CN102344901B - 对氯化钠耐受的枯草芽孢杆菌的筛选方法 - Google Patents
对氯化钠耐受的枯草芽孢杆菌的筛选方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102344901B CN102344901B CN 201110222044 CN201110222044A CN102344901B CN 102344901 B CN102344901 B CN 102344901B CN 201110222044 CN201110222044 CN 201110222044 CN 201110222044 A CN201110222044 A CN 201110222044A CN 102344901 B CN102344901 B CN 102344901B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- subtilis
- sodium chloride
- sodium
- bacillus subtilis
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于微生物领域,涉及一种对氯化钠耐受的枯草芽孢杆菌的筛选方法,包括如下过程:(1)筛选:将CGMCC保藏的编号为1.0769的枯草芽孢杆菌,以营养琼脂为培养基,先进行试管斜面培养,然后再进行培养皿斜面划线培养后筛选出典型的枯草芽孢杆菌的单菌落;将典型的枯草芽孢杆菌转入营养琼脂试管斜面,进行培养;(2)驯化:在营养琼脂培养基里增加氯化钠,制成氯化钠浓度不同的培养皿,逐步提高氯化钠浓度进行筛选驯化培养,筛选出能够耐受较高浓度氯化钠的枯草芽孢杆菌。得到能够耐受质量浓度为12.5%氯化钠的枯草芽孢杆菌,这种枯草芽孢杆菌可用于肥料。
Description
技术领域
本发明属于微生物领域,涉及一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的筛选驯化方法以及得到的枯草芽孢杆菌,是应用于肥料中提高枯草芽孢杆菌对盐的耐受性。
背景技术
枯草芽孢杆菌,拉丁学名Bacillus subtilis,是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7~0.8×2~3微米,着色均匀。无荚膜,周生鞭毛,能运动。革兰氏阳性菌,芽孢0.6~0.9×1.0~1.5微米,椭圆到柱状,位于菌体中央或稍偏,芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明,污白色或微黄色,在液体培养基中生长时,常形成皱醭。需氧菌。在遗传学研究中应用广泛,对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中,易在枯草浸汁中繁殖,故名。
枯草芽孢杆菌具有解磷作用,能够提高磷的植物利用度,因此被应用于肥料中。例如CN101899405A公开的“枯草芽孢杆菌GU及其在制备高效生物复合磷肥中的应用”,CN101643710A公开的“一株枯草芽孢杆菌及其应用”,CN101200385A公开的“用侧孢芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌制备复合微生物肥料”,上述文献均涉及了枯草芽孢杆菌在肥料中的应用。然而,由于枯草芽孢杆菌对盐的耐受性较差,高浓度的盐能够抑制菌株。例如杨清香、曹卫军在《武汉大学学报(自然科学)》1998年02期“高渗环境对枯草芽孢杆菌和 粘质沙雷氏菌胞内自由氨基酸库含量和组成的影响”一文中,公开有枯草芽孢杆菌(93151和93215)可耐受8%NaCl。因此,目前枯草芽孢杆菌均是用于生物有机肥,或低含盐里的复合肥。这限制了枯草芽孢杆菌在肥料中的应用。化肥主要成份为无机盐,使得将枯草芽孢杆菌与化肥混用时大部分枯草芽孢杆菌不能存活。
发明内容
本发明的目的就在于提供一种对氯化钠耐受的枯草芽孢杆菌的筛选方法。
本发明采用如下技术方案:一种对氯化钠耐受的枯草芽孢杆菌的筛选方法,包括如下过程:
(1)筛选:将枯草芽孢杆菌CGMCC 1.0769,以营养琼脂为培养基,先进行试管斜面培养,然后再进行培养皿斜面划线培养后筛选出典型的枯草芽孢杆菌的单菌落;将典型的枯草芽孢杆菌转入营养琼脂试管斜面,进行培养;
(2)驯化:在营养琼脂培养基里增加氯化钠,制成氯化钠浓度不同的培养皿,把步骤(1)中最后培养得到的枯草芽孢杆菌先在氯化钠浓度较低的培养皿中划线培养;将培养的单菌落转移到试管斜面培养后作为菌种,再在下一个氯化钠浓度较高的培养皿中划线培养,以此类推,逐步提高氯化钠浓度,筛选出能够耐受较高浓度氯化钠的枯草芽孢杆菌。
所述步骤(2)中氯化钠质量浓度可以分别为2%、5%、8%、10%、12%、12.5%、13%和15%。
所述营养琼脂组成为:每1000ml水用蛋白胨10克、牛肉粉3.0克和氯化钠5.0克,pH值为7.3±0.1。
各步骤中所述培养条件为恒温培养箱中34℃±0.5℃培养3-5天。
本发明的方法得到的枯草芽孢杆菌,通过筛选、驯化,在质量浓度为12.5%的氯化钠营养琼脂中生长良好,表明能够耐受质量浓度为12.5%的氯化钠。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步详细描述,以助于理解本发明的内容。
枯草芽孢杆菌subsp.subutilis来源,中科院微生物所的中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)购买,编号为1.0769。
所用分离基础培养基:营养琼脂培养基
蛋白胨:10克
牛肉粉:3.0克
氯化钠:5.0克
水:1000ml
pH值:7.3±0.1
筛选驯化方法:
(1)准备:按照营养琼脂培养基标准配制好培养基,连同包好的培养皿、试管培养基、无菌水、玻璃刮刀、移液管等辅助器具,经过高温灭菌后待用。灭好菌的营养琼脂培养基倒平板,试管培养基摆斜面,冷却,备用。
(2)复壮:超净工作台开紫外灯灭菌30分钟,实验室甲醛熏蒸,准备工作做好后,吸0.2毫升的无菌水加入冻干管中,将枯草芽孢杆菌菌种干粉做成菌悬液,在火焰封口的状态下倒入制备好的试管斜面上,将菌悬液平铺在斜面培养基上,放入恒温培养箱中34℃±0.5℃,培养3-5天。镜检观察形态,芽孢率。
(3)筛选:在菌种操作间,将超净工作台开紫外灯灭菌30分钟,进行无菌操作,用接种针在培养好的试管斜面菌种挑起菌落,在准备好的培养皿中划线,将划好线的培养皿放入恒温培养箱中34℃±0.5℃,培养3-5天,观察是否有典型的枯草芽孢杆菌的单菌落形成。将典型的枯草芽孢杆菌的单菌落,转入准备好的营养琼脂试管斜面上,放入恒温培养箱中34℃±0.5℃,培养3-5天,待用。
(4)驯化:在营养琼脂培养基里相应增加氯化钠的浓度,按照质量分数2%、5%、8%、10%、12%、12.5%、13%、15%各个浓度,制备成培养皿;在培养好的营养琼脂试管斜面上,挑菌种先在2%氯化钠营养琼脂培养皿内划线培养,然后以前一批次的单菌落存试管斜面,培养结束后,作为菌种在下一个浓度的培养皿中划线培养,依次类推。根据实验结果表明氯化钠的浓度(质量分数)在12.5%时,本菌株能生长良好,作为驯化后的菌种。
(5)、检测:选取营养琼脂培养基加入质量分数为12.5%浓度的氯化钠,高压灭菌后,用灭菌后的培养皿倒平板。划线或者稀释平板涂布,34℃±0.5℃培养,3-5天生长出单菌落,表面经过筛选驯化后的枯草芽孢杆菌能够耐受12.5%浓度的氯化钠。
(6)生物学鉴定
驯化后得到的能够耐受20%浓度氯化钠的枯草芽孢杆菌,进行生物学鉴定,鉴定结果:菌株为革兰氏阳性、两端钝圆的粗短杆菌,2~8×0.7~1.0μm,单个或短链,有动力,无荚膜,卵圆形芽孢近于菌体一端,大于菌体宽度。在普通琼脂平板上极易生长,菌落不整齐、灰色、表面粗糙、干燥有皱纹,边缘不呈卷发状。在液体培养基表面形成较厚的具皱纹的菌膜。可分解甘露醇、*** 糖及木糖,产酸不产气。不产生卵磷脂酶。
驯化前后对比:
将驯化前的菌株和驯化后的菌株分别接入液体培养基培养,待95%以上芽孢形成下摇床准备平板计数。结果如表1:
表1驯化前后枯草芽孢杆菌存活情况
驯化前菌株的存活率在:41.1%,驯化后的菌株存活率能达到72.8%,表明经过驯化后枯草芽孢杆菌对盐的耐受能力得到显著增强。
Claims (3)
1.一种对氯化钠耐受的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的筛选方法,其特征在于包括如下过程:
(1)筛选:将枯草芽孢杆菌CGMCC1.0769,以营养琼脂为培养基,先进行试管斜面培养,然后再进行培养皿斜面划线培养后筛选出典型的枯草芽孢杆菌的单菌落;将典型的枯草芽孢杆菌转入营养琼脂试管斜面,进行培养;
(2)驯化:在营养琼脂培养基里增加氯化钠,制成氯化钠质量浓度分别为2%、5%、8%、10%、12%、12.5%、13%和15%浓度不同的培养皿,把步骤(1)中最后培养得到的枯草芽孢杆菌先在氯化钠浓度较低的培养皿中划线培养;将培养的单菌落转移到试管斜面培养后作为菌种,再在下一个氯化钠浓度较高的培养皿中划线培养,以此类推,逐步提高氯化钠浓度,筛选出能够耐受较高浓度氯化钠的枯草芽孢杆菌。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述营养琼脂组成为:每1000ml水用蛋白胨10克、牛肉粉3.0克和氯化钠5.0克,pH值为7.3±0.1。
3.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于:各步骤中所述培养条件为在恒温培养箱中34℃±0.5℃培养3-5天。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 201110222044 CN102344901B (zh) | 2011-08-04 | 2011-08-04 | 对氯化钠耐受的枯草芽孢杆菌的筛选方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 201110222044 CN102344901B (zh) | 2011-08-04 | 2011-08-04 | 对氯化钠耐受的枯草芽孢杆菌的筛选方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102344901A CN102344901A (zh) | 2012-02-08 |
CN102344901B true CN102344901B (zh) | 2013-07-31 |
Family
ID=45543975
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN 201110222044 Expired - Fee Related CN102344901B (zh) | 2011-08-04 | 2011-08-04 | 对氯化钠耐受的枯草芽孢杆菌的筛选方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102344901B (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103305451A (zh) * | 2013-06-20 | 2013-09-18 | 双赢集团有限公司 | 对磷酸二氢铵耐受的侧孢芽孢杆菌的筛选方法 |
CN111647539B (zh) * | 2020-07-06 | 2022-07-08 | 重庆工商大学 | 一种强化好氧反硝化菌成膜能力的方法 |
CN114990018A (zh) * | 2022-06-09 | 2022-09-02 | 江苏农牧科技职业学院 | 一种水产改底用枯草芽孢杆菌的驯化方法及设备 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1563354A (zh) * | 2004-03-24 | 2005-01-12 | 河北科技大学 | 用于工业废水或海水生化需氧量传感器测量菌株-地衣芽孢杆菌的培养方法 |
-
2011
- 2011-08-04 CN CN 201110222044 patent/CN102344901B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1563354A (zh) * | 2004-03-24 | 2005-01-12 | 河北科技大学 | 用于工业废水或海水生化需氧量传感器测量菌株-地衣芽孢杆菌的培养方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
Substitution of GPR Grade Salts in the Production of α-Amylase by Bacillus lichenif ormis 6346 in Solid State Fermentation;Vasanthy Arasaratnam等;《Malaysian Journal of Biochemistry and Molecular Biology》;20091231;第17卷(第1期);1-4 * |
Vasanthy Arasaratnam等.Substitution of GPR Grade Salts in the Production of α-Amylase by Bacillus lichenif ormis 6346 in Solid State Fermentation.《Malaysian Journal of Biochemistry and Molecular Biology》.2009,第17卷(第1期), |
李俊叶等.耐盐菌的筛选及初步鉴定.《安徽农业科学》.2011,第39卷(第11期), |
耐盐菌的筛选及初步鉴定;李俊叶等;《安徽农业科学》;20110410;第39卷(第11期);6658-6660 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102344901A (zh) | 2012-02-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102586142B (zh) | 一种用于防治黄瓜霜霉病的枯草芽孢杆菌及其微生物菌剂 | |
CN103484396B (zh) | 一种嗜热一氧化碳链霉菌新菌株及其应用 | |
CN104164394A (zh) | 一株拮抗植物病原菌的菌株及其应用 | |
CN109576188A (zh) | 一种防治半夏根腐病菌剂及其制备方法和应用 | |
CN104946574B (zh) | 一株抑制植物病原真菌的枯草芽孢杆菌Baisha2C | |
CN106244504B (zh) | 具有降解有机磷和抑菌作用的枯草芽孢杆菌及其菌剂 | |
CN103571770B (zh) | 一种高效花生根瘤固氮菌株及其应用 | |
CN113846039A (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
CN101935627B (zh) | 一种辛酰溴苯腈降解菌及其生产的菌剂 | |
CN102344901B (zh) | 对氯化钠耐受的枯草芽孢杆菌的筛选方法 | |
CN109402008A (zh) | 一株具有吲哚降解能力的不动杆菌tat1-6a及其应用 | |
CN102344902A (zh) | 对复合肥料耐受的枯草芽孢杆菌的筛选方法 | |
CN102586143A (zh) | 用于防治黄瓜霜霉病的摩加夫芽孢杆菌及其微生物菌剂 | |
CN101935626B (zh) | 一种二甲基甲酰胺降解菌及其生产的菌剂 | |
CN105018395B (zh) | 一株短小芽孢杆菌及其在防治苹果斑点落叶病中的应用 | |
CN102344895B (zh) | 对氯化钠耐受的地衣芽孢杆菌的筛选方法 | |
CN107841474B (zh) | 一种池生代尔夫特菌及其在水稻稻曲病防治中的应用 | |
CN102344893B (zh) | 对磷酸氢二铵耐受的枯草芽孢杆菌的筛选方法 | |
CN104862253A (zh) | 一株诺氟沙星降解乙酸钙不动杆菌nor-36及其应用 | |
CN105176895B (zh) | 一种用于防治棉花黄萎病的解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
CN107217016A (zh) | 一株具有抑制水稻纹枯病的内生芽孢杆菌菌株zy122及其应用 | |
CN104367597B (zh) | 用于防治仿刺参腐皮综合症的微生态制剂及制备方法 | |
CN102344896A (zh) | 对复合肥料耐受的地衣芽孢杆菌的筛选方法 | |
CN102533610B (zh) | 一种防治黄瓜霜霉病的枯草芽孢杆菌及其微生物菌剂 | |
CN102344894B (zh) | 耐磷酸氢二铵的地衣芽孢杆菌的筛选方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130731 Termination date: 20200804 |