CN102245179A - 神经病症的治疗剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及为Nrf2-ARE途径激活剂的治疗化合物，其适于治疗已知受氧化应激介导的疾病，例如运动神经元疾病。本发明还包括本发明方法鉴定的用于治疗神经退行性疾病的化合物。
Description
发明领域
本发明涉及治疗剂，其用于治疗已知受氧化应激介导的神经病症，特别是用于治疗运动神经元疾病和肌萎缩性侧索硬化。本发明特别包括用于治疗神经障碍的产品。
发明背景
氧化应激是指自由基产生和细胞防御它们的能力之间失配的细胞病理学后果。来自实验模型和人脑研究的增加中的数据表明，氧化应激可能在神经退行性疾病中起着重要作用。氧化应激与正常老化和诸如帕金森氏病、阿尔茨海默氏病(Alzheimer′s disease)和肌萎缩性侧索硬化的各种神经退行性障碍有关联，并且可以是引起包括坏死、凋亡和兴奋性毒性在内的各种形式的细胞死亡的常见机制。
运动神经元疾病(MND)在美国通常称为肌萎缩性侧索硬化(ALS)，并且是进行性、致命的神经退行性疾病，特征为运动皮质层、脑干和脊髓中运动神经元的丧失，这导致乏力和萎缩。ALS通常在诊断的2-3年内导致死亡。ALS以散发性形式(所有病例的90％)和家族形式两者发生(所有病例的10％)。在20％的家族ALS中，发现在铜锌超氧化物岐化酶基因(SOD1)中存在突变。参与散发性病例和参与其余80％家族病例的基因还有待鉴定。目前，没有预防或逆转所述病症进程的治疗。合适的治疗(诸如利鲁唑和抗氧化物)最好也仅是适度延长存活期。
没有完全了解引起所述疾病的机制。然而，将SOD1突变鉴定为一部分ALS家族病例的成因已经允许产生所述疾病的细胞和小鼠模型，这些模型已经大大增强了对疾病机制的了解。来自这些模型以及来自患者的证据已经为氧化应激在疾病发病机制中的作用提供了非常好的证据。氧化应激对神经元损伤的其他潜在机制具有显著的串扰，例如线粒体功能障碍、兴奋性毒性、蛋白凝集、细胞骨架功能障碍和神经胶质细胞激活。它可以输入这些机制或相应地通过它们增强。在最常用的ALS小鼠模型(表达人SOD1的G93A突变体形式的转基因小鼠)中进行的荟萃分析(meta-analysis)研究反应了发病机制的该核心作用，其中靶向氧化应激的疗法已经作为在减慢疾病进程中表现出最大前景而被突出。
尽管该核心作用，但是在ALS中靶向氧化应激没有转化成患者的临床益处，这在一定程度上可能是由于缺乏足够有效的能接近CNS的抗氧化剂。限制神经退行性疾病中的氧化应激的新型方法是促进转录因子即NFE2-相关因子2(Nrf2)的激活。Nrf2通过它与抗氧化剂反应元件(ARE)的相互作用来驱动一批Phase II去毒蛋白和抗氧化酶的表达。当激活时，该‘程序性细胞生命’反应是神经保护性的，相反地，该途径的减弱可以增强神经元对一系列神经毒性应激的敏感性。已经在ALS细胞模型中观察到该途径的调节异常，并在人组织中得到证实。Nrf2本身和多个靶基因在表达突变的(G93A)人SOD1的运动神经细胞系中受到抑制。此外，在线粒体抗氧化防御中起重要作用的该途径的靶标，即过氧化物氧化还原酶3(peroxiredoxin 3，PRDX3)，在该细胞模型和来自家族和散发性ALS的人组织中都受到下调。G93A SOD1转基因小鼠，当与ARE报告小鼠杂交时，表现出在30天龄的肌肉中Nrf2-ARE途径的激活，90天时，在脊髓中少量激活，且在110天时间点时，更强烈的激活。在90天龄时，小鼠已经开始表现出肌肉乏力和运动神经元丧失，且在110天时，它们表现出显著的运动神经元病理。这表明在该鼠模型中Nrf2-ARE途径的激活在量上可能不足或太晚而不能保护运动神经元免于显著的损伤。联合其他报告，这可能反应出表达突变的SOD1的细胞在激活该途径的能力上的缺陷。
Nrf2-ARE途径是ALS中吸引人的治疗靶标，因为其已经得到很好地阐述，易受小分子激活，并且细胞防御的激活可以比例如直接的清除法赋予更持久的抗氧化应激的保护。从现有技术了解到衍生于绿茶儿茶素-(-)表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)的类黄酮在表达突变的(G93A)人SOD1的运动神经细胞系中表现出神经保护性作用。在EGCG的浓度大于20μM时，该细胞系部分地受到免于H2O2诱导的细胞死亡的保护。还在来自60天龄的ALS G93A小鼠模型中，以口服一系列剂量，一天一次，检验了该化合物。在较高剂量时，观察到存活期显著延长，同时平均存活期增加。尽管事实上EGCG本身是促氧化剂，但是还是发现了该治疗作用，从而缩小了它的治疗窗和它的高度极性，使它不可能以显著的浓度穿过血脑屏障。
需要有效治疗已知受氧化应激介导的疾病且尤其是类似运动神经元疾病、ALS、帕金森氏病的疾病和其他神经退行性疾病的治疗剂。
需要具有最小的毒性并且有能力穿过血脑屏障，因此能透入CNS的用于治疗神经退行性疾病的治疗剂。
发明概述
按照本发明的第一方面，提供了治疗运动神经元疾病的治疗剂，所述治疗剂是选自穿心莲内酯和S[+]阿朴***的Nrf2-ARE途径激活剂。
运动神经元疾病(MND)是用于涵盖多种运动神经元病的整个概括性术语。肌萎缩性侧索硬化(ALS)、进行性肌萎缩(PMA)、进行性延髓麻痹(PBP)、原发性侧索硬化(PLS)都是亚型。MND是多用于欧洲的一般术语，而ALS有时更常用于美国。本领域技术人员应当理解，提及运动神经元疾病(MND)也延伸至提及ALS、PMA、PBP和PLS，这些命名的疾病状态可以交替使用。
在整个本说明书的描述和权力要求书中，词“包括(comprise)”和“包括(contain)”以及所述词的变型，例如“包括(comprising)”和“包括(comprises)”表示“包括但不限于”，并且并不意图(和不)排除其他部分、添加剂、组分、整数或步骤。
在整个本说明书的描述和权力要求书中，除非上下文有其他指示，单数包括复数。特别是，如果使用了不定冠词，应当将说明书理解成考虑复数以及单数，除非上下文有其他指示。
结合本发明的具体方面、实施方案或实施例而描述的特征、整数、性能、化合物、化学部分或组应当被理解成适用于本文描述的任何其他方面、实施方案或实施例，除非与之不相容。
本发明通过筛查和检验的级联已经说明，穿心莲内酯和S[+]阿朴***是有效且还有能力渗透CNS的‘类药性(like-drug)’Nrf2-ARE激活剂。
本发明的化合物可以以其自身或作为治疗方案的一部分用于预防或治疗。
应当理解，本文所用的术语“治疗(treatment)”和“治疗(treating)”表示为了抵抗诸如疾病或病症的疾病状况，而对患者的管理和护理。所述术语意图包括患者正患有的给定疾病状况的全方位治疗，例如给予活性化合物，来缓解症状或并发症，延迟疾病、病症或疾病状况的进展，缓解或减轻症状和并发症和/或至治愈或消除疾病、病症或疾病状况以及至预防所述疾病状况，其中预防应当被理解成为了减轻疾病、疾病状况或病症而对患者的管理和护理，并包括给予活性化合物，以预防症状或并发症的发作。待治疗的患者优选为哺乳动物，尤其是人，但它也可以包括动物，例如狗、猫、牛、羊和猪。
按照本发明的另一方面，提供了选自穿心莲内酯和S[+]阿朴***的Nrf2-ARE途径激活剂在制备用于治疗运动神经元疾病的药物中的用途。
阿朴***是多巴胺激动剂，通常作为间歇注射或连续输注而皮下给药。它用于管理晚期帕金森氏病，并为神经外科程序提供选择。以前临床上并未表明所述化合物的[S]+对映异构体可用于治疗ALS或其他疾病状态。结果显示，尤其是没有多巴胺激动剂活性的S对映异构体具有正确的如本发明方法所限定的和如上文所描述的作为ALS治疗剂的标准。因此，本发明认识到阿朴***的[S]+对映异构体的新的治疗作用。
下面给出了阿朴***的化学结构，并且应当理解，[S]+对映异构体的任何变体和替代物都包括在本发明的化合物中。另外，[S]+对映异构体的任何衍生物或盐都包括在本发明的范围内，且通过引用将PCT/US03/08448的内容并入本文。
穿心莲内酯是植物穿心莲(Andrographis paniculata)的双萜内酯，已知对诸如乳腺癌的某些具体癌症具有抗肿瘤活性和已知具有抗炎作用。以前临床上并未表明，所述化合物可用于治疗与氧化应激有关的疾病，所述疾病例如但不限于ALS。因此，本发明认识到穿心莲内酯的新的治疗作用。
下面给出了穿心莲内酯的化学结构，并且应当理解，其任何变体和替代物都包括在本发明的化合物中。例如穿心莲内酯和它的衍生物可以具有下述化学式，其中R1取代基(R.sub.1)、R2取代基(R.sub.2)和R3取代基(R.sub.1)可各自代表氢、酰基、苯基、单磷酸盐或聚磷酸盐、单硫酸盐或聚硫酸盐、糖基、环烷基或脂肪族烷基、烯基或炔基，其中所述磷酸盐或硫酸盐衍生物可以为游离酸形式或者作为盐。
优选地，可以将本发明的化合物配制成适于给予需要治疗的患者的药物形式。
药物组合物可以为适于口服给药、肠胃外给药、局部给药、鼻内给药、眼部给药、耳部给药、直肠给药或经皮给药的任何形式。如果意欲将所述组合物肠胃外给药，可以将它们配制成用于静脉内给药、肌肉内给药、腹膜内给药、皮下给药或通过注射、输注或其他递送方式直接递送到靶器官或组织中。递送可以通过大丸剂注射、短期输注或较长期的输注进行，且可以通过被动递送或通过利用合适的输注泵进行。
因此，本发明的化合物还包含药物成分或赋形剂。
“药物成分”或“赋形剂”表示添加到本发明组合物中的药理上非活性的药物可接受的化合物。所述成分或赋形剂没有任何药理学特性。
按照本发明的另一方面，提供了用于治疗由于氧化应激而发生的神经退行性疾病状况的治疗剂，所述治疗剂是选自穿心莲内酯和S[+]阿朴***的Nrf2-ARE途径激活剂。
优选地，已知受氧化应激介导的所述神经退行性疾病状况选自：运动神经元疾病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)和原发性侧索硬化(PLS)、亨廷顿舞蹈病(Huntington′s disease)、年龄相关的黄斑部退化、用于移植/外科程序的器官的保存、细胞培养物的稳定、光致氧化应激与皮肤老化和辐射诱导的细胞损伤的治疗。
按照本发明的另一方面，提供了穿心莲内酯用于治疗由于氧化应激而发生的疾病或疾病状况的用途，所述疾病或状况选自运动神经元疾病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、原发性侧索硬化(PLS)、亨廷顿舞蹈病、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、年龄相关的黄斑部退化、用于移植/外科程序的器官的保存、细胞培养物的稳定、光致氧化应激与皮肤老化和辐射诱导的细胞损伤的治疗。
按照本发明的另一方面，提供了治疗患有由于氧化应激而发生的神经退行性疾病的个体的方法，所述方法包括给予治疗上有效量的选自穿心莲内酯和S[+]阿朴***的Nrf2-ARE途径激活剂。
按照本发明的另一方面，提供了体外筛查适于治疗已知受氧化应激介导的疾病的候选治疗剂库的方法，所述方法包括：
(i)将非神经元来源的对照或正常细胞暴露于候选治疗剂，并鉴定能激活Nrf2-ARE途径的候选试剂；
(ii)将神经元来源的细胞暴露于在步骤(i)中具有阳性作用的候选试剂，并评估它们激活Nrf2-ARE途径的能力；
(iii)评估所述候选试剂保护神经元来源的细胞免受氧化应激损害的能力；以及
(iv)进行一些列电脑模拟(in silico)检验，以确定物理和化学参数，其中在步骤(i-iii)中具有阳性结果并具有合适的物理化学性质的候选治疗剂可能适于治疗已知受氧化应激介导的疾病。
本发明提供了便利的检验级联，作为用于鉴定更有效且还有能力渗透CNS的‘类药性’Nrf2-ARE激活剂的筛查方法。本发明的方法提供了有力的筛查级联，以选择少量有希望的分子用于进一步的体内检验。最初检验这些“采样(hit)”分子在衍生于正常非人动物的细胞系和人类来源的细胞系中激活Nrf2-ARE途径的能力，随后将其用作“工具”分子来确定在源于非人动物CNS的初级培养物的神经细胞中是否可以激活所述途径。
优选地，衍生细胞的非人动物选自猴、狗、猫、兔、大鼠和小鼠。优选啮齿动物，且小鼠是最优选的物种。
优选地，在本发明的一个实施方案中，用ARE报告构建体稳定地转染细胞，任选地，所述报告分子是荧光剂，例如但不限于GFP等。
优选地，测定Nrf2可调型基因表达增加的细胞。本文下面描述了用于检测激活的方法。
优选地，神经元来源的细胞是CNS细胞，且尤其是星形胶质细胞。在本发明的一个实施方案中，它们衍生于表达G93A突变形式的人SOD1的转基因非人动物。
优选地，步骤(iii)的氧化应激检验包括剥夺血清并任选地用二氯荧光黄或衍生物测量氧化应激，或与线粒体毒素(甲萘醌)一起孵育，并检测细胞存活。然而，应当理解，本发明方法可以利用其他应激检验。
优选地，步骤(iv)中合适的物理和化学参数是cLogP＜5、分子量＜500、氢键供体(OH+NH的数量)＜5和氢键受体(O加N原子)＜10。通常将合适的物理和化学参数称为里宾斯基五规则。另外，对于被动扩散穿过血-脑屏障(BBB)而言，AlogP小于4但大于1且分子极性表面积为100以下(理想地为80)是最佳的，然而，进一步优选的性能还可以应用于选择最好的候选治疗剂。
归于本发明具体方面的任何特征都意图适用每一方面和已作必要修正的每一方面。
附图简要说明
图1表示用在本发明中的NRF2-ARE测定的示意图。
图2显示了测定确认的结果。图1a显示了在CHO-4×ARE-TK细胞系中tBHQ(空方块)和EGCG(实方块)的浓度反应曲线。两种分子都具有窄的的ARE激活窗，峰值分别在10μM和100μM。图1显示了Z’得分测定的结果。显示了来自单个384孔板的介质(192孔)和阳性对照(10μM依布硒啉，192孔)的平均值+/-SD。该测定的Z’得分是0.51，信噪比(S/N)和信号与背景的比(S/B)分别为12.8和2.9。
图3显示了一个384孔板的谱库筛查数据的实例。GFP荧光对孔数。孔1-24和360-384包含备选的阳性(10μM依布硒啉)和阴性(介质)对照。虚线表示阴性对照的平均值+3SD，并且将该线以上的所有化合物都计为‘采样’。一些孔显示荧光减弱，最大的可能是由于毒性所致。
图4a显示了所有46种采样化合物的重叠浓度反应曲线。注意多数采样化合物的图谱遵守钟形剂量反应曲线，同时在更高浓度时由于毒性导致荧光减弱，并具有窄的ARE诱导窗。图4b显示了在高浓度时具有极小毒性或具有宽的ARE诱导窗的化合物，注意这些化合物的多数在100μM时都表现出一些毒性。
图5显示了来自1321N1细胞中的A/初级筛查(EC50＜5μM的化合物)和B/星形胶质细胞氧化应激测定(EC50＜3μM的化合物)的化合物的药效基团模型和比对。芳香族/疏水性特征为绿色，氢键受体特征为蓝色。对于(B)，基本药效基团表现出与氢键受体相关的两个疏水性特征。这与已知的Nrf2激活剂一致，其可以通过KEAP1上的巯基基团的亲电子攻击而起作用，KEAP1是胞质Nrf2调节剂。
图6显示了17种最好的采样化合物和S[+]阿朴***在C6星形胶质细胞系中的ARE报告测定结果。大体上，反应与在CHO细胞系中所观察到的相似，并且R[-]和S[+]阿朴***两者都将Nrf2-ARE途径诱导至相似的程度，这表明该活性与R[-]阿朴***的多巴胺激动剂活性无关。对于大多数化合物而言，在NSC34细胞系中的反应基本上减弱或不存在(未示出)。
图7显示了用穿心莲内酯(Andro)和S[+]阿朴***(Apo S)以在C6-4×ARE-TK报告细胞中所确定的EC50和EC90浓度处理大鼠C6星形胶质细胞系(C6星形胶质细胞，图7a和图7b)和初级小鼠星形胶质细胞(图7c和图7d)24小时之后，两种细胞系中NRF2可调型基因的定量RT-PCR分析。在C6细胞中，药物处理后，使用多重PCR查询9个感兴趣的基因的表达水平，包括Nrf2本身。仅有血红素加氧酶1和NQO1两个基因在基因表达上表现出统计学上显著变化，分别显示在(a)和(b)中。还进行了相同条件下这两个基因在初级小鼠星形胶质细胞中的标准定量RT-PCR，(c)和(d)。星号表示通过单向ANOVA，DMSO对照中的显著差异。
图8显示NRF2诱导剂保护初级小鼠星形胶质细胞/MN共培养物中的运动神经元(MN)免于甲萘醌应激。用S[+]阿朴***(Apo S)和穿心莲内酯(Andro)分别以如在大鼠C6 4×ARE-TK报告细胞中所确定的它们的EC50和EC90浓度将所述共培养物预处理24小时。然后用10μM甲萘醌激发共培养物6小时，以诱导氧化应激。在DMSO对照细胞中，观察到运动神经元数减少约25％，这在任一药物处理的孔中都没发现。
图9显示用Nrf2诱导剂以EC50和EC90浓度处理之后，初级小鼠星形胶质细胞中的血红素加氧酶1的免疫荧光染色。用Image J确定面积和染色强度，并用其计算染色指数。
图10显示了用Nrf2诱导剂以EC50和EC90浓度处理之后，初级小鼠星形胶质细胞(图10a)和来自初级小鼠星形胶质细胞的条件培养基(图10b)中总的谷胱甘肽水平。在用Nrf2诱导剂预处理24小时之后，使用标准方法检测总的谷胱甘肽水平。相对于DMSO对照，所有的处理都显著增加了星形胶质细胞中的谷胱甘肽水平，并且两种药物的EC90浓度都显著增加了细胞外谷胱甘肽水平(*p值＜0.005)。数据是三次独立实验的平均值。
图11显示了用穿心莲内酯(Andro)和S[+]阿朴***(Apo S)以EC50和EC90浓度处理24小时之后，超表达G93A突变的SOD1的初级小鼠星形胶质细胞中Nrf2可调型基因NQO1(a)和血红素加氧酶1(HOX1)的定量RT-PCR分析。星号表示通过单向ANOVA来自DMSO对照的显著差异。
图12A显示了S[+]阿朴***(Apo S)的体内药物动力学时程，以及图12B显示了在小鼠中相应的PK参数(每个时间点n＝3或4)。图12C表示在2.5或5.0mg/kg S[+]阿朴***(Apo S)单次皮下注射之后的6、24和48小时，小鼠中HO-1和NQO-1的QRT-PCR。
发明的详细描述
细胞培养物
将中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSC34小鼠运动神经细胞、C6(大鼠)和1321N1(人)星形胶质细胞系常规地维持在补充了10％FBS和青霉素/链霉素的DMEM中。TK-EGFP报告构建体由***pEGFP(Clontech)的多克隆位点的123bp的胸苷激酶启动子组成，以及ARE-TK-EGFP还包含位于TK启动子3′的41bp的GST ARE基序(TAGCTTGGAAATGACATTGCTAATCGTGACAAAGCAACTTT)(SEQID NO：1)的四个重复。使用Lipofectamine 2000(Invitrogen)将这些质粒转染进CHO、C6和1321N1细胞系，在0.5mg/ml G418中选择10-14天后，将它们扩大，并使用荧光激活细胞分选术(BD，FACSAria)对每个细胞系进行两次相继的细胞分选来选择基础eGFP表达。这些具有基础eGFP表达的稳定的转染子的混合群体用于随后的测定中，将含有ARE的系称为4×ARE-TK-GFP，且将对照细胞系称为TK-GFP。用G93A突变的SOD1转染NSC34细胞系，并通过在250μg/ml G418选择和通过有限稀释克隆来分离稳定转染的单细胞克隆。
ARE报告测定-谱库筛查确认
为了筛查2000种小分子药物和天然产物的谱库(spectrum library)，使用一系列铺板密度(在测定前24小时以5-20×104/孔铺板)和不同的培养基在384孔板(Greiner Bio-one，μClear，黑色)中使TK-GFP CHO ARE报告细胞系进行Z’得分测定。将备选孔与10μM的依布硒啉(Ebselen)和介质(0.1％DMSO)孵育24小时，随后用含有0.3μM的溴乙啡锭二聚体-1(EthD1)的PBS取代培养基。该依布硒啉浓度代表该药的近似EC90。然后使用Fusion通用读板器(Packard Bioscience)，在Ex485nm/Em530nm检测GFP荧光(ARE诱导)。按下面计算z得分。
其中
SD+＝阳性对照孔的标准偏差
3SD-＝阴性对照孔的标准偏差
Ave+＝阳性对照孔的平均荧光读数
Ave-＝阴性对照孔的平均荧光读数
对于不同的测定条件，还要确定信噪比(S/N＝Ave+/SD+)和信号与背景(S/B＝Ave+/Ave-)的比。可接受的Z’得分为＞0.5。对于库筛查，在-1天和0天时，将细胞在含有10％FBS的正常DMEM培养基中以20×104的密度铺板，在无血清的培养基中将细胞与药物一起孵育24小时。手动去除培养基，并使用Q-bot液体处理***(Genetix，New Milton，UK)用在0.1％DMSO中稀释至10μM谱库取代(1种化合物/孔)。24小时后去除培养基，并用相同体积的含有0.3μM EthD1的PBS取代。然后用Fusion通用读板器(Packard Bioscience)检测GFP荧光(ARE诱导，Ex485nm/Em530nm)和Eth D1荧光(毒性Ex530nm/Em645nm)。以单点测定对TK-GFP CHO ARE细胞系筛查两次，且对对照TK-GFP CHO细胞系筛查一次，以消除假阳性。图1显示了NRF2-ARE测定的示意图。
ARE报告测定-EC50的确定
在无FCS的DMEM中用药物(0.01-100□M，一式三份)或介质(0.1-1％DMSO)(一式三份)将96或384-孔组织-培养板中的表达4×ARE-TK-GFPCHO或TK-GFP CHO细胞的汇合培养物处理24小时，一式三份。去除培养基，并用相同体积的含有0.3μM EthD1的PBS取代。然后用Fusion通用读板器(Packard Bioscience)检测GFP荧光(ARE诱导，Ex485nm/Em530nm)和Eth D1荧光(毒性Ex530nm/Em645nm)。利用GraphPad Prism(GraphPad软件)，用非线性回归拟合半对数图上的∑形剂量-反应曲线，以计算EC50。以相似的方式在用4×ARE-TK-GFP和TK-GFP构建体稳定转染的C6和1321N1星形胶质细胞系中实施报告测定，除了将Eth D1直接添加至培养基中，并在将细胞洗涤一次和读取DCF信号之前读取。
氧化应激测定
使用简单的氧化应激测定来确定用NRF2-ARE诱导药物预处理是否能防御随后的氧化应激损害(血清剥夺(serum withdrawal))。将NSC34、C6和1321N1细胞铺于96孔组织培养平板，以达到30％的汇合度。将它们在一式三孔中与作为9点滴度的药物(100□M-10nM)一起孵育24小时。观察细胞密度，确保没有显著的毒性或生长抑制发生。然后用无血清、无苯酚的培养基取代培养基，持续5小时。将二氯荧光黄(DCF)和溴乙啡锭二聚体(EthD1)(Molecular Probes，Paisley，UK)添加至细胞，至终浓度为5μM和0.3μM，1小时后，分别在Ex485nm/Em530nm、EX530nm/Em645nm读取DCF和EthD1荧光。然后对细胞进行细胞存活测定，由于将保护检测为DCF信号的％减弱，因此将检测到细胞数量减少的数据点排除。
细胞活力测定
所用的方法基本上如本领域内之前所描。简而言之，将溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)添加至细胞空孔，至终浓度为0.5mg/ml，并取决于所用的细胞系于37℃孵育1-3小时。在Ex695nm处读取吸光度之前，将细胞和反应产物于室温下在20％SDS/50％DMF中溶解1小时，同时摇动。
在表达G93A SOD1的NSC34细胞(ALS细胞模型)中的基础氧化应激测定
将表达G93A SOD1的NSC34细胞铺于96-孔组织-培养板中含有10％FBS的无酚红的DMEM中，直至30-40％汇合。然后一式三孔中将它们与0.01、0.1、1、10μM的药物或介质(0.1％DMSO)一起孵育24小时。使用如同在氧化应激测定中的DCF和EthD1检测细胞溶质的活性氧水平。
初级小鼠运动神经元/星形胶质细胞共培养物
从来自1-2天龄幼小动物的C57B1/6皮质建立小鼠神经胶质培养物。切出皮质，在DNaseI、胶原酶和胰蛋白酶中孵育后，通过粉碎，解离细胞。重复孵育和粉碎步骤，以确保细胞完全解离。将细胞以45,000细胞/cm2铺于含有10％FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM中。24小时后，将培养物在PBS中洗涤，并生长2-3周直至汇合，每周换一次培养基。通过摇动和温和的胰蛋白酶化富集汇合的神经胶质培养物的星形胶质细胞。使富集的星形胶质细胞生长至汇合，并以40,000细胞/cm2铺于包被有聚-D-鸟氨酸(1.5mg/ml；Sigma，Poole，UK)的盖玻片，生长1周。
从E13.5野生型C7B1/6小鼠胚胎培养初级脊髓运动神经元(MN)。简而言之，在胰蛋白酶和DNaseI中孵育后，通过粉碎，解离脊髓制备物。然后通过密度梯度离心分离MN。通过在Neurobasal培养基中以8000/cm2将MN铺于星形胶质细胞上来建立共培养物，所述Neurobasal培养基补充有1％B27、2％马血清、50mg/ml链霉素、50U/ml青霉素、0.5mM L-谷氨酰胺、25mM谷氨酸(所有试剂都来自Invitrogen，Paisley，UK)、1ng/ml BDNF、10ng/ml CNTF和100pg/ml GDNF(所有试剂都来自R&DSystems，Abingdon，UK)。
当共培养物建立2周时，通过暴露于药物或介质24小时，随后10μM甲萘醌氧化应激或10μM谷氨酸盐6小时来进行神经保护测定。应激处理之后，将盖玻片洗涤3次，用SM132(Covance)固定和渗透以选择性地染色运动神经元。
通过荧光显微镜在每个盖玻片的1.5cm2面积内对总MN进行计数。每个条件一式三份最低进行三次重复。在应激处理之前和之后，介质和药物处理都要进行计数，通过使用Bonferroni事后检验的双向方差分析对结果进行统计学分析。
总的谷胱甘肽测定
使初级星形胶质细胞在24孔板中长至汇合，然后在无酚红、含有10％FBS和青霉素/链霉素的DMEM中用药物(或0.05％DMSO介质)处理24小时。收集条件培养基，然后在添加250μl/孔的磺基水杨酸(SSA，5％(w/v))之前，将星形胶质细胞在冰冷的PBS中洗涤。将平板在-80℃下冷冻并在37℃融化两次，然后在4℃孵育15分钟。弃去上清，并于13,000×g离心5分钟。将条件培养基样品在80℃孵育15分钟，然后于13,000×g离心5分钟。直接使用样品或存于-80℃。将反应混合物(150μl/孔；pH 7.0的100mM磷酸钾缓冲液、1mM EDTA、6U/ml谷胱甘肽还原酶、1.5mg/ml 5，5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸))添加至96-孔板中的10μl的每种样品或谷胱甘肽标准品(0-50μM还原型谷胱甘肽)中，并在添加50μl/孔的NADPH溶液(0.16mg/ml)之前，于室温孵育5分钟。每分钟检测A412nm，持续15分钟，根据初始比率计算出总的谷胱甘肽浓度(GSH+GSSG)。一式三份检验样品。
电脑模拟分析
为了选择用于进一步筛选的类药性分子，使用Pipeline Pilot(SciTegic，London，UK)进行电脑模拟分析。计算来自谱收集物的2000个分子的分子极性表面积(mPSA)，作为可能的CNS渗透率的粗略检测结果{Ertl，2000#834}，并且还应用Lipinski过滤器(Lipinski Filter)来确定哪些分子最是类药性的。该过滤器应用选择化合物的‘五规则(rule of five)’，所述化合物：cLogP＜5、分子量＜500、氢键供体(OH+NH的数量)＜5和氢键受体(O加N原子)＜10。
定量RT-PCR
在用穿心莲内酯和S(+)阿朴***以如同在C6细胞中NRF2-ARE报告测定所确定的EC50和EC90浓度处理之后，使用多重PCr检测1321N1星形胶质细胞系中靶基因表达水平的变化。利用下面表1中概括的下述引物，用GenomeLabTM GeXP遗传分析***(Beckman Coulter)，在多重反应中鉴定9个感兴趣的基因(Hmox1、Fth1、Keap1、Gclc、Nfe212、Gsr、Nqo1、Sqstm1和EphX1)和3个看家基因(18s、GAPDH和ACTB)的基因表达变化。
用粗体显示的那些位于内含子序列的侧翼，从而防止基因组背景。按下述在96孔样品微量培养板上组合RT反应混合物：3μl不含DNase/RNase的H2O、4μl RT缓冲液5×、2μl RT Rev Primer Plex反转录酶、5μl KANr RNA、5μl样品RNA(20ng/μL)至20μl的总反应体积。然后将样品按下述孵育：48℃1分钟、37℃5分钟、42℃60分钟、95℃5分钟、4℃保持。按下述在96-孔样品微量培养板上组合PCR反应混合物：4.0μl PCR缓冲液5×、4.0μl 25mM MgCl2(Abgene)、2.0μl PCR FwdPrimer Plex、0.7μl热启动DNA聚合酶(ABgene AB-0908/A)、来自RT反应的9.3μl cDNA样品。按下述运行PCR：(1)95℃10分钟；(2)94℃30秒、(3)55℃30秒、(4)70℃1分钟、(5)重复步骤2-4，额外34个循环；(6)4℃保持。基于预备实验来优化反向RT引物浓度，以便允许在一次反应中检测到所有产物。将PCR反应产物稀释于SLS(加样溶液)中，在毛细管电泳单元上分离，并使用GeXP软件和Microsoft Excel数据包进行数据分析，以给出相对于GAPDH和ACTB的表达的倍数变化。
标准QPCR
如以前出版物Wood-Allum et al 2005所述，实施QPCR，本质差异在于，使用RNeasy试剂盒(Qiagen)按照制造商的说明书，从初级星形胶质细胞或星形胶质细胞系分离RNA。使用oligo dT驱动的Superscript II(Invitrogen)按照制造商的说明书，制备cDNA。对于每一样品，使用25ngcDNA、1×SYBR Green PCR Master Mix(Stratagene)和优化浓度的正向引物和反向引物(表1)，于20μl总体积中，一式三份，进行定量RT-PCR(Q-PCR)。在95℃变性10分钟之后，通过在MX3000P实时PCR***(Stratagene)上以95℃15秒和60℃1分钟的40个循环来扩增产物。为了确保单一产物的扩增，对于每次扩增，都要制作解离曲线。通过针对每个样品中的gapdh的表达水平将表达水平标准化，并通过使用ddCt计算(SYBRGreen PCR混合物和RT-PCR方案，Applied Biosystems)，来确定样品中感兴趣的基因的相对水平。通过针对介质(DMSO)中生长的细胞将数据标准化来计算药物处理后感兴趣的基因的总的相对浓度。
统计学分析
对于谱库筛查，每个384孔板都有32孔仅用介质(培养基中的0.1％DMSO)孵育。通过平板基础计算平板上这些孔的平均荧光读数和标准偏差。采样被列为具有大于介质平均值加3倍标准偏差的GFP荧光值。以相同的方式确定毒性(即EthD1荧光值大于介质平均值加3倍标准偏差)。
实施例
实施例1
检验4×ARE-TK-GFP和TK-GFP报告细胞系对一系列浓度的已知的ARE诱导剂叔丁基苯二酚(tBHQ)和类黄酮EGCG的反应。将所述化合物一式三份施加到位于96孔板的无血清培养中的汇合细胞中，持续24小时。在荧光读板器中检测GFP的诱导。两种化合物都以窄窗诱导GFP表达，EGCG峰值在100μM，而tBHQ峰值在10μM(图2a)。在高于该峰值表达的浓度，通过直接观察(细胞丢失)或增加的溴乙啡锭二聚体荧光，两种化合物都表现出毒性迹象。在对照TK-GFP细胞系(为示出)中没有观察到荧光增加。
实施例2
为了筛查2000个分子的谱收集物，将报告测定按比例缩小至384孔-平板样式。为了评估测定对库筛查的适用性，通过用介质(0.1％DMSO)和10μM依布硒啉作为阳性对照处理备选孔来进行Z’得分计算(参见方法中的计算)。我们已经表明，依布硒啉在该测定中给出有力的浓度反应曲线。计算出的Z’得分是0.51(图2b)，这是可被库筛查所接受的。此外，信噪比(S/N)和信号与背景(S/B)的比是可被接受的，分别在12.8和2.9。随后以10μM每种化合物的单一浓度对库进行筛查。通过Q-BOT液体处理***实施药物库稀释和铺板，并检验4×ARE-TK-GFP和TK-GFP报告细胞系对化合物的反应。图3显示了来自单个384孔板的ARE-TK-GFP细胞系数据的实例组。采样被确定为具有高于背景水平多余3倍标准偏差的数据点，所述背景水平是仅用介质(0.1％DMSO)处理的24个孔的平均值。核实采样化合物，看它们在对照细胞系是否由于转录的非特异性激活或化合物的自发荧光而引起反应。此外，排除通过增强溴乙啡锭二聚体荧光而表现出毒性迹象的任何化合物。仅用4×ARE-TK-CHO细胞系重复库筛查，且将两次筛查都作为采样出现的化合物进行进一步的评估。基于此共鉴定出46种化合物。下一步就是确定这46种采样化合物产生50％反应(EC50)所需的化合物浓度。将每种化合物在重复孔中进行7点浓度反应曲线。由于在更高浓度时的毒性，多种化合物表现出与诸如tBHQ和EGCG1的标准ARE诱导剂所观察到的反应曲线相似的钟形剂量反应曲线。图4a显示第一测定中所有46条剂量反应曲线。大多数化合物由于在更高浓度时的毒性都表现出钟形剂量反应曲线，并且多数还有非常窄的ARE诱导窗。图4b显示在更宽的浓度范围(＞1log单位)内报告表达增加或在更高浓度毒性最小的一组化合物。重复所有46个采样的浓度反应曲线，并检测平均EC50和GFP荧光的平均最大倍数诱导。还要记录引起毒性反应的最低浓度，并将数据总结在表2(在本文后面呈现)中，连同简短描述这些化合物的已知生物活性。观察到毒性的最低剂量也包括在表中。按照报告测定中的活性将化合物分级。最有效的ARE诱导剂是天然产物穿心莲内酯，具有亚微摩尔EC50(740nM)的唯一化合物，该化合物来自天然产物穿心莲，且广泛用于中国和印度草药中。在26种其他天然产物中，另外两种已用于人类：即一叶秋碱，其实GABAA受体拮抗剂和CNS***；和异甘草素，其是甘草根的组分，是醛糖还原酶抑制剂。其余的19种产物是合成的小分子或衍生物，这些中，共6种分子是活动批准的药物。两种烷基化抗肿瘤药物(溴丙哌嗪(pipobroman)和二氯甲基二乙胺(mechlorethamine))、多巴胺激动剂(盐酸阿朴***(apomorphinehydrochloride))、局部皮肤漂白剂(氢醌(hydroquinone))、袢利尿剂(利尿酸)和血管扩张剂(异舒普林(isoxsuprine hydrochloride)。所述合成的小分子之一(依布硒啉)已经到了中风的三期临床试验。
实施例3
研究诱导Nrf2-ARE的采样化合物对运动神经元和星形胶质细胞中的血清剥夺所诱导的氧化应激的影响。由于该途径的激活可随着细胞类型改变，那么我们继续筛查这些采样化合物能有多好地保护运动神经细胞系(NSC34细胞)和大鼠(C6)和人(1321N1)星形胶质细胞系免于血清剥夺所诱导的氧化应激。用一系列浓度的采样化合物对细胞系进行预处理24小时，以激活NRF2-ARE途径。然后弃去化合物，并使细胞进行6小时的血清剥夺以诱导氧化应激。使用二氯荧光黄(DCF)荧光检测氧化应激的程度，并将保护程度显示在表3中，作为三种细胞系中每一种的DCF荧光的百分比减弱。如果是拟合曲线可能的，则还可以引用产生半最大作用(IC50)所需的浓度。通常，采样化合物在星形胶质细胞系中比在运动神经细胞系中更可能表现出保护作用。表3(在本文后面呈现)给出了所有化合物的测定结果，通过在运动神经细胞系中的活性进行分级。46种化合物中仅有9种化合物减弱了NSC34细胞中血清剥夺所诱导的氧化应激DCF信号，46种化合物中有18种在该测定中没有作用，且其余的17种化合物在该测定中是促氧化剂。换句话而言，与降低血清剥夺引起的氧化应激相反，它们促进氧化应激并增加DCF荧光。相比之下，仅有一种化合物在1321 N1星形胶质细胞系中是促氧化剂，且46种有29种将DCF信号降低30％或更多。对于C6细胞系，没有化合物是促氧化剂，且46种化合物中有32种将DCF信号降低30％或更多。
实施例4
为了使获得的生物学结果合理化，使用在MOE(Molecular OperatingEnvironment)[Molecular Operating Environment(MOE 2007.09)中实施的Pharmacophore Elucidator，研究表1所报道的化合物的常用药效基团.Chemical Computing Group，Inc.Montreal，Quebec，Canadahttp://www.chemcomp.com]。考虑到用于在CHO 4×ARE-TK细胞系中诱导NRF2-ARE途径的EC50小于10μM的24种分子(表2)，经过比对，它们中的22种呈现出两个共同的特征：芳香族部分/疏水性部分和氢键受体部分(图5a)。应当注意，EGCG也具有这些结构特征，并与计算出的药效基团绝对匹配。然而，当使用1321N1星形胶质细胞氧化应激测定结果(表3)构建3μM活性阈值的药效基团时，鉴定出一个另外的共同芳香族/疏水性特征(图5b)。这与已知的Nrf2激活剂一致，其可以通过KEAP1上巯基基团的亲电子攻击而起作用，KEAP1是胞质Nrf2调节剂。这些初步的模型化数据可以用来理解Nrf2-ARE途径的潜在激活剂的结构要求，并可以在这类化合物的新结构的设计中加以考虑。
实施例5
评估化合物的物理/化学性质。除了筛查对相关细胞类型具有功能作用的化合物之外，我们还使用化学信息学程序Pipeline Pilot来计算化学/物理性质，也显示在表3中。ALogP(在辛醇/水中的分配系数的log值)和分子极性表面积(mPSA)是化合物亲油性的不同计量，并允许粗略推测可能的CNS渗透率。对于CNS渗透率，AlogP小于4但大于1，且mPSA低于100(理想地为80)，对于被动扩散通过BBB是最佳的。此外，使用Lipinski过滤器鉴定非类药性分子，并排除4种-(桃花心木内酯-3-乙酸酯(swietenolide-3-acetate)、endecaphylin X、肺衣酸(lobaric acid)和大戟醇乙酰酯(euphol acetate))。
为了过滤出不需要的分子，仅选择在NSC34氧化应激测定中具有保护作用和中性作用的那些分子(表3)，并排除已知的细胞毒素分子(溴丙哌嗪、氯丹、草不绿、扑草胺)。对剩余的22种分子应用AlogP和mPSA标准，留下17种分子用于进一步的研究。在表3中将这些分子以粗体突出，并称为‘最好的采样’分子。另外，显示了观察到的毒性的最低剂量，NA：不合适(数据不足，没有浓度反应或没有抑制)。对于表3化合物，通过在NSC34细胞系中的保护能力分类。相对于NSC34细胞，ARE诱导剂更有效地保护星形胶质细胞系(1321N1和C6)免于氧化应激。
实施例6
研究最好的采样化合物在神经元和星形胶质细胞系中诱导NRF2-ARE的活性。为了确定在星形胶质细胞和运动神经细胞系中的保护差异是否是由于这些细胞类型中NRF2-ARE途径激活程度的差异导致的，使NRF2-ARE报告构建体在星形胶质(C6)和运动神经(NSC34)细胞系中稳定地表达。然后在每个细胞系中对17种最好的采样分子进行筛查。当阿朴***作为R[-]或S[+]对映异构体存在时，我们还筛查了它的S[+]对映异构体。R[+]对映异构体具有多巴胺激动剂活性，而S[+]对映异构体已失去该活性，所以我们想确定它是否仍保留诱导NRF2-ARE的活性。C6报告细胞系的结果显示在图6中。通常，C6细胞中NRF2-ARE途径的激活与在CHO细胞系中所观察到的激活相似。如果用一组相同的浓度反应曲线进行任何激活，NSC34报告细胞系都显示出极小，这表明相对于NSC34细胞，在星形胶质细胞系中更早观察到的更大的免于氧化应激的保护的潜在原因是由于星形胶质细胞系中NRF2-ARE途径的更强烈的激活。此外，就NRF2-ARE激活而言，相对于R[+]对映异构体，阿朴***的S[+]对映异构体的效力相当，这表明该活性与多巴胺受体激动无关，因为S[+]对映异构体不是多巴胺激动剂。
目的是鉴定出具有运动神经元疾病临床检验快速追踪的潜能的分子。在这点上，一个关键标准是分子具有在人类中使用的历史，即便不是用于MND。在17个最好的采样分子中，两种作为天然产物有在人类中使用的历史(一叶秋碱，穿心莲内酯)，且一种目前已被批准为用于帕金森氏病中‘失常’事件(‘off’episode)的急性挽救药物(作为R对映异构体的盐酸阿朴***)。此外，氢醌有使用历史，尽管作为局部施加的皮肤漂白剂。在这些药物中，选择穿心莲内酯和阿朴***的S[+]对映异构体用于进一步评估，由于一叶秋碱在小鼠和人类中具有充分描述的惊厥剂性质，并且阿朴***的S[+]对映异构体中多巴胺激动缺失被认为是明显的优势。
实施例7
研究穿心莲内酯和S[+]阿朴***对C6细胞和初级小鼠星形胶质细胞中的ARE靶基因的诱导。为了证实这些优选的或‘先导’分子能激活NRF2-ARE途径，从而导致星形胶质细胞中靶基因表达，在GenomeLabTMGeXP遗传分析***上对于9个感兴趣的基因进行多重RT-PCR测定。用穿心莲内酯和S(+)阿朴***以如同在C6-4×ARE-TK报告细胞中所确定的EC50和EC90浓度处理C6细胞24小时。仅有血红素加氧酶1和NQO1两个基因在基因表达上表现出统计学上显著的变化，这通过标准定量RT-PCR证实(图7A和7B)。
实施例8
由于诱导NRF2的先导分子能增加靶基因在初级小鼠运动神经元中的表达，在用穿心莲内酯或[S+]阿朴***预处理之后，将由星形胶质细胞饲养层上的初级小鼠运动神经元(MN)组成的共培养物暴露于氧化损害(图8)。然后用10μM甲萘醌将共培养物激发6小时，以诱导氧化应激，并对运动神经元染色和计数。在DMSO对照细胞中，观察到运动神经元数减少约25％，这在用任一药物处理的孔中都没发现。这些结果表明NRF2诱导剂在初级小鼠星形胶质细胞/MN共培养物中保护运动神经元(MN)免于氧化应激。
在相同条件下，初级小鼠星形胶质细胞中NQO1和HCM基因的标准定量RT-PCR也表明基因表达的显著增加(图7C和7D)。为了证实基因表达的变化导致蛋白表达的相应增加，通过免疫荧光染色来评估初级小鼠星形胶质细胞的HO-1水平升高(图9)，其证实表达的剂量依赖性增加高于在DMSO处理细胞中所见到的。我们还通过在相同条件下，在初级星形胶质细胞本身和在从处理的星形胶质细胞所收集的培养基中检测总的谷胱甘肽水平，来检测该增强的抗氧化能力的功能作用(图10)。这表明，谷胱甘肽水平在细胞本身和在培养基中都升高了，这提供了一种机制，通过该机制，Nrf2响应的星形胶质细胞可以保护邻近的非-ARE响应MN免于氧化激发。
实施例9
为了使获得的生物学结果合理化，我们试图使用在MOE(MolecularOperating Environment)中实施的药效基团说明[Molecular OperatingEnvironment(MOE 2007.09)鉴定研究表2中所报道的化合物的常用药效基团。Chemical Computing Group，Inc.Montreal，Quebec，Canadahttp://www.chemcomp.com]。考虑到用于诱导CHO ARE-TK细胞系中NRF2-ARE途径的、EC50小于10μM的24种分子(表2)，经过比对，它们中的22种呈现出两个共同的特征：芳香族部分/疏水性部分和氢键受体部分(图4a)。应当注意，EGCG也具有这些结构特征，并与计算出的药效基团绝对匹配。然而，当使用1321 N1星形胶质细胞氧化应激测定结果(表3)用于构建3μM活性阈值的药效基团时，鉴定出一个另外的共同的芳香族/疏水性特征(图5b)。这与已知的Nrf2激活剂一致，其可以通过KEAP1上的巯基基团的亲电子攻击而起作用，KEAP1是胞质Nrf2调节剂。这些初步的模型化数据可以用来理解Nrf2-ARE途径的潜在激活剂的结构要求，并可以在该级化合物的新结构设计中加以考虑进。
实施例10
由于之前的工作已经表明，在表达突变的SOD的运动神经细胞系中和在来自家族性人类SOD1病例的星形胶质细胞的事后剖析材料(postmortem material)中Nrf2反应减弱，我们研究我们的先导诱导剂是否仍能在表达G93A突变的SOD1的星形胶质细胞中激活Nrf2。第一次确定Nrf2可调型基因NAD(P)H：醌氧化还原酶(NQO1)和血红素加氧酶1(HOX1)是否能在来自G93A突变的SOD1转基因小鼠的初级小鼠星形胶质细胞中受到诱导(图11)。定量RT-PCR表明，在用穿心莲内酯和和S[+]阿朴***以它们的EC90浓度预处理24小时后，NQO1和HO1转录本显著增加(图11)。
实施例11
图12表明[S+]阿朴***在雄性C57BI/6小鼠中的体内药物动力学和药效学。[S+]阿朴***的单一静脉内剂量之后，在血浆、脑和脑脊液中检测所述化合物的水平(图12A和12B)，皮下剂量之后，在HO-1和NQO-1转录酶剂量后24小时，存在显著诱导，这可通过QRT-PCR确定(图12C)。因此，[S+]阿朴***通过转录激活可以导致抗氧化酶表达的增加延长。
这些数据表明已经鉴定出是体外NF2-ARE途径激活剂也可以在体内激活该途径的数种化合物。
表2
Claims (7)
1.治疗运动神经元疾病的治疗剂，所述治疗剂是选自穿心莲内酯和S[+]阿朴***的Nrf2-ARE途径激活剂。
2.选自穿心莲内酯和S[+]阿朴***的Nrf2-ARE途径激活剂在制备用于治疗运动神经元疾病的药物中的用途。
3.治疗由于氧化应激而发生的神经退行性疾病状况的治疗剂，所述治疗剂是选自穿心莲内酯和S[+]阿朴***的Nrf2-ARE途径激活剂。
4.如权利要求3所述的治疗剂，其中已知受氧化应激介导的所述神经退行性疾病状况选自：运动神经元疾病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)和原发性侧索硬化(PLS)、亨廷顿舞蹈病、年龄相关的黄斑部退化、用于移植/外科程序的器官的保存、细胞培养物的稳定、光致氧化应激与皮肤老化和辐射诱导的细胞损伤的治疗。
5.穿心莲内酯用于治疗由于氧化应激而发生的疾病或疾病状况的用途，所述疾病或状况选自运动神经元疾病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、原发性侧索硬化(PLS)、亨廷顿舞蹈病、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、年龄相关的黄斑部退化、用于移植/外科程序的器官的保存、细胞培养物的稳定、光致氧化应激与皮肤老化和辐射诱导的细胞损伤的治疗。
6.如权利要求1、3、4任一项所述的治疗剂或如权利要求2或5任一项所述的用途，其还包括其他的药物成分或赋形剂稀释剂或载体。
7.如权利要求1、3、4任一项所述的治疗剂或如权利要求2或5任一项所述的用途，其被配制成用于肠胃外给药、静脉内给药、肌肉内给药、腹膜内给药或皮下给药，或通过注射或输注直接递送到靶器官或组织中。
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106632191A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-05-10 | 四川大学 | 高异黄酮曼尼希碱类化合物、其制备方法和用途 |
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| CN109575089A (zh) * | 2018-12-27 | 2019-04-05 | 大理大学 | 酰化葡萄糖类化合物及其药物组合物和制备方法与应用 |
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Families Citing this family (12)
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|---|---|---|---|---|
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| US20170354639A1 (en) * | 2014-10-24 | 2017-12-14 | Biogen Ma Inc. | Diterpenoid derivatives and methods of use thereof |
| WO2016118639A1 (en) * | 2015-01-20 | 2016-07-28 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Small molecule oxidizers of pdi and their use |
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| JP6864327B2 (ja) * | 2017-07-06 | 2021-04-28 | 山田 健一 | 脂質過酸化誘発性疾患の治療薬およびそのスクリーニング方法 |
| KR20210102206A (ko) * | 2018-10-19 | 2021-08-19 | 아클립스 원, 인크. | 신경계 질환의 치료 |
| US20230141988A1 (en) * | 2019-08-07 | 2023-05-11 | Aclipse One Inc. | Pharmaceutical composition for use in the treatment of neurological diseases |
| JPWO2021075477A1 (zh) * | 2019-10-16 | 2021-04-22 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1921872A (zh) * | 2004-02-03 | 2007-02-28 | 智利南方大学 | 用于激活PPR－γ受体而治疗自身免疫性疾病和阿尔茨海默病的提取自穿心莲的半日花烷型二萜类组合物 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2002357911A1 (en) * | 2001-12-20 | 2003-07-09 | Cytokine Pharmasciences, Inc. | APOMORPHINE INHIBITORS OF AMYLOID-Beta (ABeta) FIBRIL FORMATION AND THEIR USE IN AMYLOIDOSIS BASED DISEASE |
| GB0509317D0 (en) * | 2005-05-06 | 2005-06-15 | Clarke Anthony | Pharmaceutical formulation of apomorphine |
| WO2007008652A2 (en) * | 2005-07-08 | 2007-01-18 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and compositions directed to dj-1 as regulator of the anti-oxidant transcription factor nrf2 |
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-
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1921872A (zh) * | 2004-02-03 | 2007-02-28 | 智利南方大学 | 用于激活PPR－γ受体而治疗自身免疫性疾病和阿尔茨海默病的提取自穿心莲的半日花烷型二萜类组合物 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ANTHONY Y. H. WOO ET AL: "Andrographolide Up-Regulates Cellular-Reduced Glutathione Level and Protects Cardiomyocytes against Hypoxia/Reoxygenation Injury", 《THE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND EXPERIMENTAL THERAPEUTICS》 * |
| HIROKAZU HARA ET AL.: "Apomorphine protects against 6-hydroxydopamine-induced neuronal cell death through activation of the Nrf2-ARE pathway", 《JOURNAL OF NEUROSCIENCE RESEARCH》 * |
| VAN MUISWINKEL FL,KUIPERIJ HB.: "The Nrf2/ARE Signalling pathway:promising drug target to combat oxidative stress in neurodegenerative disorders.", 《CURR DRUG TARGETS CNS NEUROL DISORD》 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107375272A (zh) * | 2016-05-14 | 2017-11-24 | 江西青峰药业有限公司 | 喜炎平注射液在制备治疗和/或预防神经退行性疾病药物中的应用 |
| CN107375271A (zh) * | 2016-05-14 | 2017-11-24 | 江西青峰药业有限公司 | 穿心莲内酯磺化物/衍生物/混合物在制备治疗/预防神经退行性疾病药物中的应用 |
| CN106632191A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-05-10 | 四川大学 | 高异黄酮曼尼希碱类化合物、其制备方法和用途 |
| CN106632191B (zh) * | 2016-09-30 | 2018-10-30 | 四川大学 | 高异黄酮曼尼希碱类化合物、其制备方法和用途 |
| CN109575089A (zh) * | 2018-12-27 | 2019-04-05 | 大理大学 | 酰化葡萄糖类化合物及其药物组合物和制备方法与应用 |
| CN109575089B (zh) * | 2018-12-27 | 2021-09-10 | 大理大学 | 酰化葡萄糖类化合物及其药物组合物和制备方法与应用 |
| CN113286581A (zh) * | 2019-01-09 | 2021-08-20 | 扶桑药品工业株式会社 | 用于治疗视网膜疾病的眼内或者口服给药用药物组合物 |
| CN110432888A (zh) * | 2019-08-15 | 2019-11-12 | 任鹏宇 | 一种前庭神经权重信息编码神经元的筛选方法 |
| CN110432888B (zh) * | 2019-08-15 | 2021-11-23 | 任鹏宇 | 一种前庭神经权重信息编码神经元的筛选方法 |
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