CN102292102A - 免疫应答的引发 - Google Patents
免疫应答的引发 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102292102A CN102292102A CN2009801549244A CN200980154924A CN102292102A CN 102292102 A CN102292102 A CN 102292102A CN 2009801549244 A CN2009801549244 A CN 2009801549244A CN 200980154924 A CN200980154924 A CN 200980154924A CN 102292102 A CN102292102 A CN 102292102A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nucleic acid
- acid construct
- protein
- peptide
- constant chain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000028993 immune response Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 230000037452 priming Effects 0.000 title abstract 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 198
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 198
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 129
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 78
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 297
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 297
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 296
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 228
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 161
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 144
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 125
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 121
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 110
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 103
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 102
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 96
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 92
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 89
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 81
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 63
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 59
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 57
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 claims description 51
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 claims description 50
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 49
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 44
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 37
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 33
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 30
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 30
- -1 radical amino acid Chemical class 0.000 claims description 29
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 28
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 28
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims description 28
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 28
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 28
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 claims description 27
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 25
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 23
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims description 23
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 23
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 21
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 20
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 claims description 18
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 claims description 18
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 16
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 15
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 15
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 14
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 14
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 14
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 13
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 12
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 11
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 11
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims description 11
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 11
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 10
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 9
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 9
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims description 9
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 claims description 8
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 8
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 claims description 7
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000005829 trimerization reaction Methods 0.000 claims description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 6
- 241000282341 Mustela putorius furo Species 0.000 claims description 5
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 5
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 4
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 claims description 4
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 claims description 4
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 claims description 4
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 claims description 3
- 101001056180 Homo sapiens Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100026539 Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Human genes 0.000 claims description 3
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 3
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000055104 bcl-X Human genes 0.000 claims description 3
- 108700000711 bcl-X Proteins 0.000 claims description 3
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 claims description 3
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 2
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 claims description 2
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 claims description 2
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920000083 poly(allylamine) Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 2
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 claims description 2
- 102000000763 Survivin Human genes 0.000 claims 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 claims 1
- 108010028930 invariant chain Proteins 0.000 abstract description 27
- 230000003053 immunization Effects 0.000 abstract description 17
- 238000002649 immunization Methods 0.000 abstract description 17
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 98
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 78
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 69
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 67
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 52
- 230000008859 change Effects 0.000 description 47
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 37
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 37
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 33
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 33
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 30
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 28
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 27
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 25
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 24
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 22
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 21
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 21
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 21
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 21
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 20
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 20
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 20
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 19
- 239000000463 material Substances 0.000 description 18
- 241000894007 species Species 0.000 description 17
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 15
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 15
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 14
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 14
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 14
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 12
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 12
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 12
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 12
- 101001082628 Mus musculus H-2 class II histocompatibility antigen gamma chain Proteins 0.000 description 12
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 12
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 12
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 12
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 12
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 12
- 101710145505 Fiber protein Proteins 0.000 description 11
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 11
- 108010031099 Mannose Receptor Proteins 0.000 description 11
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 11
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000006870 function Effects 0.000 description 11
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 11
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 11
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 10
- 241000712899 Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus Species 0.000 description 10
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 9
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 238000011160 research Methods 0.000 description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 9
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 8
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 8
- 241001597008 Nomeidae Species 0.000 description 8
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 8
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 8
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 8
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 8
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 8
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 7
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 7
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 7
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 7
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 7
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 7
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 7
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 7
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 6
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 6
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 6
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 6
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 6
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 6
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 6
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 6
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 6
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 6
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 6
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 5
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 5
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 5
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 5
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 5
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 5
- 108091093094 Glycol nucleic acid Proteins 0.000 description 5
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 5
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 5
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 5
- 108010029973 Lymphocytic choriomeningitis virus glycoprotein peptide Proteins 0.000 description 5
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 5
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 5
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 5
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 5
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 5
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 5
- 229940022007 naked DNA vaccine Drugs 0.000 description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s)-2-azaniumyl-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-carboxylatobutanoyl]amino]-6-azaniumy Chemical group OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 4
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 4
- 102100025074 C-C chemokine receptor-like 2 Human genes 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 241000242711 Fasciola hepatica Species 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 101000716068 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 6 Proteins 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 208000001203 Smallpox Diseases 0.000 description 4
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 4
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 4
- 210000000746 body region Anatomy 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 4
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 4
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 4
- 108010084652 homeobox protein PITX1 Proteins 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 4
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 4
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 4
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 4
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 4
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 4
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 4
- 208000004441 taeniasis Diseases 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 108700026758 Adenovirus hexon capsid Proteins 0.000 description 3
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 241001148111 Brucella suis Species 0.000 description 3
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- 101100327692 Caenorhabditis elegans hsp-60 gene Proteins 0.000 description 3
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 3
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 3
- 108091029430 CpG site Proteins 0.000 description 3
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 3
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 3
- 206010013029 Diphyllobothriasis Diseases 0.000 description 3
- 241001137876 Diphyllobothrium Species 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 3
- 241000498255 Enterobius vermicularis Species 0.000 description 3
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 description 3
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 3
- 102100030595 HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Human genes 0.000 description 3
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 3
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101001082627 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Proteins 0.000 description 3
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 3
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 206010023076 Isosporiasis Diseases 0.000 description 3
- 102220624575 Kelch repeat and BTB domain-containing protein 7_M99A_mutation Human genes 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 3
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 description 3
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 3
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 3
- 101100221606 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) COS7 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 3
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 241000607764 Shigella dysenteriae Species 0.000 description 3
- 241000607762 Shigella flexneri Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 3
- 241000244174 Strongyloides Species 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 3
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 3
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001399 aluminium compounds Chemical class 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 3
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 3
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 206010014881 enterobiasis Diseases 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 3
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- 239000002479 lipoplex Substances 0.000 description 3
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 3
- 239000005645 nematicide Substances 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003351 stiffener Substances 0.000 description 3
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 3
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N (R)-camphor Chemical compound C1C[C@@]2(C)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N 0.000 description 2
- RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane-2,5-dione Chemical group O=C1COC(=O)CO1 RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000224422 Acanthamoeba Species 0.000 description 2
- 241000224423 Acanthamoeba castellanii Species 0.000 description 2
- 241000167877 Acanthamoeba culbertsoni Species 0.000 description 2
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- 241000607516 Aeromonas caviae Species 0.000 description 2
- 241000607528 Aeromonas hydrophila Species 0.000 description 2
- 241000607522 Aeromonas sobria Species 0.000 description 2
- 241000607574 Aeromonas veronii Species 0.000 description 2
- 241001465677 Ancylostomatoidea Species 0.000 description 2
- 241000244021 Anisakis simplex Species 0.000 description 2
- 102100021663 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5 Human genes 0.000 description 2
- 241001235572 Balantioides coli Species 0.000 description 2
- 241000726107 Blastocystis hominis Species 0.000 description 2
- 241001148106 Brucella melitensis Species 0.000 description 2
- 241001453380 Burkholderia Species 0.000 description 2
- 206010069747 Burkholderia mallei infection Diseases 0.000 description 2
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 2
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 2
- 102100029968 Calreticulin Human genes 0.000 description 2
- 108090000549 Calreticulin Proteins 0.000 description 2
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 2
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 2
- 101100507655 Canis lupus familiaris HSPA1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 241001327965 Clonorchis sinensis Species 0.000 description 2
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 2
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 2
- 108010069241 Connexin 43 Proteins 0.000 description 2
- 102000001045 Connexin 43 Human genes 0.000 description 2
- 241000217227 Contracaecum Species 0.000 description 2
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 2
- 241000223938 Cryptosporidium muris Species 0.000 description 2
- 241000223936 Cryptosporidium parvum Species 0.000 description 2
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000205707 Cystoisospora belli Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- YTBSYETUWUMLBZ-QWWZWVQMSA-N D-threose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)C=O YTBSYETUWUMLBZ-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 2
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 2
- 241000243988 Dirofilaria immitis Species 0.000 description 2
- 206010014096 Echinococciasis Diseases 0.000 description 2
- 208000009366 Echinococcosis Diseases 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000224432 Entamoeba histolytica Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 208000000832 Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 241001126302 Fasciolopsis buski Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 241000239183 Filaria Species 0.000 description 2
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 description 2
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 2
- 241000589602 Francisella tularensis Species 0.000 description 2
- 101000609762 Gallus gallus Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 241000224467 Giardia intestinalis Species 0.000 description 2
- 201000003641 Glanders Diseases 0.000 description 2
- 241000607259 Grimontia hollisae Species 0.000 description 2
- 241001522191 Gyrodactylus salaris Species 0.000 description 2
- 102100034051 Heat shock protein HSP 90-alpha Human genes 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 241000228404 Histoplasma capsulatum Species 0.000 description 2
- 101001016865 Homo sapiens Heat shock protein HSP 90-alpha Proteins 0.000 description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 2
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000222740 Leishmania braziliensis Species 0.000 description 2
- 241000222727 Leishmania donovani Species 0.000 description 2
- 241000222734 Leishmania mexicana Species 0.000 description 2
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 2
- 241000255640 Loa loa Species 0.000 description 2
- 241000712898 Machupo mammarenavirus Species 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 241000530522 Mansonella ozzardi Species 0.000 description 2
- 241000142895 Mansonella perstans Species 0.000 description 2
- 241000022705 Mansonella streptocerca Species 0.000 description 2
- 241000002163 Mesapamea fractilinea Species 0.000 description 2
- 229930191564 Monensin Natural products 0.000 description 2
- 208000006123 Myiasis Diseases 0.000 description 2
- 241000970873 Nanophyetus salmincola Species 0.000 description 2
- 241000296822 Nanophyetus schikhobalowi Species 0.000 description 2
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 2
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 2
- 101000783504 Orgyia pseudotsugata multicapsid polyhedrosis virus Uncharacterized 15.4 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 2
- 241000935974 Paralichthys dentatus Species 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 241000150350 Peribunyaviridae Species 0.000 description 2
- 241001672678 Photobacterium damselae subsp. damselae Species 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 2
- 241001505293 Plasmodium ovale Species 0.000 description 2
- 241000223810 Plasmodium vivax Species 0.000 description 2
- 241000223830 Plasmodium yoelii Species 0.000 description 2
- 241000606999 Plesiomonas shigelloides Species 0.000 description 2
- 241000233872 Pneumocystis carinii Species 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 241000392514 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Dublin Species 0.000 description 2
- 241000607132 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Gallinarum Species 0.000 description 2
- 241000531795 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi A Species 0.000 description 2
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 2
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 2
- 241000242683 Schistosoma haematobium Species 0.000 description 2
- 241000242677 Schistosoma japonicum Species 0.000 description 2
- 241000242680 Schistosoma mansoni Species 0.000 description 2
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102220533605 Single-strand selective monofunctional uracil DNA glycosylase_M91A_mutation Human genes 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 2
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 2
- 241000244159 Taenia saginata Species 0.000 description 2
- 241000244157 Taenia solium Species 0.000 description 2
- 101710192266 Tegument protein VP22 Proteins 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 241000244030 Toxocara canis Species 0.000 description 2
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 description 2
- 102000002070 Transferrins Human genes 0.000 description 2
- 108010015865 Transferrins Proteins 0.000 description 2
- 241000243774 Trichinella Species 0.000 description 2
- 241001442397 Trypanosoma brucei rhodesiense Species 0.000 description 2
- 241000223095 Trypanosoma evansi Species 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 241000870995 Variola Species 0.000 description 2
- 241000607594 Vibrio alginolyticus Species 0.000 description 2
- 241000607296 Vibrio cincinnatiensis Species 0.000 description 2
- 241000607291 Vibrio fluvialis Species 0.000 description 2
- 241001148070 Vibrio furnissii Species 0.000 description 2
- 241001135144 Vibrio metschnikovii Species 0.000 description 2
- 241000607253 Vibrio mimicus Species 0.000 description 2
- 241000607265 Vibrio vulnificus Species 0.000 description 2
- 241000244005 Wuchereria bancrofti Species 0.000 description 2
- 241000607447 Yersinia enterocolitica Species 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 201000008680 babesiosis Diseases 0.000 description 2
- 208000007456 balantidiasis Diseases 0.000 description 2
- 229940011597 blastocystis hominis Drugs 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229960000846 camphor Drugs 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 2
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 229940007078 entamoeba histolytica Drugs 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 238000013265 extended release Methods 0.000 description 2
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 208000006275 fascioliasis Diseases 0.000 description 2
- 206010016235 fasciolopsiasis Diseases 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 229940118764 francisella tularensis Drugs 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 229940085435 giardia lamblia Drugs 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 2
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 2
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002607 hemopoietic effect Effects 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 2
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000004531 microgranule Substances 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102220023256 rs387907547 Human genes 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 229940007046 shigella dysenteriae Drugs 0.000 description 2
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 2
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 2
- 210000003956 transport vesicle Anatomy 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098232 yersinia enterocolitica Drugs 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- LAOOXBLMIJHMFO-UHFFFAOYSA-N 1-[2-(diethylamino)ethylamino]-4-methylthioxanthen-9-one;hydron;chloride Chemical compound Cl.S1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C(C)=CC=C2NCCN(CC)CC LAOOXBLMIJHMFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEBVLXFERQHONN-UHFFFAOYSA-N 1-butyl-N-(2,6-dimethylphenyl)piperidine-2-carboxamide Chemical compound CCCCN1CCCCC1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C LEBVLXFERQHONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XWBADQOPXPRKBX-FMIVXFBMSA-N 1-n,1-n-diethyl-4-n-[6-methoxy-2-[(e)-2-(4-nitrophenyl)ethenyl]quinolin-4-yl]pentane-1,4-diamine Chemical compound N=1C2=CC=C(OC)C=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=1\C=C\C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XWBADQOPXPRKBX-FMIVXFBMSA-N 0.000 description 1
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- 101710163881 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010022579 ATP dependent 26S protease Proteins 0.000 description 1
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 1
- 241000881711 Acipenser sturio Species 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 208000009663 Acute Necrotizing Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000000230 African Trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 208000003857 African horse sickness Diseases 0.000 description 1
- 208000007407 African swine fever Diseases 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 229910017119 AlPO Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010060935 Alloimmunisation Diseases 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 208000003829 American Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 1
- 241000224489 Amoeba Species 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 241001147657 Ancylostoma Species 0.000 description 1
- 241000498253 Ancylostoma duodenale Species 0.000 description 1
- 102100037435 Antiviral innate immune response receptor RIG-I Human genes 0.000 description 1
- 101710127675 Antiviral innate immune response receptor RIG-I Proteins 0.000 description 1
- 241000712892 Arenaviridae Species 0.000 description 1
- 241000712891 Arenavirus Species 0.000 description 1
- 201000009695 Argentine hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 241000244185 Ascaris lumbricoides Species 0.000 description 1
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 description 1
- 241001533362 Astroviridae Species 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000713826 Avian leukosis virus Species 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 241000335423 Blastomyces Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 description 1
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006049 Bovine Tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 241000589567 Brucella abortus Species 0.000 description 1
- 241001509299 Brucella canis Species 0.000 description 1
- 241000589568 Brucella ovis Species 0.000 description 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 1
- 241000244038 Brugia malayi Species 0.000 description 1
- 241000722910 Burkholderia mallei Species 0.000 description 1
- 241001136175 Burkholderia pseudomallei Species 0.000 description 1
- 206010069748 Burkholderia pseudomallei infection Diseases 0.000 description 1
- 208000027312 Bursal disease Diseases 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100031974 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Human genes 0.000 description 1
- 241000244203 Caenorhabditis elegans Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical compound NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026548 Caspase-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 1
- 102100038608 Cathelicidin antimicrobial peptide Human genes 0.000 description 1
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 1
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 1
- 208000010711 Cattle disease Diseases 0.000 description 1
- 108010031896 Cell Cycle Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000005483 Cell Cycle Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000242722 Cestoda Species 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001597062 Channa argus Species 0.000 description 1
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 241001647378 Chlamydia psittaci Species 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 241000983417 Chrysomya bezziana Species 0.000 description 1
- 101710117490 Circumsporozoite protein Proteins 0.000 description 1
- 241000223203 Coccidioides Species 0.000 description 1
- 241000223205 Coccidioides immitis Species 0.000 description 1
- 208000003495 Coccidiosis Diseases 0.000 description 1
- 241000933851 Cochliomyia Species 0.000 description 1
- 241000202814 Cochliomyia hominivorax Species 0.000 description 1
- 208000027205 Congenital disease Diseases 0.000 description 1
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 1
- 241000606678 Coxiella burnetii Species 0.000 description 1
- 208000000307 Crimean Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 1
- 201000003075 Crimean-Congo hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 241000150230 Crimean-Congo hemorrhagic fever orthonairovirus Species 0.000 description 1
- 241000222716 Crithidia Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 102000013701 Cyclin-Dependent Kinase 4 Human genes 0.000 description 1
- 108010025464 Cyclin-Dependent Kinase 4 Proteins 0.000 description 1
- 241000016605 Cyclospora cayetanensis Species 0.000 description 1
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 description 1
- 229930183912 Cytidylic acid Natural products 0.000 description 1
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 208000006313 Delayed Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 102100034274 Diamine acetyltransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000866683 Diphyllobothrium latum Species 0.000 description 1
- 241000935792 Dipylidium caninum Species 0.000 description 1
- 208000009514 Dourine Diseases 0.000 description 1
- 241001520695 Duvenhage lyssavirus Species 0.000 description 1
- 241000710945 Eastern equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 208000030820 Ebola disease Diseases 0.000 description 1
- 241000464908 Elliptica Species 0.000 description 1
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 description 1
- 241000146368 Endolimax nana Species 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 241001455610 Ephemerovirus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001646719 Escherichia coli O157:H7 Species 0.000 description 1
- 101000906736 Escherichia phage Mu DNA circularization protein N Proteins 0.000 description 1
- 102100039717 G antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 241001502121 Glossina brevipalpis Species 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 208000000464 Henipavirus Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000724675 Hepatitis E virus Species 0.000 description 1
- 208000037262 Hepatitis delta Diseases 0.000 description 1
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000703754 Homo sapiens CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000741320 Homo sapiens Cathelicidin antimicrobial peptide Proteins 0.000 description 1
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 description 1
- 101000641077 Homo sapiens Diamine acetyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000886137 Homo sapiens G antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001019455 Homo sapiens ICOS ligand Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000713305 Homo sapiens Sodium-coupled neutral amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000640813 Homo sapiens Sodium-coupled neutral amino acid transporter 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000716973 Homo sapiens Thialysine N-epsilon-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 108010070875 Human Immunodeficiency Virus tat Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 241000714192 Human spumaretrovirus Species 0.000 description 1
- 241000607236 Hysterothylacium Species 0.000 description 1
- 102100034980 ICOS ligand Human genes 0.000 description 1
- 101100028758 Influenza A virus (strain A/Swine/Wisconsin/1/1967 H1N1) PB1-F2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- 241001500343 Influenzavirus C Species 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 1
- 102100030704 Interleukin-21 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241001466978 Kyasanur forest disease virus Species 0.000 description 1
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 1
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 1
- 241000283953 Lagomorpha Species 0.000 description 1
- 241001520693 Lagos bat lyssavirus Species 0.000 description 1
- 206010023927 Lassa fever Diseases 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 241000589242 Legionella pneumophila Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 101000839464 Leishmania braziliensis Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 241000222736 Leishmania tropica Species 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 206010024238 Leptospirosis Diseases 0.000 description 1
- 241001523405 Limax Species 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- 208000032912 Local swelling Diseases 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- 108010064171 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014944 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000711828 Lyssavirus Species 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 108010048043 Macrophage Migration-Inhibitory Factors Proteins 0.000 description 1
- 102100037791 Macrophage migration inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 208000000932 Marburg Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 201000011013 Marburg hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 241001115401 Marburgvirus Species 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 206010027336 Menstruation delayed Diseases 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000725171 Mokola lyssavirus Species 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241001508687 Mustela erminea Species 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 1
- 241000204022 Mycoplasma gallisepticum Species 0.000 description 1
- 241000202942 Mycoplasma synoviae Species 0.000 description 1
- PIJXCSUPSNFXNE-QRZOAFCBSA-N N-acetyl-4-(N-acetylglucosaminyl)muramoyl-L-alanyl-D-isoglutamine Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@@H]1[C@@H](NC(C)=O)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 PIJXCSUPSNFXNE-QRZOAFCBSA-N 0.000 description 1
- 241000224438 Naegleria fowleri Species 0.000 description 1
- 208000006007 Nairobi Sheep Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000498270 Necator americanus Species 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000526636 Nipah henipavirus Species 0.000 description 1
- 201000009688 Nipah virus encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000714209 Norwalk virus Species 0.000 description 1
- 241000669618 Nothes Species 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 241000243981 Onchocerca Species 0.000 description 1
- 241000243985 Onchocerca volvulus Species 0.000 description 1
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 1
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 101150103639 PB1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010058096 Pancreatic necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241001480234 Paragonimus westermani Species 0.000 description 1
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 1
- 208000026681 Paratuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 241001040659 Plasmodium (Plasmodium) Species 0.000 description 1
- 241000224024 Plasmodium chabaudi Species 0.000 description 1
- 241000223821 Plasmodium malariae Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010035673 Pneumonia chlamydial Diseases 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000244039 Pseudoterranova Species 0.000 description 1
- 206010037151 Psittacosis Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000186813 Renibacterium Species 0.000 description 1
- 241000186812 Renibacterium salmoninarum Species 0.000 description 1
- 241000702247 Reoviridae Species 0.000 description 1
- 241001068295 Replication defective viruses Species 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 241000711931 Rhabdoviridae Species 0.000 description 1
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- 241000606697 Rickettsia prowazekii Species 0.000 description 1
- 208000000705 Rift Valley Fever Diseases 0.000 description 1
- 241000713124 Rift Valley fever virus Species 0.000 description 1
- 208000006257 Rinderpest Diseases 0.000 description 1
- 208000013007 Rodent disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- 241000736032 Sabia <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000522522 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Abortusovis Species 0.000 description 1
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 1
- 241000607683 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Pullorum Species 0.000 description 1
- 241001442514 Schistosomatidae Species 0.000 description 1
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 1
- 208000012936 Sheep disease Diseases 0.000 description 1
- 241000607766 Shigella boydii Species 0.000 description 1
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 1
- 101710173693 Short transient receptor potential channel 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710173694 Short transient receptor potential channel 2 Proteins 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001480238 Steinernema Species 0.000 description 1
- 101000764570 Streptomyces phage phiC31 Probable tape measure protein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000244155 Taenia Species 0.000 description 1
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 1
- 241000244040 Terranova Species 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 208000001117 Theileriasis Diseases 0.000 description 1
- 102100020926 Thialysine N-epsilon-acetyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 1
- 241000244020 Toxocara cati Species 0.000 description 1
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 241001439624 Trichina Species 0.000 description 1
- 241000243777 Trichinella spiralis Species 0.000 description 1
- 241000736913 Trichiurus Species 0.000 description 1
- 241000197881 Trichocephalus Species 0.000 description 1
- 241000224527 Trichomonas vaginalis Species 0.000 description 1
- 241001489145 Trichuris trichiura Species 0.000 description 1
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 description 1
- 241000223105 Trypanosoma brucei Species 0.000 description 1
- 241001442399 Trypanosoma brucei gambiense Species 0.000 description 1
- 241000223109 Trypanosoma cruzi Species 0.000 description 1
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000196508 Turbatrix Species 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010046793 Uterine inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 1
- 208000002687 Venezuelan Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710959 Venezuelan equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000711970 Vesiculovirus Species 0.000 description 1
- 241000607618 Vibrio harveyi Species 0.000 description 1
- 241000607272 Vibrio parahaemolyticus Species 0.000 description 1
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 1
- 208000001449 Viral Hemorrhagic Septicemia Diseases 0.000 description 1
- 206010051511 Viral diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000010094 Visna Diseases 0.000 description 1
- 206010047799 Vulvovaginitis trichomonal Diseases 0.000 description 1
- 201000006449 West Nile encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010057293 West Nile viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 1
- 241000710951 Western equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000244002 Wuchereria Species 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 241000607477 Yersinia pseudotuberculosis Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- LUXUAZKGQZPOBZ-SAXJAHGMSA-N [(3S,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] (Z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O LUXUAZKGQZPOBZ-SAXJAHGMSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940021704 adenovirus vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000037006 agalactosis Effects 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 208000006730 anaplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 210000000776 antibody secreting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003716 antitrichomonal agent Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 206010003230 arteritis Diseases 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 201000009361 ascariasis Diseases 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 108010056708 bcr-abl Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004441 bcr-abl Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 208000003836 bluetongue Diseases 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 229940038698 brucella melitensis Drugs 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229960003150 bupivacaine Drugs 0.000 description 1
- 229940074375 burkholderia mallei Drugs 0.000 description 1
- 102220369446 c.1274G>A Human genes 0.000 description 1
- 102220369445 c.668T>C Human genes 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 241001233037 catfish Species 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000306 component Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 208000037933 contagious bovine pleuropneumonia Diseases 0.000 description 1
- 201000005332 contagious pustular dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000003683 corneal stroma Anatomy 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 1
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- IERHLVCPSMICTF-XVFCMESISA-N cytidine 5'-monophosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 IERHLVCPSMICTF-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- IERHLVCPSMICTF-UHFFFAOYSA-N cytidine monophosphate Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(COP(O)(O)=O)O1 IERHLVCPSMICTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 229940099686 dirofilaria immitis Drugs 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000005059 dormancy Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010824 fish disease Diseases 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 208000026234 goat disease Diseases 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 1
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 208000029080 human African trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229940074383 interleukin-11 Drugs 0.000 description 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229920000831 ionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 201000009837 laryngotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 229940115932 legionella pneumophila Drugs 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000000088 lip Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 108010045758 lysosomal proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 201000004015 melioidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 210000003936 merozoite Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001035 methylating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010208 microarray analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000013586 microbial product Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 208000005871 monkeypox Diseases 0.000 description 1
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108700036949 murine gammaherpesvirus 68 M2 Proteins 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002102 nanobead Substances 0.000 description 1
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 201000000901 ornithosis Diseases 0.000 description 1
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N p-menthan-3-ol Chemical compound CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002824 peroxisome Anatomy 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229940118768 plasmodium malariae Drugs 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 201000006509 pleuropneumonia Diseases 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004094 preconcentration Methods 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229940046939 rickettsia prowazekii Drugs 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 102220023257 rs387907546 Human genes 0.000 description 1
- 102220023258 rs387907548 Human genes 0.000 description 1
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 230000001843 schistosomicidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 208000008864 scrapie Diseases 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 238000005245 sintering Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 201000002612 sleeping sickness Diseases 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 1
- 210000004215 spore Anatomy 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000005987 sulfurization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940126577 synthetic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940098465 tincture Drugs 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 229940096911 trichinella spiralis Drugs 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 1
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 239000002691 unilamellar liposome Substances 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 1
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006266 variola major Diseases 0.000 description 1
- 201000000627 variola minor Diseases 0.000 description 1
- 208000014016 variola minor infection Diseases 0.000 description 1
- 229940126580 vector vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 208000010484 vulvovaginitis Diseases 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001148—Regulators of development
- A61K39/00115—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001154—Enzymes
- A61K39/001164—GTPases, e.g. Ras or Rho
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
- A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6006—Cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及使用恒定链连接的抗原的引发免疫应答的技术和方法,当这些用于引发使用任何合适疫苗的后续加强免疫接种时。
Description
本申请中引用的所有专利和非专利参考文献在此通过引用整体并入。
发明领域
本发明涉及使用恒定链连接的抗原的引发免疫应答的技术和方法(当这些用于引发使用任何合适疫苗的后续加强免疫接种时)。
背景技术
疫苗接种是给受试者施用抗原材料(疫苗),以便产生对疾病或状况的免疫。当用于刺激免疫应答时,抗原被称为免疫原,并且该过程被称为免疫接种。疫苗接种涉及一种或多种免疫原的施用,这可以以几种形式施用。
疫苗接种要求实体免疫应答的建立。由感染或疫苗接种激活的免疫应答依赖于几种细胞类型例如T、B和抗原呈递细胞,以及几种不同分子主要是抗原、MHC分子、T和B细胞受体及许多其他的相互作用。
常规疫苗或第一代疫苗基于被杀死或减毒的致病菌株。这些通常具有减少的传染力,并且它们通常是无足够的免疫原性的,导致来自疫苗接种的不充分保护。
基于来自致病生物的个别抗原蛋白质的第二代疫苗或亚单位疫苗的开发已揭示纯肽或碳水化合物趋于是弱免疫原。
DNA疫苗或第三代疫苗具有诱导较广泛范围的免疫应答类型的能力,但维持在人中具有低免疫原性的潜在缺点。
对于所有类型的疫苗,疫苗接种程序面对关于增加疫苗效力的未满足需要,以克服上述局限性且提供在疫苗接种过程中刺激免疫***的更经济方法。
本发明目标在于通过提供用于增加疫苗效力的解决方案来解决与疫苗的低免疫原性相关的问题。
本发明目标在于通过提供用于引发免疫应答的解决方案来解决与疫苗的低免疫原性相关的问题。
本发明因此涉及用核酸构建体引发免疫***,所述核酸构建体包括MHC II类结合的恒定链/CD74(本文被称为恒定链或Ii)或其变体,且编码至少一种抗原蛋白质或所述抗原蛋白质的片段,随后为后续加强疫苗接种,以增加所述疫苗的效力。
根据本发明的疫苗可以涉及致病性抗原或癌抗原。
本文呈现的数据显示使用包括恒定链或其变体的核酸构建体开发引发-加强方案并不简单。
令人惊讶的是,本发明公开了可以改变来自恒定链的Ii-KEY(包括LRMK氨基酸残基)和/或Ii-CLIP结构域的部分,而不减少所述免疫引发的效应。
不充分地解决这个问题的现有技术参考文献在下文讨论:
WO 2007/062656(Holst等人)涉及开发改良DNA疫苗,以这样的方式刺激免疫应答,所述方式增加应答的动力学,同时伴随扩大且改善应答。Holst等人发现抗原与恒定链的融合通过CD4+T细胞独立机制显著增强随后的抗病毒CD4+和CD8+T细胞应答。
Holmes等人(J Clin Oncol. 2008,Jul
10;26(20):3426-33)描述了Ii-key杂合肽疫苗的首次人I期试验,其中Ii-key包括LRMK 4氨基酸序列,恒定链蛋白质的中心部分。
Kallinteris等人的发现(Expert Opin. Biol. Ther. 2006,6(12):1311,1321)也涉及利用包括LRMK氨基酸的Ii-key部分用于增强疫苗效力。
US
2008/0095798(Humphreys等人)公开了用于增加疫苗针对病原体的效力的方法,通过首先用包括所述Ii-key肽的LRMK残基的Ii-Key杂合肽构建体引发受试者的免疫***,并且随后施用针对病原体的疫苗以加强在引发步骤中产生的免疫应答。
发明概述
本发明显示用核酸构建体引发免疫***,所述核酸构建体包括至少一种MHC II类结合的恒定链/CD74(本文被称为恒定链或Ii)或其变体,且编码至少一种抗原蛋白质或所述抗原蛋白质的片段,随后为后续加强疫苗接种增加所述疫苗的效力。
根据本发明的疫苗可以涉及致病性抗原或癌抗原。
令人惊讶的是,本发明公开了Ii-KEY结构域(包括LRMK氨基酸残基)和/或Ii-CLIP结构域的部分可以从恒定链中部分置换或省略,而不降低所述引发的作用。
因此,本发明已解决了通过采用二步引发-加强方案的疫苗接种而产生的充分刺激免疫应答的问题,由此首先用包括恒定链或其变体的核酸构建体引发免疫***,随后为以这样的方式使用任何类型的合适疫苗的后续加强免疫接种,所述方式增加应答的动力学,同时伴随扩大且改善应答。特别地,在此可提供用于直接、特异和快速刺激免疫***的新型***,以便改善所有动物例如人的疫苗接种方案。
这个问题通过在权利要求中表征的本发明的实施方案得到解决。通过本发明,发现用基于Ii链的核酸构建体的引发显著增加在用疫苗后续加强后的抗原特异性CD8+ T细胞、CD4+ T细胞和/或B细胞生成。
因此,本发明的一个方面是提供包括这样的序列的核酸构建体,所述序列编码与至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段可操作地连接的至少一种恒定链或其变体,其中所述核酸构建体能够引发免疫***,以增强在受试者中施用后续疫苗后的免疫接种。
在一个实施方案中,本发明提供了包括这样的序列的核酸构建体,所述序列编码与至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段可操作地连接的至少一种恒定链或其变体,其中通过在受试者中施用后续疫苗,所述核酸构建体能够引发免疫接种。
在一个实施方案中,在本发明的核酸构建体中包括的恒定链可以由其野生型序列加以改变,而不减少Ii的效应。
因此,在一个实施方案中,包括LRMK氨基酸残基的Ii-KEY结构域已通过缺失或置换例如突变加以改变。
在另一个实施方案中,Ii-CLIP结构域的部分已通过缺失或置换例如突变加以改变。Ii-CLIP结构域可以具体地通过将在位置91和99上的甲硫氨酸置换为丙氨酸而改变;这令人惊讶地增加MHCII呈递。
在另一个实施方案中,Ii可以具体地通过缺失Ii的前17个氨基酸而改变;这令人惊讶地增加记忆应答。
由此可见这些改变各自可以分开或组合发生。
在一个实施方案中,当用于引发针对病毒、微生物例如细菌或寄生虫的疫苗的免疫应答时,在本发明的核酸构建体中包括的恒定链由其野生型序列加以改变。
在另一个实施方案中,当用于引发癌症疫苗或针对异常生理学应答的疫苗的免疫应答时,在本发明的核酸构建体中包括的恒定链可以由或不由其野生型序列加以改变。
在另一个实施方案中,用于引发免疫应答的核酸构建体和用于加强免疫应答的后续疫苗的至少一个部分是等同的。引发物和加强物(booster)的所述至少一个等同部分可以是Ii或其变体、抗原肽或抗原肽的部分、或遍在的辅助T细胞表位。
同样本发明的一个目的是提供包括如本文详述的核酸构建体的递送媒介物(vehicle),其中所述递送媒介物是基于RNA的媒介物、基于DNA的媒介物/载体、基于脂质的媒介物、基于聚合物的媒介物或病毒衍生的或DNA或RNA媒介物。
在一个优选实施方案中,所述递送媒介物包括脂质体的形成、生物可降解聚合物微球体的形成、核酸构建体包被到胶体金颗粒上或掺入病毒衍生的DNA或RNA载体内。
在另外一个优选实施方案中,所述核酸构建体或所述递送媒介物借助于针注射、基因枪、射流注射(jet injection)、电穿孔、超声或水动力递送进行施用。
因此,本发明的一个方面是提供通过包括这样的序列的核酸构建体刺激免疫应答的方法,所述序列编码与至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段可操作地连接的至少一种恒定链或其变体。
一个进一步目的提供刺激在这些中的任何或这些中的任何的任何部分内编码的核酸构建体或蛋白质的细胞内散布的装置(means)。
本发明的另外一个目的是提供如由本文描述的核酸构建体编码的嵌合蛋白质。
本发明的一个进一步方面是提供识别由本文描述的核酸构建体编码的嵌合蛋白质的抗体。
本发明的一个方面是提供用于改善疫苗效力的方法,其包括施用如本文详述的核酸构建体。
与本发明特别相关的是包括这样的序列的核酸构建体,所述序列编码与至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段可操作地连接的至少一种恒定链或其变体,其适合于引发免疫应答。
本发明的另外一个方面是提供部分试剂盒(kit in parts),所述试剂盒包括如本文描述的核酸构建体连同施用所述核酸构建体的医疗器械或其他装置,和/或合适疫苗,和另外关于如何使用部分试剂盒的说明书。
因此可见本发明提供了通过给动物施用如本文下文详述的核酸构建体用于加强动物中的免疫应答的方法。
附图说明
图1:用基于Ii链的裸露DNA疫苗的DNA引发。
图2:在Ii序列中结构域和测试的突变的定位。
图3:Ii显著增加SIINFEKL/H-2kb OVA衍生表位的细胞表面呈递。
图4:Ii仅以顺式工作。
图5:N末端缺失和置换不影响Ii刺激能力。
图6:C末端缺失和置换不影响Ii刺激能力。
图7:仅N和C末端缺失降低Ii刺激能力。
图8:Ad-IiGP和Ad-GP疫苗的剂量应答。
图9:Ad-GP、Ad-IiGP和Ad-IiCLIPGP 作用于MHC II类呈递的比较。
图10:Ad-GP、Ad-IiGP、Ad-GPLamp-1和Ad-IiΔ17GP在体内时间过程研究中的比较。
图11:Ad-GP、Ad-IiGP、Ad-IiΔ17GP、Ad-IiKEYGP、Ad-IiCLIPGP、Ad-Ii1-117GP和Ad-Ii1-199GP在体内应答中的比较。
图12:Ad-GP能够引发后续Ad-IiGP加强。
图13:Ad-IiGP不能引发后续Ad-GP或Ad-IiGP加强。
图14:Ad-GP和AdIi-Gp疫苗的剂量应答。
图15:与包括残基50 - 215的恒定链变体(Ii50-215)偶联的甘露糖受体,与腺病毒纤维蛋白质进一步偶联。
定义
腺病毒:一组包含双链DNA的病毒。腺病毒可以进行遗传修饰,使得其不能复制或条件性不能复制。以这种形式,作为腺病毒构建体或腺病毒载体,它们可以用作基因递送媒介物用于疫苗接种或基因疗法。
腺病毒纤维蛋白质:来自腺病毒的任何血清型的纤维蛋白质。它还称为腺病毒纤维结或具有异源结***片段的腺病毒纤维结。
佐剂:其与施用的免疫原决定簇/抗原/核酸构建体的混合物增加或以其他方式修饰对于所述决定簇的免疫应答的任何物质。
氨基酸:任何合成或天然存在的氨基羧酸,包括在肽和多肽包括在体内合成的蛋白质和酶中存在的任何氨基酸,从而包括氨基酸的修饰。术语氨基酸在本文中与术语“氨基酸残基”同义使用,其意欲包含如所述已与至少一个其他种类例如2、例如3、例如超过3个其他种类反应的氨基酸。通用词氨基酸包括天然和非天然氨基酸,其中任何可以以“D”或“L”异构形式存在。氨基酸可以缩写为‘aa’。
抗体:免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的活性部分。抗体是例如完整免疫球蛋白分子或其保留免疫学活性的片段。
抗原:可以与克隆分布的免疫受体(T细胞或B细胞受体)结合的任何物质。通常是肽、多肽或多聚体多肽。抗原优选能够引发免疫应答。
加强:通过加强物注射(shot)或剂量来加强是给予免疫试剂例如疫苗的一次或多次另外剂量,在用于引发免疫***的物质的初始剂量后一段时间给予,以维持或增强通过相同(同源)或另一种(异源)免疫试剂的先前剂量引发的免疫应答。
载体:抗原与之偶联以帮助诱导免疫应答的实体或化合物。
嵌合蛋白质:由核苷酸序列编码的遗传改造蛋白质,所述核苷酸序列通过将2种或更多种完整或部分基因或一系列(非)随机核酸剪接在一起制备。
补体:其作用于“补充”抗体工作的复杂系列的血液蛋白质。补体破坏细菌,产生炎症,且调节免疫反应。
细胞因子:生长或分化调节剂,在本文中非限定使用,并且不应限制本发明和权利要求的解释。除细胞因子外,粘附或辅助分子或其任何组合可以单独或与细胞因子组合采用。
CTL:细胞毒性T淋巴细胞。表达CD8连同T细胞受体,且因此能够响应由I类分子呈递的抗原的T细胞亚组。
递送媒介物:由此核苷酸序列或多肽或两者可以从至少一种介质转运到另一种介质的实体。
片段:用于指出核酸或多肽的非全长部分。因此,片段自身也分别是核酸或多肽。
异源加强或引发-加强:其中用于加强免疫***的物质不同于先前用于引发免疫应答的物质。
同源加强或引发-加强:其中用于加强免疫***的物质与先前用于引发免疫应答的物质相同。
个体:鸟、哺乳动物、鱼、两栖类或爬行类包括人类的任何物种或亚种。
恒定链:与内质网和后续细胞区室中的MHC II分子结合且稳定其的整合膜蛋白质糖蛋白。此处术语恒定链涵盖所有天然存在或人工生成的与人恒定链具有特定相似性的全长或片段化的同源基因和蛋白质。恒定链在本文中缩写为Ii。
分离的:与本文公开的核酸、多肽或抗体结合使用的‘分离的’指已鉴定且从其天然的、一般的细胞环境的组分中分离和/或回收的那些。本发明的核酸、多肽和抗体优选是分离的,并且本发明的疫苗和其他组合物优选包括分离核酸、多肽或分离抗体。
MHC:主要组织相容性复合物,存在MHC的2个主要亚类,I类和II类。
裸露DNA:不与组蛋白结合的DNA;通常是低甲基化和富含CpG的DNA。裸露DNA可以是环状或线性的,例如环状质粒。
核酸:传送遗传信息的核苷酸链或序列。就本发明而言,核酸可以是脱氧核糖核酸(DNA)或下述中的任何:核糖核酸(RNA)、锁核酸(LNA)、肽核酸(PNA)、嵌入核酸(INA)、扭曲嵌入核酸(TINA)、己糖醇核酸(HNA)、阿糖核酸(ANA)、环己烷核酸(CNA)、环己烯基核酸(CeNA)、甘油核酸(GNA)、苏糖基核酸(TNA)、缺口-聚体(Gap-mers)、混合-聚体(Mix-mers)和吗啉代类物质(Morpholinos)。
核酸构建体:遗传改造的核酸。一般包括几种元件例如基因或其片段、启动子、增强子、终止子、多聚腺苷酸尾、接头、多聚接头、操作接头、多克隆位点(MCS)、标记、终止密码子、其他调节元件、内部核糖体进入位点(IRES)或其他。
操作接头:以保证核酸或多肽的生物加工的方式使核酸构建体或(嵌合)多肽的2个部分结合在一起的核苷酸或氨基酸残基序列。
病原体:疾病的特异性成因剂,特别是生物剂例如病毒、细菌、朊病毒或寄生虫,其可以引起对其宿主的疾病,也被称为传染剂。
肽:限定序列且由酰胺键连接的多个共价连接的氨基酸残基。该术语与寡肽和多肽类似地使用。天然和/或非天然氨基酸可以通过肽键或通过非肽键连接。术语肽还包含通过化学或酶催化反应引入的翻译后修饰,如本领域已知的。该术语可以指多肽变体或片段。
药物载体:也称为赋形剂或稳定剂,在采用的剂量和浓度下对暴露于其的细胞或个体是无毒的。通常生理学上可接受的载体是pH缓冲的水性溶液。生理学上可接受的载体的例子包括缓冲液例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸;抗氧化剂包括抗坏血酸;低分子量(小于约10个残基)多肽;蛋白质例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白;亲水聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸;单糖、二糖和其他碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合剂例如EDTA;糖醇例如甘露糖醇或山梨糖醇;成盐抗衡离子例如钠;和/或非离子表面活性剂例如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
多个:至少2个。
引发:用例如DNA初始引发免疫***,以使免疫应答集中于所需免疫原。
引发-加强:用例如DNA初始引发免疫***,以使免疫应答集中于所需免疫原,并且用疫苗随后加强免疫应答,导致由所述疫苗诱导的免疫应答中的增加。
启动子: RNA聚合酶在其上结合以起始通过一种或多种附近结构基因的信使RNA转录的DNA链中的结合位点。
信号肽:决定蛋白质在细胞中的最终定位的短氨基酸序列,也被称为分选肽。
合适疫苗:用于根据本发明使用的任何疫苗,能够加强通过初始引发刺激的免疫应答,特征在于用于引发免疫应答的核酸构建体和用于加强免疫应答的后续疫苗的至少一个部分是等同的。引发物和加强物的所述至少一个等同部分可以是Ii或其变体、抗原肽或抗原肽的部分、或遍在的辅助T细胞表位。
表面活性剂:能够减少它溶解于其中的液体的表面张力的表面活性试剂。表面活性剂是包含其为亲水的极性基团和其为疏水的非极性基团,并且通常由脂肪链组成的化合物。
疫苗:能够在动物中诱导免疫应答的物质或组合物:在该正文中也被称为免疫原性组合物。免疫应答是在生物中诱导记忆的免疫应答(体液/抗体和/或细胞免疫应答),导致传染剂由二次而不是初次应答对抗,从而减少其对宿主生物的影响。本发明的疫苗可以作为预防和/或治疗药物给予。组合物可以包括下述中的一种或多种:一种或多种抗原、包括与Ii可操作地连接的一种或多种抗原的核酸构建体、载体、佐剂和药物载体。
变体:给定参考核酸或多肽的‘变体’指这样的核酸或多肽,其展示出与所述参考核酸或多肽的一定序列同源性/同一性程度,但不等同于所述参考核酸或多肽。
结构域、区域和基序在本文中可以互换使用。
发明详述
本发明涉及包括这样的序列的核酸构建体,所述序列编码与至少一种抗原蛋白质或肽编码序列可操作地连接的恒定链或其变体。核酸构建体用于引发免疫应答,以加强后续加强疫苗接种的效应。
免疫应答
疫苗可以在预防上使用:它们在实际感染发生前给予;或在治疗上使用:其中它们引发或加速对已在体内的病原体的免疫应答。2种疫苗接种方法要求实体免疫应答的建立。通过感染或疫苗接种激活的免疫应答依赖于几种细胞类型例如T、B和抗原呈递细胞,以及几种不同分子主要是抗原、MHC分子、T和B细胞受体及许多其他的相互作用。
抗原是在抗原呈递细胞的表面上由MHC分子呈递的肽片段。抗原可以是外源的,即致病性来源,或源于生物自身,所谓的自体或自身抗原。MHC分子是由特异性染色体区域编码的多态基因家族的代表,所述特异性染色体区域称为“主要组织相容性复合物”(“major
histocompatibility complex”),因此为MHC。存在2类MHC分子,MHC I类(MHC-I)和MHC II类(MHC-II)。
T辅助细胞通过由MHC II类(MHC-II)分子呈递的抗原刺激,所述MHC-II分子位于抗原呈递细胞的表面上。MHC-II分子在内质网中合成。在合成过程中,它们以阻止MHC-II分子负载有自体或自身抗原的方式与恒定链(Ii)组合。MHC-II分子通过恒定链中的信号序列转运至在特异性细胞区室中的细胞表面。随着区室通过加工其内含物而成熟,它从溶酶体发展到晚期内体(在与内吞囊泡融合后)到MHC
II类区室(MIIC)。内吞囊泡包含外源抗原,即蛋白酶解切割的细菌肽片段。这些片段通过其降解制备,以负载到MHC-II分子上。MHC-II分子通过恒定链在2部分过程中释放,这时恒定链首先通过蛋白酶解被降解,仅留下在MHC-II结合结构域中称为CLIP的肽,其次通过HLA-DM分子去除CLIP。MHC-II分子随后游离,以结合外源抗原,且在MIIC囊泡与质膜融合后,将其呈递在细胞表面上。这起始体液免疫应答,因为呈递的抗原刺激T辅助细胞的激活,这依次通过几种方式激活B细胞,这最终分化成抗体分泌细胞。
当T细胞毒性细胞的T细胞受体识别与在抗原呈递细胞上的MHC I类分子结合的抗原时,细胞免疫应答起始。MHC-I分子不与功能性类似与MHC-II结合的恒定链的分子结合。MHC-I加工成的抗原呈递分子另外不同于MHC-II分子的那种,因为MHC-I分子已在内质网中负载有抗原。由MHC-I分子呈递的抗原一般是通过蛋白质的蛋白酶体切割的肽片段,所述蛋白质已通过抗原呈递细胞自身合成。这些蛋白质可以是在细胞自身DNA中编码的异常蛋白质或衍生自病毒或其他病原体的蛋白质,所述病毒或其他病原体已感染细胞且寄生其蛋白质合成机制。MHC I类相关蛋白酶解***存在于基本上所有细胞中。
2类T细胞的功能是显著不同的,如由其名称所示的。细胞毒性T细胞通过细胞的直接裂解和通过分泌细胞因子例如γ-干扰素来消灭细胞内病原体和肿瘤。占优势的细胞毒性T细胞是CD8+ T细胞,这也是抗原特异性的。辅助T细胞也是裂解细胞,但其主要功能是分泌促进B细胞(抗体生产细胞)和其他T细胞的活性的细胞因子,并且因此它们广泛增强对于外源抗原的免疫应答,包括抗体介导的和细胞毒性T细胞介导的应答机制。CD4+ T细胞是免疫应答中的主要辅助T细胞表型。
核酸构建体
本发明的一个方面涉及包括这样的序列的核酸构建体例如裸露DNA构建体,所述序列编码与至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段简言之抗原可操作地连接的至少一种恒定链或其变体。
在一个实施方案中,本发明涉及包括这样的序列的核酸构建体,所述序列编码与至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段可操作地连接的至少一种恒定链或其变体,其中所述恒定链或其变体不包括KEY区域的LRMK氨基酸残基。
在另一个实施方案中,本发明涉及包括这样的序列的核酸构建体,所述序列编码与至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段可操作地连接的至少一种恒定链或其变体,其中所述恒定链或其变体包括CLIP区域的变体。
在另一个实施方案中,本发明涉及包括这样的序列的核酸构建体,所述序列编码与至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段可操作地连接的至少一种恒定链或其变体,其中所述恒定链或其变体不包括前17个氨基酸。
在另外一个实施方案中,本发明涉及包括这样的序列的核酸构建体,所述序列编码与至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段可操作地连接的至少一种恒定链或其变体,其中所述核酸构建体用于癌症疫苗的引发。
核酸构建体应理解为遗传改造的核酸。核酸构建体可以是非复制的且线性的核酸、环状表达载体或自主复制质粒。核酸构建体可以包括几种元件,例如但不限于基因或其片段、启动子、增强子、终止子、多聚腺苷酸尾、接头、多聚接头、操作接头、多克隆位点(MCS)、标记、终止密码子、内部核糖体进入位点(IRES)和用于整合的宿主同源序列或其他限定元件。应当理解根据本发明的核酸构建体可以包括上述元件的任何组合的所有或亚组。
用于改造核酸构建体的方法是本领域众所周知的(参见例如,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Sambrook等人,编辑,Cold Spring Harbor Laboratory,第2版,Cold Spring
Harbor,N.Y.,1989)。进一步地,根据本发明的核酸构建体可以无需模板而合成,并且可以得自各种商业供应者(例如Genscript
Corporation)。
在一个实施方案中,核酸构建体包括的核酸残基可以被修饰。所述修饰可以选自:乙酰化、甲基化、磷酸化、遍在蛋白化、核糖基化、硫化及其他。
在一个实施方案中,根据本发明的核酸构建体可以由DNA组成。在另一个实施方案中,核酸构建体可以由选自下述的核酸组成:脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、锁核酸(LNA)、肽核酸(PNA)、嵌入核酸(INA)、扭曲嵌入核酸(TINA)、己糖醇核酸(HNA)、阿糖核酸(ANA)、环己烷核酸(CNA)、环己烯基核酸(CeNA)、甘油核酸(GNA)、苏糖基核酸(TNA)、缺口-聚体、混合-聚体、吗啉代类物质或其组合。
如上所述,MHC II分子在加工过程中与恒定链结合,直至结合的恒定链降解,以允许外源抗原肽负载到MHC
II分子上。当应用包括恒定链–接头–表位的‘外部’蛋白质构建体时,其中恒定链包括KEY区域(包括LRMK氨基酸残基),所述蛋白质构建体在所述MHC
II分子定位于细胞的细胞外表面上时将与MHC II分子(包含抗原)相互作用。因此,效应是外部的,并且依赖于蛋白质构建体(包括LRMK氨基酸残基)的恒定链KEY-残基竞争负载到MHC II分子上的能力。换言之,在细胞内加工过程中已负载到MHCII分子上的抗原必须被“倒出”(“tipped
off”)或从细胞表面上的MHCII分子中去除,并且由包括恒定链–接头–表位的蛋白质构建体代替。这给出无法扩增的“1:1”-效应,并且它不变地依赖于来自恒定链的LRMK氨基酸残基的存在。
根据本发明的核酸构建体涉及应用编码恒定链或其变体且还编码抗原肽或表位的‘内部’核酸构建体,即核酸构建体转染到受试者中细胞的细胞内间隙内。所述核酸构建体将使用细胞翻译机制,以产生恒定链–接头–表位或恒定链–表位产物,在所述MHC分子定位在细胞内例如在胞内体或MIIC中时,这将与MHCII分子或MHCI分子(不包含抗原)相互作用。因此,效应是内部的,并且不依赖于蛋白质构建体(包括LRMK氨基酸残基)的恒定链KEY-结构域竞争负载到MHC分子上的能力。事实上,该效应不依赖于Ii-KEY区域及其LRMK残基的存在。此外,这给出可以扩增的效应,因为一个核酸构建体可以产生超过一种产物。
核酸构建体的‘内部’使用具有优于蛋白质构建体的‘外部’使用的几个优点,如上详述:1)扩增;小量核酸构建体的引入产生可以都与MHC分子结合的许多产物,这还可以是二次扩增的,因为与MHC结合的所述产物可以通过内在化进一步再循环,以最终增加其展示,2)细胞自身抗原加工***的使用确保表位与MHC分子的正确和紧密结合,3)不需要Ii-KEY区域的LRMK残基和天然Ii-CLIP结构域。
密码子最佳化和简并核酸序列
功能蛋白质在异源宿主中的表达是现代生物技术的基石。不幸的是,许多蛋白质难以在其原始背景外表达。它们可以包含表达限制性调节元件,来自使用非经典核苷酸编码的生物,或来自具有在所需宿主中很少使用的密码子的普遍基因(gene
rife)。基因合成速度和效率中的改善已致使可行的完整基因重新设计用于最大限度的蛋白质表达。例如,当在研究下的基因的密码子频率与宿主表达***的密码子频率匹配时,蛋白质表达可以显著改善。例如,重新设计策略可以不仅包括最佳密码子偏好的使用,还包括mRNA结构元件的改变以及翻译和起始区的修饰。用于密码子最佳化的技术是本领域技术人员已知的,并且可以通过商业供应者例如GenScript
Corporation执行。
应当理解根据本发明包括恒定链或其变体的核酸构建体可以以任何方式进行密码子最优化,以便通过翻译成蛋白质即氨基酸产生包括根据本发明的恒定链或其变体的氨基酸序列,所述恒定链对应于SEQ
ID NO:2(人Ii)中公开的氨基酸序列。
同样地,根据本发明包括恒定链的核酸构建体可以以任何方式进行密码子最优化,以便通过翻译成蛋白质即氨基酸产生包括根据本发明的恒定链或其变体的氨基酸序列,所述恒定链对应于其中核酸构建体可以用于引发免疫应答的任何动物的氨基酸序列;包括任何脊椎动物、哺乳动物、鱼或鸟。
密码子偏好:密码子偏好已鉴定为在原核生物基因表达中的单个最重要因子。给定密码子在遗传密码中出现的程度在生物之间、在以高和低水平表达的蛋白质之间和甚至在相同操纵子的不同部分之间显著不同。关于这点的原因几乎是必然的,因为优选密码子与细胞内可用的同族tRNA丰度相关。这个关系用于最优化翻译***且平衡密码子浓度与同工tRNA(isoacceptor tRNA)浓度。
替换很少使用的密码子:一般而言,基因包含的罕见密码子越多,异源蛋白质将在那种特定宿主***内以合理水平表达的可能性越小。如果罕见密码子成簇或在蛋白质的N末端部分中出现,那么这些水平变得甚至更低。用更紧密地反映宿主***的密码子偏好而不改变氨基酸序列的其他密码子替换罕见密码子可以增加功能蛋白质表达水平。
消除问题密码子:生物使用小于5%- 10%时机的任何密码子都可能引起问题,不管它来自何处。再次,紧密或相邻密码子对蛋白质表达比它们分开可以具有更大的影响。消除罕见密码子和可以作为终止信号阅读的密码子可以阻止低表达或不存在表达的情况。
在哺乳动物宿主中表达病毒蛋白质:如果基因正确制备,甚至病毒基因也可以在哺乳动物细胞系中成功表达。病毒基因的密集信息负荷频繁导致重叠的读码框。许多病毒基因还在编码序列内编码顺式作用的负调节序列。病毒基因可以重新合成,不仅只表达所需蛋白质,还破坏调节元件,从而增强蛋白质产生。病毒密码子最优化在DNA疫苗研究中是特别有用的,因为它增加靶的免疫原性。
其他限制:尽管密码子偏好在基因表达中发挥很大作用,但表达载体和转录启动子的选择也是重要的。在蛋白质N末端区域周围的核苷酸序列对于罕见密码子的存在和紧邻起始AUG的密码子的特性是特别敏感的。在翻译和mRNA稳定性之间还存在一定相互影响。
遗传密码的简并性
根据上文可见遗传密码具有冗余性但不具有多义性(ambiguity)。例如,尽管密码子GAA和GAG都指定谷氨酸(冗余性),但其中无一指定任何其他氨基酸(无多义性)(关于完全关联参见下文密码子表)。编码一种氨基酸的密码子可以在其3个位置中的任何中不同。遗传密码的简并性是解释沉默突变的存在的原因。因为4种碱基的三联体密码指定20种氨基酸和终止密码子,所以产生简并性。
该表显示20种氨基酸、起始(start)和终止(stop)密码子和64种可能密码子。mRNA的方向是5'到3'。
同义置换
沉默突变或置换是不导致对蛋白质的氨基酸序列的改变的DNA突变。它们可以在非编码区中出现(在基因外或在内含子内),或它们可以以不改变最终氨基酸序列的方式在外显子内出现。短语沉默突变或置换通常可与短语同义突变或置换互换使用;然而,同义突变或置换是前者的子范畴,仅在外显子内出现。
应当理解根据本发明包括恒定链或其变体的核酸构建体可以包括同义置换,以便通过翻译成蛋白质即氨基酸产生包括根据本发明的恒定链或其变体的氨基酸序列,所述恒定链对应于SEQ
ID NO:2(人Ii)中公开的氨基酸序列。
同样地,根据本发明包括恒定链的核酸构建体可以包括同义置换,以便通过翻译成蛋白质即氨基酸产生包括根据本发明的恒定链或其变体的氨基酸序列,所述恒定链对应于其中核酸构建体可以用于引发免疫应答的任何动物的氨基酸序列;包括任何脊椎动物、哺乳动物、鱼或鸟。
非同义置换成同义氨基酸
非同义置换引起氨基酸中的改变。然而,氨基酸根据所述氨基酸的性质分组,并且一个氨基酸由另一个氨基酸的置换可以对包括所述氨基酸的蛋白质的功能或性质没有影响(如果置换导致同义氨基酸)。此类置换可以指示保守置换或突变:DNA或RNA序列中的改变导致一个氨基酸由生物化学相似的氨基酸替换。
因此,应当理解根据本发明包括恒定链或其变体的核酸构建体可以包括非同义置换,以便通过翻译成蛋白质即氨基酸产生包括恒定链变体的氨基酸序列,其中所述非同义置换导致其为同义的一个或多个氨基酸的置换。
同义置换可以包括疏水性氨基酸由另一个疏水性氨基酸的置换;亲水性氨基酸由另一个亲水性氨基酸的置换;极性氨基酸由另一个极性氨基酸的置换;非极性氨基酸由另一个非极性氨基酸的置换;带正电的氨基酸由另一个带正电的氨基酸的置换;带负电的氨基酸由另一个带负电的氨基酸的置换;中性氨基酸由另一个中性氨基酸的置换;多重性(ambiguous)氨基酸由其配对多重性荷电氨基酸的置换,例如异亮氨酸和亮氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸以及谷氨酰胺和谷氨酸;芳香族氨基酸由另一个芳香族氨基酸的置换;脂肪族氨基酸由另一个脂肪族氨基酸的置换;或任何氨基酸由丙氨酸的置换。这些置换可以指示等值置换。
剪接变体
可变剪接是RNA剪接变异机制,其中初级基因转录物(前mRNA)的外显子分离且重新连接,以便产生可变核糖核苷酸排列。这些线性组合随后经历翻译过程,其中指定氨基酸的特定和独特序列,导致同种型蛋白质或剪接变体。以这种方式,可变剪接使用遗传表达以促进更多样的蛋白质的合成。在真核生物中,可变剪接是朝向更高效率的重要步骤,因为信息可以经济得多地被贮存。几种蛋白质可以在其长度在原核生物编码方式中只够2种蛋白质的DNA序列中编码。
在一个实施方案中,本发明的核酸构建体可以这样设计,以便产生多重抗原肽或抗原肽的片段和/或多重恒定链或其变体。
在一个实施方案中,根据本发明的核酸构建体包括抗原肽或所述抗原肽的片段的至少1、例如2、例如3、例如4、例如5、例如6、例如7、例如8、例如9、例如10、例如11、例如12、例如13、例如14、例如15、例如16、例如17、例如18、例如19、例如20种剪接变体。
超过一种抗原肽剪接变体可以包含等同或不等同的抗原肽。
在另一个实施方案中,根据本发明的核酸构建体包括恒定链或其变体的至少1、例如2、例如3、例如4、例如5、例如6、例如7、例如8、例如9、例如10、例如11、例如12、例如13、例如14、例如15、例如16、例如17、例如18、例如19、例如20种剪接变体。
超过一种恒定链剪接变体可以包含等同或不等同恒定链或其变体。
在一个实施方案中,恒定链的至少一种剪接变体包括天然全长恒定链。在另一个实施方案中,恒定链的至少一种剪接变体包括恒定链的变体。在另外一个实施方案中,恒定链的至少一种剪接变体包括恒定链的变体,其中所述Ii不包括Ii-KEY区域的LRMK氨基酸残基。在另一个实施方案中,恒定链的至少一种剪接变体包括恒定链的变体,其中所述Ii不包括CLIP结构域的M91和M99残基。
由此可见剪接变体可以包括等同或不等同抗原肽和/或等同或不等同恒定链或其变体的任何组合。
以这种方式,可能的是“改组”(“shuffle”)包括恒定链的不同结构域或区域的序列(外显子),以便通过可变剪接获得恒定链的变体。以这种方式,还可能的是“改组”包括一种或多种抗原肽的不同结构域或区域的序列(外显子),以便通过可变剪接获得一种或多种所述抗原肽的变体。
恒定链
恒定链(Ii)或MHC
II类结合的恒定链或CD74或p31是非多态II型嵌膜蛋白质,关于人和小鼠Ii的氨基酸序列分别参见SEQ ID NOs:2和4,并且同样地关于人和小鼠Ii的核酸序列分别参见SEQ ID NOs:1和3。恒定链在淋巴细胞成熟和适应性免疫应答中具有多重功能,特别地靶向溶酶体区室是Ii
CLIP序列可以占据MHC II类分子,直至这些与胞内体区室融合(Pieters
J. 1997,Curr. Opin. Immunol.,9:8996)。此外,Ii已显示发挥MHC I类伴侣蛋白的功能(Morris等人,2004,Immunol. Res.
30:171-179),并且通过其胞内体靶向序列,促进针对共价连接抗原的CD4+而不是CD8+ T细胞的增殖(Diebold等人,2001,Gene Ther.
8:487-493)。
恒定链蛋白质包括几个结构域:包括信号或分选肽(也称为溶酶体靶向序列)的细胞溶质结构域、跨膜结构域、和其自身包括CLIP区域、KEY区域(包括LRMK残基)的腔结构域、核心结构域和三聚结构域。这些结构域的两侧为高度弹性区域(Strumptner-Cuvelette
& Benaroch,2002,Biochem.
Biophys. Acta.,1542:1-13)。恒定链已在几种生物中得到表征,包括脊椎动物(例如鸡)、哺乳动物(例如牛、犬、小鼠和大鼠)和人。
本发明涉及包括这样的序列的核酸构建体,其中至少一种恒定链或其变体是生物特异性的,或可以与特定生物有关。优选地,至少一种恒定链具有脊椎动物起源,更优选哺乳动物起源且最优选人起源。与之相关,由SEQ
ID NO:1限定的序列是来自人的恒定链的核酸序列。在另一个优选实施方案中,至少一种恒定链具有禽起源,最优选来自家鸡(Gallus
gallus domesticus)(鸡)。在另外一个优选实施方案中,至少一种恒定链衍生自鱼,最优选可以在养鱼场中培育的鱼(例如***哈鱼或鲑鱼)。在另外一个优选实施方案中,至少一种恒定链衍生自雪貂。
采用的恒定链优选是待接受核酸构建体的生物的恒定链。本发明的一个目的是恒定链和宿主生物或处理接受者具有相同物种。
在本发明的一个实施方案中,包括至少一种恒定链或其变体的核酸构建体具有下述前提:当核酸构建体包括至少一种恒定链的变体时,所述恒定链不包括Ii-KEY序列的LRMK氨基酸残基。
在本发明的另一个实施方案中,包括至少一种恒定链或其变体的核酸构建体具有下述前提:当核酸构建体包括至少一种恒定链的变体时,所述恒定链包括Ii-CLIP结构域的变体。在一个实施方案中,所述变体是在位置91和99上的甲硫氨酸由另一个氨基酸的置换。在另一个实施方案中,所述变体是M91A M99A双点突变(在位置91和99上的氨基酸甲硫氨酸至丙氨酸的置换)。
在另一个实施方案中,Ii变体是Ii的前17个氨基酸的缺失(Δ17Ii)。
在第三个实施方案中,Ii变体包括在位置91和99上的甲硫氨酸的置换,和Ii的前17个氨基酸的缺失。
本发明人已惊讶地发现Ii-KEY结构域的LRMK残基不是根据本发明用于引发免疫应答所需的。
此外,本发明人已惊讶地发现在Ii的位置91和99上的甲硫氨酸置换增加MHCII呈递。
此外,本发明人已发现缺失Ii的前17个氨基酸令人惊讶地增加记忆应答。
本发明人已进一步发现包括残基编号50 – 118的恒定链的中心部分是获得Ii的完全效应所需的。这种Ii变体缺乏三聚结构域。因此,在一个实施方案中,核酸构建体包括至少一种恒定链或其变体,其中所述恒定链包括与来自另一种蛋白质的三聚结构域偶联的氨基酸残基编号50 – 118。所述其他蛋白质可以是例如细菌蛋白质或腺病毒纤维蛋白质。
本发明还涉及核酸构建体,其中编码的至少一种恒定链是具有至少40个氨基酸的SEQ
ID NO:2中鉴定的序列片段且与SEQ ID
NO:2的相同片段具有至少85%同一性。
片段是来自如SEQ ID NO:2中所示恒定链的任何部分的至少40个氨基酸的片段。这包括包含下述残基的片段:残基1 -
40、10 - 50、20 -
60、25 - 65、30 -
70、35 - 75、40 -
80、45 - 85、50 -
90、55 - 95、60 -
100、65 - 105、70 -
110、75 - 115、80 -
120、85 - 125、90 -
130、95 - 135、100 -
140、105 - 145、110 -
150、115 - 155、120 -
160、125 - 165、130 -
170、135 - 175、140 -
180、145 - 185、150 -
190、155 - 195、160 -
200,165 - 205、170 - 210和175 -
216。它还包括如上文列出中的任何扩大至其任一侧的高达5个残基的片段。它进一步包括至少50个残基、至少60个残基、至少70个残基、至少80个残基、至少90个残基、至少100个残基、至少110个残基、至少120个残基、至少130个残基、至少140个残基、至少150个残基、至少160个残基、至少170个残基、至少180个残基 至少190个残基、至少200个残基和至少210个残基的片段。
在本发明的范围内包括与SEQ ID NO:2具有至少85 %序列同一性、例如至少90 %序列同一性、例如至少91%序列同一性、例如至少92 %序列同一性、例如至少93 %序列同一性、例如至少94 %序列同一性、例如至少95 %序列同一性、例如至少96 %序列同一性、例如至少97%序列同一性、例如至少98 %序列同一性、例如99%序列同一性的上述片段中的任何。
氨基酸序列之间的同一性/同源性可以使用众所周知的评分矩阵进行计算,例如BLOSUM
30、BLOSUM 40、BLOSUM
45、BLOSUM 50、BLOSUM
55、BLOSUM 60、BLOSUM
62、BLOSUM 65、BLOSUM
70、BLOSUM 75、BLOSUM
80、BLOSUM 85和BLOSUM
90中的任何一个。
在一个实施方案中,本发明是核酸构建体,其中编码的至少一种恒定链是具有至少186个氨基酸的SEQ ID NO:2的片段。这包括如上定义并且因此与SEQ ID NO:2的恒定链序列共享同一性的片段中的任何。
本发明另外涉及核酸构建体,其中编码的至少一种恒定链与SEQ ID NO:2至少85%等同。
这包含与SEQ ID NO:2具有至少85 %序列同一性、例如至少90 %序列同一性、例如至少91%序列同一性、例如至少92 %序列同一性、例如至少93 %序列同一性、例如至少94 %序列同一性、例如至少95 %序列同一性、例如至少96 %序列同一性、例如至少97%序列同一性、例如至少98 %序列同一性、例如99%序列同源性的衍生自如SEQ ID NO:2中提及的恒定链的任何序列,其包括在本发明的范围内。这包括比SEQ
ID NO:2中所述的序列更长或更短的序列。
与起源、序列同一性或长度无关,上述序列中的任何来自在此命名的恒定链变体。
由此可见在本发明的范围内,来自任何生物的恒定链变体可以是根据上文的变体,即变体可以在Ii-KEY区域中是改变的和/或在Ii-CLIP区域中是改变的和/或是生物恒定链的片段和/或在恒定链的所有序列上或在其片段内与所述恒定链至少85%等同。恒定链还可以来自生物的相关物种或来自遥远相关的物种。
本发明的另一个方面涉及如由核酸构建体编码的至少一种恒定链的区域、肽或结构域的添加、去除或置换。这些区域、肽或结构域中的一个或多个的去除将截短所得到的恒定链。区域、肽或结构域的添加或替换包括从已知来源例如天然存在的蛋白质或多肽或从人工合成的多肽或编码其的核酸残基中选择这些序列的选项。区域、结构域或肽的添加包括添加每种类型或不同类型区域、结构域、肽中的1个、2个或更多个,和编码这些区域、结构域和肽的核酸中的1个、2个、3个或更多个的选项。这些基于序列可以是彼此等同或不同的。区域、肽和结构域无需与支架恒定链源于相同的生物。
区域、结构域或肽的去除包括去除每种类型或不同类型区域、结构域、肽中的1个、2个、3个或更多个和去除编码这些区域、结构域和肽的氨基酸残基中的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个的选项。执行编码所得到的多肽的个别核苷酸以及核苷酸段的添加、缺失和置换是本领域众所周知的。
当确定哪些置换、缺失、重排或其他改变对于构建体将是有利的时,比对来自不同生物的同源基因或蛋白质的核酸且特别是蛋白质序列可以具有极大帮助。如下举例说明的比对人和鼠类恒定链序列给出哪些氨基酸残基对于在这些生物中恒定链的结构和功能可以具有重要性的指示 – 这些是在2个序列之间是保守的残基。同样地,推测的较不重要的残基是在其中序列不同的那些。就本发明而言有利的是执行变体残基/区域的置换和/或缺失。当尝试突变或缺失或以其他方式改变例如人恒定链的序列以便改善其免疫应答刺激能力时,检查保守残基且制备例如同源置换(即其中氨基酸被视为具有例如相同结构质量、极性、疏水性或其他的置换)也可以是相关的。
在衍生自人和小鼠的恒定链蛋白质如下比对中,KEY区域的LRMK氨基酸残基是具有下划线的。
KEY
区域
本发明的一个优选实施方案涉及至少一种恒定链的KEY区域的去除、置换或替换。如上所述,KEY区域的添加或替换包括用来自相同或其他生物的恒定链的KEY区域或来自相同或其他生物的KEY区域的变体来添加或替换在选择的一种或多种恒定链的变体中的现有KEY区域的选项。如由上文可见的,变体KEY区域可以是特异性生成的KEY区域的突变体形式,通过单个或多个核酸置换、缺失或添加生成。一个优选实施方案包括单独的KEY区域的N末端或C末端相邻序列,但不含KEY区域自身。相邻意指在KEY区域的10个残基内、在KEY区域的20个残基内、在30个残基内、在40个残基内、在50个残基内、在75个残基内或在100个残基内的任何氨基酸。
一个最优选的实施方案包括KEY区域的一个或多个置换或缺失,导致在KEY区域中包括的LRMK氨基酸中的1个、2个、3个或4个氨基酸残基的置换或缺失。在一个实施方案中,缺失在KEY区域中包括的LRMK氨基酸中的至少1个、例如2个、例如3个、例如4个。在另一个实施方案中,在KEY区域中包括的LRMK氨基酸中的至少1个、例如2个、例如3个、例如4个由其他氨基酸置换。所述氨基酸可以是选自下述的任何氨基酸:G(甘氨酸)、P(脯氨酸)、A(丙氨酸)、V(缬氨酸)、L(亮氨酸)、I(异亮氨酸)、M(甲硫氨酸)、C(半胱氨酸)、F(苯丙氨酸)、Y(酪氨酸)、W(色氨酸)、H(组氨酸)、K(赖氨酸)、R(精氨酸)、Q(谷氨酰胺)、N(天冬酰胺)、E(谷氨酸)、D(天冬氨酸)、S(丝氨酸)和T(苏氨酸)。
在一个特定实施方案中,LRMK氨基酸残基各自由丙氨酸(A)氨基酸残基置换,从而序列阅读为:AAAA。在另一个实施方案中,LRMK氨基酸残基由包括同义或等值置换的氨基酸置换。例如,氨基酸残基L可以由I、V、M或F置换;R可以由K、H、E或D置换;M可以由L、I、F或V置换;并且K可以由H或R置换。
在本发明的一个实施方案中,KEY区域可以包括大于LRMK残基,或LRMK残基可以由大于4个氨基酸残基的序列替换。
本发明的一个实施方案涉及如上所述不含KEY区域的恒定链的片段。这些片段可以是至少5个氨基酸残基长,长度至少10个残基、至少15个残基、至少20个残基、至少25个残基、至少30个残基或至少35个残基。另一个实施方案涉及恒定链的片段,其中信号肽被去除,并且恒定链片段是至少10个氨基酸残基长,长度至少15个残基、至少20个残基、至少25个残基、至少30个残基、至少35个残基、至少50个残基、至少60个残基、至少70个残基、至少80个残基、至少90个残基、至少100个残基、至少110个残基、至少120个残基、至少130个残基、至少140个残基、至少150个残基、至少160个残基、至少170个残基或至少180个残基。
在本发明的一个实施方案中,由如本文描述的核酸构建体编码的至少一种恒定链不包括Ii-KEY区域的LRMK氨基酸残基。
在一个实施方案中,本发明因此涉及包括与至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段连接的至少一种恒定链或其变体的核酸构建体,其中所述恒定链或其变体不包括Ii-KEY区域的LRMK氨基酸残基。
CLIP
区域
本发明的另一个实施方案涉及至少一种恒定链的CLIP区域的去除、添加或替换。如上所述,CLIP区域的添加或替换包括用来自相同或其他生物的恒定链的CLIP区域或来自相同或其他生物的CLIP区域的变体来添加或替换在选择的一种或多种恒定链的变体中的现有CLIP区域的选项。如由上文可见的,变体CLIP区域可以是特异性生成的CLIP区域的突变体形式,通过单个或多个核酸置换、缺失或添加生成。一个优选实施方案包括单独的CLIP区域,或连同N末端相邻序列或C末端相邻序列的CLIP区域,不含恒定链的任何其他区域或结构域。其他优选实施方案包括单独的CLIP区域的N末端或C末端相邻序列,但不含CLIP区域自身。相邻意指在CLIP区域的10个残基内、在CLIP区域的20个残基内、在30个残基内、在40个残基内、在50个残基内、在75个残基内或在100个残基内的任何氨基酸,。
一个优选实施方案包括CLIP区域的一个或多个置换或缺失,导致在CLIP区域的1个、2个、3个、4个或更多个氨基酸残基的置换或缺失。在一个实施方案中,缺失在CLIP区域中包括的氨基酸中的至少1个、例如2个、例如3个、例如4个或更多个。在另一个实施方案中,在CLIP区域中包括的氨基酸中的至少1个、例如2个、例如3个、例如4个或更多个由其他氨基酸置换。所述氨基酸可以是选自下述的任何氨基酸:G(甘氨酸)、P(脯氨酸)、A(丙氨酸)、V(缬氨酸)、L(亮氨酸)、I(异亮氨酸)、M(甲硫氨酸)、C(半胱氨酸)、F(苯丙氨酸)、Y(酪氨酸)、W(色氨酸)、H(组氨酸)、K(赖氨酸)、R(精氨酸)、Q(谷氨酰胺)、N(天冬酰胺)、E(谷氨酸)、D(天冬氨酸)、S(丝氨酸)和T(苏氨酸)。
本发明的一个实施方案涉及如上所述不含CLIP区域的恒定链的片段。这些片段可以是至少5个氨基酸残基长,长度至少10个残基、至少15个残基、至少20个残基、至少25个残基、至少30个残基或至少35个残基。另一个实施方案涉及恒定链的片段,其中信号肽被去除,并且恒定链片段是至少10个氨基酸残基长,长度至少15个残基、至少20个残基、至少25个残基、至少30个残基、至少35个残基、至少50个残基、至少60个残基、至少70个残基、至少80个残基、至少90个残基、至少100个残基、至少110个残基、至少120个残基、至少130个残基、至少140个残基、至少150个残基、至少160个残基、至少170个残基或至少180个残基。
在一个特定实施方案中,在位置91和99上的M氨基酸残基各自由丙氨酸(A)氨基酸残基置换,从而序列阅读为:M91A M99A。在另一个实施方案中,在位置91和99上的M氨基酸残基由包括同义或等值置换的氨基酸置换。
在本发明的一个实施方案中,由如本文描述的核酸构建体编码的至少一种恒定链不包括在Ii-CLIP序列的位置91和99上的M氨基酸残基。
在一个实施方案中,本发明因此涉及包括与至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段连接的至少一种恒定链或其变体的核酸构建体,其中所述恒定链或其变体不包括在Ii-CLIP区域的位置91和99上的M氨基酸残基。
N
或
C
末端改变
:
本发明的一个实施方案涉及至少一种恒定链的N或C末端区域的去除(缺失)、置换或替换。如上所述,N或C末端区域的添加或替换包括用来自相同或其他生物的恒定链或其他蛋白质的N或C末端区域或来自相同或其他生物的N或C末端区域的变体来添加或替换在选择的一种或多种恒定链的变体中的现有N或C末端区域的选项。如由上文可见的,变体N或C末端区域可以是特异性生成的N或C末端区域的突变体形式,其通过单个或多个核酸置换、缺失或添加生成。
一个实施方案包括Ii的前(N末端)或末(C末端)氨基酸的缺失,例如Ii的前或末1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、125、130、135、140、145或150个氨基酸。
在本发明的一个特定实施方案中,Ii变体包括Ii的前17个氨基酸的缺失(Δ17Ii)。
本发明的一个实施方案涉及不含完整N或C末端区域的如上所述恒定链的片段。这些片段可以是至少5个氨基酸残基长,长度至少10个残基、至少15个残基、至少20个残基、至少25个残基、至少30个残基或至少35个残基。另一个实施方案涉及恒定链的片段,其中信号肽被去除,并且恒定链片段是至少10个氨基酸残基长,长度至少15个残基、至少20个残基、至少25个残基、至少30个残基、至少35个残基、至少50个残基、至少60个残基、至少70个残基、至少80个残基、至少90个残基、至少100个残基、至少110个残基、至少120个残基、至少130个残基、至少140个残基、至少150个残基、至少160个残基、至少170个残基或至少180个残基。
在本发明的一个实施方案中,Ii的跨膜区段的所有或部分可以由来自任何其他蛋白质例如趋化因子受体CCR6
TM6的相应区段替换。
在本发明的另一个实施方案中,Ii的跨膜区段的所有或部分可以由来自趋化因子受体CCR6
TM6的相应区段替换。
信号肽
本发明的另一个实施方案涉及至少一种恒定链,其中信号肽被去除、替换或添加到编码恒定链的序列上。信号肽是决定蛋白质在细胞中的最终定位的短氨基酸序列,也被称为分选肽。决定蛋白质至亚细胞区室例如内质网、高尔基体和各种区室包括高尔基体、核、质膜、线粒体及其中的各种空间和膜、过氧化物酶体、溶酶体、胞内体和分泌囊泡的信号肽都包括在本发明的范围内。一个优选实施方案包括单独的恒定链的溶酶体靶向序列。
抗原
恒定链的上述变体中的任何以这样的形式包含在本发明中,其中所述变体中的至少一种与至少一种抗原例如抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段可操作地连接。
本发明的一个目的是包括但不限于源于致病性生物的抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的片段、癌症特异性多肽和抗原、和与异常生理学应答相关的蛋白质或肽。
更优选地,本发明的一个目的是包括源于下述类型病原体中的任何的抗原:病毒、微生物和寄生虫。这包括任何动物已知的病原体。优选具有来自哺乳动物病原体的抗原,例如特异性靶向哺乳动物例如雪貂的病原体。优选具有来自人病原体的抗原。一般而言,可以使用发现与人病原体或疾病相关的任何抗原。
在另一个实施方案中,优选具有来自禽病原体的抗原,例如特异性靶向鸟或家禽的病原体。更优选具有来自鸡(家鸡)的抗原。一般而言,可以使用发现与禽病原体相关的任何抗原。
在另外一个实施方案中,优选具有来自鱼类病原体即特异性靶向鱼的病原体的抗原。更优选具有来自可以在养鱼场中培育的鱼的抗原。一般而言,可以使用发现与鱼类病原体相关的任何抗原。
病毒抗原
在一个优选实施方案中,至少一种抗原可以源于但不限于下述病毒科中的任何:腺病毒、沙粒病毒科、星状病毒科、布尼亚病毒科、嵌杯病毒科、冠状病毒科、黄病毒科、疱疹病毒科、正粘病毒科、副粘病毒科、细小RNA病毒科、痘病毒科、呼肠病毒科、逆转录病毒科、弹状病毒科和披膜病毒科。
更具体而言,至少一种抗原或抗原序列可以衍生自下述病毒中的任何:甲型流感例如H1N1、H1N2、H3N2和H5N1(禽流感),乙型流感,丙型流感病毒,甲型肝炎病毒,乙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒,丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒,轮状病毒属,诺瓦克病毒属中的任何病毒,肠腺病毒,细小病毒属,登革热病毒,猴痘,单股负链病毒目,狂犬病病毒属例如狂犬病病毒,拉戈斯蝙蝠病毒,莫科拉病毒,杜温哈格病毒,欧洲蝙蝠病毒1和2以及澳大利亚蝙蝠病毒,短暂热病毒属,水泡病毒属,水疱性口炎病毒(VSV),疱疹病毒例如单纯疱疹病毒1和2型,水泡带状疱疹,巨细胞病毒,EB病毒(EBV),人疱疹病毒(HHV),人疱疹病毒6和8型,人免疫缺陷病毒(HIV),***状瘤病毒,鼠类γ疱疹病毒,沙粒病毒例如阿根廷出血热病毒、玻利维亚出血热病毒、Sabia伴随出血热病毒、委内瑞拉出血热病毒、拉沙热病毒,Machupo病毒,淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV),布尼亚病毒科例如克里米亚-刚果出血热病毒,汉他病毒,引起伴肾病综合征的出血热病毒,裂谷热病毒,丝状病毒科(丝状病毒)包括埃博拉出血热和马尔堡出血热,黄病毒科包括科萨努尔森林病病毒,鄂木斯克出血热病毒,引起蜱传脑炎的病毒和副粘病毒例如亨德拉病毒和尼帕病毒,重型天花和轻型天花(天花),甲病毒例如委内瑞拉马脑炎病毒,东方马脑炎病毒,西方马脑炎病毒,SARS-相关冠状病毒(SARS-CoV),西尼罗河病毒,引起任何脑炎的病毒。
在本发明的一个优选实施方案中,至少一种抗原蛋白质或肽来自选自下述的病毒:HIV、丙型肝炎病毒、流感病毒、疱疹病毒、拉沙、埃博拉、天花、禽流感、丝状病毒、马尔堡和***状瘤病毒。
在本发明的一个更优选实施方案中,至少一种抗原蛋白质或肽选自下述和/或可以是下述中的任何的至少一个抗原片段:水疱性口炎病毒糖蛋白(VSV-GP);甲型流感NS-1(非结构蛋白质1)、M1(基质蛋白质1)、NP(核蛋白)、NEP、M2、M2e、HA、NA、PA、PB1、PB2、PB1-F2;LCMV NP、LCMV GP;埃博拉GP、埃博拉NP;HIV抗原tat、vif、rev、vpr、gag、pol、nef、env、vpu;SIV抗原tat、vif、rev、vpr、gag、pol、nef、env;鼠类γ疱疹病毒M2、M3和ORF73(例如MHV-68 M2、M3和ORF73);鸡卵白蛋白(OVA);或辅助T细胞表位。将本文提及抗原中的任何的2种或更多种组合是在本发明的范围内的。
微生物抗原
本发明的一个实施方案包括来自微生物的至少一种抗原蛋白质或肽或抗原蛋白质或肽的片段。更具体而言,至少一种抗原可以衍生自来自非详尽列表的下述中的一种:炭疽(炭疽芽孢杆菌(Bacillus
anthracis)),结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis),沙门氏菌属(Salmonella)(鸡沙门氏菌(Salmonella
gallinarum)、鸡白痢沙门氏菌(S. pullorum)、伤寒沙门氏菌(S. typhi)、肠炎沙门氏菌(S. enteridtidis)、副伤寒沙门氏菌(S. paratyphi)、都柏林沙门氏菌(S.
dublin)、鼠伤寒沙门氏菌(S. typhimurium)),肉毒梭菌(Clostridium botulinum),产气荚膜梭菌(Clostridium
perfringens),白喉杆菌(Corynebacterium diphtheriae),百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis),弯曲杆菌属(Campylobacter)例如空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni),新型隐球菌(Crytococcus
neoformans),鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis),小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica),假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis),单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes),钩端螺旋体属(Leptospira)物种,嗜肺军团菌(Legionella pneumophila),伯氏疏螺旋体(Borrelia
burgdorferi),链球菌属(Streptococcus)物种例如肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae),脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitides),流感嗜血杆菌(Haemophilus
influenzae),弧菌属(Vibrio)物种例如霍乱弧菌(Vibrio
cholerae)O1、霍乱弧菌非O1、副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)、副溶血弧菌、溶藻弧菌(V.
alginolyticus)、弗尼斯弧菌(V. furnissii)、鲨鱼弧菌(V. carchariae)、霍氏弧菌(V.
hollisae)、辛辛那提弧菌(V. cincinnatiensis)、梅氏弧菌(V. metschnikovii)、海鱼弧菌(V.
damsela)、拟态弧菌(V. mimicus)、河流弧菌(V.
fluvialis)、创伤弧菌(V. vulnificus),蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),嗜水气单胞菌(Aeromonas
hydrophila)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)和维氏气单胞菌(Aeromonas
veronii),类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides),志贺氏菌属(Shigella)物种例如宋氏志贺氏菌(Shigella sonnei)、鲍氏志贺氏菌(S. boydii)、弗氏志贺氏菌(S. flexneri)和痢疾志贺氏菌(S. dysenteriae),致泻大肠埃希氏菌(Enterovirulent
Escherichia coli)EEC(产肠毒素大肠埃希氏菌(Escherichia coli - enterotoxigenic)(ETEC)、肠致病性大肠埃希氏菌(Escherichia coli
- enteropathogenic)(EPEC)、肠出血性大肠埃希氏菌O157∶H7(Escherichia coli O157:H7 enterohemorrhagic)(EHEC)、肠侵袭性大肠埃希氏菌(Escherichia coli
- enteroinvasive)(EIEC)),葡萄球菌属(Staphylococcus)物种例如金黄色葡萄球菌(S.
aureus)且特别是万古霉素中间产物/抗性物种(VISA/VRSA)或多药抗性物种(MRSA),志贺氏菌属物种例如弗氏志贺氏菌、宋氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌,微小隐孢子虫(Cryptosporidium
parvum),布鲁氏菌属(Brucella)物种例如流产布鲁氏菌(B.
abortus)、马尔他布鲁氏菌(B. melitensis)、绵羊布鲁氏菌(B.ovis)、猪布鲁氏菌(B. suis)和犬布鲁氏菌(B. canis),鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia
mallei)和类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei),鹦鹉衣原体(Chlamydia psittaci),贝氏柯克斯体(Coxiella
burnetii),土拉热弗朗西丝菌(Francisella tularensis),普氏立克次体(Rickettsia prowazekii),夹膜组织胞浆菌(Histoplasma
capsulatum),粗球孢子菌(Coccidioides immitis)。
在本发明的一个优选实施方案中,至少一种抗原蛋白质或肽来自选自下述的微生物:结核分枝杆菌、炭疽芽孢杆菌、葡萄球菌属物种和弧菌属物种。
寄生虫抗原
本发明的一个实施方案涉及核酸构建体,其中编码的至少一种抗原蛋白质或肽来自寄生虫。
本发明的另一个实施方案涉及核酸构建体,其包括来自上述病原体中的任何的至少2种抗原蛋白质或肽的组合。
优选地,抗原衍生自但不限于选自下述的寄生虫:疟原虫属(Plasmodium)物种例如三日疟原虫(Plasmodium
malariae)、卵形疟原虫(Plasmodium ovale)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、恶性疟原虫(Plasmodium
falciparum),微小内蜒阿米巴(Endolimax nana),蓝氏贾第虫(Giardia lamblia),溶组织内阿米巴(Entamoeba
histolytica),微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum),人芽囊原虫(Blastocystis hominis),***毛滴虫(Trichomonas
vaginalis),刚地弓形虫(Toxoplasma gondii),圆孢子球虫(Cyclospora cayetanensis),鼠隐孢子虫(Cryptosporidium
muris),卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii),杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、热带利什曼原虫(Leishmania
tropica)、巴西利什曼原虫(Leishmania braziliensis)、墨西哥利什曼原虫(Leishmania mexicana),棘阿米巴属(Acanthamoeba)物种例如卡氏棘阿米巴(Acanthamoeba castellanii)和卡伯特森氏棘阿米巴(A. culbertsoni),福氏耐格里原虫(Naegleria
fowleri),克鲁斯氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、布氏罗得西亚锥虫(Trypanosoma brucei rhodesiense)、布氏冈比亚锥虫(Trypanosoma brucei gambiense),贝氏等孢子球虫(Isospora belli),结肠小袋纤毛虫(Balantidium
coli),蛔虫(Roundworm)(似蚓蛔线虫(Ascaris
lumbricoides)),钩虫(Hookworm)(美洲钩虫(Necator
Americanus)、十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenal)),蛲虫(Pinworm)(蠕形住肠线虫(Enterobius vermicularis)),蛔虫(犬弓蛔虫(Toxocara canis)、猫弓蛔虫(Toxocara
cati)),犬心丝虫(Heart worm)(犬恶丝虫(Dirofilaria
immitis)),类圆线虫属(Strongyloides)(粪类圆线虫(Stronglyoides stercoralis)),毛线虫属(Trichinella)(旋毛线虫(Trichinella spiralis)),丝虫属(Filaria)(班氏吴策线虫(Wuchereria bancrofti)、马来丝虫(Brugia
malayi)、旋盘尾丝虫(Onchocerca volvulus)、罗阿丝虫(Loa loa)、链尾曼森线虫(Mansonella
streptocerca)、常现曼森线虫(Mansonella perstans)、奥氏曼森线虫(Mansonella ozzardi))和异尖线虫(Anisakine)幼虫(简单异尖线虫(Anisakis simplex)(鲱鱼蠕虫)),拟地新线虫属(Pseudoterranova)(海豹线虫(Phocanema)、钻线虫(Terranova))形态种(鳕鱼或海豹蠕虫),对盲囊线虫属(Contracaecum)物种和宫脂线虫(Hysterothylacium)(鲔蛔线虫属(Thynnascaris)物种),鞭形鞭虫(Trichuris trichiura),牛肉绦虫(Beef
tapeworm)(牛肉绦虫(Taenia saginata)),猪肉绦虫(Pork tapeworm)(猪带绦虫(Taenia
solium)),鱼绦虫(Fish tapeworm)(阔节裂头绦虫(Diphyllobothrium latum))和犬绦虫(Dog
tapeworm)(犬复孔绦虫(Dipylidium caninum)),肠吸虫(Intestinal fluke)(布氏姜片吸虫(Fasciolopsis
buski)),血吸虫(Blood fluke)(日本血吸虫(Schistosoma japonicum)、曼氏血吸虫(Schistosoma
mansoni)、埃及血吸虫(Schistosoma haematobium)),肝吸虫(Liver fluke)(华支睾吸虫(Clonorchis
sinensis)),东方肺吸虫(Oriental lung fluke)(卫氏并殖吸虫(Paragonimus westermani))和绵羊肝吸虫(Sheep
liver fluke)(肝片形吸虫(Fasciola hepatica)),鲑隐孔吸虫(Nanophyetus salmincola)和希氏侏形吸虫(N.
schikhobalowi)。
在本发明的一个优选实施方案中,至少一种抗原蛋白质或肽来自选自下述的寄生虫:疟原虫属物种、利什曼原虫属物种和锥虫属物种。
本发明的至少一种抗原可以是来自恶性疟原虫的Var2Csa。在本发明的一个优选实施方案中,至少一种抗原蛋白质或肽或抗原蛋白质或肽的片段是Var2Csa。
家畜抗原
本发明的一个方面涉及衍生自感染家畜的疾病或因子的抗原和/或抗原序列,特别是商业上相关的动物例如猪、牛、马、绵羊、山羊、美洲驼、兔、貂、小鼠、大鼠、犬、猫、雪貂,家禽例如鸡、火鸡、雉鸡及其他,鱼例如鲑鱼、***哈鱼、鳕鱼及其他养殖物种。至少一种抗原或抗原序列可以衍生自其的疾病或其因子(agent)的例子包括但不限于:多物种疾病例如:炭疽、Aujeszky氏病、蓝舌病,布鲁氏菌病例如:流产布鲁氏菌、马尔他布鲁氏菌或猪布鲁氏菌;克里米亚刚果出血热,棘球蚴病/包虫病,细小RNA病毒科的病毒,引起***的***病毒属特别是7个免疫上不同的血清型中的任何:A、O、C、SAT1、SAT2、SAT3、Asia1,或心水病,日本脑炎,钩端螺旋体病,新大陆螺旋蝇蛆病(嗜人锥蝇(Cochliomyia
hominivorax)),旧大陆螺旋蝇蛆病(蛆症金蝇(Chrysomya
bezziana)),副结核,Q型热,狂犬病,裂谷热,牛疫,旋毛虫病,土拉菌病,水疱性口腔炎或西尼罗河热;牛疾病例如:牛边虫病、牛巴贝虫病、牛生殖道弯曲杆菌病、牛海绵状脑病、牛结核病、牛病毒性腹泻、牛传染性胸膜肺炎、地方流行性牛白血病、出血性败血症、牛传染性鼻气管炎/传染性脓疱性外阴***炎、疙瘩皮肤病(Lumpky skin disease)、恶性卡他热、泰勒虫病、毛滴虫病或锥虫病(舌蝇传播的);绵羊和山羊疾病例如:山羊关节炎/脑炎、接触传染性无乳症、接触传染性山羊胸膜肺炎、地方流行性母羊流产(绵羊衣原体病)、梅迪-维斯纳病(Maedi-visna)、内罗毕绵羊病、绵羊***(羊布鲁氏菌)、小反刍动物瘟疫、沙门氏菌病(羊流产沙门氏菌(S.
abortusovis))、羊瘙痒症、绵羊痘和山羊痘;马疾病例如:非洲马瘟病、马接触传染性子宫炎、马交媾病、马脑脊髓炎(东方)、马脑脊髓炎(西方)、马传染性贫血、马流感、马焦虫病、马鼻肺炎、马病毒性动脉炎、马鼻疽、苏拉病(伊氏锥虫(Trypanosoma
evansi))或委内瑞拉马脑脊髓炎;猪疾病例如:非洲猪瘟、古典猪瘟、尼帕病毒性脑炎、猪囊虫病、猪繁殖与呼吸综合征、猪水疱病或传染性肠胃炎;禽疾病例如:禽衣原体病、禽传染性支气管炎、禽传染性喉气管炎、禽支原体病(鸡毒支原体(M.
gallisepticum))、禽支原体病(滑液支原体(M. synoviae))、鸭病毒性肝炎、家禽霍乱、家禽伤寒、高致病性禽流感这是任何甲型或乙型流感病毒且特别是H5N1、传染性法氏囊病(Gumboro病)、马立克氏病、新城疫、鸡白痢或火鸡鼻气管炎;兔类动物和啮齿类动物疾病例如:病毒性肠炎、粘液瘤病或兔出血性疾病;鱼疾病例如:地方流行性造血器官坏死症、传染性造血器官坏死症、鲤鱼春季病毒血症、病毒性出血性败血症、传染性胰脏坏死病、传染性鲑鱼贫血、流行性溃疡综合征、细菌性肾病(鲑鱼肾杆菌(Renibacterium
salmoninarum))、三代虫病(Gyrodactylosis)(三代虫病(Gyrodactylus salaris))、红海鲷虹彩病毒病;或其他疾病例如骆驼痘或利什曼病。
在本发明的一个优选实施方案中,至少一种抗原蛋白质或肽来自Aujeszky氏病、***、水疱性口炎病毒、禽流感或新城疫。
本发明的另外一个优选实施方案涉及至少一种抗原蛋白质或肽或所述抗原蛋白质或肽的片段,其是与上述抗原中的任何具有至少85%同一性的抗原肽或蛋白质。氨基酸之间的同源性或同一性可以通过先前提及的BLOSUM评分矩阵中的任何进行计算。
癌抗原
许多蛋白质/糖蛋白已得到鉴定且与特定类型的癌症联系;这些被称为癌症特异性多肽、肿瘤相关抗原或癌抗原。一般而言,可以使用发现与癌症肿瘤相关的任何抗原。其中可以发现癌症特异性抗原的一种方法是通过扣除分析(subtraction
analysis)例如各种微阵列分析,例如DNA微阵列分析。此处,比较在健康和癌性患者之间、在癌性患者组之间、或在相同患者中的健康和癌性组织之间的基因表达模式(如由所述基因编码的RNA或蛋白质水平中可见的)。从彼此中“扣除”具有大约相等的表达水平的基因,留下在健康和癌性组织之间不同的基因/基因产物。这种方法是本领域已知的,并且可以用作鉴定新型癌抗原的方法或产生对于给定患者或患者组特异的基因表达概况。因此鉴定的抗原,单一抗原和它们可以在其中发现的组合落入本发明的范围内。
优选地,本发明的至少一种抗原衍生自但不限于选自下述的癌症特异性多肽:MAGE-3,MAGE-1,gp100,gp75,TRP-2,酪氨酸酶,MART-1,CEA,Ras,p53,B-连环蛋白,gp43,GAGE-1,BAGE-1,PSA,MUC-1、2、3,和HSP-70,TRP-1,gp100/pmel17,β-HCG,Ras突变型,p53突变型,HMW黑素瘤抗原,MUC-18,HOJ-1,细胞周期蛋白依赖性激酶4(Cdk4),半胱天冬酶8,HER-2/neu,Bcr-Abl酪氨酸激酶,癌胚抗原(CEA),端粒酶,SV40大T,人***状瘤病毒HPV 6、11、16、18、31和33型;HPV衍生的病毒癌基因E5、E6、E7和L1;存活素、Bcl-XL、MCL-1和Rho-C。
在本发明的一个优选实施方案中,至少一种抗原蛋白质或肽或抗原蛋白质或肽的片段来自选自下述的癌症特异性多肽:HPV衍生的病毒癌基因E5、E6、E7和L1;存活素、Bcl-XL、MCL-1和Rho-C。
与异常生理学应答相关的抗原
本发明的一个实施方案涉及核酸构建体,其中至少一种抗原蛋白质或肽或抗原蛋白质或肽的片段来自与异常生理学应答相关的多肽。此类异常生理学应答包括但不限于自身免疫疾病、过敏反应、癌症和先天性疾病。其例子的非详尽列表包括疾病例如类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、多发性硬化、银屑病和Crohn氏病。
操作接头(
Operative linker
)
本发明的一个方面涉及核酸构建体,其中在恒定链和抗原蛋白质或肽或抗原蛋白质或肽的片段之间的操作连接是直接连接或由间隔区介导的连接。术语操作接头应理解为核苷酸或氨基酸残基序列,其以保证核酸或多肽的生物加工的方式使核酸构建体或嵌合多肽的2个部分结合在一起。如果操作接头是直接连接,那么各自编码开放读码框或开放读码框的片段的2个核酸彼此紧邻放置,并且从而也在框内。如果操作接头由间隔区介导,那么一系列核苷酸分别***编码至少一种恒定链和至少一种抗原肽的核苷酸之间。具有间隔区是在本发明的范围内的,其中间隔区仅是以保留开放读码框的方式使本发明的至少2种元件连接的一系列核苷酸,或间隔区可以编码如本文下文定义的一种或多种信号或分离元件。
在一个特定实施方案中,本发明包括操作接头,其中操作接头是间隔区。
在一个实施方案中,本发明包括编码关于MHC II类分子的至少一个辅助表位的间隔区。辅助表位的例子是免疫原决定簇例如白喉毒素。特别地白喉毒素B片段COOH-末端区域已显示在小鼠中是免疫原性的。此外,HSP70部分或整体、以及其他免疫原性肽例如流感病毒、或具有锚定至HLA I类和II类分子的锚定基序的免疫原性序列或肽也可以在核酸构建体的间隔区中编码。
在另一个实施方案中,核酸构建体的间隔区编码至少一个蛋白酶切割位点。溶酶体蛋白酶例如组织蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和锌蛋白酶以及其他细胞内蛋白酶的切割位点落入本发明的范围内。
在另外一个实施方案中,核酸构建体的操作接头可以包括至少一个siRNA或miRNA编码序列。siRNA(小干扰RNA)和miRNA(微小RNA)以序列特异性方式靶向内源RNA用于降解。因此可以选择在本发明的核酸构建体内编码的siRNA或miRNA,以靶向不希望有的基因产物。
在另一个实施方案中,操作接头包括至少一个多聚接头或多克隆位点(MCS)。多聚接头和MCS是包括限制酶识别序列的核苷酸系列,即其中限制酶以平端或交错方式切割DNA的位点,促进DNA的其他片段/序列亚克隆到核酸构建体内。多聚接头/ MCS的识别序列一般是独特的,意味着它们在核酸构建体的其他地方未发现。操作接头可以另外包括一个或多个终止或末端密码子,其发出新生多肽从核糖体释放的信号。操作接头还可以包括至少一个IRES(内部核糖体进入位点)和/或至少一个启动子。IRES是允许在信使RNA(mRNA)序列中间起始翻译的核苷酸序列,作为蛋白质合成的更大过程的部分。启动子是使得基因能够被转录的DNA序列。启动子由RNA聚合酶识别,这随后起始转录,参见下文。启动子可以是单向或双向的。
在一个实施方案中,跨越在恒定链和至少一种抗原之间的区域的操作接头是这样的操作接头,其包括至少一个多聚接头和至少一个启动子以及还任选地至少一个IRES。这些元件可以以任何次序放置。在一个进一步优选的实施方案中,恒定链的终止密码子已被缺失,并且多聚接头已以保存开放读码框的方式克隆到载体内,允许***多聚接头内的至少一种抗原的框内阅读。这具有促进多种抗原在一个步骤或多个克隆步骤中亚克隆到相同构建体内,并且允许多种抗原在与恒定链相同的框内同时表达的优点。终止密码子可以在多聚接头后***用于翻译终止。这个实施方案可以与上述辅助表位中的任何、mi/siRNA或本文描述的其他元件中的任何进行组合。
本发明的一个实施方案涉及操作接头相关于至少一种恒定链和至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的片段的放置,其中至少一种抗原肽编码序列放置在:恒定链序列内、恒定链序列的前端、恒定链序列的末端部分。这以确保构建体的开放读码框的可读性的方式完成,从而使得至少一个操作接头在抗原肽之前、周围或之后。
本发明的另一个实施方案进一步涉及操作接头相关于至少一种恒定链和至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的片段的放置,其中至少一种抗原肽编码序列优选放置在恒定链的末端部分,并且操作接头***两者之间;末端部分是恒定链或其片段的第一个或最后一个残基。
在另一个实施方案中,核酸构建体不包括操作接头;相反,至少一种抗原肽编码序列与恒定链直接栓系(tethered)。至少一种抗原肽编码序列可以放置在:恒定链序列内、恒定链序列的前端、恒定链序列的末端部分。这以确保构建体的开放读码框的可读性的方式完成。
存在关于包括或排除操作接头的2种可能性的优点;在一个实施方案中,排除接头可以减少引发针对所述接头的免疫应答而不是引发针对抗原肽的免疫的可能性。
组合
核酸构建体编码多个元件是在本发明的范围内的。元件是至少一种恒定链或其变体和至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的片段。因此具有多个恒定链或其变体落入本发明的范围内,这些各自彼此可操作地连接且与多个抗原蛋白质或肽或抗原蛋白质或肽的片段可操作地连接。核酸构建体的元件因此必须彼此是可操作地连接的。各自与一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的片段可操作地连接的几个系列的恒定链或其变体(这些系列各自彼此可操作地连接)包含在本发明内。
本发明的优点和非常重要的方面涉及下述事实:可以起始任何类型的免疫应答例如T细胞介导和抗体介导的应答,二者可以用已知是弱抗原的表位、未知抗原性质的多肽和同时多个表位/抗原来起始。
因此,也在本发明的范围内的是一个优选实施方案是核酸构建体,所述核酸构建体编码与多个抗原蛋白质或肽或蛋白质或肽的片段可操作地连接的至少一种恒定链或其变体,例如2、3、4、5、6、8、10、12种或更多种抗原蛋白质或肽或蛋白质或肽的片段。
核酸构建体可以包括另外元件。这些包括但不限于:内部核糖体进入位点(IRES);编码涉及抗原呈递的蛋白质的基因,所述蛋白质例如LAMP、钙网织蛋白、Hsp
33、Hsp 60、Hsp70、Hsp90、Hsp100、sHSP(小热休克蛋白)和热休克结合蛋白例如77-残基DNAJ-同源Hsp73-结合结构域;编码涉及细胞内散布(spreading)的蛋白质的基因,所述蛋白质例如VP22、HIV Tat、Cx43或其他连接蛋白和细胞内缝隙连接组成成分;编码天然杀伤细胞(NK细胞)活化分子例如H60和细胞因子、鸡卵白蛋白或任何T辅助细胞表位的基因。
在本发明的一个优选实施方案中,核酸构建体包括编码涉及抗原呈递的蛋白质的至少一种基因,所述蛋白质例如LAMP、LIMP、钙网织蛋白Hsp 33、Hsp 60、Hsp70、Hsp90、Hsp100、sHSP(小热休克蛋白)或77-残基DNAJ-同源Hsp73-结合结构域。
在本发明的另外一个优选实施方案中,核酸构建体包括编码涉及细胞内散布的蛋白质的至少一种基因,所述蛋白质例如VP22、Cx43、HIV Tat、其他连接蛋白和细胞内缝隙连接组成成分。
启动子
术语启动子将在此处用于指一组转录控制模块,其在RNA聚合酶II的起始位点周围成簇。关于启动子被如何组织的许多想法衍生自几种病毒启动子的分析,包括关于HSV胸苷激酶(tk)和SV40早期转录单位的启动子。由更近期工作加强的这些研究已显示启动子由不连续功能模块组成,各自由约7-20 bp DNA组成,并且包含转录激活蛋白质的一个或多个识别位点。每个启动子中的至少一个模块作用于RNA合成的起始位点的定位。这点的最佳已知例子是TATA盒,但在缺乏TATA盒的某些启动子中,例如哺乳动物末端脱氧核苷酰转移酶基因的启动子和SV 40晚期基因的启动子,重叠自身起始位点的不连续元件帮助固定起始位置。
另外的启动子元件调节转录起始频率。一般地,这些位于起始位点上游30-110 bp的区域中,尽管许多启动子近期已显示也包含起始位点下游的功能元件。元件之间的间距是弹性的,从而使得当元件倒转或相对于彼此移动时,启动子功能被保存。在tk启动子中,在活性开始下降前元件之间的间距可以增至相隔50 bp。依赖于启动子,看起来个别元件可以共同或独立地作用,以激活转录。可以引导由核酸构建体编码的序列的转录起始的任何启动子可以在本发明中使用。
本发明的一个方面包括核酸构建体,其中使得构建体能够表达的启动子在至少一种可操作地连接的恒定链和抗原蛋白质或肽编码序列前。
进一步方面的是启动子选自组成型启动子、诱导型启动子、生物特异性启动子、组织特异性启动子、细胞类型特异性启动子和炎症特异性启动子。
启动子的例子包括但不限于:组成型启动子例如:猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒启动子、人免疫缺陷病毒长末端重复启动子、莫洛尼病毒启动子、禽白血病病毒启动子、EB病毒即早期启动子、劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子、人肌动蛋白启动子、人肌球蛋白启动子、人血红蛋白启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子和人肌肉肌酸启动子,诱导型启动子例如:金属硫蛋白启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子(tet开或tet关),组织特异性启动子例如:HER-2启动子和PSA相关启动子和双向启动子,其能够起始从启动子任一方向的转录。
使用诱导型启动子的优点包括提供可以随意激活的“休眠”核酸构建体的选项。如果免疫应答的引发优选仅在体内局部与全身性(例如在涉及癌症的情况下)比较诱导,或免疫应答的引发在施用时对于接受者的健康是有害的,这可以是有用的。
在一个优选实施方案中,核酸构建体包括选自下述的启动子:CMV启动子、SV40启动子和RSV启动子。
递送媒介物
本发明的一个方面包括如包括在递送媒介物中的在上文任何中描述的核酸构建体。递送媒介物是由此核苷酸序列或多肽或两者可以从至少一种介质转运到另一种介质的实体。递送媒介物一般用于表达在核酸构建体内编码的序列和/或用于构建体或其中编码的多肽的细胞内递送。
核酸构建体可以在体内或先体外后体内转移到细胞内;后者通过从患者中取出靶组织(即肝细胞或白血细胞),在体外转移构建体,并且随后将转导细胞重新植入患者内来进行。
非病毒递送的方法包括物理(无载体递送)和化学方法(基于合成载体的递送)。
物理方法包括针注射、基因枪、射流注射、电穿孔、超声和水动力递送,采用渗透细胞膜且促进细胞内基因转移的物理力。所述物理力可以是电或机械的。
化学方法使用合成或天然存在的化合物作为载体,以将转基因递送到细胞内。用于非病毒基因递送的最频繁研究的策略是通过使用阳离子脂质或阳离子聚合物将DNA配制成浓缩颗粒。含DNA的颗粒随后经由以细胞内囊泡形式的胞吞作用、巨胞饮作用或吞噬作用被细胞吸收,DNA的小部分从细胞内囊泡中释放到细胞质内并移动到核内,在其中发生转基因表达。
在本发明的范围内的是递送媒介物是选自下述的媒介物:基于RNA的媒介物、基于DNA的媒介物/载体、基于脂质的媒介物、基于聚合物的媒介物和病毒衍生的DNA或RNA媒介物。
本发明的一个优选实施方案涉及通过机械或电技术递送核酸构建体。
• 物理
○ 注射:一个优选实施方案涉及在溶液中的核酸构建体的简单注射。注射通常用递送至细胞外空间的核酸构建体在骨骼肌中肌内(IM)、皮内(ID)或对于肝进行。通过注射的递送可以通过下述得到辅助:电穿孔;使用盐水或蔗糖的高渗溶液;用肌毒素例如布比卡因暂时损害肌纤维;或加入能够增强DNA被靶细胞内在化效率的物质,例如转铁蛋白、与水不混溶的溶剂、非离子聚合物、表面活性剂或核酸酶抑制剂。
○ 基因枪:基因枪或Biolistic粒子递送***是用于将遗传信息注射细胞的装置。有效负荷(payload)是用例如质粒DNA包被的重金属例如金、银或钨的元素粒子。这种技术通常简称为biolistics。压缩氦可以用作推进剂。特别地在金颗粒例如胶体金颗粒上的核酸构建体涂层是一个有利的实施方案。
○ 气动(射流)注射:不需要颗粒,水性溶液。
○ 电穿孔或电渗透作用是由外部应用的电场引起的细胞质膜的导电性和渗透性的显著增加。
○ 超声促进的基因转移:超声产生膜孔,并且促进通过DNA被动扩散跨越膜孔的细胞内基因转移。效率可以通过使用造影剂或使得膜更具有流动性的条件得到增强。
○ 水动力基因递送:水动力基因递送是将裸露质粒DNA引入在高度充满(perfused)的内脏(例如肝)的细胞内的简单方法。在啮齿类动物中,大量DNA溶液的快速尾静脉注射引起注射溶液在下腔静脉的暂时溢流,这超过心输出量。因此,注射诱导DNA溶液逆流到肝内的流动、肝内压力的快速升高、肝扩大和肝窗的可逆破裂。
• 化学
○ 阳离子脂质介导的基因递送:尽管某些阳离子脂质单独显示出良好的转染活性,但它们通常用不荷电磷脂或胆固醇作为辅助脂质进行配制,以形成脂质体。在与阳离子脂质体混合后,使质粒DNA浓缩成称为lipoplex的准稳定颗粒。lipoplex中的DNA被充分保护免于核酸酶降解。lipoplex能够触发细胞摄取,并且促进在到达破坏性溶酶体区室前使DNA从细胞内囊泡中释放。
○ 阳离子聚合物介导的基因递送:大多数阳离子聚合物都具有使DNA浓缩成为小颗粒并且通过与细胞表面上阴离子位点的电荷-电荷相互作用促进经由胞吞作用的细胞摄取的功能。阳离子聚合物DNA载体包括聚乙烯亚胺(PEI)、聚乙二胺和聚丙胺树状聚体(dendrimers)、聚烯丙胺、阳离子右旋糖酐、壳聚糖、阳离子蛋白质(聚赖氨酸、鱼精蛋白和组蛋白)和阳离子肽。
○ 脂质-聚合物杂交***:用聚阳离子预浓缩DNA,随后用阳离子脂质体、阴离子脂质体或两亲性聚合物连同或不连同辅助脂质包被。
化学递送媒介物的例子包括但不限于:生物可降解聚合物微球体、基于脂质的制剂例如脂质体载体、阳离子荷电分子例如脂质体、钙盐或树状聚体、脂多糖、多肽和多糖。
可选的物理递送方法可以包括裸露核酸构建体在粘膜表面例如鼻和肺粘膜上的气溶胶滴注;核酸构建体向眼和粘膜组织的局部施用;和水合作用例如通过其盐水溶液受力进入眼的角膜基质内的基质水合。
本发明的另一个实施方案包括载体,其在本文中指示病毒载体(即非病毒),作为递送媒介物。根据本发明的病毒载体由修饰的病毒基因组制成,即形成病毒基因组的实际DNA或RNA,并且以裸露形式引入。因此,在由病毒或非病毒蛋白质制成的病毒基因组周围的任何包被结构不是根据本发明的病毒载体的部分。
病毒载体由其衍生的病毒选自下述非详尽组:腺病毒、逆转录病毒、慢病毒、腺伴随病毒、疱疹病毒、痘苗病毒、泡沫病毒、巨细胞病毒、塞姆利基森林病毒、痘病毒、RNA病毒载体和DNA病毒载体。此类病毒载体是本领域众所周知的。
重组细胞
本发明的一个方面涉及包括如在上文中的任何中定义的核酸构建体的细胞。此类重组细胞可以用作体外研究的工具,用作核酸构建体的递送媒介物或用作基因疗法方案的一部分。根据本发明的核酸构建体可以通过本领域众所周知的技术引入细胞内,并且所述技术包括DNA显微注射到细胞的核内、转染、电穿孔、脂转染/脂质体融合和粒子轰击。合适的细胞包括自体和非自体细胞,并且可以包括异种细胞。
在一个优选实施方案中,本发明的核酸构建体包括在抗原呈递细胞(APC)内。在其表面上呈递与MHC分子结合的抗原的任何细胞被视为抗原呈递细胞。此类细胞包括但不限于巨噬细胞、树突细胞、B细胞、杂合APC和养育(foster)APC。制备杂合APC的方法是本领域众所周知的。
在一个更优选的实施方案中,APC是专职抗原呈递细胞,并且最优选APC是MHC-I和/或MHC-II表达细胞。
根据上文中的任何的APC可以是得自患者的干细胞。在引入本发明的核酸构建体后,干细胞可以以治疗具有医学状况的患者的意图重新引入患者内。优选地,从患者中分离的细胞是能够分化成抗原呈递细胞的干细胞。
在本发明的范围内另外包括的是包括本发明的核酸构建体的抗原呈递细胞不表达任何共刺激信号,并且抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段是自身抗原。
嵌合蛋白质和抗体
本发明的一个目的是由如本文上文描述的核酸构建体编码的嵌合蛋白质,包括至少一种可操作地连接的恒定链或其变体和至少一种抗原蛋白质或肽或所述抗原蛋白质或肽的片段。嵌合蛋白质应理解为由核苷酸序列编码的遗传改造蛋白质,所述核苷酸序列通过将2种或更多种完全或部分基因或一系列(非)随机核酸剪接在一起制备。
本发明的一个方面涉及可以识别如本文上文定义的嵌合蛋白质的抗体。术语抗体应理解为免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的活性部分。抗体是例如完整免疫球蛋白分子或其保留免疫学活性的片段。此类抗体可以用于动物的被动免疫接种,或用于在用于检测抗体与之结合的蛋白质的测定中。
核酸构建体组合物
本发明的一个方面涉及包括核酸序列的组合物,所述核酸序列编码与至少一种抗原蛋白质或肽或所述抗原蛋白质或肽的片段可操作地连接的至少一种恒定链或其变体。组合物因此可以包括如上文中的任何中定义的核酸构建体。组合物可以另外用作药物。
根据本发明的核酸构建体组合物可以根据已知方法进行配制,例如通过一种或多种药学上可接受的载体也称为赋形剂或稳定剂与活性剂的混合。这些赋形剂对于施用于任何个体/动物,优选脊椎动物且更优选人可以是可接受的,因为它们在采用的剂量和浓度下对暴露于其的细胞或个体是无毒的。通常生理学上可接受的载体是pH缓冲水溶液。此类赋形剂、载体和配制方法的例子可以例如在Remington's Pharmaceutical Sciences(Maack Publishing Co,Easton,PA)中找到。生理学上可接受的载体的例子包括但不限于:缓冲液例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸;抗氧化剂包括抗坏血酸;低分子量(小于约10个残基)多肽;蛋白质例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白;亲水聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸;单糖、二糖和其他碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合剂例如EDTA;糖醇例如甘露糖醇或山梨糖醇;成盐抗衡离子例如钠;和/或非离子表面活性剂例如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
为了配制适合于有效施用的药学上可接受的组合物,此类组合物根据本发明将包含有效量的核酸构建体,所述核酸构建体被包括在递送媒介物内或嵌合蛋白质在如本文描述的核酸构建体内编码。通常,如果用如由本发明的核酸构建体编码的蛋白质或多肽引发免疫应答,那么通过使蛋白质或肽与之偶联且因此帮助诱导免疫应答,载体将用作支架。载体蛋白质可以是任何常规载体,包括适合于呈递免疫原决定簇的任何蛋白质。合适载体一般是大的、缓慢代谢的大分子,例如蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、氨基酸共聚物、脂质聚集体(例如油小滴或脂质体)和非活性病毒颗粒。此类载体是本领域普通技术人员众所周知的。此外,这些载体可以充当免疫刺激剂(“佐剂”)。动物的免疫接种可以用佐剂和/或药物载体执行。常规载体蛋白质包括但不限于钥孔血蓝蛋白,血清蛋白质例如转铁蛋白、牛血清白蛋白或人血清白蛋白,卵白蛋白,免疫球蛋白或激素例如胰岛素。载体可以连同佐剂或独立于其存在。
在下文中,核酸构建体组合物或组合物意指包含对于预防和治疗用途包括刺激患者中的免疫应答有用的组合物。进一步考虑本发明的组合物不包括任何全身或局部毒性反应或任何其他副作用。
在一个优选实施方案中,如本文使用的,短语‘组合物’指用于引发免疫应答的组合物。
在一个优选实施方案中,核酸构建体是包装的。用于核酸构建体的包装装置(means)包括选自但不限于下述的装置:基于RNA的或基于DNA载体、基于脂质的载体、病毒表达载体、病毒递送载体、胶体金颗粒和生物可降解聚合物微球体的包被。先前提及的递送装置中的任何因此可以用于在组合物中使用的包装目的。
在一个实施方案中,核酸构建体的包装方法是选自但不限于下述的病毒表达载体:腺病毒、逆转录病毒、慢病毒、腺伴随病毒、疱疹病毒、痘苗病毒和DNA病毒载体。病毒载体可以是复制缺陷型或条件复制缺陷型病毒载体。
本发明的一个方面涉及包括至少2种载体的组合物。这包含如所述的任何1种或2种不同核酸构建体可以包装到至少2种载体内,这些载体是如上文中的任何中所述的类型。本发明另外涉及包括3、4、5或6种载体的组合物。再次,这些载体可以彼此不同或相同,并且可以携带如本文上文描述的等同或不同核酸构建体。本发明的一个进一步方面涉及组合物,其包括如由本文描述的核酸构建体中的任何编码的至少一种嵌合蛋白质。当嵌合蛋白质或多肽待用作免疫原时,它可以通过在重组细胞中表达任何一种或多种上述核酸构建体产生,或它可以通过本领域已知的方法通过化学合成制备。如上文中所述,此类嵌合蛋白质和/或肽可以与载体偶联,以增加对于蛋白质/肽的免疫应答,并且可以连同或不连同佐剂和/或赋形剂一起施用。
在一个实施方案中,本发明涉及如本文描述的核酸构建体用于产生组合物的用途。
增强免疫应答:常规佐剂
佐剂可以包括在组合物中以增强特异性免疫应答。因此,特别重要的是鉴定这样的佐剂,当与一种或多种抗原/核酸构建体和/或递送媒介物(其中任何也可以被称为免疫原决定簇)组合时,其导致能够诱导强特异性免疫应答的组合物。免疫原决定簇还可以在免疫接种前与2种或更多种不同佐剂混合。组合物在呈现的正文中还被称为免疫原性组合物。
大量佐剂已得到描述并且用于在实验室动物例如小鼠、大鼠和兔中生成抗体。在此类设置中,副作用的耐受相当高,因为主要目标是获得强抗体应答。对于用途和对于批准用于在药物中使用,且特别对于在人中使用,要求组合物的组分包括佐剂是充分表征的。进一步要求组合物具有任何不良反应的最低限度危险,例如肉芽肿、脓肿或发热。
本发明的一个实施方案涉及包括佐剂的组合物。在一个优选实施方案中,组合物适合于施用于哺乳动物例如人类。因此,优选佐剂适合于施用于哺乳动物,并且最优选地适合于施用于人类。
在另一个优选实施方案中,组合物适合于施用于鸟或鱼,并且最优选鸡(家鸡)。因此,优选佐剂适合于施用于鸟或鱼。
佐剂的选择可以进一步通过其刺激希望的免疫应答类型B细胞和/或T细胞激活的能力进行选择,并且组合物可以配制为最优化对相关淋巴组织的分布和呈递。
关于本发明的佐剂可以根据其起源进行分组,其为矿物质、细菌、植物、合成的或宿主产物。在这个分类法下的第一个组是矿物质佐剂,例如铝化合物。与铝盐沉淀的抗原或与预形成的铝盐或化合物混合或吸附的抗原已广泛用于增强动物和人中的免疫应答。铝颗粒已在免疫接种后7天在兔的局部***中得到证实,并且可能另一种显著功能是将抗原导向在结自身中的含T细胞区域。佐剂效力已显示与引流***的暗示相关。虽然许多研究已证实与铝盐一起施用的抗原导致增加的体液免疫,细胞介导的免疫看起来仅是轻微增加的,如通过迟发型超敏反应测量的。氢氧化铝已描述为激活补体途径。这种机制可以在局部炎症应答以及免疫球蛋白生产和B细胞记忆中起作用。此外,氢氧化铝可以保护抗原不受快速分解代谢。主要由于其极佳的安全记录,铝化合物是目前在人中使用的唯一佐剂。
另一大组佐剂是细菌起源的那些。具有细菌起源的佐剂可以进行纯化且合成(例如胞壁酰二肽、脂质A),并且宿主介质已得到克隆(白介素1和2)。最近十年已在细菌起源活性组分的几种佐剂的化学纯化中获得显著进展:百日咳博德特氏菌、结核分枝杆菌、脂多糖、弗氏完全佐剂(FCA)和弗氏不完全佐剂(Difco Laboratories,Detroit,Mich.)和Merck Adjuvant
65(Merck和Company,Inc.,Rahway,N.J.)。另外,依照本发明的合适佐剂是例如Titermax
Classical佐剂(SIGMA-ALDRICH)、ISCOMS、Quil A、ALUN,参见US 58767和5,554,372,脂质A衍生物、霍乱毒素衍生物、HSP衍生物、LPS衍生物、合成肽基质、GMDP及其他以及与免疫刺激剂组合(US 5,876,735)。百日咳博德特氏菌在本发明的背景中作为佐剂是有利的,由于其通过对T淋巴细胞群体的作用调节细胞介导的免疫的能力。对于脂多糖和弗氏完全佐剂,佐剂活性部分已得到鉴定且合成,这允许研究结构-功能关系。这些还考虑用于包括在根据本发明的免疫原性组合物中。
已发现脂多糖(LPS)及其各种衍生物包括脂质A与脂质体或其他脂质乳剂组合是有力佐剂。仍未确定是否可以产生用于在人中的一般使用的具有足够低毒性的衍生物。弗氏完全佐剂是大多数实验研究中的标准。
矿物油可以加入免疫原性组合物中,以便保护抗原不受快速分解代谢。
许多其他类型的材料可以用作根据本发明的免疫原性组合物中的佐剂。这些包括植物产物例如皂苷、动物产物例如壳多糖和众多合成化学制品。
根据本发明的佐剂还可以通过其提议的作用机制进行分类。这类分类法必定是略微任意的,因为大多数佐剂看起来通过超过一种机制起作用。佐剂可以通过抗原定位和递送,或通过对构成免疫***的细胞例如巨噬细胞和淋巴细胞的直接作用起作用。根据本发明的佐剂通过其增强免疫应答的另一种机制是通过抗原沉积物的产生。这看起来促成铝化合物、油乳剂、脂质体和合成聚合物的佐剂活性。脂多糖和胞壁酰二肽的佐剂活性看起来主要通过巨噬细胞的激活介导,而百日咳博德特氏菌影响巨噬细胞和淋巴细胞。当掺入根据本发明的免疫原性组合物内可以是有用的佐剂的进一步例子在US
5,554,372中描述。
在根据本发明的组合物中有用的佐剂因此可以是矿物盐,例如氢氧化铝和磷酸铝或钙凝胶、油乳剂和基于表面活性剂的制剂例如MF59(微流体化去污剂稳定的水包油乳剂)、QS21(纯化皂苷)、AS02(SBAS2、水包油乳剂 + 单磷酰脂质A(MPL)+ QS21)、Montanide ISA 51和ISA-720(稳定的油包水乳剂)、佐剂65(包含花生油、二缩甘露醇一油酸和单硬脂酸铝)、RIBI ImmunoChem Research Inc.,Hamilton,Utah)、微粒佐剂例如病毒体(掺入流感血凝素的单层脂质体小泡(原文为cehicles,疑为vehicles))、AS04(含MPL的Al盐)、ISCOMS(皂苷和脂质(例如胆固醇)的结构复合物、聚丙交酯共乙交酯(PLG)、微生物衍生物(天然和合成)例如单磷酰脂质A(MPL)、Detox(MPL +草分支杆菌(M. Phlei)细胞壁支架)、AGP(RC-529(合成乙酰化单糖))、DC_chol(能够自组构成脂质体的类脂免疫刺激剂)、OM-174(脂质A衍生物)、CpG基序(包含免疫刺激CpG基序的合成寡核苷酸)、修饰细菌毒素、具有无毒佐剂效应的LT和CT、内源人免疫调节剂例如hGM-CSF或hIL-12或Immudaptin(C3d串联排列)、惰性媒介物例如金颗粒。
佐剂的另外例子包括:免疫刺激油乳剂(例如,油包水、水包油、水包油包水例如弗氏不完全佐剂例如Montainde®,Specol,矿物盐例如Al(OH)3、AlPO4,微生物产物,皂苷例如Qual
A,合成产物以及佐剂佐剂,和免疫刺激复合物(ISCOM)和细胞因子,热灭活细菌/组分,纳米珠,LPS,LTA。其他常用佐剂的列表公开于WO 2003/089471中的第6-8页上,所述列表在此引入作为参考。
根据本发明的免疫原性组合物还可以包含稀释剂例如缓冲剂,抗氧化剂例如抗坏血酸,低分子量(小于约10个残基)多肽,蛋白质,氨基酸,碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖或糊精,螯合剂例如EDTA,谷胱甘肽及其他稳定剂和赋形剂。中性缓冲盐水或与非特异性血清白蛋白混合的盐水是示例性合适稀释剂。
佐剂一般以根据制造商的说明书的量包括在免疫原性组合物中。
增强免疫应答:非常规佐剂
细胞因子调节
对于有效的疫苗,它必须诱导对于给定病原体的合适免疫应答。这可以通过修饰表达的抗原形式(即细胞内与分泌的比较)、递送方法和途径和递送的DNA剂量来完成。然而,它还可以通过共施用编码免疫调节分子例如细胞因子、淋巴因子或共刺激分子的质粒DNA(pDNA)来完成。这些“遗传佐剂”可以连同如本文概述的‘常规佐剂’或‘其他免疫刺激佐剂’中的任何以许多方式施用:
• 作为2种分开质粒的混合物,一种编码免疫原和另一种编码细胞因子;
• 作为通过间隔区分开的单一的双或多顺反子载体;或
• 作为质粒编码的嵌合体或融合蛋白;或
• 以其天然形式,即蛋白质或核苷酸。
一般而言,促炎因子(例如各种白介素、肿瘤坏死因子和GM-CSF)加上TH2诱导细胞因子的共施用增加抗体应答,而促炎因子和TH1诱导细胞因子降低体液应答且增加细胞毒性应答(这例如在病毒保护中更重要)。有时还使用共刺激分子如B7-1、B7-2和CD40L。
这个概念已成功地应用于编码IL-10的pDNA的局部施用。编码B7-1(在APC上的配体)的质粒在抗肿瘤模型中已成功地增强免疫应答,并且使编码GM-CSF和约氏疟原虫(P. yoelii)的环子孢子蛋白(PyCSP)的质粒混合已增强针对后续攻击的保护(而单独的编码PyCSP的质粒则不是)。GM-CSF可以促使树突细胞更有效地呈递抗原,且增强IL-2产生和TH细胞激活,从而驱动增加的免疫应答。这可以通过首先用pPyCSP和pGM-CSF混合物引发,且以后用表达PyCSP的重组痘病毒加强得到进一步增强。然而,与通过单独的pPcMSP1-HBs递送获得的保护比较,编码GM-CSF(或IFN-γ、或IL-2)和夏氏疟原虫(P. chabaudi)裂殖子表面蛋白质1(C末端)-乙型肝炎病毒表面蛋白质(PcMSP1-HBs)的融合蛋白的质粒的共注射实际上消除了针对攻击的保护。
其他免疫刺激佐剂
在一个实施方案中,下述中的任何可以用作关于根据本发明的核酸构建体或组合物的免疫刺激佐剂:
LPS(脂多糖),Poly-IC(多聚肌醇胞嘧啶)或任何其他佐剂,其类似于双链RNA、LL37、RIG-1解螺旋酶、IL-12、IL-18、CCL-1、CCL-5、CCL-19、CCL-21、GM-CSF、CX3CL、CD86、PD-1、分泌PD-1、IL10-R、分泌IL10-R、IL21、ICOSL、41BBL、CD40L,以及刺激免疫应答的其他任何蛋白质或核酸序列。
在一个实施方案中,使免疫刺激佐剂与腺病毒纤维蛋白质融合。例如,CX3CL可以与腺病毒纤维蛋白质融合。
免疫刺激
CpG
基序
质粒DNA自身看起来对免疫***具有佐剂作用。质粒DNA已衍生自这样的细菌,发现所述细菌触发先天性免疫防御机制,激活树突细胞和产生TH1细胞因子。这是由于识别具有免疫刺激的的特定CpG二核苷酸序列。CpG刺激(CpG-S)序列在细菌衍生的DNA中的出现频率为真核生物中的20倍。这是因为真核生物显示“CpG抑制”- 即CpG二核苷酸对以比预期的低得多的频率出现。另外,CpG-S序列是低甲基化的。这在细菌DNA中频繁出现,而在真核生物中出现的CpG基序在胞嘧啶核苷酸上都是甲基化的。相比之下,抑制免疫应答激活的核苷酸序列(命名为CpG中和,或CpG-N)在真核生物基因组中是过度出现的。最佳免疫刺激序列已发现是未甲基化的CpG二核苷酸,其侧面为2个5'嘌呤和2个3'嘧啶。此外,在这个免疫刺激六聚体外的侧面区域任选是富含鸟嘌呤的,以确保结合且摄取到靶细胞内。
先天性免疫***与适应性免疫***协同作用,以设定针对DNA编码蛋白质的应答。CpG-S序列诱导多克隆B细胞激活以及细胞因子表达和分泌的上调。受刺激的巨噬细胞分泌IL-12、IL-18、TNF-α、IFN-α、IFN-β和IFN-γ,受刺激的B细胞分泌IL-6和一些IL-12。在DNA疫苗的质粒骨架中CpG-S和CpG-N序列的操纵可以确保对于编码抗原的免疫应答的成功,并且驱动针对TH1表型的免疫应答。如果病原体要求TH应答用于保护,那么这是有用的。CpG-S序列也已用作外部佐剂,用于具有可变成功率的DNA和重组蛋白质疫苗接种。具有低甲基化的CpG基序的其他生物也已证实多克隆B细胞扩增的刺激。然而,在这背后的机制可以比简单甲基化更复杂 – 未发现低甲基化的鼠类DNA设定免疫应答。
DNA
的配制
DNA免疫接种的效率可以通过针对降解稳定DNA且增加DNA递送到抗原呈递细胞内的效率得到改善。这可以通过用DNA包被生物可降解的阳离子微粒(例如用十六烷基三甲基溴化铵配制的聚(丙交酯共乙交酯))来达到。此类DNA包被微粒在产生CTL方面可以与重组痘苗病毒一样有效,特别是当与铝混合时。直径300nm的颗粒看起来对于通过抗原呈递细胞摄取是最有效的。
施用
根据本发明的核酸构建体和组合物可以以治疗有效量施用于个体。有效量可以根据各种因素例如个体的状况、重量、性别和年龄而改变。其他因素包括施用方式。
在一个实施方案中,根据本发明的核酸构建体可以以DNA、RNA、LNA、PNA、INA、TINA、HNA、ANA、CNA、CeNA、GNA、TNA、缺口-聚体、混合-聚体(Mix-mers)、吗啉代类物质或其任何组合的形式递送给受试者。
在一个实施方案中,根据本发明的核酸构建体可以以DNA的形式递送给受试者。
在另一个实施方案中,根据本发明的核酸构建体可以以RNA的形式递送给受试者。因此,核酸构建体可以在施用前转录成RNA。
在另外一个实施方案中,根据本发明的核酸构建体可以以蛋白质的形式递送给受试者。因此,核酸构建体可以在施用前翻译成蛋白质。
在其中根据本发明的核酸构建体以蛋白质的形式递送给受试者的实施方案中,蛋白质可以已进行修饰,以增加稳定作用和/或最优化进入细胞内的递送。蛋白质可以具有增加的稳定性,原因在于二硫键的存在(例如US 5,102,985用过氧化氢处理以还原形式的蛋白质溶液,以90-96%得率生成具有分子内二硫桥的蛋白质)、极性残基中的增加、表面电荷最优化、表面盐桥、封装(例如用中孔硅酸盐),或蛋白质可以与热休克蛋白(例如Hsp-60、Hsp-70、Hsp-90、Hsp-20、Hsp-27、Hsp-84及其他)、HIV tat易位结构域、腺病毒纤维蛋白质或任何其他蛋白质或结构域连接。
药物或兽医学组合物可以通过各种途径提供给个体,例如皮下(sc或s.c.)、局部、经口和肌内(im或i.m.)。药物组合物的施用经口或肠胃外实现。肠胃外递送的方法包括局部、动脉内(直接对于组织)、肌内、大脑内(ic或i.c.)、皮下、髓内、鞘内、心室内、静脉内(iv或i.v.)、腹膜内或鼻内施用。本发明还具有提供用于在用组合物引发免疫应答的方法中使用的合适局部、经口、全身和肠胃外药物制剂的目的。
例如,组合物可以在此类经口剂型中施用,例如片剂、胶囊(各自包括限时释放和持续释放制剂)、丸剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、酊剂、溶液、悬浮液、糖浆剂和乳状剂,或通过注射。同样地,它们还可以以静脉内(弹丸和输注)、腹膜内、皮下、局部连同或不连同阻塞、或肌内形式施用,全部使用药学领域普通技术人员众所周知的形式。可以采用包括本文所述化合物中的任何的有效但无毒量的组合物。还包含其是本领域已知适合于配制可注射免疫原性肽组合物的任何和所有常规剂型,例如冻干形式和溶液、悬浮液或乳剂形式,需要时,其包含常规药学上可接受的载体、稀释剂、防腐剂、佐剂、缓冲组分等。
在一个实施方案中,用于引发和/或后续加强疫苗的组合物作为缓慢或持续释放制剂给予。
根据本发明的核酸构建体或组合物的优选施用方式包括但不限于全身施用,例如静脉内或皮下施用、真皮内施用、肌内施用、鼻内施用、经口施用、直肠施用、***施用、肺施用和一般地任何形式的粘膜施用。此外,在本发明中包括用于在本文中提及的任何施用形式的方法在本发明的范围内。
根据本发明的核酸构建体或组合物可以施用一次,或任何次数例如2、3、4或5次。
在一个优选实施方案中,核酸构建体或组合物施用一次,随后为合适疫苗的施用。
在另一个优选实施方案中,核酸构建体或组合物在施用疫苗前作为一系列施用进行施用。此类系列可以包括每天、每第二天、每第三天、每第四天、每第五天、每第六天、每周、每两周或每第三周施用核酸构建体或组合物,总共1、2、3、4或5次。
在一个实施方案中,在首先施用核酸构建体或组合物用于引发免疫应答和其次施用疫苗用于加强之间的时间段是相隔至少1天、例如相隔至少2天、例如相隔3天、例如相隔至少4天、例如相隔5天、例如相隔至少6天、例如相隔7天、例如相隔至少8天、例如相隔9天、例如相隔至少10天、例如相隔15天、例如相隔至少20天、例如相隔25天。
用核酸构建体或组合物引发因此预期通过施用疫苗得到进一步加强。施用可以以不同于先前施用或类似于先前施用的形式或在不同于先前施用或类似于先前施用的身体部分中。
加强注射(shot)是同源或异源加强注射。同源加强注射是其中第一次和后续施用包括相同构建体且更具体而言相同递送媒介物。异源加强注射是其中等同构建体包括在不同载体内。
根据本发明的组合物的优选施用形式是将组合物施用于身体区域,内或外,最可能是给定感染的接受器(receptacle)。感染接受器是感染通过其接受的身体区域,例如关于流感,感染接受器是肺。
本发明的核酸构建体或组合物可以施用于它对于其可以是有利的任何生物,特别是任何动物例如脊椎动物。组合物的施用装置和方式适合于接受者落入本发明的范围内。
组合物的优选接受者是哺乳动物,并且在本发明的一个更优选实施方案中,哺乳动物选自:牛、猪、马、绵羊、山羊、美洲驼、小鼠、大鼠、猴、犬、猫、雪貂和人。在最优选的实施方案中,哺乳动物是人。
组合物的另一个优选接受者是来自鸟纲(鸟)的任何脊椎动物,例如家鸡(鸡)。
本发明的一个实施方案包括进一步包括第二种活性成分的组合物。第二种活性成分选自但不限于佐剂、抗生素、化学治疗、抗变应原、细胞因子、免疫***的补体因子和共刺激分子。
本发明的另一个实施方案包括部分试剂盒,其中试剂盒包括根据上文中的任何的至少一种核酸构建体或组合物,用于施用所述核酸构建体或组合物的装置,和关于如何做到这点的说明书。包括多个剂量的相同组合物或几种不同组合物在本发明的范围内。在一个优选实施方案中,部分试剂盒进一步包括第二种活性成分。在一个更优选的实施方案中,所述第二种活性成分是合适疫苗,即能够加强通过所述免疫应答的先前引发产生的免疫应答的疫苗。
本发明进一步包括用于加强动物中的免疫应答的方法,其包括给动物施用根据上文中的任何的核酸构建体或组合物,随后施用合适疫苗,从而引发且加强受试者的免疫***。
免疫应答可以是但不限于下述应答类型中的任何:MHC-I依赖性应答、MHC-I和/或MHC-II依赖性应答、T细胞依赖性应答、CD4+
T细胞依赖性应答、CD4+ T细胞不依赖性应答、CD8+ T细胞依赖性应答和B细胞依赖性免疫应答。合适疫苗是在用根据本发明的核酸构建体或组合物引发免疫***后能够加强免疫***的那些。
在一个进一步的实施方案中,本发明涉及治疗有此需要的个体的方法,其包括施用如本文上文所述的组合物,以治疗所述个体中的临床状况。
增加疫苗的效力
本发明的一个实施方案涉及编码至少一种恒定链或其变体和至少一种抗原蛋白质或肽或蛋白质或肽的片段的核酸构建体,其中至少一种抗原蛋白质或肽或蛋白质或肽的片段来自病毒、细菌或寄生虫。
本文呈现的数据显示使用包括恒定链或其变体的核酸构建体开发引发-加强方案并不简单。因此,如图1中呈现的,包括恒定链和抗原的裸露DNA构建体(DNA-IiGP)能够引发免疫应答,而包括抗原但不含恒定链的裸露DNA构建体(DNA-GP)不能引发免疫应答。此外,图12中呈现的数据显示包括抗原的腺病毒载体(AdGP)能够引发特定(Ad-IiGP)但并非全部(Ad-GP)免疫应答,而图13中呈现的数据显示包括恒定链连同抗原的腺病毒载体(Ad-IiGP)在正常剂量和处理方案下不能引发任何(Ad-IiGP和Ad-GP)免疫应答。然而,可能的是通过使用较低剂量的Ad-IiGP用于引发来最优化Ad-IiGP加强的Ad-IiGP引发(如图14中所示)。
本发明的一个目的是提供编码至少一种恒定链和病毒、细菌或寄生虫抗原或其片段的核酸构建体,其中所述恒定链是恒定链的变体,用于引发免疫应答,其中所述引发随后为用癌症疫苗的后续加强疫苗接种。所述恒定链的变体可以是如本文其他地方指定的任何变体,包括其中Ii-KEY
LRMK氨基酸残基已通过例如缺失或置换加以改变,或其中CLIP区域的部分已通过例如缺失或置换加以改变的恒定链。
在一个实施方案中,本发明涉及核酸构建体用于增加疫苗效力的用途。
在一个实施方案中,本发明公开了用于增加疫苗效力的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链或其变体和抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适疫苗加强步骤b)的免疫应答。
在一个实施方案中,本发明公开了用于增加疫苗效力的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链的变体和抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链的变体包括通过例如缺失或置换的Ii-KEY LRMK氨基酸残基的改变。
在一个实施方案中,本发明公开了用于增加疫苗效力的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链的变体和抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链的变体包括通过例如缺失或置换的CLIP区域改变。
在一个实施方案中,本发明公开了用于增加疫苗效力的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链的变体和抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链的变体不包括前17个氨基酸。
在另一个实施方案中,本发明涉及核酸构建体用于引发免疫应答的用途。
在一个实施方案中,本发明公开了用于引发免疫应答的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链或其变体和抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适疫苗加强步骤b)的免疫应答。
在一个实施方案中,本发明公开了用于引发免疫应答的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链的变体和抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链的变体包括通过例如缺失或置换的Ii-KEY LRMK氨基酸残基改变。
在一个实施方案中,本发明公开了用于引发免疫应答的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链的变体和抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链的变体包括通过例如缺失或置换的CLIP区域改变。
在一个实施方案中,本发明公开了用于引发免疫应答的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链的变体和抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链的变体不包括前17个氨基酸。
增加癌症疫苗的效力
本发明的一个实施方案涉及编码至少一种恒定链或其变体和至少一种抗原蛋白质或肽或蛋白质或肽的片段的核酸构建体,其中至少一种抗原蛋白质或肽或蛋白质或肽的片段来自癌症特异性多肽或癌抗原。
本发明的一个目的是提供编码至少一种恒定链和癌抗原或其片段的核酸构建体,其中所述恒定链以其天然、野生型形式,用于引发免疫应答,其中所述引发随后为用癌症疫苗的后续加强疫苗接种。
本发明的另外一个目的是提供编码至少一种恒定链和癌抗原或其片段的核酸构建体,其中所述恒定链是恒定链的变体,用于引发免疫应答,其中所述引发随后为用癌症疫苗的后续加强疫苗接种。所述恒定链的变体可以是如本文其他地方指定的任何变体,包括其中Ii-KEY
LRMK氨基酸残基已通过例如缺失或置换加以改变,或其中CLIP区域的部分已通过例如缺失或置换加以改变,或其中前17个氨基酸已缺失的恒定链。
由此可见当用于加强免疫应答的随后施用的疫苗是癌症疫苗时,由根据本发明的核酸构建体编码的恒定链可以以其天然、野生型形式,或它可以是恒定链的变体。
在一个实施方案中,本发明涉及核酸构建体用于增加癌症疫苗效力的用途。
在一个实施方案中,本发明公开了用于增加癌症疫苗效力的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链或其变体和癌症特异性抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适的癌症疫苗加强步骤b)的免疫应答。
在一个实施方案中,本发明公开了用于增加癌症疫苗效力的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链和癌症特异性抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适的癌症疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链以其天然、野生型形式。
在一个实施方案中,本发明公开了用于增加癌症疫苗效力的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链的变体和癌症特异性抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适的癌症疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链的变体包括通过例如缺失或置换的Ii-KEY LRMK氨基酸残基的改变,和/或通过例如缺失或置换的CLIP区域部分的改变,和/或Ii的前17个氨基酸的缺失。
在另一个实施方案中,本发明涉及核酸构建体用于引发免疫应答的用途。
在一个实施方案中,本发明公开了用于引发免疫应答的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链或其变体和癌症特异性抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适的癌症疫苗加强步骤b)的免疫应答。
在一个实施方案中,本发明公开了用于引发免疫应答的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链和癌症特异性抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适的癌症疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链以其天然、野生型形式。
在一个实施方案中,本发明公开了用于引发免疫应答的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链的变体和癌症特异性抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适的癌症疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链的变体包括通过例如缺失或置换的Ii-KEY LRMK氨基酸残基的改变,和/或通过例如缺失或置换的CLIP区域部分的改变,和/或Ii的前17个氨基酸的缺失。
增加针对异常生理学应答的疫苗的效力
本发明的一个目的是提供编码至少一种恒定链和与异常生理学应答相关的多肽或其片段的核酸构建体,其中所述恒定链以其天然、野生型形式,用于引发免疫应答,其中所述引发随后为用针对所述异常生理学应答的疫苗的后续加强疫苗接种。
本发明的另外一个目的是提供编码至少一种恒定链和与异常生理学应答相关的多肽或其片段的核酸构建体,其中所述恒定链是恒定链的变体,用于引发免疫应答,其中所述引发随后为用针对所述异常生理学应答的疫苗的后续加强疫苗接种。所述恒定链的变体可以是如本文其他地方指定的任何变体,包括其中Ii-KEY
LRMK氨基酸残基已通过例如缺失或置换加以改变,或其中CLIP区域的部分已通过例如缺失或置换加以改变,或其中前17个氨基酸已缺失的恒定链。
由此可见当用于加强免疫应答的随后施用的疫苗是针对所述异常生理学应答的疫苗时,由根据本发明的核酸构建体编码的恒定链可以以其天然、野生型形式,或它可以是恒定链的变体。
在一个实施方案中,本发明涉及核酸构建体用于增加针对异常生理学应答的疫苗效力的用途。
在另一个实施方案中,本发明涉及核酸构建体用于引发免疫应答的用途。
在一个实施方案中,本发明公开了用于增加针对异常生理学应答的疫苗效力的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链或其变体和与异常生理学应答相关的抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用针对异常生理学应答的合适疫苗加强步骤b)的免疫应答。
在一个实施方案中,本发明公开了用于增加针对异常生理学应答的疫苗效力的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链和与异常生理学应答相关的抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用针对异常生理学应答的合适疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链以其天然、野生型形式。
在一个实施方案中,本发明公开了用于增加针对异常生理学应答的疫苗效力的方法,其包括步骤:
a. 提供包括恒定链的变体和与异常生理学应答相关的抗原肽或其片段的核酸构建体,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用针对异常生理学应答的合适疫苗加强步骤b)的免疫应答,
其中所述恒定链的变体包括通过例如缺失或置换的Ii-KEY LRMK氨基酸残基的改变,和/或通过例如缺失或置换的CLIP区域部分的改变,和/或Ii的前17个氨基酸的缺失。
疫苗类型
本发明的一个方面涉及受试者中的免疫应答引发,通过施用包括Ii连接的抗原的核酸构建体来进行,随后为通过给相同受试者施用合适疫苗达到的后续加强。
根据本发明的合适疫苗具有与用于引发免疫应答的核酸构建体共同的至少一个等同特征。所述等同特征可以包括在恒定链的部分或全部、抗原肽的部分或全部、主链结构的部分或全部例如启动子区的部分或全部、增强子的部分或全部、终止子的部分或全部、多聚腺苷酸尾的部分或全部、接头的部分或全部、多聚接头的部分或全部、操作接头的部分或全部、多克隆位点(MCS)的部分或全部、标记的部分或全部、终止密码子的部分或全部、内部核糖体进入位点(IRES)的部分或全部和用于整合的宿主同源序列或其他限定元件的部分或全部中。
在一个优选实施方案中,等同特征是抗原肽或独特辅助T细胞表位的部分或全部。在一个最优选的实施方案中,等同特征是抗原肽的部分或全部。
在另一个优选实施方案中,等同特征是恒定链的部分或全部。
疫苗可以被视为常规或创新的。本文引用的疫苗类型中的任何可以在根据本发明的后续加强步骤中使用。
常规疫苗或第一代疫苗依赖于完整生物;已被杀死的致病菌株,或具有减毒致病性的菌株。
分子生物学技术已用于开发新疫苗,基于来自致病生物的个别抗原蛋白质的第二代疫苗。概念上,抗原肽而不是完整生物的使用将避免致病性,同时提供包含最具免疫原性的抗原的疫苗。这些包括基于众所周知的灭活毒性化合物的基于类毒素的疫苗,和基于灭活或减毒致病菌株的片段的亚单位疫苗。
缀合物疫苗:特定细菌具有弱免疫原性的多糖外衣壳。通过使这些外衣壳与蛋白质(例如毒素)连接,免疫***可以导致识别多糖,如同它是蛋白质抗原。
重组载体疫苗:通过使一种微生物的生理学和另一种的DNA组合,免疫可以针对具有复杂感染过程的疾病产生。
合成疫苗主要或整个由合成肽、碳水化合物或抗原组成。
DNA(或遗传)疫苗或第三代疫苗是用于开发预防和治疗疫苗的新的和有希望的候选物。DNA疫苗由DNA的小环状段(质粒)构成,其已进行遗传改造,以产生来自微生物的一种或多种抗原。将疫苗DNA注射到机体的细胞内,其中宿主细胞的“内部机制”“阅读”DNA,并且将其转变成致病蛋白质。因为这些蛋白质被识别为外来的,所以它们通过宿主细胞加工且在其表面上展示,以改变免疫***,这随后触发一系列免疫应答。确保免疫应答的强度通过载体(即裸露DNA、病毒载体、活减毒病毒等)效力、抗原表达水平和重组抗原自身(即高或低亲和力MHC结合物、对于或多或少有限的T或B细胞储库选择的结构决定簇等)的组合决定。免疫记忆的有效诱导要求或获益于CD4+(辅助细胞)T细胞与介导免疫记忆的许多效应的CD8+(细胞毒性)T细胞和B细胞的相互作用,这一般是真实的。
在本发明的一个实施方案中,用根据本发明的核酸构建体引发免疫应答随后为用于加强所述免疫应答的第一代或常规疫苗的后续施用。
在本发明的一个实施方案中,用根据本发明的核酸构建体引发免疫应答随后为用于加强所述免疫应答的第二代疫苗的后续施用。
在本发明的一个实施方案中,用根据本发明的核酸构建体引发免疫应答随后为用于加强所述免疫应答的第三代或DNA疫苗的后续施用。
在DNA疫苗构建体中使用恒定链以增加免疫原性是本领域众所周知的。在本发明的一个实施方案中,用根据本发明的核酸构建体引发免疫应答随后为用于加强所述免疫应答的DNA疫苗的后续施用,所述DNA疫苗包括恒定链或其变体。
在本发明的一个实施方案中,用根据本发明的核酸构建体引发免疫应答随后为用于加强所述免疫应答的腺病毒疫苗的后续施用。
疫苗可以进一步是单价的(monovalent)(也称为一价的(univalent))或多价的(multivalent)(也称为多价的(polyvalent))。单价疫苗设计为针对单一抗原或单一微生物免疫接种。多价或多价体疫苗设计为针对相同微生物的2种或更多种菌株,或针对2种或更多种微生物免疫接种。
附图详述
图1:用基于Ii链的裸露DNA疫苗的DNA-引发显著增强在用高度有效的病毒载体的后续加强后的病毒特异性CD8+T细胞生成。小鼠用DNA-IiGP、DNA-GP进行基因枪免疫接种2次,相隔3周,或不予以处理。在最后一次免疫接种后3周,所有小鼠在右后足垫中用2x107
IFU Ad5-IiGP注射,并且4周后,处死动物,并且如图1中所述分析脾细胞。表位特异性IFN-γ+CD8+
T细胞数目作为平均值± SE(n=5只小鼠/组)呈现。*指示相对于仅用Ad5-IiGP疫苗接种的小鼠的统计显著性(曼-怀二氏秩和检验)。描述了来自2次相似实验之一的结果。
图2:Ii序列中的结构域和测试突变定位。WT Ii中的结构域在条上描述。ESS;胞内体分选信号,TM;跨膜结构域,KEY;肽呈递增强区域,CLIP;II类结合的恒定链肽,TRIM:三聚结构域。Ii中的缺失突变和置换程度在条下标记。A;Ad-Δ17IiGP,b;Ad-IiLTMGP,c;Ad-IiUTMGP,d;Ad-Δ50IiGP,e;Ad-Ii1-201GP,f;Ad-Ii1-118GP,g;Ad-Ii1-105GP,h;Ad-IiCLIPGP,i;Ad-IiKEYGP,j;Ad-Ii51-118GP。
图3:Ii显著增加SIINFEKL/H-2kb OVA衍生表位的细胞表面呈递。骨髓衍生的树突细胞用Ad-OVA、Ad-IiOVA或Ad-IiGP(阴性对照)转染,并且表面对于MHC II类(染色成熟树突细胞)和用SIINFEKL/H-2kb特异性抗体(OVA表位)染色。
图4:Ii仅以顺式工作。A)来自Ad-IiGP和Ad-Ii + GP载体的Ii的表达;在用50 moi Ad-IiGP和Ad-Ii
+ GP感染的COS7细胞中将Ii表达对GAPDH进行标准化。B)TCR318 GP33限制响应Ad-GP、Ad-IiGP或Ad-Ii + GP转导的BMDC(骨髓衍生的树突细胞)的T细胞增殖。
图5:N末端缺失和置换不影响Ii刺激能力。TCR 318 GP33限制响应Ad-GP、Ad-IiGP、Ad-Δ17IiGP、Ad-IiLTMGP、Ad-IiUTMGP、Ad-Δ50IiGP转导的BMDC(骨髓衍生的树突细胞)的T细胞增殖。
图6:C末端缺失和置换不影响Ii刺激能力。TCR 318 GP33限制响应Ad-GP、Ad-IiGP、Ad-Ii1-205GP、AdIi1-118GP和Ad-Ii1-105GP转导的BMDC(骨髓衍生的树突细胞培养***)的T细胞增殖。
图7:仅N和C末端缺失减少Ii刺激能力。TCR 318 GP33限制响应Ad-GP、Ad-IiGP、Ad-IiCLIPGP、Ad-IiKEYGP和Ad-Ii51-118GP转导的BMDC(骨髓衍生的树突细胞培养***)的T细胞增殖。
图8:Ad-IiGP和Ad-GP疫苗的剂量应答。小鼠组用在指示菌株中的指示疫苗进行疫苗接种。在疫苗接种后14天,处死小鼠,并且用指示表位刺激脾细胞。通过细胞内染色和FACS分析测定特异性CD8+脾细胞的总数目。数据显示Ad-IiGP在极低剂量下诱导应答,并且因此用低剂量Ad-IiGP(或任何抗原)引发和用更高剂量Ad-IiGP(或任何抗原)后续加强可以应用于同源引发-加强方案。
图9:Ad-GP、Ad-IiGP和Ad-IiCLIPGP用于MHC II类呈递(CD4+ T细胞的刺激)的比较。SMARTA GP61-80限制响应Ad-GP、Ad-IiGP和Ad-IiCLIPGP转导的BMDC的T细胞呈递显示增加的Ad-IiCLIPGP的MHCII抗原呈递。
图10:在体内时间-过程研究中的Ad-GP、Ad-IiGP、Ad-GPLamp-1和Ad-IiΔ17GP比较。
图11:Ad-GP、Ad-IiGP、Ad-IiΔ17GP、Ad-IiKEYGP、Ad-IiCLIPGP、Ad-Ii1-117GP和Ad-Ii1-199GP体内应答的比较。
图12:Ad-GP能够引发后续Ad-IiGP加强。3组C57BL/6小鼠用Ad-GP进行疫苗接种。60天后,这些小鼠不受干扰,用Ad-GP进行疫苗接种,或用Ad-IiGP进行疫苗接种。包括用Ad-GP进行疫苗接种的第4组小鼠。第一次疫苗接种后120天,处死小鼠,并且通过用所述肽的先体外后体内再刺激和用于干扰素-γ产生的细胞内染色来定量识别指示表位的抗原特异性细胞。
图13:Ad-IiGP不能引发后续Ad-GP或Ad-IiGP加强。3组C57BL/6小鼠用Ad-IiGP进行疫苗接种。60天后,这些小鼠不受干扰,用Ad-GP进行疫苗接种,或用Ad-IiGP进行疫苗接种。包括用Ad-IiGP进行疫苗接种的第4组小鼠。第一次疫苗接种后120天,处死小鼠,并且通过用所述肽的先体外后体内再刺激和用于干扰素-γ产生的细胞内染色来定量识别指示表位的抗原特异性细胞。这显示Ad-IiGP引发不能用Ad-IiGP加强,而DNA-IiGP引发可以用Ad-IiGP加强(参见图1)。
图14:Ad-GP和AdIi-Gp疫苗的剂量应答。小鼠组用在指示菌株中的指示疫苗进行疫苗接种。在疫苗接种后14天,处死小鼠,并且用指示表位刺激脾细胞。通过细胞内染色和FACS分析测定CD8+脾细胞的总数目。
图15:与包括残基50 – 215(Ii50-215)的恒定链的变体偶联的甘露糖受体进一步与腺病毒纤维蛋白质偶联。腺病毒纤维蛋白质(Ad纤维)可以源自腺病毒的任何血清型。甘露糖受体可以是来自甘露糖受体的一个或多个结构域。Ii可以是Ii的变体或全长。Ag = 抗原。
本发明的实施例
本发明现在将参考下述实施例进一步举例说明。应当理解下述仅作为例子并且可以做出细节中的修饰,同时仍落入本发明的范围内。
实施例
1
:用基于
Ii
链的裸露
DNA
疫苗引发显著加强在用最优化病毒载体的后续加强后的病毒特异性
CD8+T
细胞生成。
用裸露DNA疫苗(即核酸构建体)引发显示加强通过用Ad5(腺病毒血清型5)载体的后续免疫接种产生的免疫应答。用DNA-IiGP(表达与恒定链(Ii)融合的LCMV(淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒)糖蛋白(GP)的DNA构建体)引发在本文中证实显著增强通过在腺病毒血清型5载体(Ad5-IiGP)中递送的相同基因构建体诱导的CD8+ T细胞应答,提供关于在未来异源免疫接种(“引发-加强”)方案中包括基于Ii链的DNA构建体的强论据。
我们的研究显示Ii链连接的免疫增强效应并不限于Ad5载体,还与DNA平台相关。此外,考虑Ii链增强超过一种表位的呈递的事实,这提出基于Ii链的DNA疫苗作为用于各种异源引发-加强方案的非常有希望的候选物。
结果和讨论
改善诱导的T细胞记忆的一种方法是通过异源引发-加强方案,例如裸露DNA引发随后为载体加强。因此具有在我们实验室中的合适载体——表达与p31
Ii链融合的LCMV GP的复制缺陷型腺病毒(Ad5-IiGP),在实验上测试了这种可能性。首先,我们执行了标准DNA疫苗接种,用DNA-IiGP或DNA-GP的基因枪疫苗接种2次,相隔3周。第二次DNA疫苗接种后3周,通过在右后足垫中接种2x107
IFU Ad5-IiGP免疫接种小鼠组和匹配对照,并且4周后,通过关于IFN-γ的ICCS和流式细胞术计数脾中的病毒特异性CD8+
T细胞数目。用融合的DNA构建体引发的小鼠包含比未引发小鼠明显更多的GP33-41和GP276-286特异性IFN-γ+CD8+ T细胞,并且对于GP92-101特异性细胞注意到相似趋势,尽管在这种情况下差异不是统计上显著的。相比之下,在不存在Ii的情况下用编码GP的裸露DNA引发对通过用Ad5-IiGP的后续免疫接种诱导的GP特异性记忆CD8+ T细胞水平具有很少作用(图1)。应当指出观察到的诱导Ii作用不反映疫苗接种小鼠的免疫反应性的非特异性加强,因为用仅包括Ii但不含GP的载体的DNA引发对随后用腺病毒载体接种的小鼠中的GP特异性CD8+
T细胞水平没有作用(数据未显示)。
我们已显示使用改良DNA载体作为异源引发-加强方案的一部分将显著加强通过已最优化的病毒载体诱导的应答(Holst等人,2008)。这强烈指出甚至基于非常免疫原性载体的免疫接种也可以通过用基于Ii链的裸露DNA疫苗最初引发宿主得到进一步改善。总之,因为与抗原的Ii链融合物将导致用于广泛CD8+ T细胞应答的引发,所以基于Ii链的DNA疫苗应代表关于针对快速突变病毒的预防策略作为异源引发-加强方案的一部分的明确优点。
材料与方法
小鼠。C57BL/6(B6)野生型小鼠得自Taconic M&B(Ry,丹麦)。穿孔蛋白缺陷B6小鼠由最初得自The Jackson Laboratory(Bar
Harbor,ME)的育种对当地培育。7 – 10周大的小鼠在所有实验中使用,并且来自外部来源的动物在使用前总是允许适应当地环境至少1周。所有动物在无特殊病原体的条件下饲养,如通过标记(sentinels)筛选验证的。所有动物实验根据国家指导进行。
DNA 疫苗构建和免疫接种程序。DNA疫苗使用真核生物表达载体pACCMV.pLpA产生,所述pACCMV.pLpA包含鼠类恒定链随后为LCMV的GP或单独的LCMV GP。构建体如近期描述的生成(Holst等人,2008)。大肠杆菌菌株XL1-blue(Stratagene,USA)通过电穿孔用构建体进行转化。使用循环测序、Big Dye Terminator和ABI310遗传分析仪(ABIprism,USA)的DNA测序鉴定阳性克隆。引物得自TAG,Copenhagen,丹麦。使用Qiagen Maxi Prep(Qiagen,USA)产生大规模DNA制剂。
基因枪免疫接种。将DNA以2 μg DNA/mg金的浓度包被到1.6 nm金颗粒上,并且将DNA/金复合物包被到塑料管上,从而使得0.5 mg金递送至小鼠/注射(1 μg DNA/注射)。这些程序根据制造商的说明书执行(Biorad,CA,USA)(Bartholdy等人,2003)。小鼠使用采用压缩氦(400 psi)作为粒子原运力的手提式基因枪装置在腹部皮肤上进行免疫接种。除非另有说明,否则小鼠用3-4周的间隔免疫接种2次,并且随后在进一步攻击/研究前允许休息3周。
病毒。LCMV的阿姆斯特朗(Armstrong)毒株克隆13在大多数实验中使用。除非另有说明,否则待感染的小鼠接受在0.3
ml的i.v.注射中的105
pfu,或在右后足垫(f.p.)中在0.03
ml中的20 pfu克隆13剂量。对于i.c.注射,小鼠接受在0.03 ml的体积中的20 pfu的 向神经阿姆斯特朗克隆53b。如近期描述的(Holst等人,2008)产生且滴定编码恒定链连接的GP的复制缺陷型腺病毒(Ad5-IiGP)。
病毒滴定。通过如先前描述的(Battegay等人,1991)免疫焦点测定来测定器官病毒滴度。
CD4+ 和 CD8+ T 细胞的体内耗尽。使用抗CD4(克隆GK1.5)和抗CD8 mAbs(克隆53.6.72)。在相对于感染的第-1和0天时,待耗尽细胞的小鼠腹膜内接受在0.3 ml PBS的体积中的200 □g剂量;而对于假处理,使用纯化的大鼠IgG(Jackson ImmunoResearch)。通过流式细胞术验证细胞耗尽的效率。
存活研究。死亡率用于评估急性LCMV诱导的脑膜炎的临床严重性。小鼠每天检查2次,共14天时间段,或直至达到100%的死亡率。
LCMV 特异性足垫肿胀反应的测定。小鼠如上所述在右后足垫中进行局部感染,并且跟踪局部肿胀反应直至第14天p.i。用指针式测径器(dial caliper)(Mitutoyo 7309,Mitutoyo
Co.,Tokyo,日本)测量足垫厚度,并且病毒特异性肿胀测定为受感染右足和未感染左足厚度的差异(Christensen等人,1994)。
细胞制备。无菌取出来自小鼠的脾细胞,并且转移至Hanks`平衡盐溶液(HBSS)。通过按压器官经由精细无菌钢丝网获得单细胞悬浮液。细胞用HBSS洗涤2次,并且细胞浓度在包含10%胎牛血清(FCS)的RPMI 1640中调整,所述RPMI 1640补充有2-巯基乙醇、L-谷氨酰胺和青霉素-链霉素溶液。
用于流式细胞术的 mAb。下述mAb都作为大鼠抗小鼠抗体购自PharMingen(San
Diego,CA):FITC缀合的抗CD44、Cy-铬缀合的抗CD8a、Cy-铬缀合的抗CD4和藻红蛋白(PE)缀合的抗IFN-γ。
流式细胞术分析。对于LCMV特异性(产生干扰素-γ)CD8+/CD4+
T细胞的显现,使1-2 x 106个脾细胞重悬浮于0.2 ml完全RPMI培养基中,所述完全RPMI培养基补充有10个单位鼠类重组IL-2(R&D Systems
Europe Ltd,Abingdon,UK)、3 μM 莫能星(Sigma Chemicals co.,St
Louis,MO)和1μg/ml相关肽,并且在37℃下孵育5小时。使用下述肽:对于CD8+
T细胞为GP33-41、GP276-86、GP92-101、GP118-125且NP396-404用于对照;对于CD4+
T细胞为GP61-80。在孵育后,细胞进行表面染色,洗涤,渗透化且用IFN-γ特异性mAb染色,如先前描述的(Andreasen等人,2000;Christensen等人,2003)。同种型匹配的抗体充当对照用于非特异性染色。细胞使用FACS
Calibur(Becton Dickinson,San Jose,CA)进行分析,并且使用低角度和侧面散射的组合来门控至少104个活细胞,以排除死细胞和碎片。使用Cell-Quest软件进行数据分析。
实施例
2
:
Ii
连接的抗原增强的
CD8+ T
细胞激活不依赖于天然
Ii
Ii序列包含在抗原加工具有功能的多个区域,其包括:细胞质分选结构域和三聚结构域、细胞质和近侧膜发信号结构域、细胞质、膜内和周质三聚结构域、涉及解锁MHC分子以促进外源肽结合的“key”基序、在CLIP区域中对于MHC I和II类的结合基序、周质糖基化位点以及与CD44和巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)相互作用的在结构上未鉴定的区域(图2)。
Ii连接增加在MHC I和II类上的抗原呈递。通过使用骨髓衍生的树突细胞(BMDC)的Ad-IiOVA(OVA是卵白蛋白)或Ad-OVA转导,我们发现Ii连接的确诱导MHC I类限制性抗原呈递的显著增加,如通过用针对在H-2Kb上呈递的SIINFEKL
OVA表位的抗体的直接染色测量的(图3)。增加的来自Ii连接的序列的MHC I类限制性抗原的表达直接作用于APC,不依赖于MHC II类、CD4+ T细胞和任何其他细胞类型,并且可以在树突细胞培养中直接测量。
以顺式的
Ii
为了确定Ii是仅以顺式还是也以反式工作,通过合成具有β-珠蛋白多聚腺苷酸化信号的磷酸甘油酸酯激酶(pGK)启动子,并且将其克隆到腺病毒骨架的E3区域内,建立在腺病毒载体内的另外读码框。这种载体随后可以用于与穿梭载体重组,所述穿梭载体用于制备Ad-GP载体(其表达在人CMV启动子和SV40多聚腺苷酸的控制下来自E1读码框的LCMV GP)。新载体表达来自腺病毒E1区的LCMV GP和来自E3区的Ii(Ad-Ii+GP)。启动子通过转染到COS7细胞内就绿色荧光细胞的诱导进行验证,并且在Ad-IiGP和Ad-Ii+GP感染的COS7细胞中Ii mRNA表达的测量证实Ii由pGK启动子表达至少与由CMV启动子表达一样有效(图4A)。用Ad-GP、Ad-IiGP和Ad-Ii+GP感染的BMDC刺激的TCR318细胞的比较显示Ii必须与抗原连接,以具有任何作用(图4B)。如果以反式的Ii表达已显示功效那将是令人惊讶的,因为用于刺激的BMDC培养物已表达Ii。
N
末端改变:
从N末端开始,我们进行1)前17个氨基酸的缺失(Ad-Δ17IiGP),这去除基于亮氨酸的胞内体分选信号,2)用来自趋化因子受体CCR6 TM6的相应区段替换跨膜区段的前一半(Ad-IiLTMGP),3)用相应CCR6 TM6区段替换跨膜区段的另一半(Ad-IiUTMGP),和最后4)前50个氨基酸的完全缺失(Ad- Δ50IiGP)。后面一种缺失去除整个细胞溶质、TM和膜近侧区。这些突变无一对其余Ii序列增强CD8+ T细胞刺激的能力具有任何作用(图5)。
C
末端改变:
从C末端我们进行最后14个aa(Ad-Ii1-201GP,这去除C末端糖基化信号)、最后97个aa(Ad-Ii1-118GP)和最后110个aa(Ad-Ii1-105GP)的缺失。通过1-201未观察到对其余Ii序列增强CD8+ T细胞刺激的能力的作用,而从1-105突变和1-118突变仅可见不一致和较小的减少趋势(图6)。
突变:
我们还尝试在报道的CLIP 区域的MHC I类结合位点(Ad-IiCLIPGP:双重的M至A点突变 - M91A M99A – 设计为取消Ii与MHC I类分子的相互作用)和KEY基序(Ad-IiKEYGP:LRMK至AAAA的四重的点突变,这将破坏Ii-KEY区段)中进行点突变。这些突变无一对于Ii介导的增强的CD8+ T细胞刺激是关键的。当我们组合N和C末端截短(truncation)时,唯一有趣的数据出现。因此,当我们测试51-118变体(Ad-Ii51-118GP)时,观察到CD8+ T细胞刺激能力的显著减少,但突变体仍优于Ad-GP(图7)。
实施例
3
在本发明的一个实施方案中,提供了与Ii偶联的与糖基结合蛋白质组合的非人糖基转移酶。Ii可以是全长或变体,其中变体可以是包括残基编号50 – 215的Ii的截短形式。这种变体具有完全活性,尽管缺乏跨膜结构域。任选地,可以进一步提供佐剂或一个或多个易位结构域。在图15中提供的是一个实施方案的示意图,其中甘露糖受体(在疫苗中通常靶向的钙依赖性凝集素)与包括残基50 – 215的恒定链的变体(Ii50-215)偶联,与腺病毒纤维蛋白质进一步偶联。腺病毒纤维蛋白质(Ad纤维)可以源于腺病毒的任何血清型。甘露糖受体可以是来自甘露糖受体的一个或多个结构域。
在一个特定例子中,提供了这样的腺病毒:在一个读码框中表达Egghead(来自果蝇的蛋白质),并且在另一个读码框中表达甘露糖受体(或来自甘露糖受体的结构域),所述受体与不含跨膜区的具有完全活性的Ii变体例如Ii50-215变体,其与腺病毒纤维蛋白质进一步偶联。
糖基转移酶例如Egghead和糖基结合蛋白质例如甘露糖受体可以由在相同腺病毒载体中的不同读码框表达,或糖基转移酶例如Egghead和糖基结合蛋白质例如甘露糖受体可以由同时施用的不同腺病毒载体表达。
Egghead在所有糖基化ER(内质网)蛋白质上偶联甘露糖。分泌蛋白质的甘露糖基化可以因此引起甘露糖化蛋白质与甘露糖受体-Ii-Ad纤维复合物的结合(如图15中所示)。复合物的腺病毒纤维引起与所述复合物连接的分泌蛋白质由其他细胞吸收,激活这些以变得免疫刺激的,并且提供复合物对Ii可以在其中发挥其作用的细胞溶质的接近。
这种技术可以用于构建可以直接施用到例如癌症内的疫苗。
参考文献列表
Andreasen,S. O.,Christensen,J. E.,Marker,O. & Thomsen,A. R.(2000). Role of CD40
ligand and CD28 in induction and maintenance of antiviral CD8+ effector T cell
responses. J Immunol 164,3689-3697.
Bartholdy,C.,Stryhn,A.,Hansen,N. J.,Buus,S. & Thomsen,A. R.(2003). Incomplete
effector/memory differentiation of antigen-primed CD8+ T cells in gene gun
DNA-vaccinated mice. Eur J Immunol 33,1941-1948.
Battegay,M.,Cooper,S.,Althage,A.,Banziger,J.,Hengartner,H.和Zinkernagel,R.M.(1991). Quantification
of lymphocytic choriomeningitis virus with an immunological focus assay in 24-
or 96-well plates. J.Virol.Methods 33:191-198.
Becker,T.C.,Noel,R.J.,Coats,W.S.,Gomez-Foix,A.M.,Alam,T.,Gerard,R.D.和Newgard,C.B.(1994). Use of recombinant adenovirus for metabolic engineering
of mammalian cells. Methods Cell Biol. 43 Pt A:161-189.
Christensen,J. P.,Marker,O. & Thomsen,A. R.(1994). The role of CD4+ T cells in cell-mediated immunity to
LCMV:studies in MHC class I and class II
deficient mice. Scand J Immunol 40,373-382.
Christensen,J. P.,Kauffmann,S. O. &
Thomsen,A. R.(2003). Deficient CD4+ T cell priming and regression of CD8+ T cell
functionality in virus-infected mice lacking a normal B cell compartment. J
Immunol 171,4733-4741.
Diebold,S. S.,M.
Cotten,N. Koch和M.
Zenke.(2001). MHC
class II presentation of endogenously expressed antigens by transfected
dendritic cells. Gene Ther. 8:487-493.
Holmes JP,Benavides LC,Gates JD,Carmichael MG,Hueman MT,Mittendorf EA,Murray JL,Amin A,Craig D,von Hofe E,Ponniah S,Peoples GE.(2008). Results of the
first phase I clinical trial of the novel II-key hybrid preventive HER-2/neu
peptide(AE37)vaccine.
J Clin Oncol. Jul 10;26(20):3426-33.
Holst,P. J.,Sorensen,M. R.,Mandrup Jensen,C. M.,Orskov,C.,Thomsen,A. R. & Christensen,J. P.(2008). MHC Class
II-Associated Invariant Chain Linkage of Antigen Dramatically Improves
Cell-Mediated Immunity Induced by Adenovirus Vaccines. J Immunol 180,3339-3346.
Kallinteris NL,Lu X,Blackwell CE,von
Hofe E,Humphreys RE,Xu M.(2006). Ii-Key/MHC class II epitope hybrids:a strategy that enhances MHC class II epitope loading to
create more potent peptide vaccines. Expert Opin. Biol. Ther. 6(12):1311-1321.
Morris,C. R.,A. J.
Reber,J. L. Petersen,S. E. Vargas和J. C.
Solheim.(2004).
Association of intracellular proteins with folded major histocompatibility
complex class I molecules. Immunol.Res. 30:171-179.
Pieters,J.(1997). MHC class II restricted antigen presentation. Curr.Opin.Immunol.
9:89-96.
Sambrook等人,编辑,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold
Spring Harbor Laboratory,2nd Edition,Cold Spring Harbor,N.Y.,1989.
Strumptner-Cuvelette,P.和P. Benaroch.(2002). Multiple roles of the invariant chain in MHC class II
function. Biochem. Biophys. Acta.,1542:1-13.
WO 2007/062656
US 2008/0095798
WO 2003/089471
US 5,554,372
US 5,876,735
5,102,985。
序列表
<110> Holst,
Peter Johannes
Thomsen, Allan Randrup
Christensen, Jan Pravsgaard
Grujic, Mirjana
<120> 免疫应答的引发
<130> P1982DK00
<140> PA 2008 01638
<141> 2008-11-21
<160> 4
<170> FastSEQ
for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 1287
<212> DNA
<213> 智人 - 恒定链
<400> 1
ctgcaggggg gggggggggg gggggggaca
ttggctcttc cttggggagt gatgcacagg 60
aggagaagca ggagctgtcg ggaagatcag
aagccagtca tggatgacca gcgcgacctt 120
atctccaaca atgagcaact gcccatgctg
ggccggcgcc ctggggcccc ggagagcaag 180
tgcagccgcg gagccctgta cacaggcttt
tccatcctgg tgactctgct cctcgctggc 240
caggccacca ccgcctactt cctgtaccag
cagcagggcc ggctggacaa actgacagtc 300
acctcccaga acctgcagct ggagaacctg
cgcatgaagc ttcccaagcc tcccaagcct 360
gtgagcaaga tgcgcatggc caccccgctg
ctgatgcagg cgctgcccat gggagccctg 420
ccccaggggc ccatgcagaa tgccaccaag
tatggcaaca tgacagagga ccatgtgatg 480
cacctgctcc agaatgctga ccccctgaag
gtgtacccgc cactgaaggg gagcttcccg 540
gagaacctga gacaccttaa gaacaccatg
gagaccatag actggaaggt ctttgagagc 600
tggatgcacc attggctcct gtttgaaatg
agcaggcact ccttggagca aaagcccact 660
gacgctccac cgaaagagtc actggaactg
gaggacccgt cttctgggct gggtgtgacc 720
aagcaggatc tgggcccagt ccccatgtga
gagcagcaga ggcggtcttc aacatcctgc 780
cagccccaca cagctacagc tttcttgctc
ccttcagccc ccagcccctc ccccatctcc 840
caccctgtac ctcatcccat gagaccctgg
tgcctggctc tttcgtcacc cttggacaag 900
acaaaccaag tcggaacagc agataacaat
gcagcaaggc cctgctgccc aatctccatc 960
tgtcaacagg ggcgtgaggt cccaggaagt
ggccaaaagc tagacagatc cccgttcctg 1020
acatcacagc agcctccaac acaaggctcc
aagacctagg ctcatggacg agatgggaag 1080
gcacagggag aagggataac cctacaccca
gaccccaggc tggacatgct gactgtcctc 1140
tcccctccag cctttggcct tggcttttct
agcctattta cctgcaggct gagccactct 1200
cttccctttc cccagcatca ctccccaagg
aagagccaat gttttccacc catccctccc 1260
cccccccccc cccccccccc cctgcag 1287
<210> 2
<211> 216
<212> PRT
<213> 智人 - 恒定链
<400> 2
Met Asp Asp
Gln Arg Asp Leu Ile Ser Asn
Asn Glu Gln
Leu Pro Met
1
5 10 15
Leu Gly Arg Arg Pro Gly Ala Pro Glu Ser Lys Cys
Ser Arg Gly Ala
20 25 30
Leu Tyr Thr Gly Phe Ser Ile
Leu Val Thr Leu Leu Leu
Ala Gly Gln
35 40 45
Ala Thr
Thr Ala Tyr Phe Leu Tyr
Gln Gln Gln
Gly Arg Leu
Asp Lys
50 55 60
Leu Thr Val Thr Ser Gln Asn Leu
Gln Leu Glu
Asn Leu Arg
Met Lys
65 70 75 80
Leu Pro Lys Pro Pro Lys Pro Val Ser Lys Met Arg Met Ala Thr Pro
85 90 95
Leu Leu Met Gln Ala Leu Pro Met Gly Ala Leu Pro Gln Gly
Pro Met
100 105 110
Gln Asn Ala Thr Lys Tyr Gly
Asn Met Thr Glu Asp His Val Met His
115 120 125
Leu Leu Gln Asn Ala Asp Pro Leu Lys Val Tyr Pro Pro Leu Lys
Gly
130 135 140
Ser Phe
Pro Glu Asn Leu Arg His Leu
Lys Asn Thr
Met Glu Thr Ile
145 150 155 160
Asp Trp
Lys Val Phe Glu Ser Trp Met His His Trp Leu
Leu Phe Glu
165 170 175
Met Ser Arg
His Ser Leu Glu Gln Lys Pro Thr
Asp Ala Pro Pro Lys
180 185 190
Glu Ser Leu Glu Leu Glu Asp Pro Ser Ser Gly Leu
Gly Val Thr Lys
195 200 205
Gln Asp Leu Gly Pro Val
Pro Met
210 215
<210> 3
<211> 648
<212> DNA
<213> 小家鼠 - 恒定链
<400> 3
atggatgacc aacgcgacct catctctaac
catgaacagt tgcccatact gggcaaccgc 60
cctagagagc cagaaaggtg cagccgtgga
gctctgtaca ccggtgtctc tgtcctggtg 120
gctctgctct tggctgggca ggccaccact
gcttacttcc tgtaccagca acagggccgc 180
ctagacaagc tgaccatcac ctcccagaac
ctgcaactgg agagccttcg catgaagctt 240
ccgaaatctg ccaaacctgt gagccagatg
cggatggcta ctcccttgct gatgcgtcca 300
atgtccatgg ataacatgct ccttgggcct
gtgaagaacg ttaccaagta cggcaacatg 360
acccaggacc atgtgatgca tctgctcacg
aggtctggac ccctggagta cccgcagctg 420
aaggggacct tcccagagaa tctgaagcat
cttaagaact ccatggatgg cgtgaactgg 480
aagatcttcg agagctggat gaagcagtgg
ctcttgtttg agatgagcaa gaactccctg 540
gaggagaaga agcccaccga ggctccacct
aaagagccac tggacatgga agacctatct 600
tctggcctgg gagtgaccag gcaggaactg
ggtcaagtca ccctgtga 648
<210> 4
<211> 215
<212> PRT
<213> 小家鼠 - 恒定链
<400> 4
Met Asp Asp
Gln Arg Asp Leu Ile Ser Asn
His Glu Gln Leu Pro Ile
1
5 10 15
Leu Gly Asn Arg Pro Arg Glu
Pro Glu Arg Cys Ser Arg Gly
Ala Leu
20 25 30
Tyr Thr Gly Val Ser Val Leu Val Ala Leu Leu Leu Ala Gly
Gln Ala
35 40 45
Thr Thr Ala Tyr Phe Leu Tyr
Gln Gln Gln
Gly Arg Leu
Asp Lys Leu
50 55 60
Thr Ile Thr Ser Gln Asn Leu
Gln Leu Glu
Ser Leu Arg Met Lys Leu
65 70 75 80
Pro Lys
Ser Ala Lys Pro Val Ser Gln
Met Arg Met Ala Thr Pro Leu
85 90 95
Leu Met Arg Pro Met Ser Met Asp Asn
Met Leu Leu Gly Pro Val Lys
100 105 110
Asn Val Thr Lys Tyr Gly Asn
Met Thr Gln Asp His Val Met
His Leu
115 120 125
Leu Thr Arg Ser Gly Pro Leu Glu
Tyr Pro Gln Leu Lys Gly
Thr Phe
130 135 140
Pro Glu
Asn Leu Lys
His Leu Lys Asn Ser Met Asp Gly Val Asn Trp
145 150 155 160
Lys Ile Phe Glu Ser Trp Met Lys Gln Trp
Leu Leu Phe
Glu Met Ser
165 170 175
Lys Asn Ser Leu Glu Glu Lys
Lys Pro Thr Glu Ala Pro Pro Lys Glu
180 185 190
Pro Leu
Asp Met Glu Asp Leu Ser Ser Gly Leu
Gly Val Thr Arg Gln
195 200 205
Glu Leu Gly Gln Val Thr Leu
210 215
Claims (68)
1.一种核酸构建体,其包括编码下述的序列:
a. 与b可操作地连接的至少一种恒定链或其变体,
b. 至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段,
其中所述核酸构建体用于癌症疫苗的引发,和/或所述恒定链或其变体不包括前17个氨基酸,和/或所述恒定链或其变体不包括KEY区域的LRMK氨基酸残基,和/或所述恒定链包括CLIP区域的变体。
2.根据权利要求1的核酸构建体,其用作用于刺激免疫应答的引发物,从而增加后续施用的疫苗的效力。
3.根据权利要求1的核酸构建体,其中至少一种恒定链或其变体是生物特异性的。
4.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中至少一种恒定链或其变体是人源的。
5.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中所述至少一种恒定链的至少一个区域、肽或结构域加入、去除或置换所述至少一种恒定链的区域、肽或结构域。
6.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中所述至少一种恒定链的KEY区域的LRMK氨基酸残基中的1、2、3或4个由其他氨基酸残基置换。
7.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中所述至少一种恒定链的KEY区域的LRMK氨基酸残基中的1、2、3或4个由丙氨酸置换。
8.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中所述至少一种恒定链的KEY区域的LRMK氨基酸残基中的1、2、3或4个是缺失的。
9.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中所述至少一种恒定链的CLIP区域在位置91和99上的甲硫氨酸氨基酸残基由其他氨基酸残基置换。
10.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中所述至少一种恒定链的CLIP区域在位置91和99上的甲硫氨酸氨基酸残基由丙氨酸置换。
11.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中所述至少一种恒定链的前17个氨基酸是缺失的(Δ17Ii)。
12.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中所述恒定链包括与来自另一种蛋白质的三聚结构域偶联的氨基酸残基编号50 - 118。
13.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中所述至少一种恒定链或其片段引起以CD4+ T细胞依赖性和/或不依赖性方式的MHC-I和/或MHC-II依赖性免疫应答。
14.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段选自:致病性生物、癌症特异性多肽和与异常生理学应答相关的蛋白质或肽。
15.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中来自致病性生物的所述至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段选自包括下述的病原体:病毒、微生物和寄生虫。
16.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段来自哺乳动物生物,优选人病原体。
17.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段来自癌症特异性多肽。
18.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段来自选自下述的癌症特异性多肽:HPV衍生的病毒癌基因E5、E6、E7和L1;存活素、Bcl-XL、MCL-1和Rho-C。
19.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段是与权利要求14 – 18所述抗原中的任何至少85%等同的抗原肽或蛋白质。
20.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中在所述恒定链或其变体和所述抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段之间的操作接头选自:直接连接或由间隔区介导的连接。
21.根据权利要求20的核酸构建体,其中所述操作接头是间隔区。
22.根据权利要求21的核酸构建体,其中所述间隔区编码关于MHC
II类分子的至少一个辅助表位。
23.根据权利要求21的核酸构建体,其中所述间隔区编码至少一个蛋白酶切割位点。
24.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中至少一种恒定链与至少2种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段可操作地连接。
25.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中使得所述构建体能够表达的启动子在所述至少一种可操作地连接的恒定链或其变体和至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段编码序列前。
26.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其中所述启动子选自组成型启动子、诱导型启动子、生物特异性启动子、组织特异性启动子和细胞类型特异性启动子、CMV启动子、SV40启动子和RSV启动子。
27.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其包括与抗原呈递和/或细胞内散布有关的基因。
28.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体,其包括编码佐剂的基因。
29.一种递送媒介物,其包括根据前述权利要求中任一项的核酸构建体。
30.根据权利要求29的递送媒介物,其中所述媒介物选自:基于RNA的媒介物、基于DNA的媒介物/载体、基于脂质的媒介物、基于聚合物的媒介物和病毒衍生的DNA或RNA媒介物。
31.根据权利要求30的递送媒介物,其中所述递送媒介物是聚乙二醇化的载体或媒介物。
32.根据权利要求30的递送媒介物,其中所述基于脂质的媒介物是脂质体。
33.根据权利要求30的递送媒介物,其中所述基于聚合物的媒介物由选自下述的阳离子聚合物DNA载体形成:聚乙烯亚胺(PEI)、聚乙二胺和聚丙胺树状聚体、聚烯丙胺、阳离子右旋糖酐、壳聚糖、阳离子蛋白质(聚赖氨酸、鱼精蛋白和组蛋白)、阳离子肽、多肽、脂多糖和多糖。
34.根据权利要求33的递送媒介物,其中所述递送媒介物是生物可降解聚合物微球体。
35.根据权利要求30的递送媒介物,其中所述递送媒介物包括将所述核酸构建体包被到胶体金颗粒上。
36.一种用于施用根据权利要求29 – 35中任一项的递送媒介物的方法,其中所述施用选自针注射、基因枪、射流注射、电穿孔、超声和水动力递送。
37.一种用于施用根据权利要求29 – 35中任一项的核酸构建体的方法,其中所述施用选自针注射、基因枪、射流注射、电穿孔、超声和水动力递送。
38.一种细胞,其包括如权利要求1 – 28中任一项中定义的核酸构建体。
39.一种嵌合蛋白质,其包括至少一种可操作地连接的恒定链或其变体和至少一种抗原蛋白质或肽,编码其的序列如通过权利要求1 – 28中任一项中的核酸构建体中的任何定义的。
40.一种抗体,其可以识别如权利要求39中定义的嵌合蛋白质。
41.根据权利要求40的抗体在用于检测所述抗体与之结合的蛋白质的测定中的用途。
42.一种组合物,其包括编码下述的核酸序列:
a. 与b可操作地连接的至少一种恒定链或其变体,
b. 至少一种抗原蛋白质或肽或所述蛋白质或肽的抗原片段。
43.一种用作药物的组合物,其包括编码下述的核酸序列:
a. 与b可操作地连接的至少一种恒定链或其变体,
b. 至少一种多肽。
44.根据权利要求42和43中任一项的组合物,其包括如权利要求1 – 28中任一项中定义的核酸构建体。
45.根据权利要求42 - 44中任一项的组合物,其中所述组合物包括至少2种载体。
46.一种组合物,其包括根据权利要求39的至少一种嵌合蛋白质,如通过权利要求1 – 28中任一项中的核酸构建体中的任何定义的。
47.根据权利要求42 - 46中任一项的组合物,其中所述组合物包括佐剂。
48.一种部分试剂盒,其包括:
a. 包括根据权利要求1 – 28中任一项的核酸构建体的组合物,
b. 用于施用所述组合物的医疗器械或其他装置,
c. 关于如何使用所述部分试剂盒的说明书。
49.根据权利要求48的部分试剂盒,其中所述试剂盒包括第二种活性成分。
50.根据权利要求49的部分试剂盒,其中所述第二种活性成分是合适疫苗。
51.一种用于增加疫苗效力的方法,其包括步骤:
a. 提供根据权利要求1 – 28中任一项的核酸构建体、或根据权利要求42 – 47中任一项的组合物,
b. 通过施用步骤a)的核酸构建体或组合物引发受试者的免疫***,从而刺激所述受试者中的免疫应答,和
c. 通过施用合适疫苗加强步骤b)的免疫应答。
52.根据权利要求51的方法,其中用于引发免疫应答的所述核酸构建体的至少一部分和用于加强所述免疫应答的所述疫苗是等同的。
53.根据权利要求52的方法,其中所述等同部分是所述抗原肽或蛋白质的部分。
54.根据权利要求52的方法,其中所述等同部分是遍在辅助T细胞表位。
55.根据权利要求51的方法,其中所述免疫应答是MHC-I依赖性的。
56.根据权利要求51的方法,其中所述免疫应答是MHC-II依赖性的。
57.根据权利要求51的方法,其中所述免疫应答是MHC-I和MHC-II依赖性的。
58.根据权利要求51的方法,其中所述免疫应答是T细胞依赖性的。
59.根据权利要求51的方法,其中所述免疫应答是CD4+
T细胞依赖性的。
60.根据权利要求51的方法,其中所述免疫应答是CD4+
T细胞不依赖性的。
61.根据权利要求51的方法,其中所述免疫应答是CD8+
T细胞依赖性的。
62.根据权利要求51 – 61中任一项的方法,其包括步骤:
a. 提供根据权利要求42 – 47中任一项的至少一种组合物,
b. 给受试者施用所述至少一种组合物至少一次用于动物的治疗或预防。
63.根据权利要求51 – 62中任一项的方法,其中所述组合物施用于最可能是给定感染的接受器的区域。
64.根据权利要求51 – 63中任一项的方法,其中所述受试者是人。
65.根据权利要求51 – 63中任一项的方法,其中所述受试者是哺乳动物。
66.根据权利要求51 – 63中任一项的方法,其中所述受试者是雪貂。
67.根据权利要求51 – 63中任一项的方法,其中所述受试者是鱼。
68.根据权利要求51 – 63中任一项的方法,其中所述受试者是鸟。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710007117.6A CN107090472A (zh) | 2008-11-21 | 2009-11-20 | 免疫应答的引发 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DKPA200801638 | 2008-11-21 | ||
DKPA200801638 | 2008-11-21 | ||
PCT/DK2009/050310 WO2010057501A1 (en) | 2008-11-21 | 2009-11-20 | Priming of an immune response |
Related Child Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710007117.6A Division CN107090472A (zh) | 2008-11-21 | 2009-11-20 | 免疫应答的引发 |
CN201410485599.2A Division CN104404068A (zh) | 2008-11-21 | 2009-11-20 | 免疫应答的引发 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102292102A true CN102292102A (zh) | 2011-12-21 |
Family
ID=40823418
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2009801549244A Pending CN102292102A (zh) | 2008-11-21 | 2009-11-20 | 免疫应答的引发 |
CN201710007117.6A Pending CN107090472A (zh) | 2008-11-21 | 2009-11-20 | 免疫应答的引发 |
CN201410485599.2A Pending CN104404068A (zh) | 2008-11-21 | 2009-11-20 | 免疫应答的引发 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710007117.6A Pending CN107090472A (zh) | 2008-11-21 | 2009-11-20 | 免疫应答的引发 |
CN201410485599.2A Pending CN104404068A (zh) | 2008-11-21 | 2009-11-20 | 免疫应答的引发 |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US20110293704A1 (zh) |
EP (3) | EP2865387B1 (zh) |
JP (4) | JP2012509071A (zh) |
CN (3) | CN102292102A (zh) |
AU (1) | AU2009317691A1 (zh) |
BR (1) | BRPI0921927B8 (zh) |
CA (1) | CA2743229A1 (zh) |
CY (1) | CY1122117T1 (zh) |
DK (1) | DK2865387T3 (zh) |
ES (1) | ES2743677T3 (zh) |
HK (1) | HK1209645A1 (zh) |
HR (1) | HRP20191594T1 (zh) |
HU (1) | HUE045093T2 (zh) |
IL (4) | IL212914A0 (zh) |
LT (1) | LT2865387T (zh) |
PL (1) | PL2865387T3 (zh) |
PT (1) | PT2865387T (zh) |
RU (2) | RU2011125306A (zh) |
SI (1) | SI2865387T1 (zh) |
WO (1) | WO2010057501A1 (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105307674A (zh) * | 2013-03-15 | 2016-02-03 | 葛兰素史密斯克莱生物公司 | 改进的痘病毒疫苗 |
CN108601820A (zh) * | 2015-10-12 | 2018-09-28 | 南托米克斯有限责任公司 | 用于病毒癌症新表位的组合物和方法 |
US10576143B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-03-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Poxviral vaccines |
CN111729093A (zh) * | 2020-06-29 | 2020-10-02 | 南京超维景生物科技有限公司 | 一种造影剂成膜剂组合物、造影剂成膜脂液、造影剂及其制备方法 |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK2121048T3 (en) | 2007-02-19 | 2015-11-23 | Marinepolymer Tech Inc | Hemostatic compositions and therapeutic regimens |
US9061066B2 (en) * | 2010-06-04 | 2015-06-23 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Immunoadjuvant compounds and uses thereof |
GB201115095D0 (en) | 2011-09-01 | 2011-10-19 | Singapore Volition Pte Ltd | Method for detecting nucleosomes containing nucleotides |
WO2013054199A2 (en) * | 2011-10-12 | 2013-04-18 | Novartis Ag | Cmv antigens and uses thereof |
BR112014013082B1 (pt) | 2011-12-07 | 2021-02-02 | Singapore Volition Pte Limited | uso de um aduto nucleossomo-proteína e métodos para detectar a presença de um aduto nucleossomo-proteína |
US9962436B2 (en) | 2012-07-26 | 2018-05-08 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Multimeric fusion protein vaccine and immunotherapeutic |
PL2968440T3 (pl) | 2013-03-15 | 2019-12-31 | Zymeworks Inc. | Związki cytotoksyczne i antymitotyczne oraz sposoby ich stosowania |
SG10201801428RA (en) * | 2013-08-21 | 2018-03-28 | Curevac Ag | Method for increasing expression of rna-encoded proteins |
GB201321384D0 (en) * | 2013-12-04 | 2014-01-15 | Isis Innovation | Molecular adjuvant |
US10675355B2 (en) * | 2013-12-27 | 2020-06-09 | Var2 Pharmaceuticals Aps | VAR2CSA-drug conjugates |
EP3086815B1 (en) | 2013-12-27 | 2022-02-09 | Zymeworks Inc. | Sulfonamide-containing linkage systems for drug conjugates |
WO2017025782A1 (en) | 2014-09-17 | 2017-02-16 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Improved poxviral vaccines |
RS62860B1 (sr) | 2014-09-17 | 2022-02-28 | Zymeworks Inc | Citotoksična i antimitotička jedinjenja, i postupci upotrebe istih |
AU2016369519B2 (en) | 2015-12-16 | 2023-04-20 | Gritstone Bio, Inc. | Neoantigen identification, manufacture, and use |
EP3504230A1 (en) * | 2016-08-23 | 2019-07-03 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Fusion peptides with antigens linked to short fragments of invariant chain (cd74) |
WO2018060288A1 (en) | 2016-09-29 | 2018-04-05 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Compositions and methods of treatment of persistent hpv infection |
US10517958B2 (en) | 2016-10-04 | 2019-12-31 | Zymeworks Inc. | Compositions and methods for the treatment of platinum-drug resistant cancer |
GB201620968D0 (en) | 2016-12-09 | 2017-01-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Adenovirus polynucleotides and polypeptides |
GB201704417D0 (en) * | 2017-03-20 | 2017-05-03 | Univ Copenhagen | Improved li vaccine adjuvant |
BR112020000581A2 (pt) * | 2017-07-12 | 2020-07-14 | Nouscom Ag | polipeptídeo, ácido nucleico, vetor, coleção de um ou mais vetores de expressão, composição compreendendo uma vacina e kit de vacinação |
AU2018348165A1 (en) | 2017-10-10 | 2020-05-21 | Gritstone Bio, Inc. | Neoantigen identification using hotspots |
KR20200076696A (ko) * | 2017-11-03 | 2020-06-29 | 노우스콤 아게 | 백신 t 세포 인핸서 |
JP2021503897A (ja) | 2017-11-22 | 2021-02-15 | グリットストーン オンコロジー インコーポレイテッド | 新生抗原のためのジャンクションエピトープ提示の低減 |
GB201721069D0 (en) | 2017-12-15 | 2018-01-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hepatitis B Immunisation regimen and compositions |
GB201721068D0 (en) | 2017-12-15 | 2018-01-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hepatitis B immunisation regimen and compositions |
CN108285885A (zh) * | 2017-12-28 | 2018-07-17 | 中国农业大学 | 一种霍乱弧菌菌影制备方法及其在家禽疫苗中的应用 |
US11702674B2 (en) | 2018-06-12 | 2023-07-18 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Simian adenovirus vectors comprising the ChAd-157 fiber protein |
JP2022504315A (ja) * | 2018-10-19 | 2022-01-13 | ノイスコム アーゲー | 硬骨魚類インバリアント鎖癌ワクチン |
WO2020128012A1 (en) | 2018-12-21 | 2020-06-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Methods of inducing an immune response |
RU2725493C2 (ru) * | 2018-12-28 | 2020-07-02 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) | Система для стабильной экспрессии опухоль-ассоциированных антигенов на основе лентивирусного вектора |
EP3934687A1 (en) | 2019-03-05 | 2022-01-12 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Hepatitis b immunisation regimen and compositions |
EP4137153A1 (en) | 2021-08-18 | 2023-02-22 | Sirion Biotech GmbH | Therapeutic papilloma virus vaccines |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1373668A (zh) * | 1999-09-14 | 2002-10-09 | 抗原表达公司 | 杂交肽调制免役反应 |
US20040058881A1 (en) * | 2002-09-24 | 2004-03-25 | Antigen Express, Inc. | Ii-key/antigenic epitope hybrid peptide vaccines |
WO2007062656A2 (en) * | 2005-11-30 | 2007-06-07 | Copenhagen University | A nucleotide vaccine |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US587673A (en) | 1897-08-03 | higgins | ||
US58767A (en) | 1866-10-16 | John brougjbton | ||
US5554372A (en) | 1986-09-22 | 1996-09-10 | Emory University | Methods and vaccines comprising surface-active copolymers |
JP2682061B2 (ja) | 1988-10-07 | 1997-11-26 | 藤沢薬品工業株式会社 | ペプチドの分子内ジスルフィド結合の形成法 |
US5559028A (en) * | 1993-05-19 | 1996-09-24 | Antigen Express, Inc. | Methods of enhancing or antigen presentation to T cells inhibiting |
US5876735A (en) | 1994-04-22 | 1999-03-02 | Corixa Corporation | Methods for enhancement of protective immune responses |
WO1997049430A1 (en) * | 1996-06-26 | 1997-12-31 | Antigen Express, Inc. | Immunotherapy by modulation of antigen presentation |
JP2002520000A (ja) * | 1998-05-13 | 2002-07-09 | エピミューン, インコーポレイテッド | 免疫応答を刺激するための発現ベクターおよびそのベクターの使用方法 |
GB0208817D0 (en) | 2002-04-17 | 2002-05-29 | European Molecular Biology Lab Embl | Method for producing monoclonal antibodies |
US20080095798A1 (en) * | 2006-10-18 | 2008-04-24 | Robert Humphreys | Ii-key enhanced vaccine potency |
US9085638B2 (en) * | 2007-03-07 | 2015-07-21 | The Johns Hopkins University | DNA vaccine enhancement with MHC class II activators |
US8748130B2 (en) * | 2008-09-02 | 2014-06-10 | Antigen Express, Inc. | Human papillomavirus / Ii-Key hybrids and methods of use |
-
2009
- 2009-11-20 EP EP15152408.9A patent/EP2865387B1/en active Active
- 2009-11-20 CN CN2009801549244A patent/CN102292102A/zh active Pending
- 2009-11-20 BR BRPI0921927A patent/BRPI0921927B8/pt active Search and Examination
- 2009-11-20 CN CN201710007117.6A patent/CN107090472A/zh active Pending
- 2009-11-20 PT PT15152408T patent/PT2865387T/pt unknown
- 2009-11-20 WO PCT/DK2009/050310 patent/WO2010057501A1/en active Application Filing
- 2009-11-20 US US13/129,857 patent/US20110293704A1/en not_active Abandoned
- 2009-11-20 EP EP09760468A patent/EP2355842A1/en not_active Withdrawn
- 2009-11-20 JP JP2011536741A patent/JP2012509071A/ja active Pending
- 2009-11-20 CN CN201410485599.2A patent/CN104404068A/zh active Pending
- 2009-11-20 ES ES15152408T patent/ES2743677T3/es active Active
- 2009-11-20 CA CA2743229A patent/CA2743229A1/en active Pending
- 2009-11-20 DK DK15152408.9T patent/DK2865387T3/da active
- 2009-11-20 EP EP19173464.9A patent/EP3552622A3/en active Pending
- 2009-11-20 LT LTEP15152408.9T patent/LT2865387T/lt unknown
- 2009-11-20 RU RU2011125306/10A patent/RU2011125306A/ru unknown
- 2009-11-20 SI SI200931996T patent/SI2865387T1/sl unknown
- 2009-11-20 PL PL15152408T patent/PL2865387T3/pl unknown
- 2009-11-20 AU AU2009317691A patent/AU2009317691A1/en not_active Abandoned
- 2009-11-20 RU RU2017138373A patent/RU2017138373A/ru not_active Application Discontinuation
- 2009-11-20 HU HUE15152408A patent/HUE045093T2/hu unknown
-
2011
- 2011-05-16 IL IL212914A patent/IL212914A0/en unknown
-
2014
- 2014-06-16 IL IL233176A patent/IL233176A0/en unknown
- 2014-06-16 IL IL233175A patent/IL233175A0/en unknown
- 2014-06-16 IL IL233174A patent/IL233174A0/en unknown
- 2014-09-10 US US14/482,452 patent/US20150056227A1/en not_active Abandoned
- 2014-11-07 JP JP2014226711A patent/JP2015061530A/ja active Pending
-
2015
- 2015-10-28 HK HK15110589.9A patent/HK1209645A1/zh unknown
-
2017
- 2017-01-26 JP JP2017011749A patent/JP2017131220A/ja active Pending
- 2017-04-25 US US15/496,045 patent/US20170290898A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-05-15 JP JP2019091809A patent/JP6825036B2/ja active Active
- 2019-09-02 CY CY20191100920T patent/CY1122117T1/el unknown
- 2019-09-04 HR HRP20191594 patent/HRP20191594T1/hr unknown
-
2021
- 2021-06-17 US US17/350,971 patent/US20210386842A1/en active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1373668A (zh) * | 1999-09-14 | 2002-10-09 | 抗原表达公司 | 杂交肽调制免役反应 |
US20040058881A1 (en) * | 2002-09-24 | 2004-03-25 | Antigen Express, Inc. | Ii-key/antigenic epitope hybrid peptide vaccines |
WO2007062656A2 (en) * | 2005-11-30 | 2007-06-07 | Copenhagen University | A nucleotide vaccine |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
GEORG MALCHEREK等: "MHC class II-associated invariant chain peptide replacement by T cell epitopes: engineered invariant chain as a vehicle for directed and enhanced MHC class II antigen processing and presentation", 《EUR. J. IMMUNOL》 * |
高明等: "II类抗原提呈的分子机制及分子伴侣Ii研究进展", 《微生物学免疫学进展》 * |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105307674A (zh) * | 2013-03-15 | 2016-02-03 | 葛兰素史密斯克莱生物公司 | 改进的痘病毒疫苗 |
CN109182378A (zh) * | 2013-03-15 | 2019-01-11 | 葛兰素史密斯克莱生物公司 | 改进的痘病毒疫苗 |
US10576143B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-03-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Poxviral vaccines |
US10588961B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-03-17 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Poxviral vaccines |
US11278614B2 (en) | 2013-03-15 | 2022-03-22 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Poxviral vaccines |
CN108601820A (zh) * | 2015-10-12 | 2018-09-28 | 南托米克斯有限责任公司 | 用于病毒癌症新表位的组合物和方法 |
US11623001B2 (en) | 2015-10-12 | 2023-04-11 | Nantomics, Llc | Compositions and methods for viral cancer neoepitopes |
CN111729093A (zh) * | 2020-06-29 | 2020-10-02 | 南京超维景生物科技有限公司 | 一种造影剂成膜剂组合物、造影剂成膜脂液、造影剂及其制备方法 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102292102A (zh) | 免疫应答的引发 | |
US20210230633A1 (en) | Nucleotide vaccine | |
US11813327B2 (en) | Ii vaccine adjuvant | |
US20040033585A1 (en) | Flexible vaccine assembly and vaccine delivery platform | |
CN113151184A (zh) | 基于细胞膜展示冠状病毒免疫原以诱导中和抗体的方法 | |
WO2021236513A1 (en) | Vaccine compositions comprising endogenous gag polypeptides | |
AU2015227479B2 (en) | Priming of an immune response |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20111221 |