CN102268100A - 一种委陵菜多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种委陵菜多糖的制备方法,包括如下步骤:以委陵菜全草为原料,加入蒸馏水搅拌,保温浸泡12-24h后,补加水至料液比为1:10-1:20,再进行微波提取,得到提取液,将提取液浓缩,加酸调至适当pH,加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解反应,酶解液经过大孔树脂除杂,透过液再采用醇沉或透析法纯化,最后洗涤干燥得到高纯度委陵菜多糖。该方法生产委陵菜多糖,收率高,过程简单,能源消耗少,产量大,纯度高。
Description
技术领域
本发明属于天然产物分离领域,尤其是涉及一种多糖的制备方法,具体是涉及一种采用大孔树脂纯化委陵菜多糖的方法。
背景技术
多糖(Polysaccharide)是由单糖之间脱水形成糖苷键,并以糖苷键线性或分枝连接而成的链状聚合物。多糖种类繁多、结构复杂、具有特殊生物学活性,生物体内多糖的研究可追溯到上世纪30年代。到目前已有300多种多糖类化合物从天然产物中提取分离出来,从中药中提取的水溶性多糖具有无细胞毒性,分子量通过化学手段易控制等特点,加之实验证明多糖与感染、肿瘤、炎症及一些自身免疫性疾病的治疗有关,已成为新药开发研究的发展方向之一。
委陵菜多糖(Potentilla AnserinePolysaccharide,PAP)是由蔷薇科委陵菜属鹅绒委陵菜(Potentilla Anserine L.)中提取分离得到的。委陵菜中含有糅质、糖类、蛋白质、脂肪酸及委陵菜苷等。现代药理研究表明,其水提物具有提高机体免疫力、抗疲劳、耐缺氧和止泻抑菌的作用。委陵菜在青海、甘肃、西藏等高海拔地区广泛分布,有“人参果”的美誉。此外,刘素君等研究表明委陵菜多糖具有抗肿瘤作用,且其抗肿瘤作用和其免疫调节作用有明显的相关性,由此推断委陵菜多糖的抗肿瘤作用可能与激活体内免疫***有关。
委陵菜多糖是鹅绒委陵菜的主要活性成分之一,从该植物中提取分离多糖成分的技术已有陆续报道。多是采用有机溶剂萃取等方法制备,后续处理麻烦,且存在毒性有机溶剂残留问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种委陵菜多糖的制备方法,该方法操作简单,提取率高,产品含量高,品质好,活性强。
本发明的目的通过以下技术方案实现:
一种委陵菜多糖的制备方法,其特征在于:以委陵菜全草为原料,加入蒸馏水搅拌,保温浸泡12-24h后,补加水至料液比为1:10-1:20,再进行微波多次提取,得到提取液,提取液浓缩至小体积,加酸调pH至5-6,加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解反应,酶解液经过大孔树脂除杂,过柱液再采用醇沉或透析法纯化,最后沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、***依次洗涤,挥去***,干燥得到高纯度委陵菜多糖。
所述的淀粉酶和蛋白酶,酶的加入量为浓缩液量的2-5‰,酶解条件为:时间5-10h,温度40-45℃。
所述的大孔树脂为非极性大孔树脂,可选用D101、HZ802、XAD-16等型号中的一种。
所述的醇沉操作为,向过柱液中缓缓加入95%乙醇,使醇浓度达45%~60%,冷藏过夜,离心收集沉淀。
所述的透析纯化步骤为,过柱液经过截留分子量2000的超滤膜截留多糖,再采用5-20倍量60~85%乙醇液透析1~3次,收集截留液,浓缩干燥得沉淀物。
所述的干燥步骤可采用冷冻干燥或喷雾干燥。
本发明的优势在于:采用微波提取结合酶水解法纯化委陵菜多糖,与传统水提法相比,不需要高温、缩短了操作时间,提高了生产效率,且节约了能耗,脱蛋白效率高;采用大孔树脂吸附非极性杂质,减少有毒有机溶剂应用,所得产品质量好,活性高。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明,但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1:
将鹅绒委陵菜破碎,称取1kg置于提取器中,加2L蒸馏水充分搅匀,保温浸泡12小时,补加水至料液比为1:15,微波提取1小时,反复提取4次,过滤,合并提取液,浓缩至500ml,加酸调pH至5,按淀粉酶:蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制剂,加入1g,在45℃温度下反应6小时,将酶解液通过HZ802大孔吸附树脂柱,透过液缓缓加入95%乙醇,使醇浓度达60%,冷藏过夜,离心15分钟,收集沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、***依次洗涤,挥去***,喷雾干燥得到高纯度委陵菜多糖得到25.6g。
实施例2:
将鹅绒委陵菜破碎,称取1kg置于提取器中,加5L蒸馏水充分搅匀,保温浸泡18小时,补加水至料液比为1:20,微波提取1.5小时,反复提取2次,过滤,合并提取液,将提取液浓缩至500ml,加酸调pH至6,按淀粉酶:蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制剂,加入2.5g,在40℃温度下反应5小时,将酶解液通过D101大孔吸附树脂柱,透过液缓缓加入95%乙醇,使醇浓度达45%,冷藏过夜,离心15分钟,收集沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、***依次洗涤,挥去***,喷雾干燥得到高纯度委陵菜多糖得到21.9g。
实施例3:
将鹅绒委陵菜破碎,称取2kg置于提取器中,加4.5L蒸馏水充分搅匀,浸泡16小时,补加水至料液比为1:15,微波提取1小时,反复提取5次,过滤,合并提取液,将提取液浓缩至2L,加酸调pH至5,按淀粉酶:蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制剂,加入5.0g,在43℃温度下反应6小时,将酶解液通过XAD-16大孔吸附树脂柱,透过液过截留分子量2000的超滤膜截留多糖,再采用5倍量60%乙醇液透析3次,收集截留液,浓缩干燥得沉淀物,沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、***依次洗涤,挥去***,喷雾干燥得到高纯度委陵菜多糖得到35.9g。
实施例4:
将鹅绒委陵菜破碎,称取5kg置于提取器中,加40L蒸馏水充分搅匀,浸泡20小时,补加水至料液比为1:18,微波提取1.5小时,反复提取5次,过滤,合并提取液,将提取液浓缩至5L,加酸调pH至5.5,按淀粉酶:蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制剂,加入17.5g,在42℃温度下反应8小时,将酶解液通过D101大孔吸附树脂柱,透过液过截留分子量2000的超滤膜截留多糖,再采用20倍量85%乙醇液透析1次,收集截留液,浓缩干燥得沉淀物,沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、***依次洗涤,挥去***,冷冻干燥得到高纯度委陵菜多糖得到89.5g。
实施例5:
将鹅绒委陵菜破碎,称取10kg置于提取器中,加30L蒸馏水充分搅匀,浸泡24小时,补加水至料液比为1:15,微波提取2小时,反复提取3次,过滤,合并提取液,将提取液浓缩至10L,加酸调pH至6,按淀粉酶:蛋白酶=5:1的重量配比配制成酶制剂,加入45g,在40℃温度下反应10小时,将酶解液通过XAD-16大孔吸附树脂柱,透过液缓缓加入95%乙醇,使醇浓度达55%,冷藏过夜,离心15分钟,收集沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、***依次洗涤,挥去***,喷雾干燥得到高纯度委陵菜多糖得到192.5g。
Claims (5)
1.一种委陵菜多糖的制备方法,其特征在于:以委陵菜全草为原料,加入蒸馏水搅拌,保温浸泡12-24h后,补加水至料液比为1:10-1:20,再进行微波多次提取,得到提取液,提取液浓缩至小体积,加酸调pH至5-6,加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解反应,酶解液经过大孔树脂除杂,过柱液再采用醇沉或透析法纯化,最后沉淀物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、***依次洗涤,挥去***,干燥得到高纯度委陵菜多糖。
2.如权利要求1所述的一种委陵菜多糖的制备方法,其特征在于所述的淀粉酶和蛋白酶,加入量为浓缩液量的2-5‰,酶解条件为:时间5-10h,温度40-45℃。
3.如权利要求1所述的一种委陵菜多糖的制备方法,其特征在于所述的大孔树脂为非极性大孔树脂,可选用D101、HZ802、XAD-16等型号中的一种。
4.如权利要求1所述的一种委陵菜多糖的制备方法,其特征在于所述的醇沉操作为,向过柱液中缓缓加入95%乙醇,使醇浓度达45%~60%,冷藏过夜,离心收集沉淀。
5.如权利要求1所述的一种委陵菜多糖的制备方法,其特征在于所述的透析纯化步骤为,过柱液经过截留分子量2000的超滤膜截留多糖,再采用5-20倍量60~85%乙醇液透析1~3次,收集截留液,浓缩干燥得沉淀物。
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