CN102262141B

CN102262141B - 一种用高效液相色谱仪检测3,3′,4′,5-四氯水杨酰苯胺的方法

Info

Publication number: CN102262141B
Application number: CN201110095944.8A
Authority: CN
Inventors: 杨果; 戴煦; 刘文秋; 朱平; 郭冰
Original assignee: Shenzhen Centre Testing Technology Co Ltd
Current assignee: Ningbo Huace Detection Technology Co Ltd
Priority date: 2011-04-15
Filing date: 2011-04-15
Publication date: 2014-01-29
Anticipated expiration: 2031-04-15
Also published as: CN102262141A

Abstract

本发明涉及一种用高效液相色谱法检测3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的方法，包括以下步骤：称取适量样品，选择合适的溶剂，利用旋涡混和、离心分离、旋转蒸发浓缩等步骤对样品进行前处理；用连接二极管阵列检测器的高效液相色谱仪对3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺进行检测，有机流动相的比例设定为75％，无机流动相的比例设定25％，流速设定为0.5mL/min，进样量设定为10uL，色谱柱选择反相色谱柱，二极管阵列检测器的最大吸收波长设定为500nm。采用本发明所述检测方法具有简便、快速、回收率高等特点。

Description

一种用高效液相色谱仪检测3,3′,4′,5-四氯水杨酰苯胺的方法

技术领域

本发明涉及一种3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的检测方法，特别是涉及一种用连接二极管阵列检测器的高效液相色谱技术检测检测3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的方法。

背景技术

3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺常用作代谢解偶联剂，添加到活性污泥法污水处理工艺中，可有效减少污泥的产生。

研究发现，该物质具有潜在的致癌性、致畸性、神经毒性、急性毒性、持久性、生物累积性等，《加拿大环境保护法》将其列入有毒物质列表内，欧盟化妆品指令76/768/EEC将其列入化妆品禁用物质列表内，为此，需要对产品中可能存在的3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺进行定性定量检测。然而，目前尚未有3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的检测方法。为此，建立一种3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的检测方法势在必行。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提出一种用常规的连接二极管阵列检测器的高效液相色谱技术检测3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的方法。

本发明解决所述技术问题可以通过采用以下技术方案来实现：

包括以下步骤：

①称取适量样品，选择甲醇或丙酮作为溶剂，利用旋涡混合仪对样品进行萃取处理，萃取处理的时间为3-10min；

②利用离心机对萃取处理后的样品进行分离，分离的时间为5-30min，倾出上层清液；

③利用旋转蒸发仪浓缩上层清液，形成浓缩溶液；

④浓缩溶液用与萃取步骤相同的溶剂进行定容，过0.45um滤膜，形成前处理后的待测溶液；

⑤利用连接二极管阵列检测器的高效液相色谱仪对待测溶液中的3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺进行检测，对所述仪器有机流动相的比例设定为75％，无机流动相的比例设定25％，流速设定为0.5mL/min，进样量设定为10uL，色谱柱选择反相色谱柱，二极管阵列检测器的最大吸收波长设定为500nm。

本发明的技术效果在于：

1、提出一种用常规的连接二极管阵列检测器的高效液相色谱技术检测3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的方法；

2、前处理方法简便、快速、回收率高；

3、通过选择合适的色谱柱、合适的流速、流动相比例和最大吸收波长，能使样品中的3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺得到最优化的分离。

附图说明

图1是本发明实施例1所检测的3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的色谱图；

图2是本发明实施例1所检测的3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的标准曲线图。

具体实施方式

以下结合附图所示之最佳实施例作进一步详述。

实验条件：高效液相色谱仪和二极管阵列检测器，所用试剂均为色谱纯。高效液相色谱仪和二极管阵列检测器中有机流动相为甲醇，比例设定为75％；无机相为水，比例设定为25％；流速设定为0.5mL/min；进样量设定为10ul；二极管阵列检测器的最大吸收波长设定为500nm。计算机***记录色谱图形，以目标物的峰面积作为目标物的响应值，对样品进行分析。

制作标准曲线：以甲醇为配制标准溶液的溶剂，配制3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺系列标准溶液，按所述实验条件进行高效液相色谱仪和二极管阵列检测器联用(HPLC-DAD)分析检测。图1为3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的色谱图。以总目标峰面积对浓度作图，根据标准溶液的3次平行测量结果，建立3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的标准曲线，如图2所示，横坐标代表3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺标准溶液的浓度，纵坐标代表液相色谱峰面积响应值，所得标准曲线的函数关系为y＝29.09x+60.767，其中y代表液相色谱峰面积响应值，x代表3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺标准溶液的浓度，其线性相关系数为R²＝0.9977，这表明该标准曲线具有较好的线性相关性。

应用上述试验条件和标准曲线所作的具体实施例如下：

实施例1

准确称取1g污泥样品于50mL旋盖离心管内，向其中加入20mL溶剂甲醇，旋紧管盖。将离心管置于旋涡混合仪上进行分散混和萃取，萃取时间为5min。置于离心机上高速离心，离心时间为10min。倾出上层清液。如此操作三次，合并上层清液至100mL圆底烧瓶内，通过旋转蒸发仪将上层清液浓缩至5mL左右，形成浓缩溶液，将浓缩溶液转移至10mL容量瓶内，用甲醇定容至刻度，过0.45um滤膜，形成前处理后的待测溶液，进行HPLC-DAD测试。对污泥样品作了五个平行样品，样品编号分别为A-1、A-2、A-3、A-4和A-5，分析结果见表1，并对第一个平行样品(样品编号为A-1)重复测定5次，分析结果见表2。由表1知，平行样的相对标准偏差(RSD)为2.82％。由表2知，重复性测试的相对标准偏差(RSD)为0.96％。

将定量的3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺标准溶液加入到上述的污泥样品中，选择与上述相同的溶剂、前处理方法和仪器条件进行实验。作两个加标含量，每个加标含量的样品作3次平行测量取平均值，根据实际加入量和实测结果(该实测结果为扣除样品中3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的含量后的结果)，计算各种样品的加标回收率，实验结果见表3。由表3可知，样品的加标回收率达到85％以上，并在85～110％之间。

表1污泥样品中3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的测试含量

表2污泥样品的测试重复性

表3样品的加标回收率

实施例2

将离心管置于旋涡混合仪上进行分散混和萃取的时间设定为3min，其他条件同实施例1，所得平行样的相对标准偏差＜8％，重复性测试的相对标准偏差＜5％，样品的加标回收率在85％-110％之间。

实施例3

将离心管置于旋涡混合仪上进行分散混和萃取的时间设定为10min，其他条件同实施例1，所得平行样的相对标准偏差＜8％，重复性测试的相对标准偏差＜5％，样品的加标回收率在85％-110％之间。

实施例4

将离心时间设定为5min，其他条件同实施例1，所得平行样的相对标准偏差＜8％，重复性测试的相对标准偏差＜5％，样品的加标回收率在85％-110％之间。

实施例5

将离心时间设定为30min，其他条件同实施例1，所得平行样的相对标准偏差＜8％，重复性测试的相对标准偏差＜5％，样品的加标回收率在85％-110％之间。

实施例6

用丙酮作溶剂，其他条件同实施例1，所得平行样的相对标准偏差＜8％，重复性测试的相对标准偏差＜5％，样品的加标回收率在85％-110％之间。

以上所述实施例仅表达了本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制，应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围；因此，凡跟本发明权利要求范围所做的均等变化与修饰，均应属于本发明权利要求的涵盖范围。

Claims

1.一种3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的检测方法，其特征在于：包括以下步骤，

③利用旋转蒸发仪浓缩上层清液，形成浓缩溶液；

⑤利用连接二极管阵列检测器的高效液相色谱仪对待测溶液中的3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺进行检测，高效液相色谱仪和二极管阵列检测器中有机流动相为甲醇，比例设定为75％；无机相为水，比例设定为25％，流速设定为0.5mL/min，进样量设定为10uL，色谱柱选择反相色谱柱，二极管阵列检测器的最大吸收波长设定为500nm。

2.如权利要求1所述的3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的检测方法，其特征在于：所述溶剂为甲醇。

3.如权利要求1所述的3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的检测方法，其特征在于：利用旋涡混合仪对样品进行萃取处理的时间为5min。

4.如权利要求1所述的3，3′，4′，5-四氯水杨酰苯胺的检测方法，其特征在于：利用离心机对萃取处理后的样品进行分离的时间为10min。