CN102250203B - β-咔啉类氨基酸苄酯及其制备和应用 - Google Patents
β-咔啉类氨基酸苄酯及其制备和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一类β-咔啉类氨基酸苄酯及其制备方法和应用。本发明通过将L-色氨酸在稀硫酸催化下与甲醛进行Pictet-Spengler缩合得到一系列中间体，再将中间体与多种氨基酸苄酯进行偶联，得到2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酰氨基酸苄酯。本发明方法操作简单，原料易得，所得衍生物具有优秀的体内外抗肿瘤活性，因而本发明公开了18种新型2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酰氨基酸苄酯作为抗肿瘤药物的临床应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一类抗肿瘤药物，特别涉及β-咔啉类氨基酸苄酯，即2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酰氨基酸苄酯及其制备方法和应用，属于生物医药领域。
背景技术
恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的常见病和多发病，近20年来，我国肿瘤死亡率上升了29.42%。在35至59岁的中壮年人群中，肿瘤已列居各类死因之首。有数据显示：我国肿瘤发病率约为200/10万人，每年新发病例约220万人以上，在治患者约600万人以上。肿瘤的治疗方法有手术治疗，放射治疗和药物治疗（化学治疗）。目前，化学治疗仍然是临床***的主要手段。寻找抗肿瘤药物是新药研究的热点之一。β-咔啉类衍生物具有广泛的生物学活性，它们能抑制拓扑异构酶、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）和DNA的合成，并能嵌入DNA双链中，所有这些作用使它们具有很强的抗肿瘤活性。已知，2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸有一定抗肿瘤活性，因此，在2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸的羧基上引入天然氨基酸苄酯有可能产生更优秀的抗肿瘤活性。基于以上理论，本发明公开了与2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酰氨基酸苄酯相关的发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酰氨基酸苄酯，通过对它们的体内外抗肿瘤活性研究证实了这些衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明是通过以下技术方案来实现这一目的的：
结构式3、4、5和6a-r代表的化合物，
其中R为CH3、H、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH(CH3)2、CH2C6H5、CH2CH2CO2Bzl、CH2CO2Bzl、CH2OH、CHOHCH3、(CH2)4NH2、(CH2)2CONH2、CH2CONH2、(CH2)2SCH3、CH2SC(CH3)3、Indole-5-yl-CH2、CH2-imidazole或CH2-C6H4-OH-p。
本发明还提供了一种制备3S-N-Boc-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-L-亮氨酸苄酯（3）的方法，即3S-N-Boc-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸与TosH·Leu-OBzl在1-羟基苯并***（HOBt）、二环己基碳二亚胺（DCC）和N-甲基吗啉（NMM）的存在下，在冰浴条件下反应。
本发明还提供了一种制备2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸苄酯（4）的方法，即3S-N-Boc-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-L-亮氨酸苄酯（3）在盐酸和乙酸乙酯存在下，在冰浴条件下脱Boc。
本发明还提供了一种制备2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸（5）的方法，即2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸苄酯（4）在钯/碳存在下氢解脱苄基。
本发明提供了一种制备2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酰氨基酸苄酯（6a-r）的方法，即2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸（5）在DCC、HOBt和NMM的存在下，在冰浴条件下与各种氨基酸苄酯反应。
本发明还提供了2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸苄酯（4）作为制备抗肿瘤药物的应用。
本发明还提供了2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酰氨基酸苄酯（6a-r）作为制备抗肿瘤药物的应用。
本发明方法的合成路线如图1所示。
在图1中，i)稀硫酸、甲醛；ii)(Boc)2O、DMF、Et3N；iii)DCC、HOBt、NMM、无水四氢呋喃（THF）；iv)4N HCl/EtOAc、甲醇、丙酮、Et3N；v)H2、Pd/C、甲醇；vi)DCC、HOBt、NMM、无水THF、氨基酸苄酯。6a中R=CH3；6b中R=H；6c中R=CH2CH(CH3)2；6d中R=CH(CH3)CH2CH3；6e中R=CH(CH3)2；6f中R=CH2C6H5；6g中R=CH2CH2CO2Bzl；6h中R=CH2CO2Bzl；6i中R=CH2OH；6j中R=CHOHCH3；6k中R=(CH2)4NH2；6l中R=(CH2)2CONH2；6m中R=CH2CONH2；6n中R=(CH2)2SCH3；6o中R=CH2SC(CH3)3；6p中R=Indole-5-yl-CH2；6q中R=CH2-imidazole；6r中R=CH2-C6H4-OH-p。
本发明通过将L-色氨酸在稀硫酸催化下与甲醛进行Pictet-Spengler缩合得到一系列中间体，再将中间体与多种氨基酸苄酯进行偶联，得到2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酰氨基酸苄酯衍生物。本发明方法操作简单，原料易得，所得衍生物具有优秀的体内外抗肿瘤活性，有利于抗肿瘤药物研发的发展。
附图说明
图1为本发明方法的合成路线。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。
实施例1制备3S-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1)
将200mL水置于250mL的圆底烧瓶中，缓慢加入0.1mL浓硫酸。往得到的稀硫酸溶液中加入2.520g(12.4mmol)L-色氨酸并超声振荡至L-色氨酸完全溶解。往得到的溶液中加入5mL浓度为37-40%的甲醛水溶液。反应混合物室温搅拌6小时，薄层层析监测到L-色氨酸消失，终止反应。往反应溶液中缓慢滴加浓氨水，调节反应混合物的pH至6，静置半小时。布氏漏斗减压滤出生成的沉淀物，用水和丙酮反复淋洗所得沉淀物，淋洗3次，将滤出的无色固体平铺于培养皿，并置于通风橱中吹干后得到2.640g(98.9%)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)215[M-H]-。
实施例2制备3S-N-Boc-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(2)
100mL茄瓶中加入20mL DMF，搅拌下加入2.033g(9.41mmol)3S-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1)，得白色浑浊混悬液。冰浴搅拌下往该混悬液中加入2.752g(12.6mmol)Boc2O，加三乙胺将反应液pH值调至10。反应混合物室温搅拌48小时，薄层层析监测至S-咔啉羧酸消失，终止反应。将反应液倒入表面皿，在风扇下吹约24小时至干。将吹干的油状物用100mL乙酸乙酯溶解，然后置于250mL分液漏斗中，用KHSO4(5%)水溶液洗涤(10mL×3)。分出合并的乙酸乙酯层，在150mL三角瓶中加入无水硫酸钠干燥2小时，减压过滤。滤液减压浓缩至干，析出白色固体。得到的白色固体中加入氯仿，减压过滤，得到2.230g(75.0%)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)315[M-H]-。
实施例3制备3S-N-Boc-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-L-亮氨酸苄酯(3)
冰浴冷却下向250mL茄瓶中加入2.243g(7.10mmol)3S-N-Boc-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(2)，4.900g(12.4mmol)TosH·Leu-OBzl，1.402g(10.4mmol)HOBt，加入80mL无水THF，搅拌溶解。2.589g(12.6mmol)DCC溶于10mL无水THF中，冰浴冷却条件下缓缓滴加至反应瓶中，充分搅拌5分钟。NMM调节反应液pH至8，反应混合物在0℃下搅拌4小时后抽滤2次滤除二环己基脲（DCU），滤液减压浓缩至干。将得到的残余物用150mL乙酸乙酯溶解、然后置于250ml分液漏斗中、依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗(30mL×3)、饱和氯化钠水溶液洗(30mL×3)、按重量计浓度为5%的硫酸氢钾水溶液洗(30mL×3)、饱和氯化钠水溶液洗(30mL×3)、饱和碳酸氢钠水溶液洗(30mL×3)、饱和氯化钠水溶液洗(30mL×3)。合并乙酸乙酯层并用无水硫酸钠干燥2小时，然后过滤、滤液减压浓缩至干，得到淡黄色油状物。加入少量***溶解，水泵减压抽干固化，反复3次。得到3.565g(96.7%)标题化合物，为无色粉末。Rf=0.65(氯仿:甲醇=20:1)，ESI-MS(m/e)520[M+H]+.1H-NMR(DMSO-d6,300MHz):δ=10.822(d,J=18.9Hz,1H),8.397(m,1H),7.293(s,5H),7.208(m,2H),6.991(m,2H),5.104(m,1H),4.941(m,2H),4.694(d,J=18.9Hz,1H),4.542(m,1H),3.230(m,1H),3.040(m,1H),1.570(m,3H),1.423(s,9H),0.839(s,3H),0.764(s,3H);13C-NMR(DMSO-d6,75MHz):δ=172.56,172.02,155.54,136.55,136.29,131.10,128.80,128.42,128.22,126.87,121.12,118.83,117.79,111.35,104.41,103.85,80.15,79.99,66.38,53.50,52.23,50.75,50.41,33.83,28.41,24.93,24.59,24.17,23.37,23.17,15.64。
实施例4制备2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸苄酯(4)
将2.147g(4.14mmol)3S-N-Boc-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-甲酰-L-亮氨酸苄酯(3)置于100mL茄形瓶中，加入5mL乙酸乙酯溶解。冰浴下往得到的溶液中缓慢滴入20mL4N HCl/EtOAc。反应混合物在0℃下搅拌2小时后水泵抽干。残留物加入乙酸乙酯充分搅拌，水泵减压抽干，重复3次。加入***充分搅拌后水泵减压抽干，重复3次。得到的无色粉末溶于60mL甲醇和20mL丙酮的混合溶剂中，用三乙胺调整pH值到9、避光反应7天，利用薄层层析监测至N-Boc-S-咔啉酰-L-亮氨酸苄酯消失，终止反应。将反应混合物减压浓缩至干、残留物用200mL乙酸乙酯溶解、溶液置于250mL分液漏斗中并用30mL饱和氯化钠水溶液洗(30mL×8)。洗后的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥2小时后过滤。滤液减压浓缩至干。残留物用5mL甲醇溶解、静置，然后滤出0.35g(37.7%)标题化合物，其为淡黄色粉末。Rf=0.32(石油醚:丙酮，4:1)，ESI-MS(m/e)460[M+H]+;Mp190-192℃;1H-NMR(CDCl3),300MHzδ=7.882(s,1H),7.524(d,J=8.1Hz,1H),7.341(m,6H),7,154(m,2H),5.204(m,2H),3.962(m,2H),3.846(d,J=13.5Hz,1H),3.481(m,1H),3.190(m,1H),2.769(m,2H),1.612(m,1H),1.461(s,3H),1.245(s,3H),0.955(m,6H).13C-NMR(CDCl3,75MHz)δ=171.78,170.62,136.29,135.33,131.02,128.74,128.66,128.51,128.27,127.26,121.75,119.68,118.22,110.68,108.47,78.92,66.87,61.12,57.42,41.60,34.07,29.69,25.65,25.03,23.89,18.87,16.59,11.22。
实施例5制备2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)
将131mg(0.285mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸苄酯(4)置于100mL茄瓶中，加入15mL甲醇溶解，搅拌下加入15mg Pd/C，连好三通及氢气袋，水泵减压抽出空气后通入氢气，反复重复2次。保持通入氢气的状态搅拌反应2小时。薄层层析监测至4消失，停止反应，小心滤除Pd/C，将滤液减压浓缩至干，得到102mg(96.9%)标题化合物，其为淡黄色粉末。Rf=0.40(氯仿:甲醇:冰醋酸=20:1:0.10)，ESI-MS(m/e)368[M-H]-;Mp236-237℃;
(c=0.60,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.979(s,1H),7.356(dd,J1=30.3Hz,J2=7.6Hz,2H),6.988(m,2H),3.928(m,2H),3.768(d,J=14.1Hz,1H),3.416(m,1H),2.870(m,1H),1.998(m,2H),1.657(m,2H),1.420(s,3H),1.287(s,3H),0.930(t,6H);13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.73,171.00,136.53,133.17,127.17,120.94,118.83,117.91,111.41,106.34,78.55,57.23,52.77,47.05,41.77,38.95,33.80,25.81,25.20,24.94,24.90,23.85,23.22,22.77,19.70。
实施例6制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰丙氨酸苄酯(6a)
冰浴冷却下向50mL茄瓶中加入176mg(0.48mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，65mg(0.48mmol)HOBt，207mg(0.59mmol)TosH·Ala-OBzl，加入25mL无水THF溶解搅拌。118mg(0.57mmol)DCC溶于5mL无水THF，冰浴冷却下滴加至反应瓶中，充分搅拌5分钟。NMM调节反应液pH为8，反应混合物在0℃下搅拌4小时后利用TLC检测5消失，停止反应，将反应液抽滤2次滤除DCU，将滤液减压浓缩至干。所得残余物用30mL乙酸乙酯溶解，并转移至100mL分液漏斗中，依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗(10mL×3)、饱和氯化钠水溶液洗(10mL×3)、5%硫酸氢钾水溶液洗(10mL×3)、饱和氯化钠水溶液洗(10mL×3)、饱和碳酸氢钠水溶液洗(10mL×3)、饱和氯化钠水溶液洗(10mL×3)。合并乙酸乙酯层并用无水硫酸钠干燥2小时，然后过滤，将滤液减压浓缩至干，得到淡黄色油状物。在所得油状物中加入少量石油醚反复磨洗3次，得到235mg(93.0%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得140mg(60%)纯标题化合物。Rf=0.27(石油醚:丙酮=2:1)。ESI-MS(m/e)531[M+H]+;Mp128-129℃;
(c=0.65,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.868(s,1H),8.238(d,J=6.3Hz,1H),7.428(d,J=6.3Hz,1H),7.321(s,6H),7.005(m,2H),5.096(s,2H),4.374(m,1H),3.961(m,2H),3.742(d,J=14.1Hz,1H),3.454(d,J=8.1Hz,1H),2.917(d,J=14.7Hz,1H),2.071(m,1H),1.890(m,1H),1.701(m,1H),1.509(m,1H),1.362(s,3H),1.314(d,J=6.9Hz,3H),1.269(s,3H),0.910(s,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.49,172.24,171.08,136.40,136.24,132.85,128.83,128.47,128.31,127.15,121.04,118.92,117.98,111.36,106.38,79.29,66.53,57.52,55.87,48.16,47.87,41.72,39.03,33.77,25.33,24.97,24.14,23.08,22.74,18.43,17.14。
实施例7制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰甘氨酸苄酯(6b)
按照制备6a的操作，由359mg(0.97mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，403mg(1.19mmol)TosH·Gly-OBzl，130mg(0.96mmol)HOBt，245mg(1.19mmol)DCC制备得到462mg(92.0%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得280mg(60%)纯标题化合物。Rf=0.53(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)517[M+H]+;Mp86-87℃;
(c=0.60,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.878(s,1H),8.147(m,1H),7.418(d,J=7.5Hz,1H),7.344(s,5H),7.322(m,1H),7.001(m,2H),5.110(s,2H),3.956(m,2H),3.932(m,1H),3.754(d,J=13.8Hz,1H),3.453(m,1H),2.906(m,1H),2.099(m,1H),1.934(m,1H),1.722(m,1H),1.562(m,2H),1.388(s,3H),1.274(s,3H),0.921(s,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.19,171.83,169.96,136.58,136.27,133.01,128.84,128.50,128.46,127.18,126.87,121.01,118.90,117.90,111.42,106.44,79.24,66.36,57.53,56.02,47.99,41.52,39.00,33.81,25.80,25.31,23.99,23.04,22.77,18.41。
实施例8制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰亮氨酸苄酯(6c)
按照制备6a的操作，由402mg(1.09mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，528mg(1.34mmol)TosH·Leu-OBzl，148mg(1.09mmol)HOBt，275mg(1.33mmol)DCC制备得到570mg(91.5%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得350mg(62%)纯标题化合物。Rf=0.52(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)573[M+H]+;Mp116-117℃;
(c=0.60,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.892(s,1H),8.222(d,J=7.8Hz,1H),7.430(d,J=7.5Hz,1H),7.325(m,1H),7.312(s,5H),7.004(m,2H),5.091(s,2H),4.367(m,1H),3.954(m,2H),3.750(d,J=13.8Hz,1H),3.458(m,1H),2.916(m,1H),2.100(m,1H),1.870(m,1H),1.725(m,1H),1.624(m,2H),1.611(m,1H),1.350(s,3H),1.266(s,3H),0.910(s,3H),0.903(s,6H),0.836(d,J=5.7Hz,3H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.40,172.29,171.53,136.54,136.20,133.01,128.84,128.50,128.40,127.15,121,02,118.90,117.97,111.42,106.38,79.26,66.55,57.53,56.14,50.83,47.97,41.77,39.00,33.82,25.79,25.29,24.95,24.73,24.12,23.27,23.08,22.73,21.51,18.15。
实施例9制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰异亮氨酸苄酯(6d)
按照制备6a的操作，由308mg(0.84mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，394mg（1.00mmol）TosH·Ile-OBzl，132mg(0.98mmol)HOBt，225mg(1.09mmol)DCC制备得到462mg(96.9%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得270mg(59%)纯标题化合物。Rf=0.51(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)573[M+H]+;Mp96-97℃;
(c=0.65,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.886(s,1H),8.024(d,J=8.1Hz,1H),7.436(d,J=7.5Hz,1H),7.197(s,5H),7.307(m,1H),7.008(m,2H),5.086(m,2H),4.328(m,1H),3.922(m,2H),3.770(d,J=13.5Hz,1H),3.499(m,1H),2.932(m,1H),2.052(m,2H),1.932(m,1H),1.726(m,1H),1.556(m,3H),1.346(s,3H),1.290(s,3H),0.932(d,J=6.3Hz,6H),0.836(m,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.73,171.80,171.32,136.58,136.11,133.00,128.79,128.56,128.51,127.16,121,03,118.91,117.97,111.43,106.33,79.37,66.53,57.53,56.92,56.69,41.82,38.98,37.00,33.81,25.80,25.42,25.04,24.91,24.14,23.01,22.83,18.32,16.04,11.64。
实施例10制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰缬氨酸苄酯(6e)
按照制备6a的操作，由602mg(1.63mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，745mg(1.96mmol)TosH·Val-OBzl，221mg(1.64mmol)HOBt，415mg(2.01mmol)DCC制备得到846mg(93.1%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得367mg(43%)纯标题化合物。Rf=0.51(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)559[M+H]+;Mp100-101℃;
(c=0.70,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.907(s,1H),8.013(d,J=8.4Hz,1H),7.438(d,J=7.5Hz,1H),7.301(s,5H),7.289(m,1H),7.006(m,2H),5.094(t,2H),4.278(m,1H),3.926(m,2H),3.766(d,J=13.8Hz,1H),3.506(m,1H),2.936(m,1H),2.121(m,2H),1.992(m,1H),1.720(d,J=11.7Hz,1H),1.543(m,1H),1.351(s,3H),1.292(s,3H),0.940(s,3H),0.920(s,3H),0.892(d,J=7.2Hz,3H),0.835(d,J=6.6Hz,3H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.73,171.88,171.35,136.54,136.13,133.00,128.81,128.58,128.53,127.13,121.04,118.91,118.01,111.42,106.32,79.37,66.55,57.51,57.45,56.88,41.82,33.82,30.50,25.41,25.79,25.02,24.93,24.16,23.05,22.82,19.44,18.33,17.85。
实施例11制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰苯丙氨酸苄酯(6f)
按照制备6a的操作，由792mg(2.15mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，1100mg(2.58mmol)TosH·Phe-OBzl，298mg(2.21mmol)HOBt和539mg(2.62mmol)DCC制备得到1198mg(91.5%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得579mg(48%)纯标题化合物。Rf=0.52(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)607[M+H]+;Mp63-64℃;
(c=0.55,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.862(s,1H),8.236(d,J=7.8Hz,1H),7.442(d,J=7.5Hz,1H),7.282(s,5H),7.249(m,6H),7.009(m,2H),5.085(s,2H),4.620(m,1H),3.850(m,2H),3.702(d,J=14.1Hz,1H),3.426(m,1H),3.132(m,1H),2.926(m,2H),2.444(d,J=13.5Hz,1H),1.919(m,1H),1.819(m,1H),1.335(m,1H),1.200(s,3H),1.150(s,3H),0.852(d,J=6.9Hz,3H),0.821(d,J=6.6Hz,3H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.38,171.38,171.33,137.16,136.38,136.03,132.81,129.70,129.62,128.81,128.73,128.60,128.45,128.31,127.12,127.05,126.74,121.04,118.93,117.95,111.37,106.37,79.22,66.68,57.49,56.42,56.32,53.76,41.70,38.84,37.13,25.27,24.84,24.06,22.85,22.79,18.14。
实施例12制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰谷氨酸双苄酯(6g)
按照制备6a的操作，由363mg(0.98mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，593mg(1.19mmol)TosH·Glu-OBzl2，134mg(0.99mmol)HOBt，250mg(1.21mmol)DCC制备得到627mg(94.0%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得308mg(49%)纯标题化合物。Rf=0.52(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)679[M+H]+;Mp133-134℃;
(c=0.50,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.873(s,1H),8.213(d,J=9Hz,1H),7.408(d,J=7.5Hz,1H),7.324(s,11H),7.005(m,2H),5.097(s,2H),5.073(s,2H),4.414(m,1H),3.950(m,2H),3.742(d,J=13.5Hz,1H),3.638(s,1H),3.433(m,1H),2.908(d,J=12Hz,1H),2.430(t,2H),2.050(m,3H),1.702(m,1H),1.529(m,1H),1.345(s,3H),1.252(s,3H),0.905(m,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.37,172.22,171.55,171.41,136.52,136.40,136.14,132.94,132.85,128.85,128.83,128.51,128.41,128.33,127.12,126.87,121.03,118.91,117.95,111.36,106.39,106.35,79.22,66.70,66.03,57.52,55.81,51.54,41.72,39.06,33.77,29.99,26.38,25.27,24.98,24.92,24.06,23.05,22.72,18.52。
实施例13制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰天冬氨酸双苄酯(6h)
按照制备6a的操作，由374mg(1.01mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，590mg(1.22mmol)TosH·Asp-OBzl2，141mg(1.04mmol)HOBt，256mg(1.24mmol)DCC制备得到619mg(92.2%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得285mg(46%)纯标题化合物。Rf=0.52(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)665[M+H]+;Mp127–128℃;
(c=0.50,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.884(s,1H),8.302(d,J=8.1Hz,1H),7.412(d,J=7.5Hz,1H),7.335(d,J=5.7Hz,1H),7.325(s,5H),7.295(s,5H),7.005(m,2H),5.068(s,2H),4.784(m,1H),3.929(m,2H),3.748(d,J=13.8Hz,1H),3.445(m,1H),2.904(d,J=6.6Hz,3H),2.581(d,J=12Hz,1H),2.026(m,1H),1.921(m,1H),1.529(m,1H),1.326(s,3H),1.254(s,3H),0.899(s,3H),0.877(s,3H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.25,171.23,170.57,170.42,136.56,136.41,136.18,135.95,132.84,128.85,128.79,128.52,128.49,128.39,128.34,128.25,127.12,126.87,121.03,118.92,117.91,111.38,106.42,79.22,66.96,66.41,57.43,55.93,49.09,48.98,41.75,38.86,36.08,25.27,24.99,24.01,23.01,22.79,18.41。
实施例14制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰丝氨酸苄酯(6i)
按照制备6a的操作，由410mg(1.11mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，310mg(1.35mmol)HCl·Ser-OBzl，154mg(1.14mmol)HOBt，284mg(1.38mmol)DCC制备得到538mg(89.2%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得215mg(40%)纯标题化合物。Rf=0.49(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)547[M+H]+;Mp93-94℃;(c=0.50,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.874(s,1H),8.134,(d,J=7.8Hz,1H),7.438(d,J=7.5Hz,1H),7.320(s,5H),7.288(m,1H),7.004(m,2H),5.184(t,1H),5.101(s,2H),4.441(m,1H),3.948,(m,2H),3.788(m,2H),3.633(m,1H),3.475(m,1H),2.913(d,J=13.2Hz,1H),2.539(m,1H),2.090(s,1H),1.946(m,1H),1.561(m,1H),1.367(s,3H),1.286(s,3H),0.929(s,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.34,171.56,170.64,136.55,136.27,133.01,128.78,128.37,128.18,127.16,121.02,118.90,117.95,111.42,106.46,79.26,66.50,61.66,57.53,56.42,54.89,41.79,38.85,31.15,25.35,25.02,24.18,23.12,23.00,22.74,18.46。
实施例15制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰苏氨酸苄酯(6j)
按照制备6a的操作，由418mg(1.13mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，338mg(1.38mmol)HCl·Thr-OBzl，155mg(1.15mmol)HOBt，286mg(1.39mmol)DCC制备得到570mg(90.0%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得240mg纯标题化合物(42%)。Rf=0.49(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)561[M+H]+;Mp93-94℃;
(c=0.65,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.882(s,1H),7.843(d,J=8.4Hz,1H),7.424(d,J=7.5Hz,1H),7.308(s,5H),7.287(m,1H),7.104(m,2H),5.189(s,1H),5.084(t,2H),4.335(d,J=8.4Hz,1H),4.243(s,1H),4.058(m,1H),3.912(m,1H),3.770(d,J=13.5Hz,1H),3.487(d,J=3.9Hz,1H),2.912(d,J=12.9Hz,1H),2.129(m,1H),2.033(m,1H),1.995(s,1H),1.594(m,1H),1.373(s,3H),1.298(s,3H),1.008(d,J=5.7Hz,3H),0.940(s,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.38,171.89,170.78,136.56,136.26,132.99,128.76,128.35,128.24,127.16,121.02,118.90,117.96.111.43,106.51,79.20,66.54,66.50,60.22,57.93,57.53,56.64,41.85,38.83,25.27,25.07,24.17,23.11,22.77,20.67,18.47,14.55。
实施例16制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰赖氨酸苄酯(6k)
按照制备6a的操作，由373mg(1.01mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，614mg(1.65mmol)HCl·Lys(Boc)-OBzl，143mg(1.06mmol)HOBt，253mg(1.23mmol)DCC制备得611mg[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰-N-Boc-赖氨酸苄酯粗产品(88.0%)，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得281mg(46%)纯[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰-N-Boc-赖氨酸苄酯。Rf=0.49(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)688[M+H]+;1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.862(s,1H),8.181(d,J=7.5Hz,1H),7.429(d,J=7.8Hz,7.309(s,6H),7.002(m,2H),6.741(t,1H),5.092(s,2H),4.308(d,J=4.2Hz,1H),3.937(d,J=12.6Hz,2H),3.756(d,J=13.8Hz,1H),3.462(m,1H),2.938(s,1H),2.868(d,J=6.3Hz,2H),2.072(m,1H),1.919(m,1H),1.720(m,2H),1.529(m,2H),1.362(s,15H),1.272(s,3H),0.916(t,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.35,171.97,171.50,171.42,156.01,136.55,136.39,136.20,133.01,132.84,128.82,128.47,128.36,127.16,127.12,121.02,118.90,117.97,111.35,106.36,79.29,77.81,66.53,57.53,56.19,52.34,52.26,41.73,39.03,31.00,29.38,28.73,25.36,25.00,24.13,23.04,22.84,22.77,18.42。
将纯品250mg(0.36mmol)[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰-N-Boc-赖氨酸苄酯置于50mg茄瓶中，滴加2mL无水乙酸乙酯搅拌溶解，冰浴条件下缓慢向反应瓶中滴加2.5mL4N HCl/EtOAc，加干燥管。反应2小时后利用TLC层析跟踪至原料点消失，停止反应。将反应液用水泵减压抽干，加无水乙酸乙酯充分搅拌后水泵减压抽干，反复三次。加无水***充分搅拌后水泵减压抽干，反复三次。得202mg(94.6%)纯标题化合物，其为淡黄色粉末。Rf=0.49(氯仿:甲醇:冰醋酸=20:1:0.10)。ESI-MS(m/e)588[M+H]+;Mp93-94℃;
(c=0.75,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=8.422(d,J=7.2Hz,1H),8.025(s,2H),7.519(d,J=7.5Hz,1H),7.372(d,J=12.3Hz,1H),7.351(s,5H),7.067(m,2H),5.097(s,2H),4.482(m,1H),4.325(d,J=5.1Hz,2H),4.105(m,1H),3.146(m,2H),2.719(s,2H),1.988(m,2H),1.915(s,2H),1.818(m,4H),1.641(m,2H),1.547(s,4H),1.366(s,3H),0.917(t,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.40,171.90,170.41,136.96,136.80,136.29,128.87,128.44,128.34,126.44,121.97,119.36,118.49,111.78,105.88,66.51,57.64,55.11,52.67,52.51,42.42,38.68,38.57,33.73,29.93,26.59,25.19,23.17,22.77,22.64,22.50,21.46,19.75,18.96。
实施例17制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰谷酰胺苄酯(6l)
按照制备6a的操作，由331mg(0.90mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，309mg(1.13mmol)HCl·Gln-OBzl，122mg(0.90mmol)HOBt，233mg(1.13mmol)DCC制备得到431mg(82.4%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=100:1)，得108mg(25%)纯标题化合物。Rf=0.23(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)588[M+H]+;Mp99-100℃;(c=0.55,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.872(s,1H),8.246(d,J=7.2Hz,1H),7.428(d,J=7.5Hz,1H),7.320(s,5H),7.307(d,J=7.5Hz,2H),7.002(m,2H),6.789(s,1H),5.093(s,2H),4.336(d,J=4.5Hz,1H),3.961(m,2H),3.752(d,J=13.8Hz,1H),3.450(m,1H),2.912(d,J=12Hz,1H),2.562(d,J=16.5Hz,1H),2.134(m,2H),2.058(m,2H),1.869(m,2H),1.521(m,1H),1.359(s,3H),1.270(s,3H),0.910(t,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.48,172.29,171.83,171.42,136.43,136.23,132.85,128.83,128.46,128.36,127.14,121.02,118.90,117.97,111.36,106.42,79.62,79.28,66.56,57.53,55.96,52.26,52.16,41.72,39.09,31.30,27.08,25.36,25.01,24.11,23.07,22.75,18.47。
实施例18制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰天冬酰胺苄酯(6m)
按照制备6a的操作，由495mg(1.34mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，416mg(1.61mmol)HCl·Asn-OBzl，186mg(1.38mmol)HOBt，333mg(1.62mmol)DCC制备得到653mg(85.6%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=100:1)，得170mg(25%)纯标题化合物。Rf=0.23(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)574[M+H]+;Mp110-111℃;
(c=0.75,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=8.193(d,J=8.1Hz,1H),7.422(d,J=8.4Hz,2H),7.305(s,5H),7.288(d,J=10.2Hz,1H),7.006(m,3H),5.068(s,2H),3.907(m,2H),3.746(d,J=13.8Hz,1H),3.422(m,1H),3.370(m,2H),2.884(m,1H),2.635(m,2H),2.061(m,1H),1.904(m,1H),1.555(m,1H),1.353(s,3H),1.262(s,3H),0.906(m,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.09,171.48,171.33,171.00,136.58,136.39,136.26,132.98,132.84,128.79,128.37,128.16,127.13,121.01,118.88,117.97,111.38,106.56,79.15,66.56,57.58,55.92,49.12,41.81,38.91,36.69,25.24,25.01,23.99,23.09,22.77,18.43。
实施例19制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰蛋氨酸苄酯(6n)
按照制备6a的操作，由450mg(1.22mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，603mg(1.47mmol)TosH·Met-OBzl，167mg(1.24mmol)HOBt，307mg(1.49mmol)DCC制备得到665mg(93.1%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得300mg(45%)纯标题化合物。Rf=0.53(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)591[M+H]+;Mp110-111℃;
(c=0.60,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.886(s,1H),8.225(d,J=7.8Hz,1H),7.424(d,J=7.5Hz,1H),7.327(s,5H),7.297(d,J=18Hz,1H),7.001(m,2H),5.113(m,2H),4.496(m,1H),3.964(m,2H),3.748(d,J=13.5Hz,1H),3.454(m,1H),2.910(m,1H),2.450(m,2H),2.061(m,1H),2.036(m,1H),2.003(s,3H),1,902(m,2H),1.530(m,1H),1.367(s,3H),1.267(s,3H),0.896(m,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.19,171.72,171.40,136.53,136.18,133.02,128.85,128.54,128.47,127.14,121.02,118.91,117.96,111.42,106.39,79.23,66.69,57.50,55.80,51.38,41.76,30.69,29.74,25.30,24.99,24.09,23.07,22.77,18.44,14.94。
实施例20制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰半胱氨酸苄酯(6o)
按照制备6a的操作，由435mg(1.18mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，389mg(1.476mmol)H-Cys(But)-OBzl，171mg(1.27mmol)HOBt，294mg(1.43mmol)DCC制备得到670mg(92.1%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样,进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得310mg(46%)纯标题化合物。Rf=0.52(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)619[M+H]+;Mp90-91℃;
(c=0.50,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.884(s,1H),8.276(d,J=7.2Hz,1H),7.418(d,J=7.5Hz,1H),7.333(s,5H),7.305(d,J=8.4Hz,1H),(7.006(m,2H),5.117(s,2H),4.595(d,J=5.7Hz,1H),3.942(m,2H),3.758(d,J=13.5Hz,1H),3.465(d,J=7.8Hz,1H),2.916(m,2H),2.009(m,2H),1.724(d,J=9.6Hz,1H),1.560(m,2H),1.366(s,3H),1.251(s,12H),0.920(d,J=4.2Hz,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.35,171.44,170.49,136.55,136.04,133.01,128.80,128.49,128.38,127.16,127.07,126.84,121.01,118.91,117.90,111.43,106.42,79.27,66.83,57.54,56.40,52.74,42.67,40.81,38.89,33.83,30.99,29.92,25.79,25.42,24.94,24.12,22.95,22.79,18.42。
实施例21制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰色氨酸苄酯(6p)
按照制备6a的操作，由786mg(2.13mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，942mg(2.57mmol)HCl·Trp-OBzl，291mg(2.15mmol)HOBt，544mg(2.64mmol)DCC制备得到1161mg(84.5%)标题化合物，其为淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得766mg(66%)纯标题化合物。Rf=0.52(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)646[M+H]+;Mp101-102℃;
(c=0.85,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.945(s,1H),10.860(s,1H),8.228(d,J=7.5Hz,1H),7.482(m,2H),7.349(m,2H),7.246(s,5H),7.195(m,1H),7.030(m,4H),5.032(s,2H),4.644(m,1H),3.868(m,2H),3.671(t,1H),3.404(m,2H),3.170(m,2H),2.910(d,J=12.3Hz,1H),2.430(d,J=13.2Hz,1H),1.961(m,1H),1.831(m,1H),1.230(s,3H),1.115(s,3H),0.849(m,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.35,171.79,171.34,136.65,136.56,136.07,132.95,128.76,128.39,128.27,127.51,127.20,124.39,121.43,121.01,118.89,118.48,118.02,113.98,111.84,111.40,109.29,106.49,79.23,66.59,57.49,56.30,53.46,41.73,38.91,27.57,25.31,24.93,24.14,22.92,22.72,18.14。
实施例22制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰脯氨酸苄酯(6q)
按照制备6a的操作，由700mg(1.90mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，377mg(2.28mmol)HCl·Pro-OBzl，257mg(1.90mmol)HOBt，470mg(2.28mmol)DCC制备得到1010mg(90.1%)标题化合物，淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得500mg(49%)纯标题化合物。Rf=0.51(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)557[M+H]+;Mp106-107℃;
(c=0.60,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.861(s,1H),7.376(s,5H),7.364(m,2H),6.999(m,2H),5.128(m,2H),4.907(m,1H),4.361(m,1H),3.953(d,J=13.5Hz,1H),3.713(d,J=13.8Hz,1H),3.555(m,1H),3.472(m,2H),2.958(m,1H),2.478(m,1H),2.209(m,1H),1.963(m,1H),1.892(m,2H),1.710(m,2H),1.625(m,1H),1.463(s,3H),1.189(s,3H),0.862(m,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=171.82,171.43,168.03,136.55,136.36,132.99,128.87,128.50,128.27,127.15,121.03,118.91,117.96,111.41,106.34,79.21,66.43,59.58,56.97,50.65,47.01,41.38,33.81,29.14,25.80,25.43,25.11,24.98,24.92,24.31,22.89,22.83,18.19。
实施例23制备[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-2-(甲基丙基)-乙酰酪氨酸苄酯(6r)
按照制备6a的操作，由607mg(1.64mmol)2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸(5)，876mg(1.98mmol)TosH·Tyr-OBzl，231mg(1.71mmol)HOBt，409mg(1.98mmol)DCC制备得到878mg(85.8%)标题化合物，淡黄色粉末。该粉末用氯仿湿法装柱，干法拌样，进行纯化(氯仿:甲醇=200:1)，得410mg(47%)纯标题化合物。Rf=0.52(氯仿:甲醇=20:1)。ESI-MS(m/e)623[M+H]+;Mp103-104℃;(c=0.60,CH3OH);1H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ=10.846(s,1H),9.203(s,1H),8.134(d,J=8.1Hz,1H),7.442(d,J=7.5Hz,1H),7.322(s,1H),7.275(s,5H),6.994(m,4H),6.634(d,J=8.4Hz,2H),5.069(s,2H),4.526(m,1H),3.831(m,2H),3.719(d,J=13.8Hz,1H),3.430(m,1H),2.988(m,1H),2.896(m,1H),2.772(m,1H),2.447(d,J=12.6Hz,1H),1.868(m,1H),1.388(m,2H),1.240(s,3H),1.171(s,3H),0.858(t,6H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)δ=172.40,171.44,171.23,156.45,136.39,136.10,136.05,132.95,132.81,132.63,130.56,128.80,128.43,128.31,127.13,127.00,121.04,118.92,118.00,115.44,111.36,106.40,79.25,66.60,57.44,56.38,54.05,53.97,41.72,38.90,36.47,31.14,25.32,24.89,24.10,22.82,18.14。
实验例16a-r抗肿瘤细胞增殖活性评价
1)受试样品
本发明的6a-r均用含1%二甲基亚砜（DMSO）的PBS配制成所需浓度。
2)细胞株
S180(小鼠肉瘤细胞)、HL60(人早幼粒细胞白血病细胞)、K562(人慢性粒细胞白血病细胞)、H22(小鼠肝癌细胞)、SH-sy5y(人神经母细胞瘤细胞)5株肿瘤细胞均购自美国标准菌种收藏所(ATCC)。
3)主要仪器及材料
石英自动双重纯水蒸馏器：1018-B，江苏荣华仪器制造有限公司；
高压灭菌锅：400Ep-Z，H+P公司；
水浴锅：YLE-1000，北京德天佑科技发展有限公司；
超净台：VS-1300-U洁净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；
细胞孵育箱：INC153，北京五洲东方科技发展有限公司；
低温离心机：SPD111V，Thermo公司；
酶标仪：MULTISJKAN MK3，Thermo公司；
平板振荡器：MS2Minishaker，IKA公司；
96孔细胞培养板、25cm2培养瓶：Corning Costar公司；
2mL冻存管：Corning Costar公司；
0.22μm、0.45μm微孔滤膜：上海兴亚净化材料厂。
4)主要试剂
RPMI-1640培养基干粉：Gibco公司；
PBS缓冲液：每升溶液中含有NaCl8.2g、KCl0.2g、Na2HPO4·H2O1.56g、KH2PO40.2g，PH值7.4；
胎牛血清：Hyclone公司；
0.25%胰酶溶液：Hyclone公司；
青霉素、链霉素：solarbio公司；
MTT(四噻唑蓝)：solarbio公司，溶于PBS溶液中，制成5mg/mL的溶液，过滤除菌后使用，避光保存；
阿霉素(ADR)：北京华丰联合技术有限公司。
DMSO：二甲基亚枫，Hyclone公司；
5)试验方法
将生长状态良好、处于对数生长期的SH-sy5y细胞按3×104个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μl。置于37℃、5%CO2培养箱中培养4小时待贴壁。分别将生长状态良好、处于对数生长期的S180、HL60、K562、H22细胞按照4×104个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μl。5株细胞按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的6a-r，每孔25μl，对照孔加入等体积的PBS。在37℃、5%CO2培养箱中培养48小时，每孔加入25μl浓度为5mg/mL的MTT溶液，继续置于37℃、5%CO2培养箱中培养4小时。离心4分钟(3000rpm/min)。小心吸出上清液，每孔加入120μl DMSO溶解紫色残留物(甲瓒)，平板振荡10分钟使沉淀全部溶解，于570nm酶标仪上测定O.D.值(吸光度)，波长570nm。
按照公式“相对生存率=(D含药-D空白)/(D对照-D空白)×100%”计算每一个样品浓度下的样品对肿瘤细胞的抑制率。
实验平行重复3次，以抑制率对化合物浓度作图，计算本发明化合物(6a-r)的IC50(半数有效抑制浓度)值。实验结果如表1所示。
表16a-r抗肿瘤细胞增殖活性(IC50±SDμM)a
a)n=9b)100μM时该化合物对该种肿瘤细胞的抑制率
实验例26a-r体内抗肿瘤活性评价
1）实验材料
受试化合物：本发明实施例6-23得到的所有化合物6a-r；
阳性对照为阿霉素；
实验动物：ICR雄性小鼠(清洁级)，体重20±2g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。每12只小鼠一组，空白和阳性对照各一组；
瘤源：小鼠S180肉瘤，由北京大学医学部动物实验中心提供，自行传代维持；
溶剂：生理盐水。
2）剂量设置
6a-r和阿霉素的给药剂量均为1μmol/kg，均采用腹腔单次给药。
3）药物配制
6a-r加入少量吐温80助溶，逐渐加入生理盐水至所需浓度即可。阿霉素为生理盐水溶液。
4）给药剂量及给药设置
6a-r均以腹腔单次给药，按1μmol/kg的给药剂量每天一次，0.2mL每鼠，连续给药7天，共给药7次。
生理盐水对照以等体积的相应溶液，均以腹腔单次给药，0.2mL每鼠，连续给药7天，共给药7次。
阿霉素均以腹腔单次给药，按1μmol/kg的给药剂量每天一次，0.2mL每鼠，连续给药7天，共给药7次。
5）动物模型的建立
采用体内抗肿瘤腋皮下接种模型：无菌条件下抽取接种7d后生长旺盛的S180腹水瘤瘤液，用生理盐水稀释成(1:3)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2%台盼蓝染色，混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞，并按如下公式计算细胞浓度和细胞存活率。
细胞浓度=(4大方格内活细胞数/4)×104稀释倍数=细胞数/mL
细胞存活率=活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%
将存活率大于90%的瘤液用匀浆法制备成1.5×107个/mL的细胞悬液，于鼠腋皮下接种0.2mL/只，造成实体瘤动物模型。
6）实体瘤抑瘤率的测定和脾指数的测定
实验进行至第8天，称小鼠体重，脱颈椎处死小鼠，并剖取各组小鼠的肿瘤及各主要脏器称重，最后统计各组药物的抑瘤率。实体瘤的疗效以瘤重抑制百分率表示，计算如下：瘤重抑制率%=(1-给药组瘤重/空白组瘤重)×100%。脾指数=脾重(mg)/处死体重(g)。
7）统计方法
本实验数据统计均采用t检验和方差分析。
6a-r对荷S180肉瘤小鼠的体内抗肿瘤活性结果如表2所示。
表2的数据表明在1μmol/kg剂量下6a-r几乎都显示抗肿瘤作用，其中6d和6h的抗肿瘤作用最强。
表2.5和6a-r对荷S180小鼠肿瘤重量的影响a
注：a)n=12；*）与生理盐水组比较P<0.001
绝大多数抗肿瘤药物在杀伤肿瘤细胞的同时，对免疫功能也有很大的影响，常引起脾指数大幅度降低。从脾指数来看，与空白对照比较，在1μmol/kg剂量下阿霉素引起脾指数降低50%，6a-r不引起脾指数降低。
Claims (3)
1.一种以下通式的化合物
其中R为CH3、H、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH(CH3)2、CH2C6H5、CH2CH2CO2Bzl、CH2CO2Bzl、CH2OH、CHOHCH3、(CH2)4NH2、(CH2)2CONH2、CH2CONH2、(CH2)2SCH3、CH2SH、Indole-3-yl-CH2或CH2-C6H4-OH-p。
2.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其特征在于，2-[四氢-β-咔啉并(2,2-二甲基-咪唑-4-酮-3-基)]-4-甲基-戊酸在1-羟基苯并***、二环己基碳二亚胺和N-甲基吗啉存在下，在冰浴条件下与氨基酸苄酯的盐酸盐或磺酸盐反应。
3.权利要求1所述化合物作为制备抗肿瘤药物的应用。
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| 彭师奇.β-咔啉及吲哚嗪生物碱类似物的立体选择性合成.《化学通报》.1991,(第7期), |
| 薛宝玉等.3S21 ,2 ,3 ,42四氢2β2咔啉232羧酸的结构修饰和抗血栓活性研究.《首都医科大学学报》.2005,第26卷(第1期), |
| 薛宝玉等.3S21,2,3,42四氢2β2咔啉232羧酸的结构修饰和抗血栓活性研究.《首都医科大学学报》.2005,第26卷(第1期), * |
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