CN1020751C - 有关啤酒生产方法的改进 - Google Patents

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Abstract

通过加入侧孢属木聚糖酶而改善麦芽汁或啤酒的过滤性(带来产量的提高)。

Description

本发明涉及有关啤酒生产方法的改进,尤其是,但不仅仅是,底层发酵的啤酒。更具体地说,它涉及一种增加麦芽汁或啤酒的过滤性从而提高其产量的方法以及改进在成熟过程中啤酒的胶态稳定性的方法。
啤酒是从含有低浓度的可发酵糖的粮食生产的。在用酵母菌对其进行发酵前,粮食中的糖必须经过糖化(即,水解成可发酵的糖-麦芽糖和葡萄糖)。大麦不含或含有很少的淀粉酶,但是当它发芽时却形成了大量的淀粉酶。因此,将大麦弄湿,让其发芽,然后干燥和贮藏以备使用。这种干燥的已发芽的大麦称作麦芽。在欧洲,大麦芽仍传统地用于啤酒生产。至于大麦中淀粉的糖化,使用了大麦芽本身的淀粉水解酶(淀粉酶)。
因此,啤酒生产过数中的第一步就是制造麦芽。然后将麦芽磨碎 且悬浮于水中,以让其淀粉进一步水解,从而提取出可发酵的糖。为了改善提取物的发酵能力,可以向悬浮液中加进几种淀粉降解酶,如α-淀粉酶,β-淀粉酶,淀粉葡糖苷酶以及解枝酶(象枝链淀粉酶)。在糖化达到所要求的阶段后,将混合物煮沸以停止进一步的酶促变化,然后过滤。再向滤液中加进啤酒花提取物,该提取物使啤酒带上典型的苦味并且也作为抗细菌生长的一种防腐剂。这种加入啤酒花的可发酵糖的过滤提取物称作麦芽汁,于是为发酵做好了制备。
在啤酒发酵过滤中,总是用从预发酵得到的酵母菌的特定菌株对麦芽汁进行接种。发酵在低温下进行5至10天。用于生产啤酒的大部分酵母菌属于卡尔酵母和酿酒酵母。在发酵过程中,可发酵的糖被转化成醇且产生了具有特征性味道的化合物。
发酵之后,除去大部分的酵母,将绿啤酒于陈化罐中贮藏一段时间以便让其成熟。
在啤酒厂中,如果使用低重量的麦芽或用大麦或小麦代替部分麦芽,那么就必须向麦芽汁中加进α-葡聚糖酶,有时为α-淀粉酶和蛋白酶,以减少其粘性,增加啤酒厂产量。β-葡聚糖酶也可以在陈化时或冷藏过程中加进,以改善过滤率,啤酒透明度和胶体稳定性,同时节省助滤设备,β-葡聚糖是由非常长的1,4-β-D-吡喃葡萄糖(70%连接)链和1,3-β-吡喃葡糖(30%连接)链组成。它们的分子量大约是200,000。β-葡聚糖溶液非常粘着,因此常常给酿酒带来过滤的困难。现在,得自枯草芽孢杆菌、黑曲霉和爱默生青霉(Penilillium    emersonii)的β-葡聚糖酶通常可用来解决由β-葡聚糖引起的工业规模的过滤问题。
而且,β-葡聚糖及某些戊聚糖也存在于大麦和小麦胶中。戊聚糖没有β-葡聚糖了解得清楚,它们的结构更加复杂,带有1,4-β-D-吡喃木糖的长链和单个的1,2-或1,3-α-L-***呋喃糖侧基(***糖与木糖单位的比率为1∶2);见附图1,它由H    NenKom,L.Providoli,H.Gremli和P.A.Jui在Cereal    Chem.,第 44卷,238页(1967)上提出。其中,位置1的垂线代表多肽链,X=β-D-吡喃木糖单位;A=α-L-***呋喃糖单位;G=半乳糖单位;1,2,3=糖与蛋白质间的可能连接。位置3的连接是后来建立起来的,如发生在半乳糖和羟脯氨酸之间,见G.B.Finder,W.H.Bawyer和R.A.Stone.Biochem.J.138,535(1974)。
戊聚糖的性质随着多肽、阿魏酸和***半乳聚糖的存在或缺乏而变化。总戊聚糖中大约有三分之二是不溶性的,因为其分子量大且与蛋白质及其它组分相交联。它们具有非常高的持水力而且产生大量废滤饼。当可溶性的戊聚糖的***呋喃糖侧基被水解时,就可以观察到未被取代的木聚糖的缔合和沉淀。
各种谷物中戊聚糖的平均含量如下(见“Handbuch    der    Labensmit    telchemie”,第5卷,32页,1967年,Springer    Verlag):
谷物    戊聚搪(干重百分比)
大麦(包括外壳)    10.3
小麦    7.4
黑麦    10.6
燕麦(包括外壳)    7.5
玉米    6.2
水稻    2.0
水米    2.0
第1,421,127号英国说明书叙述一种从爱默生青霉制备含有β-1,4/β-1,3-葡聚糖酶活性的酶溶液的方法,建议将其用于酿酒过程以改善麦芽汁的过滤性。
Coote和Kirsop(J.lnst.Brew.,82,34(1976)]指出在高比重的啤酒中出现的某些浊雾含有88%的戊聚糖。
第2,150,933号英国说明书叙述过得自爱默生青霉发酵的戊聚糖酶。提到过这种酶能够催化木聚糖酶的降解,并且可用于改进在酿 酒过程中的可发酵糖的生产和提取以及用于预防或处理某些类型的浊雾。
现在,我们惊奇地发现,由真菌侧孢属(Disporotrichum)产生的内木聚糖酶具有特殊价值的性质,它可作为改进麦芽汁或啤酒的产量和过滤性的一种试剂。
侧孢属以及其中的两型孢侧孢(Disporotrichumdimorphosporum)已由J.A.Stalpers在“Studies    in    Mycoloyy”24卷,第1页(1984)上叙述过。
本发明相应地提供了一种其过滤性得到改善和/或降低了其粘度的麦芽汁或啤酒的生产方法,它包括将所说的麦芽汁或啤酒经过侧孢属木聚糖 酶的作用。
更可取的是使用得自两型孢侧孢的木聚糖酶制备物。当使用得自两型孢侧孢的ATCC24562号菌株(可从ATCC得到)的木聚糖酶制备物时,得到了非常令人满意的结果,该菌株与从荷兰Baarn的Centraal    Bureeu    voor    Schcmmel    cultures得到的CBS484.76菌株是完全一样的。这些菌株更适合用于本发明的目的。
能够用于本发明的其它木聚糖制备物是那些实际上与得自两型孢侧孢的ATCC    24562(或CBS    484.76)菌株具有同样特征的木聚糖酶制备物,它包括来自转化宿主微生物的制备物,该宿主含有所说的两型孢侧孢ATCC    24562(或CBS    484.76)菌株产生的木聚糖酶编码的基因。
从技术角度的观点来看,最好是使用内式酶(endo-type    enzyme),因为它能够非常迅速地水解大分子量的多糖。而使用外式酶(exo-type)时,要达到同样的技术效果,它需要更多的时间和更大的酶促浓度。
一般地,戊聚糖酶或木聚糖酶的活性是在商业化的底物上测定的,这些底物得自落叶松木木聚糖或燕麦外壳木聚糖,且具有完全不同于谷物木聚糖底物的结构。当在精确的pH和温度条件下完成酶促反应后,通过测定还原糖就可推算出酶促活性。使用这种方法时,不可能区别该酶是内式、外式还是其混合物,而且,现在的商业化底物,通过纯化处理后多少有些变性。
另一方面,本发明提供了一种测定内木聚糖酶活性的方法。使用这种新的和有独创性的方法,我们就能够选择适用于本发明的最有效的酶。
测定内木聚糖酶活性的方法是以测定天然黑麦戊聚糖底物上的酶的粘度活性为基础的,它将在以下的实例中更详细地概述。在这一方法中,避免了通过热处理或强碱或强酸预处理来修饰天然底物(它保持酶促测定的某些选择性)。
利用所说的新方法时,在对比实验中发现,两型孢侧孢戊聚糖酶具有水解来自谷物的戊聚糖的特有的性质。
适用于本发明的侧孢属木聚糖酶浓缩物可以按以下方式获得。用已知方法在一个无菌罐和培养基中进行发酵。培养基中含有纤维素,果胶,酵母膏和合适的盐。用两型孢侧孢纯培养接种。发酵是在20℃至37℃之间的一个恒定温度下完成,最好是32℃左右,且pH维持在3.0至6.0的范围内(最好是4.0-4.5)。发酵可以是分批的或连续的。在这一过程中,随之出现木聚糖酶的活性,而不必通过加进含有木聚酶的材料(即玉米棒或面粉)来诱导酶的产生,加进这些产品主要是促进内木聚糖酶的产生,而对本发明用处不大。当达到所需的酶促活性时,收集麦芽浆,过滤,用真空浓缩或超过滤方法将其浓缩。浓缩物可以液体制备物或干燥粉末的形式销售。内木聚糖酶水解戊糖链中的1,4-β-木糖键。
非纯化的酶促产物对于含有±1%的木聚糖的底物的影响已用粘度汁法进行过研究(见图2和3)。最适pH是4.7,但pH在3.0至6.0之间时,其相对活性大于50%。最适温度是55℃,但在65℃时仍具有大于50%的相对活性。这种侧孢属木聚糖酶的纯化已被Comtat研究过(J.Comtat,K.Ruel,J.P.Joseleau和F.Barnoud,Symposium    on    Enzymatil    Hydrolysis    of    Cellulose,S.I.T.R.A,Helsinki,Finland,351(1975);Comtat和J.-P.Joseleau,Carvohydr.Res.,95,101(1981))
图2为50℃时,pH对在含有±1%木聚糖的底物上的侧孢属木聚糖酶活性的影响。
图3为pH4.7时,温度对在含有±1%木聚糖的底物上的木聚糖酶的影响。
侧孢属木聚糖酶在酿酒过程中可以与其它的添加剂一起使用,如常用防冻剂,例如木瓜蛋白酶,聚乙烯吡咯烷酮,鞣酸以及美国专利号3,061, 439,3,095,358,3,749,582和3,770,454和加拿大专利号743,524等叙述过的其它酶类。令人惊奇的是木聚糖酶在酿酒中是有效的,因为在大麦胶中β-葡聚糖与戊聚糖的比率是4∶1,但这也可能是由于戊聚糖的高持水力。
木瓜蛋白酶(一种植物蛋白酶)被广泛地用于通过水解蛋白质而改善啤酒的胶体稳定性。向陈化罐中的木瓜蛋白酶中加进侧孢属木聚糖酶时,就会在胶体稳定性上带来补充效应且改善了啤酒的过滤性。当小麦或大麦被用作糖化胶时或当麦芽的质量较差时,加入木聚糖酶是尤其合适的。
侧孢属木聚糖酶似乎比其它的木聚糖酶更适合用于酿酒。例如,当将木霉属和侧孢属木聚糖酶进行比较时,发现在粘性试验中它们的效率有很大的不同,侧孢属木聚糖酶更加优越。英国专利说明书第2,150,933号指出,其木聚糖酶(戊聚糖酶)在87±2℃时具有最适抗燕麦皮木聚糖活性,并且当其在pH5.0,于95℃加热6分钟时仍保留其原活性的50%。这对于用于酿酒中的发酵步骤的酶来说,这种高度热稳定性是不合需要的,因为它意味着在使用正常的啤酒巴氏灭菌法进行灭菌的过程中,这种酶将不会明显地变性。而侧孢属木聚糖酶在这些条件下几乎将完全被变性。
侧孢属木聚糖酶可以加到β-葡聚糖酶溶液中以改善其性质。侧孢属木聚糖酶的加入改进了啤酒和麦芽汁的粘性,提取率和过滤性。通过降低麦芽汁粘度和废谷物的持水力,侧孢属木聚糖酶可以通过生产高密度的啤酒来提高啤酒厂的容量。特别当小麦或大麦(含有大量的戊聚糖)被用于啤酒厂,时侧孢属木聚糖酶可用于解决有关麦芽汁或啤酒的过滤性的问题。
得自爱默生青霉的木聚糖酶(英国专利说明书2,150,933号)显示了与侧孢属木聚糖酶类同的降低粘度的活性,但是爱默生青霉的木聚糖的活性要低得多(通常是侧孢属木聚糖酶活性的10%到40%)。然而,正是由于这种较低的活性,所以向爱默生青酶溶液中加入侧孢属木聚糖酶就可改 进该产物的效率。爱默生青霉木聚糖酶是热稳定的(最适温度85~87℃),而β-葡聚糖和戊聚糖仅仅在65℃当淀粉胶化时在麦芽汁中是自由的。在这一温度下,侧孢属木聚糖酶保持了50%以上的剩余活性,足够用于水解在这一温度下剩下的自由戊聚糖。而且85℃的温度从未用于酿酒过程中,酿酒过程中的温度从未超过76℃。
在啤酒厂中,侧孢属木聚糖对啤酒的过滤性具有影响,但是当在啤酒厂中没有使用侧孢属木聚糖酶时,仍然可以将其与β-葡聚糖一起或单独加进陈化罐中以改善啤酒的过滤性且得到相应的节省(如在劳动,过滤板上,和损失等)。当然,侧孢属木聚糖酶可以同时用于啤酒厂和陈化罐中。这样制得的啤酒在过滤循环时不需要较大的压力,从过滤器中出来时更加透明,且改善了胶体稳定性。在陈化罐中使用爱默生青酶木聚糖酶似乎是困难的,因为在啤酒的正常巴氏灭菌下其活性不钝活。
用侧孢属木聚糖酶处理过的啤酒的胶体稳定性已通过乙醇冷却试验进行了检定。与单独加进木瓜蛋白酶相比,将β-葡聚糖酶(得自枯草芽孢杆菌)与过量的木瓜蛋白酶(超出达到最大稳定效果的剂量)一起加进陈化罐中没有改变啤酒的胶体稳定性。但是,如果侧孢属木聚糖酶是与过量的木瓜蛋白酶一起加入,那么啤酒的最小浊度值仍然会进一步下降。
侧孢属木聚糖的优良性质在通过表层发酵制造浓啤酒的过程中也是有用的。
下面的实例是以图表的形式给出。在实例中用于测定内木聚糖酶活性的方法,除非有另外的叙述,则都按以下步骤进行。
内木聚糖酶活性的测定方法
分析方法是来自实例1中所举例的方法。
A.原理
该方法是以测定在天然黑麦戊聚糖底物上的酶的粘度活性为基础的。
通过比粘度的倒数(1/nS)与酶作用的函数关系的变化,就可测定出 表面张力常数,它与酶制品的比活性成正比。
B.设备
-温度控制在42℃±0.1℃的水浴
-恒定流速接近0.03的毛细管粘度计
-n°IC型Vbbelhode粘度计或UF型Prolabo粘度计
-两块秒表
-过滤器
-pH仪
-离心机
C试剂
C1.戊聚糖底物
这种底物是从170型黑麦粉(按照法国规定,质量为灰色面粉)提取的。这种黑麦粉是按以下标准选择的:
-高粘性戊聚糖含量(按照Drews的方法,见实例Ⅰ)
-低天然戊聚糖酶活性
在42℃制备好300克黑麦粉浆和1升蒸馏水,然后在该温度下搅拌30分钟。通过加Na    OH将pH调到10.0且在该温度下将该pH值维持2小时。这样pH处理的目的是在没有改变底物的性质的情况下抑制天然戊聚糖酶的活性。在pH10.0下处理2小时后,用乙酸将其pH调到4.70。通过离心和/或过滤分离出不溶部分。如果必要,pH再校正到4.7。这种底物以每份100毫升冻藏在塑料瓶中。
C2.酶溶液
用水稀释酶产品至其溶液中木聚糖酶的含量为每升6至15单位。含有不溶物质的酶溶液在使用前先过滤。
D.测定
在测定之前,粘度计至少要在42℃的水浴中平衡30分钟。将精确含有 20毫升底物的一支试管放入水浴中,直至其温度恒定不变,然后加进2毫升酶溶液,此时在秒表n°1上记录的时间为0时,混合后取所需量的样品至粘度计上。3分钟后测定混合物的粘度,然后每3分钟一次至15分钟。
将混合物吸进上面的容器中,让液体往下流;当液体的弯月面刚好到达上面的刻度时,秒表n°2开始记录时间。在此同时,读出秒表n°1上记录的时间T。
当液体的弯月面刚好到达下面的刻度时,停止秒表n°2,记下时间△t,它是液体流过毛细管所需时间。对于不同的时间T,按上述方法重复测定△t。
作为每一系列测定,还要测定出与酶促反应相应的最小粘度△tm,该反应是在试验条件下使底物与过量的酶在底物上反应来完成的。
而且,还要测定出与20毫升底物和2毫升水的粘度相对应的△to。在所有分析过程中都要检定这一值的稳定性。
用标准酶制品作同样的分析。
E.计算
E1.K常数的测定
对于每一样品和标准品,计算出每次测定的时间t(秒):t=T+△t/2。对每-t,计算比值I/ns=△to-△tm/△t-△m。在曲线图上以连续t值对I/ns值作图。给出曲线(它应为直线),测定其斜率K(秒-1),它代表了表面动力常数。
E2.活性的计算
对于木聚糖酶标准品,我们知道:
-参考活性As(木聚糖酶单位/克)
-该试验溶液的酶浓度Cs(克/升)
-表面动力常数Ks
对于要测定的未知木聚糖酶,我们知道:
-该试验溶液的酶浓度Ce(克/升)
-表面动力常数Ke
与标准品相比的未知活性的计算是:
活性=As×Cs/Ce×Ke/Ks=木聚糖酶单位/克或毫升。
实例1
用Drews的方法从两型孢侧孢,木霉属和黑曲霉得到的木聚糖酶的内木聚糖酶活性的比较。
内木聚糖酶的活性采用Drews和Weipert在Dic    Mullerei,15卷,369页(1970)上叙述的方法进行测定。以这种方式测出的活性与木聚糖酶在酿酒过程中的工艺作用非常相符合。
于42℃将150克的灰色黑麦粉(170型)分散在350毫升的自来水中。将该悬浮浆装进温度维持在42℃的Brabender粘度计的盘中,待粘度稳定之后,将10毫升用还原糖法测定含有60个木聚糖酶单位的酶溶液加到粘度计中。测定酶促水解10、20和30分钟以后的粘度降低百分数。
在42℃时淀粉末胶化而且α-淀粉酶无作用。并且还证实了糖化酶,蛋白酶和β-葡聚糖酶都没有明显作用。
也可使用黑麦粉分散体经离心后得到液体部分作为粘性底物。用Ostwald型粘度计代替Brabender粘度计也是可行的。这两种方法的结果相似(方法见第7页所述)。
图4、5和6表示了,按还原糖测定法(常规方法)测出的曲霉属、侧孢属和木酶属木聚糖酶在同量的酶活下的效果。
图4表示曲霉属木聚糖酶对戊聚糖的粘度没有作用,它与时间的函数关系不变。该产品仅含有外木聚糖酶。
图5表示侧孢属木聚糖酶的效果,它与时间的函数关系是典型的连续下降。这一曲线是典型的内木聚糖酶活性。
图6表示木霉属木聚糖酶的效果:开始的1~2分钟内,粘度迅速下 降,在其余的时间内,粘度维持不变。这一曲线是与这一酶有关的抑制作用或位阻现象的特点。
爱默生青霉木聚糖酶与侧孢属木聚糖酶显示了同样的典型曲线,但侧孢属商业产品的木聚糖酶的活性水平明显要低(在1毫升Glaxo的β-葡聚糖酶商业产品中,内木聚糖酶的活性为50~150单位)
实例2
在不同的底物上以及按照不同的方法比较从侧孢属和木霉属得到的木聚糖酶的木聚糖酶活性
分析方法    木霉属木聚糖酶与侧孢
属木聚糖酶的活性比
在玉米轴木聚糖还原法的活性    21.8
在Brabender粘度计(Drews)上的测
粘法一总黑麦底物,见实例1    约6
在Ostwald粘度计上的测粘法一可溶性黑
麦底物,见第7页的方法    约9
在Ostward粘度计上的测粘法及通过乙醇
沉淀的纯化黑麦底物    从3.4至15
使用Ostward粘度计的测粘法在于90℃精
确加热20分钟的可溶性黑麦底物上    31.5
第一个分析是用还原法测定单糖在玉米轴木聚糖方面实行的。在这种情况下,测定的是外和内木聚糖酶的活性。使用测粘法在Brabender或Ostward粘度计上计算出木霉属木聚糖酶的活性是困难的,因为其结果与所用的酶浓度非常有关。它表明了其抑制作用。
使用乙醇沉淀的黑麦木聚糖作为纯化底物用于测粘分析也没有改变其结果。而且也证实一些蛋白酶对于木霉属木聚糖酶既不改变可溶性底物也不改变抑制作用,然而加热可溶性底物则促进不溶性底物的沉淀、不溶性底物含有65%蛋白和35%碳水化合物,其中主要是木糖,***糖和葡萄糖。用这种热处理过的可溶性底物则得到侧孢属木聚糖酶活性的改善,其因数为5。木霉木聚糖酶活性的改善,其因数为20,因而对于后一种木聚糖酶这一抑制作用是很重要的。
实例3
在实验规模条件下,木聚糖酶对麦芽汁的影响
使用低质量的麦芽,即由于存在高水平的未降解的β-葡聚糖和半纤维素而带来酿酒工业上的低提取量和低过滤性的麦芽。
为了滤桶过滤,将麦芽在EBC    MIAG磨粉机上磨碎。
标准酿酒方法:
在50℃用3份的水水化1份的麦芽(记住每次实验的开始重量)。这一温度维持20分钟。
以1℃/分的速度加热至63℃,这一温度维持30分钟。
以1℃/分的速度加热至72℃,这一温度维持20分钟以获得完全糖化(用碘试验为黄色)。加到至76℃,这一温度维持5分钟。
控制每次试验的重量,且通过加水来达到起始重量(水蒸发)。将制备过滤的麦芽浆倒进带有漏斗的Schleicher和Schall纸过滤器(EBC)中。测定过滤的麦芽汁的体积与时间的关系。过滤完后测定比重。这一值可用来计算提取率和产量。
麦芽汁的粘度是用毛细管粘度计在20℃测定的。高分子量的β-葡聚糖是在用30%的硫酸铵沉淀后测定的。在酸水解和用地衣二酚试剂测定葡萄糖前,测定物先用乙醇冲洗。
下面表中所述的木聚糖酶活性是采用第7页上所述的测粘度法测出的。
a)侧孢属和木霉属木聚糖酶的比较
结果如表1所示。这些实验清楚地表明,与木霉属木聚糖酶相比,侧孢属木聚糖酶具有更好的效果。也见实例Ⅰ和Ⅱ的解释。
b)对于含有β-葡聚糖酶的不同商业产品,比较加或不加侧孢属木聚糖酶时麦芽汁过滤性的增加。
对于不同来源的含有β-葡聚糖的三种商业产品,含有其中之一的麦芽汁的过滤性与加进了侧孢属木聚糖酶的进行比较,其结果见表2。
这些实验证实了侧孢属木聚糖酶对于麦芽汁粘度、提取率和过滤性具有较好的效果。用Glaxo公司的β-葡聚糖酶样品得到的比较好的结果是由于某些木聚糖酶的活性(165u/g)的存在。
Figure 861081676_IMG2
c)不同的搭配对麦芽汁过滤性增加的影响的比较(枯草芽孢菌β-葡聚糖与侧孢属木聚糖酶的混合物,爱默生青霉β-葡聚糖酶以及加进了侧孢属木聚糖酶的爱默生青霉β-葡聚糖酶)。
1)麦芽汁是Stella    Artois啤酒厂的100%的Menuet    81麦芽。结果如表3所示。
2)麦芽汁是“Enfants    de    Gayant”啤酒厂的100%麦芽。其结果如表4所示。
爱默生青霉β-葡聚糖酶与侧孢属木聚糖酶的组合跟枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶与侧孢属木聚糖酶的组合达到的效果基本是相似的。
3)麦芽汁是60%的Menuet    81麦芽(得自Stella    Artois啤酒厂)+40%    Menuet52大麦。其结果如表5所示。
如果将表5中的结果与表3和表4中的结果进行比较就会清楚地看到,通过使用侧孢属木聚糖酶就可使由于在麦芽汁使用大麦引起的高粘度得到充分降低。
Figure 861081676_IMG5
单位    单独的木瓜    木瓜蛋白酶+1500    木瓜蛋白酶+1200    木瓜蛋白酶+3000
蛋白酶    u/HI的枯草芽    u/HI的侧孢属    u/HI侧孢属
杆菌β-葡聚糖酶    木聚糖酶    木聚糖酶
6100    10.5    10.4    9.8    7.8
9200    3.6    3.7    3.9    2.3
12200    2.1    3.1    0.6    0.8
18400    1.9    2.5    0.4    0.6
当将侧孢属木聚糖酶加到木瓜蛋白酶中去时,使用过量的木瓜蛋白酶得到的最小度值进一步降低。
实例4
使用侧孢属木聚糖酶改善啤酒的胶体稳定性
按照M.Moll,V.That,A.Schmitt和M.Parisot在J.Amer.Soc.Brew.Chem,34期187页(1976)上所述的方法,在相同条件下测定实验室规模的经过滤而未处理的啤酒的胶体稳定性:将表6所列举的一定数量的酶以小体积的形式加进瓶中。为了避免由于啤酒的加入而稀释,该酶被固化。为了避免氧化,加进啤酒后瓶子立即封口。在室温下将其保持一星期,且用乙醇冷却试验测定酶处理的效果。EBC浊度值越低,该酶产品越有效。结果如下面的表6所示。
表6
木瓜蛋白酶    浊度值(浊度计)(E.B.C单位)
的浓度    单独的木    木瓜蛋白酶+    木瓜蛋白酶+    木瓜蛋白酶+
(NF单位    瓜蛋白酶    1500u/HI枯    1200u/HI    3000u/HI
/HI)    草芽孢杆菌β    侧孢属木聚糖    侧孢属木聚糖酶
-葡聚糖酶    酶
6100    10.5    10.4    9.8    7.8
9200    3.6    3.7    3.9    2.3
12200    2.1    3.1    0.6    0.8
18400    1.9    2.5    0.4    0.6
当将侧孢属木聚糖酶加到木瓜蛋白酶中时,使用过量的木瓜蛋白酶得到的最小浊度值将进一步降低。

Claims (5)

1、生产改进了其过滤性和/或降低了其粘度的麦芽汁和啤酒的方法。它包括将所说的麦芽汁或啤酒经过侧孢属木聚糖酶的作用。
2、如权利要求1所述的方法,其中所说的木聚糖酶来自两型饱侧孢ATCC24562。
3、如权利要求1所述的方法,其中所说的木聚糖酶与可从两型孢侧孢ATCC24562得到的木聚糖酶实际上具有同样的特性。
4、如权利要求1至3中任何一项所述的方法,其中,木瓜蛋白酶也加到了麦芽汁或啤酒中。
5、如权利要求1至4中任何一项所述的方法,其中,麦芽汁或啤酒是用未发芽的小麦或大麦制得的。
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Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5200215A (en) * 1988-04-20 1993-04-06 Nabisco, Inc. Enzyme treated low moisture content comestible products
AT394730B (de) * 1990-05-08 1992-06-10 Voest Alpine Ind Anlagen Verfahren zur herstellung exo- und endocellulasefreier xylanase
NZ239083A (en) * 1990-07-24 1993-08-26 Gist Brocades Nv Endo-xylanase-containing silage composition
CH683843A5 (fr) * 1992-03-10 1994-05-31 Brasserie Du Cardinal Fribourg Procédé de fabrication d'une bière sans alcool ayant les propriétés organoleptiques d'une bière blonde de type lager.
WO1997013862A1 (en) * 1995-10-13 1997-04-17 Gist-Brocades B.V. Fungal cellulases
EP0915985A1 (en) 1996-08-05 1999-05-19 Mogen International N.V. Improved process for the production of alcoholic beverages using maltseed
EP0941359A1 (en) * 1996-11-21 1999-09-15 Novo Nordisk A/S Use of carbohydrate-binding domain in starch processing
US6031155A (en) * 1997-06-05 2000-02-29 Cameron-Mills; Verena Arabinoxylan degradation
AU2002210409A1 (en) * 2000-11-10 2002-05-21 Novozymes A/S Ethanol process
EP1613729A1 (en) * 2003-04-04 2006-01-11 Novozymes A/S Mash viscosity reduction
ES2401795T3 (es) * 2003-07-02 2013-04-24 Syngenta Participations Ag Glucanasas, ácidos nucleicos que las codifican y métodos para eleborarlas y utilizarlas
US20060251762A1 (en) * 2005-05-03 2006-11-09 Robert Jansen Grain wet milling process for producing ethanol
CN106222185B (zh) 2006-08-04 2021-12-03 维莱尼姆公司 葡聚糖酶、编码它们的核酸及制备和使用它们的方法
GB0702844D0 (en) * 2007-02-14 2007-03-28 Leuven K U Res & Dev Improving taste of beer
US20090095286A1 (en) * 2007-08-03 2009-04-16 John Kerr Cereal Refining Process
WO2009073709A1 (en) 2007-12-06 2009-06-11 Novozymes A/S Polypeptides having acetylxylan esterase activity and polynucleotides encoding same
WO2009094418A2 (en) * 2008-01-24 2009-07-30 Tate And Lyle Ingredients Americas, Inc. Corn wet milling process
CA2775347A1 (en) 2009-09-29 2011-04-07 Novozymes A/S Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
ES2574054T3 (es) 2009-11-06 2016-06-14 Novozymes, Inc. Polipéptidos con actividad de xilanasa y polinucleótidos que los codifican
EP2542344A1 (en) * 2010-03-01 2013-01-09 Novozymes A/S Viscosity pressure assay
JP5658489B2 (ja) * 2010-06-16 2015-01-28 アサヒビール株式会社 発酵麦芽飲料の製造方法
CN103300284A (zh) * 2013-05-22 2013-09-18 哈尔滨商业大学 格瓦斯面包浓缩物生产方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2150933B (en) * 1983-11-28 1987-08-19 Glaxo Group Ltd Pentosan-degrading enzyme
CA1272150C (en) * 1985-12-03 1990-07-31 PRODUCTION OF GLUCOSE AND PURIFIED STARCH SYRUPS FROM WHEAT STARCH AND OTHER CEREALS CONTAINING PENTOSANES

Also Published As

Publication number Publication date
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EP0227159A2 (en) 1987-07-01
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DK578586D0 (da) 1986-12-02

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