CN102018676B - 一种水溶性药物纳米粒及其混悬型气雾剂的制备方法 - Google Patents

一种水溶性药物纳米粒及其混悬型气雾剂的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102018676B
CN102018676B CN2010105992490A CN201010599249A CN102018676B CN 102018676 B CN102018676 B CN 102018676B CN 2010105992490 A CN2010105992490 A CN 2010105992490A CN 201010599249 A CN201010599249 A CN 201010599249A CN 102018676 B CN102018676 B CN 102018676B
Authority
CN
China
Prior art keywords
water
aerosol
nanoparticle
water soluble
soluble drug
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN2010105992490A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102018676A (zh
Inventor
吴传斌
谭银合
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Wanze Medicine Technology Co ltd
Original Assignee
Sun Yat Sen University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sun Yat Sen University filed Critical Sun Yat Sen University
Priority to CN2010105992490A priority Critical patent/CN102018676B/zh
Publication of CN102018676A publication Critical patent/CN102018676A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102018676B publication Critical patent/CN102018676B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了一种水溶性药物纳米粒及其混悬型气雾剂的制备方法,将水溶性药物,冻干保护剂溶解于水中作为水相;将亲油性表面活性剂溶解于叔丁醇中作为油相;将水相加入油相中形成单相溶液;将单相溶液速冻成固体,冷冻干燥除去水与叔丁醇,得到含纳米粒的冻干物;采用有机溶剂离心洗涤冻干物,收集沉淀物,即得水溶性药物纳米粒。本发明制备的纳米粒使用高凝固点和高蒸汽压叔丁醇,很容易去除有机溶剂;避免了使用高能量研磨分散或者高速剪切均质可能造成对药物分子结构的破坏降解,加快了溶剂的升华速度,缩短冻干时间;工艺相对简单,易于工业化生产放大;制备的混悬型气雾剂分散均匀,稳定性良好,能取得较高的体外药物沉积,适合肺部给药。

Description

一种水溶性药物纳米粒及其混悬型气雾剂的制备方法
技术领域
本发明属于药品、生物制品及保健品技术领域,具体地说,本发明涉及一种水溶性药物纳米粒及水溶性药物纳米粒混悬型气雾剂的制备方法。
背景技术
由于环境保护的原因,定量吸入气雾剂的抛射剂氟利昂逐步被氢氟烷烃(四氟乙烷HFA 134a及七氟丙烷HFA227ea)替代,绝大多数药物在这两种新抛射剂中不溶解。水溶性药物,如蛋白质多肽等目前只能采用药物微粉化或多孔微球混悬在抛射剂进行肺部给药。随着纳米技术的兴起和在医药领域的应用,最近的研究表明纳米化的药物比微米化的药物或多孔微球有更高的肺部沉积率。水溶性药物,特别是蛋白质多肽类药物的纳米化并进行肺部给药成为药剂学研究的热点及难点之一。
本发明所说的纳米粒,采用国际上药剂学的定义:平均粒径在1nm至1000nm(但不包括1000nm)范围,优选平均粒径在50nm至500nm的微粒。据报道,有许多物理和化学的方法制备药物纳米材料用于肺部药物传递,其中包括湿法研磨、超临界流体提取、喷雾干燥、高压均质、电喷雾、纳米沉淀。另外,微乳模板法、喷雾冷冻干燥法、颗粒复制非湿模板法(PRINT)也用于纳米粒的制备。
目前的药物纳米化技术大多数是针对难溶性药物,以提高其生物利用度为目的;少数用于水溶性药物的纳米化,如有文献报道治疗支气管哮喘的硫酸沙丁胺醇用微乳模板法制备成纳米粒。最近Nyambura等报道用微乳化法与纳米沉淀法以溶菌酶为模型药制备蛋白质类药物纳米粒,但胰岛素能用乳化法而不能用纳米沉淀法制备成纳米粒。
目前的药物纳米化技术要么使用高能量粉碎或剪切花费较长的时间将药物颗粒降低到纳米尺寸,这样可能导致药物分子结构被破坏降解;要么使用甲醇、二氯甲烷及氯仿等有机溶剂进行进行乳化或沉淀制备药物纳米粒,这样用冷冻干燥去除有机溶剂也要消耗大量的能量,因为甲醇、二氯甲烷及氯仿的冰点很低。目前水溶性药物纳米粒制备方法耗能费时,有的制备工艺相当复杂。同时,使用二氯甲烷、氯仿等毒性有机溶剂在制备工艺中可能残留,可能对人体产生不利影响。
发明内容
本发明的第一目的在于提供克服现有技术的缺陷,提供一种新的水溶性药物纳米粒的制备方法。
为实现上述目的,本发明采取了以下技术方案:
一种水溶性药物纳米粒的制备方法,包括以下步骤:
(1)配制单相溶液
将水溶性药物,冻干保护剂溶解于水中作为水相;将亲油性表面活性剂溶解于叔丁醇中作为油相;将水相加入油相中形成单相溶液;
所述水溶性药物在水相中的浓度为0.1~5.0%w/v(g/mL);所述冻干保护剂在水相中的浓度为0.1~3.0%w/v(g/mL);所述的亲油性表面活性剂在油相中的浓度为20.0~45.0%w/v(g/mL),所述水相在单相溶液中的体积百分含量为20.0~50.0%。
(2)冷冻干燥单相溶液
将单相溶液速冻成固体,立即冷冻干燥除去水与叔丁醇,得到含纳米粒的冻干物;
(3)洗涤冻干物
采用有机溶剂离心洗涤冻干物2次以上,弃去上清液,收集沉淀物,即得;所述有机溶剂能溶解表面活性剂,而不能溶解水溶性药物和冻干保护剂。
在本发明中,所述水溶性药物为蛋白质、多肽、核酸或其衍生物、疫苗、色甘酸钠、肝素钠、倍他米松磷酸钠、硫酸沙丁胺醇、硫酸特布他林、丙酸倍氯米松、头孢类如头孢哌酮钠、头孢拉定、头孢噻肟钠、头孢唑啉钠、青霉类药物的钠盐如青霉素钠、青霉素钾、喹诺酮类的盐酸盐或有机酸盐、克林霉素盐酸盐或其它盐类。优选地,所述水溶性药物为生物技术药物,包括溶菌酶、胰岛素、干扰素、降钙素、人生长激素,催产素、生长抑素、抑肽酶、放线菌素D、人***、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、神经生长因子、白细胞介素-2、促***释放激素及其类似物、脑啡肽、内非肽、胸腺素、胸腺五肽、心房肽激素。
优选地,所述冻干保护剂为蔗糖、乳糖、海藻糖和甘露醇中的一种或几种。
优选地,所述表面活性剂为卵磷脂、磷脂酰胆碱、二油酸棕榈酰胆碱(DPPC)、1,2-二油烯氧基3-三甲氨基丙烷(DOTAP)和二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)中的一种或几种。
优选地,步骤(2)中所述速冻是采用浸入液氮或干冰或放入超低温冰箱中短时间冻成固体。所述冷冻干燥的参数为:冷阱温度-50~-55℃,真空度0.22~0.25mBar,干燥12h以上。
优选地,步骤(3)中所述有机溶剂为无水乙醇、异丙醇、叔丁醇和异辛烷中的一种或几种。
采用本发明的制备方法制备得到的可溶性药物纳米粒为球形或近球形,平均粒径200nm左右,多分散系数为0.10~0.15。
本发明的第二目的在于提供一种可溶性药物纳米粒混悬型气雾剂的制备方法,该气雾剂具有良好的药物肺部沉积。
为实现上述目的,本发明采取了以下技术方案:
一种可溶性药物纳米粒混悬型气雾剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)配制混悬药液
将本发明制备的纳米粒,添加药剂学上允许的辅料,超声分散后装入气雾瓶中,加上定量阀盖,扎盖封口。
(2)制备混悬型气雾剂
通过阀杆将定量抛射剂压入气雾瓶中,将气雾瓶置于20~30℃水浴超声分散,检漏质检即得。
优选地,所述抛射剂为四氟乙烷(HFA 134a)和/或七氟丙烷(HFA 227)。
优选地,步骤(1)中所述药剂学上允许的辅料为表面活性剂、潜溶剂、助悬剂和矫味剂中的一种或几种。
优选地,所述表面活性剂为油酸、司盘85、卵磷脂、磷脂酰胆碱或二油酸棕榈酰胺胆碱,所述表面活性剂在气雾剂中的体积百分含量为0~10.0%。
优选地,所述潜溶剂为无水乙醇、丙二醇或异丙醇,所述潜溶剂在气雾剂中的体积百分含量为0~5.0%。
优选地,所述助悬剂为低分子量的醛酮、植物精油如柠檬醛、香草醛、桉叶素等或C4~C7直链烷烃,所述助悬剂在气雾剂中的体积百分含量为0~4.0%。
优选地,所述矫味剂为芳香性成分,所述矫味剂在气雾剂中的体积百分含量为0~2.0%。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
(1)本发明通过利用叔丁醇/水共溶体系来制备水溶性药物纳米粒,使用的是高凝固点和高蒸汽压叔丁醇,避免了使用低凝固点的甲醇、二氯甲烷、氯仿等有机溶剂,因此很容易除去有机溶剂;
(2)本发明的水溶性药物纳米粒制备方法避免了使用高能量研磨分散或者高速剪切均质可能造成对药物分子结构的破坏降解,加快了溶剂的升华速度,缩短冻干时间,节约能源;
(3)本发明制备的水溶性药物纳米粒可分散在非水介质形成混悬剂,尤其适用于混悬型气雾剂的制备,能取得较高的体外药物沉积;
(4)本发明制备方法工艺相对简单,易于工业化生产放大。
附图说明
图1为本发明的水溶性药物纳米粒的透射电镜图(TEM);
图2为本发明的水溶性药物纳米粒的典型的平均粒径及粒径分布图(Zave=218nm,PI=1.2)。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步的说明。
实施例1溶菌酶纳米粒的制备1
配方如下:
溶菌酶            25mg
乳糖(冻干保护剂)  10mg
超纯水            1.8ml
卵磷脂(表面活性剂)    700mg
叔丁醇                3.0ml
制备方法:
(1)配制单相溶液
称取溶菌酶、乳糖放入西林瓶中,加入超纯水溶解作为水相;称取卵磷脂放入50ml塑料离心管中,加入叔丁醇溶解作为油相;将水相与油相混匀得到黄色透明澄清的单相溶液。
(2)冻干单相溶液
用液氮将此50ml塑料离心管中的单相溶液速冻成固体,放入冷冻干燥机-55℃,真空度0.25mBar,用冻干机自带的“main-drying”冻干程序,冻干24h去除水、叔丁醇溶剂得到含纳米粒的冻干物。
(3)洗涤冻干物
用无水乙醇洗涤冻干物,首次加无水乙醇4ml于50ml塑料离心管中溶解分散冻干物,获得的混悬液转入5ml聚四氟乙烯塑料离心管中,置于台式离心机上,15000rpm,离心2min,倾去上清液,重复洗涤离心2次,倾去上清液,得沉淀,即为溶菌酶纳米粒,测量粒径。
实施例2溶菌酶纳米粒的制备2
配方如下:
溶菌酶                  25mg
蔗糖(冻干保护剂)        10mg
超纯水                  1.8ml
磷脂酰胆碱(表面活性剂)  990mg
叔丁醇                  2.8ml
制备方法:
(1)配制单相溶液
称取溶菌酶、蔗糖放入西林瓶中,加入超纯水溶解作为水相;称取磷脂酰胆碱放入50ml塑料离心管中,加入叔丁醇溶解作为油相;将水相与油相混匀得到黄色透明澄清的单相溶液。
(2)冻干单相溶液
用液氮将此50ml塑料离心管中的单相溶液速冻成固体,放入冷冻干燥机-55℃,真空度0.25mBar,用冻干机自带的“main-drying”冻干程序,冻干24h去除水、叔丁醇溶剂得到含纳米粒的冻干物。
(3)洗涤冻干物
用无水乙醇洗涤冻干物,首次加无水乙醇4ml于50ml塑料离心管中溶解分散冻干物,获得的混悬液转入5ml聚四氟乙烯塑料离心管中,置于台式离心机上,15000rpm,离心2min,倾去上清液,重复洗涤离心2次,倾去上清液,得沉淀,即为溶菌酶纳米粒,测量粒径。
实施例3溶菌酶纳米粒的制备3
配方如下:
溶菌酶                        25mg
海藻糖(冻干保护剂)            10mg
超纯水                        1.8ml
二棕榈酰磷脂胆碱(表面活性剂)  1180mg
叔丁醇                        2.7ml
制备方法:
(1)配制单相溶液
称取溶菌酶、海藻糖放入西林瓶中,加入超纯水溶解作为水相;称取二棕榈酰磷脂胆碱放入50ml塑料离心管中,加入叔丁醇溶解作为油相;将水相与油相混匀得到黄色透明澄清的单相溶液。
(2)冻干单相溶液
用液氮将此50ml塑料离心管中的单相溶液速冻成固体,放入冷冻干燥机-55℃,真空度0.25mBar,用冻干机自带的“main-drying”冻干程序,冻干24h去除水、叔丁醇溶剂得到含纳米粒的冻干物。
(3)洗涤冻干物
用无水乙醇洗涤冻干物,首次加无水乙醇4ml于50ml塑料离心管中溶解分散冻干物,获得的混悬液转5ml聚四氟乙烯塑料离心管中,置于台式离心机上,15000rpm,离心2min,倾去上清液,重复洗涤离心2次,倾去上清液,得沉淀,即为溶菌酶纳米粒,测量粒径。
实施例4胸腺五肽纳米粒的制备1
配方如下:
胸腺五肽            25mg
乳糖(冻干保护剂)    15mg
超纯水              1.5ml
卵磷脂(表面活性剂)  650mg
叔丁醇              3.0ml
制备方法:
(1)配制单相溶液
称取胸腺五肽、乳糖放入西林瓶中,加入超纯水溶解作为水相;称取卵磷脂放入50ml塑料离心管中,加入叔丁醇溶解作为油相;将水相与油相混匀得到黄色透明澄清的单相溶液。
(2)冻干单相溶液
用液氮将此50ml塑料离心管中的单相溶液速冻成固体,放入冷冻干燥机-55℃,真空度0.25mBar,用冻干机自带的“main-drying”冻干程序,冻干24h去除水、叔丁醇溶剂得到含纳米粒的冻干物。
(3)洗涤冻干物
用叔丁醇洗涤冻干物,首次加叔丁醇4ml于50ml塑料离心管中溶解分散冻干物,获得的混悬液转入5ml聚四氟乙烯塑料离心管中,置于台式离心机上,15000rpm,离心2min,倾去上清液,重复洗涤离心2次,倾去上清液,得沉淀,即为溶菌酶纳米粒,测量粒径。
实施例5胸腺五肽纳米粒的制备2
配方如下:
胸腺五肽            25mg
海藻糖(冻干保护剂)  15mg
超纯水                  1.5ml
磷脂酰胆碱(表面活性剂)  960mg
叔丁醇                  2.5ml
制备方法:
(1)配制单相溶液
称取胸腺五肽、海藻糖放入西林瓶中,加入超纯水溶解作为水相;称取磷脂酰胆碱放入50ml塑料离心管中,加入叔丁醇溶解作为油相;将水相与油相混匀得到黄色透明澄清的单相溶液。
(2)冻干单相溶液
用液氮将此50ml塑料离心管中的单相溶液速冻成固体,放入冷冻干燥机-55℃,真空度0.25mBar,用冻干机自带的“main-drying”冻干程序,冻干24h去除水、叔丁醇溶剂得到含纳米粒的冻干物。
(3)洗涤冻干物
用叔丁醇洗涤冻干物,首次加叔丁醇4ml于50ml塑料离心管中溶解分散冻干物,获得的混悬液转入5ml聚四氟乙烯塑料离心管中,置于台式离心机上,15000rpm,离心2min,倾去上清液,重复洗涤离心2次,倾去上清液,得沉淀,即为溶菌酶纳米粒,测量粒径。
实施例6胸腺五肽纳米粒的制备3
配方如下:
胸腺五肽                      25mg
海藻糖(冻干保护剂)            10mg
超纯水                        1.5ml
二棕榈酰磷脂胆碱(表面活性剂)  990mg
叔丁醇                        2.8ml
制备方法:
(1)配制单相溶液
称取胸腺五肽、海藻糖放入西林瓶中,加入超纯水溶解作为水相;称取二棕榈酰磷脂胆碱放入50ml塑料离心管中,加入叔丁醇溶解作为油相;将水相与油相混匀得到黄色透明澄清的单相溶液。
(2)冻干单相溶液
用液氮将此50ml塑料离心管中的单相溶液速冻成固体,放入冷冻干燥机-55℃,真空度0.25mBar,用冻干机自带的“main-drying”冻干程序,冻干24h去除水、叔丁醇溶剂得到含纳米粒的冻干物。
(3)洗涤冻干物
用叔丁醇洗涤冻干物,首次加叔丁醇4ml于50ml塑料离心管中溶解分散冻干物,获得的混悬液转入5ml聚四氟乙烯塑料离心管中,置于台式离心机上,15000rpm,离心2min,倾去上清液,重复洗涤离心2次,倾去上清液,得沉淀,即为溶菌酶纳米粒,测量粒径。
实施例7硫酸沙丁胺醇纳米粒的制备1
配方如下:
硫酸沙丁胺醇        25mg
乳糖(冻干保护剂)    10mg
超纯水              1.5ml
卵磷脂(表面活性剂)  660mg
叔丁醇              3.0ml
制备方法:
(1)配制单相溶液
称取硫酸沙丁胺醇、乳糖放入西林瓶中,加入超纯水溶解作为水相;称取卵磷脂放入50ml塑料离心管中,加入叔丁醇溶解作为油相;将水相与油相混匀得到黄色透明澄清的单相溶液。
(2)冻干单相溶液
用液氮将此50ml塑料离心管中的单相溶液速冻成固体,放入冷冻干燥机-55℃,真空度0.25mBar,用冻干机自带的“main-drying”冻干程序,冻干24h去除水、叔丁醇溶剂得到含纳米粒的冻干物。
(3)洗涤冻干物
用叔丁醇洗涤冻干物,首次加叔丁醇4ml于50ml塑料离心管中溶解分散冻干物,获得的混悬液转入5ml聚四氟乙烯塑料离心管中,置于台式离心机上,15000rpm,离心2min,倾去上清液,重复洗涤离心2次,倾去上清液,得沉淀,即为溶菌酶纳米粒,测量粒径。
实施例8硫酸沙丁胺醇纳米粒的制备2
配方如下:
硫酸沙丁胺醇            25mg
蔗糖(冻干保护剂)        10mg
超纯水                  1.5ml
磷脂酰胆碱(表面活性剂)  990mg
叔丁醇                  2.8ml
制备方法:
(1)配制单相溶液
称取硫酸沙丁胺醇、蔗糖放入西林瓶中,加入超纯水溶解作为水相;称取磷脂酰胆碱放入50ml塑料离心管中,加入叔丁醇溶解作为油相;将水相与油相混匀得到黄色透明澄清的单相溶液。
(2)冻干单相溶液
用液氮将此50ml塑料离心管中的单相溶液速冻成固体,放入冷冻干燥机-55℃,真空度0.25mBar,用冻干机自带的“main-drying”冻干程序,冻干24h去除水、叔丁醇溶剂得到含纳米粒的冻干物。
(3)洗涤冻干物
用叔丁醇洗涤冻干物,首次加叔丁醇4ml于50ml塑料离心管中溶解分散冻干物,获得的混悬液转入5ml聚四氟乙烯塑料离心管中,置于台式离心机上,15000rpm,离心2min,倾去上清液,重复洗涤离心2次,倾去上清液,得沉淀,即为溶菌酶纳米粒,测量粒径。
实施例9硫酸沙丁胺醇纳米粒的制备3
配方如下:
硫酸沙丁胺醇    25mg
海藻糖(冻干保护剂)    10mg
超纯水                1.5ml
卵磷脂(表面活性剂)    960mg
叔丁醇                2.5ml
制备方法:
(1)配制单相溶液
称取硫酸沙丁胺醇、蔗糖放入西林瓶中,加入超纯水溶解作为水相;称取卵磷脂放入50ml塑料离心管中,加入叔丁醇溶解作为油相;将水相与油相混匀得到黄色透明澄清的单相溶液。
(2)冻干单相溶液
用液氮将此50ml塑料离心管中的单相溶液速冻成固体,放入冷冻干燥机-55℃,真空度0.25mBar,用冻干机自带的“main-drying”冻干程序,冻干24h去除水、叔丁醇溶剂得到含纳米粒的冻干物。
(3)洗涤冻干物
用叔丁醇洗涤冻干物,首次加叔丁醇4ml于50ml塑料离心管中溶解分散冻干物,获得的混悬液转入5ml聚四氟乙烯塑料离心管中,置于台式离心机上,15000rpm,离心2min,倾去上清液,重复洗涤离心2次,倾去上清液,得沉淀,即为溶菌酶纳米粒,测量粒径。
实施例10溶菌酶纳米粒混悬型气雾剂的制备1
取实施例1制备的溶菌酶纳米粒(35mg),加入2%DPPC无水乙醇溶液4.5ml,超声分散均匀,离心,倾去上清液,沉淀(纳米粒),转入带有塑料托的玻璃气雾瓶中,加上定量阀盖,扎盖封口。通过阀杆将10g抛射剂压入气雾瓶,将灌入抛射剂的气雾瓶置于20℃水浴超声分散1min,检漏质检即得。
实施例11胸腺五肽纳米粒混悬型气雾剂的制备2
取实施例5制备的胸腺五肽纳米粒(40mg),加入0.4ml正庚烷或0.1ml桉叶素,超声分散均匀,混悬液转入带有塑料托的玻璃气雾瓶中,加上定量阀盖,扎盖封口。通过阀杆将10g抛射剂压入气雾瓶,将灌入抛射剂的气雾瓶25℃置于水浴超声分散1min,检漏质检即得。
实施例12硫酸沙丁胺醇纳米粒混悬型气雾剂的制备3
取实施例8制备的沙丁胺醇纳米粒(35mg),加入0.4ml正己烷和0.1ml桉叶素,超声分散均匀,混悬液转入带有塑料托的玻璃气雾瓶中,加上定量阀盖,扎盖封口。通过阀杆将10g抛射剂压入气雾瓶,将灌入抛射剂的气雾瓶置于30℃水浴超声分散1min,检漏质检即得。
试验例1药物纳米粒形态观察
取经过洗涤的纳米粒,混悬分散在异辛烷中置于铜网上让异辛烷挥散,然后用1%(w/v)的磷钨酸对纳米粒染色,在相对湿度45%以下的室温中干燥好,制备好的样品用JEM-1400透射电镜进行观察。
取实施例1~9中制备得到的溶菌酶、胸腺五肽及硫酸沙胺丁醇纳米粒,进行形貌观察,初测粒径。典型溶菌酶纳米粒的透射电镜图见图1。
试验例2药物纳米粒的粒径及其分布测定
纳米粒径采用光子相关谱法(又称做动态光散射)使用英国马尔文公司的Malvem Zetasizer Nano ZS90进行测量,测量流体动力学粒径(表示为Z-平均粒径)及提示粒径分布宽度的多分散系数(PI)采用动态光散射国际标准进行累积分析。首先,纳米粒水浴超声5min,均匀分散于已经用0.1μm的尼龙膜过滤的异辛烷中。样品浓度调节为5mg纳米粒/mL异辛烷,以便在动态光散射分析中有足够的分析计数率(每秒钟大于5万计数),然后混悬样品液转入不结霜的石英皿并放入动态光散射仪的样品托中。在正式测量之前使样品有2min的平衡时间,每个样品测量三次。
取实施例1~9的制备溶菌酶、胸腺五肽及硫酸沙胺丁醇纳米粒,进行粒径测定(n=3),粒径分布图见图2,结果见表1:
表1实施例1-9制备的溶菌酶、胸腺五肽及硫酸沙胺丁醇纳米粒粒径及其分布
Figure BDA0000039730850000121
Figure BDA0000039730850000131
实验结果表明实施例1-9制备的纳米粒流体力学粒径在200nm左右,多分散系数在0.10~0.13之间,颗粒分布较窄,透射电镜观察的颗粒呈球形,纳米粒粒径与其水力学粒径接近。
试验例3溶菌酶的活性测定
供试液的制备:称取5mg溶菌酶对照样品与适当重量的样品(相当于5mg溶菌酶,根据样品浓度而定)三份于不同西林瓶中。在每个西林瓶中加入5ml的pH7.0磷酸缓冲液并振摇均匀形成澄清溶液,然后每份溶液量取200μl加入另外一个洁净的西林瓶中并用磷酸缓冲液稀释至10ml。
底物混悬液的制备:取3mg溶菌酶干粉末加入少量磷酸缓冲液并在乳钵中研磨2min,然后用磷酸缓冲液稀释至25ml。测量时双波长紫外可见光分光光度仪器调到450nm处,温度25℃。
活性测定:2.5ml底物混悬液移入1ml石英比色皿中并孵育5min,达到温度平衡。然后取样品及对照品各100μl加入石英比色皿,立即反复倒转石英比色皿混合成均匀溶液。记录10min内溶液在波长450nm处的吸光度下降。用100μl的磷酸缓冲液溶液代替样品或对照品溶液进行空白测定。用样品、对照和空白溶液吸光度单位降低值计算每个样品溶菌酶活性保留百分率。
在制备纳米粒过程及混悬在HFA 134a抛射剂中溶菌酶的活性保留(相对于相同重量的溶菌酶原料制备),各制备1批样品,每批50份/罐,取样3份/罐,测定结果见表2。
表2本发明方法制备的溶菌酶纳米粒活性保留
Figure BDA0000039730850000132
从实验结果可以看出,溶菌酶的活性几乎没有改变。
试验例4胸腺五肽的含量测定
采用反相高效液相色谱法测定胸腺五肽的含量。
色谱条件与***适用性实验:
用十八烷基键合相硅胶作为填充剂,C18色谱柱,检测波长:275nm;流动相:乙腈-水(12∶88,v/v),同时水相中添加0.1%三氟乙酸(TFA,trifluoroaceticacid)。流速:0.80mL/min,理论塔板数按胸腺五肽峰计算不低于1200。
测定法:取样品适量,精密称定,加入流动相溶解并稀释制成每1mL中约含0.5mg胸腺五肽的溶液,作为供试品溶液;精密量取20ul,注入液相色谱仪,记录色谱图;另取经五氧化二磷干燥至恒重的胸腺五肽对照品适量,同法测定,按外表法以峰面积计算。
取实施例4、5、6制备胸腺五肽纳米粒40mg(各3批,每批取样3份),测定胸腺五肽纳米粒的含量(mg);另外取实施例11制备的胸腺五肽气雾剂(3批,每批50罐,每批取样3罐),置于干冰中冷却抛射剂,缓慢挥去抛射剂,如前法测定,实验结果见表3:
表3实施例4-6、11制备的胸腺五肽纳米粒和气雾剂的含量
Figure BDA0000039730850000141
结果表明,在纳米粒的制备过程胸腺五肽含量基本无变化,制备工艺过程对含量几乎没有影响;制备的胸腺五肽气雾剂含量也在规定的范围内,符合要求。
试验例5硫酸沙丁胺醇的含量测定
采用反相高效液相色谱法测定硫酸沙丁胺醇的含量。
色谱条件与***适用性实验:
用十八烷基键合相硅胶作为填充剂,C18色谱柱,检测波长:278nm;流动相:甲醇-水(55∶45,v/v),同时添加1.1013g/L的庚烷基硫磺酸并用乳酸调至pH3.0。流速:1mL/min,理论塔板数按硫酸沙丁胺醇峰计算不低于1500。
测定法:样品用600mL甲醇的标准溶液加水至1000mL,并含7μg/mL丁酚胺。作为供试品溶液;精密量取20ul,注入液相色谱仪,记录色谱图;另取经五氧化二磷干燥至恒重的硫酸沙丁胺醇对照品同法测定,按外表法以峰面积计算。
取实施例7,8,9制备的硫酸沙丁胺醇纳米粒各35mg(各3批,批量50份,每批取样3份),测定硫酸沙丁胺醇的含量(mg);另外取实施例11制备的硫酸沙丁胺醇气雾剂(3批,每批50罐,每批取样3罐),置于干冰中冷却,去除阀盖,缓慢挥去抛射剂,如前法测定,结果表4。
表4实施例7-9、12制备的硫酸沙丁胺醇纳米粒和气雾剂的含量
Figure BDA0000039730850000151
结果表明,在纳米粒的制备过程硫酸沙胺丁醇含量基本无变化,制备工艺过程对含量几乎没有影响;制备的硫酸沙丁胺醇气雾剂含量也在规定的范围内,符合要求。
试验例6药物纳米粒混悬在HFA抛射剂中的分散性考察
混悬型气雾剂药物的分散性(物理稳定性)对给药剂量的准确性与精密性有很大的影响。在实施例10、11、12制备的气雾剂过程中,充入抛射剂后,立即超声2min,观察是否出现药物纳米粒分离、絮凝、沉淀等现象。纳米粒在抛射剂HFA 134a的再分散性是通过模仿病人使用前对气雾瓶的振摇,至少保持1min纳米粒不出现分离,絮凝及沉降等来衡量。
结果表明,实施例10、11、12制备的气雾剂,纳米粒在抛射剂中分散良好,没有出现分离、絮凝、沉降及粘壁等。灌封的气雾剂振摇后2min内保持稳定,没有出现分离、絮凝、沉降等,有利于给药剂量准确均匀。
试验例7气雾剂的雾粒分布测定
参照中国药典2010版附录(XH):仪器双层液体碰撞器(Twin 2 stage liquidimpinger,TI)。①应保证两垂直管平行。②第一级圆底烧瓶处放置接受液7ml,第二级三角烧瓶处放置接受液30ml,接受液品种与受试样品有关。③调节G的高度,使中心凸出处与三角烧瓶底部恰好接触。④接真空泵,抽气速度调整为60L/min,气雾剂喷射前振摇,每次间隔5s,保证单位剂量的药物完全释放。⑤以空白接受液将弯管E及垂直管处的药物洗脱,并与三角烧瓶内的接受液合并,测定药物的含量,计算药物在第二级处的沉积百分率。
取实施例11,12制备的药物纳米粒混悬气雾剂(每个实施例3批,每批50罐,每批取样3罐),测定胸腺五肽、硫酸沙丁胺醇的含量(mg),测定前先空喷5揿次,其表征到达肺部的细微粒分数(FPF),截止粒径小于6.4μm,第二级处沉积百分率见表5。
表5.实施例11,12的胸腺五肽,硫酸沙丁胺醇纳米粒气雾剂的体外沉积
Figure BDA0000039730850000161
结果表明,在胸腺五肽、硫酸沙胺丁醇药物纳米混悬气雾剂有良好的体外沉积(雾粒分布)。
以上所述是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明的前提下,还可以做出若干改进和修饰,这些改进和修饰也视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种制备水溶性药物纳米粒的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)配制单相溶液
将水溶性药物、冻干保护剂溶解于水中作为水相;将亲油性表面活性剂溶解于叔丁醇中作为油相;将水相加入油相中混匀形成单相溶液;
所述水溶性药物在水相中的浓度为0.1~5.0%w/v;所述冻干保护剂在水相中的浓度为0.1~3.0%w/v;所述的亲油性表面活性剂在油相中的浓度为20.0~45.0%w/v,所述水相在单相溶液中的体积百分含量为20.0~50.0%;
所述水溶性药物为溶菌酶、胸腺五肽或硫酸沙丁胺醇;所述冻干保护剂为蔗糖、乳糖或海藻糖;所述亲油性表面活性剂为卵磷脂、磷脂酰胆碱或二油酸棕榈酰胆碱;
(2)冷冻干燥单相溶液
将单相溶液速冻成固体,立即冷冻干燥去除水与叔丁醇,得到含纳米粒的冻干物;
(3)洗涤冻干物
用有机溶剂离心洗涤冻干物2次以上,弃去上清液,收集沉淀物,即得;所述有机溶剂为无水乙醇、异丙醇或叔丁醇。
2.根据权利要求1所述的制备水溶性药物纳米粒的方法,其特征在于,步骤(2)中所述速冻是采用浸入液氮或干冰或放入超低温冰箱中短时间冻成固体;所述冷冻干燥的参数为:冷阱温度-50~-55℃,真空度0.22~0.25mBar,干燥12h以上。
3.根据权利要求1或2所述的方法制备而得的水溶性药物纳米粒。
4.一种制备水溶性药物纳米粒混悬型气雾剂的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)配制混悬药液
在权利要求3所述的水溶性药物纳米粒中,添加药剂学上允许的辅料,超声分散后装入气雾瓶中,加上定量阀盖,扎盖封口;
(2)制备混悬型气雾剂
将抛射剂定量压入气雾瓶中,将气雾瓶置于20~30℃水浴中,超声分散,检漏质检即得。
5.根据权利要求4所述的制备水溶性药物纳米粒混悬型气雾剂的方法,其特征在于,所述抛射剂为四氟乙烷和/或七氟丙烷。
6.根据权利要求4所述的制备水溶性药物纳米粒混悬型气雾剂的方法,其特征在于,步骤(1)中所述药剂学上允许的辅料为表面活性剂、潜溶剂、助悬剂和矫味剂中的一种或几种。
7.根据权利要求6所述的制备水溶性药物纳米粒混悬型气雾剂的方法,其特征在于,所述表面活性剂为油酸、司盘85、卵磷脂、磷脂酰胆碱或二油酸棕榈酰胺胆碱,所述表面活性剂在气雾剂中的体积百分含量为0~10.0%;所述潜溶剂为无水乙醇、丙二醇或异丙醇,所述潜溶剂在气雾剂中的体积百分含量为0~5.0%;所述助悬剂为植物精油或C4~C7直链烷烃,所述助悬剂在气雾剂中的体积百分含量为0~4.0%;所述矫味剂为芳香性成分,所述矫味剂在气雾剂中的体积百分含量为0~2.0%。
CN2010105992490A 2010-12-21 2010-12-21 一种水溶性药物纳米粒及其混悬型气雾剂的制备方法 Expired - Fee Related CN102018676B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010105992490A CN102018676B (zh) 2010-12-21 2010-12-21 一种水溶性药物纳米粒及其混悬型气雾剂的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010105992490A CN102018676B (zh) 2010-12-21 2010-12-21 一种水溶性药物纳米粒及其混悬型气雾剂的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102018676A CN102018676A (zh) 2011-04-20
CN102018676B true CN102018676B (zh) 2012-12-05

Family

ID=43860731

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010105992490A Expired - Fee Related CN102018676B (zh) 2010-12-21 2010-12-21 一种水溶性药物纳米粒及其混悬型气雾剂的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102018676B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2791690T3 (es) * 2011-02-09 2020-11-05 Glaxosmithkline Llc Formulaciones liofilizadas
CN103239709B (zh) * 2013-04-25 2015-07-08 浙江大学 胸腺五肽缓释制剂的制备方法和用途
CN103272237B (zh) * 2013-04-27 2015-05-06 中山大学 水溶性药物无水反胶束纳米粒及其混悬型气雾剂的制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1444927A (zh) * 2003-04-16 2003-10-01 沈阳药科大学 一种制备脂质体的新方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1444927A (zh) * 2003-04-16 2003-10-01 沈阳药科大学 一种制备脂质体的新方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
崔福德.气雾剂的制备.《药剂学》.人民卫生出版社,2004,(第5版),第191页. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN102018676A (zh) 2011-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Patil-Gadhe et al. Single step spray drying method to develop proliposomes for inhalation: a systematic study based on quality by design approach
Sivadas et al. A comparative study of a range of polymeric microspheres as potential carriers for the inhalation of proteins
Yamasaki et al. Enhanced dissolution of inhalable cyclosporine nano-matrix particles with mannitol as matrix former
Hamishehkar et al. Effect of carrier morphology and surface characteristics on the development of respirable PLGA microcapsules for sustained-release pulmonary delivery of insulin
JP3695754B2 (ja) 医薬組成物に関する改良
US20150328157A1 (en) Application of silicon dioxide aerogel as nano-drug carrying system in pharmacy
El-Gendy et al. Budesonide nanoparticle agglomerates as dry powder aerosols with rapid dissolution
Mahajan et al. Preparation, characterization and pulmonary pharmacokinetics of xyloglucan microspheres as dry powder inhalation
Eggerstedt et al. Protein spheres prepared by drop jet freeze drying
Chi Lip Kwok et al. Nanotechnology versus other techniques in improving drug dissolution
Tan et al. A novel bottom-up process to produce nanoparticles containing protein and peptide for suspension in hydrofluoroalkane propellants
CN101370479A (zh) 用于递送治疗剂的纳米团簇
Yang et al. The effects of surface morphology on the aerosol performance of spray-dried particles within HFA 134a based metered dose formulations
Leng et al. Formulating inhalable dry powders using two-fluid and three-fluid nozzle spray drying
CN102018676B (zh) 一种水溶性药物纳米粒及其混悬型气雾剂的制备方法
Sawant et al. Drug nanocrystals: novel technique for delivery of poorly soluble drugs
CN107137375A (zh) 阿塞那平微球制剂及其制备方法
CN113694046A (zh) 一种重楼皂苷纳米脂质体粉雾剂的制备方法及其应用
Chan et al. Integrated continuous manufacturing of inhalable remdesivir nanoagglomerate dry powders: Design, optimization and therapeutic potential for respiratory viral infections
US9381518B2 (en) Nano-suspension process
CN104398497B (zh) 伊曲康唑吸入粉雾剂及其制备方法
CN115590826B (zh) 一种活性蛋白黏膜给药制剂及其制备方法和应用
Sahoo et al. Preparation, characterization and dissolution behavior of artemisinin microparticles
Li et al. Preparation of nanoparticles by spray-drying and their use for efficient pulmonary drug delivery
CN1771911B (zh) 一种可再分散的难溶性药物纳米粒粉末及制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: GUANGZHOU WEDGE MEDICAL TECHNOLOGY CO., LTD.

Free format text: FORMER OWNER: ZHONGSHAN UNIVERSITY

Effective date: 20130531

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20130531

Address after: 510275, Guangzhou International Biological Island, Guangdong, No. three, Road 312, an office area, third, layer, unit

Patentee after: GUANGZHOU WANZE MEDICINE TECHNOLOGY Co.,Ltd.

Address before: 510275 Xingang West Road, Guangdong, Guangzhou, No. 135, No.

Patentee before: Sun Yat-sen University

ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: GUANGZHOU NEWORLD PHARMACEUTICALS TECHNOLOGY CO.,

Free format text: FORMER OWNER: GUANGZHOU WEDGE MEDICAL TECHNOLOGY CO., LTD.

Effective date: 20141014

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 510275 GUANGZHOU, GUANGDONG PROVINCE TO: 510660 GUANGZHOU, GUANGDONG PROVINCE

TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20141014

Address after: 510660, room 262, No. 503, Zhongshan Avenue, Tianhe District, Guangdong, Guangzhou

Patentee after: NEWORLD PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Address before: 510275, Guangzhou International Biological Island, Guangdong, No. three, Road 312, an office area, third, layer, unit

Patentee before: GUANGZHOU WANZE MEDICINE TECHNOLOGY Co.,Ltd.

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20151224

Address after: 510000, Guangzhou International Biological Island, Guangdong, No. three, Road 312, an office area, third, layer, unit

Patentee after: GUANGZHOU WANZE MEDICINE TECHNOLOGY Co.,Ltd.

Address before: 510660, room 262, No. 503, Zhongshan Avenue, Tianhe District, Guangdong, Guangzhou

Patentee before: NEWORLD PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20121205

Termination date: 20211221

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee