CN102124001A

CN102124001A - 2-氧代烷基-1-哌嗪-2-酮衍生物、其制备方法和治疗用途

Info

Publication number: CN102124001A
Application number: CN2009801315538A
Authority: CN
Inventors: 马科·巴罗尼; 弗朗索瓦·博诺; 桑德里尼·德尔巴里-戈萨特
Original assignee: Sanofi Aventis France
Current assignee: Sanofi Aventis France
Priority date: 2008-06-13
Filing date: 2009-06-12
Publication date: 2011-07-13
Anticipated expiration: 2029-06-12
Also published as: MY151228A; FR2932481A1; JP5476372B2; AR072102A1; JO2773B1; ES2378380T3; EP2310383B1; PL2310383T3; BRPI0915482B8; EP2310383A1; CL2010001432A1; UY31894A; SI2310383T1; FR2932481B1; AU2009259120B2; US20120289518A1; PT2310383E; EA201170015A1; US8247404B2; CA2726666A1

Abstract

本发明涉及具有通式(I)的4-{2-[苯基-3，6-二氢吡啶-1-基]-2-氧代烷基}-1-哌嗪-2-酮和4-{2-[苯基-2，5-二氢吡咯-1-基]-2-氧代烷基}-1-哌嗪-2-酮衍生物，其中A，B，m，R3和n如权利要求1中所定义。本发明还涉及其制备并涉及其治疗用途。

Description

2-氧代烷基-1-哌嗪-2-酮衍生物、其制备方法和治疗用途

技术领域

本发明涉及4-{2-[苯基-3，6-二氢吡啶-1-基]-2-氧代烷基}-1-哌嗪-2-酮和4-{2-[苯基-2，5-二氢吡咯-1-基]-2-氧代烷基}-1-哌嗪-2-酮衍生物，涉及其制备及其治疗用途。

本发明的化合物对p75^NTR神经营养蛋白(neurotrophine)受体具有亲和力。

背景技术

神经营养蛋白所属的蛋白家族的生物学作用具体为细胞存活和分化。

p75^NTR受体，是所有神经营养蛋白的受体，是肿瘤坏死因子(TNF)受体家族的跨膜糖蛋白(W.J.Friedman和L.A.Greene，Exp.Cell.Res.，1999，253，131-142)。p75^NTR受体在几种细胞类型中表达，且下述几种生物学功能被归于所述受体：一方面，调节神经营养蛋白对酪氨酸激酶(trk)受体的亲和力；另一方面，在trk不存在时，诱导通过细胞凋亡的细胞死亡信号。而且，神经营养蛋白前体，前神经营养蛋白(proneurotrophine)能够以高亲和力结合p75^NTR，且被视为在神经元和某些细胞系中强力的p75^NTR依赖性细胞凋亡诱导物。

在中枢神经***的水平中，许多研究表明凋亡涉及几种病理状态，例如肌萎缩性侧索硬化症、多发性硬化症、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病和朊病毒病等。还已知p75^NTR在多种神经变性疾病如阿尔茨海默病和肌萎缩性侧索硬化症(ALS)中过表达(Longo F.M.等，Curr.Alzheimer Res.2007；4：503-506；Lowry K.S.等，Amyotroph.Lateral.Scler.Other.Motor.Neuron.Disord.2001；2：127-34)。

研究结果表明p75^NTR可能在导致缺血后凋亡性神经元死亡的机理中起主要作用(P.P.Roux等，J.Neurosci.，1999，19，6887-6896)。

研究结果(V.Della-Bianca等，J.Biol.Chem.，2001，276：38929-33和S.Rabizadeh等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91，10703-10706)支持了p75^NTR在朊病毒蛋白感染诱导的(传播性海绵状脑病(transmissible spongiforn encephalopathy))或者β淀粉样蛋白诱导的(阿尔茨海默病)神经元死亡中起重要作用的假说。

p75^NTR受体还与Nogo受体相关，并涉及这些髓磷脂蛋白针对轴突生长的抑制作用的信号传导。其结果是，p75^NTR受体在神经元可塑性的调节和神经元-神经胶质的相互作用中起着主要的作用，因而表示用于促进神经再生的治疗靶标的选择。

除了神经***疾病和神经变性疾病之外，还表明p75^NTR可在心血管病如动脉粥样硬化和心肌缺血等中发挥作用(M.L.Bochaton-Pialat等，Am.J.Pathol.，1995，146，1-6；H.Perlman，Circulation，1997，95，981-987)。近来研究显示动脉粥样硬化损害(atherosclerosis lesion)中p75^NTR及神经营养蛋白的表达和广泛性凋亡(massive apoptosis)的增加。

几项研究还暗示p75^NTR是炎症的介质(Rihl M.等，Ann.Rheum.Dis.2005：64(11)：1542-9；Raychaudhuri S.P.等，Prog.Brain.Res.2004；146：433-7，Tokuoka S.等，Br.J.Pharmacol.2001，134：1580-1586)。

p75^NTR还在肿瘤生物学中发挥重要作用。

已知多种化合物与trkA/NGF/p75^NTR***发生相互作用或者具有NGF(神经生长因子)型的活性。因此，专利申请WO 00/59893描述了取代的嘧啶衍生物，所述取代的嘧啶衍生物具有NGF型活性和/或增大了NGF对PC12细胞的活性。

专利申请WO 03/104225描述了对p75^NTR受体显示亲和力的化合物。这些化合物发生高度的代谢，并显示高百分率的hERG基因(human Ether a go-go Related Gene)抑制。

hERG基因编码钾离子通道的K_v11.1.蛋白。已知该蛋白质对心脏的电活性有作用。当经药物作用抑制所述通道传导通过细胞膜的电流的能力时，可导致潜在的致命病症，称为QT综合征。一些药物已经抑制该蛋白，同时也带来了作为不良副作用的并发猝死风险。这使得hERG抑制成为药物管制和药物研发中的重要课题(Sanguinetti MC，Tristani-Firouzi M(March 2006).“hERG potassium channels and cardiac arrhythmia”.Nature 440(7083)：463-9)。

发明内容

本发明主题是对p75^NTR受体的显示亲和力的新化合物，其不具有现有技术化合物所具有的高代谢和强hERG抑制的缺点。因此，它显示出用于开发新型药物的优点。

本发明的主题是对应于下式(I)的化合物：

其中，

-m是0或1；

-A是：

且B是氢原子

或

A是氢原子，而B是：

-R1和R2，其可相同或不同，独立地为氢或卤素原子，C₁-C₄烷基，C₁-C₄氟烷基，C₁-C₂全氟烷基或C₁-C₄烷氧基或三氟甲氧基；

-n是1或2；

-R3是下式的基团：

其中R4和R5，其可相同或不同，位于任何可用的位置，且独立地为氢或卤素原子，羟基，C₁-C₄烷基，C₁-C₄氟烷基，C₁-C₂全氟烷基或C₁-C₄烷氧基，三氟甲氧基，氰基或COOH，COO烷基，CONH2，CONR6R7或NHCOR基团；

-R，R6和R7是C₁-C₆烷基。

式(I)化合物可包含一种或多种不对称碳原子。因此它们可呈对映体或非对映体形式。这些对映体和非对映体及其的混合物(包括外消旋混合物)构成本发明的一部分。

式(I)化合物可呈碱或者与酸的加成盐的形式。这样的加成盐构成本发明的一部分。

这些盐可使用药用酸来制备，但是有用的例如有用于纯化或分离式(I)化合物的其它酸的盐也是本发明的一部分。

在本发明的上下文中：

-术语“卤素原子”意指：氟、氯、溴或碘；

-术语“烷基”意指：直链或支化的饱和脂族基团。举例而言，可提及C₁-C₄烷基，其可表示甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基；

-术语“氟烷基”意指：其中一个或多个氢原子已被氟原子取代的烷基；

-术语“全氟烷基”意指：其中所有氢原子都已被氟原子取代的烷基；

-术语“烷氧基”意指：-O-烷基，其中烷基如上所定义。

在本发明主题的式(I)化合物中，另一组化合物由下述构成，其中R4和R5可为相同或不同，位于任何可用的位置，且独立地为CONH₂、CONR6R7或NHCOR，R、R6和R7如上所定义；所述化合物呈碱或酸加成盐形式。

在本发明主题的式(I)化合物中，另一组化合物由式(I)化合物构成，其中：

-m是1；

-A是：

且B是氢原子；

-n是1或2；

-R3是下式的基团：

其中R4和R5可为相同或不同，位于任何可用的位置并独立地为氢或卤素原子，羟基，C₁-C₄烷基，C₁-C₄氟烷基，C₁-C₂全氟烷基或C₁-C₄烷氧基，三氟甲氧基，氰基或COOH或COO烷基；

且其为碱或酸加成盐的形式。

在本发明主题的式(I)化合物中，另一组化合物由下述化合物构成，其中R1不是H，R2如上所述；

且其为碱或酸加成盐的形式。

在本发明主题的式(I)化合物中，另一组化合物由下述化合物构成，其中

R1在苯基的2-，3-或4-位，且为卤素原子或更具体地，氯原子，或CF₃基团，而R2是氢或3-或4-卤素，更具体地，3-或4-Cl；或者R1在2-，3-或4-位，且为氯原子或CF₃基团，而R2是氢原子；或者R1在苯基的3-位，且为CF₃基团，而R₂在苯基的4-位，且为氯原子；或者R1在苯基的2-位，且为氯原子，而R2在苯基的3-位，且为氯原子；和/或

R3是吡啶-2-基或嘧啶-2-基，均由如上所定义的R4和R5所取代；和/或

n＝1；

且其为碱或酸加成盐的形式。

在后述组的化合物中，可提及下述式(I)化合物，其中：

R1是3-CF₃；

R2是4-氯；

R3是5-CF₃取代的吡啶-2-基；且

n＝1；

且其为碱或酸加成盐的形式。

在本发明主题的式(I)化合物中，可具体地提及下述化合物：

-化合物1：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物2：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物3：4-{2-[4-(4-氯苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物4：4-{2-氧代-2-[4-(3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙基}-1-(吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物5：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物6：4-{2-[4-(4-氯苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(吡啶-2-基)-哌嗪-2-酮；

-化合物7：4-{2-[4-(2，3-二氯苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物8：4-{2-[4-(4-氯苯基)-3，6-二氧-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(6-氯吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物9：4-{2-[4-(3-氯苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物10：4-{2-[4-(4-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物11：4-{2-[4-(3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物12：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-吡啶-3-基哌嗪-2-酮；

-化合物13：1-(6-氯吡啶-3-基)-4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}哌嗪-2-酮；

-化合物14：4-{2-氧代-2-[5-(3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物15：4-{2-氧代-2-[4-(3-三氟甲氧基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙基}-1-(吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物16：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-2，5-二氢-吡咯-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物17：4-{2-[4-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物18：4-{2-[4-(3-甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物19：4-{2-[4-苯基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物20：4-{2-氧代-2-[5-(2，3-二氯苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物21：4-{2-氧代-2-[5-(3-甲氧基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

且其为碱或酸加成盐的形式。

下文中，术语“保护基团Pg”意指使得下面成为可能的基团：一方面在合成期间保护反应性官能团例如羟基或胺，并且另一方面在合成结束时再生完整的反应性官能团。保护基和保护方法以及脱保护方法的实例在Protective Groups in Organic Synthesis，Green等，2nd edition(John Wiley & Sons，Inc.，New York)中给出。

根据本发明，通式(I)化合物可根据下述方法制备。

方案1：

其中A，B，m，n和R3如上所定义的式(I)化合物，可通过如上所定义的式(IV)化合物与如上所定义的式(V)化合物根据如WO03/104225所述本领域技术人员已知的方法反应来制备。更具体地，制备通式(I)化合物的方法包括将式(IV)化合物与通式(V)化合物在碱存在下，在WO 03/104225中所述的溶剂中进行反应，其中式(IV)化合物为

其中A，B，m和n如通式(I)中所定义，而Hal表示卤素原子，例如氯，而通式(V)化合物为

其中R3如通式(I)所定义。因此，对于碱，可提及有机碱如三乙胺、N，N-二异丙基胺、二异丙基乙胺(DPEA)或N-甲基吗啉，或碱金属碳酸盐或碳酸氢盐如碳酸钾、碳酸钠或碳酸氢钠，以及存在或不存在碱金属碘化物，如碘化钾或碘化钠。有利地，反应在溶剂如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯酮(NMP)、甲苯或丙-2-醇中，在环境温度至溶剂回流温度的温度进行。术语“环境温度”意为5至25℃的温度。试举一例，所述反应可在碳酸氢钠和碘化钠存在下在溶剂如DMF中进行。所述反应优选在微波反应器中进行。

在由此获得的通式(I)化合物中，可通过本领域技术人员惯用的处理来修饰R，R1，R2，R4，R5，R6和R7，例如通过水解酯基团得到羧基。

通式(I)化合物的酸加成盐可通过将合适的酸添加至游离碱形式的式(I)化合物来获得。

其中R1和R2如式(I)化合物中所定义的式(IV)化合物，可通过将式(II)化合物和式(III)化合物根据本领域技术人员已知的方法，例如，在碱存在下在溶剂中如WO03/104225所述进行反应来制备。

更具体地，式(IV)化合物可通过将相应的式(II)化合物与式(III)化合物进行反应来获得，其中式(II)化合物为

其中A，B和m如通式(I)中所定义；任选地为酸加成盐形式，而式(III)化合物为

其中n和Hal如式(IV)中所定义，且Hal′是卤素原子，其可与Hal相同或不同。优选地，Hal′是氯原子。

该反应通常是在碱如三乙胺、N，N-二异丙基乙胺或N-甲基吗啉存在下，在溶剂如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃或二噁烷或这些溶剂的混合物中，在0℃至环境温度的温度进行的。式(II)和(III)化合物通常是可市购的，或可根据本领域技术人员已知的方法制备。

其中R3如式(I)中所定义的式(V)化合物，是根据本领域技术人员已知的方法制备的。例如，其可根据下述方法制备。

方案2：

更具体地，式(V)化合物可从相应的式(XI)化合物来制备，其中R3如式(I)中所定义，而Pg是氮原子的保护基团(如苄基)的。该反应可通过应用或转用(adaptation)任何本领域技术人员已知的方法来进行；通常，该反应是在酸性介质中，在催化剂如Pd/C存在下进行的。

式(XI)化合物可通过其中R3如式(I)中所定义而Pg是保护基团的式(VIII)化合物，在式(VI)化合物的存在下获得的。通常，该反应是在环境温度至可包含水的反应混合物的沸点的温度进行的。

或者，式(XI)化合物可从式(IX)化合物通过与碱金属氢化物在惰性溶剂如甲苯、二甲基甲酰胺或二甲亚砜中，在环境温度至反应混合物沸点的温度反应来获得。

式(IX)化合物可通过式(VII)化合物通过与溴乙酸乙酯或氯乙酸乙酯在溶剂如丁醇或丙酮，在碱如碳酸钾存在下，在环境温度至反应混合物沸点的温度反应来获得。

式(VIII)化合物可从其中R3如式(I)中所定义而X是卤素原子(如氯)的式(VII)化合物，在其中Pg是如式(VIII)中所定义的保护基团的式(X)化合物存在下获得。通常，该反应是在环境温度至反应混合物的沸点的温度进行的。

任选地，本发明的方法包括下述步骤，即分离获得的所需产物。

根据其另一方面，本发明的主题亦为式(IV)化合物

其中A，B，m和n如通式(I)中所定义，而Hal是卤素原子，例如氯；且其为碱或酸加成盐的形式。这些化合物可用作中间体以供合成式(I)化合物。

对于方案1和2中的起始化合物和反应物，如果未描述其制备方法，则其为可市购的，或描述于文献，或者可根据本文中所述的方法或本领域技术人员已知的方法来制备。

下述实施例描述了根据本发明对某些化合物的制备。这些化合物并不具限定性，仅为说明本发明。例示的化合物的编号是参照下文表格中给出的那些的，其表明本发明一些化合物的化学结构和物理性质。

HPLC是通过配置离子阱质谱检测器和二极管阵列检测器的ThermoElectron LCQ Deca XP Max***进行的。

用于液相色谱-质谱(LC/UV/MS)分析的条件如下：

-色谱***A

-洗脱剂A＝H₂O+0.01％TFA

-洗脱剂B＝CH₃CN

-梯度：98％的A至95％的B，10分钟，然后用95％的B洗脱5分钟。

-流速0.5毫升/分钟；温度40℃

-注入2μl的浓度为0.1mg/ml在CH₃CN∶H₂O＝9∶1混合物中的溶液

-色谱***B

-洗脱剂A＝H₂O+0.05％TFA

-洗脱剂B＝CH₃CN+0.035％TFA

-梯度：98％的A至95％的B，12分钟，然后用95％的B洗脱3分钟。

-流速0.7毫升/分钟；温度40℃

-注入2μl的浓度为0.1mg/ml在CH₃CN∶H₂O＝9∶1混合物中的溶液

-色谱***C

洗脱剂A＝5mM乙酸铵缓冲液，pH 6.5

洗脱剂B＝CH₃CN

梯度：98％的A至95％的B，10分钟，然后用95％的B洗脱5分钟。

-流速0.5毫升/分钟；温度40℃

-注入2μl的浓度为0.1mg/ml在CH₃CN∶H₂O＝9∶1混合物中的溶液

产物在220nm通过UV检测。

所用的柱为C18柱，粒度在2和4μm之间，优选3.5μm.

对于质谱部分：

-离子化模式：正电喷雾(API-ES极性+)

-扫描范围：120至1500uma。

质子核磁共振(¹H NMR)谱是在下述条件下记录的：

a)在500MHz在配置Avance III控制台(console)的Bruker机器上；

b)在400MHz在配置Avance I控制台的Bruker机器上。

化学位移是参照TMS频率以ppm记录的。

用于表征信号的缩写如下所述：s＝单峰，bs＝宽单峰，m＝多重峰，bm＝宽多重峰，d＝双峰，bd＝宽双峰，t＝三重峰，q＝四重峰.

*＝由于水造成的宽峰的干扰而不可积。

**＝由于NMR溶剂造成的峰的干扰而不可积。

2Xm＝两个部分重叠的峰。

制备1

1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮盐酸盐

将10g 2-氯-5-(三氟甲基)吡啶(式(VIII)化合物)和40.5ml N-苄基乙二胺(式(X)化合物)在135℃在圆底烧瓶中加热6小时。将混合物倾入水中，并将所得的混合物用乙酸乙酯萃取。将所得的产物干燥并蒸干；将由此获得的粗产物通过快速色谱纯化。将14g分离的产物(式(VIII)化合物)溶解于200ml 2NHCl溶液。添加30g三聚乙二醛二水合物(化合物VI)并使混合物在环境温度搅拌72小时。将其用乙酸乙酯萃取。将所得的产物干燥并蒸干；将由此获得的粗产物通过快速色谱纯化。将10g分离的产物(式(IX)化合物)溶解于450ml乙醇，然后添加15ml用HCl饱和的异丙醇溶液和3g 10％的Pd/C。使混合物在氢气流下在40℃的温度反应4小时。将所得的产物过滤并蒸干，而获得3g标题化合物(式(V)化合物)，熔点205-207℃。

制备2

1-(5-甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮盐酸盐

将4.7g 2-氯-5-甲基吡啶(式(VII)化合物)和27.5ml N-苄基乙二胺(式(X)化合物)在135℃在圆底烧瓶中加热5小时。将混合物倾入水，并将所得的混合物用乙酸乙酯萃取。将所得的产物干燥并蒸干；将由此获得的粗产物通过快速色谱纯化。分离了3.6g的产物(式(VIII)化合物)。

将1.5g该产物溶于3ml丁醇。添加0.85g碳酸钾和1.05g溴乙酸乙酯，然后将混合物在回流温度加热3小时。将其倾入水并用乙酸乙酯萃取。将所得的产物干燥并蒸干；将由此获得的粗产物通过快速色谱纯化。然后将1g分离的产物(式(IX)化合物)溶解于甲苯，然后在氮气流下将该溶液缓慢添加至0.25g 60％的氢化钠(NaH)在25ml甲苯中的溶液。将混合物在回流温度加热2小时。将其倾入水并将所得的混合物用乙酸乙酯萃取。将所得的产物干燥并在真空下蒸发。

0.6g粗产物是以油状物的形式(式(IX)化合物)获得的，将其溶解于25ml乙醇，然后添加1.5ml用HCl饱和的异丙醇溶液和0.3g 10％Pd/C。使混合物在氢气流下在40℃的温度反应4小时。将所得的产物过滤并在真空下蒸发，而获得0.3g的标题化合物(式(V)化合物))。

制备3

2-氯-1-[4-[3-三氟甲基-4-氯苯基]-1-[3，6-二氢-1(2H)吡啶基]]-1-乙酮

将4-[3-(三氟甲基)-4-氯苯基]-3，6-二氢-1(2H)-吡啶盐酸盐(式(II)化合物)(3.94g)和3.8ml三乙胺/33.5ml二氯甲烷冷却至0℃。逐滴添加2-氯乙酰氯(式(III)化合物)，并使混合物搅拌1小时30分。添加水，并用二氯甲烷萃取所得的混合物。将有机相用Na₂SO₄干燥，并在真空下蒸发。

获得4.2g无定形固体形式的化合物(式(IV)化合物)

实施例1：

化合物1：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮及其盐酸盐

将制备3的化合物(0.49mg)、制备1的化合物(0.4mg)、碳酸钾(0.41g)和碘化钠(0.45g)在7ml二甲基甲酰胺中的混合物在微波反应器中在180℃加热30分钟。将反应混合物倾入水，并用乙酸乙酯萃取所得的混合物。将有机相用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发，得到700mg油状物形式的粗产物。通过硅胶柱色谱纯化产物，其用环己烷/乙酸乙酯＝1/1的混合物进行洗脱。其盐酸盐是通过添加盐酸在异丙醇中的溶液制备的。获得了200g的标题化合物。

M+H⁺＝m/z 547

δ(ppm，dmso-d6)：2.55(bs，**)；2.63(m，**)；3.43-3-54(m，2H)；3.65(m，*)；3.75(m，1H)；3.96(bs，2H)；4.18(m，6H)；6.40(bs，1H)；7.72(d，J＝8.4Hz，1H)，7.74-7.80(m，1H)，7.80-7.85(m，1H)，8.21(d，J＝9Hz，1H)；8.26(dd，J₁＝9Hz，J₂＝2Hz，1H)；8.88(s，1H)。

实施例2：

化合物2：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮及其盐酸盐

标题化合物是通过进行实施例1所述的方法，但是使用制备2的化合物代替制备1的化合物获得的。

M+H⁺＝m/z 493

(机器a).δ(ppm，dmso-d6)：2.32(s，3H)，2.56(m，1H)，2.65(m，1H)，3.10-3.60(m，*)，3.64(m，1H)，3.77(m，1H)，3.98(m，2H)，4.05-4.51(m，6H)，6.41(m，1H)，7.69(dd，J＝8.4和2.0Hz，1H)，7.73(d，8.5Hz，1H)，7.75-7.81(m，2H)，7.83(bd，J＝9.3Hz，1H)，8.31(bd，J＝2Hz，1H)；

下述表格表明了本发明化合物的一些实施例的化学结构和物理性质。在该表中：

在“盐”一栏中，“-”表示游离碱形式的化合物，而“HCl”表示盐酸形式的化合物。

表

本发明化合物是下述生物化学研究的主题。

细胞培养：

在包被了胶原的培养瓶(Becton Dickinson，France)中常规培养SH-SY-5Y株(人神经母细胞瘤)，培养基为DMEM培养基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium，Gibco BRL，France)，其含5％FCS(胎牛血清)(Boehringer Mannheim，Germany)、丙酮酸钠(1mM)和谷氨酰胺(4mM)。

常规培养亲株SK-N-BE(人神经母细胞瘤)和稳定表达人p75NTR受体完整型的Bep 75克隆(SK-N-BE Bep 75)，培养基为RPMI培养基，其含FCS(5％)、丙酮酸钠(1mM)和谷氨酰胺(4mM)。对于SK-N-BE Bep 75细胞，加入潮霉素(200μl/20ml培养基)作为选择剂。

¹²⁵I NGF与p75^NTR受体结合的研究

按照Weskamp(Neuron，1991，6，649-663)所述方法，对SK-N-BE Bep 75株的细胞悬液进行NGF结合研究(神经生长因子用碘-125放射标记，Amersham-2000Ci/mmol)。通过测量在未放射标记的NGF(1μM)存在下细胞在37℃预培养1小时之后总结合来确定非特异性结合。从总结合测量与非特异性结合测量之差算出特异性结合。采用浓度0.3nM的碘化NGF(¹²⁵I NGF)进行竞争性实验。本发明化合物对¹²⁵I NGF与p75^NTR受体结合50％抑制浓度(IC₅₀)很低，为10^-6至10^-11M。

在该测试中，式(I)化合物呈现活性，IC₅₀值为10^-6至10^-11M。

例如，化合物3和1显示0.1nM和5.2nM的IC₅₀。

独立于其配体的p75^NTR受体的二聚研究

对SK-N-BE Bep 75株的细胞悬液进行p75^NTR受体二聚研究。将细胞(2.5×10⁴个细胞/孔)置于96孔板的各孔中，放置24h，然后在存在或不存在本发明化合物的情形下在37℃预培养1小时。然后加入由培养来源于肾的HEK293人细胞得到的上清液(最终浓度10nM)，所述来源于肾的HEK293人细胞在转染48小时后表达并分泌与碱性磷酸酶偶联的p75^NTR受体(该受体的胞外部分)的可溶型。可溶p75^NTR受体与SK-N-BE Bep 75细胞上存在的受体的特异性结合的定量通过下面方法确定：在所述上清液存在下在37℃培育细胞1小时后，测量碱性磷酸酶酶活性。在过滤和将滤膜转移至24孔板上之后，通过加入CDP-Star化学发光底物(即用的，Roche)来测定碱性磷酸酶活性。本发明化合物对p75^NTR受体二聚的50％抑制浓度(IC₅₀)很低，为10^-6至10^-11M。

例如，化合物1、2和3分别显示1.34nM、3.88nM和0.11nM的IC₅₀。

细胞凋亡的测量

在直径35mm的培养皿(Biocoat胶原I)中加入细胞(10⁵个细胞/孔)(人神经母细胞瘤株SH-SY-5Y和SK-N-BE Bep 75)，在包含5％FCS的合适培养基中培养24小时。然后去除培养基，用PBS(Dulbecco的磷酸缓冲盐水)淋洗，接着在存在或不存在本发明化合物的情形下加入含5％FCS的新鲜培养基或者含NGF(浓度为10ng/ml)或β淀粉样肽(Aβ1-40)(浓度为10μM)的培养基。在处理SH-SY-5Y株48小时后和处理SK-N-BE Bep 75株24小时后，通过定量与DNA片段相结合的胞质组蛋白来测量细胞凋亡水平(细胞死亡检测ELISA，Boehringer Mannheim，Germany)。细胞凋亡的水平表示为每10⁵个细胞的寡聚核小体的量。每个值对应于分布在三次独立实验中9个实验点的平均值。

式(I)化合物呈现抑制NGF诱导凋亡的活性，IC₅₀值为10^-6至10^-11M。例如，化合物1显示1.61nM的IC₅₀而化合物5显示52nM的IC₅₀。

因此，本发明化合物与p75^NTR受体的结合表现为：一方面在生物化学水平上抑制神经营养蛋白诱导的或者独立于所述配体的受体二聚化，另一方面在细胞水平上抑制p75^NTR受体介导的促凋亡作用。

因此，根据本发明的一个主题，式(I)化合物显示对独立于其配体的p75^NTR受体二聚化非常有利的抑制活性。

因此，本发明化合物可用于制备药物，具体为用于预防或治疗任何涉及p75^NTR受体的病理状态的药物。

因此，根据本发明的另一方面，本发明的主题是包含式(I)化合物或者其与药用酸的加成盐的药物。

根据本发明的另一方面，本发明的主题是式(I)化合物或者其与药用酸的加成盐，用于预防或治疗下述的病理状态。

因此，本发明化合物可用于在人或动物中，治疗或预防各种p75^NTR依赖性病症，例如中枢或外周神经变性疾病如老年性痴呆(senile dementia)、癫痫(epilepsy)、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森病(Parkinson’s disease)、亨廷顿舞蹈病(Huntington’s chorea)、唐氏综合征(Down’s syndrome)、朊病毒病(prion diseases)、遗忘症(amnesia)、精神***症(schizophrenia)、抑郁症(depression)、双相性精神障碍(bipolar disorder)；肌萎缩性侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)、多发性硬化症(multiple sclerosis)；心血管病症(cardiovascular conditions)如缺血后心脏损伤(post-ischaemic cardiac damage)、心肌病(cardiomyopathies)、心肌梗塞(myocardial infarction)、心力衰竭(heart failure)、心脏缺血(cardiac ischaemia)、脑梗塞(cerebral infarction)；外周神经病(peripheral neuropathies)(糖尿病性、创伤性或医源性)；视神经损伤和视网膜损伤(damage to the optic nerve and to the retina)(视网膜色素变性(retinal pigment degeneration)、青光眼(glaucoma))；视网膜缺血(retinal ischaemia)；黄斑变性(macular degeneration)；脊索创伤(spinal chord traumas)和颅创伤(cranial traumas)；动脉粥样硬化(atherosclerosis)；狭窄(stenoses)；愈合障碍(healing disorder)；脱发(alopecia)。

本发明化合物也可用于治疗癌症如肺癌、甲状腺癌、胰腺癌、***癌、小肠癌和结肠癌或乳腺癌，以及用于***、转移和白血病(leukaemias)。

本发明化合物也可用于治疗呼吸***疾病如肺炎(pulmonary inflammation)、***反应(allergy)和哮喘(asthma)，或者慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease)。

本发明化合物也可用于治疗皮肤疼痛(cutaneous pain)(皮肤、皮下组织和相关器官的)、躯体痛(somatic pain)、内脏疼痛(visceral pain)(循环***、呼吸***、胃肠***或者泌尿生殖***中)，和神经疼痛(neurological pain)。

本发明化合物也可用于治疗慢性神经性和炎症性疼痛(chronic neuropathic and inflammatory pain)，以及治疗自身免疫病(autoimmune diseases)如类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)。

本发明化合物也可用于治疗疾病例如强直性脊椎关节炎(ankylosing spondyl arthritis)、银屑病关节炎(psoriatic arthritis)或者斑块状银屑病(plaque psoriasis)。

本发明化合物还可用于治疗骨折(bone fracture)，或者治疗或预防骨病(bone diseases)例如骨质疏松症(osteoporosis)。

因此，本发明的主题是本发明的式(I)化合物用于预防或治疗任何涉及p75^NTR受体的病理状态，更具体为上述的病理状态。

根据本发明另一个方面，本发明涉及药物组合物，其包含作为活性成分的本发明化合物。这些药物组合物含有有效剂量的至少一种本发明化合物或所述化合物的药用盐和至少一种药用赋形剂。

根据药物形式和所需给药方法，所述赋形剂选自本领域技术人员已知的常用赋形剂。

在用于口服给药、舌下给药、皮下给药、肌内给药、静脉内给药、表面给药、局部给药、气管内给药、鼻内给药、经皮给药或直肠给药的本发明药物组合物中，上述式(I)活性成分或其盐可按单位给药形式(与常规药物赋形剂的混合物)来给药至动物和人类以预防或治疗上述病症或疾病。

合适的单位给药形式包括口服给药形式(例如片剂、硬胶囊剂或软胶囊剂、粉末剂、颗粒剂和口服溶液剂或混悬剂)、舌下给药形式、含服给药形式、气管内给药形式、眼内给药形式、鼻内给药形式、吸入给药形式、局部给药形式、肠胃外(如经皮)给药形式、皮下给药形式、肌内给药形式、静脉内给药形式、直肠给药形式和植入剂。就局部给药而言，本发明化合物可用在乳膏剂、凝胶剂、软膏剂或洗剂中。

例如，片剂形式的本发明化合物的单位给药形式可包含以下组分：

本发明化合物 50.0mg

甘露醇 223.75mg

交联羧甲基纤维素钠 6.0mg

玉米淀粉 15.0mg

羟丙基甲基纤维素 2.25mg

硬脂酸镁 3.0mg

每日给药的活性成分的剂量可以达到0.01至100mg/kg，以一次或多次摄入，优选0.02至50mg/kg。一般而言，本发明化合物的日剂量会是该化合物能产生治疗效果的最低有效剂量。

较高剂量或较低剂量就具体情况而言可能是合适的；这样的剂量并不背离本发明的上下文。根据常规实践，适于每位患者的剂量由医生根据给药方法和所述患者体重和响应来确定。

根据本发明另一个方面，本发明还涉及治疗上述病理状态的方法，所述方法包括向患者给药有效剂量的本发明化合物或其药用盐。

Claims

1.碱形式或酸加成盐形式的式(I)化合物

其中，

-m是0或1；

-A是：

且B是氢原子

或

A是氢原子，而B是：

-n是1或2；

-R3是下式的基团：

其中R4和R5，其可相同或不同，位于任何可用的位置，且独立地为氢或卤素原子，羟基，C₁-C₄烷基，C₁-C₄氟烷基，C₁-C₂全氟烷基或C₁-C₄烷氧基，三氟甲氧基，氰基或COOH，COO烷基，CONH₂，CONR6R7或NHCOR基团；

-R，R6和R7是C₁-C₆烷基。

2.权利要求1的碱形式或酸加成盐形式的化合物，其中R4和R5可为相同或不同，位于任何可用的位置，且独立地为CONH₂、CONR6R7或NHCOR。

3.权利要求1的碱形式或酸加成盐形式的化合物，其中：

-m是1；

-A是：

且B是氢原子；

-n是1或2；

-R3是下式的基团：

其中R4和R5可为相同或不同，位于任何可用的位置并独立地为氢或卤素原子，羟基，C₁-C₄烷基，C₁-C₄氟烷基，C₁-C₂全氟烷基或C₁-C₄烷氧基，三氟甲氧基，氰基或COOH或COO烷基。

4.前述任一项权利要求的碱形式或酸加成盐形式的化合物，其中R1不是H。

5.前述任一项权利要求的碱形式或酸加成盐形式的化合物，其中R1在2-，3-或4-位，且为氯原子或CF₃基团，而R2是氢或3-或4-Cl。

6.前述任一项权利要求的碱形式或酸加成盐形式的化合物，其中R3是吡啶-2-基或嘧啶-2-基，均由权利要求1所定义的R4和R5所取代。

7.前述任一项权利要求的碱形式或酸加成盐形式的化合物，其中n＝1。

8.前述权利要求1和3至7任一项的碱形式或酸加成盐形式的化合物，其中

R1是3-CF₃；

R2是4-氯；

R3是5-CF₃取代的吡啶-2-基；且

n＝1。

9.前述任一项权利要求的碱形式或酸加成盐形式的化合物，选自

化合物1：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物2：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物3：4-{2-[4-(4-氯苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物4：4-{2-氧代-2-[4-(3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙基}-1-(吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物5：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物6：4-{2-[4-(4-氯苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(吡啶-2-基)-哌嗪-2-酮；

化合物7：4-{2-[4-(2，3-二氯苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物8：4-{2-[4-(4-氯苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(6-氯吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物9：4-{2-[4-(3-氯苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物10：4-{2-[4-(4-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物11：4-{2-[4-(3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物12：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}-1-吡啶-3-基-哌嗪-2-酮；

化合物13：1-(6-氯吡啶-3-基)-4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-2-氧代乙基}哌嗪-2-酮；

化合物14：4-{2-氧代-2-[5-(3-三氟甲基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物15：4-{2-氧代-2-[4-(3-三氟甲氧基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙基}-1-(吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

化合物16：4-{2-[4-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-2，5-二氢吡咯-1-基]-2-氧代乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮；

-化合物21：4-{2-氧代-2-[5-(3-甲氧基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙基}-1-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-2-酮。

10.制备前述任一项权利要求的式(I)化合物的方法，其中A，B，m，n，R3如上所定义，包括将式(IV)化合物与通式(V)化合物在碱存在下反应的步骤，其中式(IV)化合物为

其中A，B，m和n如通式(I)中所定义，而Hal表示卤素原子，

而通式(V)化合物为

其中R3如通式(I)所定义。

11.碱形式或酸加成盐形式的式(IV)化合物

其中A，B，m和n如权利要求1至9任一项中所定义，且Hal是卤素原子，但所述化合物不是2-氯-1-[4-(2-甲氧基苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]-乙酮和2-氯-1-[4-(4-溴苯基)-3，6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙酮。

12.药物，其特征在于其包含权利要求1至9中任一项的式(I)化合物或者该化合物与药用酸的加成盐。

13.药物组合物，其特征在于其包含权利要求1至9中任一项的式(I)化合物或者其药用盐，以及至少一种药用赋形剂。

14.权利要求1至9中任一项的化合物，其用于制备用于预防或治疗下述疾病的药物：中枢或外周神经变性疾病、老年性痴呆、癫痫、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、唐氏综合征、朊病毒病、遗忘症、精神***症、抑郁症、双相性精神障碍、肌萎缩性侧索硬化症、多发性硬化症、心血管病症、缺血后心脏损伤、心肌病、心肌梗塞、心力衰竭、心脏缺血、脑梗塞；外周神经病、视神经损伤和视网膜损伤、视网膜色素变性、青光眼、视网膜缺血、黄斑变性、脊索创伤、颅创伤、动脉粥样硬化；狭窄、瘢痕形成障碍、脱发、癌症、肿瘤、转移、白血病、呼吸***疾病、肺炎、***反应、哮喘、慢性阻塞性肺病、皮肤疼痛、躯体痛、内脏疼痛和神经疼痛、慢性神经性和炎症性疼痛、自身免疫病、类风湿关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、斑块状银屑病、骨折、骨病和骨质疏松症。

15.权利要求14的化合物，其具有抑制独立于p75^NTR受体配体的p75^NTR受体二聚化的能力。