CN102175733A - 分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法 - Google Patents
分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102175733A CN102175733A CN2010106019662A CN201010601966A CN102175733A CN 102175733 A CN102175733 A CN 102175733A CN 2010106019662 A CN2010106019662 A CN 2010106019662A CN 201010601966 A CN201010601966 A CN 201010601966A CN 102175733 A CN102175733 A CN 102175733A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- digoxin
- penicillin
- imprinted polymer
- particle
- sensor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
一种分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法，先制备对地高辛及青霉素有特异性吸附性能的印迹聚合物颗粒，再将颗粒与琼脂糖混合并固定于玻碳电极上制备成地高辛分子印迹聚合膜传感器，该传感器可以特异性的结合模板分子-地高辛或青霉素且其电化学信号与模板浓度相关，再用它来检测标本中地高辛或青霉素的含量。该分子印迹传感器是非标记性的，制作简便、成本低、检测快速、特异性高、稳定性好等优点，其检测下限为1.28nM，结果检测时间为5min。
Description
技术领域
本发明属于药物检测试剂的制备和应用方法，特别涉及一种分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法。
背景技术
很多不同的技术被用来检测标本中地高辛或青霉素浓度，其中包括放射性免疫测定(RIA)、酶扩大免疫测定技术(EMIT)、荧光极化免疫测定(FPIA)和液相层析质谱等。然而，这些方法多需要昂贵的仪器，操作复杂，时间长，有的还有放射性危害。因此，需要1种快速简便，高灵敏度，价格不贵的检测方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法。制作简便、成本低、检测快速、特异性高、稳定性好。
本发明的技术方案是：
一种分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法，其特征在于：
印迹聚合物颗粒的制备
使用热聚合的方法制备印迹聚合物颗粒：取0.2×10-3mM地高辛或青霉素溶液390μl，加入0.2mM功能单体MAA 780μl，再加入溶剂甲醇3000μl放置在摇床上120rpm、29℃预作用6h，使模板分子与功能单体充分作用形成复合物；然后加入1mM交联剂EDMA 2000μl，0.1g致孔剂AIBN，混匀后转入15ml试管中，通N2脱氧10min，真空下密封后放入恒温水浴槽中，60℃反应24h形成棒状聚合物；用同样条件，制备无模板分子的空白聚合物(NIP)；然后将聚合物用研钵粉碎研磨后过60目筛，得到粒径均一的印迹聚合物颗粒；
MIPs颗粒使用体积比9∶1的甲醇-乙酸的溶液进行超声洗涤，直到洗脱液用紫外分光光度计检测不到模板分子地高辛的残留；之后用甲醇洗去多余的乙酸，再用蒸馏水反复多次洗去多余甲醇，最后将颗粒放入真空干燥器干燥至恒重；
涂膜量的优化
2μl制膜溶液不足以覆盖电极表面，取3μl、5μl、8μl、10μl这4个量制备传感器，用其对地高辛或青霉素分别进行电化学检测，分析涂膜量对试验结果的影响，每个试验要重复3次；
印迹聚合膜的制备
取20mg印迹颗粒加入到1ml 0.8％的琼脂糖溶液中，制成20mg/ml的印迹颗粒溶液备用。将直径为3mm的玻碳电极打磨抛光后，依次用乙酸、乙醇、丙酮超声清洗3min，再用蒸馏水超声清洗2遍，每遍3min。洗好的电极放入PH6.0的PBS溶液中，在-0.8～2.0V电位下进行活化，直到得到稳定的循环伏安响应；处理好的电极待表面干燥后，取3μl印迹聚合物颗粒均匀涂于电极表面，水分蒸发后既在电极表面形成一层印迹聚合物颗粒膜；非印迹聚合膜使用同样的方法制备，只是用非印迹聚合物颗粒替换印迹聚合物颗粒即可。
所述的分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法，其特征在于：电化学检测及标准曲线的绘制：
用1mM的铁***溶液来表征电极表面电流的变化；用制备好的印迹聚合膜对地高辛模板进行吸附来检测印迹聚合膜的性能，取地高辛或青霉素浓度为1.28nM、6.4nM、12.8nM、19.2nM、25.6nM、38.4nM、64nM、102nM、128nM、256nM、384nM、512nM、640nM这13个浓度作为检测浓度，每个浓度的稳定时间为5min，检测玻碳电极表面电流的变化，每个试验重复3次，绘制标准曲线，即物质浓度与相关电流的曲线。
本发明特点和效果是：
本发明是应用分子印迹的方法制备了对地高辛及青霉素有特异性吸附性能的印迹聚合物颗粒，再将颗粒与琼脂糖混合并固定于玻碳电极上制备成地高辛或青霉素分子印迹聚合膜传感器，该传感器可以特异性的结合模板分子-地高辛或青霉素且其电化学信号与模板浓度相关，再用它来检测标本中地高辛或青霉素的含量。该分子印迹传感器是非标记性的，制作简便、成本低、检测快速、特异性高、稳定性好等优点，其检测下限为1.28nM，结果检测时间为5min。
分子印迹生物传感器，将分子印迹颗粒与琼脂糖混合后固定到电极上制备成为1个电化学传感器，不仅制作简单，检测也相当方便，并且灵敏度高，价格便宜。
附图说明
图1是地高辛印迹聚合膜传感器对不同浓度地高辛的吸附曲线图
图中：a：地高辛印迹膜传感器对模板分子地高辛的甲醇溶液吸附；b：地高辛非印迹膜传感器对模板分子地高辛的吸附；c：地高辛印迹膜传感器对模板分子地高辛的血清溶液的吸附。(浓度范围：1.28～640nM，检测环境：1mM铁***)
具体实施方式
本分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法，包括印迹聚合物颗粒的制备、涂膜量的优化、印迹聚合膜的制备和电化学检测及标准曲线的绘制。
1、印迹聚合物颗粒的制备
使用热聚合的方法制备印迹聚合物颗粒：取0.2×10-3mM地高辛或青霉素溶液390μl，加入0.2mM功能单体MAA 780μl，再加入溶剂甲醇3000μl放置在摇床上120rpm、29℃预作用6h，使模板分子与功能单体充分作用形成复合物。然后加入1mM交联剂EDMA 2000μl，0.1g致孔剂AIBN，混匀后转入15ml试管中，通N2脱氧10min，真空下密封后放入恒温水浴槽中，60℃反应24h形成棒状聚合物。用同样条件，制备无模板分子的空白聚合物(NIP)。然后将聚合物用研钵粉碎研磨后过60目筛，得到粒径均一的印迹聚合物颗粒。
MIPs颗粒使用甲醇-乙酸(体积比9∶1)的溶液进行超声洗涤，直到洗脱液用紫外分光光度计检测不到模板分子地高辛的残留。之后用甲醇洗去多余的乙酸，再用蒸馏水反复多次洗去多余甲醇，最后将颗粒放入真空干燥器干燥至恒重。
2、涂膜量的优化
涂膜量对试验有一定的影响。2μl制膜溶液不足以覆盖电极表面，取3μl、5μl、8μl、10μl这4个量制备传感器，用其对地高辛分别进行电化学检测(见1.2.4)，分析涂膜量对试验结果的影响(每个试验重复3次)。
3、印迹聚合膜的制备
取20mg印迹颗粒加入到1ml 0.8％的琼脂糖溶液中，制成20mg/ml的印迹颗粒溶液备用。将直径为3mm的玻碳电极打磨抛光后，依次用乙酸、乙醇、丙酮超声清洗3min，再用蒸馏水超声清洗2遍，每遍3min。洗好的电极放入PH6.0的PBS溶液中，在-0.8～2.0V电位下进行活化，直到得到稳定的循环伏安响应。处理好的电极待表面干燥后，取3μl印迹聚合物颗粒均匀涂于电极表面，水分蒸发后既在电极表面形成一层印迹聚合物颗粒膜。非印迹聚合膜使用同样的方法制备，只是用非印迹聚合物颗粒替换印迹聚合物颗粒即可。
2、电化学检测及标准曲线的绘制
用1mM的铁***溶液来表征电极表面电流的变化。用制备好的印迹聚合膜对地高辛模板进行吸附来检测印迹聚合膜的性能，取地高辛或青霉素浓度为1.28nM、6.4nM、12.8nM、19.2nM、25.6nM、38.4nM、64nM、102nM、128nM、256nM、384nM、512nM、640nM这13个浓度作为检测浓度，每个浓度的稳定时间为5min，检测玻碳电极表面电流的变化(每个试验重复3次)。
结果与讨论
电化学检测及标准曲线的绘制
制备好的印迹聚合膜依次检测13个浓度，记录电极表面电流值，对其进行分析。试验结果表明地高辛印迹聚合膜对模板分子有较好的吸附效果，非印迹聚合膜对模板分子的吸附很少，可以忽略不计，见图1是地高辛印迹聚合膜传感器对不同浓度地高辛的吸附曲线。
其中：a：地高辛印迹膜传感器对模板分子地高辛的甲醇溶液吸附；
b：地高辛非印迹膜传感器对模板分子地高辛的吸附；
c：地高辛印迹膜传感器对模板分子地高辛的血清溶液的吸附。(浓度范围：1.28～640nM，检测环境：1mM铁***)
Claims (2)
1.一种分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法，其特征在于：
印迹聚合物颗粒的制备
使用热聚合的方法制备印迹聚合物颗粒：取0.2×10-3mM地高辛或青霉素溶液390μl，加入0.2mM功能单体MAA 780μl，再加入溶剂甲醇3000μl放置在摇床上120rpm、29℃预作用6h，使模板分子与功能单体充分作用形成复合物；然后加入1mM交联剂EDMA 2000μl，0.1g致孔剂AIBN，混匀后转入15ml试管中，通N2脱氧10min，真空下密封后放入恒温水浴槽中，60℃反应24h形成棒状聚合物；用同样条件，制备无模板分子的空白聚合物(NIP)；然后将聚合物用研钵粉碎研磨后过60目筛，得到粒径均一的印迹聚合物颗粒；
MIPs颗粒使用体积比9∶1的甲醇-乙酸的溶液进行超声洗涤，直到洗脱液用紫外分光光度计检测不到模板分子地高辛的残留；之后用甲醇洗去多余的乙酸，再用蒸馏水反复多次洗去多余甲醇，最后将颗粒放入真空干燥器干燥至恒重；
涂膜量的优化
2μl制膜溶液不足以覆盖电极表面，取3μl、5μl、8μl、10μl这4个量制备传感器，用其对地高辛或青霉素分别进行电化学检测，分析涂膜量对试验结果的影响，每个试验要重复3次；
印迹聚合膜的制备
取20mg印迹颗粒加入到1ml 0.8％的琼脂糖溶液中，制成20mg/ml的印迹颗粒溶液备用。将直径为3mm的玻碳电极打磨抛光后，依次用乙酸、乙醇、丙酮超声清洗3min，再用蒸馏水超声清洗2遍，每遍3min。洗好的电极放入PH6.0的PBS溶液中，在-0.8～2.0V电位下进行活化，直到得到稳定的循环伏安响应；处理好的电极待表面干燥后，取3μl印迹聚合物颗粒均匀涂于电极表面，水分蒸发后既在电极表面形成一层印迹聚合物颗粒膜；非印迹聚合膜使用同样的方法制备，只是用非印迹聚合物颗粒替换印迹聚合物颗粒即可。
2.根据权利要求1所述的分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法，其特征在于：
电化学检测及标准曲线的绘制：
1.用1mM的铁***溶液来表征电极表面电流的变化；用制备好的印迹聚合膜对地高辛或青霉素进行吸附来检测印迹聚合膜的性能，取地高辛或青霉素浓度为1.28nM、6.4nM、12.8nM、19.2nM、25.6nM、38.4nM、64nM、102nM、128nM、256nM、384nM、512nM、640nM这13个浓度作为检测浓度，每个浓度的稳定时间为5min，检测玻碳电极表面电流的变化，每个试验重复3次，绘制物质浓度与相关电流的标准曲线。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010106019662A CN102175733A (zh) | 2010-12-23 | 2010-12-23 | 分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010106019662A CN102175733A (zh) | 2010-12-23 | 2010-12-23 | 分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102175733A true CN102175733A (zh) | 2011-09-07 |
Family
ID=44518938
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010106019662A Pending CN102175733A (zh) | 2010-12-23 | 2010-12-23 | 分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102175733A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102924645A (zh) * | 2012-11-21 | 2013-02-13 | 安徽农业大学 | 一种青霉素类抗生素及其中间体的分子印迹型聚合物的制备方法与应用 |
| CN103044639A (zh) * | 2011-10-14 | 2013-04-17 | 中国药科大学 | 一种新型碳纳米管表面分子印迹聚合物及其制备方法 |
| CN103243367A (zh) * | 2013-05-17 | 2013-08-14 | 天津前方科技有限公司 | 链霉素抗生素分子印迹生物传感器的制备方法 |
| CN103792274A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-05-14 | 东南大学 | 一种电化学dna生物传感器及其制备方法与应用 |
| CN104407030A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-03-11 | 广西科技大学 | 一种阿魏酸/甲基丙烯酸分子印迹聚合物修饰玻碳电极的制备方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1869674A (zh) * | 2006-06-25 | 2006-11-29 | 襄樊学院 | 琼脂糖水凝胶固定化酶电极及其制备方法和应用 |
| CN101139411A (zh) * | 2006-09-06 | 2008-03-12 | 天津科技大学 | 可去除鲜奶中青霉素类抗生素的分子印记聚合物的制备方法 |
| CN101738423A (zh) * | 2008-11-13 | 2010-06-16 | 华东师范大学 | 一种分子印迹聚合物/碳纳米管/基底电极修饰电极及其应用 |
| CN101762630A (zh) * | 2010-01-06 | 2010-06-30 | 天津科技大学 | 一种用于青霉素现场快速检测的分子印迹生物传感器的制备方法 |
| CN201561965U (zh) * | 2009-12-11 | 2010-08-25 | 宇星科技发展(深圳)有限公司 | 食品毒性检测仪 |
-
2010
- 2010-12-23 CN CN2010106019662A patent/CN102175733A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1869674A (zh) * | 2006-06-25 | 2006-11-29 | 襄樊学院 | 琼脂糖水凝胶固定化酶电极及其制备方法和应用 |
| CN101139411A (zh) * | 2006-09-06 | 2008-03-12 | 天津科技大学 | 可去除鲜奶中青霉素类抗生素的分子印记聚合物的制备方法 |
| CN101738423A (zh) * | 2008-11-13 | 2010-06-16 | 华东师范大学 | 一种分子印迹聚合物/碳纳米管/基底电极修饰电极及其应用 |
| CN201561965U (zh) * | 2009-12-11 | 2010-08-25 | 宇星科技发展(深圳)有限公司 | 食品毒性检测仪 |
| CN101762630A (zh) * | 2010-01-06 | 2010-06-30 | 天津科技大学 | 一种用于青霉素现场快速检测的分子印迹生物传感器的制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 李丽,等.: "新型青霉素生物传感器的研究", 《生物加工过程》 * |
| 李敏,等.: "分子印迹技术应用于血清中地高辛的快速检测", 《生物加工过程》 * |
| 王慧,等.: "分子印迹技术应用于牛乳青霉素残留的检测", 《中国乳品工业》 * |
| 陈福生 等: "《食品安全检测与现代生物技术》", 31 August 2004, 化学工业出版社 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103044639A (zh) * | 2011-10-14 | 2013-04-17 | 中国药科大学 | 一种新型碳纳米管表面分子印迹聚合物及其制备方法 |
| CN103044639B (zh) * | 2011-10-14 | 2014-10-22 | 中国药科大学 | 一种新型碳纳米管表面分子印迹聚合物及其制备方法 |
| CN102924645A (zh) * | 2012-11-21 | 2013-02-13 | 安徽农业大学 | 一种青霉素类抗生素及其中间体的分子印迹型聚合物的制备方法与应用 |
| CN102924645B (zh) * | 2012-11-21 | 2014-03-26 | 安徽农业大学 | 一种青霉素类抗生素及其中间体的分子印迹型聚合物的制备方法与应用 |
| CN103243367A (zh) * | 2013-05-17 | 2013-08-14 | 天津前方科技有限公司 | 链霉素抗生素分子印迹生物传感器的制备方法 |
| CN103243367B (zh) * | 2013-05-17 | 2016-04-27 | 天津前方科技有限公司 | 链霉素抗生素分子印迹生物传感器的制备方法 |
| CN103792274A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-05-14 | 东南大学 | 一种电化学dna生物传感器及其制备方法与应用 |
| CN103792274B (zh) * | 2014-01-24 | 2016-02-10 | 东南大学 | 一种电化学dna生物传感器及其制备方法与应用 |
| CN104407030A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-03-11 | 广西科技大学 | 一种阿魏酸/甲基丙烯酸分子印迹聚合物修饰玻碳电极的制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Musa et al. | Recent progress in screen-printed electrochemical sensors and biosensors for the detection of estrogens | |
| Zhang et al. | A molecularly imprinted polymer based on functionalized multiwalled carbon nanotubes for the electrochemical detection of parathion-methyl | |
| Zhang et al. | A novel amperometric sensor based on screen-printed electrode modified with multi-walled carbon nanotubes and molecularly imprinted membrane for rapid determination of ractopamine in pig urine | |
| Hu et al. | Investigation of ractopamine‐imprinted polymer for dispersive solid‐phase extraction of trace β‐agonists in pig tissues | |
| CN102175733A (zh) | 分子印迹技术应用于地高辛及青霉素的快速检测方法 | |
| Xie et al. | Molecular imprinting method for on-line enrichment and chemiluminescent detection of the organophosphate pesticide triazophos | |
| Chen et al. | Molecularly imprinted polymer as a novel solid‐phase microextraction coating for the selective enrichment of trace imidazolinones in rice, peanut, and soil | |
| Li et al. | Selective determination of trace thiamphenicol in milk and honey by molecularly imprinted polymer monolith microextraction and high‐performance liquid chromatography | |
| Rezaei et al. | Development of a voltammetric procedure for assay of thebaine at a multi-walled carbon nanotubes electrode: quantification and electrochemical studies | |
| CN110057878B (zh) | 一种***毒品的分子印迹电化学检测方法 | |
| Li et al. | A label-free impedimetric sensor for the detection of an amphetamine-type derivative based on cucurbit [7] uril-mediated three-dimensional AuNPs | |
| Song et al. | An ultrasensitive and selective electrochemical sensor for determination of estrone 3-sulfate sodium salt based on molecularly imprinted polymer modified carbon paste electrode | |
| CN108776160B (zh) | 一种同时检测双酚a和双酚s的方法 | |
| Es' haghi et al. | Carbon nanotube/polyurethane modified hollow fiber‐pencil graphite electrode for in situ concentration and electrochemical quantification of anticancer drugs Capecitabine and Erlotinib | |
| Liu et al. | Novel stir bar array sorptive extraction coupled with gas chromatography–mass spectrometry for simultaneous determination of three β2-agonist residues in pork | |
| Zhang et al. | A disposable molecularly imprinted sensor based on Graphe@ AuNPs modified screen-printed electrode for highly selective and sensitive detection of cyhexatin in pear samples | |
| Han et al. | Fabrication of a fluorescence probe via molecularly imprinted polymers on carbazole-based covalent organic frameworks for optosensing of ethyl carbamate in fermented alcoholic beverages | |
| Wang et al. | Inorganic–organic hybrid coating material for the online in‐tube solid‐phase microextraction of monohydroxy polycyclic aromatic hydrocarbons in urine | |
| Zhang et al. | Preparation of 17β‐estradiol surface molecularly imprinted polymers and their application to the analysis of biological samples | |
| CN102353710B (zh) | 一种胆固醇分子印迹膜传感电极检测血液胆固醇的用途 | |
| Mofidi et al. | Simultaneous extraction and determination of trace amounts of diclofenac from whole blood using supported liquid membrane microextraction and fast Fourier transform voltammetry | |
| CN104330452B (zh) | 一种软材料修饰的丝网印刷电极及其制备方法与应用 | |
| Han et al. | Nano‐MoO3 for highly selective enrichment of polycyclic aromatic hydrocarbons in in‐tube solid‐phase microextraction | |
| Luo et al. | Voltammetric detection of catechol and dopamine based on a supramolecular composite prepared from multifarene [3, 3] and reduced graphene oxide | |
| Li et al. | Disposable Sandwich‐type Electrochemical Sensor for Selective Detection of Glucose Based on Boronate Affinity |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20110907 |