CN102276570A - 一种提纯表没食子儿茶素没食子酸酯（egcg）的方法 - Google Patents
一种提纯表没食子儿茶素没食子酸酯（egcg）的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种模拟移动床(SMB)色谱分离提纯表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的方法，其特征在于以茶叶提取物茶多酚为原料，采用模拟移动床色谱***分离提纯EGCG，该方法设置SMB的基本区带为洗脱带、精制带和吸附带，洗脱带独立，以十八烷基硅烷键合硅胶ODS为固定相，醇与水的混合溶液为流动相，对茶多酚原料液进行两次SMB分离：一次是除去难洗脱杂质；另一次是除去易洗脱杂质。最后经除脱除溶剂处理后，得到EGCG产品。本发明能规模化、稳健、连续、自动高效地从茶多酚中提纯EGCG，产品回收率超过94％，纯度超过96％，固定相和流动相能反复利用，降低成本，属于绿色环保分离工程。
Description
技术领域
本发明涉及天然植物有效组分的分离提纯方法，尤其是一种利用三带模拟移动床色谱提纯表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的方法。
背景技术
表没食子儿茶素没食子酸酯(简称EGCG，以下称EGCG)是一种抗氧化性和清除自由基功能很强的活性物质，已作为一种抗肿瘤、抗突变、降血压等用途的新药，其提取与应用受到国内外广泛关注。EGCG是茶叶提取的多酚类混合物即茶多酚的主要成分，在茶多酚中，还存在与EGCG化学结构和性质十分相近的其它黄烷醇类化合物，如：表儿茶素(EC)；表儿茶素没食子酸酯(ECG)；表没食子儿茶素(EGC)；没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)；DL-儿茶素(DL-C)，而且这些黄烷醇类化合物极易氧化，聚(缩)合，使分离纯化EGCG单体困难。
目前，获得高纯度EGCG单体(高于95％)的主要技术是制备色谱分离法，如：CN1319597(一种茶多酚中儿茶素类化合物的分离方法)、CN1603319(儿茶素单体的分离纯化方法)和CN1465572(表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化方法)采用葡聚糖凝胶SephadexLH-20柱的层析法；CN101381359(一种从绿茶中提取高纯度表没食子儿茶素没食子酸酯的方法)采用闪烁硅胶柱的层析法，CN101723927A(一种儿茶素单体EGCG工厂化生产分离纯化方法)采用KR100-5C18柱的层析法，这些方法虽然可以用于工业生产高纯度EGCG，但都为批处理工艺即间歇提纯工艺，不能连续自动生产，而且吸附剂的利用率低，洗脱剂耗量大，原料的处理量较小，耗时，生产效率低。
模拟移动床色谱是提纯化合物的一个强大的具有优势的分离手段。模拟移动床色谱在制备色谱的基础上，引进了特殊的运行机制，使色谱分离过程从间歇变为连续，能够进行高效率的自动化和规模化分离。目前尚无采用模拟移动床色谱技术分离提纯EGCG的报道。
发明内容
本发明提供了一种模拟移动床(简称SMB，以下称SMB)色谱分离提纯表没食子儿茶素没食子酸酯(简称EGCG，以下称EGCG)的方法，可以连续、自动、高效地提纯EGCG。
提纯EGCG的方法，其特征在于以茶叶提取物茶多酚为原料，采用SMB色谱分离提纯EGCG，该方法的技术方案如下：
(1)SMB设备
SMB设备组成为色谱柱、洗脱液输送泵、进料液输送泵、自控阀、单片机、自动控制***、多通、管线、接头、储液罐、计算机；
色谱柱规格为柱长10～50cm，柱长与直径比为8～20；
固定相使用十八烷基硅烷键合硅胶ODS，10～60μm；
自控阀由电磁阀和止逆阀组成。
(2)SMB工作条件
SMB运行模式：设置SMB***色谱柱数目总数N，3≤N≤8，设置SMB的基本区带为洗脱带，精制带和吸附带，每个带由1～4根相同的色谱柱串联而成，a为洗脱带色谱柱数目，b为精制带色谱柱数目，c为吸附带色谱柱数目，a+b+c＝N，运行模式表示为a-b-c；
流动相组成：精制带和吸附带的流动相D为醇与水混合的均相溶液，醇的体积百分含量CD为10～40％；洗脱带的流动相P为醇与水混合的均相溶液，醇的体积百分含量CP为CD～100％；
流动相流速：在洗脱带中，洗脱液P流速Up为1～20cm/min，萃取液E流速UE＝Up；在精制带和吸附带中，洗脱液D流速UD为1～15cm/min，进样液F流速UF为0.1～6cm/min，萃余液R流速UR＝UD+UF；UD≤Up≤3UD；UF＜2UD；
模拟移动床操作温度：室温。
(3)分离步骤
使用如(1)所述SMB设备在如(2)所述的条件下，进行两次SMB分离：一次是从萃取液E除去难洗脱杂质，切换时间tS：5～30min；另一次从萃余液R除去易洗脱杂质，切换时间tS：3～25min；
茶多酚用醇含量为0～100％的水溶液溶解，配置浓度为10～100mg/mL的均相原料液，作为第一次SMB分离的进样液F；第一次SMB分离得到的萃余液R或者经过浓缩后、或者直接作为第二次SMB分离的进样液F；
将除去杂质的EGCG溶液经脱除溶剂处理后，得到EGCG产品。
(4)检测方法
采用岛津LC-10AT色谱泵，SPD-10A紫外检测器，Agilent Extend色谱柱，4.6×150mm，ODS填料，粒径5μm，流动相为乙腈和水，体积比为15∶85，冰醋酸体积百分含量0.1％，流速1.0mL/min，检测波长278nm。由EGCG标准品来标定产品中EGCG的含量。
所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，流动相中的醇为甲醇、乙醇。
所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，固定相ODS，20～30μm；精制带和吸附带的流动相D采用甲醇水溶液，其中甲醇体积百分含量CD为25～35％。
所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，固定相ODS，20～30μm；精制带和吸附带的流动相D采用乙醇水溶液，其中乙醇体积百分含量CD为10～20％。
所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，由SMB分离得到的EGCG溶液脱除溶剂的过程为：或者冷冻干燥、或者重结晶、或者真空干燥、或者减压膜蒸馏。
本发明提供的用模拟移动床色谱分离提纯EGCG的方法与现有制备色谱分离技术相比，其显著优势在于能规模化、稳健、连续、自动高效地从茶多酚中提纯EGCG，产品回收率超过94％，纯度超过96％，固定相和流动相能反复利用，降低成本，属于绿色环保分离工程。
附图说明
图1是两次模拟移动床分离过程示意图；
图2是茶多酚原料液的HPLC谱图；
图3是第一次SMB分离结果，难洗脱杂质的HPLC谱图；
图4是第一次SMB分离结果，脱除难洗脱杂质的EGCG的HPLC谱图；
图5是第二次SMB分离结果，易洗脱杂质的HPLC谱图；
图6是第二次SMB分离结果，脱除杂质的EGCG的HPLC谱图。
具体实施方式
实施例1
(1)SMB设备
8根色谱柱、流动相D输送泵流量0-10mL/min，压力0-10Mpa；原料液F泵流量0-30mL/h，压力0-8Mpa；流动相P输送泵流量0-10mL/min，压力0-10Mpa，48个自控阀、一套单片机自动控制***、5个储液罐(流动相D、原料液F、流动相P、萃取液E、萃余液R各需一个储液罐)、多通、管线、接头、计算机；色谱柱为规格10cm×1cm；固定相使用十八烷基硅烷键合硅胶ODS，20～30μm。
(2)SMB工作条件
第一次SMB工作条件如下：
SMB运行模式：设置SMB***色谱柱数目总数N＝4，设置SMB洗脱带1根色谱柱，精制带1根色谱柱，吸附带2根色谱柱，运行模式为1-1-2；
流动相组成：精制带和吸附带的流动相D为甲醇与水的混合溶液，甲醇的体积百分含量CD为30％；洗脱带的流动相P为甲醇与水的混合溶液，醇的体积百分含量CP为80％；
流动相流速：在洗脱带中，洗脱液P流速Up为3.2cm/min，萃取液E流速UE＝Up；在精制带和吸附带中，洗脱液D流速UD为1.9cm/min，进样液F流速UF为0.13cm/min，萃余液R流速UR＝UD+UF。
切换时间为：15min。
模拟移动床操作温度：15-20℃。
第二次SMB工作条件如下：
SMB运行模式：设置SMB***色谱柱数目总数N＝4，设置SMB洗脱带1根色谱柱，精制带1根色谱柱，吸附带2根色谱柱，运行模式为1-1-2；
流动相组成：精制带和吸附带的流动相D为甲醇与水的混合溶液，甲醇的体积百分含量CD为30％；洗脱带的流动相P为甲醇与水的混合溶液，醇的体积百分含量CP为60％；
流动相流速：在洗脱带中，洗脱液P流速Up为3.8cm/min，萃取液E流速UE＝Up；在精制带和吸附带中，洗脱液D流速UD为1.9cm/min，进样液F流速UF为0.13cm/min，萃余液R流速UR＝UD+UF。
切换时间为：10min。
模拟移动床操作温度：15-20℃。
(3)分离步骤
使用如(1)所述SMB设备在如(2)所述的条件下，进行两次SMB分离，如图1所示。第一次SMB分离是从萃取液E除去难洗脱杂质，取5克茶多酚原料(EGCG纯度55.5％)，用甲醇体积百分含量为30％的水溶液溶解，0.45μm滤膜过滤，配置浓度为5g/100mL的溶液，作为第一次SMB分离的进样液F，EGCG为22.3mg/mL，其HPLC谱图如图2所示，用流动相P将难洗脱杂质于萃取液E中除去，其HPLC谱图如图3所示，由流动相D获得含易洗脱杂质和EGCG的萃余液R，其HPLC谱图如图4所示，EGCG的纯度为92.19％，收率99.7％，将该萃余液旋转蒸发浓缩，EGCG为18mg/mL，用作第二次SMB分离的进样液F。第二次SMB分离是除去易洗脱杂质，用流动相D将易洗脱杂质于萃余液R中除去，其HPLC谱图如图5所示，由流动相P获得EGCG的萃取液E，其HPLC谱图如图6所示，EGCG的纯度为97.8％，收率99.8％。EGCG的萃取液经旋转蒸发后，冷冻干燥得到EGCG产品。
(4)检测方法
采用岛津LC-10AT色谱泵，SPD-10A紫外检测器，Agilent Extend色谱柱，4.6×150mm，ODS填料，粒径5μm，流动相为乙腈和水，体积比为15∶85，冰醋酸体积百分含量0.1％，流速1.0mL/min，检测波长278nm。由EGCG标准品来标定产品中EGCG的含量。
实施例2
(1)SMB设备：同实施例1。
(2)SMB工作条件
第一次SMB工作条件如下：
SMB运行模式：设置SMB***色谱柱数目总数N＝5，设置SMB洗脱带1根色谱柱，精制带2根色谱柱，吸附带2根色谱柱，运行模式为1-2-2；
流动相组成：精制带和吸附带的流动相D为乙醇与水的混合溶液，乙醇的体积百分含量CD为15％；洗脱带的流动相P为乙醇；
流动相流速：在洗脱带中，洗脱液P流速Up为3.8cm/min，萃取液E流速UE＝Up；在精制带和吸附带中，洗脱液D流速UD为2.9cm/min，进样液F流速UF为0.25cm/min，萃余液R流速UR＝UD+UF。
切换时间为：14min。
模拟移动床操作温度：10-15℃。
第二次SMB工作条件如下：
SMB运行模式：设置SMB***色谱柱数目总数N＝5，设置SMB洗脱带1根色谱柱，精制带2根色谱柱，吸附带2根色谱柱，运行模式为1-2-2；
流动相组成：精制带和吸附带的流动相D为乙醇与水的混合溶液，乙醇的体积百分含量CD为15％；洗脱带的流动相P为乙醇；
流动相流速：在洗脱带中，洗脱液P流速Up为3.8cm/min，萃取液E流速UE＝Up；在精制带和吸附带中，洗脱液D流速UD为1.3cm/min，进样液F流速UF为1.9cm/min，萃余液R流速UR＝UD+UF。
切换时间为：4min。
模拟移动床操作温度：10-15℃。
(3)分离步骤
使用如(1)所述SMB设备在如(2)所述的条件下，进行两次SMB分离。第一次SMB分离是从萃取液E除去难洗脱杂质，取5克茶多酚原料(EGCG纯度65.8％)，用乙醇体积百分含量为15％的水溶液溶解，0.45μm滤膜过滤，配置浓度为5g/100mL的溶液，作为第一次SMB分离进样液F，EGCG为28.9mg/mL，用流动相P将难洗脱杂质于萃取液E中除去，由流动相D获得含易洗脱杂质和EGCG的萃余液R，EGCG的纯度为92.43％，收率99.2％，将该萃余液旋转蒸发浓缩，EGCG为8.3mg/mL，用作第二次SMB分离的进样液F。第二次SMB分离是除去易洗脱杂质，用流动相D将易洗脱杂质于萃余液R中除去，由流动相P获得EGCG的萃取液E，EGCG的纯度为96.5％，收率99.4％。EGCG的萃取液经旋转蒸发后，冷冻干燥得到EGCG产品。
(4)检测方法同实施例1
实施例3
(1)SMB设备：同实施例1。
(2)SMB工作条件
第一次SMB工作条件如下：
SMB运行模式：设置SMB***色谱柱数目总数N＝6，设置SMB洗脱带1根色谱柱，精制带3根色谱柱，吸附带2根色谱柱，运行模式为1-3-2；
流动相组成：精制带和吸附带的流动相D为乙醇与水的混合溶液，乙醇的体积百分含量CD为15％；洗脱带的流动相P为乙醇；
流动相流速：在洗脱带中，洗脱液P流速Up为5.1cm/min，萃取液E流速UE＝Up；在精制带和吸附带中，洗脱液D流速UD为2.9cm/min，进样液F流速UF为0.25cm/min，萃余液R流速UR＝UD+UF。
切换时间为：6min。
模拟移动床操作温度：10-15℃。
第二次SMB工作条件如下：
SMB运行模式：设置SMB***色谱柱数目总数N＝7，设置SMB洗脱带1根色谱柱，精制带3根色谱柱，吸附带3根色谱柱，运行模式为1-3-3；
流动相组成：精制带和吸附带的流动相D为乙醇与水的混合溶液，乙醇的体积百分含量CD为15％；洗脱带的流动相P为乙醇；
流动相流速：在洗脱带中，洗脱液P流速Up为5.1cm/min，萃取液E流速UE＝Up；在精制带和吸附带中，洗脱液D流速UD为2.0cm/min，进样液F流速UF为1.1cm/min，萃余液R流速UR＝UD+UF。
切换时间为：5min。
模拟移动床操作温度：10-15℃。
(3)分离步骤
使用如(1)所述SMB设备在如(2)所述的条件下，进行两次SMB分离。第一次SMB分离是从萃取液E除去难洗脱杂质，取5克茶多酚原料(EGCG纯度65.8％)，用乙醇体积百分含量为15％的水溶液溶解，0.45μm滤膜过滤，配置浓度为5g/100mL的溶液，作为第一次SMB分离进样液F，EGCG为28.9mg/mL，用流动相P将难洗脱杂质于萃取液E中除去，由流动相D获得含易洗脱杂质和EGCG的萃余液R，EGCG的纯度为94.4％，收率97.5％，将该萃余液旋转蒸发浓缩，EGCG为11.3mg/mL，用作第二次SMB分离的进样液F。第二次SMB分离是除去易洗脱杂质，用流动相D将易洗脱杂质于萃余液R中除去，由流动相P获得EGCG的萃取液E，EGCG的纯度为98.9％，收率97.4％。EGCG的萃取液经旋转蒸发后，冷冻干燥得到EGCG产品。
(4)检测方法同实施例1。
Claims (5)
1.一种提纯表没食子儿茶素没食子酸酯(简称EGCG，以下称EGCG)的方法，其特征在于以茶叶提取物茶多酚为原料，采用模拟移动床(简称SMB，以下称SMB)色谱分离提纯EGCG，该方法的技术方案如下：
(1)SMB设备
SMB设备组成为色谱柱、洗脱液输送泵、进料液输送泵、自控阀、单片机、自动控制***、多通、管线、接头、储液罐、计算机；
色谱柱规格为柱长10～50cm，柱长与直径比为8～20；
固定相使用十八烷基硅烷键合硅胶ODS，10～60μm；
自控阀由电磁阀和止逆阀组成；
(2)SMB工作条件
SMB运行模式：设置SMB***色谱柱数目总数N，3≤N≤8，设置SMB的基本区带为洗脱带，精制带和吸附带，每个带由1～4根相同的色谱柱串联而成，a为洗脱带色谱柱数目，b为精制带色谱柱数目，c为吸附带色谱柱数目，a+b+c＝N，运行模式表示为a-b-c；
流动相组成：精制带和吸附带的流动相D为醇与水混合的均相溶液，醇的体积百分含量CD为10～40％；洗脱带的流动相P为醇与水混合的均相溶液，醇的体积百分含量CP为CD～100％；
流动相流速：在洗脱带中，洗脱液P流速Up为1～20cm/min，萃取液E流速UE＝Up；在精制带和吸附带中，洗脱液D流速UD为1～15cm/min，进样液F流速UF为0.1～6cm/min，萃余液R流速UR＝UD+UF；UD≤Up≤3UD；UF＜2UD；
模拟移动床操作温度：室温；
(3)分离步骤
使用如(1)所述SMB设备在如(2)所述的条件下，进行两次SMB分离：一次是从萃取液E除去难洗脱杂质，切换时间tS：5～30min；另一次从萃余液R除去易洗脱杂质，切换时间tS：3～25min；
茶多酚用醇体积百分含量为0～100％的水溶液溶解，配置浓度为10～100mg/mL的均相原料液，作为第一次SMB分离的进样液F；第一次SMB分离得到的萃余液R或者经过浓缩后、或者直接作为第二次SMB分离的进样液F；
将除去杂质的EGCG溶液经脱除溶剂处理后，得到EGCG产品；
(4)检测方法
采用岛津LC-10AT色谱泵，SPD-10A紫外检测器，Agilent Extend色谱柱，4.6×150mm，ODS填料，粒径5μm，流动相为乙腈和水，体积比为15∶85，冰醋酸体积百分含量0.1％，流速1.0mL/min，检测波长278nm，由EGCG标准品来标定产品中EGCG的含量。
2.根据权利要求1所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，其特征在于：流动相中的醇为甲醇、乙醇。
3.根据权利要求1和要求2所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，其特征在于：固定相ODS，20～30μm；精制带和吸附带的流动相D采用甲醇水溶液，其中甲醇体积百分含量CD为25～35％。
4.根据权利要求1和要求2所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，其特征在于：固定相ODS，20～30μm；精制带和吸附带的流动相D采用乙醇水溶液，其中乙醇体积百分含量CD为10～20％。
5.根据权利要求1所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，其特征在于：由SMB分离得到的EGCG溶液脱除溶剂的过程为：或者冷冻干燥、或者重结晶、或者真空干燥、或者减压膜蒸馏。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1286252A (zh) * | 1999-08-16 | 2001-03-07 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 制备表棓儿茶素没食子酸酯的方法 |
| CN1546485A (zh) * | 2003-12-12 | 2004-11-17 | 贵州家诚药业有限责任公司 | 茶多酚混合物的分离方法 |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1286252A (zh) * | 1999-08-16 | 2001-03-07 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 制备表棓儿茶素没食子酸酯的方法 |
| CN1546485A (zh) * | 2003-12-12 | 2004-11-17 | 贵州家诚药业有限责任公司 | 茶多酚混合物的分离方法 |
| CN101732890A (zh) * | 2009-12-08 | 2010-06-16 | 辽宁科技大学 | 三带模拟移动床色谱装置 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 黄永东等: "传统SMB、Varicol和Partial-discard工艺分离纯化ECG和EGCG的比较研究", 《茶叶科学》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102643260A (zh) * | 2012-04-25 | 2012-08-22 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 连续化柱层析分离表没食子儿茶素没食子酸酯的方法 |
| CN106986851A (zh) * | 2017-05-04 | 2017-07-28 | 广西轻工业科学技术研究院 | 一种高纯度egcg的制备方法 |
| CN111315391A (zh) * | 2017-10-31 | 2020-06-19 | 株式会社爱茉莉太平洋 | 包含具有不同成分含量的茶提取物的用于改善循环***疾病的组合物 |
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