CN102370630B - 重组人生长激素rhGH长效缓释微囊及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药领域,具体的涉及重组人生长激素rhGH长效缓释微囊及其制备方法。根据本发明的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,通过包括以下步骤的方法制备:1)将两嵌段两亲性聚合物材料溶于有机溶剂中,形成油相O;2)将含重组人生长激素rhGH的水溶液W1或颗粒S加入步骤1)所得到的油相O中,乳化制备W1/O或S/O初乳,W1为内水相;3)将初乳加入到含有稳定剂的外水相中W2,形成W1/O/W2或S/O/W2预复乳;4)将步骤3)所得的W1/O/W2或S/O/W2预复乳用压力通过微孔膜,得到W1/O/W2或S/O/W2复乳液;5)将复乳液中有机溶剂去除固化、离心洗涤、冷冻干燥。通过本发明得到的微囊尺寸均一、包埋率高、活性高、突释低、重复性好且操作简单有利于药物疗效的活性和工业化放大生产。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域,具体的涉及重组人生长激素rhGH长效缓释微囊及其制备方法。
背景技术
重组人生长激素(rhGH)是临床上广泛应用于治疗矮小症、严重烧伤、艾滋病患者的脂肪代谢障碍等多种疾病的药物,体内的半衰期短(0.5小时),急需开发rhGH长效缓释制剂。传统rhGH微囊的制备方法主要是机械搅拌或利用均质仪,制得的微囊粒径非常大,达到几十甚至上百微米,且大小不可控。粒径不均一导致药物在小粒径微囊中分布不均,包埋率难以提高,而且势必造成制备、治疗重复性差的问题,难以报批临床;其次,较大的粒径在应用时还会受到给药途径的限制;另外均质等剧烈的乳液制备方法也会导致rhGH在包埋过程中失活,难以保持药物的活性。虽然目前对rhGH的微囊进行了大量的研究,但目前还没有真正商品化的rhGH长效缓释制剂产品。1999年美国FDA批准第一个载rhGH的聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)微囊,但可能由于放大生产中出现了药物突释率高于20%,释放达不到一个月等一系列问题,已撤出市场。
目前已有Gang Ruan等人在Biomaterials中指出用三嵌段聚合物材料(PLA-PEG-PLA)包埋紫杉醇能达到持续释放一个月的效果。但三嵌段结构的材料,其亲水性PEG受到两端PLA空间位阻的影响,降低了对乳液的稳定作用,导致药物包埋率难以提高(64~82%)。
被包埋药物的生物活性保持也是限制载药聚合物微囊进入临床应用的主要问题,疏水性的有机溶剂和疏水性的聚合物材料对所包埋的蛋白药物的生物活性影响很大。中国专利(公开号CN1187120)中使用的包埋rhGH微球材料是疏水性的聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA)共聚物,大鼠皮下注射该微球6天以后,体内产生了抗hGH抗体,说明被包埋的hGH在释放过程中由于PLGA降解产生的酸性寡聚体导致聚集。hGH聚集后产生免疫原性,这种具有免疫原性的hGH没有活性,降低了载药微囊的药物利用度。
中国专利(公开号CN1187120)也公开了一种延续释放人生长激素(hGH)组合物的制备及使用方法,该技术解决了一个月内给对象提供延续释放治疗有效血液水平剂量的hGH的问题,但需要用金属离子锌Zn2+稳定生长激素达到延续释放的要求,制备工艺复杂;另外,由于制备过程中加入Zn2+,对残留的测定和去除带来困难,不利于大规模的工业化生产。
粒径大小与微囊的降解及药物的释放有紧密联系,粒径均一的微囊有利于准确调控药物释放和实验批次间的重复性。在制备载重组人生长激素缓释微囊方面,Kwak等人在Journal of Controlled Release中指出分别用PLGA、氧化锌作为微囊材料和稳定剂能制备出包埋率为87%可持续释放一个月,并且有活性的rhGH微囊,但该方法制备的微囊粒径非常不均一,势必导致药物控释难以准确控制、降低疗效、放大重复性和批次重复性差。
由于生长激素属于蛋白质药物,稳定性差,容易变性,一般制备人重组生长激素微囊研究条件要求较高,使研究受到限制。用W/O/W(水相/油相/水相)复乳法制备比较简单,故目前常用此法来制备。但蛋白质溶液在与有机溶剂-水界面接触后容易发生变性,所以Kim等人在Journal of Controlled Release中提出聚集体/油相/水相乳化法,即将含PLGA的乙酸乙酯溶液和含rhGH粉末的磷酸缓冲盐溶液被均质仪以高速混合,得到的初乳加入到聚乙烯醇的柠檬酸缓冲盐中,挥发去有机溶剂,经离心水洗干燥即得到负载人重组生长激素的微米缓释球。它能使固态蛋白质在有机溶剂中保持活性,避免了溶剂挥发法中蛋白质在有机溶剂-水界面发生的变性。但该方法药物包埋率不高,最高只达到76.7%,而且体外释放研究结果显示该微囊的药物突释率为25%。这种较高的突释造成血药浓度过高,超过有效利用浓度,导致体内药物浓度过高引起或加重副作用;且造成药物浪费,致使药物在后期不能达到有效浓度的持续释放。总的来说,在制备载重组人生长激素缓释微囊时,现有技术制备得到的微囊粒径不均一、重复性差、生物利用度低;制备和释放过程中蛋白药物容易产生聚集体(大于15%为明显聚集),从而产生免疫原性,导致失去活性;需要额外添加赋形剂才能得到较高的药物包埋率和可持续释放,造成后期残留测定困难,并且降低生物安全性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种尺寸均一的高包埋率、高活性、低突释的载重组人生长激素rhGH长效缓释微囊。
本发明的再一目的是提供一种快速制备尺寸均一的载重组人生长激素微囊的方法。
根据本发明的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,是通过包括以下步骤的方法制备:
1)将两嵌段两亲性聚合物材料溶于有机溶剂中,形成油相O;
2)将含重组人生长激素rhGH的水溶液W1或颗粒S加入步骤1)所得到的油相O中,乳化制备W1/O或S/O初乳,其中W1为内水相;
3)再将上述所得初乳加入到含有稳定剂的外水相中W2,形成W1/O/W2或S/O/W2预复乳;
4)将步骤3)所得的W1/O/W2或S/O/W2预复乳用压力通过微孔膜,得到W1/O/W2或S/O/W2复乳液;
5)将步骤4)所得到的复乳液中的有机溶剂去除固化、离心洗涤、冷冻干燥,得人生长激素rhGH长效缓释微囊。
本发明针对rhGH微囊粒径不均一,药物包埋率低、突释率高、不能持续释放和活性低等问题,提出采用一种两嵌段的两亲性聚合物为材料对rhGH进行包埋,采用快速膜乳化方法制备出粒径均一可控,药物包埋率高,突释率低,能持续释放,且药物活性高的rhGH微囊。
因为两嵌段的两亲性聚合物,可以很好的解决rhGH与微囊膜材之间的疏水相互作用问题,亲水性mPEG链段可以覆盖在疏水性膜材的表面,阻隔rhGH与材料疏水链段(如PLA)之间的接触,有效保持被包埋蛋白的活性,且释放过程中不会因为疏水吸附而释放不完全;其次,两亲性共聚物避免rhGH与油水界面的接触,降低rhGH聚集体生成的几率;另外,以两亲型聚合物为微囊材料还可以稳定制备过程中的初乳液,亲水链段和疏水链段能够自由分布于油水两相,能很好地增强初乳液的稳定性,从而可以获得较高的包埋率。由于两亲性材料本身具有类似于表面活性剂的性质,在制备过程中不需要额外添加辅料和佐剂,降低了生产成本,解决了残留测定的困难,利于提高生物安全性。采用快速膜乳化法可实现制备出粒径均一,大小可控的载rhGH微囊,因为粒径大小与药物释放有紧密联系,从而可以通过调节微囊粒径大小达到控制释放周期的目的。
因此,根据本发明的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,本领域普通技术人员,基于本发明的技术方案的原理,结合现有技术和公知常识,可以选择适合本发明的两嵌段的两亲性聚合物,所述的聚合物材料的选择面很广。
在本发明的具体实施例中,可以选择两亲性材料为:聚乳酸、聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物、聚酸酐、聚原酸酯、聚己内酯分别与聚乙二醇共聚所得的聚合物材料之一,或不同种类不同分子量的聚合物复配混合使用,并且本发明的发明人经试验证明使用上述两亲性材料、根据本发明的方法制备的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊尺寸均一、包埋率高、活性高、突释低、重复性好。
根据本发明的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其中,在步骤1)中,所述的两嵌段两亲性聚合物为聚乳酸、聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物、聚己内酯、聚原酸酯、聚酸酐、聚磷腈与聚乙二醇共聚所得的两亲性聚合材料中的一种或多种。所述的有机溶剂可选自水中的溶解度低于2%的有机溶剂,如二氯甲烷、甲苯、氯仿等有机溶剂中的任意一种或多种;也可选自在水中的溶解度高于2%的有机溶剂,如乙酸乙酯、丙酸乙酯、乙酸丙酯、丙酮等中的一种或者几种;还可选自上述不同有机溶剂之间的任意复配,具体种类或体积需视所用膜材等制备参数而定。
根据本发明的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其中在步骤2)中,所述的重组人生长激素水溶液的浓度为1~100mg/mL,也可为固体颗粒,药物为固体颗粒时,其粒径必须小于膜孔径。
根据本发明的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其中在步骤3)中,所述的外水相稳定剂为聚乙烯醇、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(Tween80)、聚氧乙烯山梨糖醇酐月桂酸酯(Tween20)、十二烷基磺酸钠(SDS)重的一种或多种,稳定剂使用浓度优选为0.1%~10wt%,其中内水相(W1)和油相(O)的体积比优选为1∶1~1∶10,所述的油相(O)与外水相(W2)体积比为1∶4~1∶10。
根据本发明的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,在步骤4)中所述的微孔膜优选亲水的膜,如采用亲水性的SPG膜,该SPG膜为商品化产品,在制备过程中,可通过选择不同膜孔径的SPG膜来控制产品的粒径大小,常用的微孔膜孔径为0.5~200μm,优选的为0.5~50μm,更优选的为1.4~18μm,通过微孔膜的压力可在1~2000kPa之间调节,这主要由制备过程中使用的微孔膜孔径的大小及目标微囊大小的制备要求所决定。步骤4)所得的复乳液可作为预复乳用压力再次通过微孔膜,直至得到的复乳液的粒径大小与均一性满足要求,乳液过膜时的流速大小高达10mL·s-1,因而制备过程大多瞬间完成,因此,步骤4)可多次重复。
根据本发明的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,在步骤4)中在制备预复乳时我们选用普通的乳化方式如均质、超声、机械搅拌等方法制备,通过这些常规的方法制得的乳液粒径大于膜孔径,在压力的作用下将这些粒径大于膜孔径的预复乳通过微孔膜后,便可以得到粒径和微孔膜一致的复乳液,可以多次重复的操作直至得到的复乳液的粒径大小与均一性满足要求。因此在制备过程中,可通过选择不同膜孔径的SPG膜来控制产品的粒径大小,并且能够解决以往粒径难以均一的问题。
根据本发明的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,在步骤5)中所述的将步骤4)复乳液中的有机溶剂去除固化、离心洗涤、冷冻干燥的过程中,复乳液的体积会的缩小,因此如本发明的实施例所示,制得的微囊的粒径会小于微孔膜的孔径,但是由于体积、粒径是同等程度的缩小,因此我们最后得到的微囊仍然是粒径大小均一,可控的。
根据本发明的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊的制备方法,所述方法包括以下步骤:
1)将两嵌段两亲性聚合物材料溶于有机溶剂中,形成油相O;
2)将含重组人生长激素rhGH的水溶液W1或颗粒S加入步骤1)所得到的油相O中,乳化制备W1/O或S/O初乳,其中W1为内水相;
3)再将上述所得初乳加入到含有稳定剂的外水相中W2,形成W1/O/W2或S/O/W2预复乳;
4)将步骤3)所得的W1/O/W2或S/O/W2预复乳用压力通过微孔膜,得到W1/O/W2或S/O/W2复乳液;
5)将步骤4)所得到的复乳液中的有机溶剂去除固化、离心洗涤、冷冻干燥,得人生长激素rhGH长效缓释微囊。
根据本发明的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊的制备方法,所述的预复乳液的粒径大小要大于膜孔径,在制备预复乳液的制备方法,可通过普通的乳化方式如均质、超声、机械搅拌等方法制备,所述的复乳液中的有机溶剂的去除可采用减压蒸发、常温常压搅拌挥发或溶剂萃取等方法中的一种或者几种。
本发明提供的重组人生长激素微囊,该微囊尺寸均一、可控、直径分布系数(CV)值在20%以内,更优选的在15%以内。药物包埋率在90%以上,释放过程中活性保持率在90%以上,突释率低于20%,能持续释放4周至12周。该聚合物微囊在制备过程中至少采用了一种两嵌段两亲性聚合物材料和一种亲水性有机溶剂,有利于提高生长激素的包埋率和生物活性,以及降低突释和保持长效释放。
粒径分布系数(Coefficient of Variation,CV)采用数球法测定,测定300个粒子的粒径,按下面的公式计算粒子的粒径分布系数(CV)。
本发明提供的尺寸均一的载重组人生长激素微囊,所述的载药聚合物微囊尺寸均一、可控,直径分布系数CV值在20%以内,更优选的在15%以内,聚合物微囊的平均粒径范围在100nm~100μm,所述的聚合物微囊在制备过程中至少采用了一种两嵌段的两亲性聚合物材料并且采用了至少一种在水中的溶解度高于2%的有机溶剂,更有利于提高药物的包埋率、保持生物活性和可持续释放。所述的两嵌段的两亲性聚合物材料选自聚乳酸、聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物、聚己内酯分别与聚乙二醇共聚所得的聚合物材料中的一种或者几种。所述的有机溶剂可选自乙酸乙酯、丙酸乙酯、乙酸丙酯、丙酮等中的一种或者几种。
本发明公开的制备方法与现有技术相比,具有如下优点:
1、本发明的重组人生长激素长效缓释微囊,微囊的直径分布系数在20%以内,药物包埋率在90%以上,释放过程中活性保持率在90%以上,突释率低于20%,能持续释放4周至12周。
2、本发明提供了一种快速制备尺寸均一的载重组人生长激素缓释微囊的方法,并可通过控制制备过程中的微孔膜孔径大小和操作压力来控制产品的粒径大小。
3、本发明克服了现有技术无法制备粒径均一的载重组人生长激素缓释微囊的问题,保证了实验的可重复性,利于药物疗效的稳定性和工业化放大生产。
4、本发明不需要在内水相和油相额外添加稳定剂和乳化剂,即可达到稳定初乳和持续释放的效果,免去了后期测定残留带来的困难,同时利于降低成本。
5、本发明克服了传统缓释微囊药物突释率高,在后期不能完全释放的问题,并且在包埋,释放和储存过程中都能有效保持药物活性。
6、本发明方法操作简单、条件温和并且易于工业化放大生产。
附图说明
图1载药微囊的制备流程示意图。
图2实施例1制备的微囊的电镜照片。
图3实施例1制备的微囊的粒径分布图。
图4实施例1制备的微囊的生长激素体外释放图。
图5实施例1制备的微囊与聚乳酸微囊、聚乳酸聚乙醇酸微囊比较释放出的生长激素聚集体。
图6实施例2制备的微囊的电镜照片。
图7实施例3制备的微囊的电镜照片。
图8实施例4制备的微囊的电镜照片。
图9实施例5制备的微囊的电镜照片。
图10实施例6制备的过膜后复乳液的光学显微镜照片。
图11实施例7制备的微囊的电镜照片。
图11-I、II、III为实施例7中同样条件制备的微囊的电镜照片,平均粒径分别为2.05、1.97、2.03μm。
图12实施例7制备的微囊的粒径分布图。
图13实施例8制备的微囊的生长激素体外释放图。
图14实施例9制备的微囊的电镜照片。
图15实施例10制备的微囊的电镜照片。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述,但本发明不仅仅限制于该实施例中。
实施例1
将孔径为5.2μm的亲水性SPG膜置于水中浸润,使孔膜充分湿润。将0.8mL浓度为40mg/mL重组人生长激素(rhGH)水溶液作为内水相(W1),将0.4g的分子量为3万的聚乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)溶于8mL乙酸乙酯中,作为油相(O)。将内水相和油相混合,均质乳化30s,得到W1/O型初乳。将该初乳加入到48mL的1%wt的聚乙烯醇(PVA)水溶液(W2)中,磁力搅拌300rpm搅拌1min制备预复乳(W1/O/W2),再将该预复乳液在300kPa的操作压力下压过微孔膜装置(如图1),得到复乳液,乳液过膜时间小于10s,再将复乳液室温下,用1L的0.9%NaCl搅拌4h萃取乙酸乙酯,再经离心洗涤即得到载药微囊。将所得的微囊真空干燥48h得到成品微囊。干燥后的微囊重新分散在水中,利用场发射扫描电镜(JEOL SEM Company,Japan)观察微囊的表面形貌(如图2)。微囊的体积平均粒径及其分布用激光粒度仪(MalvernCompany,USA)测定(如图3),经测定,微囊的平均粒径为2.53μm,粒度分布系数CV值为13.53%。
包埋率的测定方法为,准确称量10mg冻干微囊,加入2mL含2.0wt%SDS的0.1MNaOH溶液,室温下振荡24h,微囊完全溶解后,以0.1M盐酸中和,其中蛋白质含量用BCA(Bicinchoninic acid)试剂盒测定。
根据包埋率公式:蛋白质包埋率(EE)=(实测蛋白质装载率/理论蛋白质装载率)×100%,经测定,微囊的包埋率为99.5%。
体外释放的测定方法:准确称量30mg冻干微球,加入10mL pH 7.4的PBS缓冲(8g NaCl、0.2g KCl、0.24g KH2PO4、1.81g Na2HPO4·H2O、0.5g NaN3、0.1gTween20和1000mL蒸馏水)。样品管置于37℃水浴恒温振荡器振摇(120rpm)。定期离心分离,取出1.0mL上清液,同时补入1.0mL新鲜PBS缓冲液。上清液中蛋白含量以BCA试剂和micro-BCA试剂盒则定。
根据体外释放的测定,该微囊的突释为14.2%,45天之内持续释放累积达到89%(如图4)。用HPLC测定释放出的rhGH聚集体含量,经测定,释放出的rhGH聚集体含量低于10%。并将PELA微囊与传统的PLA、PLGA微囊比较,前者释放出的rhGH聚集体远远低于后两者(如图5)。
实施例2
将孔径为0.5μm的亲水性SPG膜置于水中浸润,使孔膜充分湿润。将1.0mL浓度为100mg/mL重组人生长激素(rhGH)水溶液作为内水相(W1),将0.2g的分子量为1万和0.2g的分子量为2万的聚乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)复配溶于8mL乙酸丙酯中,作为油相(O)。将内水相和油相混合,均质乳化15s,得到(W1/O)型初乳。将该初乳加入到48mL的1%wt的PVA水溶液中,磁力搅拌300rpm搅拌1min制备预复乳(W1/O/W2),再将该预复乳液在2000kPa的操作压力下压过微孔膜装置,得到复乳液,乳液过膜时间小于10s,再将复乳液室温下,用1L的0.9%NaCl搅拌4h萃取乙酸乙酯,再经离心洗涤即得到载药微囊。将所得的微囊真空干燥48h得到成品微囊。干燥后的微囊重新分散在水中,利用场发射扫描电镜(JEOL SEM Company,Japan)观察微囊的表面形貌(如图6)。微囊的平均粒径为150nm,粒度分布系数CV值为13.96%,微囊的包埋率为91.6%。该微囊的突释率为19.8%,30天之内持续释放累积达到100%。用HPLC测定释放出的rhGH聚集体含量,经测定,释放出的rhGH聚集体含量低于10%。
实施例3
将孔径为1.4μm的亲水性膜置于水中浸润,使孔膜充分湿润。将0.4g的分子量为2万的聚己内酯与聚乙二醇共聚物溶于8mL丙酸乙酯中,作为油相(O),将120mg重组人生长激素(rhGH)固体颗粒与油相混合,均质乳化15s,得到(S/O)型初乳。将该初乳加入到48mL的1%wt的PVA水溶液中,磁力搅拌300rpm搅拌1min制备预复乳(S/O/W2),再将该预复乳液在800kPa的操作压力下压过微孔膜装置,得到复乳液,乳液过膜时间小于10s,再将复乳液室温下,用1L的0.9%NaCl搅拌4h萃取乙酸乙酯,再经离心洗涤即得到载药微囊。将所得的微囊真空干燥48h得到成品微囊。干燥后的微囊重新分散在水中,利用场发射扫描电镜(JEOL SEM Company,Japan)观察微囊的表面形貌(如图7)。微囊的平均粒径为0.46μm,粒度分布系数CV值为13.26%,微囊的包埋率为93.3%。该微囊的突释为13.2%,40天之内持续释放累积达到96%。用HPLC测定释放出的rhGH聚集体含量,经测定,释放出的rhGH聚集体含量低于10%。
实施例4
将孔径为18μm的亲水性SPG膜置于水中浸润,使孔膜充分湿润。将1.6mL浓度为30mg/mL重组人生长激素(rhGH)水溶液作为内水相(W1),将0.4g的分子量为2万的聚磷腈与聚乙二醇共聚物溶于8mL丙酮中,作为油相(O)。将内水相和油相混合,均质乳化15s,得到(W1/O)型初乳。将该初乳加入到80mL的1%wt的PVA水溶液中,磁力搅拌300rpm搅拌1min制备预复乳(W1/O/W2),再将该预复乳液在50kPa的操作压力下压过微孔膜装置,得到复乳液,乳液过膜时间小于10s,再将复乳液室温下,用1L的0.9%NaCl搅拌4h萃取乙酸乙酯,再经离心洗涤即得到载药微囊。将所得的微囊真空干燥48h得到成品微囊。干燥后的微囊重新分散在水中,利用场发射扫描电镜(JEOL SEM Company,Japan)观察微囊的表面形貌(如图8)。微囊的平均粒径为7.12μm,粒度分布系数CV值为14.26%,微囊的包埋率为95.3%。该微囊的突释为19.2%,60天之内持续释放累积达到80%。用HPLC测定释放出的rhGH聚集体含量,经测定,释放出的rhGH聚集体含量低于10%。
实施例5
将孔径为50μm的亲水性膜置于水中浸润,使孔膜充分湿润。将1.2mL浓度为10mg/mL重组人生长激素(rhGH)水溶液作为内水相(W1),将0.4g的分子量为3万的聚乳酸聚羟基乙酸-聚乙二醇共聚物(PLGA-mPEG)溶于8mL二氯甲烷中,作为油相(O)。将内水相和油相混合,均质乳化30s,得到(W1/O)型初乳。将该初乳加入到60mL的1%wt的PVA水溶液中,磁力搅拌300rpm搅拌1min制备预复乳(W1/O/W2),再将该预复乳液在20kPa的操作压力下压过微孔膜装置,得到复乳液,乳液过膜时间小于10s,再将复乳液室温下,搅拌24h以除去有机溶剂二氯甲烷,再经离心洗涤即得到载药微囊。将所得的微囊真空干燥48h得到成品微囊。干燥后的微囊重新分散在水中,利用场发射扫描电镜(JEOL SEM Company,Japan)观察微囊的表面形貌(如图9)。微囊的平均粒径为29.6μm,粒度分布系数CV值为13.80%,微囊的包埋率为98.4%。根据体外释放的测定,该微囊的突释为13.2%,11周之内持续释放累积达到92%。用HPLC测定释放出的rhGH聚集体含量,经测定,释放出的rhGH聚集体含量低于10%。
实施例6
将孔径为200μm的亲水性膜置于水中浸润,使孔膜充分湿润。将1.2mL浓度为1mg/mL重组人生长激素(rhGH)水溶液作为内水相(W1),将0.4g的分子量为2万的聚乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)溶于8mL乙酸乙酯中,作为油相(O)。将内水相和油相混合,均质乳化30s,得到(W1/O)型初乳。将该初乳加入到60mL的1%wt的PVA水溶液中,磁力搅拌300rpm搅拌1min制备预复乳(W1/O/W2),再将该预复乳液在1kPa的操作压力下压过微孔膜装置,得到复乳液,乳液过膜时间小于10s,利用光学显微镜观察复乳液(如图10)。再将复乳液室温下,用1L的0.9%NaCl搅拌4h萃取乙酸乙酯,再经离心洗涤即得到载药微囊。将所得的微囊真空干燥48h得到成品微囊。干燥后的微囊重新分散在水中。微囊的平均粒径为98μm,粒度分布系数CV值为14.10%,微囊的包埋率为98.9%。根据体外释放的测定,该微囊的突释为19.2%,12周之内持续释放累积达到96%。用HPLC测定释放出的rhGH聚集体含量,经测定,释放出的rhGH聚集体含量低于10%。
实施例7
考查快速膜乳化制备粒径均一微囊的实验重复性,将孔径为5.2μm的亲水性SPG膜置于水中浸润,使孔膜充分湿润。将0.8mL浓度为40mg/mL重组人生长激素(rhGH)水溶液作为内水相(W1),将0.4g的分子量为2万的聚乳酸与聚乙二醇共聚物溶于8mL乙酸乙酯中,作为油相(O)。将内水相和油相混合,均质乳化15s,得到(W1/O)型初乳。将该初乳加入到48mL的1%wt的PVA水溶液中,磁力搅拌300rpm搅拌1min制备预复乳(W1/O/W2),再将该预复乳液在300kPa的操作压力下压过微孔膜装置,得到复乳液,乳液过膜时间小于10s,再将复乳液室温下,用1L的0.9%NaCl搅拌4h萃取乙酸乙酯,再经离心洗涤即得到载药微囊。将所得的微囊真空干燥48h得到成品微囊。干燥后的微囊重新分散在水中,利用场发射扫描电镜(JEOLSEM Company,Japan)观察微囊的表面形貌(如图11),微囊的体积平均粒径及其分布用激光粒度仪(Malvern Company,USA)测定(如图12)。分别制备三批同样条件的样品,批号为I、II、III。微囊的平均粒径分别为2.05、1.97、2.03μm,粒度分布系数CV值分别为13.16%、13.0%、13.07%。膜乳化制备过程的重复性用相对标准偏差(RSD)表示,不同批次间制得的微囊粒径的相对标准偏差RSD%为4.16%,小于5%,说明本发明的快速膜乳化制备粒径均一微囊的方法重复性好。
实施例8
考查微囊粒径与药物释放周期的关系。将孔径为5.2μm和18μm的亲水性SPG膜置于水中浸润,使孔膜充分湿润。将0.8mL浓度为30mg/mL重组人生长激素(rhGH)水溶液作为内水相(W1),将0.4g的分子量为2万的聚乳酸与聚乙二醇共聚物(PELA)溶于8mL乙酸乙酯中,作为油相(O)。将内水相和油相混合,均质乳化15s,得到(W1/O)型初乳。将该初乳加入到48mL的1%wt的PVA水溶液中,磁力搅拌300rpm搅拌1min制备预复乳(W1/O/W2),再将该预复乳液在适宜的操作压力下压过微孔膜装置,得到复乳液,乳液过膜时间小于10s,再将复乳液室温下,用1L的0.9%NaCl搅拌4h萃取乙酸乙酯,再经离心洗涤即得到载药微囊。将所得的微囊真空干燥48h得到成品微囊。孔径为5.2μm的膜制备的微囊粒径为2.53μm,孔径为18μm的膜制备的微囊粒径为7.12μm。两种粒径的微囊的释放图见图13,粒径为2.53μm的微囊,其药物在45天之内持续释放累积达到89%,粒径为7.12μm的微囊在60天之内其药物持续释放累积达到80%。在释放过程中,微囊平均粒径越小药物释放速率越快,这是由于粒径较小的微囊与模拟体液之间的比表面积较大,药物更容易释放到外水相的缘故。用膜乳化法可以通过选择孔径不同的膜制备粒径均一、大小可控的载药微囊,进而精确控制药物的释放速率,且重复性好,与传统方法相比有不可比拟的优势。
实施例9
将孔径为5.2μm的亲水性膜置于水中浸润,使孔膜充分湿润。将5mL浓度为40mg/mL重组人生长激素(rhGH)水溶液作为内水相(W1),将0.05g的分子量为6万的聚乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)溶于5mL乙酸乙酯中,作为油相(O)。将内水相和油相混合,均质乳化30s,得到(W1/O)型初乳。将该初乳加入到20mL的1%wt的PVA水溶液中,磁力搅拌300rpm搅拌1min制备预复乳(W1/O/W2),再将该预复乳液在300kPa的操作压力下压过微孔膜装置,得到复乳液,乳液过膜时间小于10s。再将复乳液室温下,用1L的0.9%NaCl搅拌4h萃取乙酸乙酯,再经离心洗涤即得到载药微囊。将所得的微囊真空干燥48h得到成品微囊,干燥后的微囊重新分散在水中,利用场发射扫描电镜(JEOL SEM Company,Japan)观察微囊的表面形貌(如图14)。微囊的平均粒径为2.52μm,粒度分布系数CV值为13.45%,微囊的包埋率为97.9%。根据体外释放的测定,该微囊的突释为14.3%,10周之内持续释放累积达到87%。用HPLC测定释放出的rhGH聚集体含量,经测定,释放出的rhGH聚集体含量低于10%。
实施例10
将孔径为18μm的亲水性SPG膜置于水中浸润,使孔膜充分湿润。将4mL浓度为25mg/mL重组人生长激素(rhGH)水溶液作为内水相(W1),将1g分子量为6万的聚乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)溶于4mL乙酸乙酯中,作为油相(O)。将内水相和油相混合,均质乳化30s,得到(W1/O)型初乳。将该初乳加入到16mL的1%wt的PVA水溶液中,磁力搅拌300rpm搅拌1min制备预复乳(W1/O/W2),再将该预复乳液在50kPa的操作压力下压过微孔膜装置,得到复乳液,乳液过膜时间小于10s。再将复乳液室温下,用1L的0.9%NaCl搅拌4h萃取乙酸乙酯,再经离心洗涤即得到载药微囊。将所得的微囊真空干燥48h得到成品微囊,干燥后的微囊重新分散在水中,利用场发射扫描电镜(JEOL SEM Company,Japan)观察微囊的表面形貌(如图15)。微囊的平均粒径为7.10μm,粒度分布系数CV值为13.72%,微囊的包埋率为98.2%。根据体外释放的测定,该微囊的突释为18.0%,9周之内持续释放累积达到86%。用HPLC测定释放出的rhGH聚集体含量,经测定,释放出的rhGH聚集体含量低于10%。
Claims (10)
1.一种重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其特征在于,所述微囊通过包括以下步骤的方法制备:
1)将两嵌段两亲性聚合物材料溶于有机溶剂中,形成油相O;
2)将含重组人生长激素rhGH的水溶液W1或颗粒S加入步骤1)所得到的油相O中,乳化制备W1/O或S/O初乳,其中W1为内水相;
3)再将上述所得初乳加入到含有稳定剂的外水相中W2,形成W1/O/W2或S/O/W2预复乳;
4)将步骤3)所得的W1/O/W2或S/O/W2预复乳用压力通过微孔膜,得到W1/O/W2或S/O/W2复乳液,;
5)将步骤4)所得到的复乳液中的有机溶剂去除固化、离心洗涤、冷冻干燥,得人生长激素rhGH长效缓释微囊;
所述的两嵌段两亲性聚合物材料为聚乳酸、聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物、聚己内酯、聚原酸酯、聚酸酐、聚磷腈与聚乙二醇共聚所得的两亲性聚合材料中的一种或多种;
所述有机溶剂在水中的溶解度大于2%。
2.根据权利要求1所述的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其特征在于,所述的两嵌段两亲性聚合物的分子量为1~6万,浓度为1%~20%m/v。
3.根据权利要求1所述的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其特征在于,在步骤2)中,所述的重组人生长激素为浓度1~100mg/mL的溶液W1或粒径小于膜孔径的固体颗粒S。
4.根据权利要求1所述的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其特征在于,在步骤4)中,压力为1~2000kPa。
5.根据权利要求1所述的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其特征在于,所述的步骤4)中的微孔膜为亲水性膜,孔径为0.5~200μm。
6.根据权利要求5所述的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其特征在于,所述微孔膜的孔径为0.5~50μm。
7.根据权利要求5所述的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其特征在于,所述微孔膜的孔径为或1.4~18μm。
8.根据权利要求1所述的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其特征在于,所述的内水相W1和油相O的体积比为1:1~1:10,所述的油相O与外水相W2体积比为1:4~1:10。
9.根据权利要求1所述的重组人生长激素rhGH长效缓释微囊,其特征在于,所述外水相包含的稳定剂为聚乙烯醇、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐月桂酸酯、十二烷基磺酸钠的一种或多种,稳定剂的浓度为0.1%~10wt%。
10.一种重组人生长激素rhGH长效缓释微囊的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
1)将两嵌段两亲性聚合物材料溶于有机溶剂中,形成油相O;
2)将含重组人生长激素rhGH的水溶液W1或颗粒S加入步骤1)所得到的油相O中,乳化制备W1/O或S/O初乳,其中W1为内水相;
3)再将上述所得初乳加入到含有稳定剂的外水相中W2,形成W1/O/W2或S/O/W2预复乳;
4)将步骤3)所得的W1/O/W2或S/O/W2预复乳用压力通过微孔膜,得到W1/O/W2或S/O/W2复乳液;
5)将步骤4)所得到的复乳液中的有机溶剂去除固化、离心洗涤、冷冻干燥,得人生长激素rhGH长效缓释微囊;
所述的两嵌段两亲性聚合物材料为聚乳酸、聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物、聚己内酯、聚原酸酯、聚酸酐、聚磷腈与聚乙二醇共聚所得的两亲性聚合材料中的一种或多种;
所述有机溶剂在水中的溶解度大于2%。
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刘世芸.重组人生长激素缓释微球的制备及体内外释放的研究.《医药卫生科技辑》.2008,9、29-31、39-40、59-61. |
刘世芸等.重组人生长激素长效缓释的研究进展.《生物学杂志》.2007,第24卷(第4期),4-7. |
李唐棣等.重组人生长激素脂质体的制备及载药研究.《中国生化药物杂志》.2006,第27卷(第3期),133-136. |
苏虹.重组人生长激素栓剂的研制及质量评定.《医药卫生科技辑》.2007,全文. |
重组人生长激素栓剂的研制及质量评定;苏虹;《医药卫生科技辑》;20070331;全文 * |
重组人生长激素缓释微球的制备及体内外释放的研究;刘世芸;《医药卫生科技辑》;20080831;9、29-31、39-40、59-61 * |
重组人生长激素脂质体的制备及载药研究;李唐棣等;《中国生化药物杂志》;20061231;第27卷(第3期);133-136 * |
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