻干燥得纳豆激酶-β-环糊精或纳豆激酶-羟丙基-β-环糊精包合物；
3)鉴定：通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定，测定包合率和包合比。
2.根据权利要求1所述的制备纳豆激酶包合物的方法，其特征在于选择的包合材料是β-环糊精、羟丙基-β-环糊精。
3.根据权利要求1所述的制备纳豆激酶包合物的方法，其特征在于选择的纳豆激酶的酶活为28000-30000IU/mg。
4.根据权利要求1所述的制备纳豆激酶包合物的方法，其特征在于所使用的超声条件是：频率40hz和60hz，功率是600w。
5.根据权利要求1所述的制备纳豆激酶包合物的方法，其特征在于通过差示扫描量热法和X射线衍射法对包合物进行鉴定，包合率为92.15％，包合比为6∶1。
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| CN107259366A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-10-20 | 福建德广中草药有限公司 | 一种大豆酵素及其制备方法、应用 |
| CN107412750A (zh) * | 2017-04-10 | 2017-12-01 | 乐研新生物科技（成都）有限公司 | 含高活性纳豆激酶的组合物及其制备方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120411 |