CN102101864B

CN102101864B - 三宝木内酯a-d,其药物组合物,制备方法和应用

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Publication number: CN102101864B
Application number: CN200910218391A
Authority: CN
Inventors: 郝小江; 郑永唐; 何红平; 黄宁; 谭承建; 李春燕; 邸迎彤; 王睿睿
Original assignee: Kunming Institute of Botany of CAS; Kunming Institute of Zoology of CAS
Current assignee: Kunming Institute of Botany of CAS; Kunming Institute of Zoology of CAS
Priority date: 2009-12-18
Filing date: 2009-12-18
Publication date: 2012-09-05
Anticipated expiration: 2029-12-18
Also published as: CN102101864A

Abstract

提供由结构式(I)所示的三宝木内酯A-D(Trigonolactone A-D，1-4)，为化学结构新颖的大环二萜内酯，具有显著的HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体抑制活性，治疗指数(TI)在1848-13484范围，可作为抗艾滋病病毒(HIV)的药物。Trigonosteliimone A(1)R₁＝Cl R₂＝HTrigonosteliimone B(2)R₁＝H R₂＝H

Description

三宝木内酯A-D,其药物组合物,制备方法和应用

技术领域：

本发明属于药物技术领域，具体地，涉及三宝木内酯A-D，其为药物活性成分的药物组合物，其制备方法，其在制备抗艾滋病药物中的应用。

背景技术：三宝木属(Trigonostemon)我国有6种，主要分布于我国华南和西南地区。迄今为止，现有技术中未见有三宝木内酯A-D化合物及其活性的报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供结构式(I)所示的三宝木内酯A-D，其为药物活性成分组成的抗艾滋病药物组合物和药物，其制备方法，以及该类化合物及其药物组合物在制备治疗艾滋病药物中的应用。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

式(I)化合物的制备方法，取孟仑三宝木，用95％乙醇加热回流提取三次，每次4小时，合并提取液，减压回收乙醇，得浸膏，将其用水捏溶、过滤，分别用石油醚，乙酸乙酯萃取三次，得乙酸乙酯萃取部分，用石油醚-丙酮梯度洗脱得Fr1、Fr2、Fr3、Fr4四部分，其中石油醚∶丙酮7∶3洗脱部分Fr3用Sephadex LH-20甲醇洗脱得含有三宝木内酯A-D的组分；该组分再用硅胶柱层析氯仿∶甲醇8∶1洗脱，然后用HPLC乙腈∶水65∶35纯化得化合物三宝木内酯A、B、C和D。

本发明提供结构式(I)所示的三宝木内酯A-D化合物即Trigonolactone A-D(1-4)，

Trigonosteliimone A(1)R₁＝Cl R₂＝H

Trigonosteliimone B(2)R₁＝H R₂＝H

Trigonosteliimone C(3)R₁＝Cl

Trigonosteliimone D(4)R₁＝H

抗HIV药物组合物，含有治疗有效量的权利要求1式(I)所示的化合物和药学上可接受的载体。

式(I)化合物在制备抗艾滋病药物中的应用。

含有治疗有效量的式(I)化合物和药学上可接受的载体组成的药物组合物在制备抗艾滋病药物中的应用。

本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0.1-99％，优选为0.5-90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。苔黑酚-1-氧-β-D-葡萄糖吡喃苷、苔黑酚及其衍生物的组合物采用制药和食品领域公认的方法制备成各种剂型、如液体制剂(注射剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂等)、固体制剂(片剂、胶囊剂、颗粒剂，冲剂等)、喷剂、气雾剂等。本发明的药物可经注射(静脉注射、静脉滴注、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射)和口服、舌下给药、粘膜透析等给药途径进行抗艾滋病的治疗。

具体实施方式：

下面用本发明实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

孟仑三宝木(Trigonostemon lii Y.T.Chang)全株20kg，用95％乙醇加热回流提取三次(3×4h)，合并提取液，减压回收乙醇，得浸膏2kg。将其用水捏溶、过滤，分别用石油醚，乙酸乙酯萃取三次，得到乙酸乙酯萃取部分200g；用石油醚-丙酮梯度洗脱得Fr1、Fr2、Fr3、Fr4四部分，其中石油醚∶丙酮7∶3洗脱部分Fr3用SephadexLH-20甲醇洗脱得含有三宝木内酯A-D的组分；该组分再用硅胶柱层析氯仿∶甲醇8∶1洗脱，然后用HPLC乙腈∶水65∶35纯化得化合物三宝木内酯A(Trigonosteliimone A)(1)(50.4mg)、B(2)(12.0mg)、C(3)(35.5mg)和D(4)(45.8mg)。

分离得到的4个化合物Trigonosteliimone A(1))、B(2)、C(3)和D(4)的结构分析数据如下：

三宝木内酯A(Trigonosteliimone A)(1)：white amorphous powder；C₃₈H₄₉O₁₁ Cl；

(c 0.20 CHCl₃)；UV(CHCl₃)λ_max 257.6nm(ε17474)；IR(KBr)v_max3455，2931，1713 and 1618cm^-1；ESIMSm/z 739[M+Na]⁺；HRESIMS m/z739.2866[M+Na]⁺(calcd forC₃₈H₄₉O₁₁NaCl，739.2861).¹H NMR(CDCl₃，400 MHz)δ：6.48(1H，s，H-1)，5.38(1H，s，H-3)，3.93(1H，s，H-5)，3.41(1H，s，H-7)，4.74(1H，s，H-8)，2.74(1H，q，J＝8.8Hz，H-11)，4.29(1H，s，H-12)，4.39(1H，s，H-14)，1.47(1H，m，H-16α)，1.73(1H，m，H-16β)，1.39(3H，s，H-17)，1.23(3H，d，J＝8.5Hz，H-18)，6.07(1H，s，H-19)，3.83(2H，br s，H-20)，2.41(1H，m，H-2′)，1.70(1H，m，H-3α′)，1.36(1H，m，H-3β′)，1.35(1H，m，H-4α′)，1.09(1H，m，H-4β′)，1.31(2H，m，H-5′)，1.41(2H，m，H-6′)，1.48(1H，m，H-7α′)，1.18(1H，m，H-7β′)，1.23(1H，m，H-8α′)，1.40(1H，m，H-8β′)，1.59(1H，m，H-9′)，1.04(3H，d，J＝8.0Hz，H-10′)，1.20(3H，d，J＝9.0Hz，H-11′)，7.76(1H，m，H-3″)，7.43(1H，m，H-4″)，7.41(1H，m，H-5″)，7.43(1H，m，H-6″)，7.76(1H，m，H-7″).¹³C NMR(CDCl₃，100.6MHz)δ：125.7(C-1，d)，139.7(C-2，s)，78.6(C-3，d)，83.4(C-4，s)，7 1.6(C-5，d)，60.5(C-6，s)，62.3(C-7，d)，34.6(C-8，d)，74.6(C-9，s)，149.2(C-10，s)，34.7(C-11，d)，79.6(C-12，d)，72.1(C-13，s)，79.2(C-14，d)，75.5(C-15，s)，38.3(C-16，t)，23.7(C-17，q)，13.9(C-18，q)，114.5(C-19，d)，63.6(C-20，t)，178.7(C-1′，s)，42.3(C-2′，d)，34.9(C-3′，t)，31.4(C-4′，t)，27.0(C-5′，t)，28.2(C-6′，t)，27.8(C-7′，t)，37.8(C-8′，t)，25.1(C-9′，d)，24.9(C-10′，q)，18.6(C-11′，q)，108.4(C-1″，s)，138.2(C-2″，s)，125.2(C-3″，d)，128.2(C-4″，d)，129.5(C-5″，d)，128.2(C-6″，d)，125.2(C-7″，d)。

三宝木内酯B(Trigonosteliimone B)(2)：white amorphous powder；C₃₈H₅₀O₁₁；

(c 0.14 CHCl₃)；UV(CHCl₃)λ_max 246.6nm(ε15144)；IR(KBr)v_max 3442，2924，1710 and 1639cm^-1；ESIMS m/z683[M+H]⁺；HRESIMS m/z683.3441[M+H]⁺(calcd for C₃₈H₅₁O₁₁，683.3431).¹H NMR(CDCl₃，400 MHz)δ：6.30(1H，s，H-1)，5.38(1H，s，H-3)，3.87(1H，s，H-5)，3.49(1H，s，H-7)，4.79(1H，s，H-8)，2.77(1H，q，J＝9.0Hz，H-11)，4.29(1H，s，H-12)，4.39(1H，s，H-14)，1.43(1H，m，H-16α)，1.71(1H，m，H-16β)，1.37(3H，s，H-17)，1.23(3H，d，J＝8.5Hz，H-18)，5.17(1H，s，H-19a)，5.07(1H，s，H-19b)，3.75(1H，d，J＝15.0Hz，H-20α)，3.91(1H，d，J＝15.0Hz，H-20β)，2.35(1H，m，H-2′)，1.69(1H，m，H-3α′)，1.30(1H，m，H-3β′)，1.30(1H，m，H-4α′)，1.06(1H，m，H-4β′)，1.30(2H，m，H-5′)，1.43(2H，m，H-6′)，1.48(1H，m，H-7 α′)，1.15(1H，m，H-7β′)，1.21(1H，m，H-8α′)，1.36(1H，m，H-8β′)，1.55(1H，m，H-9′)，1.04(3H，d，J＝8.0Hz，H-10′)，1.19(3H，d，J＝9.5 Hz，H-11′)，7.76(1H，m，H-3″)，7.41(1H，m，H-4″)，7.41(1H，m，H-5″)，7.41(1H，m，H-6″)，7.76(1H，m，H-7″).¹³C NMR(CDCl₃，100.6 MHz)δ：130.2(C-1，d)，145.6(C-2，s)，80.0(C-3，d)，83.5(C-4，s)，71.8(C-5，d)，60.0(C-6，s)，62.0(C-7，d)，34.5(C-8，d)，74.5(C-9，s)，147.5(C-10，s)，34.6(C-11，d)，79.7(C-12，d)，72.1(C-13，s)，79.4(C-14，d)，75.3(C-15，s)，37.9(C-16，t)，23.8(C-17，q)，13.9(C-18，q)，111.2(C-19，t)，62.4(C-20，t)，179.7(C-1′，s)，42.8(C-2′，d)，35.1(C-3′，t)，31.6(C-4′，t)，27.8(C-5′，t)，28.3(C-6′，t)，27.2(C-7′，t)，37.5(C-8′，t)，24.9(C-9′，d)，25.0(C-10′，q)，18.8(C-11′，q)，108.4(C-1″，s)，138.5(C-2″，s)，125.2(C-3″，d)，128.2(C-4″，d)，129.5(C-5″，d)，128.2(C-6″，d)，125.2(C-7″，d).

三宝木内酯C(Trigonosteliimone C)(3)：white amorphous powder；C₄₅H₅₃O₁₄Cl；

(c 0.67 CHCl₃)；UV(CHCl₃)λ_max 248.4nm(ε20467)；IR(KBr)v_max 3444，2925，1710 and 1677cm^-1；ESIMSm/z 853[M+H]⁺；HRESIMS m/z853.3245[M+H]⁺(calcd forC₄₅H₅₄O₁₄Cl，853.3202).¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：6.42(1H，s，H-1)，5.32(1H，s，H-3)，3.78(1H，s，H-5)，2.99(1H，s，H-7)，4.45(1H，s，H-8)，2.71(1H，q，J＝8.5Hz，H-11)，4.31(1H，s，H-12)，4.48(1H，s，H-14)，1.84(1H，d，J＝18.0Hz，H-16α)，1.56(1H，dd，J＝7.5，18.0Hz，H-16β)，4.80(1H，d，J＝15.0Hz，H-17α)，4.57(1H，d，J＝15.0Hz，H-17β)，1.24(3H，d，J＝9.0Hz，H-18)，6.00(1H，s，H-19)，3.59(1H，d，J＝15.5Hz，H-20α)，3.48(1H，d，J＝15.5Hz，H-20β)，2.31(1H，m，H-2′)，1.67(1H，m，H-3α′)，1.30(1H，m，H-3β′)，1.31(1H，m，H-4α′)，1.12(1H，m，H-4β′)，1.55(2H，m，H-5′)，1.13(2H，m，H-6′)，1.54(1H，m，H-7α′)，1.16(1H，m，H-7β′)，1.40(1H，m，H-8α′)，1.30(1H，m，H-8β′)，1.76(1H，m，H-9′)，1.09(3H，d，J＝8.0Hz，H-10′)，1.17(3H，d，J＝9.0Hz，H-11′)，7.76(1H，m，H-3″)，7.43(1H，m，H-4″)，7.41(1H，m，H-5″)，7.43(1H，m，H-6″)，7.76(1H，m，H-7″)，7.18(1H，d，J＝10.0Hz，H-4″′)，7.49(1H，t，J＝10.0Hz，H-5″′)，6.92(1H，t，J＝10.0Hz，H-6″′)，7.70(1H，dd，J＝1.5，10.0Hz，H-7″′).¹³C NMR(CDCl₃，100.6MHz)δ：125.7(C-1，d)，139.6(C-2，s)，78.6(C-3，d)，83.8(C-4，s)，71.0(C-5，d)，60.3(C-6，s)，61.8(C-7，d)，34.6(C-8，d)，74.6(C-9，s)，149.0(C-10，s)，34.7(C-11，d)，79.2(C-12，d)，72.3(C-13，s)，79.2(C-14，d)，76.0(C-15，s)，37.1(C-16，t)，67.8(C-17，t)，13.9(C-18，q)，114.5(C-19，d)，63.4(C-20，t)，178.8(C-1′，s)，42.5(C-2′，d)，34.7(C-3′，t)，31.0(C-4′，t)，28.0(C-5′，t)，28.4(C-6′，t)，27.1(C-7′，t)，37.9(C-8′，t)，25.6(C-9′，d)，24.2(C-10′，q)，18.8(C-11′，q)，108.4(C-1″，s)，138.4(C-2″，s)，125.2(C-3″，d)，128.2(C-4″，d)，129.5(C-5″，d)，128.2(C-6″，d)，125.2(C-7″，d)，170.2(C-1″′，s)，112.2(C-2″′，s)，161.7(C-3″′，s)，118.2(C-4″′，d)，136.1(C-5″′，d)，119.0(C-6″′，d)，129.5(C-7″′，d).

三宝木内酯D(Trigonosteliimone D)(4)：white amorphous powder；C₄₅H₅₄O₁₄；

(c 0.63 CHCl₃)；UV(CHCl₃)λ_max 244.2nm(ε28282)；IR(KBr)v_max 3443，2925，1704 and 1678cm^-1；ESIMS m/z841[M+Na]⁺；HRESIMS m/z 841.3407[M+Na]⁺(calcd forC₄₅H₅₄O₁₄Na，841.3411).¹H NMR(CDCl₃，400 MHz)δ：6.12(1H，s，H-1)，5.35(1H，s，H-3)，3.78(1H，s，H-5)，3.01(1H，s，H-7)，4.46(1H，s，H-8)，2.68(1H，q，J＝7.2 Hz，H-11)，4.29(1H，s，H-12)，4.43(1H，s，H-14)，1.87(1H，d，J＝18.0 Hz，H-16α)，1.56(1H，dd，J＝7.5，18.0Hz，H-16β)，4.78(1H，d，J＝11.6Hz，H-17α)，4.54(1H，d，J＝11.6Hz，H-17β)，1.24(3H，d，J＝9.0Hz，H-18)，5.11(1H，s，H-19a)，6.01(1H，s，H-19b)，3.56(1H，br s，H-20α)，3.42(1H，br s，H-20β)，2.31(1H，m，H-2′)，1.67(1H，m，H-3α′)，1.28(1H，m，H-3β′)，1.31(1H，m，H-4α′)，1.11(1H，m，H-4β′)，1.52(2H，m，H-5′)，1.15(2H，m，H-6′)，1.52(1H，m，H-7α′)，1.16(1H，m，H-7β′)，1.40(1H，m，H-8α′)，1.29(1H，m，H-8β′)，1.73(1H，m，H-9′)，1.07(3H，d，J＝7.5Hz，H-10′)，1.18(3H，d，J＝9.0Hz，H-11′)，7.76(1H，m，H-3″)，7.43(1H，m，H-4″)，7.41(1H，m，H-5″)，7.43(1H，m，H-6″)，7.76(1H，m，H-7″)，7.18(1H，d，J＝10.0 Hz，H-4″′)，7.49(1H，t，J＝10.0Hz，H-5″′)，6.92(1H，t，J＝10.0Hz，H-6″′)，7.70(1H，dd，J＝1.5，10.0Hz，H-7″′).¹³C NMR(CDCl₃，100.6MHz)δ：130.2(C-1，d)，145.6(C-2，s)，79.2(C-3，d)，83.2(C-4，s)，71.2(C-5，d)，60.1(C-6，s)，61.8(C-7，d)，34.2(C-8，d)，74.5(C-9，s)，147.2(C-10，s)，34.6(C-11，d)，79.9(C-12，d)，72.4(C-13，s)，79.3(C-14，d)，75.8(C-15，s)，37.2(C-16，t)，67.8(C-17，t)，13.9(C-18，q)，111.3(C-19，t)，62.8(C-20，t)，179.2(C-1′，s)，42.5(C-2′，d)，34.9(C-3′，t)，31.3(C-4′，t)，28.2(C-5′，t)，28.3(C-6′，t)，27.2(C-7′，t)，37.9(C-8′，t)，25.4(C-9′，d)，24.1(C-10′，q)，18.8(C-11′，q)，108.4(C-1″，s)，138.4(C-2″，s)，125.2(C-3″，d)，128.2(C-4″，d)，129.5(C-5″，d)，128.2(C-6″，d)，125.2(C-7″，d)，170.2(C-1″′，s)，112.2(C-2″′，s)，161.8(C-3″′，s)，118.2(C-4″′，d)，135.9(C-5″′，d)，118.9(C-6″′，d)，129.4(C-7″′，d).

实施例2：

按实施例1的方法先制得三宝木内酯A-D(1-4)，按常规注射液所用辅剂，分别加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例3：

按实施例1的方法先制得三宝木内酯A-D(1-4)，将其分别溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

实施例4：

将所分离得到的三宝木内酯A-D(1-4)分别与赋形剂重量比为9∶1的比例加入赋形剂，制成粉剂。

实施例5：

按实施例1的方法先制得三宝木内酯A-D(1-4)，分别按其与赋形剂重量比为1∶5-1∶10的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例6：

按实施例1的方法先制得三宝木内酯A-D(1-4)，分别按常规口服液制法制成口服液。

实施例7：

按实施例1的方法先制得三宝木内酯A-D(1-4)，分别按其与赋形剂重量比为5∶1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。

实施例8：

按实施例1的方法先制得三宝木内酯A-D(1-4)，分别按其与赋形剂重量比为3∶1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。

本发明从产自云南西双版纳的孟仑三宝木(Trigonostemon.liiY.T.Chang)中分离鉴定的上述4个化学结构新颖的大环二萜内酯

(1-4)，经抗HIV活性筛选，发现该类化合物具有显著的HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体抑制活性，参考其对C8166的细胞毒性，治疗指数(TI)在1848-13484范围，是一种具有较强抗HIV活性药物。

下面用本发明的试验例来说明本发明化合物的药理试验结果，用于证明本发明化合物对艾滋病具有较强活性。

试验例1：

三宝木内酯A-D(1-4)抗HIV药理作用实验结果：

I材料和方法

一、测定药物和化合物

待测样品为由本发明提供的式(I)4个化合物A-D(1-4)。待测样品溶解于DMSO中，4℃保存，贮存浓度为25.0mg/ml；

二、试剂和溶液

(1)试剂

HEPES(N-2(2-Hydroxyothyl)piperazine-N′-(2-ethanesufonicacid)、MTT(3，(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyl tetrazoliumbromide)、DMF(N，N’-Dimethyl formamine)、青霉素(Penicillin)、硫酸链霉素(Streptomycin sulfate)、谷氨酰胺(Glutamine)均购自Sigma公司；2-巯基乙醇(2-ME，2-Mercaptoethanol)为Bio-Rad公司产品。RPMI-1640和新生小牛血清为Gibco公司产品。

(2)培养基

RPMI-1640完全培养基，含有10％新生小牛血清，2mM L-谷氨酰胺，10mM HEPES，50μM 2-巯基乙醇，100,000IU青霉素，100μg/ml链霉素。

三、细胞和病毒

人T淋巴细胞系C8166、MT-4以及HIV-1实验株HIV-1IIIB均由英国Medical Research Council，AIDS Reagent Project惠赠。所有细胞和病毒均以含10％小牛血清的RPMI-1640完全培养基进行培养。按常规方法制备HIV-1_IIIB，滴定并计算出病毒的TCID₅₀。病毒贮存液分装后，置-70℃保存。细胞和病毒按常规方法冻存和复苏。

四、HIV-1感染性滴定

HIV-1_IIIB按Johnson&Byington(1990)所述方法改良进行滴定，简述如下：将HIV-1贮存液在96孔板上作4倍稀释，10个梯度，每梯度6个重复孔，同时设置对照孔6孔。每孔加入C8166细胞50μl，每孔终体积为200μl。37℃，5％CO₂培养。第3天补加新鲜RPMI-1640完全培养基100μl，第7天在倒置显微镜下观察每孔中HIV-1诱导的细胞病变效应(Cytopathic Effect，CPE)，以每孔是否有合胞体(Syncytium)的形成确定；按Reed&Muench方法计算病毒的TCID₅₀(50％Tissue Culture Infection Dose)。

五、对C8166细胞的毒性实验

4×10⁵/ml C8166细胞悬液100μl与不同的待测药物溶液混合，设3个重复孔。同时设置不含药物的对照孔，37℃，5％CO₂培养3天，采用MTT比色法检测细胞毒性。ELx800酶标仪测定OD值，测定波长为595nm，参考波长为630nm。计算得到CC₅₀值(50％CytotoxicConcentration)，即对50％的正常T淋巴细胞系C8166产生毒性时的药物浓度。

六、对HIV-1_IIIB致细胞病变(CPE)的抑制实验

将8×10⁵/ml C8166细胞50μl/孔接种到含有100μl/孔梯度倍比稀释药物的96孔细胞培养板上，然后加入50μl的HIV-1_IIIB稀释上清，1300TCID50/孔。设3个重复孔。同时设置不含药物的正常细胞对照孔。AZT为阳性药物对照。37℃，5％CO₂培养3天，倒置显微镜下(100×)计数合胞体的形成。EC₅₀(50％Effective Concentration)为抑制合胞体形成50％时的药物浓度。

七、对HIV-1_IIIB感染MT-4细胞死亡的保护实验

在96孔细胞培养板上，对每种药物进行5倍倍比稀释，每个稀释度设4孔，共6个稀释度。每孔100μl。同时设置不含药物的未感染或感染HIV-1_IIIB的细胞对照组。AZT作为阳性对照药物。每个稀释度中的2孔分别滴加MT-4细胞悬液和HIV-1_IIIB上清各50μl(感染复数为0.3)。另2孔滴加MT-4细胞悬液100μl。每孔终体积为200μl。置37℃，5％CO2培养箱中培养。感染后第3天补加100μl新鲜培养基。第5天用MTT方法用ELx800酶标仪测定OD_595/630nm值。计算药物对细胞生长的抑制率和对HIV-1_IIIB感染细胞的保护率。CC₅₀为对50％的宿主细胞产生毒性的药物浓度；EC₅₀为保护50％的HIV-1_IIIB感染细胞存活时的药物浓度。

八、计算公式

根据实验结果绘制剂量反应曲线，按Reed&Muench法计算出化合物抑制病毒的50％有效浓度(EC₅₀)，50％抑制细胞生长浓度(CC₅₀)及抗HIV-1活性的治疗指数TI值(Therapeutic index)为：TI＝CC₅₀/EC₅₀。

1、细胞生长存活率(％)＝实验孔OD值/对照孔OD值×100

2、HIV-1致细胞病变的抑制率(％)＝(1-实验孔合胞体数/对照孔合胞体数)×100

九、实验结果(见表1)。

第一次活性实验结果显示药物与病毒先孵育2h，三宝木内酯A(1)、三宝木内酯B(2)、三宝木内酯C(3)、三宝木内酯D(4)的EC₅₀分别为1.62ng/ml、6.46ng/ml、＜64ng/ml、1.26ng/ml。

第二次活性筛选结果显示药物与细胞先孵育2h，三宝木内酯A(1)、三宝木内酯B(2)、三宝木内酯C(3)、三宝木内酯D(4)的EC₅₀分别为3.99ng/ml、7.60ng/ml、＜64ng/ml、2.37ng/ml。

实验结果表明：上述化合物具有显著的抑制HIV与细胞形成合胞体的作用，并且具有较高的选择指数。

表1本发明化合物抗HIV药理试验结果

Claims

1.结构式（I）所示的三宝木内酯A-D，

2.抗HIV药物组合物，含有治疗有效量的权利要求1式（I）所示的化合物和药学上可接受的载体。

3.权利要求1所述式（I）化合物的制备方法，取孟仑三宝木，用95 %乙醇加热回流提取三次，每次4小时，合并提取液，减压回收乙醇，得浸膏，将其用水捏溶、过滤，分别用石油醚，乙酸乙酯萃取三次，得乙酸乙酯萃取部分，用石油醚-丙酮梯度洗脱得Fr1、Fr2、Fr3、Fr4四部分，其中石油醚∶丙酮7∶3洗脱部分Fr3用SephadexLH-20 甲醇洗脱得含有三宝木内酯A-D的组分；该组分再用硅胶柱层析氯仿∶甲醇8∶1洗脱，然后用HPLC乙腈∶水65∶35纯化得化合物三宝木内酯A、B、C和D。

4.权利要求1式（I）化合物在制备抗艾滋病药物中的应用。

5.权利要求2所述药物组合物在制备抗艾滋病药物中的应用。