CN102349865B - 一种绿豆萌芽提取物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种萌芽绿豆提取物及其制备方法与应用。本发明所提供的提取分离方法简便，所得产品纯度较高，有效成分提取率高，损失小，产品质量有了很大的改进。绿豆萌发的过程中，大分子量的不溶物向小分子量的可溶物转化，贮藏类物质向生理活性物质转化，氨基酸、各种维生素的含量也大幅提高，这些活性成分的变化进一步奠定了其用于化妆品的功效性，使其清洁肌肤、改善皮肤干燥、维持皮肤弹力、舒敏抗敏功效、祛痘功效更加显著。

Description

一种绿豆萌芽提取物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种植物提取物，具体地说是一种绿豆萌芽提取物及其制备方法和新用途。

背景技术

绿豆，又名青小豆，为豆科草本植物绿豆的成熟种子，在我国已有两千多年的栽培史，作为粮食作物在各地都有种植。绿豆中富含蛋白质、碳水化合物、各种氨基酸和微量元素，其中生物活性物质主要有黄酮类物质、SOD、鞣质、香豆素、生物碱、植物甾醇等，具有抗氧化、抗肿瘤、降血脂、提高免疫力等功效。历代本草对绿豆的药用功效多有阐述，《本草纲目》云“绿豆，消肿治痘之功虽同于赤豆，而压热解毒之力过之。且益气、厚肠胃、通经脉，无久服枯人之忌。外科治痈疽，有内托护心散，极言其效。”并可“解金石、砒霜、草木一切诸毒”。《本草求真》日：“绿豆味甘性寒，据书备极称善，有言能厚肠胃、润皮肤、和五脏及资脾胃，按此虽用参、茂、归、术，不是过也。第所言能厚、能润、能和、能资者，缘因毒邪内炽，凡脏腑经络皮肤脾胃，无一不受毒扰，服此性善解毒，故凡一切无不用此奏效。”

目前，绿豆多用于保健食品的制备，其用途及功效较单一，如何开发期潜在应用价值是本领域技术人员研究的热点。

发明内容

本发明的目的在于提出一种绿豆萌芽提取方法。

本发明的再一目的在于提出一种利用上述方法提取得到的绿豆萌芽提取物。

本发明的第三目的在于提出上述绿豆萌芽提取物的用途。

本发明的发明思路在于：绿豆经发芽后，其活性成分得到进一步的改善，绿豆中的大分子量的不溶物向小分子量的可溶物转化，贮藏类物质向生理活性物质转化，氨基酸、各种维生素的含量也大幅提高，这些活性成分的变化进一步奠定了其用于化妆品的功效性，使其清洁肌肤、改善皮肤干燥、维持皮肤弹力、舒敏抗敏功效、祛痘功效更加显著。近年来，闪式提取法具有室温提取、无成分破坏、操作简单快速、高效节能等优点，已被广泛应用于各种原料(包括植物的根、茎、叶、花、果实、种子等)中各种成分的提取，且可采用多种溶剂进行提取。因此采用闪式提取设备对绿豆芽进行常温提取，能最大程度的减少有效成分的破坏和提高提取率。

为了实现上述目的，本发明采用如下具体技术方案：

一种绿豆萌芽的提取方法，所述方法步骤如下：

(1)取萌芽二到四天的绿豆芽，按照1∶2～1∶4的重量比加入去离子水，用闪式提取器进行常温提取，提取时间为3～5分钟，速度为4000～6000r/min；

过滤，离心，取上清液，上清液加入10wt％～20wt％的1，3-丁二醇，此处为质量比，目的为形成稳定体系，一定程度上保护活性物质。

(2)80～90℃高温灭菌后得到萌芽绿豆提取物，高温灭菌时间推荐为20～30分钟；

所述步骤(2)中过滤为200～400目过滤。

所述步骤(2)中离心转速为4000～5000rpm，优选5000rpm；离心的时间为10～20分钟，优选20分钟。

所述萌芽二到四天的绿豆芽是由下述方法制备得到的：

(1)将绿豆清洗干净，加水浸泡6～10h；

(2)将浸泡后的绿豆在20℃～25℃下萌发2～4天，得到所述绿豆芽。

所述步骤(2)中将浸泡后的绿豆先沥干水分并置于垫有湿润脱水棉的容器中，并用纱布覆盖，置于20℃～25℃下萌发下培养萌发；每隔一定时间，一般为2小时，淋水一次，保持绿豆湿润，每18～30h用清水清洗一次，防止绿豆芽发霉腐烂；发芽时间为2～4天，发芽结束后将绿豆芽用清水清洗至少一次。

绿豆在上述条件下均会发芽，不论发芽程度，只要选择发芽绿豆提取即可。

一种绿豆萌芽提取物，其由上述方法提取得到的。

所述的绿豆萌芽提取物在制备保湿、舒敏抗敏、祛痘功效的护肤品中的应用。

一种具有保湿、舒敏抗敏、祛痘功效的护肤品，所护肤品由上述的绿豆萌芽提取物和护肤品领域可接受的辅料制成。

根据使用途径不同，本发明绿豆萌芽提取物制成外用护肤品制剂，如外用面霜、爽肤水、洗面奶、喷雾剂、面膜或精华素等。但不局限于上述剂型，可按照护肤品工业领域中已知的方法，将上述提取物按已知方法除菌后制成各种不同的外用制剂。

本发明的有益效果：

本发明提供了一种针对绿豆萌芽的提取方法，该方法提取得到的绿豆萌芽提取物具有很高的外用护肤价值，尤其是祛痘抗敏保湿功效显著。所提供的提取分离方法简便，所得产品纯度较高，有效成分提取率高，损失小，产品质量高。绿豆萌发的过程中，大分子量的不溶物向小分子量的可溶物转化，贮藏类物质向生理活性物质转化，氨基酸、各种维生素的含量也大幅提高，这些活性成分的变化进一步奠定了其用于护肤品的功效性，使其清洁肌肤、改善皮肤干燥、维持皮肤弹力、舒敏抗敏功效、祛痘功效更加显著。通过萌芽的方法，进一步提高了活性成分的含量和改善了活性成分的质量。所得到的提取物经试验验证具有较强的保湿、舒敏抗敏、祛痘的功效。因此萌芽绿豆提取物可以作为保湿、舒敏抗敏、祛痘的功效添加剂，在制备护肤品中，尤其是制备具有舒敏抗敏、祛痘功效的化妆品，具有广泛应用。

附图说明

图1为绿豆萌芽提取物抑制透明质酸酶活性实验；

图2为萌芽绿豆提取物对痤疮丙酸杆菌抑菌效果图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述的实验检测方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

本发明具体实施方式所用绿豆为市售绿豆，无特殊要求。所用闪式提取器为河南金鼎科技发展有限公司销售的JHBC-50S型闪式提取器，其他厂家生产销售的闪式提取器均可用于本发明，只要制备方法及条件参数符合本发明所述范围，即可得到本发明所述效果。

实施例1制备萌芽绿豆提取物

萌芽绿豆提取物的具体制备过程如下：

(1)制备萌芽绿豆

取一定质量的绿豆，清洗干净，加去离子水，水与绿豆的质量比为2∶1，室温下浸泡8h，浸泡结束后，将绿豆沥干水分并置于垫有湿润脱水棉的容器中，并用纱布覆盖，置于室温下最佳为22℃下培养萌发；每隔2小时淋水一次，保持绿豆湿润，每24h用清水清洗一次，防止豆芽发霉腐烂；发芽3天后将豆芽用清水清洗一次，取出。

(2)提取

取萌芽三天左右的绿豆芽，按照重量比1∶2加入去离子水，用JHBC-50S闪式提取器，进行常温提取；提取时间3分钟，提取速度控制在4000r/min；

200目滤网过滤，离心，离心转速为5000r/min，离心20分钟；取上清液，加入10％的1，3-丁二醇，85℃高温灭菌20min后得到萌芽绿豆提取物。

实施例2制备萌芽绿豆提取物

(1)制备萌芽绿豆

取一定质量的绿豆，清洗干净，加去离子水，水与绿豆的质量比为1.5∶1，室温下浸泡10h，浸泡结束后，将绿豆沥干水分并置于垫有湿润脱水棉的容器中，并用纱布覆盖，置于20℃下培养萌发；每隔1.5小时淋水一次，保持绿豆湿润，每30h用清水清洗一次，防止豆芽发霉腐烂；发芽2天后将豆芽用清水清洗一次，取出。

(2)提取

取萌芽三天左右的绿豆芽，按照重量比1∶3加入去离子水，用JHBC-50S闪式提取器，进行常温提取；提取时间5分钟，提取速度控制在5000r/min；200目滤网过滤，离心，离心转速为4000r/min，离心10分钟；取上清液，加入15％的1，3-丁二醇，80℃高温灭菌30min后得到萌芽绿豆提取物。

实施例3制备萌芽绿豆提取物

(1)制备萌芽绿豆

取一定质量的绿豆，清洗干净，加去离子水，水与绿豆的质量比为3∶1，室温下浸泡6h，浸泡结束后，将绿豆沥干水分并置于垫有湿润脱水棉的容器中，并用纱布覆盖，置于25℃下培养萌发；每隔1小时淋水一次，保持绿豆湿润，每18h用清水清洗一次，防止豆芽发霉腐烂；发芽4天后将豆芽用清水清洗一次，取出。

(2)提取

取萌芽三天左右的绿豆芽，按照重量比1∶4加入去离子水，用JHBC-50S闪式提取器，进行常温提取；提取时间4分钟，提取速度控制在6000r/min；200目滤网过滤，离心，离心转速为5000r/min，离心15分钟；取上清液，加入20％的1，3-丁二醇，90℃高温灭菌25min后得到萌芽绿豆提取物。

实施例4本发明乳液的制备

1、原料及用量：

A相：鲸蜡硬脂醇5wt％

山俞醇2wt％

季戊四醇双硬脂酸酯2wt％

单硬脂酸甘油酯2wt％

乳木果油5wt％

二甲基硅油3wt％

B相：鲸蜡硬脂基葡萄糖苷3wt％

卡波姆0.1wt％

乙二胺四乙酸二钠盐0.15wt％

实施例1制备的萌芽绿豆提取物5wt％

C相：防腐剂0.5wt％

香精0.2wt％

胶原蛋白3wt％

10％NaOH 0.5wt％

余量为去离子水。

2、制备方法：

(1)按上述的组分及用量称取各原料；

(2)将A相和B相分别加热至80℃搅拌使原料溶解完全；

(3)将A相加入乳化锅中搅拌，搅拌速率为80转/分钟，边搅拌边将B相加入乳化锅中，加入的速度以乳化锅中B相原料全部乳化为准，当B相原料全部加入后抽真空(真空度为-0.1个大气压)、搅拌均质4分钟，搅拌速率为80转/分钟，加热至80℃保温，20分钟后开始降温，当温度降到30℃时加入C相原料，搅拌均匀继续降温，当温度在40℃时均质1～2分钟出料即可。

实施例5萌芽绿豆提取物的功能测定试验

将实施例1、2、3中制备得到的萌芽绿豆提取物分别依次进行如下实验。

下述试验中所用的萌芽绿豆提取物溶液，是将实施例1、2、3制备得到的萌芽绿豆提取物溶液记为质量浓度为100％的提取物溶液，其它浓度的提取物溶液是将该溶液进行相应稀释得到的。

1、绿豆萌芽提取物的保湿实验

30名志愿者均自愿参加本实验。

经表皮水分流失值(TEWL)反映角质层的屏障功能，是评价角质层状态的重要指标。皮肤保护层越完好，其TEWL的数值就越低。使用皮肤水分流失测试仪(Tewameter TM300)测量表皮附近的水蒸汽压梯度，可以得到TEWL的数值、曲线，以及平均值和标准偏差等数据，对化妆品保湿功效进行评价。

志愿者(30名，男：15名；女：15名)试验前半小时进入实验室，静坐时间30分钟。以左臂作为测试区域，涂抹添加萌芽提取物的基础护理的普通润肤露；右臂相应的对称区域涂抹未添加萌芽提取物的基础护理的普通润肤露，作为空白对照。用皮肤水分流失测试仪(Tewameter TM300)检测每个测试区域的皮肤水分流失量，于涂抹后不同时间检测，每次重复检测3次。将每个时间点检测的平均值减去空白对照的平均值即为该时段该部位的测定值即TEWL增加值，将每个时间点检测的平均值除以空白对照的平均值即为该时段该部位的TEWL变化率。

结果见表1，从表中可以看出，涂抹后，人体皮肤水分流失量减少，表明绿豆萌芽提取物具有一定的保湿功效。

表1TEWL检测结果

涂抹后时间	TEWL变化率(％)
		30min	-3.58
60min	-6.95
		90min	-7.02
120min	-6.47
		180min	-8.77
240min	-7.21

2、绿豆萌芽提取物抑制透明质酸酶活性实验

该方法按照如下文献提供的方法进行：黄丽，冯志臣，韦保耀，滕建文。地榆与桂枝抗过敏作用的研究，食品科技，2007年第06期：135-137。

透明质酸酶是过敏反应的参与者，研究表明透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，许多抗过敏药物有强抑制透明质酸酶活性的作用。透明质酸酶能够无选择地水解透明质酸中的β-N-乙酰葡糖胺与D-葡糖醛酸盐之间的1，4-键，而得到β-N-乙酰葡糖胺，β-N-乙酰葡糖胺在碱性条件下可以与乙酰丙酮缩合生成生色原2-甲基-3-二乙酰吡咯衍生物，生色原与对-二甲氨基苯甲醛在浓盐酸乙醇中生色。基本反应方程式：

2-甲基-3-乙酰-吡咯衍生物+P-DAB→生色(结构不明)

实验方法：取0.1mL 0.25mmol/L CaCl₂溶液和0.5mL透明质酸酶液37℃保温培养20min；分别加入样品液(实施例1、2、3提取物)0.5mL，继续37℃保温培养20min；加入0.5mL透明质酸钠液37℃保温30min，常温放置5min；加入0.1mL0.4mol/L NaOH溶液和0.5mL乙酰丙酮溶液，置于沸水浴中加热15min后立即用冰水进行冷却5min；加入埃尔利希试剂1.0mL并用3.0mL无水乙醇进行稀释，放置20min显色，用分光光度计测定其吸光度值。

样品对透明质酸酶抑制率的测定计算公式：

式中A——对照溶液ABS值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)

B——对照空白溶液ABS值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液)

C——试样溶液ABS值

D——试样空白溶液ABS值(用醋酸缓冲溶液代替酶液)

实验结果见图1，从图中可以看出，随着萌芽绿豆提取物的浓度的增加，抑制透明质酸酶活性也逐渐增大，侧面表明萌芽绿豆提取物具有舒敏抗敏的功效。

3、萌芽绿豆提取物对痤疮丙酸杆菌抑菌效果图

采用牛津杯法，在平板上观测样品对痤疮丙酸杆菌的抑菌圈大小，从而反映萌芽绿豆提取物对痤疮病原菌的抑制效果。实验采用三个实施例制备的绿豆萌芽提取物10％浓度，设置三个平行，经抑菌实验，可以看出，绿豆萌芽提取物对痤疮丙酸杆菌具有明显的抑菌功效。图2为绿豆萌芽提取物(10％浓度)(组2)对痤疮丙酸杆菌的抑菌效果图。

本发明临床实验及结果

选择自愿受试者60例，均为敏感肤质，有过敏史，且其面部均伴有痤疮症状；男女不限，进行试用及临床观察，随机分为2组，每组30例。观察前皮肤临床主要表现为肌肤敏感，瘙痒不适，有的常年发作。

1、方法：组1：每日洁面后，在肌肤上和易发部位涂抹实施例4制备的乳液适量，早晚各一次。组2(对照组)：每日洁面后，在肌肤上和易发部位涂抹市售某品牌祛痘面霜适量，早晚各一次。3天、7天、1个月观察并统计结果。

2、评判标准：(1)治愈：临床痤疮症状消失、一个月内再无皮肤敏感反应；(2)有效：临床痤疮症状减轻、皮肤敏感反应部分消退或消失，减小或减少；(3)无效：临床痤疮症状、皮肤敏感未见好转。

3、试用结果：(1)组1见效快，3天、7天有效率可达93％以上，并有一定的治愈率，1个月的治愈率为87％以上。组2，3天及7天有效率为47％，1个月治愈率为33％(2)对肌肤一般敏感治疗效果均显著。(3)没有一例反应出现过敏、皮肤不适等现象。

发明人还做了其他若干制剂的功效实验，如面霜、乳液及爽肤水，最终结果显示本发明提取物具有很好的舒敏抗敏功效，尤其针对痤疮皮肤患者。

Claims (7)

1.一种绿豆萌芽提取物在制备保湿、舒敏抗敏、祛痘功效的外用护肤品中的应用，其特征在于，所述提取物由下述方法提取得到的：

（1）取萌芽二到四天的绿豆芽，按照1：2～1：4的重量比加入去离子水，用闪式提取器进行常温提取，提取时间为3～5分钟，速度为4000～6000r/min；

（2）过滤，离心，取上清液，加入10wt%～20wt%的1,3-丁二醇，80～90℃高温灭菌后得到萌芽绿豆提取物。

2.权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤（2）中过滤为200～400目过滤。

3.权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤（2）中离心转速为4000～5000rpm，离心的时间为10～20分钟。

4.权利要求3所述的应用，其特征在于，所述离心转速为5000rpm，离心的时间为20分钟。

5.权利要求1所述的应用，其特征在于，所述萌芽二到四天的绿豆芽是由下述方法制备得到的：

（1）将绿豆清洗干净，加水浸泡6～10h；

（2）将浸泡后的绿豆在20℃～25℃下萌发2～4天，得到所述绿豆芽。

6.权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤（2）中将浸泡后的绿豆先沥干水分并置于垫有湿润脱水棉的容器中，并用纱布覆盖，置于20℃～25℃下萌发下培养萌发；萌芽期间保持绿豆湿润，每24h用清水清洗一次，防止绿豆芽发霉腐烂；发芽时间为2～4天，发芽结束后将绿豆芽用清水清洗至少一次。

7.权利要求6所述的应用，其特征在于，萌芽期间保持绿豆湿润的方法为每隔2小时淋水一次。

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