CN102323266A - 压载水排放浮游植物活体的鉴别方法 - Google Patents

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吴惠仙
薛俊增
蔡桢
刘艳
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Abstract

本发明提供压载水排放的浮游植物活体的鉴别方法，包括以下步骤：(1)采集浮游植物水样；(2)在每升浮游植物水样中滴加1～1.5％中性红溶液1.0-2.0ml，染色；(3)再向水样中滴加***溶液进行样品固定；(4)取样品进行镜检，并计数。与现有技术相比，本发明的方法的整个染色过程更加快速、简化，且成本较低、效果明显，极易区分出浮游植物是否活体。

Description

压载水排放浮游植物活体的鉴别方法
技术领域
本发明涉及植物活体的鉴别方法，具体地，本发明涉及压载水排放的浮游植物活体的鉴别方法。
背景技术
压载水是指为控制船舶纵倾、横倾、吃水、稳性或应力而在船上加装的水及其悬浮物。船舶到岸时为空出吨位，必须将压载水排入到岸国的海域中。据相关数据显示，全球船舶每年携带的压载水约有120亿吨，压载水和压载舱的沉积物中含有大量的生物和微生物，包括了细菌、藻类、原生动物、浮游生物及其他生物。平均每立方米压载水含有的浮游动植物超过1亿个，全世界每天存在于船舶压载水中随船舶被扩散到世界各地海域的海洋生物约有7000种，许多细菌、植物和动物经过数月的航程仍存活于压载水及其沉积物中，当船舶到港口装货时，这些生物随着压载水被排放到港口国水域。如果对这些入侵生物处理不当，会造成很大影响：
在生态方面，入侵的生物会捕食本地物种，改变生活环境或改变环境条件(如降低水的透明度)，取代本地物种，减少本地生物多样性，甚至造成本地物种的灭绝、整个生态***的破坏等；
在经济方面，入侵物种可能造成降低海产品产量等直接经济损失，还会造成与人类健康生态影响有关的间接经济损失；
在对人类的健康方面，船舶压载水排放的微生物转移可能会形成可怕的威胁，压载水除了携带细菌和病毒外，还会传输一些微藻类，包括可能形成有害的藻花或赤潮的有毒种类，这些病原体和微生物可能引起人类严重的疾病甚至死亡。
海洋船舶压载水携带的微小生物通过排放导致物种入侵问题，越来越受到国际海事组织的关注。根据《船舶压载水和沉积物控制和管理国际公约(草案)》，第D-2条压载水执行标准。根据本条进行压载水管理的船舶压载水中活体生物的排放量被设定为限值。其中第一条规定：活体生物最小尺寸≥50μm的个体浓度＜10个/m3，活体生物最小尺寸为10～50μm的个体浓度＜10个/ml。
标准中要求的是活体生物浓度，这就要求在短时间内，将压载水中种类繁多的生物种类区分死活，并将生物的个数进行加和，在现有的检测技术条件下，这是一个很大的挑战。
然而现阶段对于压载水浮游植物是否活体的鉴定则是对管理船舶压载水的关键一环。
目前通常所使用的鉴定方法中，通常分为试剂鉴定与荧光法鉴定两种方式。前者通常一套试剂只能鉴定淡水中浮游植物，后者则造价较高，难以普及于我国科研工作的实际操作中。如采用荧光法鉴定活体浮游植物，必须通过测定细胞密度或叶绿素a等生物量的指标来检测藻细胞活性。所消耗时间较长，通常需要培养5-7天后，才能了解藻细胞活性情况，藻细胞是否全部杀死，而且叶绿素a的测定发放也非常繁琐。
因此需要一种可以快速检测压载水中排放浮游植物的鉴别方法。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术在检测海洋浮游生物活性时，所使用方法通常耗时长且繁琐、还有较高的成本，其检测效果也较差，检测后结果也不稳定的缺陷，提供船舶压载水排放的浮游植物活体的鉴别方法。
本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：
压载水排放的浮游植物活体的鉴别方法，包括以下步骤：
(1)采集浮游植物水样；
(2)在每升浮游植物水样中滴加1～1.5％中性红溶液1.0-2.0ml，进行染色；
(3)再向水样中滴加***溶液进行样品固定；
(4)取样品进行镜检，并计数。
所述1～1.5％中性红溶液的制备方法为：
称取0.5g～0.75g中性红溶于50ml Ringer溶液，30℃-40℃的温度范围内稍加热，使之溶解，过滤，装入棕色瓶中于暗处保存。
所述Ringer溶液由以下组分制备而成：
Figure BDA0000064814110000031
所述步骤(2)中的染色的时间为10-15min。
所述步骤(3)中的***溶液的体积百分比浓度为4-10％。
根据本发明的压载水排放的浮游植物活体的鉴别方法，更优选的是，所述Ringer溶液由以下组分制备而成：
Figure BDA0000064814110000032
上述水可以是蒸馏水或者去离子水。
根据本发明的压载水排放的浮游植物活体的鉴别方法，优选的是，所述步骤(2)中的染色的时间为15min。所述步骤(3)中的***溶液的体积百分比浓度为5％。
本发明所述的中性红是指“3-氨基-7-甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐”。
本发明所述的中性红溶液的“％”是指质量百分比。
本发明的有益效果是，与现有技术相比，本发明的方法的整个染色过程更加快速、简化，且成本较低、效果明显，极易区分出浮游植物是否活体。
具体实施方式
为了使本发明的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1对SHOU-BWDL-03样品(样品由中船重工第七O四研究所提供的模拟船舶压载水样品)的浮游植物活体进行的检测。
1试剂
1.1制备Ringer溶液：
Figure BDA0000064814110000041
先将氯化钠、氯化钾、氯化钙分别溶于少量蒸馏水中，混合后用蒸馏水稀释到100ml。
1.21％中性红溶液
称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，在30℃-40℃稍加热，使之很快溶解，用滤纸(定性滤纸)过滤，装入棕色瓶中于暗处保存(溶液易氧化沉淀，失去染色能力)。
2染色步骤：
2.1从压载水中采集浮游植物水样(3组平行水样)，每升水样中滴加1％中性红溶液1.0ml染色15min；
2.2再向水样中滴加5％***溶液进行样品固定；
2.3将样品摇匀后，取样品0.1ml于400×光学显微镜下观察到活体浮游植物个体，并计数。视野中可观察到活体浮游植物细胞染上红色，死体无染色现象。对于SHOU-BWDL-03样品(样品由中船重工第七O四研究所提供的模拟船舶压载水样品)的检测结果发现，活体浮游植物为168个，死亡的浮游植物个体数为129个，2小时后镜检结果一致。
实施例2
本实施例的试剂和方法与实施例1的大体相同，不同之处在于，
所述Ringer溶液由以下组分制备而成：
所述步骤(2)中的染色的时间为14-15min。
在染色步骤2.1中向每组每升水样中滴加1.5％中性红溶液为1.0ml(0.75g中性红溶于50ml Ringer液)。对于SHOU-BWDL-03样品(样品由中船重工第七O四研究所提供的模拟船舶压载水样品)的检测结果发现，活体浮游植物为168个，死亡的浮游植物个体数为127个，2小时后再次镜检活体浮游植物为168个，死亡的浮游植物个体数为128个。
实施例3
本实施例的试剂和方法与实施例1的大体相同，不同之处在于，
所述步骤(3)中的***溶液的体积百分比浓度为5-8％。
在染色步骤2.1中向每组每升水样中滴加的1％中性红溶液为2.0ml(0.5g中性红溶于50ml Ringer液)。对于SHOU-BWDL-03样品(样品由中船重工第七O四研究所提供的模拟船舶压载水样品)的检测结果发现，活体浮游植物为167个，死亡的浮游植物个体数为127个，2小时后继续镜检结果相同。
对照实施例
对于SHOU-BWDL-03样品(样品由中船重工第七O四研究所提供的模拟船舶压载水样品)的直接镜检结果发现，由于死亡不久的浮游植物细胞体内叶绿素等细胞器仍相对完整，易将其判定为活体；但随着固定时间的延长，叶绿体等细胞器会随浮游植物细胞内外渗透压的变化而破裂消失。从而出现同一组样品不同时间镜检存在一定的误差，第一次镜检时发现活体浮游植物为196个，死亡的浮游植物个体数为99个，2小时后镜检发现活体浮游植物为168个，死亡的浮游植物个体数为129个。且镜检耗时长。
由实施例1-3与对照实施例对同一组样品浮游植物活体的个体浓度检测结果比较，可以得出本发明的方法具有“快速、简化、效果明显、极易区分出浮游植物是否活体且稳定性好、误差值小”等优点。且本发明采用的试剂均为市售的较廉价的试剂，从而使得本发明的方法所消耗的成本大大降低。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

Claims (6)

1.压载水排放的浮游植物活体的鉴别方法，包括以下步骤：
(1)采集浮游植物水样；
(2)在每升浮游植物水样中滴加1～1.5％中性红溶液1.0-2.0ml，进行染色；
(3)再向水样中滴加***溶液进行样品固定；
(4)取样品进行镜检，并计数。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述1～1.5％中性红溶液的制备方法为：称取0.5g～0.75g中性红溶于50ml Ringer溶液，30℃-40℃的温度范围内稍加热，使之溶解，过滤，装入棕色瓶中于暗处保存。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Ringer溶液由以下组分制备而成：
Figure FDA0000064814100000011
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述Ringer溶液由以下组分制备而成：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的染色的时间为10-15min。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的***溶液的体积百分比浓度为4-10％。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102636487A (zh) * 2012-03-23 2012-08-15 上海海洋大学 压载水排放浮游动物活体的鉴别方法
CN106244669A (zh) * 2016-10-18 2016-12-21 上海海洋大学 一种快速鉴别水中10‑50微米活体生物的方法
CN106442488A (zh) * 2016-08-31 2017-02-22 威海中远造船科技有限公司 压载水中50um以上生物活体检测方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100072144A1 (en) * 2006-09-27 2010-03-25 Tsugiyoshi Osakabe Method of treating ballast water of ship

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100072144A1 (en) * 2006-09-27 2010-03-25 Tsugiyoshi Osakabe Method of treating ballast water of ship

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李伟才: "日照港和邻近锚地及其入境船舶压舱水中浮游植物群集结构的特征", 《海洋科学》, vol. 30, no. 12, 31 December 2006 (2006-12-31), pages 52 - 57 *
李炳乾 等: "福建外来船舶压舱水中浮游植物种类组成与丰度及其影响因素的初步研究", 《台湾海峡》, vol. 28, no. 2, 31 May 2009 (2009-05-31) *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102636487A (zh) * 2012-03-23 2012-08-15 上海海洋大学 压载水排放浮游动物活体的鉴别方法
CN106442488A (zh) * 2016-08-31 2017-02-22 威海中远造船科技有限公司 压载水中50um以上生物活体检测方法
CN106442488B (zh) * 2016-08-31 2019-12-10 威海中远造船科技有限公司 压载水中50μm以上生物活体检测方法
CN106244669A (zh) * 2016-10-18 2016-12-21 上海海洋大学 一种快速鉴别水中10‑50微米活体生物的方法

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