CN102307465A - 使用逆流分离从复杂混合物中纯化取代环戊-2-烯-1-酮同源物及取代1,3-环戊二酮同源物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了纯化取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮的单个同源物的方法以及利用所述单个同源物的组合物。所述纯化方法包括以下步骤：(a)选择待分离的同源物；(b)将同源物混合物溶解在专门针对所选择的待分离的同源物的双相溶剂体系中，其中所述双相溶剂体系的分配系数是约0.5至5.0；(c)对溶解在所述双相溶剂体系中的所述混合物进行逆流色谱法；以及(d)以实质上纯的形式分离所选择的同源物。
Description
发明背景
相关申请的交叉引用
本专利申请是在2008年12月10日提交的美国临时专利申请60/121,419的非临时性申请，并要求该临时专利申请的优先权，该临时专利申请整体通过援引加入本文。
发明领域
本发明涉及逆流色谱纯化的领域；具体而言，本发明涉及纯化存在于合成混合物中或者可以从啤酒花中分离或源自啤酒花的取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮的单个同源物的方法。另外还公开了利用这些实质上纯的同源物的组合物。这些实质上纯的同源物是通过使用适合的不互溶的溶剂体系及逆流分离仪器获得的。
相关技术说明
最近已报道了异α酸(取代环戊-2-烯-1-酮)的同源物混合物在肥胖及血脂异常的鼠类模型中产生有益效果。除了这些报道外，属于不同族的异α酸(取代环戊-2-烯-1-酮)的还原异α酸(取代1，3-环戊二酮)的同源物混合物具有体外抗炎活性并在减低关节炎膝痛中具有经临床证实的有效性。为了测定不同异α酸同源物(取代环戊-2-烯-1-酮)以及属于还原异α酸族(取代环戊-2-烯-1-酮)的同源物在生物活性方面的差异，需要可以纯化这些同源物的有效分离方法。
最早经报道的纯化异α酸的同源物的方法依赖于如Rigby与Bethune所报道的Craig-Post逆流分布(CCD)装置(Rigby，F.L.和Bethune，J.L.(1952)Proc.Am.Soc.Brew.Chem.98-105)。在此报道中，纯化的异α酸同源物被称为“异葎草酮(isohumulone)”，并根据其与从被称为“葎草酮”的前体合成的对照样品相比的相同物理性质而得以鉴定。另外，被称为“异科葎草酮”的第二同源物被分离出来。使用类似于Rigby & Bethune，Verzele等人，(VerzeleM.，Anteunis，M.和Alderweireldt F.，J.Inst.Brewing，(1965)，71，232)报道的CCD方法，报道纯化被称为“反式-异葎草酮”及“顺式-异葎草酮”的异α酸的两种新型同源物。已出版的报道使用CCD方法纯化异α酸或还原异α酸的多种同源物的其它实例及参考文献可见于Verzele与DeKeukeleire的重要著作(M.Verzele，D.DeKeukeleire，Chemistry and Analysis of Hop and BeerBitter Acids.Elsevier：New York，1991；第27卷)。
Pauli等人综述了在逆流分离(CS)技术中的创新和进步(J.Nat.Prod.，2008，71(8)，第1489-1508页)。如Pauli等人的讨论并如图18所示，独特且新颖的CS设计的发展是CS领域中的显著且最新的进展。由于这些当代仪器的设计及操作的固有及基本的优点，原先由Rigby和Bethune以及Verzele等人所描述的前述CCD装置已经过时。根据Pauli等人，当代的CS仪器是根据一种或两种规范化设计原理，即流体静力学或流体动力学设计操作的。这两种设计彼此不同，并且与Verzele等人及其同时代使用的目前过时的CCD仪器相比，其具有根本上独特的设计以及固有地卓越的操作、效率及性能。
啤酒花已数十年用于将啤酒调味，并且与水、酵母及麦芽共同被认为是啤酒的基本成份。许多研究已证实源自啤酒花的还原异α酸可作为抗炎剂及膳食补品。最近的研究还证实还原异α酸的某些异构体可以比外消旋混合物在治疗上更为有效。
发明概述
需要一种有效率、精确且相对廉价的纯化取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮的异构体的方法。利用逆流分离的本发明还提供包含实质上纯的形式的这些同源物的组合物。
本发明的第一方面公开从同源物混合物中分离实质上纯的形式的同源物的方法，其包括以下步骤：
a.选择待分离的同源物；
b.将所述同源物混合物溶解在专门针对所选择的待分离的同源物的双相溶剂体系中，其中所述双相溶剂体系的分配系数是约0.5至5.0；
c.对溶解在所述双相溶剂体系中的所述同源物混合物进行逆流色谱法；以及
d.分离所选择的同源物；
其中在此方面所述同源物选自取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮。
本发明的第二方面公开包含实质上纯的同源物或其药学上可接受的盐的组合物，其中所述同源物是通过包括以下步骤的方法，从同源物混合物获得的：
a.选择待分离的同源物；
b.将所述同源物混合物溶解在专门针对所选择的待分离的同源物的双相溶剂体系中，其中所述双相溶剂体系的分配系数是约0.5至5.0；
c.对溶解在所述双相溶剂体系中的所述同源物混合物进行逆流色谱法；以及
d.分离所选择的同源物；
其中在此方面所述同源物选自取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮。
第三方面公开从同源物混合物中分离实质上纯的形式的同源物的方法，其包括以下步骤：
a.制备源自啤酒花提取物的单个同源物的适合的混合物；
b.用可以引入逆流分离仪器中用于纯化目的的适合的溶剂将所述混合物溶解；
c.收集单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液；
d.将从步骤(c)中获得的逆流分离纯化的同源物提取到适合的溶剂中；或者
e.从步骤(c)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；以及
f.从步骤(d)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；
其中在此方面所述同源物选自取代环-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮。
第四方面公开包含实质上纯的同源物或其药学上可接受的盐的组合物，其中所述同源物是通过包括以下步骤的方法，从同源物混合物获得的：
a.制备源自啤酒花提取物的单个同源物的适合的混合物；
b.用可以引入逆流分离仪器中用于纯化目的的适合的溶剂将所述混合物溶解；
c.收集单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液；
d.将从步骤(c)中获得的逆流分离纯化的同源物提取到适合的溶剂中；或者
e.从步骤(c)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；以及
f.从步骤(d)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；
其中在此方面所述同源物选自取代环-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮。
附图简述
图1显示四氢异α酸(THIAA)的顺式及反式非对映异构体。
图2描述将α酸转化成异α酸，随后转化成四氢异α酸的反应路线。
图3描述显示高速逆流色谱法(HSCCC)分离之前的THIAA的组合物的色谱图：各峰按照从左至右的顺序代表如下物质：TH1：顺式四co-异α酸；TH2：反式四co-异α酸；TH3：反式四ad-异α酸；TH4：顺式四ad-异α酸；TH5：顺式四n-异α酸；TH6：反式四n-异α酸。
图4描述显示THIAA组分的洗脱及分级(fractionation)的色谱图(通过254nm下的UV监测)。该分离是使用325mL的盘管(coil)体积；350mg的总进样量在下行(descending)模式下进行的。
图5显示THIAA组合物的代表性色谱图。上图鉴别包含混合物的THIAA组分的色谱峰。下表描述形成THIAA的单个成员的化学结构。色谱图中的各峰与含有表中所示的不同R基的不同THIAA化合物相对应。上图中描述的THIAA结构中显示了R基的位置。
图6描述THIAA组合物的代表性色谱图。最上方的图鉴别包含混合物的THIAA组分的色谱峰，而随后的各图显示各单个成员及分离流分的色谱图与相应结构。
图7显示对各纯化的TH(THIAA非对映异构体)组分所得的NMR数据。图A-E分别描述TH1、TH2、TH4、TH5和TH7。
图8描述在顺式四氢异α酸原料中发现的主要组分的化学结构。
图9是具有以下参数的HPCCC色谱图：100mg顺式四氢异α酸；配置：J-型行星式；模式：下行(由头至尾)；固定相：己烷；流动相：250mMNH4PO4(水溶液)，pH 6.3；进样量：10mL。
图10是具有以下参数的HPCCC色谱图：1021mg顺式四氢异α酸；配置：J-型行星式；模式：下行(由头至尾)；固定相：己烷；流动相：250mM浓度NH4PO4(水溶液)，pH 6.3；进样量：100mL(10mg/mL)；盘管体积：810mL；RPM：700；流速：4mL/min；固定相保留：65％；运行时间：650min。
图11是图10的HPCCC色谱图，用柱状物显示三个主要收集流分中每个的量以及各流分的均一性百分比(percent homogeneity)。
图12是显示结构的四氢顺式n异α酸原料的HPLC色谱图以及嵌入的特征性UV光谱。
图13是具有以下参数的HPCCC色谱图：100mg(10mg/mL)，6mL/min。
图14是在实施例2中经HPCCC纯化的流分的HPLC色谱的叠加。
图15描述堆叠格式(stack format)的图14中的色谱图。
图16显示使用所描述的特定参数(即THIAA pH 6.3；250mM NH4PO4；分析盘管(analytical coil)；700rpm下2mL/min；61％固定相保留)的HSCCC纯化方法的结果。
图17是在源自啤酒花(Humulus Lupulus L.)的提取物或修饰的提取物中发现的主要异α酸或还原异α酸同源物的化学结构图。
图18是将当代CS仪器设计分类的简图。
图19是显示从存在于Isohop
中的异α酸同源物混合物中分别将两种单个同源物IA1及IA5纯化至99％均一性的流程图。
图20是显示从顺式四氢异α酸的混合物中分别将两种单个同源物TH1及TH5纯化至99％均一性的流程图。
图21是存在于Isohop
中的异α酸同源物的代表性混合物的HPLC色谱图。
图22是顺式四氢异α酸的代表性混合物的HPLC色谱图。
图23是根据实施例4中提供的描述，用于纯化顺式四氢异α酸同源物的逆流分离(CS)的重构示踪(reconstructed trace)。
图24是根据实施例5中提供的描述，用于纯化顺式四氢异α酸同源物的逆流分离(CS)的重构示踪。
图25是根据实施例6中提供的描述，用于纯化顺式异α酸同源物的逆流分离(CS)的重构示踪。
图26描述存在于体系中的异α酸(或还原异α酸)的特定同源物与任何盐或缓冲液之间的复杂平衡。
图27显示缓冲液的浓度大幅影响IAA同源物IA1、IA5及IA4的分配。
图28说明缓冲液与两种IA同源物之间的化学计量效应。
图29显示缓冲液的量如何影响两种IAA同源物在两种溶剂体系SS1(HexWat)及SS2(Hemwat)中的pH。
发明详述
本发明提供取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮和取代1，3-环戊二酮及其各顺式/反式非对映异构体的结构类似物的制备色谱分离或纯化方法。
本文提及的专利、公开申请及科学文献构成本领域技术人员的常识，并整体援引加入本文，达到如同其各自特别且单独援引加入的程度。本文引用的任意文献与本说明书的具体教导之间的任何冲突应以后者为准。同样，单词或短语在本领域所理解的定义与该单词或短语在本说明书中所教导的定义之间的任何不同之处应以后者为准。
除非另外说明，本文中使用的技术术语及科学术语具有本发明所属领域技术人员通常理解的含义。本文提到的各种方法和材料是本领域技术人员已知的。记载DNA技术的一般原理的标准参考著作包括Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring HarborLaboratory Press，New York(1989)；及Kaufman等人主编，Handbook ofMolecular and Cellular Methods in Biology in Medicine，CRC Press，BocaRaton(1995)。记载药理学的一般原理的标准参考著作包括Goodman和Gilman，The Pharmacological Basis of Therapeutics，第11版，McGraw HillCompanies Inc.，New York(2006)。
除非上下文中另外清楚地指明，在说明书及所附权利要求中，单数形式包括复数的所指对象。除非上下文中另外清楚地指明，本说明书中使用的单数形式“a”、“an”及“the”特别地还包括其所涉及的术语的复数形式。另外，除非另外特别地指明，本文中使用的单词“或”是以“和/或”的“包含性”意义使用而非以“择一(either/or)”的“排除性”意义使用。本文中使用的术语“约”是指大约、在该范围、大致或附近。当术语“约”与数字范围结合使用时，其通过向上及向下延伸所述数值的界限而调节该范围。通常，术语“约”在本文中用于将数值向上及向下调节所述值的20％变化。
如本文中所用，对于变量的数值范围的描述意图表示本发明可以在与该范围内的任意值相等的变量下实施。因此，对于本身离散的变量，该变量可以与该数值范围内的任意整数值(包括该范围的端点在内)相等。类似地，对于本身连续的变量，该变量可以与该数值范围内的任意实值(包括该范围的端点在内)相等。例如，对于本身离散的变量，被描述为具有0至2的值的变量可以是0、1或2，而对于本身连续的变量，其可以是0.0、0.1、0.01、0.001或其它任意实值。
除非另外定义，本文使用的技术术语及科学术语具有本发明所属领域技术人员通常理解的含义。本文提到的各种方法及材料是本领域技术人员已知的。记载重组DNA技术的一般原理的标准参考著作包括Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring HarborLaboratory Press，New York(1989)；Kaufman等人主编，Handbook ofMolecular and Cellular Methods in Biology in Medicine，CRC Press，BocaRaton(1995)；McPherson主编，Directed Mutagenesis：A Practical Approach，IRL Press，Oxford(1991)。记载药理的一般原理的标准参考著作包括Goodman和Gilman，The Pharmacological Basis of Therapeutics，第11版，McGraw Hill Companies Inc.，New York(2006)。
在本说明书中使用时，不论是在连接短语(transitional phrase)还是在权利要求主体中，术语“包含”和“包括”应解释为具有开放式的含义。也就是说，该术语应与术语“至少具有”或“至少包括”同义地解释。当在方法的语境中使用时，术语“包括”是指该方法至少包括所提到的步骤，但可以包括其它步骤。当在化合物或组合物的语境中使用时，术语“包含”是指该化合物或组合物至少包含所提到的特征或组分，但可以包含其它特征或组分。
本文提及的专利、公开申请及科学文献构成本领域技术人员的常识，并整体援引加入本文，达到如同其各自特别且单独援引加入的程度。本文引用的任意文献与本说明书的具体教导之间的任何冲突应以后者为准。同样，单词或短语在本领域所理解的定义与该单词或短语在本说明书中所教导的定义之间的任何不同之处应以后者为准。
下文中详细提到本发明的具体实施方案。虽然会结合这些具体实施方案描述本发明，但应理解并非意图将本发明限制在这样的具体实施方案中。相反，本发明意图涵盖可包括在由所附权利要求中所限定的本发明的精神与范围内的变化、修改及等同。在以下描述中，记载许多具体细节以便充分理解本发明。可以在没有部份或全部这些具体细节的情况下实施本发明。在其它情形下，为了避免不必要地使本发明模糊不清而没有对公知的方法操作加以详细说明。
本领域技术人员可以使用已知的任意适合的材料和/或方法实施本发明。但是，本文中描述了优选的材料及方法。除非另外说明，以下描述及实施例中提到的材料、试剂等是可商购获得的。
本发明的方法及组合物意图用于可体验本发明方法的益处的任意哺乳动物。这样的哺乳动物中最优选人类，但本发明并非意图如此限制，而是可用于兽用。因此，根据本发明，“有需要的患者”包括人类以及非人类哺乳动物，特别是驯养动物，包括但不限于猫、狗及马。“有需要的患者”还包括爬行动物、鸟类、鱼类及两栖动物。
下文中详细提到本发明的具体方面及实施方案。虽然会结合这些具体实施方案描述本发明，但应理解并非意图将本发明限制在这样的具体实施方案中。相反，本发明意图涵盖可包括在由所附权利要求中所限定的本发明的精神与范围内的变化、修改及等同。在以下描述中，记载许多具体细节以便充分理解本发明。可以在没有部份或全部这些具体细节的情况下实施本发明。在其它情形下，为了避免不必要地使本发明模糊不清而没有对公知的方法操作加以详细说明。
本发明的第一方面公开从同源物混合物中分离实质上纯的形式的同源物的方法，其包括以下步骤：
a.选择待分离的同源物；
b.将所述同源物混合物溶解在专门针对所选择的待分离的同源物的双相溶剂体系中，其中所述双相溶剂体系的分配系数是约0.5至5.0；
c.对溶解在所述双相溶剂体系中的所述同源物混合物进行逆流色谱法；以及
d.分离所选择的同源物；
其中在此方面所述同源物选自取代环-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮。
本文中使用的“实质上纯的”意指其中所命名、所提及的同源物以大于65％的纯度存在的分离物。优选地，用于营养品、医疗食品或膳食补品用途的纯度应大于80％。最优选地，纯度应大于95％，以适于药物用途。
本文中使用的术语“膳食补品”是指供食用以影响生理方面的结构或功能变化的组合物。
在此方面的一些实施方案中，所述取代环己-2，4-二烯酮选自(6R)-3，5，6-三羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、(6R)-3，5，6-三羟基-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及(6R)-3，5，6-三羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮。
本文中使用的“取代环己-2，4-二烯酮”是指那些一般被描述为通常与啤酒花及啤酒生产相关的α酸的化合物。所述取代环己-2，4-二烯酮的实例包括但不限于那些在表1中确认的化合物及其衍生物。所述取代环己-2，4-二烯酮可以通过化学合成从头制备或者从啤酒花(Humulus lupulus)原料中分离、衍生或修饰。
表1.取代环己-2，4-二烯酮
在其它实施方案中，所述取代环己烷-1，3，5-三酮选自其中所述组合物富含一种或多种选自3，5-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、3，5-二羟基-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及3，5-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮的化合物的取代环己烷-1，3，5-三酮。
本文中使用的“取代环己烷-1，3，5-三酮”是指那些一般被描述为通常与啤酒花及啤酒生产相关的β酸的化合物。所述取代环己烷-1，3，5-三酮的实例包括但不限于那些在表2中确认的化合物及其衍生物。所述取代环己烷-1，3，5-三酮可以通过化学合成从头制备或者从啤酒花(Humulus lupulus)原料中分离、衍生或修饰。
表2.取代环己烷-1，3，5-三酮
在其它实施方案中，所述取代环戊-2-烯-1-酮选自(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮。
本文中使用的“取代环戊-2-烯-1-酮”是指那些一般被描述为通常与啤酒花及啤酒生产相关的异α酸的化合物。所述取代环己烷-1，3，5-三酮的实例包括但不限于那些在表3中确认的化合物及其衍生物。所述取代环戊-2-烯-1-酮可以通过化学合成从头制备或者从啤酒花(Humulus lupulus)原料中分离、衍生或修饰。
表3.取代环戊-2-烯-1-酮
在此方面的其它实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；及达99.9重量％的(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
在另一实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮。
在又一实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮及(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
本文中使用的“取代1，3-环戊二酮”是指那些一般被描述为通常与啤酒花及啤酒生产相关的还原异α酸的化合物。所述取代1，3-环戊二酮化合物是指二氢异α酸(RIAA)、四氢异α酸(“THIAA”)及六氢异α酸(“HHIAA”)。还原异α酸(RIAA)的实例包括但不限于二氢异α酸，更特别是Rho二氢异α酸(表4)、四氢异α酸(表5)及六氢异α酸(表6)，以及它们的衍生物。“Rho”是指那些其中还原是在4-甲基-3-戊烯酰基侧链中的羰基的还原的还原异α酸。
表4.取代1，3-环戊二酮化合物
表5.取代1，3-环戊二酮化合物
表6.取代1，3-环戊二酮化合物
在此方面的其它实施方案中，所述双相体系的溶剂可以是例如优选pH为0至14，或优选pH为1至13、3至12或5至10的水；pH为0至14、1至13、3至12或5至10的含有缓冲剂的水；含有可溶性聚合物的水；戊烷；己烷；庚烷；辛烷；乙酸甲酯；乙酸乙酯；乙酸丙酯；乙酸丁酯；乙酸叔丁酯；甲醇；乙醇；丙醇；异丙醇；丁醇；叔丁醇；二甲基甲酰胺；二甲亚砜；二氯甲烷；氯仿；或丙酮，或其任意组合。
在进一步的实施方案中，所述双相溶剂体系的分配系数为0.6至3.0，而在其它实施方案中，所述双相溶剂体系的分配系数为0.7至1.5。
在本发明的一些实施方案中，所述逆流色谱法是在约20℃至约30℃的温度下进行的，而在其它实施方案中，所述逆流色谱法是在环境温度下进行的。
本文中使用的“化合物”可以通过其化学结构、化学名或俗名而得以确认。当化学结构及化学名或俗名冲突时，化学结构对于确认该化合物是决定性的。本文所述的化合物可以含有一个或多个手性中心和/或双键，并因此可以以立体异构体(例如双键异构体(即几何异构体))、对映异构体或非对映异构体的形式存在。因此，本文所描述的化学结构包括所说明或确认的化合物的全部可能的对映异构体及立体异构体，包括立体异构纯形式(例如几何异构纯、对映异构纯或非对映异构纯)及对映异构与立体异构混合物。可以使用本领域技术人员公知的分离技术或手性合成技术将对映异构与立体异构混合物拆分成其组分对映异构体或立体异构体。化合物也可以以数种互变异构形式(包括烯醇形式、酮形式及其混合物)的形式存在。因此，本文所描述的化学结构包括所说明或确认的化合物的全部可能的互变异构形式。所述化合物也包括同位素标记的化合物，其中一个或多个原子的原子量不同于通常在自然界中所发现的原子量。可以引入本发明化合物中的同位素的实例包括但不限于2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O等。化合物可以未经溶剂化形式和溶剂化形式以及N-氧化物的形式存在。通常，化合物可以是水合的、溶剂化的或N-氧化物。某些化合物可以以多种结晶形式或无定形形式存在。本发明范围内也包括化合物的同源物、类似物、水解产物、代谢物及前体或前药。一般而言，除非另外说明，全部物理形式对于本文的用途而言是等效的，并且意图包括在本发明的范围内。
本发明的化合物可以以盐的形式存在。具体而言，本发明包括所述化合物的药学上可接受的盐。本发明的“药学上可接受的盐”是本发明的化合物以及与所述化合物形成盐(例如镁盐，本文中表示为“Mg”或“Mag”)的酸或碱的结合，并且在治疗条件下是个体可耐受的。通常，本发明化合物的药学上可接受的盐的治疗指数(最低毒性剂量与最低治疗有效剂量之比)是1或更大。本领域技术人员可以理解，治疗有效剂量会随着个体及适应症的不同而改变，并且会做出相应的调节。
本发明的第二方面公开包含实质上纯的同源物或其药学上可接受的盐的组合物，其中所述同源物是通过包括以下步骤的方法，从同源物混合物获得的：
a.选择待分离的同源物；
b.将所述同源物混合物溶解在专门针对所选择的待分离的同源物的双相溶剂体系中，其中所述双相溶剂体系的分配系数是约0.5至5.0；
c.对溶解在所述双相溶剂体系中的所述同源物混合物进行逆流色谱法；以及
d.分离所选择的同源物；其中在此方面所述同源物选自取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮。
在此方面的一些实施方案中，所述取代环己-2，4-二烯酮选自(6R)-3，5，6-三羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、(6R)-3，5，6-三羟基-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及(6R)-3，5，6-三羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮。
在其它实施方案中，所述取代环己烷-1，3，5-三酮选自其中所述组合物富含一种或多种选自3，5-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、3，5-二羟基-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及3，5-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮的化合物的取代环己烷-1，3，5-三酮。
在其它实施方案中，所述取代环戊-2-烯-1-酮选自(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮。
在此方面的其它实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；及达99.9重量％的(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
在另一实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮。
在又一实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮及(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
在此方面的其它实施方案中，所述双相体系的溶剂选自水、含有缓冲剂的水、含有可溶性聚合物的水、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸叔丁酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿及丙酮，或其任意组合。
在进一步的实施方案中，所述双相溶剂体系的分配系数为0.6至3.0，而在其它实施方案中，所述双相溶剂体系的分配系数为0.7至1.5。
在本发明的一些实施方案中，所述逆流色谱法是在约20℃至约30℃的温度下进行的，而在其它实施方案中，所述逆流色谱法是在环境温度下进行的。
在一些实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂选自等渗及吸收延迟剂(isotonic and absorption delaying agent)、粘合剂、胶粘剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、甜味剂、吸收剂、洗涤剂及乳化剂，或其任意组合，而在其它实施方案中，所述组合物还包含一种或多种抗氧化剂、维生素、矿物质、蛋白质、脂肪及碳水化合物。
有用的赋形剂的实例包括但不限于乳糖、蔗糖、D-甘露醇、淀粉、玉米淀粉、结晶纤维素、轻质无水硅酸等。有用的润滑剂的实例包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石、胶体二氧化硅等。有用的粘合剂的实例包括但不限于结晶纤维素、蔗糖、D-甘露醇、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、蔗糖、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等。有用的崩解剂的实例包括淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基淀粉钠、L-羟丙基纤维素等。有用的溶剂的实例包括注射用水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、芝麻油、玉米油、橄榄油等。有用的助溶剂(dissolution aid)的实例是聚乙二醇、丙二醇、D-甘露醇、苯甲酸苄酯、乙醇、三氨基甲烷、胆固醇、三乙醇胺、碳酸钠、柠檬酸钠等。有用的助悬剂的实例是表面活性剂，例如硬脂酰基三乙醇胺、十二烷基硫酸钠、月桂基氨基丙酸、卵磷脂、苯扎氯铵、苄索氯铵、单硬脂酸甘油酯等；亲水性聚合物，例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素等。有用的等渗剂的实例包括但不限于葡萄糖、D-山梨醇、氯化钠、甘油、D-甘露醇等。有用的缓冲液的实例包括但不限于磷酸盐、乙酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐等的缓冲液。有用的安抚剂的实例包括但不限于苯甲醇等。防腐剂的实例包括对羟基苯甲酸酯(p-oxybenzoate)、氯丁醇、苯甲醇、苯乙醇、脱氢乙酸、山梨酸等。抗氧化剂的实例包括亚硫酸盐、抗坏血酸、α-生育酚等。
可以用任意公知的药学上可接受的载体(包括稀释剂及赋形剂)将本发明的化合物任选地配制到药学上可接受的媒介物中(参见Remington，Pharmaceutical Sciences，第18版，Gennaro，Mack Publishing Co.，Easton，PA1990和Remington：The Science and Practice of Pharmacy，Lippincott，Williams & Wilkins，1995)。虽然在生成本发明的组合物中所用的药学上可接受的载体/媒介物的类型会取决于将该组合物向哺乳动物给药的模式而改变，但通常药学上可接受的载体是生理惰性且无毒的。本发明组合物的制剂可以含有多于一种的本发明化合物以及用于治疗待治疗症状/病症的任意其它药理学活性成份。
在其它实施方案中，所述组合物为适合通过选自口服、吸入、直肠、眼部、鼻腔、局部、***及肠胃外的途径给药的剂型。
本发明组合物的制剂可以方便地以单位剂型的形式存在，并且可以通过如上所述的常规制药技术进行制备。这样的技术包括将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的载体(例如稀释剂或赋形剂)结合的步骤。通常，通过以下方法制备所述制剂：将所述活性成份与液体载体或微细粉碎的固体载体或二者均匀且紧密地结合在一起，随后视需要将产物成形。
可以取决于给药个体、给药途径、疾病等适当地选择本发明化合物与本发明组合药物的混合比例。例如，通过本发明方法分离的还原异α酸的量可以取决于制剂的形式，并且通常是所述组合物的约0.01-100重量％，优选约0.1-50重量％，更优选约0.5-20重量％。
在用于口服给药的制剂的情形下，可以根据本身已知的方法向本发明化合物或组合药物中添加例如赋形剂(例如乳糖、蔗糖、淀粉等)、崩解剂(例如淀粉、碳酸钙等)、粘合剂(例如淀粉、***胶、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素等)、润滑剂(例如滑石、硬脂酸镁、聚乙二醇6000等)等，并将混合物压模，随后可以为了掩蔽味道、肠溶性质(enteric property)或持久性(durability)的目的视需要通过本身已知的方法将该模制产品包衣，以获得用于口服给药的制剂。作为该包衣剂，可以使用例如羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚氧乙二醇、Tween 80、Pluronic F68、邻苯二甲酸乙酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、琥珀酸乙酸羟甲基纤维素、Eudoragit(甲基丙烯酸丙烯酸共聚物，Rohm，DE生产)、色素(例如氧化铁红、二氧化钛等)等。所述用于口服给药的制剂可以是速释制剂和持续释放制剂中的任意一种。
例如在栓剂的情形下，可以根据本领域已知的方法将本发明化合物及组合药物制成油性或水性固体、半固体或液体栓剂。作为用于上述组合物中的油性基质，列举例如高级脂肪酸[例如可可脂、Witebsols(DynamiteNovel，DE生产)等]、中级脂肪酸[例如Myglyols(Dynamite Novel，DE生产)等]或植物油(例如芝麻油、大豆油、棉籽油等)等的甘油酯。另外，作为水性基质，列举例如聚乙二醇、丙二醇，并且作为水性胶体基质，列举例如天然树胶、纤维素衍生物、乙烯基聚合物、丙烯酸聚合物等。]
持续释放剂的实例包括但不限于持续释放微胶囊剂。为了获得持续释放微胶囊剂，可以采用本领域已知的方法，例如优选在给药前将其模制成下文第(2)部分所示的持续释放制剂。
优选地将本发明化合物模制成口服给药制剂例如固体制剂(例如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂)等，或者模制成直肠给药制剂例如栓剂。特别优选口服给药制剂。
在另一实施方案中，所述组合物中的同源物纯度为至少80％，而在其它实施方案中，所述同源物的纯度为至少95％。
第三方面公开从同源物混合物中分离实质上纯的形式的同源物的方法，其包括以下步骤：
a.制备源自啤酒花提取物的单个同源物的适合的混合物；
b.用可以引入逆流分离仪器中用于纯化目的的适合的溶剂将所述混合物溶解；
c.收集单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液；
d.将从步骤(c)中获得的逆流分离纯化的同源物提取到适合的溶剂中；或者
e.从步骤(c)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；以及
f.从步骤(d)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；
其中所述同源物选自取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮。
在此方面的一些实施方案中，所述取代环己-2，4-二烯酮选自(6R)-3，5，6-三羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、(6R)-3，5，6-三羟基-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及(6R)-3，5，6-三羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮。
在其它实施方案中，所述取代环己烷-1，3，5-三酮选自其中所述组合物富含一种或多种选自3，5-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、3，5-二羟基-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及3，5-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮的化合物的取代环己烷-1，3，5-三酮。
在其它实施方案中，所述取代环戊-2-烯-1-酮选自(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮。
在此方面的其它实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；及达99.9重量％的(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。在另一实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮。
在又一实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮及(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
在此方面的其它实施方案中，所述双相体系的溶剂选自水、含有缓冲剂的水、含有可溶性聚合物的水、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸叔丁酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿及丙酮，或其任意组合。
在进一步的实施方案中，所述双相溶剂体系的分配系数为0.6至3.0，而在其它实施方案中，所述双相溶剂体系的分配系数为0.7至1.5。
在本发明的一些实施方案中，所述逆流色谱法是在约20℃至约30℃的温度下进行的，而在其它实施方案中，所述逆流色谱法是在环境温度下进行的。
第四方面公开包含实质上纯的同源物或其药学上可接受的盐的组合物，其中所述同源物是通过包括以下步骤的方法，从同源物混合物获得的：
a.制备源自啤酒花提取物的单个同源物的适合的混合物；
b.用可以引入逆流分离仪器中用于纯化目的的适合的溶剂将所述混合物溶解；
c.收集单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液；
d.将从步骤(c)中获得的逆流分离纯化的同源物提取到适合的溶剂中；或者
e.从步骤(c)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；以及
f.从步骤(d)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；
其中所述同源物选自取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮。
在此方面的一些实施方案中，所述取代环己-2，4-二烯酮选自(6R)-3，5，6-三羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、(6R)-3，5，6-三羟基-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及(6R)-3，5，6-三羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮。
在其它实施方案中，所述取代环己烷-1，3，5-三酮选自其中所述组合物富含一种或多种选自3，5-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、3，5-二羟基-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及3，5-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮的化合物的取代环己烷-1，3，5-三酮。
在其它实施方案中，所述取代环戊-2-烯-1-酮选自(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮。
在此方面的其它实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；及达99.9重量％的(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
在另一实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮。
在又一实施方案中，所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮及(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
在此方面的其它实施方案中，所述双相体系的溶剂选自水、含有缓冲剂的水、含有可溶性聚合物的水、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸叔丁酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿及丙酮，或其任意组合。
在进一步的实施方案中，所述双相溶剂体系的分配系数为0.6至3.0，而在其它实施方案中，所述双相溶剂体系的分配系数为0.7至1.5。
在本发明的一些实施方案中，所述逆流色谱法是在约20℃至约30℃的温度下进行的，而在其它实施方案中，所述逆流色谱法是在环境温度下进行的。
在一些实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂选自等渗及吸收延迟剂、粘合剂、胶粘剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、甜味剂、吸收剂、洗涤剂及乳化剂，或其任意组合，而在其它实施方案中，所述组合物还包含一种或多种抗氧化剂、维生素、矿物质、蛋白质、脂肪及碳水化合物。
在其它实施方案中，所述组合物为适合通过选自口服、吸入、直肠、眼部、鼻腔、局部、***及肠胃外的途径给药的剂型。
在另一实施方案中，所述组合物中的同源物纯度为至少80％，而在其它实施方案中，所述同源物的纯度为至少95％。
取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮包括三种结构类似物：n-、co-及ad-。对于取代1，3-环戊二酮，参见图1。各类似物均以顺式及反式非对映异构体二者的形式存在。将单个类似物纯化成其各自的顺式及反式非对映异构体是一个困难且富于挑战的问题。本发明公开一种新颖且容易的顺式及反式非对映异构体的色谱纯化方法。本方法提供大量(即许多克)的各结构类似物的纯的顺式及反式非对映异构体，使得能够测定它们各自的药理性质及毒理性质。
本发明提供一种高速逆流色谱(HSCCC)法，用以富集或纯化取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮的非对映异构体，特别是四氢异α酸。该应用于四氢异α酸的纯化方法可以类似地应用于其它还原异α酸(即二氢异α酸及六氢异α酸)。
所述双相体系的溶剂可以是例如优选pH为0至14，或优选pH为1至13、3至12或5至10的水；pH为0至14、1至13、3至12或5至10的含有缓冲剂的水；含有可溶性聚合物的水；戊烷；己烷；庚烷；辛烷；乙酸甲酯；乙酸乙酯；乙酸丙酯；乙酸丁酯；乙酸叔丁酯；甲醇；乙醇；丙醇；异丙醇；丁醇；叔丁醇；二甲基甲酰胺；二甲亚砜；二氯甲烷；氯仿；或丙酮，或其任意组合。
用于纯化还原异α酸的双相体系的分配系数在约0.5至5，或优选地约0.6至4、0.7至3、0.8至2、0.85至1.5，或0.9至1.2，或最优选地约0.9至1.1的范围内。
所述逆流色谱法是在约20℃至约30℃，或优选地约22℃至约28℃，或约23℃至约27℃的温度下进行的，但是可以在环境温度进行。
图1显示了统称为THIAA的化合物的结构。由于在酰基侧链的变化，THIAA主要包括三种结构类似物(De Keukeleire，2000；Verzele，1986)。这三种类似物是用以下前缀命名的：n-(异丁基)、co-(异丙基)及ad-(仲丁基)。如图1所示，各类似物的顺式及反式非对映异构体均存在于THIAA混合物中。各非对映异构体是作为单一对映异构体产生的，基于这个原因，最多有6种衍生自三种类似物(即n-、co-及ad-)的独特的化学形式可以存在于THIAA中。
通常，从啤酒花制备THIAA的方法是从用超临界二氧化碳(CO2)萃取啤酒花穗(hop cone)开始的(De Keukeleire等人，1999；De Keukeleire，2000)。该萃取方法是在采集并收集啤酒花穗后立即开始的。将啤酒花穗干燥、破碎并压成颗粒。将颗粒装入萃取器内，并在200-300bar的压力下使超临界CO2通过该颗粒。萃取通常是在40-60℃的温度范围内进行的。萃取的组分从萃取室流入蒸发分离槽内，在该蒸发分离槽内压力下降至60-80bar，并将萃取的啤酒花组分从CO2中分离。
移除CO2后，将该萃取物溶解在碱性水中，并加入硫酸镁。将所得的溶液加热，并在这些条件下将α酸进行立体特异性异构化成异α酸(图2)。在将该α酸转化成异α酸后，用H2SO4将溶液酸化，并利用所得的相分离及使用水连续清洗，从所得的异α酸的游离酸形式中移除过量的盐。
将异α酸(游离酸)溶解在含硫酸镁(0.5至1.0当量；最终pH＝6.0-8.0)的碱性水及乙醇的1∶9混合物中。在该溶液中加入1重量％的10％Pd/C催化剂，并将该溶液置入氢化容器内，并在20psig的氢气下加热至约40℃。在这些条件下经数小时后，该异α酸被还原成四氢异α酸(图3)；此时通过过滤将10％Pd/C催化剂移除。将滤液酸化以产生四氢异α酸的游离酸形式，并通过蒸馏将乙醇移除。然后将剩余的不溶于水的四氢异α酸的游离酸形式进行相分离，并连续清洗以洗去水溶性盐。
本发明利用被称为高速逆流色谱法(HSCCC)的分离技术纯化或分离还原异α酸。申请人发现可以控制不同四氢还原异α酸(THIAA)结构类似物(及其各自的异构体)在两种所选择的不互溶的液相间的差异分配性质以分离THIAA的不同异构体。已使用“摇瓶(shake-flask)”法测定THIAA在多种不互溶的溶剂体系中的分配系数。发现由pH＝7.4的0.1M乙醇胺(水溶液)组成的下层水相和乙酸甲酯的上层有机相提供约1.0的近似最佳分配比例(P)。应用该发现时，可以使用HSCCC仪器(PharmaTech Research，CCC-1000型)对存在于含有THIAA的修饰啤酒花提取物中的不同非对映异构体的纯的及高度富集的流分进行分离。参见图3。
可以监测THIAA组分的洗脱及分级(图4)，并且可以测定各流分的均一性百分比；可以基于进行HSCCC纯化的物质的初始量评价在各流分中分离的量及回收百分比。下表7提供一种这样的检测的结果：
表7.各流分的均一性百分比
如图5及图6所示，在一项重复研究中，THIAA在HSCCC之前的更为详细的色谱图表明存在7个峰TH1-7。获得与最主要峰相对应的五个流分，并通过HPLC、质谱、HNMR(图7)及手性柱HPLC分析各流分以测定各流分的化学纯度及光学纯度。所有五个流分均具有足以供如表8所示的生物检测的纯度。
表8.从THIAA中分离的流分的组合物
可以使用本文所公开的分离方法容易地分离每种这些流分。所公开的方法也可以应用到其它还原异α酸，例如Rho异α酸或六氢异α酸上。
以下先后提供各纯化的化合物的一致且公认的名称及IUPAC命名：
TH1：(+)-(4R，5S)-顺式-co-四氢异α酸
(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-异丁酰基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮
TH2：(-)-(4S，5S)-反式-co-四氢异α酸
(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-2-异丁酰基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮
TH4：(+)-(4R，5S)-顺式-ad-四氢异α酸
(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮
TH5：(+)-(4R，5S)-顺式-n-四氢异α酸
(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮
TH7：(-)-(4S，5S)-反式-n-四氢异α酸
(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮
本文中使用的术语“衍生物”或“衍生的”物质是指结构上与另一种物质相关且理论上可以从其获得的化学物质，即可以从另一种物质制备的物质。衍生物可以包括经化学反应获得的化合物。
术语“药学上可接受”是以与组合物的其它成份相容且对其受者无害的含义使用。
本文中使用的“四氢-异葎草酮”分别指顺式及反式形式的(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮及(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮。
本文中使用的“四氢-异科葎草酮”分别指顺式及反式形式的(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮及(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮。
本文中使用的“四氢-加葎草酮”分别指顺式及反式形式的(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮及(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-戊酰基环戊-2-烯-1-酮。
本文中使用的“四氢-异α酸”或“THIAA”是指一种或多种四氢-加葎草酮、四氢-异科葎草酮及四氢-异葎草酮的任意混合物，包括四氢反式n异α酸、四氢顺式n异α酸、四氢反式n异α酸、四氢顺式co异α酸、四氢反式co异α酸、四氢顺式co异α酸、四氢反式co异α酸、四氢顺式ad异α酸、四氢反式ad异α酸、四氢顺式ad异α酸、四氢反式ad异α酸。图1描述形成四氢-异α酸的单个成员的化学结构。
以下实施例意图进一步说明本发明的某些优选实施方案且实际上并非限制性的。本领域技术人员仅使用常规实验会认识到或能够确定许多与本文公开的具体物质及操作相等同的物质及操作。
实施例
实施例1.四氢顺式n异α酸的符合GMP的纯化(＞99.9％；HPLC UV/vis)
已开发如下使用高速逆流色谱法(HSCCC)纯化单一植物化学物质(四氢顺式n异α酸，((4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮))的方法：
设备及方法说明
A)HSCCC设备：该方法是使用J-型HSCCC仪器(型号CCC-1000；Pharma-Tech Research Corp.，Baltimore，MD)，在100毫克(分析级)及1克(制备级)规模下进行。HSCCC仪器包含配备有3×105mL盘管(分析级)或3×275mL盘管(制备级)的自平衡离心机转子。该分析级盘管包覆有1.67-mm内径的PTFE管；该制备级盘管包覆有2.65-mm内径的PTFE管。该离心机的支架轴(holder axis)与中心轴之间的距离的旋转半径(R)是7.5cm。β率(βr)从头端的0.73变化至尾端的0.47(βr＝r/R，其中r是线轴半径且R是转子半径)。该HSCCC***配备有下列Shimadzu(Shimadzu Scientific Instruments，Inc.，Columbia，MD)组件：配有串联型双活塞的LC-20AT溶剂泵、4条溶剂输送线及低压混合器；DGU-20A5溶剂脱气器；FRC-10A流分收集器及制备收集装置(prep collection apparatus)；CBM-20A***控制器及SPD-10AV vpUV检测器。使用配备有10mL或100mL样品环路(sample loop)的Rheodyne
型号3725i手动进样阀(Oak Harbor，WA)进行进样。使用运行Shimadzu EZ Start 7.4的计算机工作站(HP Compaq dc5100，MS Windows XPv.2002)控制这些组件。
B)原料：进行四氢顺式n异α酸纯化的材料是由MetaProteomics提供的，并且由所谓的四氢异α酸(THIAA)的同源物的单一非对映异构体(顺式)混合物组成。该原料由约80％-90％(w/w)的四氢异α酸(THIAA)组成，(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮(四氢顺式n异α酸)在该原料中的含量在50-60％(w/w)范围内；其余材料由多种低分子量羧酸及碳氢化合物组成。图8显示了主要的顺式四氢异α酸。
C)HSCCC方法：以下行模式进行分离，其中固定相是较轻的(上)相且流动相是密度较大的(下)相。按照“由头至尾”的方向进行流动相的洗脱。固定相由HPLC级己烷组成，流动相由pH＝6.3的250mM NH4PO4水性缓冲液组成；这两相在使用前以约1∶1的比例充分混合并平衡。首先在8mL/min下将固定相装入HSCCC中。在用固定相将盘管完全装满后，在700rpm下旋转该盘管，并在2mL/min(分析级盘管)或4mL/min(制备级盘管)下装入流动相。收集洗脱液，使得可以测量洗脱流动相之前洗脱固定相的体积。使用该固定相的体积检查固定相在线圈中令人满意的保留。洗脱流动相后，将原料溶解在上相与下相的双相混合物(1/1v/v)中，使总浓度为10mg/mL。然后将该双相混合物装入10mL(分析级)或100mL(制备级)样品环路中并进样。
图9及图10分别显示分析级(100mg)和制备级(1000mg)的两种不同的分离的结果。图11概括所回收的纯化物质的量及各组分的均一性百分比。
完成操作后，通过HPLC分析收集的各单个流分，并将富集的流分集中到分液漏斗内。然后将流动相酸化(浓H2SO4)至pH＝2.0，并用己烷萃取3次。收集己烷，并真空移除以得到纯的组分。
D)HPLC设备及方法：使用HPLC进行原料及纯化组分的均一性的分析。图12显示了原料的代表性HPLC色谱图。
使用Shimadzu HPLC***(Shimadzu Scientific Instruments，Inc.，Columbia，MD)进行HPLC分析。该HPLC***由DGU 14A溶剂脱气器、LC-10AD溶剂泵(3)、在254nm下监测的SPD-M10ADVP光电二极管阵列检测器、SIL-10ADVP自动进样器、SCL10AVP***控制器及CTO-10AVP柱加热炉组成。使用Class VP 7.3 sp1软件控制该***。使用具有匹配的保护柱的250×4.6mm Gemini NX C18，3u，110A(Phenomenex，Torrance，CA)柱进行HPLC分析。该分离方法使用两种流动相A和B；溶剂A是pH 9.5的20mM NH4Ac水性缓冲液；溶剂B是比例为6∶4(v/v)乙腈和甲醇的二元混合物。该方法是通过以下方式进行的：在40℃下以1.6mL/min的流速使用等度洗脱(44％B)，然后进行柱清洗(95％B)及柱的再平衡。整个方法在30min内完成。
实施例2.放大研究
此项研究的目的是放大使用高速逆流色谱法(HSCCC)纯化单一植物化学物质(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮(四氢顺式n异α酸，参见图8)的纯化方法。
进行纯化的材料是四氢顺式n异α酸，并且由所谓的四氢异α酸(THIAA)的同源物的单一非对映异构体(顺式)混合物组成。该原料由约80％-90％(w/w)的四氢异α酸组成，Th5在该原料中的含量在50-60％(w/w)范围内；其余材料由多种低分子量羧酸及碳氢化合物组成。图8显示了主要的顺式四氢异α酸。这些化合物实际上是酸性的且在中性条件下易具有高极性。
实验
在Spectrum HPCCC仪器上运行的实验条件是：溶剂体系：固定相-庚烷；流动相：水+磷酸铵缓冲液(pH 6.3)；载样量-10mL中100mg；柱体积136mL-6mL/min流速。
下图13显示了所得的HPCCC色谱图。尽管有初始高SP保留，但仍有部份SP解吸(stripping)，这最可能是由于该溶剂体系在样品洗脱时发生pH改变的高灵敏度。结果可以概括如下：达到3个峰的分离；130min运行时间；总的溶剂用量-780mL；观察到非常高的SP保留：约95％；比HSCCC机器达到的稍高的化合物保留；HPLC分析表明成功的分离。
分析峰的中段的流分(如图13所示)。第1峰：38-44min；第2峰：80-92min；第3峰：106-122min。图14显示分析的3个流分及原料(crude material)的叠加。图15是4个色谱图的堆叠。数据表明已实现分离(由于柱污染而应忽略在约16min的峰)。
结果表明可以在明显改善处理能力的情况下放大该纯化方法。结果显示产量改善了9倍。
实施例3.摇瓶实验及液体分布率的分析
进行数个摇瓶实验以测试数种溶剂体系并测定用于最佳分离的液体分配率(Kd)及分配系数值。得自摇瓶实验的分配系数值是逆流色谱行为的可靠预测因子。Kd是上相中的分析物浓度除以下相中的分析物浓度，并且可以另外列为Ku/l。
用于摇瓶实验的一般操作及参数：加入1mL已知pH的储备缓冲液(stock buffer)。加入其它需要的溶剂以构成体系。加入以400mg/mL溶解在己烷中的分析物混合物。在摇瓶内的最终分析物浓度是0.1mg/mL。将烧瓶封盖并(通过涡旋混合器)混合10秒钟。从上相中取等份试液供HPLC分析，并且从各***下相中另取等份试液供HPLC分析。通过HPLC分析各组分，并使用Shimadzu Class VP软件第7.3SP1版积分。
结果：
7∶3∶5∶4∶1的H∶E∶M∶Wat(己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水)储备液-0.1mg/mL的THIAA游离酸；10uL进样
10∶9∶1的己烷∶水∶缓冲液-铵抗衡离子；顺式THIAA 0.1mg/mL
10∶9∶1的己烷∶水∶缓冲液-钾抗衡离子；顺式THIAA 0.1mg/mL
10∶9∶1的己烷∶水∶缓冲液-钠抗衡离子；顺式THIAA 0.1mg/mL
10∶9∶1的己烷∶水∶缓冲液-等度pH 6.4；顺式THIAA 0.1mg/mL
10∶9∶1的己烷∶水∶缓冲液
10∶9∶1的己烷∶水∶缓冲液
10∶9∶1的己烷∶水∶缓冲液
图16还显示使用所述特定参数的HSCCC纯化方法的结果。
实施例4.使用325mL盘管体积、“上行”洗脱法及在pH＝6.79下，通过
流体力学/J-型HSCCC从顺式THIAA同源物混合物中纯化单个顺式四氢
异α酸同源物
以顺式THIAA同源物混合物为原料，根据图20所示的流程图进行单个顺式四氢异α酸(顺式-THIAA)同源物的分离。原料(即顺式四氢异α酸(顺式-THIAA)同源物混合物)得自Hop Steiner，Yakima，WA。图22显示了该混合物的HPLC分析。用于HSCCC纯化的溶剂体系是通过以下方式制备的：在分液漏斗中混合1000mL己烷、900mL水、65mL浓氢氧化铵([14.5M]71％H2O)及35mL浓磷酸([14.8M]15％H2O)，随后剧烈振摇。当不互溶的两相在分液漏斗中沉降后，使用经校准的pH计测量水相中的pH，且测定结果是6.79。分别从分液漏斗中收集“上层”的有机相及“下层”的水相。使用下相作为固定相，并从此用于初始装填流体力学/J-型HSCCC仪器(PharmaTech Research，CCC-1000)的320mL盘管。完成325mL盘管的装填后，在680RPM下旋转HSCCC，并以“由尾至头洗脱”或被称为“上行”或“正常相”洗脱模式在4mL/min的速率下抽取上相。当上相从柱的头端洗脱时，实现平衡，并持续该平衡，即以4mL/min的速率抽取“上”相。
将顺式-THIAA(游离酸)同源物混合物溶解在“上”相中以制备浓度为200mg/mL的储备溶液。将2.5mL该储备溶液抽入10mL进样器内，随后另抽取2.5mL“上”相，由此使该进样器内的总体积是5.0mL，并且顺式THIAA同源物混合物在该进样器内的总浓度是100mg/mL。然后将该样品注入3.8mL样品环路内。该进样量过充满样品环路，由此确保可再现的进样量。在此实施例中，将380mg顺式THIAA同源物混合物装填在HSCCC上。在样品-环路进样后，UV检测器立即开始监测从HSCCC盘管中流出的洗脱液。“上”流动相维持4mL/min的流速，并且在样品-环路进样后40分钟，以28mL增量收集流分。经150分钟后，不再使用“上”相作为流动相；而取而代之以4mL/min的流速将另外的“下”固定相抽取至盘管内。用“下”相替代“上”相标志着洗脱-挤出(elution-extrusion)法的开始；总运行时间为250分钟。从样品环路进样经250分钟洗脱后，使用HPLC分析全部收集的流分，以测定哪些流分含有纯化的顺式THIAA同源物的均匀溶液。在完成各流分的HPLC分析时，如图23所示，通过将各纯化的顺式THIAA同源物的峰面积对时间(分钟)或数个其它参数(例如体积(mL)或“K”)作图来重构CS示踪。如图20所述，基于所收集流分的均一性，将其相应地集中，并通过酸性水溶液萃取而将其萃取至己烷内。进行该最终酸性萃取以从该流分中移除任何残留的水。真空移除己烷以得到高纯度的顺式THIAA同源物。该操作分别得到30mg的TH1及228mg的TH5，通过HPLC测定纯度为＞85％。
实施例5.使用825mL盘管体积、“下行”洗脱法及在pH＝6.34下，通过
流体力学/J-型HSCCC从顺式THIAA同源物混合物中纯化单个顺式四氢
异α酸同源物
此实施例按照如实施例1所述的操作。在此实施例中，根据图20所示的流程图，从顺式-THIAA同源物混合物中纯化单个顺式-THIAA同源物。此实施例与实施例1之间有几处差异。在此实施例中，进行纯化的顺式THIAA同源物混合物量较大、HSCCC的盘管体积较大(820mL对325mL)、此实施例采用“下行”洗脱方法，并且在此实施例中的水相的pH低于实施例1中使用的pH(6.34对6.79)。最后，在此实施例中将样品装填至HSCCC盘管的方式明显不同于实施例1。
用于此具体实施例的溶剂体系是通过以下方式制备的：在分液漏斗中平衡1000mL己烷、3800mL水、66mL氢氧化铵([14.5M]71％H2O)及42.3mL浓磷酸([14.8M]15％H2O)，随后剧烈振摇。当不互溶的两相在分液漏斗中沉降后，使用经校准的pH计测量水相中的pH，且测定结果是6.34。单独从“下层”的水相中收集“上层”的有机相。使用上相作为固定相，并从此用于初始装填820mL盘管。完成盘管的装填时，在700RPM下旋转HSCCC，并以“由头至尾”洗脱模式在4mL/min下抽取“上”相。完成820mL盘管的装填后，在680RPM下旋转HSCCC，并以“由头至尾”方向或被称为“下行”或“逆相”洗脱模式在4mL/min的流速下抽取“下”相。当“下”相从柱的头端洗脱时，实现平衡，并使“下”相以4mL/min的流速持续流经盘管。
将1021mg顺式四氢异α酸(THIAA)同源物(游离酸)的混合物溶解在50mL“上”相、40mL“下”相及10mL无水乙醇中。然后将样品通过1um进样器过滤器过滤，并注入空100mL样品环路中。此时HSCCC完全平衡，并将全部样品环路体积进样到HSCCC盘管上。在样品-环路进样后，UV检测器立即监测从HSCCC盘管中流出的洗脱液。在样品-环路进样后的第一个50分钟后收集93mL体积的流分；总运行时间为750分钟。
使用HPLC分析全部收集的流分，以测定哪些流分含有纯化的顺式THIAA同源物的均匀溶液。在完成各流分的HPLC分析时，如图24所示，通过将各纯化的顺式THIAA同源物的峰面积对时间(分钟)或数个其它参数(例如体积(mL)或“K”)作图来重构CS示踪。如图20所述，基于所收集流分的均一性，将其相应地集中，并通过酸性水溶液萃取而将其萃取至己烷内。进行该最终酸性萃取以从流分中移除“下层”水相(以下行模式用作流动相)。真空移除己烷以得到高纯度的顺式THIAA同源物。该操作分别得到60.7mg的TH1及531mg的TH5，通过HPLC测定纯度为＞95％。
实施例6.使用825mL盘管体积、“上行”洗脱法及在pH＝4.92下，通过
流体力学/J-型HSCCC从顺式异α酸同源物混合物中纯化单个顺式四氢异
α酸同源物
从顺式及反式IAA同源物混合物的钾盐的水溶液中获得顺式异α酸(IAA)同源物(游离酸)的混合物。作为Isohop
销售的该溶液由John I Haas，Yakima，WA友情提供。采用WO/2006/065131中公开的略微改良的操作以获得顺式异α酸(IAA)同源物混合物。具体而言，使用离心来移除未经复合的过量β-环糊精。此外，还发现足量的H2SO4(水溶液)pH＝1以及萃取到EtOAc中对于将形成麻烦的乳液降至最小至关重要。用水稀释Isohop后，按照WO/2006/065131中记载的操作将其用β-环糊精处理。对该操作进行上述改良。根据该操作(图19)，从87mL Isohop
获得较高产量的顺式异α酸(IAA)同源物(游离酸)的混合物13.3克。
用于从顺式IAA同源物混合物HSCCC纯化单个顺式IAA同源物的溶剂体系是通过在分液漏斗中平衡4000mL己烷、14000mL水、240mL浓氢氧化铵([14.5M]71％H2O)及325mL冰醋酸([17.5M])而制备的，检查pH并发现是4.92。单独从“下层”的水相中收集“上层”的有机相。使用“上”相作为固定相，并从此用于初始装填820mL HSCCC盘管。完成盘管的装填时，在700RPM下旋转HSCCC，并以“由头至尾”洗脱或被称为“上行”或“正常相”洗脱模式在4mL/min下抽取上相。当上相从盘管的头端洗脱时，实现平衡；继续以4mL/min的流速抽取“上”相。
将1313mg顺式IAA游离酸溶解在50mL上相及50mL下相中。然后将样品注入空100mL样品环路中。此时HSCCC完全平衡，并将样品-环路进样到盘管内。在样品-环路进样后，UV检测器立即开始监测从HSCCC盘管中流出的洗脱液。“上”流动相的流速维持在4mL/min，并在第一个200分钟后收集80mL体积的流分。经600分钟后，不再使用“上”相作为流动相；而取而代之以4mL/min的流速将另外的“下”固定相抽取至盘管内。用“下”相替代“上”相标志着洗脱-挤出法的开始；总运行时间为825分钟。在样品-环路进样后825分钟后，使用HPLC分析全部收集的流分，以测定哪些流分含有纯化的顺式IAA同源物的均匀溶液。在完成各流分的HPLC分析时，如图25所示，通过将各纯化的顺式-IAA同源物的峰面积对时间(分钟)或数个其它参数(例如体积(mL)或“K”)作图来重构CS示踪。如图19所述，基于所收集流分的均一性，将其相应地集中，并通过酸性水溶液萃取而将其萃取至己烷内。进行该最终酸性萃取以从该流分中移除任何残留的水。真空移除己烷以得到高纯度的顺式IAA同源物。该操作分别得到338mg的IA1及607mg的IA5，通过HPLC测定纯度为＞95％。
实施例7.用于纯化四氢异α酸(THIAA)的逆流分离(CS)法
啤酒花(Humulus Lupulus L.)是公知用于酿造啤酒已超过1500年的植物。多种修饰的啤酒花穗提取物由于其苦味及泡沫稳定性质而目前用于啤酒酿造。在这些提取物中，最近报道四氢异α酸(THIAA)在多种酶检测及细胞检测中发挥明显的抗炎效应。基于此原因，已成功地将THIAA掺入数种有助于患有炎性相关健康病症的个体的营养需求的医疗食品中。
THIAA提取物由密切相关的支链短链脂肪酸衍生的同源物及非对映异构体的定义完善(well-defined)而复杂的混合物组成。已报道THIAA的主要成份是如图17所示且表10中所列的顺式n-同源物、顺式co-同源物及反式-同源物。我们寻求开发一种可靠且有效的快速制备级纯化这些单个同源物的方法以在不同的发炎模型中测定其相对差异。
我们专注于研发一种能够使我们获得克量的高纯度(＞99％)的各主要同源物的逆流分离方法。我们根据所谓的“摇瓶”方法，通过研究THIAA在多种溶剂体系中的分配而开始。在对多种溶剂体系进行评价的过程中，我们发现相对于THIAA浓度，pH、缓冲液类型及缓冲液浓度明显影响THIAA同源物的分配。
如图26所示，异α酸(或还原异α酸)的特定同源物与存在于溶剂体系中的任何盐或缓冲液之间具有复杂的平衡。该描述的显著特点是当同源物是非离子化及离子化(RH)时其分配的重要性。为此原因，作为固有性质的同源物的pKa会大幅影响整个分配。而且，盐及缓冲液的实际作用也会影响离子化的程度，并且由于与同源物的共轭碱的离子配对，也影响同源物的离子化形式的分配。
如图27所示，缓冲液的浓度大幅影响IAA同源物IA1、IA5及IA4的分配。已研究了缓冲液化学计量及其对KU/L的影响的重要性(参见图28)。图28显示缓冲液与两种同源物之间的化学计量效应的说明。这两个曲线图(各显示两种IAA同源物的ΔKU/L之间的关系)证明缓冲液的量相对于IAA的量的重要性。图29的曲线图说明缓冲液的量如何影响两种IAA同源物在两种溶剂体系SS1(Hex Wat)及SS2(Hemwat)中的pH。基于这些发现，我们能够优化一种能够以高纯度、高产量及最少时间内纯化多种THIAA的CS方法。
实验
使用Shimadzu HPLC***(Shimadzu Scientific Instruments，Inc.，Columbia，MD)进行HPLC分析。该HPLC***由DGU 14A溶剂脱气器、LC-10AD溶剂泵(3)、在254nm下监测的SPD-M10ADVP光电二极管阵列检测器、SIL-10ADVP自动进样器、SCL10AVP***控制器及在40℃下操作的CTO-10AVP柱加热炉组成。使用Class VP 7.3 sp1软件控制该***。使用4.6×250mm、3μm粒度的Phenomenex Gemini NX C18柱(Torrance，CA)监测HSCCC流分均匀性。流动相由用氨水将表观pH调节到9.50的20mM乙酸铵(溶剂A)及60/40(v/v)的乙腈/甲醇(溶剂B)组成。流速设定在1mL/min，并等度洗脱(42％溶剂B)15.5分钟，然后清洗(95％溶剂B)并再度平衡，总方法时间是23分钟。
在CCC-1000 J-型三盘管行星运动HSCCCC(CCC-1000 J-typethree-coiled planetary motion HSCCCC，Pharma-Tech Research Corp.，Baltimore，MD，USA)上进行全部HSCCC实验。旋转半径是7.5cm，内径为1.6mm且外径为2.7mm的3×108mL PTFE Teflon盘管，并且全部盘管的β值是0.47至0.73。其与Shimadzu(Kyoto，日本)液相色谱仪(LC-20AT泵，DGU-20A5脱气器，CBM-20A控制器及SPD-10AV UV检测器)相连接。制备级Rheodyne(Rohnert Park，CA USA)3725i-038进样器与3.8mL样品环路(第7项改成10mL)相连。在运行期间在254nm及314nm下监测样品。
试剂及材料
由主要为n-同源物、co-同源物及ad-同源物(99％DCHA盐)的混合物的顺式及反式非对映异构体组成的THIAA标准品购自American Society ofBrewing Chemists(ASBC，St.Paul，MN)并在整个此项研究中使用。主要由n-同源物、co-同源物及ad-同源物组成的顺式THIAA混合物的商业制剂也用于此项研究。
用于全部HPLC分析的流动相由Burdick & Jackson(B&J ACS/HPLC级99.9％)或EMD(OMNISOLV，99.9％高纯度HPLC级)供应并直接使用。乙醇是氘代乙醇(式3A)。水得自在我们实验室维护的Barnstead NanopureInfinity Ultrapure***。在流动相中用作缓冲液的多种化学品购自AldrichChemical，且无需进一步纯化而使用。
分配系数(KU/L)摇瓶测量
根据本申请书别处所述的方法测量分配系数KU/L，即上相浓度(U)与下相浓度(L)之比。简言之，将THIAA标准品在MeOH中的5uL储备溶液(400mg/mL)加入到包含大致等体积的不互溶的两相的溶剂体系(20mL)中。加入分析物，然后将该双相混合物涡旋混合并记录沉降时间。将来自各相的等分试样直接转移到HPLC样品瓶中，并使用10uL进样量(通过先前所述的方法)进行HPLC分析。分别使用上峰面积及下峰面积计算单个THIAA同源物在多种溶剂体系中的KU/L。图22显示使用我们发明的方法的代表性HPLC色谱图。该方法使我们能够高再现性(＜5％CV)地测定各THIAA同源物在各相中的浓度。
在整个此项研究中使用两种流动相A及B。溶剂A由水性缓冲液组成，溶剂B由乙腈和/或醇组成。表9中列出流动相组合物的概述以及描述该方法的细节，例如流速、pH等。使用Redihop
的储备溶液(0.1mg/mL MeOH溶液)分析表9中的各项，以通过先前提到的摇瓶操作测量分配值。
HSCCC分离
按照摇瓶分配测试法测定THIAA在多种HEMWat溶剂体系中的KU/L值。被称为A及B的两种溶剂体系提供在1.5-2.5范围内的K值，并且THIAA同源物之间具有显著差异(ΔK)。基于这些原因，选择溶剂体系A和B用于对HSCCC进一步开发(表9)。与下行洗脱相比，上行洗脱法提供明显较高的固定相保留；因此上行洗脱法对于全部THIAA HSCCC纯化试验而言是优选的洗脱方法。表10中的项目对应于七次试验THIAA HSCCC纯化；第1-3项是使用溶剂体系A进行的；第4-7项使用溶剂体系B。由于摇瓶测试(0.1mg/mL，0.273mM)与HSCCC样品环路(100mg/mL，273mM)之间的THIAA浓度差异，在HSCCC试验中使用1.2M(第1-3项，表10)及555mM(第4-7项，表10)的水相缓冲液浓度。表10中的第3项使用由1.9mL上相(200mg/mL THIAA，0.55M)及1.9mL下相(6.5M NH4HAc水溶液)组成的双相样品-环路进样(溶剂C，表9)。根据Pauli等人的报道，在第2、6及7项中使用转换体积(switching volume)以评价洗脱-挤压方法。
表10的第4及5项检查提高溶剂体系B的pH对于THIAA同源物之间的拆分的效应。我们推断提高pH导致THIAA的离子化形式(共轭碱)的较大浓度，由此导致较大量的THIAA保留在水性固定相中，即增加了保留体积(Vr)。根据模型，成功地预测溶剂体系B(pH 6.8(第5项，表10))的pH对于THIAA拆分的效应为该溶剂体系提供了最佳拆分，并且提高pH超过该点在拆分上提供了可忽略不计的改进但具有明显较大的Vr。
结果
根据表10的第6项，将380mg(1.0mmole)的THIAA装填到盘管上，并在下一项(7)装填几乎3倍于此量的1000mg(2.7mmole)THIAA。虽然第7项中的THIAA量几乎是第6项中的3倍，但第7项中的THIAA同源物的Vr保持不变。从第6项及第7项产生的分离之间的主要差异是第7项较大载样量中明显的拖尾程度。在此情形中，后者洗脱THIAA同源物的纯度相对小于第6项。
表9.用于评价逆流分离(CS)的溶剂体系组合物；除pH以外，所有值的单
位均为mL
表10.THIAA原料的不同试验CS纯化的结果
5
表11.材料的回收及均一性％的结果
1H2O的总体积为约434mL。
2H2O的总体积为约945mL。
3H2O的总体积为约951mL。
4H2O的总体积为约16.2mL。
5除非另外注明，全部使用HSCCC仪器(PharmaTech Research CCC-1000)，在680rpm，流速为4mL/min且样品-环路进样量为3.8mL下，采用上行模式洗脱。
6使用双相样品-环路注射；1.9mL溶剂体系C，表9，样品-环路体积为3.8mL。
7使用10mL样品环路，将1.0克原料(100mg/mL)装填在HSCCC上。
8基于380mg载样量，从HPLC流分分析的面积％以及按照使用1.021g顺式THIAA的试验的61％的总的顺式THIAA回收。
结论
表11概括了此项实验的结果。比较通过CS纯化THIAA的七种变化，通过优化该溶剂体系组合物、载样量及pH来获得最佳拆分。如第3项所示，通过双相进样浓缩缓冲液加入样品产生较之第1项的最小获益。同样如第6项所示，优化EECCC在拆分上产生较之第5项的最小获益，但是EECCC确实起到使固定相再生以供后续操作的作用。经证明，优化载样量以防止拖尾并且选择适合的溶剂体系(包括pH)以获得所需成份的最大拆分是最佳的全面方法。因此，第6项提供最有用的方法，使得在最少量的时间内获得克量的高纯度THIAA同源物。
现已充分描述了本发明，本领域普通技术人员会明白可以在不偏离所附权利要求的精神或范围的情况下对其进行多种变化及修改。
Claims (58)
1.从同源物混合物中分离实质上纯的形式的同源物的方法，其包括以下步骤：
a.选择待分离的同源物；
b.将所述同源物混合物溶解在专门针对所选择的待分离的同源物的双相溶剂体系中，其中所述双相溶剂体系的分配系数是约0.5至5.0；
c.对溶解在所述双相溶剂体系中的所述同源物混合物进行逆流色谱法；以及
d.分离所选择的同源物；
其中所述同源物选自取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮。
2.根据权利要求1的方法，其中所述取代环己-2，4-二烯酮选自(6R)-3，5，6-三羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、(6R)-3，5，6-三羟基-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及(6R)-3，5，6-三羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮。
3.根据权利要求1的方法，其中所述取代环己烷-1，3，5-三酮选自其中所述组合物富含一种或多种选自3，5-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、3，5-二羟基-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及3，5-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮的化合物的取代环己烷-1，3，5-三酮。
4.根据权利要求1的方法，其中所述取代环戊-2-烯-1-酮选自(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮。
5.根据权利要求1的方法，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；及达99.9重量％的(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
6.根据权利要求1的方法，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮。
7.根据权利要求1的方法，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮及(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
8.根据权利要求1的方法，其中所述双相体系的溶剂选自水、含有缓冲剂的水、含有可溶性聚合物的水、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸叔丁酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿及丙酮，或其任意组合。
9.根据权利要求1的方法，其中所述双相溶剂体系的分配系数为0.6至3.0。
10.根据权利要求1的方法，其中所述双相溶剂体系的分配系数为0.7至1.5。
11.根据权利要求1的方法，其中所述逆流色谱法是在约20℃至约30℃的温度下进行的。
12.根据权利要求1的方法，其中所述逆流色谱法是在环境温度下进行的。
13.组合物，其包含实质上纯的同源物或其药学上可接受的盐，其中所述同源物是通过包括以下步骤的方法，从同源物混合物获得的：
a.选择待分离的同源物；
b.将所述同源物混合物溶解在专门针对所选择的待分离的同源物的双相溶剂体系中，其中所述双相溶剂体系的分配系数是约0.5至5.0；
c.对溶解在所述双相溶剂体系中的所述同源物混合物进行逆流色谱法；以及
d.分离所选择的同源物；
其中所述同源物选自取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮；并且
其中所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
14.根据权利要求13的组合物，其中所述取代环己-2，4-二烯酮选自(6R)-3，5，6-三羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、(6R)-3，5，6-三羟基-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及(6R)-3，5，6-三羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮。
15.根据权利要求13的组合物，其中所述取代环己烷-1，3，5-三酮选自其中所述组合物富含一种或多种选自3，5-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、3，5-二羟基-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及3，5-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮的化合物的取代环己烷-1，3，5-三酮。
16.根据权利要求13的组合物，其中所述取代环戊-2-烯-1-酮选自(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮。
17.根据权利要求13的组合物，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；及达99.9重量％的(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
18.根据权利要求13的组合物，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮。
19.根据权利要求13的组合物，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮及(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
20.根据权利要求13的组合物，其中所述双相体系的溶剂选自水、含有缓冲剂的水、含有可溶性聚合物的水、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸叔丁酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿及丙酮，或其任意组合。
21.根据权利要求13的组合物，其中所述双相溶剂体系的分配系数为0.6至3.0。
22.根据权利要求13的组合物，其中所述双相溶剂体系的分配系数为0.7至1.5。
23.根据权利要求13的组合物，其中所述逆流色谱法是在约20℃至约30℃的温度下进行的。
24.根据权利要求13的组合物，其中所述逆流色谱法是在环境温度下进行的。
25.根据权利要求13至24中任一项的组合物，其中所述药学上可接受的赋形剂选自等渗及吸收延迟剂、粘合剂、胶粘剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、甜味剂、吸收剂、洗涤剂及乳化剂，或其任意组合。
26.根据权利要求13至24中任一项的组合物，其中所述组合物还包含一种或多种抗氧化剂、维生素、矿物质、蛋白质、脂肪及碳水化合物。
27.根据权利要求13至26中任一项的组合物，其中所述组合物为适合通过选自口服、吸入、直肠、眼部、鼻腔、局部、***及肠胃外的途径给药的剂型。
28.根据权利要求13的组合物，其中所述同源物的纯度为至少80％。
29.根据权利要求13的组合物，其中所述同源物的纯度为至少95％。
30.从同源物混合物中分离实质上纯的形式的同源物的方法，其包括以下步骤：
a.制备源自啤酒花提取物的单个同源物的适合的混合物；
b.用可以引入逆流分离仪器中用于纯化目的的适合的溶剂将所述混合物溶解；
c.收集单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液；
d.将从步骤(c)中获得的逆流分离纯化的同源物提取到适合的溶剂中；或者
e.从步骤(c)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；以及
f.从步骤(d)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；
其中所述同源物选自取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮。
31.根据权利要求30的方法，其中所述取代环己-2，4-二烯酮选自(6R)-3，5，6-三羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、(6R)-3，5，6-三羟基-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及(6R)-3，5，6-三羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮。
32.根据权利要求30的方法，其中所述取代环己烷-1，3，5-三酮选自其中所述组合物富含一种或多种选自3，5-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、3，5-二羟基-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及3，5-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮的化合物的取代环己烷-1，3，5-三酮。
33.根据权利要求30的方法，其中所述取代环戊-2-烯-1-酮选自(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮。
34.根据权利要求30的方法，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；及达99.9重量％的(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
35.根据权利要求30的方法，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮。
36.根据权利要求30的方法，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮及(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
37.根据权利要求30的方法，其中所述双相体系的溶剂选自水、含有缓冲剂的水、含有可溶性聚合物的水、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸叔丁酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿及丙酮，或其任意组合。
38.根据权利要求30的方法，其中所述双相溶剂体系的分配系数为0.6至3.0。
39.根据权利要求30的方法，其中所述双相溶剂体系的分配系数为0.7至1.5。
40.根据权利要求30的方法，其中所述逆流色谱法是在约20℃至约30℃的温度下进行的。
41.根据权利要求30的方法，其中所述逆流色谱法是在环境温度下进行的。
42.组合物，其包含实质上纯的同源物或其药学上可接受的盐，其中所述同源物是通过包括以下步骤的方法，从同源物混合物获得的：
a.制备源自啤酒花提取物的单个同源物的适合的混合物；
b.用可以引入逆流分离仪器中用于纯化目的的适合的溶剂将所述混合物溶解；
c.收集单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液；
d.将从步骤(c)中获得的逆流分离纯化的同源物提取到适合的溶剂中；或者
e.从步骤(c)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；以及
f.从步骤(d)中获得的单个同源物的均匀溶液或部份均匀的溶液中移除溶剂以提供纯的或部分纯的同源物；
其中所述同源物选自取代环己-2，4-二烯酮、取代环己烷-1，3，5-三酮、取代环戊-2-烯-1-酮及取代1，3-环戊二酮；并且
其中所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
43.根据权利要求42的组合物，其中所述取代环己-2，4-二烯酮选自(6R)-3，5，6-三羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、(6R)-3，5，6-三羟基-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及(6R)-3，5，6-三羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6-双(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮。
44.根据权利要求42的组合物，其中所述取代环己烷-1，3，5-三酮选自其中所述组合物富含一种或多种选自3，5-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮、3，5-二羟基-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环己-2，4-二烯-1-酮及3，5-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-4，6，6-三(3-甲基丁-2-烯-1-基)环己-2，4-二烯-1-酮的化合物的取代环己烷-1，3，5-三酮。
45.根据权利要求42的组合物，其中所述取代环戊-2-烯-1-酮选自(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-4-羟基-3-甲基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-4-(4-甲基戊-3-烯酰基)环戊-2-烯-1-酮。
46.根据权利要求42的组合物，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮；及达99.9重量％的(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
47.根据权利要求42的组合物，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮及(4R，5R)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮。
48.根据权利要求42的组合物，其中所述取代1，3-环戊二酮选自(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊基]-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丙酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)-2-(2-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5S)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4R，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮、(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1S)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮及(4S，5R)-3，4-二羟基-4-[(1R)-羟基-4-甲基戊-3-烯-1-基]-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基)环戊-2-烯-1-酮。
49.根据权利要求42的组合物，其中所述双相体系的溶剂选自水、含有缓冲剂的水、含有可溶性聚合物的水、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸叔丁酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿及丙酮，或其任意组合。
50.根据权利要求42的组合物，其中所述双相溶剂体系的分配系数为0.6至3.0。
51.根据权利要求42的组合物，其中所述双相溶剂体系的分配系数为0.7至1.5。
52.根据权利要求42的组合物，其中所述逆流色谱法是在约20℃至约30℃的温度下进行的。
53.根据权利要求42的组合物，其中所述逆流色谱法是在环境温度下进行的。
54.根据权利要求42至53中任一项的组合物，其中所述药学上可接受的赋形剂选自等渗及吸收延迟剂、粘合剂、胶粘剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、甜味剂、吸收剂、洗涤剂及乳化剂，或其任意组合。
55.根据权利要求42至51中任一项的组合物，其中所述组合物还包含一种或多种抗氧化剂、维生素、矿物质、蛋白质、脂肪及碳水化合物。
56.根据权利要求42至55中任一项的组合物，其中所述组合物为适合通过选自口服、吸入、直肠、眼部、鼻腔、局部、***及肠胃外的途径给药的剂型。
57.根据权利要求42的组合物，其中所述同源物的纯度为至少80％。
58.根据权利要求42的组合物，其中所述同源物的纯度为至少95％。
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